CN116348087A - 包含氨基酸的个人护理组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于保护皮肤免受不期望的细菌侵害的个人护理组合物。本发明特别地可用于配制组合物,该组合物确保皮肤共生细菌例如表皮葡萄球菌(S.epidermidis)的生长,同时抑制有害的细菌例如大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)等的生长。因此,包含精选的氨基酸的混合物的本发明提供在皮肤上的微生物组平衡。
Description
技术领域
本发明涉及用于保护皮肤免受不期望的细菌侵害的个人护理组合物。本发明特别地可用于配制组合物,该组合物充当皮肤共生细菌例如表皮葡萄球菌(S.epidermidis)的益生元以产生代谢物,该代谢物通过本发明已显示出抑制有害的细菌例如大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)等的生长。因此,本发明提供在皮肤上的微生物组平衡。
背景技术
哺乳动物的皮肤被认为是身体的最大器官,并且具有最大的表面积。皮肤形成抵御微生物的第一道防线,该微生物通过空气、水、食物或与身体接触的材料可以侵入身体。当身体在皮肤上或系统上受到感染时,解决此类卫生问题的传统方法是用减少或杀死病菌的抗微生物活性物处理皮肤/身体。最近的研究表明,许多在皮肤上永久存在的细菌(被称为皮肤共生细菌)通常不导致健康个体的感染,更确切地说它们是保护皮肤免受致病病原体侵害的有益细菌。已经提出数种机制以解释该保护,而一些流行的机制是:在皮肤上物理地占据空间以防止病原体的定殖(colonization);产生这样的代谢物,该代谢物避开有害的,可能是致病的生物体;生成这样的代谢物,该代谢物增强先天的防御机制以防止受到有害的病原体的感染;和提供其它益处,例如维持皮肤pH值、屏障功能等。因此,最近,有一种趋势是远离用广谱抗微生物活性物治疗皮肤的方法以杀死在皮肤(或身体的任何其它部分)上存在的所有微生物作为治疗感染的手段。相反,该方法更倾向于靶向或选择性抑制/杀死要求的微生物,以将皮肤共生生物体排除在外。这确保将皮肤微生物组保持在健康平衡的状态,以用于长期卫生和健康。
为了解决选择性杀死在皮肤上的非共生细菌例如大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的问题,本发明人将研究指向通过益生元/选择性发酵诱导剂(SFI)的使用来增加皮肤共生细菌的数量和功能。
本发明人在他们在益生元领域中的广泛研究过程期间意识到,许多碳源,例如碳水化合物和糖已知为皮肤益生元,例如WO2013/122931(P&G)公开皮肤共生益生元的局部使用以改善皮肤微生物组的健康,从而潜在地改善皮肤的状态和/或外观。在本发明中,他们探索了氮源(例如氨基酸)作为益生元的用途,并且出人意料地发现了,只有某些选择的氨基酸作为益生元而将其它氨基酸排除在外。
因此,本发明的一个目的是提供确保皮肤共生细菌的生长的组合物。
本发明的另一个目的是提供组合物,该组合物抑制有害的微生物的生长,同时确保在皮肤上的皮肤共生细菌的生长。
发明内容
本发明的第一方面涉及个人护理组合物,所述个人护理组合物包含氨基酸L-半胱氨酸、L-丝氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-酪氨酸、L-甘氨酸和L-苏氨酸的组合,其中所述组合物包含小于0.05重量%,优选地小于0.01重量%的其它氨基酸。
本发明的另一方面涉及滋养皮肤共生细菌的方法,所述方法包括将第一方面的组合物施加至皮肤上的步骤。
具体实施方式
通过阅读以下详细描述和所附权利要求,这些和其它方面、特征和优点对于本领域普通技术人员来说将变得明显。为了避免疑问,本发明的一个方面的任何特征可以用于本发明的任何其它方面中。“包含(comprising)”旨在表示“包括(including)”,但不一定是“由…组成”或“由…构成”。换言之,所列步骤或选项不必是穷尽的。需要注意的是,在以下描述中给出的实施例旨在阐明本发明,而不旨在将本发明限制于这些实施例本身。同样,除非另有说明,否则所有百分比都是重量/重量百分比。除了在实施例和对比例中,或在另有明确指出的地方,在本说明书和权利要求书中表示材料的量或反应的条件、材料的物理性质和/或用途的所有数值应被理解为由“约”修饰。以“从x至y”的格式表示的数值范围被理解为包括x和y。对于特定特征,当以“从x至y”的格式描述多个优选的范围时,应当理解,还考虑组合不同端点的所有范围。
本发明涉及组合物,其包含选择的氨基酸的特定组合,以用于通过滋养皮肤共生细菌来保护皮肤免受非共生细菌的侵害。本发明人已经发现,如果组合物仅包含七种选择的氨基酸,优选地其中的五种,更优选地仅其中的三种,而将其它氨基酸排除在外,则与包含一种或多种或所有不在选择列表中的氨基酸相比,功效更好。此外,它涉及在皮肤护理组合物中的该组合作为共生细菌滋养剂的用途。可替代地,本发明还涉及在皮肤护理组合物中的该组合作为共生细菌的益生元的用途。本发明人认为,这是由于只有选择的氨基酸作为皮肤共生细菌的益生元而不作为有害的细菌的益生元而实现的;并且这只有当不在选择列表中的氨基酸不存在或处于不显著的水平时才起作用。
在下文中描述的关于本发明的一个方面(例如根据本发明所述的组合物或用途)的任何优选也优选用于本发明的任何一个其它方面中。
本文中使用的“皮肤”是指包括在身体的任何部位(例如面部、颈部、胸部、背部、手臂、腋下、手、腿、臀部和头皮)上的皮肤。它也可用于保护婴儿的皮肤。“婴儿”是指年龄小于五岁,优选地小于三岁,更优选地小于一岁的儿童。本发明的组合物针对病原体的用途优选地为非治疗性的,例如通过化妆品或个人护理组合物递送。此外,本发明的组合物和本发明的方法也优选地用于非治疗形的用途。此类组合物可以是以免洗型(leave-on)组合物的形式。可替代地且同样优选地,它可以通过清洗型(wash-off)的形式递送,以用于递送选择性保护性益处至哺乳动物特别使人类的局部区域例如皮肤和/或毛发。此类组合物包括施加至人体的用于改善外观、清洁或一般美学的任何产品。用局部可接受的载体可递送本发明的组合物,该载体可以是无水基质、液体、洗剂、乳膏(cream)、泡沫、磨砂膏、凝胶或乳状液。
本发明涉及个人护理组合物,所述组合物包含氨基酸L-半胱氨酸、L-丝氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-酪氨酸、L-甘氨酸和L-苏氨酸的组合,其中所述组合物包含小于0.05重量%,优选地小于0.01重量%的其它氨基酸。
在下表-1中给出根据本发明的有用的氨基酸的结构和它们的性质:
表-1:
根据本发明的一个优选的方面,提供组合物,所述组合物包含氨基酸L-半胱氨酸、L-丝氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-酪氨酸的组合,其中所述组合物包含小于0.05重量%,优选地小于0.01重量%的其它氨基酸。
根据本发明的另外一个优选的方面,提供组合物,所述组合物包含氨基酸L-半胱氨酸、L-丝氨酸和L-丙氨酸的组合,其中所述组合物包含小于0.05重量%,优选地小于0.01重量%的其它氨基酸。
以组合物的总重量计,在本发明的任意方面中选择性包含的氨基酸优选地以0.01至1重量%的每种所述氨基酸存在。在本发明的任意方面中的每种所述氨基酸更优选地占所述组合物的至少0.03重量%,甚至更优选地至少0.05重量%,另外更优选地至少0.07重量%,最佳地至少0.1重量%。在本发明的任意方面中的每种所述氨基酸更优选地占所述组合物的最多0.9重量%,更优选地最多0.8重量%,另外更优选地最多0.7重量%,最佳地最多0.5重量%。以所述组合物的总重量计,根据本发明的组合物包含0.03至7%,优选地0.05至5%,最优选地0.07至3%的总量的氨基酸。
“小于0.05重量%,优选地小于0.01重量%的其它氨基酸”是指,以所述组合物的重量计,不在本发明的一个方面的选择列表中的每种所述氨基酸的浓度为小于0.05重量%,优选地小于0.01重量%。根据本发明的一个特别优选的方面,以所述组合物的重量计,不在本发明的一个方面的选择列表中的每种所述氨基酸的浓度为小于0.005重量%,最优选地为小于0.001重量%。根据另外一个优选的方面,以所述组合物的总重量计,不在本发明的一个方面的选择列表中的氨基酸的总量为小于0.05重量%,优选地小于0.01重量%,另外更优选地小于0.005重量%。
根据本发明的另一个优选的方面,提供组合物,该组合物包含小于1重量%,优选地小于0.1重量%的肽,在所述肽的链中具有多于3个氨基酸(3amino acids)。根据本发明的还另一个优选的方面,提供包含小于1重量%,优选地小于0.1重量%的蛋白质的组合物。因此,当在不存在肽或蛋白质的组合物中包含所述选择的氨基酸时,会观测到本发明的益处。
在本发明的组合物中存在的选择的氨基酸优选地为皮肤共生细菌的益生元。皮肤共生细菌优选地为表皮葡萄球菌(S.epidermidis)。根据本发明来保护皮肤免受非共生细菌的侵害,所述非共生细菌可以是大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、铜绿假单胞菌(P aeruginosa)或它们的混合物。消费者经常发现此类非共生细菌是不想要的或不期望的,因为它们可提供某些负面属性,例如产生瘙痒、不适或恶臭。在某些情况下,例如干燥的皮肤、湿疹和特应性皮炎,它们甚至可以是有害的,或在极端情况下是致病的。
在一个方面,本发明的组合物优选地为清洗型组合物,这能够通过包含1至80重量%的表面活性剂来实现。一般来说,该表面活性剂可选自这样的表面活性剂,所述表面活性剂在熟知的教科书例如“Surface Active Agents”Vol.1,by Schwartz&Perry,Interscience 1949,Vol.2,by Schwartz,Perry&Berch,Interscience1958和/或由Manufacturing Confectioners Company出版的“McCutcheon's Emulsifiers andDetergents”的现行版,或在“Tenside Taschenbuch”,H.Stache,2nd Edn.,Carl HauserVerlag,1981中被描述。可以使用任何类型的表面活性剂,即阴离子、阳离子、非离子、两性离子或两性,但是优选的表面活性剂是阴离子或非离子类型。
根据本发明的清洗型组合物的pH在4至11内,优选地在5.5至10内。
表面活性剂可以是皂。皂是合适的表面活性剂以用于本发明的组合物的个人洗涤应用。所述皂优选地为C8-C24皂,更优选地C10-C20皂,最优选地C12-C16皂。所述皂可具有或可不具有一个或多个碳-碳双键或三键。所述皂的阳离子可以是碱金属、碱土金属或铵。优选地,所述皂的阳离子选自钠、钾或铵。更优选地,所述皂的阳离子是钠或钾。
通过皂化脂肪和/或脂肪酸可获得皂。通常在皂制备中使用的脂肪或油可以是例如牛油、牛油硬脂类(tallow stearines)、棕榈油、棕榈硬脂类(palm stearines)、大豆油、鱼油、蓖麻油、米糠油、向日葵油、椰子油、巴巴苏仁油、棕榈仁油等。在上述方法中,脂肪酸衍生自选自椰子、米糠、花生、牛油、棕榈、棕榈仁、棉籽、大豆、蓖麻等的油/脂肪。
典型的脂肪酸共混物由5%至30%的椰子脂肪酸和70%至95%的不含硬化的米糠油的脂肪酸组成。衍生自其它合适的油/脂肪例如花生、大豆、牛油、棕榈、棕榈仁等的脂肪酸也可以其它需要的比例来使用。最优选的皂是月桂酸盐皂(laurate soap)。当在固体形式的本发明的组合物中存在时,皂是以占所述组合物的30至90重量%,优选地50至85重量%,更优选地55至75重量%的量存在。当在液体形式的所述组合物中存在时,皂是以占所述组合物的0.5至20重量%,优选地1至10重量%的量存在。
可替代地,表面活性剂是非离子表面活性剂,例如C8-C22,优选地C8-C16脂肪醇乙氧基化物,其包含1至8个之间的环氧乙烷。表面活性剂优选地选自伯烷基硫酸盐、仲烷基磺酸盐、烷基苯磺酸盐或乙氧基化的烷基硫酸盐。所述组合物可另外包含阴离子表面活性剂,例如烷基醚硫酸盐,优选地或者来自天然来源或者来自合成来源的具有1至3个之间的环氧乙烷基团和/或磺酸的那些。特别优选的是十二烷基醚硫酸钠。在所述组合物中也可存在烷基多葡萄糖苷,优选地具有在C6和C16之间的碳链长度的那些。以所述组合物的重量计,在液体形式的清洁应用中的合适的表面活性剂浓度通常是大于0.5重量%但小于10重量%,优选地1至5重量%。在固体的组合物中,表面活性剂优选地以占所述组合物的5至40重量%,优选地10至30重量%的量存在。
取决于所述组合物的形式,水可优选地以占所述组合物的10至90重量%的量存在。在固体的组合物中,水可以10-30%的量存在,而在液体或半固体的组合物中,水可以40%至90%的量存在。
当根据本发明的另一方面的组合物是免洗型组合物时,它优选地包含表面活性剂、润肤剂、保湿剂、颜料或防腐剂中的一种或多种。
根据本发明的免洗型组合物的pH在5至9内,优选地在5.5至8内。
载体充当所述组合物的成分的稀释剂或分散剂。该载体可以是基于水的、无水的或乳状液,其中油包水或水包油乳状液通常是优选的。如果需要使用水,则水通常构成所述组合物的余量,所述水最优选地占所述组合物的40重量%至80重量%。
除了水之外,还可任选地包含有机溶剂作为载体以辅助在本发明的组合物中的任何其它载体。实例包括烷醇,例如乙醇和异丙醇。
其它合适的有机溶剂包括酯油,例如异丙基肉豆蔻酸酯、鲸蜡基肉豆蔻酸酯、2-辛基十二烷基肉豆蔻酸酯、鳄梨油、杏仁油、橄榄油和新戊二醇二癸酸酯。典型地,此类酯油有助于乳化所述组合物,并且通常使用有效量以生成稳定的乳化液,最优选地油包水乳化液。
如果需要,润肤剂也可用作载体。优选醇类例如1-十六烷醇(即鲸蜡醇)。其它润肤剂包括硅油和合成酯。适合使用的硅油包括含有3至9个,优选地4至5个硅原子的环状或线性聚二甲基硅氧烷。可用作润肤剂的非挥发性硅油包括聚烷基硅氧烷、聚烷基芳基硅氧烷和聚醚硅氧烷共聚物。可用的非挥发性聚烷基硅氧烷包括聚二甲基硅氧烷。也可以使用硅酮弹性体。可任选使用的酯润肤剂是:
(i)具有10至20个碳原子的脂肪酸的烯基酯或烷基酯。它们的实例包括异二十烷基新戊酸酯(isoarachidyl neopentanoate)、异壬基异壬酸酯、油基肉豆蔻酸酯、油基硬脂酸酯和油基油酸酯;
(ii)醚-酯,例如乙氧基化的脂肪醇的脂肪酸酯;
(iii)多元醇酯。乙二醇一脂肪酸酯和乙二醇二脂肪酸酯、二乙二醇一脂肪酸酯和二乙二醇二脂肪酸酯、聚乙二醇(200-6000)一脂肪酸酯和聚乙二醇(200-6000)二脂肪酸酯、丙二醇一脂肪酸酯和丙二醇二脂肪酸酯、聚丙二醇2000一油酸酯、聚丙二醇2000一硬脂酸酯、乙氧基化的丙二醇一硬脂酸酯、甘油一脂肪酸酯和甘油二脂肪酸酯、聚甘油多脂肪酯、乙氧基化的甘油一硬脂酸酯、1,3-丁二醇一硬脂酸酯、1,3-丁二醇二硬脂酸酯、聚氧乙烯多元醇脂肪酸酯、脱水山梨糖醇脂肪酸酯和聚氧乙烯脱水山梨糖醇脂肪酸酯是令人满意的多元醇酯;
(iv)蜡酯,例如蜂蜡、鲸蜡、硬脂酸硬脂基酯和二十烷基山萮酸酯;和,
(v)甾醇酯,其中胆固醇脂肪酸酯为实例。
当存在时,润肤剂通常占所述组合物的0.1重量%至50重量%,包括其中包含的所有范围。
还可包含具有10至30个碳原子的脂肪酸作为载体。此类脂肪酸的实例包括壬酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、异硬脂酸、油酸、亚油酸、花生酸、山萮酸或芥酸和它们的混合物。
通过使用矿脂或石蜡,可改善润湿(moisturisation)。增稠剂也可以用作在所述组合物中的一部分载体。典型的增稠剂包括交联的丙烯酸酯类(例如982)、疏水改性的丙烯酸酯类(例如/>1382)、纤维素衍生物和天然树胶。在可用的纤维素衍生物中有羧基甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、乙基纤维素和羟甲基纤维素。适合用于本发明的天然树胶包括瓜尔胶、黄原胶、菌核(sclerotium)、角叉菜胶、果胶和此类树胶的组合。增稠剂的量可占所述组合物的0.001重量%至5重量%,最佳地0.01重量%至0.5重量%。
还可存在表面活性剂。当存在时,表面活性剂的总量占所述组合物的2重量%至40重量%,优选地4重量%至20重量%,最佳地5重量%至12重量%。表面活性剂选自阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、阳离子表面活性剂和两性表面活性剂。特别优选的非离子表面活性剂是具有C10-20脂肪醇或酸的疏水物的那些,其中每摩尔的该疏水物与2至100摩尔的环氧乙烷或环氧丙烷缩合;乙二醇的一脂肪酸酯和乙二醇的二脂肪酸酯;脂肪酸一甘油酯;脱水山梨糖醇的一C8-C20脂肪酸酯和脱水山梨糖醇的二C8-C20脂肪酸酯;嵌段共聚物(环氧乙烷/环氧丙烷);和聚氧乙烯脱水山梨糖醇以及它们的组合。烷基多苷和糖类脂肪酰胺(例如甲基葡糖酰胺类)也是合适的非离子表面活性剂。
优选的阴离子表面活性剂包括皂、烷基醚硫酸盐和磺酸盐、烷基硫酸盐和磺酸盐、烷基苯磺酸盐、烷基和二烷基磺基琥珀酸盐、C8-20酰基羟乙磺酸盐、酰基谷氨酸盐、C8-20烷基醚磷酸盐和它们的组合。
各种其它成分也可用于组合物中。“活性物”被限定为除了润肤剂和除了仅改善所述组合物的物理特性的成分之外的皮肤有益剂。尽管不限于这一类,但一般实例包括补充颜料例如滑石和二氧化硅,以及α-羟基酸、β-羟基酸和锌盐。
β-羟基酸包括水杨酸。氧化锌和吡啶硫酮锌(zinc pyrithione)是可用的锌盐的实例。
合适的防腐剂包括p-羟基苯甲酸的烷基酯、乙内酰脲衍生物、丙酸盐和各种季铵化合物。特别优选的防腐剂是对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯氧乙醇和苯甲醇。防腐剂占所述组合物的0.1重量%至2重量%。
包装可以是贴片、瓶、管、滚球式施加器、推进剂驱动的气雾剂装置、挤压容器或带盖的广口瓶。
不希望受理论约束,本发明人认为许多细菌可以利用它们的内部机制合成大多数氨基酸,但可能不能合成所有氨基酸。如果它们没有必要的酶,则它们将需要由环境供应此类酶。此外,它们总是更喜欢使用在它们的环境中已经可获得的氨基酸,而不是合成它们,因为这需要能量以制备它们。在目前的情况下,我们确定了支持共生细菌的良好生长所需的氨基酸的关键混合物,而且幸运的是,它们没有为致病细菌提供任何益处。
因此,本发明旨在增加、促进、改善、保持或维持皮肤健康和皮肤弹性。这是通过经由平衡的微生物组健康来确保健康的皮肤生态系统而实现的。“平衡的微生物组健康”是指共生细菌与非共生细菌的比率保持在待保持的皮肤健康所需的范围内。
本发明特别可用于在婴儿的皮肤上使用,其中广谱抗菌剂的使用被认为过于苛刻,因为当婴儿成长为成人时,该广谱抗菌剂的使用倾向于干扰用于婴儿长期健康的健康皮肤微生物组的生长和保持。因此,无论是在婴儿的皮肤还是其它皮肤上使用,用于本发明中的组合物基本上不含常规的抗微生物化合物。“基本上不含”是指常规抗微生物活性物以占所述组合物的小于0.1重量%,更优选地小于0.05重量%,另外更优选地小于0.01重量%,甚至更加另外优选地小于0.001重量%的量存在。“常规的抗微生物活性物”是指杀死或抑制攻击皮肤的细菌例如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等的抗微生物活性物。从上述抗微生物活性物的限定中排除由于防腐剂的微生物稳定性而在组合物中包含的防腐剂。包含防腐剂以确保所述组合物对于可能生长并降解该组合物的微生物是稳定的。在另一方面,在组合物中包含抗菌化合物以阻止在基质上施加组合物的该基质(例如皮肤)上存在的微生物的生长。
常规的抗微生物化合物通常是来自双胍类、双酚类、卤酚类、微动(oligodynamic)金属化合物例如具有银或锌的那些、阳离子抗微生物化合物或精油活性物的类别。双胍类具有可另外衍生的一般碱基结构,例如氯己定或聚六亚甲基双胍(PHMB)。双酚类包括三氯生或六氯酚。卤酚类包括氯二甲苯酚(PCMX)。阳离子化合物是另一类别的抗微生物活性物,例如苯扎氯铵、鲸蜡基氯化吡啶鎓或鲸蜡基三甲基溴化铵。
在本发明的组合物中,特别地不以任何显著量包含低沸点醇的类别(它们是快速作用的抗微生物剂)。理想地,它们不出现在此类组合物中。“低沸点醇”是指具有2至5个碳原子的一元醇。
当配制本发明的组合物以用于婴儿的皮肤上时,优选的是它基本上不含芳香组分。“芳香组分”是指复合以形成香料的分子或一组分子。此类化合物的特性是它们是挥发性的(在不同程度上),并提供令人愉快的气味。在香料或芳香组分的上下文中,“基本上不含”是指它们以占所述组合物的小于0.05重量%,更优选地小于0.01重量%,另外更优选地小于0.005重量%,甚至更另外优选地小于0.001重量%的量存在。
本发明的还另一方面涉及本发明的组合物,其用于经由滋养皮肤共生细菌来保护皮肤免受非共生甚至不期望的细菌的侵害。尽管根据本发明的用途通常具有非治疗性的本质,但该组合物也可用于治疗应用中。因此,该组合物优选地是这样地组合物,所述组合物用于经由滋养皮肤共生细菌来治疗性地保护皮肤免受有害的细菌的侵害。在另一方面,本发明涉及组合物用于为皮肤提供微生物组益处的用途,所述组合物包含氨基酸L-半胱氨酸、L-丝氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-酪氨酸、L-甘氨酸和L-苏氨酸的组合,其中所述组合物包含小于0.05重量%,优选地小于0.01重量%的其它氨基酸。
本发明的还另一方面涉及在抑制有害的细菌的生长的同时滋养皮肤共生细菌的方法,所述方法包括将本发明的组合物施加至皮肤上的步骤。用关于皮肤共生细菌表皮葡萄球菌的实验数据已经观测到了这一点,但它很可能与许多其它此类已知定殖健康皮肤的有益细菌一起。本发明的方法对抑制有害的细菌是有效的,所述有害的细菌包括选自大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌或它们的混合物中的一种或多种。
现在借助于以下非限制性实施例将证实本发明。
实施例
实施例-1:在作为补充剂的单一氨基酸的存在下的表皮葡萄球菌的生长:
分别地研究了由于二十种不同氨基酸中的每一种的存在而导致的上述共生细菌的生长。从Hi media得到了所有20种L-氨基酸。在蒸馏水中制备了储备液(stock),并通过将该储备液穿过0.22μm过滤器来过滤灭菌。制备了pH 7.4的100mM的磷酸钠缓冲液并过滤灭菌。在96孔平底透明平板中设置了反应。将100μl的20%TSB(通过在100mM的磷酸钠缓冲液中稀释100%TSB而制备)添加至相应的孔中,然后添加20μl的10%葡萄糖(在水中制备并过滤灭菌)、20μl的1%各自的氨基酸储备液(在对照孔中而不是在氨基酸储备液中加入了相同体积的缓冲液)、20μl的0.2OD600nm表皮葡萄球菌培养物(22-24小时平板培养),其相当于在100mM的磷酸钠缓冲液中所制备的108CFU/ml,并用缓冲液将最终体积补足至200μl。各自的氨基酸的最终浓度为0.1%。对每个反应设置了三个重复样本(in triplicate)。该平板在37℃下在静止条件下温育了24小时。24小时后,使用TECAN平板读取器在600nm处测量了该平板的吸光度。然后,将吸光度值归一化至对照(在10%TSB+1%葡萄糖中所培育的表皮葡萄球菌)。在以下表-1中总结关于每个样品相对于对照的%生长的数据:
表-1
实施例 | 氨基酸 | 三字母代码 | %生长 |
1A | 丙氨酸 | Ala | 139 |
1B | 精氨酸 | Arg | 95 |
1C | 天冬酰胺 | Asn | 113 |
1D | 天冬氨酸 | Asp | 121 |
1E | 半胱氨酸 | Cys | 121 |
1F | 甘氨酸 | Gly | 135 |
1G | 谷氨酸 | Glu | 110 |
1H | 谷氨酰胺 | Gln | 109 |
1I | 组氨酸 | His | 96 |
1J | 异亮氨酸 | Ile | 99 |
1K | 亮氨酸 | Leu | 96 |
1L | 赖氨酸 | Lys | 85 |
1M | 蛋氨酸 | Met | 87 |
1N | 苯丙氨酸 | Phe | 100 |
1O | 脯氨酸 | Pro | 93 |
1P | 丝氨酸 | Ser | 134 |
1Q | 酪氨酸 | Tyr | 120 |
1R | 苏氨酸 | Thr | 126 |
1S | 色氨酸 | Trp | 99 |
1T | 缬氨酸 | Val | 96 |
上表中的具有更高绝对值的样品应解释为确保皮肤共生细菌表皮葡萄球菌的更高生长的氨基酸。
实施例-2:表皮葡萄球菌的生长是在0.2%的氨基酸混合物(具有单一氨基酸缺失
的全部二十种氨基酸)的存在下
通过混合等比例的所有各自的氨基酸储备液,制备了二十种不同的氨基酸混合物,在每个混合物中排除一种氨基酸(加入了等体积的水而不是被排除的氨基酸)。通过混合等比例的所有20种各自的氨基酸储备液,制备了对照氨基酸混合物。
在96孔平底透明平板中设置了反应。将100μl的20%TSB(通过在100mM磷酸钠缓冲液中稀释100%TSB而制备)加入孔中,然后添加20μl的10%葡萄糖(在水中制备并过滤灭菌)、20μL的2%氨基酸混合物、20μl的0.2OD600nm表皮葡萄球菌培养物(22-24小时平板培养),其相当于在pH7.4的100mM磷酸钠缓冲液中所制备的108CFU/ml,并用缓冲液将最终体积补足至200μl。对每个反应设置了三个重复样本。在所述混合物中各自的氨基酸的最终浓度为0.01%。
该平板在37℃下在静止条件下温育了24小时。24小时后,使用TECAN平板读取器在600nm处测量了该平板的吸光度。然后,将吸光度值归一化至对照(在含有所有20种氨基酸的10%TSB+1%葡萄糖+0.2%氨基酸混合物中所培育的表皮葡萄球菌)。
在以下表-2中总结关于每个样品相对于对照的%生长的数据。以下各行中所示的氨基酸表示在该特定样品中未包含的氨基酸:
表-2
实施例 | 氨基酸 | 三字母代码 | %生长 |
2A | 丙氨酸 | Ala | 94 |
2B | 精氨酸 | Arg | 90 |
2C | 天冬酰胺 | Asn | 92 |
2D | 天冬氨酸 | Asp | 88 |
2E | 半胱氨酸 | Cys | 77 |
2F | 甘氨酸 | Gly | 101 |
2G | 谷氨酸 | Glu | 102 |
2H | 谷氨酰胺 | Gln | 92 |
2I | 组氨酸 | His | 89 |
2J | 异亮氨酸 | Ile | 99 |
2K | 亮氨酸 | Leu | 92 |
2L | 赖氨酸 | Lys | 94 |
2M | 蛋氨酸 | Met | 100 |
2N | 苯丙氨酸 | Phe | 101 |
2O | 脯氨酸 | Pro | 99 |
2P | 丝氨酸 | Ser | 80 |
2Q | 酪氨酸 | Tyr | 94 |
2R | 苏氨酸 | Thr | 97 |
2S | 色氨酸 | Trp | 104 |
2T | 缬氨酸 | Val | 105 |
在上表中具有更低绝对值的样品应解释为确保皮肤共生细菌表皮葡萄球菌的更高生长的氨基酸。因此,数值越低越好。
基于在以上表-1和表-2中的数据(之间的差异),本发明人将最期望确保表皮葡萄球菌的生长的氨基酸列为七种氨基酸,即:L-半胱氨酸、L-丝氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-酪氨酸、L-甘氨酸和L-苏氨酸。
实施例-3:在上述七种氨基酸的混合物的存在下的表皮葡萄球菌/金黄色葡萄球
菌的生长模式。
在氨基酸混合物(混合物7)的存在下,对表皮葡萄球菌(共生)和金黄色葡萄球菌(致病菌)二者进行了生长动力学实验,所述氨基酸混合物7(混合物7)是使用一组七种氨基酸(丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、甘氨酸、丝氨酸、酪氨酸和苏氨酸)而制备的,所述七种氨基酸在补充实验中显示出了促进表皮葡萄球菌的生长。在以下表3显示出以在600nm处的吸光度测量的上述两种微生物的生长动力学。
表-3:表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌的生长动力学:10%TSB+1%葡萄糖+0.1%氨基酸混合物(混合物7)
时间(小时) | 在600nm处的表皮葡萄球菌吸光度 | 在600nm处的金黄色葡萄球菌吸光度 |
6 | 0.264 | 0.324 |
10 | 0.494 | 0.694 |
14 | 0.706 | 0.920 |
18 | 0.890 | 0.890 |
20 | 1.012 | 0.870 |
在上表中的数据表明,该七种选择的氨基酸的混合物确保表皮葡萄球菌即使在18小时后也能持续生长,同时金黄色葡萄球菌的生长在18小时后开始降低。
实施例4:从所述选择的七种氨基酸中识别阻碍金黄色葡萄球菌的生长的五种最
有效的氨基酸
为了识别作为在混合物7中的金黄色葡萄球菌的更高生长率的主要促成因素的一组氨基酸,用所有七种各自的氨基酸进行了生长动力学实验。动力学数据示出了所有七种氨基酸随着生长进入稳定阶段而单调增加。进行了所述实验直到生长20小时。它们在0.1重量%浓度的各自的氨基酸下进行。在600nm处的吸光度方面的数据总结在以下表-4中:
表-4:
实施例 | 氨基酸 | 在600nm处的吸光度 |
4A | 丙氨酸 | 0.447 |
4B | 半胱氨酸 | 0.476 |
4C | 酪氨酸 | 0.478 |
4D | 丝氨酸 | 0.504 |
4E | 天冬氨酸 | 0.540 |
4F | 苏氨酸 | 0.697 |
4G | 甘氨酸 | 0.863 |
在以上表-4中的数据表明前五种氨基酸,即半胱氨酸、丝氨酸、丙氨酸、天冬氨酸和酪氨酸确保所需的对金黄色葡萄球菌的最大的抑制。
实施例-5:在选择的五种氨基酸的混合物的存在下的表皮葡萄球菌/金黄色葡萄
球菌的生长模式。
在氨基酸混合物(混合物5)的存在下,对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌进行了生长动力学实验,所述氨基酸混合物(混合物5)通过使用在上述实验中识别的一组五种选择的氨基酸(丙氨酸、天冬氨酸、半胱氨酸、丝氨酸和酪氨酸)而制备。在以下表5中示出以在600nm处的吸光度测量的上述两种微生物的生长动力学。
表-5:在10%TSB、1%葡萄糖和0.1%氨基酸混合物(具有混合物5)的存在下的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌的生长动力学
时间(小时) | 在600nm处的表皮葡萄球菌吸光度 | 在600nm处的金黄色葡萄球菌吸光度 |
6 | 0.228 | 0.283 |
10 | 0.502 | 0.401 |
14 | 0.571 | 0.456 |
18 | 0.712 | 0.486 |
20 | 0.750 | 0.499 |
在上表中的数据表明,所述五种选择的氨基酸的混合物确保表皮葡萄球菌的持续生长,同时金黄色葡萄球菌的生长低得多。因此,用该五种氨基酸的混合物显著地观测到所需的微生物组平衡的特点。
实施例-6:在混合物5的更小子集的存在下的表皮葡萄球菌/金黄色葡萄球菌的生
长模式
为了进一步优化和最小化来自所选择的五种氨基酸的混合物中的氨基酸混合物,所述五种氨基酸可以优先地支持表皮葡萄球菌的生长胜过支持金黄色葡萄球菌的生长,在不同的氨基酸组合的存在下对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌二者进行了生长动力学实验,所述不同的氨基酸组合含有两种、三种或四种氨基酸,在所有测试的所述组合中保持两种必需氨基酸即半胱氨酸和丝氨酸作为共同氨基酸。选择了该两种氨基酸,因为如从表-2中观测到,它们各自的缺失导致了在各种的氨基酸组合中的最低生长。在下表-6中总结该数据:
表-6:相对于对照(10%TSB+1%葡萄糖),在氨基酸混合物(10%TSB+1%葡萄糖+0.1%氨基酸混合物)的存在下的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌的生长
注:“-”表示生长与其对照相似;“+”表示与对照相比的更高的生长
上表-6中的数据表明,最小子集是混合物3a,该混合物3a是半胱氨酸、丝氨酸和丙氨酸的组合,所述最小子集给出期望的结果即表皮葡萄球菌的更高生长和金黄色葡萄球菌的更低生长。
实施例-7:在选择的三种氨基酸的混合物的存在下的表皮葡萄球菌/金黄色葡萄
球菌的生长模式。
在氨基酸混合物(混合物3a)的存在下,对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌二者进行了生长动力学实验,该氨基酸混合物(混合物3a)通过使用在上述实验中识别的一组三种选择的氨基酸(丙氨酸、半胱氨酸和丝氨酸)而制备的。在以下表7中显示出,以在600nm处的吸光度测量的上述两种微生物的生长动力学。
表-7:在10%TSB+1%葡萄糖+0.1%氨基酸混合物(混合物3a)的存在下的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌的生长动力学
时间(小时) | 在600nm处的表皮葡萄球菌吸光度 | 在600nm处的金黄色葡萄球菌吸光度 |
12 | 0.477 | 0.424 |
18 | 0.670 | 0.481 |
24 | 0.816 | 0.512 |
上表中的数据表明,三种选择的氨基酸的混合物确保表皮葡萄球菌的持续生长,同时金黄色葡萄球菌的生长低得多。因此,用该三种氨基酸的优化的混合物观测到显著的微生物组平衡。
Claims (12)
1.个人护理组合物,其包含氨基酸L-半胱氨酸、L-丝氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-酪氨酸、L-甘氨酸和L-苏氨酸的组合,其中所述组合物包含小于0.05重量%,优选地小于0.01重量%的其它氨基酸。
2.根据权利要求1所述的组合物,所述组合物包含氨基酸L-半胱氨酸、L-丝氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸和L-酪氨酸的组合,其中所述组合物包含小于0.05重量%,优选地小于0.01重量%的其它氨基酸。
3.根据权利要求1或2所述的组合物,所述组合物包含氨基酸L-半胱氨酸、L-丝氨酸和L-丙氨酸的组合,其中所述组合物包含小于0.05重量%,优选地小于0.01重量%的其它氨基酸。
4.根据前述权利要求中的任意一项所述的组合物,所述组合物包含0.01至1重量%的每种所述氨基酸。
5.根据前述权利要求中的任意一项所述的组合物,所述组合物包含0.07至7重量%的总量的氨基酸。
6.根据前述权利要求中的任意一项所述的组合物,所述组合物包含小于1重量%,优选地小于0.1重量%的肽,在所述肽的链中具有多于3个氨基酸。
7.根据前述权利要求中的任意一项所述的组合物,所述组合物包含小于1重量%,优选地小于0.1重量%的蛋白质。
8.滋养皮肤共生细菌的方法,其包括将根据前述权利要求中的任意一项所述的组合物施加至皮肤上的步骤。
9.根据权利要求8所述的方法,其中所述皮肤共生细菌是表皮葡萄球菌(S.epidermidis)。
10.在抑制有害的细菌的生长的同时滋养皮肤共生细菌的方法,其包括将根据前述权利要求1至7中的任意一项所述的组合物施加至皮肤上的步骤。
11.根据权利要求10所述的方法,其中所述有害的细菌包括大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(S.aureus)、铜绿假单胞菌(P.aeruginosa)或它们的混合物。
12.组合物用于为皮肤提供微生物组益处的用途,所述组合物包含氨基酸L-半胱氨酸、L-丝氨酸、L-丙氨酸、L-天冬氨酸、L-酪氨酸、L-甘氨酸和L-苏氨酸的组合,其中所述组合物包含小于0.05重量%,优选地小于0.01重量%的其它氨基酸。
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