CN116421588A - 异补骨脂查尔酮在制备抑制新生隐球菌感染药物中的应用 - Google Patents

异补骨脂查尔酮在制备抑制新生隐球菌感染药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116421588A
CN116421588A CN202310381380.7A CN202310381380A CN116421588A CN 116421588 A CN116421588 A CN 116421588A CN 202310381380 A CN202310381380 A CN 202310381380A CN 116421588 A CN116421588 A CN 116421588A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cryptococcus neoformans
isopsoralen
inhibiting
concentration
medicine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202310381380.7A
Other languages
English (en)
Inventor
钱卫东
卢家兴
高畅
王婷
刘娜
王雪飞
刘骐铭
曾昊
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shaanxi University of Science and Technology
Original Assignee
Shaanxi University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shaanxi University of Science and Technology filed Critical Shaanxi University of Science and Technology
Priority to CN202310381380.7A priority Critical patent/CN116421588A/zh
Publication of CN116421588A publication Critical patent/CN116421588A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/12—Ketones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/48—Fabaceae or Leguminosae (Pea or Legume family); Caesalpiniaceae; Mimosaceae; Papilionaceae
    • A61K36/487—Psoralea
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了异补骨脂查尔酮在制备抑制新生隐球菌感染药物中的应用，属于医药技术领域。通过二倍稀释法和琼脂扩散法确定异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的最小抑菌浓度均为16μg/mL，最低杀菌浓度为32μg/mL，揭示了中药提取物异补骨脂查尔酮对新生隐球菌具有抑制作用，在临床医学上具有潜在的应用价值。通过表征异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的生物被膜形成的影响以及对成熟生物被膜的清除效果，发现异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的生物被膜抑制和清除有显著的效果，能够为新生隐球菌抑菌剂的研究和开发提供新的思路，并避免现有的治疗新生隐球菌感染的药物的耐药性问题，为解决真菌感染性问题提供一定的帮助，发挥在医药领域的潜在价值。

Description

异补骨脂查尔酮在制备抑制新生隐球菌感染药物中的应用
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及异补骨脂查尔酮在制备抑制新生隐球菌感染药物中的应用。
背景技术
细菌感染和真菌感染是临床常见的感染性疾病，发病率和死亡率高，如果得不到早期的诊断和治疗，会严重危及患者的生命。目前真菌感染在临床上使用灰黄霉素、制霉菌素和两性霉素B等抗真菌抗生素，但是使用抗生素又存在非常严重的耐药隐患。真菌的感染治疗依然面临着严峻的挑战，因此，寻找新型抗真菌感染策略以及开发新型抗真菌药物具有重要意义。新型抗生素的研发较困难，且成本高昂，而中药抗菌作用的特点是多靶点，真菌不易产生耐药性，故从中药材中寻找具有抗菌作用的有效成分可能是应对真菌感染问题的一种新途径和新方法(周杨杨,程强,刘昆,鲁兰,朱洁,孙文霞.2015版中国药典清热、解毒类中药材的抗菌作用[J].中国抗生素杂志,2018,43(10):1161-1167.)。
新生隐球菌(Cryptococcus neoformans，C.neoformans)属于单子纲目隐球菌属，且为唯一致病真菌，多糖组成的肥厚荚膜包裹在外面，是环境中普遍存在的一类酵母型真菌(戴璐，丁烨，俞娟.新生隐球菌研究进展[J].中华医院感染学杂志，2018，28(17):5)。新生隐球菌倾向于感染HIV/AIDS或接受过器官移植和免疫抑制治疗的个体，导致肺炎和脑膜炎，进而造成大量死亡(Park B J,Wannemuehler K A,Marston B J,et al.Estimation ofthe current global burden of cryptococcal meningitis among persons livingwith HIV/AIDS[J].Aids,2009,23(4):525-530)。此外，新生隐球菌在面对环境压力和宿主压力时会依靠多细胞分工，协作的群体行为来进行应对。其中，生物被膜或生物被膜样群落被认为是造成新生隐球菌感染难以治疗的原因之一。目前研究展示出新生隐球菌的生物被膜不仅仅会黏附在医疗器械上(腹膜透析瘘管、人工心脏瓣膜等)，在临床上甚至发现在人类的脑室以及心房发现生物被膜样结构，并且新生隐球菌以生物被膜的方式参与巨噬细胞的逃逸。同时相较于游离态的细胞生物被膜中的细胞具有更强的药物耐受性。因此在临床上治疗真菌感染的难度远低于清除患者体内生物被膜的难度。
异补骨脂查尔酮(Isobavachalcone)是一种天然黄酮类物质，属于中药补骨脂中的查耳酮成分，又名补骨脂乙素。分子式是C20H20O4，分子量是324.37，CAS号是20784-50-3，分子结构是：
Figure BDA0004172356130000021
目前异补骨脂查尔酮在抑制真菌生长方面还未见报道，在目前新生隐球菌治疗手册中，对于新生隐球菌的感染主要是氟康唑、两性霉素B等抗生素治疗，但这些治疗方式在临床上极易产生耐药菌株。
发明内容
为了克服上述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供异补骨脂查尔酮在制备抑制新生隐球菌感染药物中的应用，解决当前治疗新生隐球菌感染的药物易产生耐药性的问题。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
本发明公开了异补骨脂查尔酮在制备抑制新生隐球菌感染药物中的应用，异补骨脂查尔酮抑制新生隐球菌的体外生长，并对新生隐球菌具有体外的杀灭作用。
优选地，所述新生隐球菌为人源性致病菌株。
优选地，异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的最小抑菌浓度为16μg/mL。
优选地，异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的最低杀菌浓度为32μg/mL。
优选地，异补骨脂查尔酮通过抑制新生隐球菌生物被膜的形成和/或清除新生隐球菌生物被膜抑制新生隐球菌生长。
进一步优选地，异补骨脂查尔酮对新生隐球菌生物被膜的最低抑制浓度为8μg/mL。
优选地，异补骨脂查尔酮对新生隐球菌生物被膜的最低清除浓度为32μg/mL。
优选地，所述感染药物为治疗新生隐球菌感染导致的肺炎或脑膜炎的药物。
本发明还公开了一种抑制新生隐球菌感染的药物，含有有效量的异补骨脂查尔酮，余量为药用辅料或其它可配伍的药物。
优选地，所述辅料包括淀粉、乳糖、微晶纤维素、糊精、磷酸钙、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000、羧甲基纤维素钠、羟丙纤维素或交联聚维酮中一种以上。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供的异补骨脂查尔酮在制备抑制新生隐球菌感染药物中的应用，从天然药用植物资源库入手，寻找天然抗菌物质，基于异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的作用研究，发现异补骨脂查尔酮能够通过抑制新生隐球菌生物被膜的形成来抑制新生隐球菌的生长，且随浓度的升高其抑菌作用增强。通过二倍稀释法和琼脂扩散法确定异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的最小抑菌浓度为16μg/mL，最小杀菌浓度为32μg/mL，表明异补骨脂查尔酮对新生隐球菌具有较好的抑菌作用，可以用于抑制新生隐球菌的生长。运用结晶紫染色法检测异补骨脂查尔酮对新生隐球菌生物被膜的抑制作用，发现异补骨脂查尔酮对新生隐球菌生物被膜的最低抑制浓度为8μg/mL，最低清除浓度为32μg/mL，说明异补骨脂查尔酮对于抑制和清除新生隐球菌生物被膜有确切的功效，并且在抑制新生隐球菌的生长方面，具有显著的效果，而异补骨脂查尔酮作为中药提取物，不易产生耐药性，能够为新生隐球菌抑菌剂的研究和开发提供新的思路，并避免现有治疗新生隐球菌感染的药物的耐药性问题，为解决真菌感染性问题提供一定的帮助，发挥在医药领域的潜在价值。针对临床真菌感染难题以及真菌抗生素滥用难题，利用异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的抑菌作用，将可能成为抗生素的天然的替代品，缓解新生隐球菌的耐药感染问题。以期为将异补骨脂查尔酮开发成为市场前景广阔的天然抗菌剂提供参考，为相关研究提供基础理论依据。
附图说明
图1为加入不同浓度药液测定最小抑菌浓度的96孔板的图；
图2为异补骨脂查尔酮对新生隐球菌H99的MIC测定结果图；
图3为异补骨脂查尔酮对新生隐球菌H99的菌落观察结果图；
图4为异补骨脂查尔酮作为药物在不同药物浓度下对新生隐球菌生物被膜的抑制作用结果图；
图5为异补骨脂查尔酮作为药物在不同药物浓度下对新生隐球菌生物被膜结构的抑制效果的电镜图；其中，A为0MIC，B为1/4MIC，C为1/2MIC，D为MIC；
图6为异补骨脂查尔酮作为药物在不同药物浓度下对成熟新生隐球菌生物被膜结构的清除效果的电镜图；其中，A为0MIC，B为2MIC，C为4MIC，D为8MIC。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案，下面将结合本发明实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
下面结合附图对本发明做进一步详细描述：
本发明提供的异补骨脂查尔酮在抑制新生隐球菌生长中的应用，通过二倍稀释法和琼脂扩散法确定异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度，结果表明天然提取物异补骨脂查尔酮对新生隐球菌具有较好的抑菌作用，可以用于抑制新生隐球菌的生长。为进一步研究异补骨脂查尔酮抑制新生隐球菌的生长的方式，运用结晶紫染色法检测异补骨脂查尔酮对新生隐球菌生物被膜的抑制作用。使用乙酸进行溶解，使用酶标仪测定吸收值。在进行生物被膜的非生物表面培养抑制和清除的实验条件下，使用扫描电子显微镜进行观察生物被膜抑制和清除结果。具体实验步骤如下：
一、材料、试剂和仪器
1、实验菌株
新生隐球菌H99(Cryptoccus neo formans H 99菌株；人源性分离菌株)来自于陕西科技大学食品科学与工程学院微生物实验室。
2、试剂来源
二甲基亚砜(DMSO)、生理盐水、甲醇、酵母浸粉、葡萄糖、蛋白胨、戊二醛、无水乙醇、乙酸异戊酯均购于上海西格玛奥德里奇贸易有限公司；异补骨脂查尔酮纯品(HPLC≥98％；CAS：20784-50-3)购自成都乐美天医药科技有限公司。
3、主要试剂的配制
YPD液体培养基：称取5g酵母浸粉、10g葡萄糖和10g蛋白胨，加入500mL蒸馏水，121℃、30min高压蒸汽灭菌。
1％DMSO溶液：量取99mL水，加入1mL 100％的DMSO，混匀。
99％甲醇溶液：量取1mL水，加入99mL 100％的甲醇，混匀。
0.1％结晶紫溶液：称取结晶紫0.1g，加入100mL蒸馏水，混匀。
33％冰醋酸溶液：量取33mL的冰醋酸，加入67mL蒸馏水，混匀。
4、实验仪器
高压灭菌器(天津泰斯特仪器有限公司)；DH6000A电热恒温培养箱(天津市泰斯特仪器有限公司)；超净工作台(苏州苏洁净化设备有限公司)；96孔板、24孔板(丹麦赛默飞世尔科技有限公司)；电子天平(上海金科天美有限公司)；酶标仪(深圳迈瑞生物医疗有限公司)；场发射扫描电镜(美国FEI有限公司)
二、异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的抑制作用
1、实验方法
1.1药物的配制
精密称取异补骨脂查尔酮0.01g，溶于1mL 1％的DMSO中，得到中药成分溶液。随后使用YPD液体培养基将中药成分溶液配成浓度为1mg/mL的药物储备液。取1mL药物储备液，过0.22μm的有机相滤膜，再用1％的DMSO溶液倍比稀释，得到供测量MIC使用的不同浓度的药物。
1.2菌液的配制
取在-20℃下保存的新生隐球菌H99，无菌操作条件下用接种环分别接种于含有5mL YPD液体培养基的不同玻璃试管中，放入37℃恒温培养箱中培养24h，培养至对数生长期，并使用全波长扫描式多功能酶标仪测定OD600，以相同接种方法对新生隐球菌进行传代纯化(传代纯化保证菌株的单一性，一般一代即可)培养后，稀释至1.0×106CFU/mL，备用。
1.3异补骨脂查尔酮对新生隐球菌最小抑菌浓度(MIC)的测定
稀释法是通过测定等量的菌液在含不同浓度药物的液体培养基中的生长有无，以及生长后的培养基的浊度来确定药物的抗菌效力，由稀释法所测得的药物抑制检测菌生长的最低浓度称为“最小抑菌浓度”。该法可以准确定量的测定药物的抗菌活性，方法简便、快捷，本发明具体采用96孔板二倍稀释法来测定抑菌活性。
将稀释好的菌液用移液器加入96孔板中，每个孔加180μL菌液，然后分别吸取20μL稀释至不同浓度的异补骨脂查尔酮，加到96孔板中。使得终体系为200μL。再设置一个只含培养基的阴性对照组，一个药液为两性霉素B的阳性对照组，设置的组别参见图1，其中，A行为背景对照，B、C、D和E行为4组平行实验组，以确保实验数据的可信度，实验组各浓度设置参见表1。于37℃恒温培养箱中培养24h后观察结果，并测定OD600值，以无菌体生长的孔中药物的最低浓度作为药物对新生隐球菌的最小抑菌浓度(MIC)。
表1实验组浓度设置
组别 浓度(μg/mL)
药液1 500
药液2 250
药液3 125
药液4 62.5
药液5 31.25
药液6 15.625
药液7 7.812
药液8 3.906
药液9 1.953
药液10 0.976
阴性对照(YPD培养基)
阳性对照(两性霉素B) 100
1.4异补骨脂查尔酮对新生隐球菌最低杀菌浓度(MBC)的测定
将96孔板中透明孔的最低浓度作为异补骨脂查尔酮抗菌的最小抑菌浓度，在最小抑菌浓度的基础上，将培养皿均分，并用琼脂扩散法将上述96孔板中的混悬液各取2μL滴于营养琼脂固体平板，于37℃静置培养24h，观察是否有菌落产生，平板中未见菌株生长的最低药液浓度即为最低杀菌浓度。将培养完毕的菌液吸取5μL滴加在YPD平板上方，并在30℃下培养24h后进行观察。
1.5不同药物浓度下异补骨脂查尔酮干预生物被膜形成及清除生物被膜能力的检测
1.5.1生物被膜的建立
按1.2菌液的配制步骤配制菌液，按1.1药物的配制步骤配制药物。向96孔板中加入混合菌液和各个浓度异补骨脂查尔酮，每孔共200μL(药物浓度分别为MIC、1/2MIC、1/4MIC、1/8MIC、1/16MIC)。另设空白对照孔(只含有培养基)、DMSO对照孔(加入与药物等量体积的DMSO)和阴性对照孔(不加药物的生物被膜生长对照)。每个浓度的药物做3组平行，于37℃恒温培养箱中培养24h，建立体外新生隐球菌生物被膜模型。
1.5.2结晶紫染色
结晶紫染色的方法可以快速、简便的测量药物对生物被膜的干预作用。通过不同药物浓度下OD值的大小，可以反映药物干预生物被膜的能力强弱。
培养好后取出96孔板，弃去管内全部液体(生物被膜粘附在管底部)，并用无菌PBS轻轻冲洗3次(冲洗浮菌，减少误差干扰)。再用99％的甲醇溶液固定30min晾干，然后用0.1％的结晶紫200μL染色30min，并冲洗晾干。加入33％的冰醋酸溶液，振荡器上作用30min。用酶标仪在570nm处，测定吸光度。
1.5.3扫描电镜观察
1.5.3.1生物被膜的建立
按1.2菌液的配制步骤配制菌液，按1.1药物的配制步骤配制药物。分别设置抑制组和清除组。抑制组中取1.8mL稀释后的混合菌液加入到24孔板中，再加入200μL药物，最后使药物的终浓度达到1/4MIC、1/2MIC、1MIC。另设置一个对照孔(不加药物)。把细胞爬片用酒精消毒后，放入24孔板中，于37℃恒温培养箱中培养24h。清除组中取2mL稀释后的混合菌液加入到24孔板中，把细胞爬片用酒精消毒后，放入24孔板中，于37℃恒温培养箱中培养24h，生物被膜生长完毕，加入不同浓度梯度的药物使药物终浓度为0MIC、2MIC、4MIC和8MIC。随后于37℃恒温培养箱中培养6h。
1.5.3.2生物被膜抑制和清除结果观察
场发射扫描电子显微镜在观察生物被膜时，可在不破坏生物被膜完整性的情况下，直观观察生物被膜形态，确定生物被膜的厚度，并且清晰观察生物被膜的分布与被其包裹的细菌的形态。
将细胞爬片取出，用无菌PBS轻轻漂洗，除去生物被膜表面的游离细菌。加入电镜用戊二醛，-4℃避光固定细胞生物被膜2h，再用不同梯度的乙醇(30％、50％、70％、90％、100％)进行脱水处理。最后使用乙酸异戊酯进行避光固定5h，置场发射扫描电镜观察。每个标本取3个随机视野，观察不同浓度的药物对新生隐球菌生物被膜的影响。
1.6统计学数据分析
采用SPSS 20.0软件对数据进行统计学处理与分析，数据以±SD表示，采用多重比较和单因素方差分析对各组数据进行分析和比较。P<0.05为差异性显著，P<0.01为差异性极显著。
2、实验结果
2.1异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的最小抑菌浓度和最低杀菌浓度的测定结果
异补骨脂查尔酮对新生隐球菌H99的MIC测定结果参见图2，可明显看出在15.625μg/mL时具有显著的抑制效果。
异补骨脂查尔酮对新生隐球菌H99的菌落观察结果参见图3，由图3可以清晰看见15.625μg/mL有明显菌斑，但是在31.25μg/mL没有出现菌斑。
根据实验方法1.3和1.4，通过参照浊度可以得出，异补骨脂查尔酮对新生隐球菌H99的MIC和MBC结果见表2：
表2异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的抑制结果
Figure BDA0004172356130000101
由表2可知，异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的抑制效果较好，异补骨脂查尔酮对新生隐球菌H99的最低抑菌浓度为16μg/mL，最低杀菌浓度为32μg/mL。
2.2不同药物浓度下对生物被膜形成能力的干预作用
如图4所示，在建立了体外生物被膜模型的基础上，使用酶标仪在吸光度为570nm处测定各个药物浓度组的OD值。OD值随着药物浓度的增大而减小，呈现负相关。经过SPSS软件分析，每个药物浓度组的OD值与阴性对照组存在显著性差异，P<0.05。DMSO对照组和阴性对照组的OD值之间，没有显著性差异，P>0.05。根据结晶紫染色法得到的结果，说明异补骨脂查尔酮对新生隐球菌生物被膜有确切的干预作用。
2.3不同药物浓度下药物对生物被膜内细菌活性的影响
通过场发射扫描电子显微镜观察，不同浓度药物对新生隐球菌生物被膜的影响具体如下：
如图5所示，通过场发射扫描电子显微镜观察，在抑制组中，没有加药物的情况下生物被膜形成较厚且非常致密。而当药物浓度达到1/4MIC时，生物被膜的密度明显降低其中菌体也呈现出一定程度的皱缩，菌体活力呈下降趋势。当药物浓度达到1/2MIC(即8μg/mL)时，生物被膜被明显抑制，菌体密度呈下降趋势。
如图6所示，通过场发射扫描电子显微镜观察，在清除组中，药物浓度达到2MIC(即32μg/mL)时，成熟生物被膜开始被有效清除。而当药物浓度达到4MIC时，成熟生物被膜与菌体生物量明显变小变薄，生物被膜孔洞变大。当药物浓度达到8MIC时，生物被膜被显著清除，菌体呈现单层结构。
根据以上观察结果，说明在异补骨脂查尔酮的作用下，生物被膜内的活菌的生长受到抑制，药物可以作用到生物被膜内部，即药物对新生隐球菌生物被膜有很好的抑制作用并且对成熟的新生隐球菌生物被膜有显著的清除作用。
综上所述，结合中草药提取物作为潜在的抗菌药物不易产生耐药性的特点，可通过天然植物提取纯化异补骨脂查尔酮单品，针对新生隐球菌发挥抑制其生长的作用，并通过生物被膜体外模型，发现了异补骨脂查尔酮对新生隐球菌生物被膜的体外干预作用，即对新生隐球菌生物被膜的杀灭作用。异补骨脂查尔酮对于抑制和清除新生隐球菌生物被膜有确切的功效，并且在抑制新生隐球菌的生长方面，具有显著的效果。因而可有效缓解真菌感染，降低病死率，作为中药活性物质降低药物的毒副作用，以期为抗新生隐球菌感染的新药研发提供新的思路。
以上内容仅为说明本发明的技术思想，不能以此限定本发明的保护范围，凡是按照本发明提出的技术思想，在技术方案基础上所做的任何改动，均落入本发明权利要求书的保护范围之内。

Claims (10)

1.异补骨脂查尔酮在制备抑制新生隐球菌感染药物中的应用，其特征在于：异补骨脂查尔酮抑制新生隐球菌的体外生长，并对新生隐球菌具有体外的杀灭作用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述新生隐球菌为人源性致病菌株。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的最小抑菌浓度为16μg/mL。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：异补骨脂查尔酮对新生隐球菌的最低杀菌浓度为32μg/mL。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：异补骨脂查尔酮通过抑制新生隐球菌生物被膜的形成和/或清除新生隐球菌生物被膜抑制新生隐球菌生长。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：异补骨脂查尔酮对新生隐球菌生物被膜的最低抑制浓度为8μg/mL。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：异补骨脂查尔酮对新生隐球菌生物被膜的最低清除浓度为32μg/mL。
8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述感染药物为治疗新生隐球菌感染导致的肺炎或脑膜炎的药物。
9.一种抑制新生隐球菌感染的药物，其特征在于：含有有效量的异补骨脂查尔酮，余量为药用辅料或其它可配伍的药物。
10.根据权利要求9所述的一种抑制新生隐球菌感染的药物，其特征在于：所述辅料包括淀粉、乳糖、微晶纤维素、糊精、磷酸钙、聚乙二醇-4000、聚乙二醇-6000、羧甲基纤维素钠、羟丙纤维素或交联聚维酮中一种以上。
CN202310381380.7A 2023-04-11 2023-04-11 异补骨脂查尔酮在制备抑制新生隐球菌感染药物中的应用 Pending CN116421588A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310381380.7A CN116421588A (zh) 2023-04-11 2023-04-11 异补骨脂查尔酮在制备抑制新生隐球菌感染药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202310381380.7A CN116421588A (zh) 2023-04-11 2023-04-11 异补骨脂查尔酮在制备抑制新生隐球菌感染药物中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116421588A true CN116421588A (zh) 2023-07-14

Family

ID=87086814

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202310381380.7A Pending CN116421588A (zh) 2023-04-11 2023-04-11 异补骨脂查尔酮在制备抑制新生隐球菌感染药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116421588A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Samaranayake et al. Synergistic activity of lysozyme and antifungal agents against Candida albicans biofilms on denture acrylic surfaces
JP2022516984A (ja) 単離されたロドコッカス・ルーバーの細胞壁骨格のヒトパピローマウイルス感染症を治療する医薬の製造における使用
Otto et al. Assessment of antibacterial activity of crude leaf and root extracts of Cassia alata against Neisseria gonorrhea.
CN111419829B (zh) 和厚朴酚在抑制猪链球菌或其生物被膜中的用途
CN108853358B (zh) 一种抗菌中药组合物及其制备方法和用途
CN103550282B (zh) 一种制备西瓜霜的方法及其抗感染的医药用途
CN103698515B (zh) 一种破坏烟曲霉生物膜的方法
CN116421588A (zh) 异补骨脂查尔酮在制备抑制新生隐球菌感染药物中的应用
CN109843289B (zh) 一种抗白色念珠菌的二芳基硫族化合物及其制备和应用
CN104958284B (zh) 大黄酸在制备抑制木糖葡萄球菌生物被膜药物中的用途
CN103585277A (zh) 丁香叶提取物在抑制猪链球菌以及干预和消除猪链球菌生物被膜中的用途
CN105079007B (zh) 水杨酸在制备抑制木糖葡萄球菌生物被膜药物中的用途
CN117618409A (zh) 原儿茶酸在抑制小肠结肠炎耶尔森氏菌生物被膜中的应用
CN111228268B (zh) 一种抗菌中药成分组合物在杀灭生物被膜中的应用
Nehmatullah et al. Antimicrobial potential of some plant extracts against Candida species Isolated from infants oral thrush
CN113101284B (zh) 大蒜辣素在制备抗酵母菌药物中的应用
CN104940215B (zh) 阿司匹林在制备抑制木糖葡萄球菌生物被膜药物中的用途
CN114601829B (zh) 一种n2化合物在制备抗真菌的药物中的应用
LU504544B1 (en) Application of extract from leaves of nauclea officinalis in preparation of drug for resisting candida krusei
CN106798746A (zh) 熊果酸新用途及含有熊果酸的组合物及其用途
Masniah et al. Potential Antifungal of Merang Padi Extract (Oryza sativa) Against Fungal Growth
CN117679412A (zh) 异补骨脂查尔酮和氟康唑联合用药在制备抗真菌药物中的应用
CN112891343B (zh) 3-吲哚乙腈在制备抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2药物中的应用
CN115137733B (zh) 熊去氧胆酸在制备mcr-3酶抑制剂中的应用
CN104306477A (zh) 黄连水提物及其单体在制备抑制猪链球菌或干预猪链球菌生物被膜药物中的用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination