CN116327857A - 一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及医疗技术领域，尤其是一种芪谷逐水汤对恶性腹腔积液小鼠影响的实验研究，包括：实验材料、实验方法，实验材料包括：实验动物、实验试剂、实验仪器，实验方法包括：小鼠恶性腹腔积液模型的建立和分组及给药、指标测定、统计分析、实验结果、实验结论。本发明，通过观察研究芪谷逐水汤对恶性腹腔积液小鼠的影响及其作用机制的初步探讨，为深入探讨芪谷逐水汤的作用机制提供实验依据，为临床治疗恶性腹腔积液提供一种方法，从而使患者进一步减轻痛苦，提高生活质量，延长生存。
Description
技术领域
本发明涉及医疗技术领域，尤其涉及一种一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物及其制备方法和应用。
背景技术
恶性腹腔积液，是指由恶性肿瘤引起的腹腔内液体的异常聚积，多来源于腹腔原发癌或多种转移癌。最常见于妇科肿瘤(37％)和消化道肿瘤(26％)，此外约20％的恶性腹腔积液原发肿瘤不明。恶性腹腔积液是恶性肿瘤晚期常见的并发症之一，约50％的肿瘤病人可以恶性腹腔积液为初发症状，如果得不到及时有效的控制，最终导致全身多脏器衰竭，直至死亡。恶性腹腔积液并发症患者远期预后较差，平均生存期仅20周，1年生存率＜10％。
目前常规恶性腹腔积液治疗包括全身化疗及针对腹腔积液治疗，有利尿、腹腔穿刺引流腹水、腹腔静脉分流术、腹腔内化疗或联合热疗、免疫治疗、放射免疫治疗、靶向治疗等，但疗效不理想，存在安全性不足、局部高水平的药物浓度维持时间短及耐药性等问题，为此，我们提出了一种芪谷逐水汤对恶性腹腔积液小鼠影响的实验研究，用于解决上述问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在目前常规恶性腹腔积液治疗包括全身化疗及针对腹腔积液治疗，有利尿、腹腔穿刺引流腹水、腹腔静脉分流术、腹腔内化疗或联合热疗、免疫治疗、放射免疫治疗、靶向治疗等，但疗效不理想，存在安全性不足、局部高水平的药物浓度维持时间短及耐药性等问题，而提出的一种芪谷逐水汤对恶性腹腔积液小鼠影响的实验研究。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物，包括黄芪30g、蛇六谷30g、百合30g、龙葵30g、三叶青10g，自制成干粉，每种15付，总投料量1950g，得干粉240.1g，8.125g生药/g干粉。
本发明还包括一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物的应用，恶性腹腔积液小鼠影响的实验研究，包括：实验材料、实验方法，其特征在于，所述实验材料包括：实验动物、实验试剂、实验仪器，所述实验方法包括：小鼠恶性腹腔积液模型的建立和分组及给药、指标测定、统计分析、实验结果、实验结论，所述实验动物包括：昆明种小鼠，所述昆明种小鼠的规格为：80只，SPF级，雌雄各半，体重18～20g。
优选的，所述昆明种小鼠在领回后需要在动物房适应性喂养一周，期间自由饮水和进食、保持充足的光照和通风。
优选的，所述实验试剂包括：中药组合物、顺铂注射液、肝癌H22-H8D8细胞株、RPMI1640液体培养基，所述中药组合物组成为：黄芪30g、蛇六谷30g、百合30g、龙葵30g、三叶青10g，自制成干粉(每种15付，总投料量1950g，得干粉240.1g，8.125g生药/g干粉)。
优选的，所述顺铂注射液的规格为：6ml：30mg。
优选的，所述实验仪器包括：数字电子秤、双光紫外可见分光光度计、全自动多功能微孔板检测仪、台式高速冷冻离心机、恒温水浴箱、旋涡混合仪、小鼠癌胚抗原(CEA)ELISA测定试剂盒、小鼠血管内皮生长因子(VEGF)ELISA测定试剂盒、小鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)ELISA测定试剂盒、大小鼠生长繁殖饲料。
优选的，所述小鼠恶性腹腔积液模型的建立和分组及给药还包括：瘤细胞混悬液制备、分组及给药。
优选的，，所述指标测定还包括：一般情况观察、腹水量及抑瘤率的测定、生命延长率的测定、指标总测定，所述腹水量及抑瘤率的测定还包括：腹水量计算、抑瘤率计算。
优选的，所述实验结果还包括一般观察情况；芪谷逐水汤对小鼠腹水量与抑瘤率的影响；芪谷逐水汤对小鼠生命延长率的影响；芪谷逐水汤对小鼠腹水中CEA、TNF-α、VEGF指标的影响。
优选的，其实验步骤为：
步骤一：中药组合物的制备；
步骤二：小鼠恶性腹腔积液造模并分为7组，分别为正常组、模型对照组、芪谷逐水汤高剂量组、中剂量组、低剂量组、顺铂组以及联合用药组，给予对应治疗干预；
步骤三：治疗后观察小鼠的一般状况、生存期、腹水量的减退情况；
步骤四：检测腹水中CEA、肿瘤坏死因子(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)水平。
本发明提出的治疗恶性腹腔积液的中药组合物及其制备方法和应用，有益效果在于：治疗恶性腹腔积液的中药组合物为芪谷逐水汤，
1.芪谷逐水汤方中以黄芪为君药，益气健脾、利水消肿，蛇六谷为臣药，化痰散结、行瘀消肿，两药为药对，两药相合，一补一泻，祛邪不伤正，扶正以助祛邪，共奏利水消肿之效；百合、龙葵为佐药，百合养阴润肺、清心安神。百合既能扶正益气、养阴润肺使体内津液得复，防止阴液耗损，又能消痞除胀通利导泄；龙葵清解热毒，消肿散结，消炎利尿，通利“州都”使邪有出路，两药为药对，二者相伍祛邪又不伤正，达到水液正常输布而使邪有出路；三叶青为使药，清热解毒、祛风化痰、活血止痛。其组方药物配伍精妙，补益兼施，君臣佐使明确，药量精准得当。全方共奏益气健脾、利水消肿、解毒散结之效。
2.芪谷逐水汤方中黄芪有增强免疫功能、增强机体耐缺氧应变能力、促进机体代谢、改善心功能、保肝、降低血压、调节血糖和抗菌、抑制病毒、抗肿瘤等多种药理作用，黄芪皂苷可抑制癌细胞增殖，抑制癌细胞侵袭和转移，诱导癌细胞凋亡，抑制肿瘤生长，提高免疫力；蛇六谷具有明显的抗肿瘤作用，且与其主要化学成分魔芋葡甘露聚糖有关，许多中医肿瘤专家运用蛇六谷治疗胃癌、胰腺癌、卵巢癌、肝癌、肺癌、乳腺癌等恶性肿瘤，它不仅可预防肿瘤的发生、抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞凋亡，还可抑制肿瘤细胞的转移；百合具有抗肿瘤、抗抑郁、抗氧化、降血糖、抗疲劳与耐缺氧、免疫调节，抗炎，抑制Na+/K+ATP酶等作用，百合可抑制多种癌细胞增殖，并促进其凋亡，其中百合皂苷为抗抑郁的主要有效成分，对于癌性腹水病人的焦虑抑郁情绪具有好的调节作用，其百合多糖是调节免疫的主要活性物质，百合又可抗疲劳与耐缺氧，这与百合清心安神的功效有关；龙葵可降低血管通透性，具有抗感染、降脂、护肝等其他方面的药用价值，抗肿瘤作用表现在抑制血管再生及细胞增殖作用、细胞毒性作用、诱导肿瘤细胞凋亡作用、抑制癌细胞转移及侵入组织作用、增强肿瘤细胞对放化疗的敏感度、增强免疫力等方面；三叶青具有抗肿瘤、抗炎、解热镇痛、保肝、抗病毒等药理作用，三叶青味甘、性凉，具有清热解毒作用，同时还具有一定的滋补效果，其诱导肿瘤细胞凋亡的作用显著，且对机体不良反应较少；全方各药配伍，对于癌性腹水病人可表现出抗肿瘤、增强免疫力，镇痛，保肝及抗抑郁等作用，提高病人生活质量，延长生存期。
附图说明
图1为本发明提出的治疗恶性腹腔积液的中药组合物应用研究的结构示意图；
图2为治疗恶性腹腔积液的中药组合物对各组小鼠体重的影响的数据示意图；
图3治疗恶性腹腔积液的中药组合物对各组小鼠腹水量及抑瘤率的影响的数据示意图。
图4为治疗恶性腹腔积液的中药组合物对各组小鼠生命延长率的影响的数据示意图；
图5为治疗恶性腹腔积液的中药组合物对各组小鼠腹水中CEA、TNF-α、VEGF指标的影响的数据示意图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。
参照图1-5，一种芪谷逐水汤对恶性腹腔积液小鼠影响的实验研究，包括：实验材料、实验方法，
实验材料包括：实验动物、实验试剂、实验仪器，
实验动物包括：昆明种小鼠，昆明种小鼠的规格为：80只，SPF级，雌雄各半，体重18～20g，昆明种小鼠在领回后需要在动物房适应性喂养一周，期间自由饮水和进食、保持充足的光照和通风。
实验试剂包括：芪谷逐水汤、顺铂注射液、肝癌H22-H8D8细胞株、RPMI1640液体培养基，芪谷逐水汤的处方组成为：黄芪30g、蛇六谷30g、百合30g、龙葵30g、三叶青10g，自制成干粉(每种15付，总投料量1950g，得干粉240.1g，8.125g生药/g干粉)。顺铂注射液的规格为：6ml：30mg。
实验仪器包括：数字电子秤、双光紫外可见分光光度计、全自动多功能微孔板检测仪、台式高速冷冻离心机、恒温水浴箱、旋涡混合仪、小鼠癌胚抗原(CEA)ELISA测定试剂盒、小鼠血管内皮生长因子(VEGF)ELISA测定试剂盒、小鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)ELISA测定试剂盒、大小鼠生长繁殖饲料。
(所述实验仪器均为现有产品)。
实验方法：
一.小鼠恶性腹腔积液模型的建立和分组及给药，包括：
1.瘤细胞混悬液制备：H22细胞快速解冻复苏，于RPMI1640液体培养基，37℃、5％CO2培养箱中孵育取对数生长期细胞用1640培养基稀释，制成单细胞混悬液(活细胞>95％)。随机取2只小鼠腹腔注射200μL细胞混悬液，7-8d腹水生成。将小鼠脱臼处死，皮肤消毒，抽取腹水(活细胞>95％)，用3倍生理盐水稀释，混匀、备用。
2.分组及给药：昆明种小鼠基础饲料适应性喂养一周后，随机分组为空白组10只，实验组60只。将小鼠腹部皮肤消毒，于左下腹刺入腹腔，推注瘤液0.3ml/只(空白组除外)，制备小鼠恶性腹腔积液模型，无菌条件操作，1h内完成。将注射瘤液的小鼠随机分为6组，每组10只。即模型组、阳性对照组(顺铂，10mg﹒Kg-1)、联合治疗组(顺铂+芪谷逐水汤中剂量，10mg﹒Kg-1+4g﹒Kg-1)，芪谷逐水汤(干粉)高(8.00g﹒Kg-1)、中(4.00g﹒Kg-1)、低(2.00g﹒Kg-1)剂量组，给药体积为0.5ml/20g，空白组、模型组给予等体积生理盐水，次日开始给药，每天给药1次，连续21d。联合治疗组与顺铂组每周注射顺铂一次。每周称体重，调整给药剂量。
二.指标测定，包括：
1.一般情况观察：每周测定小鼠的体重，通过观察动物的皮肤毛发、情绪反应、行为状态、活跃状况等一般状态并测定腹围大小。
2.腹水量及抑瘤率的测定：
(1)腹水量计算：第21d称取小鼠体重，再用一次性注射器抽取小鼠体内腹水，再次称取体重。
腹水量(g)＝第一次称取体重量g–再次称取体重量g。
(2)抑瘤率计算：
抑瘤率(％)＝(模型组平均瘤重量-治疗组平均瘤重量)/模型组平均瘤重量。
3.生命延长率的测定：给药后，观察和逐日记录小鼠死亡时间，计算各组动物平均生存天数，根据平均生存天数计算生命延长率。
生命延长率(％)＝(治疗组平均存活天数-模型组平均存活天数)/模型组平均存活天数×100％。
4.指标总测定：将抽取的腹水于-20℃留存，采用ELISA法测定小鼠腹水中CEA、VEGF、TNF-α。
三.统计分析：所有实验数据以均值±标准差(x±S)表示，采用SPSS19.0统计软件进行数据处理，组间比较采用方差分析及LSD-t检验，P<0.05为有差异，P<0.01有显著性差异。
四.实验结果，包括：
1.一般观察情况：空白组小鼠体重稳定增长，精神状态良好，活泼、行动自如，皮毛光泽无秽，饮食、饮水量没有明显变化；模型组及各给药组小鼠于第7日开始出现腹水，体重及腹围开始增长，9-12天增长迅速，活动迟缓、毛色灰暗，反应性差、进食进水减少；给药到第21天(实验结束)，模型组小鼠活动度减弱明显，食欲降低，腹部极度膨胀，形体消瘦；顺铂组体重及腹围明显下降(P<0.01)；联合用药组(顺铂+中剂量)给药结束后，出现体重及腹围下降，与模型对照组相比具有显著的统计学差异(P<0.01)，芪谷逐水汤高剂量组给药后体重及腹围有所下降，但腹部仍膨胀，活动受限，精神状态较差，毛发脱落明显与模型组比较具有统计学意义(P<0.05)；除空白组外，各剂量组陆续出现死亡，如图2所示(n＝10，x±S)，(注：与空白组比较**P<0.01，*P<0.05；与模型组比较ΔΔP<0.01，ΔP<0.05)。
2.芪谷逐水汤对小鼠腹水量与抑瘤率的影响：模型组小鼠腹水量急剧增加，使得活动受限，食欲降低形体消瘦；给药后，顺铂组及联合用药组(顺铂+中剂量)腹水量显著下降(P<0.01)；芪谷逐水汤高剂量组给药腹水量有所下降，但腹部仍膨胀，活动受限，精神状态较差(P<0.05)，抑瘤率以顺铂组及联合用药组最为显著，如图3所示(n＝10，x±S)，(注：与模型组比较ΔΔP<0.01，ΔP<0.05)。
3.芪谷逐水汤对小鼠生命延长率的影响：模型组及芪谷逐水汤低剂量组小鼠存活率极低(P<0.01)；给药后，顺铂组及联合用药组(顺铂+中剂量)存活天数较模型组显著延长，且存活率大大提升(P<0.01)；芪谷逐水汤高、中剂量组存活天数延长(P<0.01)，虽与顺铂组相当，但存活率不及顺铂组(P<0.05)，如图4所示(n＝10，x±S)，(注：与模型组比较ΔΔP<0.01，ΔP<0.05)。
4.芪谷逐水汤对小鼠腹水中CEA、TNF-α、VEGF指标的影响：对各组小鼠腹水中CEA、TNF-α、VEGF指标进行检测，模型组CEA、VEGF指标显著高出各给药组(P<0.05或P<0.01)；模型组腹水中TNF-α水平下降明显(P<0.05)；给药后，顺铂组CEA、VEGF水平显著下降(P<0.05或P<0.01)，TNF-α水平有所升高(P<0.05)；联合给药组CEA、VEGF水平显著下降(P<0.01)，TNF-α水平有所升高(P<0.05)；芪谷逐水汤高剂量组TNF-α水平显著升高(P<0.01)，中剂量组CEA、VEGF水平有所降低(P<0.05)，如图5所示(n＝10，x±S)，(注：与模型组比较ΔΔP<0.01，ΔP<0.05)。
五.实验结论：本发明采用H22肝癌细胞株腹腔注射建立小鼠恶性腹腔积液模型对芪谷逐水汤抑制腹水生成作用进行药效学观察，并对模型小鼠的一般状态、腹水量、生存期、抑瘤率、生命延长率及腹水中癌胚抗原(CEA)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)指标进行检测评价其对小鼠恶性腹腔积液的影响。本实验结果显示，芪谷逐水汤中剂量+顺铂联合用药组可显著改善模型小鼠精神状态及活动度，明显降低其体重、腹围及腹水量，延长模型小鼠生存期；联合用药组及芪谷逐水汤中剂量组可显著降低CEA、VEGF含量，升高TNF-α水平。因此，芪谷逐水汤可一定程度抑制小鼠恶性腹腔积液的形成，联合顺铂效果更加明显。
具体的，其实验步骤为：
步骤一：芪谷逐水汤的制备。
步骤二：小鼠恶性腹腔积液造模并分为7组，分别为正常组、模型对照组、芪谷逐水汤高剂量组、中剂量组、低剂量组、顺铂组以及联合用药组，给予对应治疗干预。
步骤三：治疗后观察小鼠的一般状况、生存期、腹水量的减退情况。
步骤四：检测腹水中CEA、肿瘤坏死因子(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)水平。
本发明，通过观察研究芪谷逐水汤对恶性腹腔积液小鼠的影响及其作用机制的初步探讨，为深入探讨芪谷逐水汤的作用机制提供实验依据，为临床治疗恶性腹腔积液提供一种方法，从而使患者进一步减轻痛苦，提高生活质量，延长生存。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物，其特征在于：包括黄芪30g、蛇六谷30g、百合30g、龙葵30g、三叶青10g，自制成干粉，每种15付，总投料量1950g，得干粉240.1g，8.125g生药/g干粉。
2.一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物的应用，其特征在于：恶性腹腔积液小鼠影响的实验研究，包括：实验材料、实验方法，其特征在于，所述实验材料包括：实验动物、实验试剂、实验仪器，所述实验方法包括：小鼠恶性腹腔积液模型的建立和分组及给药、指标测定、统计分析、实验结果、实验结论，所述实验动物包括：昆明种小鼠，所述昆明种小鼠的规格为：80只，SPF级，雌雄各半，体重18～20g。
3.根据权利要求2所述的一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物的应用，其特征在于，所述昆明种小鼠在领回后需要在动物房适应性喂养一周，期间自由饮水和进食、保持充足的光照和通风。
4.根据权利要求1所述的一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物的应用，其特征在于，所述实验试剂包括：中药组合物、顺铂注射液、肝癌H22-H8D8细胞株、RPMI1640液体培养基，所述中药组合物组成为：黄芪30g、蛇六谷30g、百合30g、龙葵30g、三叶青10g，自制成干粉(每种15付，总投料量1950g，得干粉240.1g，8.125g生药/g干粉)。
5.根据权利要求4所述的一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物的应用，其特征在于，所述顺铂注射液的规格为：6ml：30mg。
6.根据权利要求1所述的一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物的应用，其特征在于，所述实验仪器包括：数字电子秤、双光紫外可见分光光度计、全自动多功能微孔板检测仪、台式高速冷冻离心机、恒温水浴箱、旋涡混合仪、小鼠癌胚抗原(CEA)ELISA测定试剂盒、小鼠血管内皮生长因子(VEGF)ELISA测定试剂盒、小鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)ELISA测定试剂盒、大小鼠生长繁殖饲料。
7.根据权利要求1所述的一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物的应用，其特征在于，所述小鼠恶性腹腔积液模型的建立和分组及给药还包括：瘤细胞混悬液制备、分组及给药。
8.根据权利要求1所述的一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物的应用，其特征在于，所述指标测定还包括：一般情况观察、腹水量及抑瘤率的测定、生命延长率的测定、指标总测定，所述腹水量及抑瘤率的测定还包括：腹水量计算、抑瘤率计算。
9.根据权利要求1所述的一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物的应用，其特征在于，所述实验结果还包括一般观察情况；芪谷逐水汤对小鼠腹水量与抑瘤率的影响；芪谷逐水汤对小鼠生命延长率的影响；芪谷逐水汤对小鼠腹水中CEA、TNF-α、VEGF指标的影响。
10.根据权利要求1所述的一种治疗恶性腹腔积液的中药组合物的应用，其特征在于，其实验步骤为：
步骤一：中药组合物的制备；
步骤二：小鼠恶性腹腔积液造模并分为7组，分别为正常组、模型对照组、芪谷逐水汤高剂量组、中剂量组、低剂量组、顺铂组以及联合用药组，给予对应治疗干预；
步骤三：治疗后观察小鼠的一般状况、生存期、腹水量的减退情况；
步骤四：检测腹水中CEA、肿瘤坏死因子(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)水平。
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