CN116327651A - 一种具有舒缓修复和镇痛功效的植物提取组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种具有舒缓修复和镇痛功效的植物提取组合物及其应用，属于化妆品技术领域。本发明所述具有舒缓修复和镇痛功效的植物提取组合物包括以下重量份的组分：卡瓦根提取物4份和柑橘属植物提取物3～5份。本发明将卡瓦根提取物与柑橘属植物提取物按照特定的配比进行复配，二者能够协同增效，有效抑制神经系统中广泛分布的多相感受器TRPV1蛋白的表达，从而达到舒缓的功效，还能够协同抑制神经受体，且通过抑制神经受体被激活后的神经传递达到镇痛的功效，提高植物提取组合物的神经舒缓和抗炎镇痛的性能。另外，本发明所述植物提取组合物的原料来源于天然植物提取物成分，具有安全可靠的特点。
Description
技术领域
本发明属于化妆品技术领域，具体涉及一种具有舒缓修复和镇痛功效的植物提取组合物及其应用。
背景技术
据不完全统计，目前受皮肤敏感问题困扰的女性占女性总和的50％左右，这一类人群易受外界刺激，产生皮肤瘙痒，刺痛，泛红等症状；而目前开发的舒缓皮肤类化妆品，大多数存在效果不佳，或者成分安全度不高的缺点。
目前，有研究发现，卡瓦根提取物是一种有效的皮肤舒缓添加剂，通过抑制TRPV1蛋白的表达和抑制细胞兴奋的传递，具有一定的抗菌、抗过敏、柔软角质的作用，适用于各类型的肌肤，特别是敏感、过敏的皮肤。然而，市面上含有卡瓦根提取物的化妆品中，例如专利CN114557930A公开的一种具有缓解皮肤验证和修复功效的精华液，通过将卡瓦根提取物与神经酰胺复合物、麦角硫因、β-葡聚糖、黄岑根提取物和芍药根提取物等活性成分进行复配，能达到较好的缓解皮肤炎症和修复的性能，但是神经酰胺复合物对于过敏性体质来说，使用之后容易产生瘙痒或过敏等症状，导致产品的安全性较差。
因此，开发出一款舒缓作用显著、成分安全可靠的具有舒缓修复和镇痛功效的化妆品显得尤为重要。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种具有舒缓修复和镇痛功效的组合物，且原料来源于天然植物提取物成分，具有安全可靠的特点。
为了实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
第一方面，本发明提供了一种具有舒缓修复和镇痛功效的植物提取组合物，包括以下重量份的组分：卡瓦根提取物4份和柑橘属植物提取物3～5份。
本发明的发明人研究发现，采用本发明所述卡瓦根提取物与柑橘属植物提取物，并且由于卡瓦根提取物中含有具有舒缓修复的卡瓦内酯作为主要活性成分，将各组分按照特定的配比进行复配，二者能够协同增效，使得植物提取组合物有效抑制神经系统中广泛分布的多相感受器TRPV1蛋白的表达，从而达到舒缓的功效，还能够协同抑制神经受体，并且通过抑制神经受体被激活后的神经传递达到镇痛的功效，从而进一步提高植物提取组合物的舒缓皮肤、抗炎镇痛的性能。而采用其他类型的非柑橘属植物提取物，虽然其具有一定的消炎镇痛和舒缓的性能，由于其他类型的植物提取物仅与本发明所述卡瓦根提取物进行复配后只是功效上的简单叠加或相对拮抗作用，对于TRPV1蛋白的表达和神经受体被激活后的传递的抑制作用效果较差，没有明显的协同增效作用。另外，本发明所述卡瓦根提取物和柑橘属植物提取物的原料均来源于天然植物提取物成分，具有安全可靠的特点，有利于植物提取组合物在化妆品中的应用。
作为本发明所述植物提取组合物的优选实施方式，所述植物提取组合物包括以下重量份的组分：卡瓦根提取物4份和柑橘属植物提取物3.5～4.5份。
本发明的发明人研究发现，本发明卡瓦根提取物和柑橘属植物提取物在上述的重量份范围内进行复配，使得各组分的活性成分配比更加合理，能够进一步促进卡瓦根提取物和柑橘属植物提取物的协同增效作用，使得植物提取组合物具有更好地舒缓修复和镇痛功效。而卡瓦根提取物或柑橘属植物提取物的含量较高时，由于活性成分的配比不合理，导致植物提取组合物对TRPV1蛋白的表达和神经受体被激活后的神经传递的抑制作用下降，不利于产品的应用。
作为本发明所述植物提取组合物的更优选实施方式，所述植物提取组合物包括以下重量份的组分：卡瓦根提取物4份和柑橘属植物提取物4份。
本发明的发明人研究发现，本发明所述卡瓦根提取物和柑橘属植物提取物的用量相等时，本发明所述卡瓦根提取物与柑橘属植物提取物的协同增效作用最佳，植物提取组合物具有较强的抑制TRPV1蛋白的表达和神经受体被激活后的神经传递的作用。
作为本发明所述植物提取组合物的优选实施方式，所述柑橘属提取物为酸橙果提取物、柑橘提取物、葡萄柚提取物、陈皮提取物、柠檬果提取物中的至少一种。
发明人在大量的柑橘属植物提取物研究中发现，酸橙果提取物、葡萄柚提取物、陈皮提取物、柠檬果提取物中含有大量的柚皮素、柚皮苷、芹菜素、柚皮芸香苷、新橙皮苷或芦丁等活性成分，具有较好的抗炎舒缓、镇痛作用，能较好地与卡瓦根提取物联合使用，达到更好地协同增效的作用。
作为本发明所述植物提取组合物的更优选实施方式，所述柑橘属植物提取物为酸橙果提取物。
发明人在大量的柑橘属植物提取物中试验研究发现，柑橘属植物提取物本身具有差异性，不同的柑橘属植物在提取过程中活性成分的比例不同，采用本发明所述酸橙果提取物与卡瓦根提取物进行复配，由于其活性成分具有特定的成分比例，其中又含有其他的微量成分，故能与卡瓦根提取物更好的起到协同作用。
作为本发明所述植物提取组合物的优选实施方式，所述卡瓦根提取物的制备方法为：通过醇提卡瓦根，得到提取液，浓缩并干燥所述提取液，得到所述卡瓦根提取物。
作为本发明所述植物提取组合物的优选实施方式，所述柑橘属植物提取物的制备方法为：通过醇提柑橘属植物原料，得到提取液，浓缩并干燥所述提取液，得到所述柑橘属植物提取物。
本发明的发明人研究发现，本发明所述卡瓦根提取物和柑橘属植物提取物均采用醇溶液进行提取，提取物中含有较合适的水溶性活性成分和醇溶性活性成分，同时通过特定的配比将卡瓦根提取物和柑橘属植物提取物进行复配，相比于仅加入卡瓦根提取物或柑橘属植物提取物时，本发明所述植物提取物具有更好地舒缓修复和镇痛的效果。
作为本发明所述制备方法的优选实施方式，所述植物提取组合物的制备方法包括以下步骤：称取卡瓦根提取物和柑橘属植物提取物，加水溶解，混合均匀，浓缩和干燥，得到所述植物提取组合物。
第二方面，本发明还提供了上述植物提取组合物在制备化妆品领域的应用，所述化妆品为面霜、面膜、精华液、喷雾或身体乳。
本发明的具有舒缓修复和镇痛功效的植物提取组合物能够广泛地应用于化妆品领域，所述化妆品可以为面霜、面膜、精华液、喷雾、身体乳，具有较好地舒缓皮肤的功效，同时能够有效协同作用，起到抗炎和镇痛的效果。且本发明所述植物提取组合物的来源皆采用天然植物有效成分，具有安全可靠的特点，可广泛应用。
第三方面，本发明还提供了一种具有舒缓修复和镇痛功效的化妆品，所述化妆品包括上述植物提取组合物。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
(1)采用本发明所述卡瓦根提取物与柑橘属植物提取物，并且由于卡瓦根提取物中含有具有舒缓修复的卡瓦内酯作为主要活性成分，将各组分按照特定的配比进行复配，二者能够协同增效，使得植物提取组合物能够有效抑制神经系统中广泛分布的多相感受器TRPV1蛋白的表达，从而达到舒缓的功效，还能够协同抑制神经受体，且通过抑制神经受体被激活后的神经传递达到镇痛的功效，从而进一步提高植物提取组合物的舒缓皮肤、抗炎镇痛的性能；
(2)本发明所述卡瓦根提取物和柑橘属植物提取物的原料均来源于天然植物提取物成分，具有安全可靠的特点，舒缓修复和镇痛的效果显著，有利于植物提取组合物在化妆品中的应用。
附图说明
图1为本发明实施例1所述植物提取组合物与BC、NC、PC的TRPV1免疫荧光结果对比图；
图2为本发明实施例1所述植物提取组合物与BC、NC、PC的相对IOD/细胞数平均值对比图；
图3为本发明实施例1所述植物提取组合物与正常对照组、模型对照组的斑马鱼运动距离效果对比图。
具体实施方式
下面结合实施例，对本发明的技术方案作进一步说明。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。实施例所使用的方法或操作，如无特别说明，均为本领域的常规方法或常规操作。
实施例1～10和对比例1～12
实施例1～10和对比例1～12为本发明具有舒缓修复和镇痛功效的植物提取组合物。实施例1～10和对比例1～12的植物提取组合物的组分及其重量份如下表1所示。
表1
本发明实施例1～10和对比例1～12的植物提取组合物的制备方法包括以下步骤：
S1、制备卡瓦根提取物：称取粉碎后的卡瓦根原料1份，加入提取溶液15份，所述提取溶液为体积分数为70％的乙醇溶液，通过醇提卡瓦根，在70℃下回流提取4h，得到提取液，过200目滤布，过中速滤纸精滤，在75℃浓缩至固含量为50％，设置真空度为0.085MPa，喷雾干燥，得到所述卡瓦根提取物；
S2、制备柑橘属植物提取物：称取粉碎后的柑橘属植物原料1份，加入提取溶液15份，所述提取溶液为体积分数为70％的乙醇溶液，通过醇提柑橘属植物原料，在70℃下回流提取4h，得到提取液，过200目滤布，过中速滤纸精滤，在75℃浓缩至固含量为50％，设置真空度为0.085MPa，喷雾干燥，得到所述柑橘属植物提取物；
S3、称取卡瓦根提取物和柑橘属植物提取物，加水溶解，混合均匀，浓缩和干燥，得到所述植物提取组合物。
效果例1
为了验证本发明植物提取组合物的舒缓修复性能，通过检测辣椒素受体(TRPV1)蛋白含量来评价待测样品的舒缓功效。
测试依据：根据《基于辣椒素刺激角质形成细胞的TRPV1蛋白含量检测方法》开展检测。
测试目的：本测试基于辣椒素刺激角质形成细胞，检测TRPV1蛋白含量来评价待测物是否通过抑制TRPV1而达到舒缓的功效。
测试方法：
(1)细胞接种：按1.8E5个/孔的接种密度接种角质形成细胞至6孔板，培养箱(37℃、5％CO2)中孵育过夜；
(2)配液：根据测试方案(表2)分别配置受试物工作液；
(3)给药：根据上述表2测试方案，待6孔板中细胞铺板率达到40％～50％时，进行分组给药，每孔给药量为2mL，每组设3个复孔；给药完成后将6孔板放置在培养箱(37℃、5％CO2)中孵育培养24h；
(4)TRPV1检测：用4％的多聚甲醛进行固定处理，固定30min后，进行辣椒素受体(TRPV1)的免疫荧光检测，显微镜下拍照观察，采集图片并分析。
结果统计分析：应用GraphPad Prism作图，结果表示为Mean±SD。各组间比较采用t-test统计分析。统计分析均为双尾。P＜0.05认为具有显著差异，P＜0.01认为具有极显著差异。
抑制率计算方法：
其中X为阴性对照组相对IOD/细胞数平均值，X1为样品组相对IOD/细胞数平均值。
测试方案如下表2所示。
表2
测试结果如下表3所示。
表3
从表1可以看出，与BC组相比，NC组的TRPV1蛋白含量显著上升，说明本次测试刺激条件有效。与NC组相比，PC组的TRPV1蛋白含量显著下降，说明本次测试阳性对照有效。本发明实施例1～10的植物提取组合物对TRPV1蛋白的抑制率均能达到17％以上。另外，图1和图2分别为本发明实施例1所述植物提取组合物与BC、NC、PC的TRPV1免疫荧光结果对比图和相对IOD/细胞数平均值对比图，从图1和图2可知，本发明所述卡瓦根提取物与酸橙果提取物按照特定配比进行复配，二者协同增效作用最强，实施例1的植物提取组合物具有较好的抑制TRPV1蛋白的表达，抑制率高达26.53％。
比较实施例1与对比例1～6可知，采用本发明卡瓦根提取物与特定的柑橘属植物提取物进行复配，二者协同增效，有利于抑制TRPV1蛋白的表达，从而提高植物提取组合物的舒缓修复性能，而仅含某种单一的组分，其对TRPV1蛋白的抑制性能下降。比较实施例1与对比例11～12可知，采用其他类型的芸香科植物提取物或其他类型的具有舒缓和镇痛性能的植物提取物，与本发明卡瓦根提取物进行复配，没有协同增效的作用，甚至复配的植物提取组合物对TRPV1蛋白的抑制率下降，导致舒缓性能下降。
比较实施例1与对比例7～10可知，卡瓦根提取物或柑橘属提取物的用量较多或较少，均会导致植物提取组合物对TRPV1蛋白的抑制率下降，使其舒缓性能下降。
效果例2
为了进一步验证本发明植物提取组合物的舒缓修复性能，采用斑马鱼舒缓功效(总运动距离)试验方法测试本发明实施例1～10和对比例1～12的植物提取组合物。
测试依据：根据《斑马鱼舒缓功效评价实验标准操作规程》开展检测。
测试原理：冰醋酸虽然属于弱酸，但有强烈的刺透性和腐蚀性。皮肤接触冰醋酸会有刺痛和灼伤的感觉。选择游泳能力尚未发育完全的斑马鱼，利用冰乙酸刺激斑马鱼引起较大面积和较长时间的炎性疼痛，导致运动轨迹越多，疼痛越严重。应用行为分析仪检测斑马鱼的总运动距离，评价样品是否具有舒缓功效。
测试方法：
(1)随机选取斑马鱼于30孔板中，每孔15尾；
(2)水溶给予样品，同时设置正常对照组和模型对照组，每孔容量为3mL；
(3)在28℃条件下避光孵育24h；
(4)每个试验组随机选取10尾斑马鱼转移至96孔板，水溶给予冰醋酸建立斑马鱼疼痛模型。立即利用行为分析仪测定斑马鱼的运动轨迹，分析并采集斑马鱼的总运动距离(D)，根据公式计算样品的舒缓功效，判断其是否具有舒缓功效。
注：测试方法的步骤(1)中选取斑马鱼的数量多于试验组所需斑马鱼的数量；步骤(4)为试验组从30孔板中随机选取1个孔板，再从1个孔板中随机选取10尾斑马鱼进行测试。
判定依据：统计学分析p＜0.05，判定为有显著性差异。
检测结果如下表4所示。
表4
从表4可以看出，本发明实施例1～10的植物提取组合物在检测浓度为0.2％时，采用斑马鱼舒缓功效测试得到的舒缓性能能够达到78％以上。其中，图3为本发明实施例1与正常对照组、模型对照组的斑马鱼运动距离效果图，从图中可以看出，实施例1
在检测浓度为0.2％时能够有效缓解斑马鱼的炎性疼痛，其舒缓性能高达90％，进一步提高了植物提取组合物的舒缓修复性能。
比较实施例1与对比例1～6可知，本发明卡瓦根提取物与特定的柑橘属植物提取物进行复配，二者协同增效，有利于缓解斑马鱼的炎性疼痛，提高了植物提取组合物舒缓修复性能，而仅含某种单一的组分，其舒缓性能较差。比较实施例1与对比例11～12可知，采用其他类型的芸香科植物提取物或其他类型的具有舒缓和镇痛性能的植物提取物，与本发明卡瓦根提取物进行复配，不能有效缓解斑马鱼的炎症疼痛，几乎没有协同增效作用。
比较实施例1与对比例7～10可知，卡瓦根提取物或柑橘属提取物的用量较多或较少，均会导致植物提取组合物对缓解斑马鱼的炎性疼痛性能下降，表明其舒缓修复性能较差。
效果例3
为了进一步验证本发明植物提取组合物的镇痛性能，通过手动膜片钳技术检测本发明实施例1～10和对比例1～12的植物提取组合物对SD大鼠背根神经节神经元动作电位的影响。
实验目的：背根神经元是感觉传导的初级神经元，具有传输和调节集体感觉，接收和传导伤害性感受的功能，现在已成为离体细胞水平神经病理疼痛治疗的重要模型，在疼痛机制中的作用和疼痛治疗等领域成为了研究热点，在背根神经节上存在多种离子通道，与疼痛等疾病相关的是钠离子通道。神经损伤后，电压门控钠离子通道活性改变，使得神经元兴奋性增加，产生异常的自发性放电。本发明采用手动膜片钳技术来研究植物提取组合物对大鼠神经元动作电位各参数的影响，从而进一步探究初级神经元在疼痛发生机制中的作用。
检测方法：
(1)设立空白对照组，空白对照组只有神经元细胞；
(2)将实施例1～10和对比例1～12的植物提取物分别配制水溶液，得到待测样品溶液；
(3)将待测样品溶液添加至神经元细胞培养液中，设计样品组；
(4)使用膜片钳检测；
(5)记录检测结果：记录数据包含动作电位释放频率、动作电位阈值、动作电位幅度、最大去极化速度、静息膜电位、刺激电流基强度、膜输入电阻。
注：数据参数说明
(1)动作电位释放频率(Numbers of spikes)：1.5～2倍Rheobase电流刺激下诱发出的动作电位个数。将动作电位超射值超过0mV的AP纳入计算范围；此参数可以反应动作电位释放频率，单位时间内，产生动作电位个数越多，则频率越高，即抗敏能力越弱；
(2)动作电位阈值(Threshold)：动作电位上升期的起始点(动作电位阈值)；动作电位阈值越高，则细胞越不容易兴奋，抗敏能力更强；
(3)动作电位幅度(Peak amplitude)：动作电位幅度越高，则细胞兴奋的程度越高；
(4)最大去极化速度(Max up-stroke slope)：放映对钠通道的变化；
(5)静息膜电位(Membrane potential)：静息膜电位越高，则细胞兴奋所需要的刺激电位越高，抗敏能力则更强；
(6)刺激电流基强度(Rheobase)：该电流表示刺激细胞兴奋所需要的最小电流，所需的基电流越高，则细胞越不容易产生动作电位，抗敏能力则更强；
(7)膜输入电阻(The input resistance)：代表细胞的固有属性，膜输入电阻越高，细胞越容易兴奋，神经敏感型越强。
膜片钳检测过程：
全细胞膜片钳记录神经元动作电位的电压刺激方案如下：当形成全细胞封接后将记录模式转为电流钳模式，细胞膜电流钳制于0pA，钳制电流由10pA以20pA进行递增至530pA左右，持续0.8s后恢复至0pA维持1s，然后在1.5-2倍Rheobase刺激下记录观察药效的变化，刺激时长1s，实验数据由EPC10放大器(HEKA)进行采集并储存于PactMaster(HEKA)软件中。
膜片钳操作首先用微电机拉制仪将毛细玻璃管拉制成记录电极，再将充灌细胞内液的电极装入微电极夹持器，再倒置显微镜下操控微电极操纵器使电极浸入细胞外液并记录电极电阻(Rpip)。然后将电极缓慢接触到细胞表面，给予负压抽吸形成GΩ封接。此时执行快电容补偿，继续给予负压吸破细胞膜，形成全细胞记录模式。最后进行慢电容补偿并记录串联电阻(Rs)等实验参数。不给予漏电补偿。
当全细胞记录的动作电位稳定后开始给药，每个药物浓度记录若干次(或者动作电位至稳定)后检测下一浓度，每一个测试化合物检测一个浓度。将铺有细胞的盖玻片置于倒置显微镜下记录浴槽中，空白对照外液以及待测化合物工作液利用重力灌流的方法从低浓度到高浓度依次流经记录浴槽从而作用于细胞，再记录中利用蠕动泵进行液体交换。每一个细胞在不含有化合物的外液中检测到的电流作为自己的对照组。每一个浓度至少使用3个细胞独立重复检测3次，所有电生理试验在室温中进行。
测试结果如下表5所述。
表5
从表5可知，本发明实施例1～10的植物提取组合物能够降低大鼠背根细胞神经元的兴奋性，不容易使背根细胞神经元诱发出动作电位。其中，实施例1的植物提取组合物
在测试浓度为1.2mg/mL时，可显著降低神经元细胞动作电位释放频率，让神经细胞在单位时间的兴奋频次下降，大幅度起到了舒缓镇痛的作用。
比较实施例1与对比例1～6可知，本发明实施例1的植物提取组合物具有更高的动作电位阈值、静息膜电位和刺激电流基强度，以及较低的动作电位释放频率、动作电位幅度和膜输入电阻，表明采用本发明卡瓦根提取物和特定的柑橘属植物提取物进行复配的植物提取组合物，能够提高细胞兴奋所需的刺激电位，使细胞不容易产生兴奋，同时降低了细胞兴奋的程度，提高了细胞的抗敏能力。比较实施例1与对比例11～12可知，采用其他类型的芸香科植物提取物或其他类型的具有舒缓和镇痛性能的植物提取物，与本发明卡瓦根提取物进行复配，大幅提高了动作电位释放频率和膜输入电阻，还降低了动作电位阈值、静息膜电位和刺激电流基强度，使得细胞更容易兴奋，同时还提高了细胞的兴奋程度，导致植物提取组合物的抗敏和镇痛的性能下降。
比较实施例1与对比例7～10可知，卡瓦根提取物或柑橘属提取物的用量较多或较少，会使得植物提取组合物对细胞的动作电位参数均会产生影响，导致其舒缓镇痛的性能下降。
最后所应当说明的是，以上是实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (9)
1.一种具有舒缓修复和镇痛功效的植物提取组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：卡瓦根提取物4份和柑橘属植物提取物3～5份。
2.如权利要求1所述的植物提取组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：卡瓦根提取物4份和柑橘属植物提取物3.5～4.5份。
3.如权利要求2所述的植物提取组合物，其特征在于，包括以下重量份的组分：卡瓦根提取物4份和柑橘属植物提取物4份。
4.如权利要求1～3任一项所述的植物提取组合物，其特征在于，所述柑橘属植物提取物为酸橙果提取物、柑橘提取物、葡萄柚提取物、陈皮提取物、柠檬果提取物中的至少一种。
5.如权利要求4所述的植物提取组合物，其特征在于，所述柑橘属植物提取物为酸橙果提取物。
6.如权利要求1所述的植物提取组合物，其特征在于，所述卡瓦根提取物的制备方法为：通过醇提卡瓦根，得到提取液，浓缩并干燥所述提取液，得到所述卡瓦根提取物。
7.如权利要求1所述的植物提取组合物，其特征在于，所述柑橘属植物提取物的制备方法为：通过醇提柑橘属植物原料，得到提取液，浓缩并干燥所述提取液，得到所述柑橘属植物提取物。
8.如权利要求1～7任一项所述的植物提取组合物在制备化妆品领域的应用，其特征在于，所述化妆品为面霜、面膜、精华液、喷雾或身体乳。
9.一种具有舒缓修复和镇痛功效的化妆品，其特征在于，所述化妆品包括权利要求1～7任一项所述的植物提取组合物。
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Non-Patent Citations (1)
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| 张博文等: "卡瓦提取物DCR516体外舒缓机理研究", 生物化工, vol. 8, no. 6, pages 51 - 53 * |
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