CN116323566B - 磺胺酮类化合物及其制备方法和医药用途 - Google Patents

磺胺酮类化合物及其制备方法和医药用途 Download PDF

Info

Publication number
CN116323566B
CN116323566B CN202280006844.XA CN202280006844A CN116323566B CN 116323566 B CN116323566 B CN 116323566B CN 202280006844 A CN202280006844 A CN 202280006844A CN 116323566 B CN116323566 B CN 116323566B
Authority
CN
China
Prior art keywords
dimethyl
mmol
amino
imino
thio
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202280006844.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN116323566A (zh
Inventor
殷惠军
胡远东
陈士柱
闫旭
田卫学
常江
许世民
付健民
邓伟
姚振海
霍涛
田振华
吴国盛
贾丽
钱苏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
National Institutes of Pharmaceutical R&D Co Ltd
Original Assignee
National Institutes of Pharmaceutical R&D Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by National Institutes of Pharmaceutical R&D Co Ltd filed Critical National Institutes of Pharmaceutical R&D Co Ltd
Publication of CN116323566A publication Critical patent/CN116323566A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN116323566B publication Critical patent/CN116323566B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4965—Non-condensed pyrazines
    • A61K31/497—Non-condensed pyrazines containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/538—1,4-Oxazines, e.g. morpholine ortho- or peri-condensed with carbocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/18—Oxygen or sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D241/00—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings
    • C07D241/02—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings
    • C07D241/10—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D241/14—Heterocyclic compounds containing 1,4-diazine or hydrogenated 1,4-diazine rings not condensed with other rings having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D241/20—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/12—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains three hetero rings
    • C07D471/18—Bridged systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

一种磺胺酮类化合物及其制备方法和医药用途。特别地，涉及通式(I)所示的磺胺酮类化合物，其制备方法，包含其的药物组合物，以及其作为含Src同源区2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)抑制剂的用途，特别是用于预防或治疗与SHP2活性相关的疾病的用途。通式(I)中各基团的定义与说明书中相同。

Description

磺胺酮类化合物及其制备方法和医药用途
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一类新的磺胺酮类化合物及其制备方法和医药用途。本发明的化合物可以用作含Src同源区2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP)抑制剂，并可以用于预防或治疗与SHP2活性相关的疾病。
背景技术
蛋白酪氨酸磷酸化在细胞内过程中起基础性作用，如信号转导、细胞增殖、分化和迁移等生物过程。可逆磷酸化是由蛋白酪氨酸激酶(PTK)和蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)协同调控的。酪氨酸磷酸化失调被证实与各种疾病相关，如癌症、炎症和糖尿病等。此外，在多种恶性肿瘤中可观察到PTK、PTP的高激活突变。目前已有数十种致癌基因的鉴定使得基因靶向治疗成为了很有前景的癌症治疗策略，而临床应用的PTK抑制剂的开发也取得了很大的成功。
SHP2由PTPN11基因编码，是一种593个氨基酸的经典非受体PTP。它包含两个Src同源-2(SH2)域(N-SH2和C-SH2)和一个PTP催化域。由112-215个残基组成的C-SH2结构域负责结合能，但它并不参与SHP2的激活。相比之下，N-SH2域包含氨基酸2-104，并作为构象开关，在SHP2激活中起中心作用。在正常情况下，N-SH2结构域与磷酸酶结构域结合，导致PTP活性的自抑制。然而，在刺激下，磷酸肽与N-SH2结构域的结合破坏其识别表面，触发PTP结构域的释放和酶的激活。459半胱氨酸是PTP催化结构域保守基序中的高活性半胱氨酸，具有重要的催化功能。SHP2还包含C端尾部，由两个酪氨酸磷酸化位点(Tyr542、Tyr580)组成，可在细胞外刺激下磷酸化。SHP2是RTK和细胞因子受体信号转导的关键调节因子，参与多种受体和蛋白酪氨酸激酶的信号通路，正向调控MAPK信号通路，主要通过激活RAS-ERK信号通路来调控细胞的生存和增殖。SHP2可以使许多底物去磷酸化，如Gab1、ARHGAP35、EGFR、ROCK2、CDC73。在过去的几年里已证实编码酪氨酸磷酸酶SHP2的人类PTPN11基因的种系突变与努南综合征和豹纹综合征存在密切关系。这两种多系统综合征有关发育性疾病，其特征是身材矮小、胸部畸形、蹼状颈、出血性疾病、心脏缺陷和智力迟钝。体细胞PTPN11突变也与几种类型的人类恶性肿瘤有关，比如最常见的骨髓性白血病。PTPN11突变影响疾病进展的机制包括：(1)直接影响PTP活性；(2)通过打破N-SH2和PTP结构域之间的自抑制来增强PTP催化活性；(3)改变底物与催化口袋的结合能力。在肿瘤组织中SHP2特异性较低，与多种肿瘤类型相关，包括乳腺癌、白血病、胃癌、肺癌、肝癌、口腔鳞癌、喉癌等。此外，SHP2也是免疫检查点通路(PD-1，BTLA)的关键介质，因此SHP2可能是肿瘤免疫治疗的潜在靶点。越来越多的研究证实SHP2在癌症、发育障碍和炎症中发挥重要作用。与癌细胞相比，大多数参与癌症相关炎症的细胞类型具有遗传稳定性，因此作用于炎症靶点是一种潜在的癌症预防和治疗策略，且不易产生耐药。
SHP1和SHP2在氨基酸序列上有61％的相似性，虽然SHP1和SHP2的催化位点的氨基酸残基高度相同，但人类SHP2催化位点的表面静电电位比人类SHP1更碱性，四催化位点附近的近端区域含有SHP1和SHP2之间不同的残基。SHP2具有明显的药物靶向性优势：(1)与SHP1相比，SHP2可积极激活RTK信号，包括生长因子、激素和细胞因子信号。而SHP2也是免疫细胞和癌细胞中多条信号通路的汇聚节点，是唯一被指定为“致癌基因”的PTP成员；(2)靶向SHP2的抗肿瘤作用不仅局限于恶性血液病，还包括许多实体瘤；(3)与SHP1抑制剂相比，SHP2抑制剂近年来进展迅速，在许多类型的实体肿瘤中已进入临床1/2期。越来越多的证据揭示了SHP2在炎症和肿瘤发生过程中控制决定性事件的信号通路中的重要作用。因此SHP2代表了用于开发治疗多种疾病的新疗法的极具吸引力的靶点。
本发明的化合物满足了对用于抑制SHP2活性的小分子的需要。
发明内容
本发明人经过潜心研究，开发了一类新型的磺胺酮类化合物，该类化合物具有优异的SHP2抑制活性，有望被开发为用于治疗与SHP2活性相关的疾病如癌症的药物。
因此，本发明的目的是提供一种通式(I)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，
其中：
环A选自芳基或杂芳基；
环E选自芳基、杂芳基、杂环基；
L选自键、-S-、-O-、-S-(CH2)t-、-O-(CH2)t-、-(CR8R9)v-、其中X选自CH、S、O；
R1和R2各自独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、-NRaRb、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、-NRaRb、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；或者，
R1和R2与其相连的原子一起形成环烷基或杂环基，所述环烷基或杂环基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、-NRaRb、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；所述环烷基或杂环基进一步与另一个环烷基、杂环基、芳基和杂芳基形成稠环；R3和R4各自独立地选自-NRaRb、氰基、烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、-NRaRb、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；或者，
R3和R4与其相连的硫原子一起形成杂环基，所述杂环基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、-NRaRb、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；又或者
R3和R4之一选自-NRaRb、氰基、烷基、卤代烷基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；另一个与S和N原子以及E环一起形成杂环基，所述杂环基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、-NRaRb、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；
R5各自独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、-NRaRb、氰基、氧代基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、-NRaRb、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；
R6各自独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、-NRaRb、氰基、硝基、氨基羰基、酰胺基、膦酰基、膦酰胺基、磺酰基、磺酰胺基、氨基磺酰基、氧代基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、-NRaRb、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；
R7各自独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、-NRaRb、氰基、氧代基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、-NRaRb、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；
R8和R9各自独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、-NRaRb、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、-NRaRb、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；或者
R8和R9与其相连的原子一起形成环烷基或杂环基，所述环烷基或杂环基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、-NRaRb、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；
Ra和Rb各自独立地选自氢、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；或者
Ra和Rb与其相连的氮原子一起形成杂环基，所述杂环基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；
t为1至6的整数；
v为1至6的整数；
m为0、1、2、3或4；
n为0、1、2、3或4；
p为0、1、2、3、4、5、6、7或8；
q为0、1、或2。
在一些实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，L选自键、-S-、-O-、-S-CH2-、-O-CH2-、-(CR8R9)v-、其中X选自CH、S、O；优选，L选自键或-S-；
R8和R9各自独立地选自氢和C1-C6烷基；
v为1至3的整数。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其为通式(II)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，
其中，A1、A2、A3、A4各自独立地为CH或N；优选A1、A2、A3、A4中的一个或两个为N，其余为CH；更优选A2和A3为N且A1和A4为CH；
环E、L、R1～R7、m、n、p、q如通式(I)所定义。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，环A为
其中，
为与氮杂环相连接的部位；
*为与L相连接的部位；
A1、A2、A3、A4、A5、A6各自独立地为C或N；条件是其中最多四个为N；
A7和A8各自独立地选自CH或N；
Y选自-O-、-S-、-NH-、-CH2-或-CH＝CH-。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，环A为
其中，
为与氮杂环相连接的部位；
*为与L相连接的部位；
A1、A2、A3、A4、A5、A6各自独立地为C或N；条件是其中最多四个为N；优选地，A1、A2、A3、A4各自独立地为CH或N，A5、A6各自独立地为C；
A7和A8各自独立地选自CH或N；
Y选自-O-、-S-、-NH-、-CH2-或-CH＝CH-。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，环A选自：
其中，
为与氮杂环相连接的部位；
*为与L相连接的部位；
R5如通式(I)所定义，优选地，R5选自氢和C1-C6烷基。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)或通式(II)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中环E为C6-C10芳基、5至10元杂芳基、5至10元杂环基，优选苯基、萘基、吡啶基、嘧啶基、噻吩基、噻唑基、异噻唑基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、苯并吡咯基、苯并吡咯烷基、苯并噻唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、吲哚基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、喹啉基、异喹啉基、喹喔啉基。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)或通式(II)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中环E选自：
其中：为与L相连接的部位；
*为与磺胺酮连接的部位；
R6如通式(I)所定义，优选地，R6选自氢和C1-C6烷基。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)或通式(II)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其为通式(IIIA)、(IIIB)、(IIIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，
其中：E1、E2、E3、E4各自独立地为C或N；E5选自CH2、NH、S、O，E6、E7各自独立地为CH或N；E8、E9、E10、E11各自独立地为CH或N，优选E8、E9、E10、E11中的一个或两个为N，其余为CH；
A1、A2、A3、A4如通式(II)所定义；
L、R1～R7、m、n、p、q如通式(I)所定义。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(II)或通式(IIIA)、(IIIB)、(IIIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R1和R2各自独立地选自氢、-NRaRb、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基；其中Ra和Rb各自独立地选自氢和C1-C6烷基；
优选地，R1和R2各自独立地选自C1-C6烷基和氨基。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(II)或通式(III)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，
R1和R2与其相连的原子一起形成C5-C6环烷基、5至6元杂环基、或9至10元稠环烷基或稠杂环基；所述C5-C6环烷基、5至6元杂环基、或9至10元稠环烷基或稠杂环基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、-NRaRb、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；
Ra和Rb各自独立地选自氢、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；或者
Ra和Rb与其相连的氮原子一起形成杂环基，所述杂环基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(II)或通式(IIIA)、(IIIB)、(IIIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，基团选自：
其中，R10选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；优选氢和氨基；
每个R11各自独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；优选氢、C1-C6烷基和卤素；
r为0、1或2。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、通式(IIIA)、(IIIB)、(IIIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其为通式(IVA)、(IVB)或(IVC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，
其中，R10和R11各自独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、-NRaRb、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；
Ra和Rb各自独立地选自氢、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基，其中所述烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基各自独立地任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；或者
Ra和Rb与其相连的氮原子一起形成杂环基，所述杂环基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；
L、A1～A4、E1～E11、R3～R7、m、n、p、q如通式(IIIA)、(IIIB)、(IIIC)所定义。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、通式(IIIA)、(IIIB)、(IIIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其为通式(IVD)、(IVE)或(IVF)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，
其中，R10选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；优选氢和氨基；
每个R11各自独立地选自氢、卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基；优选氢；
r为0、1或2；
L、A1～A4、E1～E11、R3～R7、m、n、p、q如通式(IIIA)、(IIIB)、(IIIC)所定义。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、通式(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVF)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，
L选自键、-S-、-O-、-S-CH2-、-O-CH2-、-(CR8R9)v-、其中X选自CH、S、O；优选，L选自键或-S-；更优选L为-S-；
R8和R9各自独立地选自氢和C1-C6烷基；
v为1至3的整数。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、通式(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其为通式(VA)～(VC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，
其中，A1～A4、E1～E11、R3～R7、R10～R11、m、n、p、q如通式(IVA)～(IVC)所定义。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVC)、或通式(VA)～(VC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，其中，A2和A3为N且A1和A4为CH。
在另一个优选的实施方案中，根据根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、通式(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVC)、通式(VA)～(VC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其为通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，
其中，E1～E11、R3～R7、R10～R11、m、n、p、q如通式(IVA)～(IVC)所定义。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(VIA)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，E1、E2、E3、E4为CH，或者E1、E2、E3、E4之一为N，其余为CH。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(VIB)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，环选自/>
其中：为与L相连接的部位；
*为与磺胺酮连接的部位。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，环选自/>/>
其中：为与L相连接的部位；
*为与磺胺酮连接的部位。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(IVA)～(IVC)或通式(VA)～(VC)或通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R10和R11各自独立地选自氨基和C1-C6烷基。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、通式(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVF)、通式(VA)～(VC)、通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，
R3和R4各自独立地选自C1-C6烷基；或者，
R3和R4与其相连的硫原子一起形成5-6元杂环基，优选四氢噻吩基、氢化硫代吡喃基、氧硫杂环己烷，所述5-6元杂环基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代；或者，
R3和R4之一为C1-C6烷基，另一个与S和N原子以及E环一起形成5-6元杂环基，所述杂环基任选进一步被选自卤素、羟基、巯基、氨基、硝基、氰基、氧代基、羧基、酯基、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、环烷基、杂环基、芳基和杂芳基的一个或多个取代基所取代。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVF)、通式(VA)～(VC)、通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R3和R4各自独立地选自C1-C6烷基。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVF)、通式(VA)～(VC)、通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R5各自独立地选自氢、氨基、C1-C6烷基、C1-C6羟烷基和5-6元杂芳基；m为1或2。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVF)、通式(VA)～(VC)、通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R6各自独立地选自氢、卤素、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基；n为1或2。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVF)、通式(VA)～(VC)、通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，R7为氢。
在另一个优选的实施方案中，根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVF)、通式(VA)～(VC)、通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，其中，q为1。
本公开典型的化合物包括但不限于：
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
/>
或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐。
本发明进一步提供一种制备根据本发明所述的通式(I)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐的方法，其包括以下步骤：
当L为S时，
化合物a-3与胺化合物a-4在碱性条件下发生取代反应得到通式(I)所示化合物；
或者
化合物a-5与巯基取代的硫酮化合物a-1在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(I)所示化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
当L为C-C键时，
化合物a-8与胺化合物a-4在碱性条件下发生取代反应得到通式(I)所示化合物；
或者
化合物a-7与卤代化合物a-5在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(I)所示化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
当L为N-C键时，
胺化合物a-9和卤素取代化合物a-5在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(I)所示的化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
其中，
Z表示卤素原子，优选氟、氯、溴；
Rc为氢、烷基，优选氢；
环A、环E、R1～R7、m、n、p、q如通式(I)所定义。
本发明进一步提供一种制备根据本发明所述的通式(II)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐的方法，其包括以下步骤：
当L为S时，
化合物b-3与胺化合物a-4在碱性条件下发生取代反应得到通式(II)所示化合物；
或者
/>
化合物b-5与巯基取代的硫酮化合物a-1在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(II)所示化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
当L为C-C键时，
化合物b-8与胺化合物a-4在碱性条件下发生取代反应得到通式(II)所示化合物；
或者
化合物a-7与卤代化合物b-5在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(II)所示化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
当L为N-C键时，
胺化合物a-9和卤素取代化合物b-5在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(II)所示的化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
其中，
Z表示卤素原子，优选氟、氯、溴；
Rc为氢、烷基，优选氢；
A1～A4、环E、R1～R7、m、n、p、q如通式(II)所定义。
本发明进一步提供一种制备根据本发明所述的通式(IIIA)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐的方法，其包括以下步骤：
当L为S时，
化合物c-3与胺化合物a-4在碱性条件下发生取代反应得到通式(IIIA)所示化合物；
或者
化合物c-5与巯基取代的硫酮化合物c-1在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(IIIA)所示化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
当L为C-C键时，
化合物c-8与胺化合物b-4在碱性条件下发生取代反应得到通式(IIIA)所示化合物；
或者
化合物c-7与卤代化合物b-5在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(IIIA)所示化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
当L为N-C键时，
胺化合物c-9和卤素取代化合物b-5在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(IIIA)所示的化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
其中，
Z表示卤素原子，优选氟、氯、溴；
Rc为氢、烷基，优选氢；
A1～A4、E1～E4、R1～R7、m、n、p、q如通式(IIIA)所定义。
本发明进一步提供一种制备根据本发明所述的通式(IVA)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐的方法，其包括以下步骤：
当L为S时，
化合物c-3与胺化合物d-4在碱性条件下发生取代反应得到通式(IVA)所示化合物；
或者
化合物d-5与巯基取代的硫酮化合物c-1在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(IVA)所示化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
当L为C-C键时，
化合物c-8与胺化合物d-4在碱性条件下发生取代反应得到通式(IVA)所示化合物；
或者
化合物c-7与卤代化合物d-5在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(IVA)所示化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
当L为N-C键时，
胺化合物c-9和卤素取代化合物d-5在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(IVA)所示的化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
其中，
Z表示卤素原子，优选氟、氯、溴；
Rc为氢、烷基，优选氢；
A1～A4、E1～E4、R3～R7、R10、R11、m、n、p、q如通式(IVA)所定义。
本发明进一步提供一种制备根据本发明所述的通式(VA)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐的方法，其包括以下步骤：
化合物c-3与胺化合物d-4在碱性条件下发生取代反应得到通式(VA)所示化合物；
或者
化合物d-5与巯基取代的硫酮化合物c-1在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(VA)所示化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
其中，
Z表示卤素原子，优选氟、氯、溴；
Rc为氢、烷基，优选氢；
A1～A4、E1～E4、R3～R7、R10、R11、m、n、p、q如通式(VA)所定义。
本发明进一步提供一种制备根据本发明所述的通式(VB)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐的方法，其包括以下步骤：
化合物e-3与胺化合物d-4在碱性条件下发生取代反应得到通式(VB)所示化合物；
或者
化合物d-5与巯基取代的硫酮化合物e-1在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(VB)所示化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
其中，
Z表示卤素原子，优选氟、氯、溴；
Rc为氢、烷基，优选氢；
A1～A4、E1～E7、R3～R7、R10、R11、m、n、p、q如通式(VB)所定义。
本发明进一步提供一种制备根据本发明所述的通式(VC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐的方法，其包括以下步骤：
化合物f-3与胺化合物d-4在碱性条件下发生取代反应得到通式(VC)所示化合物；
或者
化合物d-5与巯基取代的硫酮化合物f-1在催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(VC)所示化合物；所述催化剂优选钯催化剂；
其中，
Z表示卤素原子，优选氟、氯、溴；
Rc为氢、烷基，优选氢；
A1～A4、E1～E4、E8～E11、R3～R7、R10、R11、m、n、p、q如通式(VC)所定义。
本发明进一步提供一种药物组合物，其包含根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、通式(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVF)、通式(VA)～(VC)、通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐，以及药学可接受的赋形剂或载体。
本发明还提供根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、通式(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVF)、通式(VA)～(VC)、通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐或者包含其的药物组合物在制备含Src同源区2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2抑制剂中的用途。
本发明还提供根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、通式(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVF)、通式(VA)～(VC)、通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐或者包含其的药物组合物在制备用于预防和/或治疗与SHP2活性相关的疾病的药物中的用途，其中所述与SHP2活性相关的疾病优选努南综合征、豹纹综合征、糖尿病、肥胖和癌症；所述癌症优选神经母细胞瘤、急性骨髓白血病、青少年白血病、青少年骨髓单核细胞性白血病、肺癌、肝癌、胃癌、喉癌、口腔癌、乳癌、结肠直肠癌。
本发明另外涉及一种根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、通式(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVF)、通式(VA)～(VC)、通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐或者包含其的药物组合物，其用作SHP2抑制剂。
本发明另外涉及一种根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、通式(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVF)、通式(VA)～(VC)、通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐或者包含其的药物组合物，其用于预防和/或治疗与SHP2活性相关的疾病的药物中的用途，其中所述与SHP2活性相关的疾病优选努南综合征、豹纹综合征、糖尿病、肥胖和癌症；所述癌症优选神经母细胞瘤、急性骨髓白血病、青少年白血病、青少年骨髓单核细胞性白血病、肺癌、肝癌、胃癌、喉癌、口腔癌、乳癌、结肠直肠癌。
本发明另外涉及一种抑制SHP2的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、通式(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVF)、通式(VA)～(VC)、通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐或者包含其的药物组合物。
本发明另外涉及一种预防和/或治疗与SHP2活性相关的疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用有效量的根据本发明所述的通式(I)、通式(II)、通式(IIIA)～(IIIC)、通式(IVA)～(IVF)、通式(VA)～(VC)、通式(VIA)～(VIC)所示的化合物或其互变异构体、对映异构体、非对映异构体、内消旋体、外消旋体、或其混合物形式、或其可药用盐或者包含其的药物组合物，其中所述与SHP2活性相关的疾病优选努南综合征、豹纹综合征、糖尿病、肥胖和癌症；所述癌症优选神经母细胞瘤、急性骨髓白血病、青少年白血病、青少年骨髓单核细胞性白血病、肺癌、肝癌、胃癌、喉癌、口腔癌、乳癌、结肠直肠癌。
本发明的化合物或组合物还可以与其它治疗剂如抗体、抗体-药物偶联物、免疫调节剂或组蛋白脱乙酰基酶抑制剂等联合应用。
按照本发明所属领域的常规方法，本发明化合物可以与酸生成药学上可接受的酸式加成盐。无机酸盐的示例包括盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐等。有机酸盐的示例包括乙酸盐、三氟乙酸盐、葡萄糖酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、甲酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、对甲苯磺酸盐等。
按照本发明所属领域的常规方法，本发明化合物可以与碱生成药学上可接受的碱式加成盐。碱金属盐的示例包括钠盐、钾盐等。碱土金属盐的示例包括镁盐、钙盐等。有机胺盐的示例包括三乙胺盐、吡啶盐、普鲁卡因盐、甲基吡啶盐、二环己基胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐、三(羟甲基)氨基甲烷盐等。氨基酸加成盐的示例包括精氨酸盐、赖氨酸盐、鸟氨酸盐、丝氨酸盐、甘氨酸盐、天冬氨酸盐、谷氨酸盐等。
含活性成分的药物组合物可以是适用于口服的形式，例如片剂、糖锭剂、锭剂、水或油混悬液、可分散粉末或颗粒、乳液、硬或软胶囊，或糖浆剂或酏剂。可按照本领域任何已知制备药用组合物的方法制备口服组合物，此类组合物可含有一种或多种选自以下的成分：甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂，以提供悦目和可口的药用制剂。片剂含有活性成分和用于混合的适宜制备片剂的无毒的可药用的赋形剂。这些赋形剂可以是惰性赋形剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如微晶纤维素、交联羧甲基纤维素钠、玉米淀粉或藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶、聚乙烯吡咯烷酮或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。这些片剂可以不包衣或可通过掩盖药物的味道或在胃肠道中延迟崩解和吸收，因而在较长时间内提供缓释作用的已知技术将其包衣。例如，可使用水溶性味道掩蔽物质，例如羟丙基甲基纤维素或羟丙基纤维素，或延长时间物质例如乙基纤维素、醋酸丁酸纤维素。
也可用其中活性成分与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合的硬明胶胶囊，或其中活性成分与水溶性载体例如聚乙二醇或油溶媒例如花生油、液体石蜡或橄榄油混合的软明胶胶囊提供口服制剂。
水混悬液含有活性物质和用于混合的适宜制备水混悬液的赋形剂。此类赋形剂是悬浮剂，例如羧基甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和阿拉伯胶；分散剂或湿润剂，可以是天然产生的磷脂例如卵磷脂，或烯化氧与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，例如十七碳亚乙基氧基鲸蜡醇(heptadecaethyleneoxy cetanol)，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生的部分酯的缩合产物，例如聚环氧乙烷山梨醇单油酸酯，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的缩合产物，例如聚环氧乙烷脱水山梨醇单油酸酯。水混悬液也可以含有一种或多种防腐剂例如尼泊金乙酯或尼泊金正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一种或多种甜味剂，例如蔗糖、糖精或阿司帕坦。
油混悬液可通过使活性成分悬浮于植物油如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油，或矿物油例如液体石蜡中配制而成。油混悬液可含有增稠剂，例如蜂蜡、硬石蜡或鲸蜡醇。可加入上述的甜味剂和矫味剂，以提供可口的制剂。可通过加入抗氧化剂例如丁羟茴醚或α-生育酚保存这些组合物。
本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂的形式。油相可以是植物油例如橄榄油或花生油，或矿物油例如液体石蜡或其混合物。适宜的乳化剂可以是天然产生的磷脂，例如大豆卵磷脂，和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯，例如山梨坦单油酸酯，和所述偏酯和环氧乙烷的缩合产物，例如聚环氧乙烷山梨醇单油酸酯。乳剂也可以含有甜味剂、矫味剂、防腐剂和抗氧剂。可用甜味剂例如甘油、丙二醇、山梨醇或蔗糖配制的糖浆和酏剂。此类制剂也可含有缓和剂、防腐剂、着色剂和抗氧剂。
本发明的药物组合物可以是无菌注射水溶液形式。可以使用的可接受的溶媒和溶剂有水、林格氏液和等渗氯化钠溶液。无菌注射制剂可以是其中活性成分溶于油相的无菌注射水包油微乳。例如将活性成分溶于大豆油和卵磷脂的混合物中。然后将油溶液加入水和甘油的混合物中处理形成微乳。可通过局部大量注射，将注射液或微乳注入患者的血流中。或者，最好按可保持本发明化合物恒定循环浓度的方式给予溶液和微乳。为保持这种恒定浓度，可使用连续静脉内递药装置。
本发明的药物组合物可以是用于肌内和皮下给药的无菌注射水或油混悬液的形式。可按已知技术，用上述那些适宜的分散剂或湿润剂和悬浮剂配制该混悬液。无菌注射制剂也可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中制备的无菌注射溶液或混悬液，例如在1,3-丁二醇中制备的溶液。此外，可方便地用无菌固定油作为溶剂或悬浮介质。为此目的，可使用包括合成甘油单或二酯在内的任何调和固定油。此外，脂肪酸例如油酸也可以制备注射剂。
可按用于直肠给药的栓剂形式给予本发明化合物。可通过将药物与在普通温度下为固体但在直肠中为液体，因而在直肠中会溶化而释放药物的适宜的无刺激性赋形剂混合来制备这些药物组合物。此类物质包括可可脂、甘油明胶、氢化植物油、各种分子量的聚乙二醇和聚乙二醇的脂肪酸酯的混合物。
本领域技术人员熟知，药物的给药剂量依赖于多种因素，包括但并非限定于以下因素：所用特定化合物的活性、病人的年龄、病人的体重、病人的健康状况、病人的行被、病人的饮食、给药时间、给药方式、排泄的速率、药物的组合等。另外，最佳的治疗方式如治疗的模式、通式化合物的日用量或可药用的盐的种类可以根据传统的治疗方案来验证。
本发明可以含有通式(I)所示的化合物，及其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物作为活性成分，与药学上可接受的载体或赋型剂混合制备成组合物，并制备成临床上可接受的剂型。本发明的衍生物可以与其他活性成分组合使用，只要它们不产生其他不利的作用，例如过敏反应等。本发明化合物可作为唯一的活性成分，也可以与其它治疗与酪氨酸激酶活性相关的疾病的药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、分开或相继给药来实现。
发明的详细说明
除非有相反陈述，在说明书和权利要求书中使用的术语具有下述含义。
术语“烷基”指饱和脂肪族烃基团，其为包含1至20个碳原子的直链或支链基团，优选含有1至12个碳原子的烷基，更优选含有1至6个碳原子的烷基。非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基、正庚基、2-甲基己基、3-甲基己基、4-甲基己基、5-甲基己基、2,3-二甲基戊基、2,4-二甲基戊基、2,2-二甲基戊基、3,3-二甲基戊基、2-乙基戊基、3-乙基戊基、正辛基、2,3-二甲基己基、2,4-二甲基己基、2,5-二甲基己基、2,2-二甲基己基、3,3-二甲基己基、4,4-二甲基己基、2-乙基己基、3-乙基己基、4-乙基己基、2-甲基-2-乙基戊基、2-甲基-3-乙基戊基、正壬基、2-甲基-2-乙基己基、2-甲基-3-乙基己基、2,2-二乙基戊基、正癸基、3,3-二乙基己基、2,2-二乙基己基，及其各种支链异构体等。更优选的是含有1至6个碳原子的低级烷基，非限制性实施例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基、正戊基、1,1-二甲基丙基、1,2-二甲基丙基、2,2-二甲基丙基、1-乙基丙基、2-甲基丁基、3-甲基丁基、正己基、1-乙基-2-甲基丙基、1,1,2-三甲基丙基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、2-甲基戊基、3-甲基戊基、4-甲基戊基、2,3-二甲基丁基等。烷基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基可以在任何可使用的连接点上被取代，所述取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上定义的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-、2-或3-丁烯基等。烯基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“炔基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳三键组成的如上定义的烷基，例如乙炔基、丙炔基、丁炔基等。炔基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基。
术语“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，环烷基环包含3至20个碳原子，优选包含3至12个碳原子，更优选包含3至6个碳原子。单环环烷基的非限制性实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环己二烯基、环庚基、环庚三烯基、环辛基等；多环环烷基包括螺环、稠环和桥环的环烷基。
术语“螺环烷基”指5至20元的单环之间共用一个碳原子(称螺原子)的多环基团，其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺环烷基分为单螺环烷基、双螺环烷基或多螺环烷基，优选为单螺环烷基和双螺环烷基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺环烷基。螺环烷基的非限制性实例包括：
术语“稠环烷基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对碳原子的全碳多环基团，其中一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠环烷基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环烷基。稠环烷基的非限制性实例包括：
所述环烷基环可以稠合于芳基、杂芳基或杂环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为环烷基，非限制性实例包括茚满基、四氢萘基、苯并环戊烷基、苯并环庚烷基等。环烷基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“杂环基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基，其包含3至20个环原子，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，但不包括-O-O-、-O-S-或-S-S-的环部分，其余环原子为碳。优选包含3至12个环原子，其中1～4个是杂原子；最优选包含3至8个环原子，其中1～3个是杂原子；最优选包含5至7个环原子，其中1～2或1～3个是杂原子。单环杂环基的非限制性实例包括吡咯烷基、咪唑烷基、四氢呋喃基、四氢噻吩基、二氢咪唑基、二氢呋喃基、二氢吡唑基、二氢吡咯基、哌啶基、哌嗪基、吗啉基、硫代吗啉基、高哌嗪基、吡喃基等，优选1、2、5-噁二唑基、吡喃基或吗啉基。多环杂环基包括螺环、稠环和桥环的杂环基。
术语“螺杂环基”指5至20元的单环之间共用一个原子(称螺原子)的多环杂环基团，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。其可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据环与环之间共用螺原子的数目将螺杂环基分为单螺杂环基、双螺杂环基或多螺杂环基，优选为单螺杂环基和双螺杂环基。更优选为4元/4元、4元/5元、4元/6元、5元/5元或5元/6元单螺杂环基。螺杂环基的非限制性实例包括：
术语“稠杂环基”指5至20元，系统中的每个环与体系中的其他环共享毗邻的一对原子的多环杂环基团，一个或多个环可以含有一个或多个双键，但没有一个环具有完全共轭的π电子系统，其中一个或多个环原子为选自氮、氧或S(O)m(其中m是整数0至2)的杂原子，其余环原子为碳。优选为6至14元，更优选为7至10元。根据组成环的数目可以分为双环、三环、四环或多环稠杂环基，优选为双环或三环，更优选为5元/5元或5元/6元双环稠杂环基。稠杂环基的非限制性实例包括：
所述杂环基环可以稠合于芳基、杂芳基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂环基，其非限制性实例包括：
杂环基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、氧代基、羧基或羧酸酯基。
术语“芳基”指具有共轭的π电子体系的6至14元全碳单环或稠合多环(也就是共享毗邻碳原子对的环)基团，优选为6至10元，例如苯基和萘基。更优选苯基。所述芳基环可以稠合于杂芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为芳基环，其非限制性实例包括：
芳基可以是取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“杂芳基”指包含1至4个杂原子、5至14个环原子的杂芳族体系，其中杂原子选自氧、硫和氮。杂芳基优选为5至10元，含1至3个杂原子；更优选为5元或6元，含1至2个杂原子；优选例如咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡唑基、噁唑基、吡咯基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、噻二唑、吡嗪基等，优选为咪唑基、噻唑基、吡唑基或嘧啶基、噻唑基；更有选吡唑基或噻唑基。所述杂芳基环可以稠合于芳基、杂环基或环烷基环上，其中与母体结构连接在一起的环为杂芳基环，其非限制性实例包括：
杂芳基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(非取代的环烷基)，其中烷基的定义如上所述。烷氧基的非限制性实例包括：甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基、环己氧基。烷氧基可以是任选取代的或非取代的，当被取代时，取代基优选为一个或多个以下基团，其独立地选自烷基、烯基、炔基、烷氧基、烷硫基、烷基氨基、卤素、巯基、羟基、硝基、氰基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、环烷氧基、杂环烷氧基、环烷硫基、杂环烷硫基、羧基或羧酸酯基。
术语“卤代烷基”指被一个或多个卤素取代的烷基，其中烷基如上所定义。
术语“卤代烷氧基”指被一个或多个卤素取代的烷氧基，其中烷氧基如上所定义。
术语“羟基”指-OH基团。
术语“卤素”指氟、氯、溴或碘。
术语“氨基”指-NH2。
术语“氰基”指-CN。
术语“硝基”指-NO2。
术语“氧代基”指＝O。
术语“羧基”指-C(O)OH。
术语“巯基”指-SH。
术语“酯基”指-C(O)O(烷基)或-C(O)O(环烷基)，其中烷基和环烷基如上所定义。
术语“酰基”指含有-C(O)R’基团的化合物，其中R’为烷基、环烷基、杂环基、芳基、杂芳基。
“任选”或“任选地”意味着随后所描述的事件或环境可以但不必发生，该说明包括该事件或环境发生或不发生的场合。例如，“任选被烷基取代的杂环基团”意味着烷基可以但不必须存在，该说明包括杂环基团被烷基取代的情形和杂环基团不被烷基取代的情形。
“取代的”指基团中的一个或多个氢原子，优选为最多5个，更优选为1～3个氢原子彼此独立地被相应数目的取代基取代。不言而喻，取代基仅处在它们的可能的化学位置，本领域技术人员能够在不付出过多努力的情况下确定(通过实验或理论)可能或不可能的取代。例如，具有游离氢的氨基或羟基与具有不饱和(如烯属)键的碳原子结合时可能是不稳定的。
“药物组合物”表示含有一种或多种本文所述化合物或其生理学上/可药用的盐或前体药物与其他化学组分的混合物，以及其他组分例如生理学/可药用的载体和赋形剂。药物组合物的目的是促进对生物体的给药，利于活性成分的吸收进而发挥生物活性。
“可药用盐”是指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。
本发明化合物的合成方法
为了完成本发明的目的，本发明采用如下合成方案制备本发明的化合物。
其中L为S的本发明通式(I)所示的化合物可以通过以下方案1进行制备：
其中，巯基取代的硫酮化合物a-1与多卤代化合物a-2在钯催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到中间体a-3；a-3再和胺a-4在碱性条件下发生取代反应得到通式(I)所示化合物。
其中L为S的本发明通式(I)所示的化合物还可以通过以下方案2进行制备：
其中，多卤代化合物a-2与胺a-4在碱性条件下发生取代反应得到中间体a-5；a-5再和巯基取代的硫酮化合物a-1在钯催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(II)所示化合物。
其中L为C-C键的本发明通式(I)所示的化合物还可以通过以下方案3或方案4进行制备：
其中，卤素取代的硫酮化合物a-6在钯催化剂的作用下得到硼酸酯a-7；a-7与多卤代化合物a-2在钯催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到中间体a-8；a-8再和胺a-4在碱性条件下发生取代反应得到通式(I)所示化合物；或者a-7与卤代化合物a-5在钯催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(I)所示化合物。
其中L为N-C键的本发明通式(I)所示的化合物还可以通过以下方案5进行制备：
其中，胺a-9和卤素取代化合物a-5在钯催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式(I)所示的化合物。
通式a-1所示化合物可通过以下方案6或方案7进行制备：
具体来说，通式a-1所示化合物可通过上述五种路线合成：1)溴代物a-10经硝化得到溴代硝基化合物a-11，a-11与亚磺酰亚胺a-12在钯催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到硝基取代硫酮a-13，a-13的硝基被还原为氨基得到a-14，a-14经重氮化，卤代得到中间体a-6，a-6与硫醇在在钯催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式a-1所示化合物；如Rc作为保护基时，可通过脱保护得到Rc为H的化合物a-1；2)卤代物a-15与亚磺酰亚胺a-12在钯催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到硫酮a-16，a-16经卤代得到中间体a-6；3)卤代物a-34经卤代得到多卤素取代化合物a-17，a-17与亚磺酰亚胺a-12在钯催化剂的作用下发生有选择性的交叉偶联反应得到中间体a-6；4)a-17与硫醇在在钯催化剂的作用下发生有选择性的交叉偶联反应得到中间体a-18；a-18与亚磺酰亚胺a-12在钯催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式a-1所示化合物；5)芳胺化合物a-35经卤代得到卤素取代芳胺a-19，a-19与硫醇在在钯催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到中间体a-20，a-20经重氮化，卤代得到中间体a-18。
此外，通式a-1所示化合物还可通过上述三种路线合成：1)卤代羟基化合物a-36与硫醇在钯催化剂的作用下发生有选择性的交叉偶联反应得到中间体a-37；a-37经过取代反应得到中间体a-38；a-38与亚磺酰亚胺a-12在钯催化剂的作用下发生有选择性的交叉偶联反应得到通式a-1所示化合物；2)卤代物a-39与硫醇经过取代反应或者在钯催化剂的作用下发生有选择性的交叉偶联反应得到中间体a-40；a-40经卤代得到卤素取代化合物a-41；a-41与亚磺酰亚胺a-12在钯催化剂的作用下发生有选择性的交叉偶联反应得到通式a-1所示化合物；3)羟基化合物a-42经过取代反应得到中间体a-43；a-43与亚磺酰亚胺a-12在钯催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到硫酮a-44；a-44与硫醇在钯催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到通式a-1所示化合物。
其中L为S的本发明通式(I)所示的化合物还可以通过以下方案8进行制备：
其中，卤代芳胺a-21和二甲基亚砜经重排得到中间体a-22；a-22的氨基经保护得到中间体a-23；a-23和硫醇在钯催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到中间体a-24；a-24与多卤代化合物a-2在钯催化剂的作用下发生有选择性的交叉偶联反应得到中间体a-25；a-25经脱保护得到中间体a-26；a-26经氧化分子内关环得到中间体a-27；a-27和胺a-4发生取代反应得到通式(I)所示化合物。
通式a-2所示化合物可通过以下方案9进行制备：
其中：单卤代化合物a-28经卤代反应得到通式a-2所示化合物。
其中L为S的本发明通式(I)所示的化合物还可以通过以下方案10进行制备：
其中，中间体a-30可由单卤代化合物a-28经环化或化合物a-29经卤代得到；a-30和巯基取代的硫酮化合物a-1在钯催化剂的作用下发生交叉偶联反应得到中间体a-31；a-31和胺a-4在碱性条件下发生取代反应得到通式(I)所示化合物。
其中L为S的本发明通式(I)所示的化合物还可以通过以下方案11进行制备：
其中，化合物a-32和胺a-4在碱性条件下发生取代反应得到中间体a-33；a-33经卤代反应以后再和巯基取代的硫酮化合物a-1发生取代反应得到通式(I)所示化合物。
其中，Rc为氢、烷基，优选氢。
Z为卤素；环A、环E、R1～R7、m、n、p、q如通式(I)所定义。
附图说明
图1为实施例1和实施例66化合物在H358荷瘤小鼠中的抗肿瘤效果。
图2为实施例1化合物在Miapaca-2荷瘤小鼠中的抗肿瘤效果。
具体实施方式
进一步通过实施例来理解本发明的化合物及其制备，这些实施例说明了一些制备或使用所述化合物的方法。然而，要理解的是，这些实施例不限制本发明。现在已知的或进一步开发的本发明的变化被认为落入本文中描述的和要求保护的本发明范围之内。
本发明化合物是利用便利的起始原料和通用的制备步骤来完成制备的。本发明给出了典型的或倾向性的反应条件，诸如反应温度、时间、溶剂、压力、反应物的摩尔比。但是除非特殊说明，其他反应条件也能采纳。优化条件可能随着具体的反应物或溶剂的使用而改变，但在通常情况下，反应优化步骤和条件都能得到确定。
另外，本发明中可能用到了一些保护基团来保护某些官能团避免不必要的反应。适宜于各种官能团的保护基以及它们的保护或脱保护条件已经为本领域技术人员广泛熟知。例如T.W.Greene和G.M.Wuts的《有机制备中的保护基团》(第3版,Wiley,New York,1999和书中的引用文献)详细描述了大量的保护基团的保护或脱保护。
化合物和中间体的分离和纯化依据具体的需求采取适当的方法和步骤，例如过滤、萃取、蒸馏、结晶、柱层析、制备薄层板色谱、制备高效液相色谱或上述方法的混合使用。其具体使用方法可参阅本发明描述的实例。当然，其他类似的分离和纯化手段也是可以采用的。可以使用常规方法(包括物理常数和波谱数据)对其进行表征。
化合物的结构是通过核磁共振(NMR)或/和质谱(MS)来确定的。NMR位移以10-6(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Brukerdps 300型核磁仪、Bruker AVANCE III HD 400型核磁仪和Bruker AVANCE NEO 400型核磁仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代氯仿(CDCl3)，氘代甲醇(CD3OD)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
MS的测定用LC/MS-2020质谱仪(生产商：岛津)(QDa Detector)。
制备液相使用Waters高效液相色谱仪(Waters 2545二元梯度泵，2767样品管理器，2489UV/可视检测器，单一C18，5μm，19mm×250mm)(生产商：Waters)。
薄层层析硅胶板使用青岛海洋化工GF254硅胶板，薄层色谱法(TLC)使用的硅胶板采用的规格是0.15mm～0.2mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.4mm～0.5mm。
硅胶柱层析色谱法使用青岛海洋硅胶100～200目、200～300目硅胶为载体。
[α]2 D 5的测定时使用RUDOLPH RESEARCH ANALYTICAL APIII型旋光仪测定，其中α为用旋光仪测得的旋光度；D表示使用单色光源钠光灯，波长为589nm；25为测定时温度25℃；c为溶液的质量浓度(g/mL)；溶剂是甲醇(MeOH)。
本发明的已知的起始原料可以采用或按照本领域已知的方法来合成，或可购买自网化商城、北京偶合、Sigma、百灵威、易世明、上海书亚、上海伊诺凯、安耐吉化学、上海毕得等公司。
实施例中无特殊说明，反应能够均在氮气氛下进行。
氩气氛或氮气氛是指反应瓶连接一个约1L容积的氩气或氮气气球。
反应溶剂，有机溶剂或惰性溶剂各自表述为使用的该溶剂在所描述的反应条件下不参与反应，包括，如苯、甲苯、乙腈、四氢呋喃(THF)、N,N-二甲基甲酰胺(DMF)、氯仿、二氯甲烷、乙醚、甲醇、氮-甲基吡咯碄酮(NMP)、吡啶等。实施例中无特殊说明，溶液是指水溶液。
本发明中所描述的化学反应一般在常压下进行。反应温度在-78℃至200℃之间。反应时间和条件为，例如，一个大气压下，-78℃至200℃之间，大约1至24小时内完成。如果反应过夜，则反应时间一般为16小时。实施例中无特殊说明，反应的温度为室温，为20℃～30℃。
实施例中的反应进程的监测采用薄层色谱法(TLC)，反应所使用的展开剂的体系有：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：石油醚和乙酸乙酯体系，C：丙酮，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节。
纯化化合物采用的柱层析的洗脱剂的体系和薄层色谱法的展开剂体系包括：A：二氯甲烷和甲醇体系，B：石油醚和乙酸乙酯体系，溶剂的体积比根据化合物的极性不同而进行调节，也可以加入少量的三乙胺和三氟乙酸等碱性或酸性试剂进行调节。
除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。
实施例
实施例1：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(1)的制备
步骤1：2溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)的制备
向干燥的250mL三口瓶中依次加入2-溴-1-氯-3-氟苯(1a)(20.00g，95.49mmol)和浓硫酸(70mL)。在0℃，氮气氛围下，将硝酸钠(8.93g，105.04mmol)分批加入。反应混合物在室温搅拌2小时。将反应混合物倒入冰水(500mL)中，用乙酸乙酯(2x 500mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(600mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到黄色固体状的化合物2溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)(19.70g，收率81％)。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.89(d,J＝9.0Hz,1H),7.24(d,J＝9.0Hz,1H)。
步骤2：((2-氯-6-氟-3-硝基苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1c)的制备
在氮气氛围下，向干燥的1L圆底烧瓶中依次加入化合物1b(18.00g，51.35mmol)、二甲基亚磺酰亚胺(4.78g，51.35mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)(0.94g，1.03mmol)、4，5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(1.78g，3.08mmol)、叔丁醇钠(5.92g，61.62mmol)和1,4-二氧六环(360mL)。该反应混合物在氮气氛围下，100℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到黄色固体状的化合物1c(5.10g，收率37％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：267.0，269.0，实测值：267.0，269.0。
步骤3：((3-氨基-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1d)的制备
向干燥的500mL圆底烧瓶中依次加入化合物1c(5.10g，19.10mmol)、乙醇(100mL)和水(20mL)。在氮气氛下，缓慢加入铁粉(5.34g，95.62mmol)和氯化铵(5.12g，95.62mmol)。反应混合液在80℃搅拌2小时。反应混合物冷却至40℃，过滤。滤饼用二氯甲烷(2x 50mL)洗涤，滤液减压浓缩。残余物用水(300mL)稀释，然后用二氯甲烷(2x 300mL)萃取。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：20％-40％，25分钟)，得到黄色固体状的化合物1d(3.50g，收率77％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：237.0，239.0，实测值：237.1，239.1。
步骤4：((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)的制备
向干燥的250mL三口烧瓶中依次加入化合物1d(3.00g，12.67mmol)、溴化铜(1.42g，6.34mmol)和乙腈(90mL)。在0℃，将亚硝酸叔丁酯(1.96g，19.01mmol)逐滴加入。反应混合物在室温搅拌2小时，用氯化铵(200mL，5％)水溶液淬灭，并用二氯甲烷(2x 200mL)萃取。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：30％-60％，30分钟)，得到棕色固体状的化合物1e(1.20g，收率31％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：299.9，301.9，303.9，实测值：299.9，301.9，303.8。
步骤5：3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)的制备
在氮气氛下，向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物1e(210mg，0.70mmol)、3-巯基丙酸甲酯(84mg，0.70mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)，(64mg，0.07mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(81mg，0.14mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(180mg，1.40mmol)和1,4-二氧六环(4mL)。该反应混合物在氮气氛下，100℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/2)，得到黄色固体状的化合物1f(150mg，收率63％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：340.0，342.0，实测值：340.0，342.0。
步骤6：((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)的制备向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物1f(400mg，1.18mmol)和甲醇(8mL)。在0℃，氮气氛下，将甲醇钠(127mg，2.35mmol)一次性加入。反应混合物在室温搅拌3小时。减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到黄色固体的化合物1g(230mg，收率77％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：254.0，256.0，实测值：254.1，256.1。
步骤7：((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1h)的制备
在氮气氛下，向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物1g(244mg，0.96mmol)、2-溴-5-氯吡嗪(186mg，0.96mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)(88mg，0.10mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(111mg，0.19mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(248mg，1.92mmol)和1,4-二氧六环(5mL)。该反应混合物在氮气氛下，100℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到黄色油状的化合物1h(305mg，收率86％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：366.0，368.0，370.0，实测值：365.9，367.9，369.9。
步骤8：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(1)的制备
向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物1h(120mg，0.33mmol)、(3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺二盐酸盐(1i)(61mg，0.36mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(212mg，1.64mmol)和二甲基亚砜(3mL)。反应混合物在100℃搅拌16小时。降至室温后，反应混合物用高效液相制备色谱法(XBridge C18柱，流动相A：水(0.1％甲酸)，流动相B：乙腈，梯度：35％-65％，5.8分钟,检测波长：254nm，保留时间：5.42分钟)分离纯化，得到黄色固体状的标题化合物1(76.2mg，收率46％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：500.1，502.1，实测值：500.1，502.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.40(d,J＝1.2Hz,1H),8.25(s,1H),8.19(d,J＝1.2Hz,1H),7.09(dd,J＝10.0,8.8Hz,1H),6.55(dd,J＝8.8,5.2Hz,1H),4.25(s,2H),4.15-4.05(m,1H),4.00-3.89(m,2H),3.72(d,J＝8.4Hz,1H),3.53(d,J＝8.4Hz,1H),3.36-3.31(m,2H),3.25(s,6H),3.02(d,J＝5.2Hz,1H),1.80-1.62(m,2H),1.59-1.46(m,2H),1.11(d,J＝6.4Hz,3H)。
[α]2 D 5＝-10.435(c＝0.24,MeOH)。
实施例2：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2)的制备
/>
步骤1：((3-溴-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2b)的制备
实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物1,3-二溴-2-氯苯(2a)(500mg，1.85mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)，收率66％。
MS-ESI计算值[M+H]+：281.9，283.9，285.9，实测值：282.0，284.0，286.0。
步骤2：3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)丙酸甲酯(2c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((3-溴-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2b)(380mg，1.34mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率38％。
MS-ESI计算值[M+H]+：322.0，324.0，实测值：322.1，324.1。
步骤3：((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)丙酸甲酯(2c)(165mg，0.51mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率51％。
MS-ESI计算值[M+H]+：236.0，238.0，实测值：236.0，238.0。
步骤4：((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤7，但以反应物((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2d)(100mg，0.42mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率77％。
MS-ESI计算值[M+H]+：348.0，350.0，352.0，实测值：348.0，350.0，352.0。
步骤5：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2)的制备
向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物2e(65mg，0.19mmol)、(3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺二盐酸盐(1i)(68mg，0.28mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(120mg，0.94mmol)和二甲基亚砜(1.5mL)。反应混合物在100℃搅拌16小时。降至室温后，反应混合物用高效液相制备色谱法(Spherical C18柱，流动相A：水(10mM碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：30％-60％，15分钟，检测波长：254nm，保留时间：6.5分钟)分离纯化，得到白色固体状的标题化合物2(17.2mg，收率19％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：482.1，484.1，实测值：482.0，484.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(d,J＝1.6Hz,1H),8.21(d,J＝1.6Hz,1H),7.01(d,J＝4.8Hz,2H),6.35-6.31(m,1H),4.11-4.04(m,1H),3.94-3.83(m,2H),3.68(d,J＝8.4Hz,1H),3.49(d,J＝8.8Hz,2H),3.47-3.38(m,2H),3.27(s,6H),2.91(d,J＝5.2Hz,1H),1.82-1.40(m,5H),1.09(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例3：1-((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基-2-氯苯基)亚氨基)四氢-1H-1λ6-噻吩1-氧化物(3)的制备
步骤1：1-((3-溴-2-氯苯基)亚氨基)四氢-1H-1λ6-噻吩1-氧化物(3a)的制备实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物1,3-二溴-2-氯苯(2a)(500mg，1.85mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)并以1-亚氨基四氢-1H-1λ6-噻吩1-氧化物(440mg，3.70mmol)代替二甲基亚磺酰亚胺，收率96％。
MS-ESI计算值[M+H]+：307.9，309.9，311.9，实测值：307.9，309.9，311.9。
步骤2：3-((2-氯-3-((1-氧化三氢-1λ6-噻吩-1-亚基)氨基)苯基)硫基)丙酸甲酯(3b)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物1-((3-溴-2-氯苯基)亚氨基)四氢-1H-1λ6-噻吩1-氧化物(3a)(1.1g，3.56mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率40％。
MS-ESI计算值[M+H]+：348.0，350.0，实测值：348.2，350.2。
步骤3：1-((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)四氢-1H-1λ6-噻吩1-氧化物(3c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((2-氯-3-((1-氧化三氢-1λ6-噻吩-1-亚基)氨基)苯基)硫基)丙酸甲酯(3b)(500mg，1.44mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率79％。
MS-ESI计算值[M+H]+：262.0，264.0，实测值：262.0，264.0。
步骤4：1-((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)苯基)亚氨基)四氢-1H-1λ6-噻吩1-氧化物(3d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤7，但以反应物1-((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)四氢-1H-1λ6-噻吩1-氧化物(3c)(100mg，0.38mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率66％。
MS-ESI计算值[M+H]+：374.0，376.0，378.0，实测值：374.0，376.0，378.0。
步骤5：1-((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基-2-氯苯基)亚氨基)四氢-1H-1λ6-噻吩1-氧化物(3)的制备
实验操作流程同实施例2步骤5，但以反应物1-((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫代)苯基)亚氨基)四氢-1H-1λ6-噻吩1-氧化物(3d)(95mg，0.25mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚胺)二甲基-λ6-硫酮(2e)，收率23％。
MS-ESI计算值[M+H]+：508.2，510.2，实测值：508.1，510.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.42(d,J＝1.5Hz,1H),8.22(d,J＝1.3Hz,1H),7.03(t,J＝7.9Hz,1H),6.95(dd,J＝8.0,1.4Hz,1H),6.33(dd,J＝7.9,1.4Hz,1H),4.10-4.04(m,1H),3.93-3.84(m,2H),3.68(d,J＝8.5Hz,1H),3.49(d,J＝8.6Hz,1H),3.48-3.37(m,4H),3.30-3.16(m,2H),2.91(d,J＝5.1Hz,1H),2.28-2.10(m,4H),1.80-1.73(m,1H),1.69-1.62(m,1H),1.57-1.46(m,2H),1.09(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例4：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(4)的制备
步骤1：((6-溴吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(4b)的制备
实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物2,6-二溴吡啶(4a)(1.0g，4.22mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)，收率62％。
MS-ESI计算值[M+H]+：249.0，251.0，实测值：249.1，251.1。
步骤2：3-((6-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)吡啶-2-基)硫基)丙酸甲酯(4c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((6-溴吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(4b)(650mg，2.61mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率79％。
MS-ESI计算值[M+H]+：289.1，实测值：289.1。
步骤3：((6-巯基吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(4d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((6-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)吡啶-2-基)硫基)丙酸甲酯(4c)(300mg，1.04mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率75％。
步骤4：((6-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(4e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤7，但以反应物((6-巯基吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(4d)(150mg，0.74mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率47％。
MS-ESI计算值[M+H]+：315.0，317.0，实测值：315.0，317.0。
步骤5：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(4)的制备
实验操作流程同实施例2步骤5，但以反应物((6-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(4e)(100mg，0.32mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)，收率33％。
MS-ESI计算值[M+H]+：449.2，实测值：449.0。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.33(d,J＝1.5Hz,1H),8.21(d,J＝1.5Hz,1H),7.72-7.36(m,1H),6.58(dd,J＝7.8,0.9Hz,1H),6.51(dd,J＝8.1,0.9Hz,1H),4.27-4.12(m,1H),4.06-3.88(m,2H),3.85(d,J＝8.7Hz,1H),3.70(d,J＝8.7Hz,1H),3.43-3.37(m,2H),3.17(s,6H),3.02(d,J＝4.8Hz,1H),1.92-1.87(m,1H),1.76-1.73(m,3H),1.68-1.35(m,2H),1.26(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例5：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(5)的制备
步骤1：((3-溴-2-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(5b)的制备
实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物1,3-二溴-2-氟苯(5a)(3.00g，11.82mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)，收率82％。
MS-ESI计算值[M+H]+：266.0，268.0，实测值：266.1，268.1。
步骤2：3-((3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-2-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(5c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((3-溴-2-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(5b)(2.50g，9.39mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率73％。
MS-ESI计算值[M+H]+：306.1，实测值：306.2。
步骤3：((2-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(5d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-2-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(5c)(2.10g，6.88mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率72％。
MS-ESI计算值[M+H]+：220.0，实测值[2M-1]+：437.0。
步骤4：((3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(5e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤7，但以反应物((2-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(5d)(400mg，1.82mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率76％。
MS-ESI计算值[M+H]+：332.0，334.0，实测值：332.0，334.0。
步骤5：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(5)的制备
实验操作流程同实施例1步骤8，但以反应物((3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(5e)(150mg，0.45mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1h)，收率24％。
MS-ESI计算值[M+H]+：466.2，实测值：466.1。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.34(d,J＝1.5Hz,1H),8.23(s,1H),8.14(d,J＝1.2Hz,1H),7.07(m,1H),6.94(m,1H),6.68(m,1H),4.40-4.30(m,2H),4.12(m,1H),4.02-3.90(m,2H),3.76(d,J＝8.7Hz,1H),3.55(d,J＝8.7Hz,1H),3.26(s,8H),3.09(d,J＝5.1Hz,1H),1.79-1.46(m,4H),1.13(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例6：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-(三氟甲基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(6)的制备
/>
步骤1：((3-氟-2-(三氟甲基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(6b)的制备实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物1-溴-3-氟-2-(三氟甲基)苯(6a)(2.00g，8.23mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)，收率97％。
MS-ESI计算值[M+H]+：256.0，实测值：256.0。
步骤2：((3-((4-甲氧基苄基)硫基)-2-(三氟甲基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(6c)的制备
向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物6b(1.00g，3.92mmol)和二甲基亚砜(10mL)，再加入(4-甲氧基苯基)甲硫醇(0.60g，4.31mmol)和叔丁醇钾(0.92g，8.23mmol)。该反应混合物在90℃搅拌3小时。降至室温后，反应混合物用反相液相制备色谱法(C18柱，流动相A：水(10mmol/L三氟乙酸)，流动相B：乙腈，梯度：35％-60％，25分钟)分离纯化，得到黄色固体状化合物6c(820mg，收率53％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：390.1，实测值：389.9。
步骤3：((3-巯基-2-(三氟甲基(苯基(亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(6d)的制备
向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物6c(820mg，2.11mmol)和三氟乙酸(10mL)。该反应混合物在70℃搅拌3小时，反应液减压浓缩，残余物用反相液相制备色谱法(C18柱，流动相A：水(10mmol/L甲酸)，流动相B：乙腈，梯度：20％-80％，30分钟)分离纯化，得到白色油状的化合物6d(480mg，收率84％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：270.0，实测值：270.0。
步骤4：((3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-(三氟甲基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(6e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤7，但以反应物((3-巯基-2-(三氟甲基(苯基(亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(6d)(480mg，1.78mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率61％。
MS-ESI计算值[M+H]+：382.0，384.0，实测值：382.0，384.0。
步骤5：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-(三氟甲基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(6)的制备
实验操作流程同实施例1步骤8，但以反应物((3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-(三氟甲基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(6e)(150mg，0.39mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1h)，收率54％。
MS-ESI计算值[M+H]+：516.2，实测值：515.9。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.44(d,J＝1.5Hz,1H),8.29-8.18(m,2H),7.22-1.17(m,1H),7.08-7.05(m,1H),6.46-6.36(m,1H),4.16-4.10(m,1H),4.03-3.94(m,4H),3.77(d,J＝8.7Hz,1H),3.56(d,J＝8.7Hz,1H),3.43-3.27(m,2H),3.23(s,6H),3.09(d,J＝5.1Hz,1H),1.84-1.47(m,4H),1.14(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例7：((1-(5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)吲哚啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(7)的制备
步骤1：(R)-N-((3S,4S)-8(5-溴吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧代-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(7e)的制备
向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物7g(10.0g，40.01mmol)、(R)-2-甲基-N-((3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-丙-2-亚磺酰胺(7h)(根据专利申请WO2019158019公开的方法制备)(5.75g，21.00mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(13.55g，105.00mmol)和二甲基亚砜(200mL)。反应混合物在100℃搅拌16小时。降至室温后，通过反相液相制备色谱法(C18柱，流动相A：水(10mM碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：30％-50％，20分钟)分离纯化，得到黄色固体状化合物7e(4.55g，收率50％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：431.1，433.1，实测值：431.1，433.1。
步骤2：4-溴吲哚-1-羧酸叔丁酯(7b)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入4-溴吲哚啉(7a)(1.00g，5.05mmol)、乙腈(10mL)和二叔丁基二碳酸酯(1.23g，6.06mmol)。该反应混合物在40℃搅拌2小时。反应液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到黄色固体状化合物7b(630mg，收率41％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：298.0，300.0，实测值：298.0，300.0。
步骤3：4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)吲哚-1-羧酸叔丁酯(7c)的制备实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物4-溴吲哚-1-羧酸叔丁酯(7b)(100mg，0.33mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)，收率96％。
MS-ESI计算值[M+H]+：311.1，实测值：311.1。
步骤4：(吲哚-4-亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(7d)的制备
向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物7c(100mg，0.29mmol)和二氯甲烷(4mL)，再加入三氟乙酸(1mL)。该反应混合物在室温搅拌1小时，反应液减压浓缩，残余物用饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)稀释，用二氯甲烷(3x 30mL)萃取。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到白色固体状的化合物7d(70mg，收率100％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：211.1，实测值：211.1。
步骤5：(R)-N-((3S,4S)-8-(5-(4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)吲哚-1-基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧代-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(7f)的制备
在氮气氛下，向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物7d(70mg，0.33mmol)、(R)-N-((3S,4S)-8(5-溴吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧代-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺7e(142mg，0.33mmol)、巴豆基(2-二环己基膦-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)钯(RuPhos Pd(crotyl)Cl)(22mg，0.03mmol)、2-二环己基磷-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯(RuPhos)(31mg，0.07mmol)、叔丁醇钠(48mg，0.50mmol)和四氢呋喃(2mL)。该反应混合物在氮气氛下，80℃搅拌2小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到黄色固体状的化合物7f(80mg，收率42％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：561.3，实测值：561.0。
步骤6：((1-(5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)吲哚啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(7)的制备
向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物7f(80mg，0.14mmol)和1,4-二氧六环(3mL)，再加入4M氯化氢/1,4-二氧六环(1mL)。反应混合物在室温搅拌2小时。反应混合物减压浓缩，粗产品用高效液相制备色谱法(XBridge C18柱，流动相A：水(0.1％甲酸)，流动相B：乙腈，梯度：40％-60％，30分钟,检测波长：254nm，保留时间：5.42分钟)分离纯化，得到浅黄色固体状的标题化合物7(44.6mg，收率61％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：457.2，实测值：457.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.18(s,1H),8.09(d,J＝1.5Hz,1H),7.91(d,J＝1.5Hz,1H),7.53(d,J＝8.1Hz,1H),6.95-6.92(m,1H),6.55(d,J＝7.8Hz,1H),4.22-4.10(m,1H),4.01-3.85(m,5H),3.63(d,J＝8.7Hz,1H),3.28-3.16(m,9H),3.04-3.01(m,4H),1.71-1.55(m,4H),1.18(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例8：((2-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-3-氯吡啶-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(8)的制备
步骤1：3-氯吡啶-2,4-二醇(8b)的制备
向干燥的2L圆底烧瓶中依次加入吡啶-2，4-二醇(9a)(5.00g，45.00mmol)、冰醋酸(625mL)，再加入N-氯代丁二酰亚胺(9.01g，67.51mmol)。该反应混合物于120℃搅拌1小时。反应液减压浓缩，残余物用甲醇(2x 10mL)洗涤，干燥，得到白色固体状化合物8b(3.50g，收率53％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：146.0，148.0，实测值：146.0，148.0。
步骤2：2,4-二溴-3-氯吡啶(8c)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入化合物9b(1.00g，6.87mmol)和三溴氧磷(6.50g，22.67mmol)。该反应混合物于120℃搅拌1小时。将反应混合物缓慢倒入冰水(100mL)中，用乙酸乙酯(2x 100mL)萃取，将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到白色固体状化合物8c(1.60g，收率85％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：269.8，271.8，273.8，275.8，实测值：269.8，271.8，273.8，275.8。
步骤3：4-溴-3-氯-2-((4-甲氧基苄基)硫基)吡啶(8d)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入2,4-二溴-3-氯吡啶(8c)(1.00g，3.68mmol)、无水1,4-二氧六环(20mL)，再加入(4-甲氧基苯基)甲硫醇(625mg，4.05mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(0.95g，7.37mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)(337mg，0.37mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(427mg，0.74mmol)。该反应混合物在氮气氛下，于100℃搅拌16小时。反应液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到黄色固体状化合物8d(950mg，收率74％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：343.9，345.9，347.9，实测值：343.9，345.9，347.9。
步骤4：((3-氯-2-((4-甲氧基苄基)硫基)吡啶-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(8e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物4-溴-3-氯-2-((4-甲氧基苄基)硫基)吡啶(8d)(950mg，2.76mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)，收率85％。
MS-ESI计算值[M+H]+：357.0，359.0，实测值：357.1，359.1。
步骤5：((3-氯-2-巯基吡啶-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(8f)的制备
实验操作流程同实施例6步骤3，但以反应物((3-氯-2-((4-甲氧基苄基)硫基)吡啶-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(8e)(800mg，2.24mmol)代替((3-((4-甲氧基苄基)硫基)-2-(三氟甲基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(6c)，收率86％。
MS-ESI计算值[M+H]+：237.0，239.0，实测值：237.0，239.0。
步骤6：((3-氯-2-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)吡啶-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(8g)的制备
实验操作流程同实施例1步骤7，但以反应物((3-氯-2-巯基吡啶-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(8f)(330mg，1.39mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率78％。
MS-ESI计算值[M+H]+：349.0，351.0，353.0，实测值：349.0，351.0，353.0。
步骤7：((2-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-3-氯吡啶-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(8)的制备
实验操作流程同实施例1步骤8，但以反应物((3-氯-2-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)吡啶-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(8g)(150mg，0.39mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1h)，收率30％。
MS-ESI计算值[M+H]+：483.1，485.1，实测值：483.2，485.2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.35(d,J＝1.6Hz,1H),8.27(s,1H),8.19(d,J＝1.2Hz,1H),7.85(d,J＝5.6Hz,1H),6.93(d,J＝5.6Hz,1H),4.80-4.60(m,2H),4.15-4.07(m,1H),4.04-3.92(m,2H),3.74(d,J＝8.8Hz,1H),3.55(d,J＝8.8Hz,1H),3.40(s,6H),3.38-3.26(m,2H),3.05(d,J＝5.2Hz,1H),1.81-1.64(m,2H),1.63-1.48(m,2H),1.12(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例9：((4-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-3-氯吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(9)的制备
步骤1：((4-溴-3-氯吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(9a)的制备
实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物2,4-二溴-3-氯吡啶(8c)(1.60g，5.90mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)，收率71％。
MS-ESI计算值[M+H]+：282.9，284.9，286.9，实测值：282.6，284.6，286.6。
步骤2：((3-氯-4-((4-甲氧基苄基)硫代)吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(9b)的制备
实验操作流程同实施例8步骤1，但以反应物((4-溴-3-氯吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(9a)(540mg，1.90mmol)代替2,4-二溴-3-氯吡啶(8c)，收率70％。
MS-ESI计算值[M+H]+：357.0，359.0，实测值：357.1，359.1。
步骤3：((3-氯-4-巯基吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(9c)的制备
实验操作流程同实施例6步骤3，但以反应物((3-氯-4-((4-甲氧基苄基)硫代)吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(9b)(500mg，1.40mmol)代替((3-((4-甲氧基苄基)硫基)-2-(三氟甲基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(6c)，收率72％。
MS-ESI计算值[M+H]+：237.0，239.0，实测值：237.0，239.0。
步骤4：((3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(9d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤7，但以反应物((3-氯-4-巯基吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(9c)(200mg，0.85mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率61％。
MS-ESI计算值[M+H]+：349.0，351.0，353.0，实测值：349.0，351.0，353.0。
步骤5：((4-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-3-氯吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(9)的制备
实验操作流程同实施例1步骤8，但以反应物((3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(9d)(130mg，0.37mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1h)，收率25％。
MS-ESI计算值[M+H]+：483.1，485.1，实测值：483.2，485.2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.48(d,J＝1.2Hz,1H),8.30(d,J＝1.2Hz,1H),8.24(d,J＝4.8Hz,1H),7.79(d,J＝5.6Hz,1H),6.07(d,J＝5.6Hz,1H),4.14-4.07(m,1H),3.99-3.92(m,2H),3.87-3.78(m,2H),3.73(d,J＝8.4Hz,1H),3.54(d,J＝8.4Hz,1H),3.42-3.33(m,8H),3.07-3.01(m,1H),1.82-1.64(m,2H),1.63-1.47(m,2H),1.15-1.07(m,3H)。
实施例10：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2,6-二氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(10)的制备
步骤1：2-溴-1,3-二氯-4-硝基苯(10b)的制备
实验操作流程同实施例1步骤1，但以反应物2-溴-1,3-二氯苯(10a)(5.00g，22.14mmol)代替2-溴-1-氯3-氟苯(1a)，收率75％。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ7.74(d,J＝8.7Hz,1H),7.57(d,J＝8.7Hz,1H).
步骤2：((2,6-二氯-3-硝基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(10c)的制备实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物2-溴-1,3-二氯-4-硝基苯(10b)(4.50g，12.26mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)，收率43％。
MS-ESI计算值[M+H]+：283.0，285.5，287.0，实测值：282.9，284.9，286.9。
步骤3：((3-氨基-2,6-二氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(10d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤3，但以反应物((2,6-二氯-3-硝基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(10c)(1.70g，6.00mmol)代替((2-氯-6-氟-3-硝基苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1c)，收率78％。
MS-ESI计算值[M+H]+：253.0，255.0，257.0，实测值：253.0，255.0，257.0。
步骤4：((3-溴-2,6-二氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(10e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤4，但以反应物((3-氨基-2,6-二氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(10d)(900mg，3.56mmol)代替((3-氨基-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1d)，收率26％。
MS-ESI计算值[M+H]+：315.9，317.9，319.9，321.9，323.9，实测值：315.9，317.8，319.8，321.8，323.9。
步骤5：3-((2,4-二氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)丙酸甲酯(10f)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((3-溴-2,6-二氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(10e)(300mg，0.95mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率83％。
MS-ESI计算值[M+H]+：356.0，358.0，360.0，实测值：356.0，358.0，360.0。
步骤6：((2,6-二氯-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(10g)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((2,4-二氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)丙酸甲酯(10f)(140mg，0.39mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率79％。
MS-ESI计算值[M+H]+：270.0，272.0，274.0，实测值：270.0，272.0，274.0。
步骤7：((2,6-二氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(10h)的制备
实验操作流程同实施例1步骤7，但以反应物((2,6-二氯-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(10g)(200mg，0.74mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率74％。
MS-ESI计算值[M+H]+：381.9，383.9，385.9，387.9，389.9，实测值：382.0，383.9，386.0，388.0，390.0。
步骤8：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2,6-二氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(10)的制备
实验操作流程同实施例1步骤8，但以反应物((2,6-二氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(10h)(100mg，0.26mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1h)，收率19％。
MS-ESI计算值[M+H]+：516.1，518.1，520.1，实测值：516.1，518.1，520.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.43(d,J＝1.6Hz,1H),8.32-8.19(m,2H),7.28(d,J＝8.8Hz,1H),6.46(d,J＝8.8Hz,1H),4.16-4.08(m,1H),4.06-3.92(m,2H),3.76(d,J＝8.8Hz,1H),3.70-3.62(m,2H),3.57-3.54(m,1H),3.39-3.30(m,2H),3.24(s,6H),3.07(d,J＝5.2Hz,1H),1.79-1.48(m,4H),1.13(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例11：((4-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(11)的制备
步骤1：((4-溴噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-磺胺酮(11b)的制备
实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物3,4-二溴噻吩(11a)(5.00g，20.67mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)，收率17％。
MS-ESI计算值[M+H]+：253.9，255.9，实测值：253.9，255.9。
步骤2：3-((4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)噻吩-3-基)硫基)丙酸甲酯(11c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((4-溴噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-磺胺酮(11b)(820mg，3.22mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率51％。
MS-ESI计算值[M+H]+：294.0，实测值：294.1。
步骤3：((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)噻吩-3-基)硫基)丙酸甲酯(11c)(490mg，1.67mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率25％。
MS-ESI计算值[M+H]+：208.0，实测值：208.1。
步骤4：(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)噻吩-3-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(11e)的制备
在氮气氛下，向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物11d(75mg，0.36mmol)、(R)-N-((3S,4S)-8(5-溴吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧代-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺7e(172mg，0.40mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)(33mg，0.04mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(42mg，0.07mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(94mg，0.72mmol)和1,4-二氧六环(3mL)。该反应混合物在氮气氛下，于100℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)，得到黄色固体状的化合物11e(140mg，收率67％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：558.2，实测值：558.2。
步骤5：((4-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(11)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((4-((二甲基(氧代(-λ6-硫烷亚基)氨基)噻吩-3-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(11e)(140mg，0.25mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(5-(4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)吲哚-1-基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(7f)，收率39％。
MS-ESI计算值[M+H]+：454.1，实测值：454.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.28(s,1H),8.23(s,1H),7.99(d,J＝1.2Hz,1H),7.20(d,J＝3.3Hz,1H),6.68(d,J＝3.3Hz,1H),4.15-4.05(m,2H),3.97-3.83(m,3H),3.73(d,J＝8.7Hz,1H),3.53(d,J＝8.7Hz,1H),3.33-3.20(m,2H),3.13(s,6H),3.04(d,J＝5.1Hz,1H),1.78-1.41(m,4H),1.17-1.07(m,3H)。
实施例12：5-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-4-氯-2-甲基-3H-2λ4-苯并[c]异噻唑2-氧化物甲酸盐(12)的制备
/>
步骤1：4-溴-3-氯-2-((甲硫基)甲基)苯胺(12b)的制备
向干燥的500mL三口烧瓶中依次加入二甲基亚砜(13.62g，174.36mmol)、乙腈(32mL)和二氯甲烷(32mL)，将反应混合物降温至-78℃，再依次加入三氟乙酸酐(22.41g，116.24mmol)和事先用乙腈(32mL)溶解的4-溴-3-氯苯胺(12a)(20g，96.87mmol)。该反应混合物在-78℃搅拌5小时后，将事先用甲醇(16mL)溶解的甲醇钠(15.70g，290.60mmol)逐滴加入反应混合物中。将该反应混合物升至室温并继续搅拌12小时。将氢氧化钠水溶液(210mL，2.8M)加入反应混合物，然后用二氯甲烷(3x 1000mL)萃取，将合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将残余物溶于乙腈(300mL)，再加入三乙胺(30mL)。该反应混合物于90℃搅拌16小时，降至室温后，减压浓缩。残余物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：30％-65％，30分钟)，得到白色固体状化合物12b(13.00g，收率50％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：265.9，267.9，269.9，实测值：265.9，267.9，269.9。
步骤2：N-{4-溴-3-氯-2-[(甲硫基)甲基]苯基}-N-(叔丁氧羰基)氨基甲酸叔丁酯(12c)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入化合物12b(2.00g，7.50mmol)、二叔丁基二碳酸酯(6.55g，30.00mmol)和四氢呋喃(20mL)。反应混合物降温至-40℃，将双(三甲基硅基)氨基钠(22.5mL，22.51mmol，1M)逐滴加入。将反应混合物升温至室温并继续搅拌2小时。反应混合物用水(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(2x 100mL)萃取，将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残余物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：30％-80％，30分钟)，得到黄色固体状化合物12c(1.60g，收率45％)。
步骤3：3-({4-[二(叔丁氧羰基)氨基]-2-氯-3-[(甲硫基)甲基]苯基}硫基)丙酸甲酯(12d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物N-{4-溴-3-氯-2-[(甲硫基)甲基]苯基}-N-(叔丁氧羰基)氨基甲酸叔丁酯(12c)(100mg，0.21mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率52％。
步骤4：N-(叔丁氧羰基)-N-{3-氯-2-[(甲硫基)甲基]-4-巯基苯基}氨基甲酸叔丁基酯(12e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-({4-[二(叔丁氧羰基)氨基]-2-氯-3-[(甲硫基)甲基]苯基}硫基)丙酸甲酯(12d)(200mg，0.39mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率60％。
步骤5：N-(叔丁氧羰基)-N-{3-氯-4-[(5-氯吡嗪-2-基)硫基]-2-[(甲硫基)甲基]苯基}氨基甲酸叔丁基酯(12f)的制备
实验操作流程同实施例1步骤7，但以反应物N-(叔丁氧羰基)-N-{3-氯-2-[(甲硫基)甲基]-4-巯基苯基}氨基甲酸叔丁基酯(12e)(400mg，0.95mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率74％。
步骤6：3-氯-4-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-((甲硫基)甲基)(12g)的制备
向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物12f(300mg，0.56mmol)、二氯甲烷(5mL)和三氟乙酸(1mL)。反应混合物在室温搅拌1小时，反应液减压浓缩，残余物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：10％-50％，30分钟)得到黄色固体状的化合物12g(150mg，收率80％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：332.0，334.0，336.0，实测值：332.0，334.0，336.0。
步骤7：4-氯-5-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-甲基-3H-2λ4-苯并[c]异噻唑2-氧化物(12h)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入化合物12g(150mg，0.45mmol)和二氯甲烷(7.5mL)，将反应混合物降温至-40℃，再分批加入N-氯代丁二酰亚胺(72mg，0.54mmol)并继续搅拌1小时。将氢氧化钠水溶液(2mL，10％)加入反应混合物，然后升至室温并加入水(10mL)。将有机相分离，降温至-40℃，加入间氯过氧苯甲酸(93mg，0.54mmol，85％)，继续搅拌30分钟后将该反应混合物升至室温，反应混合物用饱和亚硫酸钠水溶液(10mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残余物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：30％-70％，30分钟)，得到黄色固体状化合物12h(40mg，收率25％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：346.0，348.0，350.0，实测值：346.0，348.0，350.0。
步骤8：5-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-4-氯-2-甲基-3H-2λ4-苯并[c]异噻唑2-氧化物甲酸盐(12)的制备
向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物12h(40mg，0.12mmol)、(3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺二盐酸盐(1i)(24mg，0.14mmol)、DIEA(75mg，0.58mmol)和二甲基亚砜(2mL)。反应混合物在50℃搅拌7天。降至室温后，反应混合物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(0.1％甲酸)，流动相B：乙腈，梯度：10％-50％，30分钟)，得到黄色固体状的标题化合物12(2.8mg，收率4％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：480.1，482.1，实测值：480.1，482.1。
1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.61-8.49(m,1H),8.12(d,J＝1.5Hz,1H),7.93(d,J＝1.5Hz,1H),7.41(d,J＝8.4Hz,1H),6.79(d,J＝8.4Hz,1H),4.68-4.56(m,3H),4.30-4.21(m,3H),4.15(d,J＝9.0Hz,1H),4.09(d,J＝9.0Hz,1H),3.54(s,3H),3.18-3.03(m,2H),1.87-1.65(m,4H),1.34-1.27(m,3H)。
实施例13：((2-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)噻唑-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(13)的制备
步骤1：((2-溴噻唑-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(13b)的制备
实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物2,4-二溴噻唑(13a)(1.00g，4.12mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)，收率69％。
MS-ESI计算值[M+H]+：254.9，256.9，实测值：254.9，256.9。
步骤2：3-((4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)噻唑-2-基)硫基)丙酸甲酯(13c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((2-溴噻唑-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(13b)(730mg，2.86mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率40％。
MS-ESI计算值[M+H]+：295.0，实测值：295.1。
步骤3：((2-巯基噻唑-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(13d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)噻唑-2-基)硫基)丙酸甲酯(13c)(200mg，0.68mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率46％。
步骤4：(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)噻唑-2-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(13e)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((2-巯基噻唑-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(13d)(110mg，0.53mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率10％。
MS-ESI计算值[M+H]+：559.2，实测值：559.1。
步骤5：((2-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)噻唑-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(13)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)噻唑-2-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧代-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(13e)(30mg，0.05mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(5-(4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)吲哚-1-基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧代-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(7f)，收率23％。
MS-ESI计算值[M+H]+：455.1，实测值：455.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.30(d,J＝1.6Hz,1H),8.22(s,1H),8.09(d,J＝1.6Hz,1H),6.77(s,1H),4.14-4.04(m,1H),3.97-3.82(m,2H),3.71(d,J＝8.8Hz,1H),3.61-3.57(m,2H),3.52(d,J＝8.8Hz,1H),3.44(s,6H),3.40-3.18(m,2H),3.01(d,J＝5.2Hz,1H),1.74-1.62(m,2H),1.59-1.43(m,2H),1.14-1.07(m,3H)。
实施例14：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮三氟乙酸盐(14)的制备
步骤1：((3-溴-1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(14b)的制备
实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物3,5-二溴-1-甲基-1H-1,2,4-三唑(14a)(1.20g，4.98mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)，收率39％。
MS-ESI计算值[M+H]+：253.0，255.0，实测值：253.1，255.1。
步骤2：3-((5-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)丙酸甲酯(14c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((3-溴-1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(14b)(200mg，0.79mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率50％。
MS-ESI计算值[M+H]+：293.1，实测值：293.0。
步骤3：((3-巯基-1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(14d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((5-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)丙酸甲酯(14c)(115mg，0.39mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率80％。
步骤4：(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((5-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)-1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(14e)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((3-巯基-1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(14d)(65mg，0.32mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率68％。
MS-ESI计算值[M+H]+：557.2，实测值：557.1。
步骤5：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-1-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮三氟乙酸盐(14)的制备
向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物14e(36mg，0.06mmol)和1,4-二氧六环(3mL)，再加入4M氯化氢/1,4-二氧六环(1mL)。反应混合物在室温搅拌2小时。反应混合物减压浓缩，粗产品用甲醇(1mL)溶解，再加入1滴三乙胺，用高效液相制备色谱法(XBridge C18柱，流动相A：水(0.1％三氟乙酸)，流动相B：乙腈，梯度：30％-60％，30分钟,检测波长：254nm，保留时间：5.42分钟)分离纯化，得到浅黄色固体状的标题化合物14(17.9mg，收率48％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：453.2，实测值：453.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.31(d,J＝1.6Hz,1H),8.18(d,J＝1.6Hz,1H),7.92-7.03(m,1H),4.24-4.17(m,2H),4.13(s,1H),4.05-3.95(m,2H),3.88(d,J＝9.2Hz,1H),3.68(d,J＝9.2Hz,1H),3.48(s,3H),3.41(s,6H),3.39-3.30(m,1H),3.13-3.03(m,2H),1.79-1.65(m,3H),1.58-1.51(m,1H),1.21(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例15：4-((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)-1,4-λ6-氧硫杂环己烷4-氧化物甲酸盐(15)的制备
/>
步骤1：4-((3-溴-2-氯苯基)亚氨基)-1,4λ6-氧硫杂环己烷4-氧化物(15b)的制备
在氮气氛下，向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入1-溴-2-氯-3-碘苯(15a)(2.00g，6.30mmol)、无水1,4-二氧六环(40mL)，再加入4-亚氨基-1,4λ6-氧硫杂环己烷4-氧化物(850mg，6.30mmol)、碳酸铯(6.18g，18.91mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)(580mg，0.63mmol)和4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(730mg，1.26mmol)。该反应混合物在氮气氛下，于100℃搅拌5小时。反应液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到白色固体状化合物15b(1.35g，收率64％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：323.9，325.9，327.9，实测值：324.0，326.0，328.0。
步骤2：3-((2-氯-3-((4-氧化-1,4λ6-氧硫杂环己烷-4-亚基)氨基)苯基)硫基)丙酸甲酯(15c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物4-((3-溴-2-氯苯基)亚氨基)-1,4λ6-氧硫杂环己烷4-氧化物(15b)(1.24g，3.82mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率96％。
MS-ESI计算值[M+H]+：364.0，366.0，实测值：364.0，366.0。
步骤3：4-((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)-1,4λ6-氧硫杂环己烷4-氧化物(15d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((2-氯-3-((4-氧化-1,4λ6-氧硫杂环己烷-4-亚基)氨基)苯基)硫基)丙酸甲酯(15c)(500mg，1.37mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率89％。
MS-ESI计算值[M+H]+：278.0，280.0，实测值：278.0，280.0。
步骤4：(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((2-氯-3-((4-氧化-1,4λ6-氧硫杂环己烷-4-亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(15e)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物4-((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)-1,4λ6-氧硫杂环己烷4-氧化物(15d)(97mg，0.35mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率98％。
MS-ESI计算值[M+H]+：628.2，630.2，实测值：628.1，630.1。
步骤5：4-((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)-1,4-λ6-氧硫杂环己烷4-氧化物甲酸盐(15)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((2-氯-3-((4-氧化-1,4λ6-氧硫杂环己烷-4-亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(15e)(214mg，0.34mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(5-(4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)吲哚-1-基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧代-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(7f)，收率64％。
MS-ESI计算值[M+H]+：524.1，526.1，实测值：524.2，526.2。
1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.52(s,1H),8.28(d,J＝1.2Hz,1H),8.21(d,J＝1.2Hz,1H),7.17(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.02-6.95(m,1H),6.52(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),4.38-4.04(m,7H),3.99(d,J＝9.0Hz,1H),3.86(d,J＝9.0Hz,1H),3.54-3.34(m,5H),3.31-3.10(m,2H),1.94-1.78(m,3H),1.78-1.61(m,1H),1.43-1.24(m,3H)。
实施例16：((5-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-4-氯苯并[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(16)的制备
步骤1：3-溴-4-氯苯并[d]异噻唑(16b)的制备
向干燥的1L圆底烧瓶中依次加入化合物16a(根据专利申请JP03255064公开的方法制备)(10.00g，58.95mmol)和乙酸乙酯(400mL)。反应混合物降至0℃，逐滴加入溴素(12.72g，79.59mmol)。该反应混合物在氮气氛下，于80℃搅拌2小时。将反应液降至室温后将倒入冰水(400mL)中，用乙酸乙酯(2x 400mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)，得到白色固体状化合物16b(12.00g，收率91％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：247.9，249.9，251.9，实测值：247.9，249.9，251.9。
步骤2：((4-氯苯并[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(16c)的制备实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物3-溴-4-氯苯并[d]异噻唑(16b)(3.00g，12.07mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)，收率76％。
MS-ESI计算值[M+H]+：261.0，263.0，实测值：261.0，263.0。
步骤3：((5-溴-4-氯苯[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(16d)和((7-溴-4-氯苯并[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6硫酮(16e)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入化合物16c(2.00g，7.67mmol)、硫酸银(2.51g，8.05mmol)和浓硫酸(40mL)。反应混合物降至0℃，加入溴素(1.84g，11.51mmol)。该反应混合物在氮气氛下，于室温搅拌16小时。将反应混合物倒入冰水(200mL)中，用乙酸乙酯(2x 200mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(200mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物用反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mM碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：40％-65％，25分钟)，得到白色固体状化合物16d(300mg，收率11％)和白色固体状化合物16e(300mg，收率11％)。
化合物16d：MS-ESI计算值[M+H]+：338.9，340.9，342.9，实测值：339.0，341.0，343.0。
化合物16e：MS-ESI计算值[M+H]+：338.9，340.9，342.9，实测值：339.0，341.0，343.0。
步骤4：3-((4-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯并[d]异噻唑-5-基)硫基)丙酸甲酯(16f)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((5-溴-4-氯苯[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(16d)(300mg，0.88mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率71％。
MS-ESI计算值[M+H]+：379.0，381.0，实测值：379.0，381.0。
步骤5：(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((4-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯并[d]异噻唑-5-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(16g)的制备
向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物16f(200mg，0.56mmol)、甲醇(5mL)和甲醇钠(61mg，1.12mmol)。室温搅拌3小时，反应液减压浓缩，粗产品直接用于下一步。在氮气氛下，向装有粗产品的圆底烧瓶中依次加入(R)-N-((3S,4S)-8(5-溴吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺7e(206mg，0.48mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)(44mg，0.05mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(28mg，0.05mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(185mg，1.43mmol)和1,4-二氧六环(4mL)。该反应混合物在氮气氛下，于100℃搅拌3小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/2)，得到黄色固体状的化合物16g(220mg，收率71％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：643.1，645.1，实测值：643.2，645.2。
步骤6：((5-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-4-氯苯并[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(16)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((4-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯并[d]异噻唑-5-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(16g)(220mg，0.34mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(5-(4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)吲哚-1-基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(7f)，收率50％。
MS-ESI计算值[M+H]+：539.1，541.1，实测值：539.1，541.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(d,J＝1.6Hz,1H),8.28-8.20(m,2H),7.86(d,J＝8.8Hz,1H),7.16(d,J＝8.8Hz,1H),4.16-4.08(m,1H),4.06-3.92(m,2H),3.76(d,J＝8.8Hz,1H),3.56(d,J＝8.8Hz,1H),3.46(s,8H),3.37-3.22(m,2H),3.08(d,J＝5.2Hz,1H),1.79-1.48(m,4H),1.16-1.10(m,3H)。
实施例17：((7-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-4-氯苯并[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(17)的制备
步骤1：3-((4-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯并[d]异噻唑-7-基)硫基)丙酸甲酯(17a)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((7-溴-4-氯苯并[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6硫酮(16e)(300mg，0.88mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率68％。
MS-ESI计算值[M+H]+：379.0，381.0，实测值：379.0，381.0。
步骤2：((4-氯-7-巯基苯并[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(17b)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((4-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯并[d]异噻唑-7-基)硫基)丙酸甲酯(17a)(220mg，0.58mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率95％。
步骤3：(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((4-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯并[d]异噻唑-7-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(17c)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((4-氯-7-巯基苯并[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(17b)(170mg，0.58mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率48％。
MS-ESI计算值[M+H]+：643.1，645.1，实测值：643.2，645.2。
步骤4：((7-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-4-氯苯并[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(17)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((4-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯并[d]异噻唑-7-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(17c)(160mg，0.25mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(5-(4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)吲哚-1-基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(7f)，收率30％。
MS-ESI计算值[M+H]+：539.1，541.1，实测值：539.1，541.1。
1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),8.14(d,J＝1.2Hz,2H),7.56-7.49(m,1H),7.38(dd,J＝7.8,1.8Hz,1H),4.33-4.06(m,3H),3.94(d,J＝9.0Hz,1H),3.81(d,J＝9.0Hz,1H),3.47(s,6H),3.29(d,J＝4.5Hz,1H),3.25-3.07(m,2H),1.82-1.72(m,3H),1.69-1.58(m,1H),1.29(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例18：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-7-氯苯并[d]噻唑-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(18)的制备
步骤1：3-((2-氨基-7-氯苯并[d]噻唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(18b)的制备实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物6-溴-7-氯苯并[d]噻唑-2-胺(18a)(根据专利申请WO2016042172公开的方法制备)(1.00g，3.72mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率66％。
MS-ESI计算值[M+H]+：303.0，305.0，实测值：303.1，305.1。
步骤2：3-((2-溴-7-氯苯并[d]噻唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(18c)的制备
向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物18b(620mg，2.01mmol)和乙腈(8mL)，再依次加入亚硝酸叔丁酯(261mg，2.41mmol)和溴化亚铜(307mg，1.31mmol)。反应混合物在50℃搅拌3小时。反应混合物减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)，得到白色固体状化合物18c(390mg，收率51％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：365.9，367.9，369.9，实测值：365.9，367.9，369.9。
步骤3：3-((7-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯并噻唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(18d)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入化合物18c(200mg，0.54mmol)、乙二醇二甲醚(50mL)，再加入二甲基亚磺酰亚胺(79mg，0.80mmol)、二[2-(2,4-二氟苯基)-5-三氟甲基吡啶][2-2'-联(4-叔丁基吡啶)]铱二(六氟磷酸)盐(Ir[DF(CF3)PPY]2(DTBPY)PF6)(13mg，0.01mmol)、1,1,3,3-四甲基胍(97mg，0.80mmol)、氯化镍二甲氧基乙烷(NiCl2(DME))(2mg，0.01mmol)和4,4′-二叔丁基-2,2′-联吡啶(3mg,0.01mmol)。该反应混合物在34W LED蓝光照射下，于室温搅拌16小时。反应液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/3)，得到浅黄色固体状化合物18d(50mg，收率24％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：379.0，381.0，实测值：379.1，381.1。
步骤4：((7-氯-6-巯基苯并[d]噻唑-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(18e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((7-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯并噻唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(18d)(75mg，0.19mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率98％。
MS-ESI计算值[M+H]+：293.0，295.0，实测值：292.9，294.9。
步骤5：(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((7-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯并噻唑-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(18f)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((7-氯-6-巯基苯并[d]噻唑-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(18e)(57mg，0.19mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率39％。
MS-ESI计算值[M+H]+：643.1，645.1，实测值：643.3，645.3。
步骤6：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-7-氯苯并[d]噻唑-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(18)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((7-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯并噻唑-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(18f)(40mg，0.06mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(5-(4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)吲哚-1-基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(7f)，收率46％。
MS-ESI计算值[M+H]+：539.1，541.1，实测值：539.1，541.1。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.50(s,1H),8.16(d,J＝1.5Hz,1H),8.05(d,J＝1.5Hz,1H),7.45(d,J＝8.4Hz,1H),7.31(d,J＝8.4Hz,1H),4.30-4.23(m,1H),4.22-4.08(m,2H),3.94(d,J＝9.0Hz,1H),3.81(d,J＝9.0Hz,1H),3.51(s,6H),3.28-3.24(m,1H),3.20-3.11(m,2H),1.85-1.75(m,3H),1.68-1.62(m,1H),1.28(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例19：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-7-氯苯[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(19)的制备
步骤1：3-((2-氯-4-氰基-3-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(19b)的制备
向干燥的500mL圆底烧瓶中依次加入3-氯-2,4-二氟苯甲腈(19a)(6.50g，37.45mmol)、碳酸钾(10.43g，74.91mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(160mL)，在逐滴加入加入巯基丙酸甲酯(4.50g，37.45mmol)。该反应混合物于室温搅拌16小时，将反应混合物倒入水(300mL)中，用乙酸乙酯(2x 300mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(300mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物用反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mM碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：55％-85％，25分钟)，得到白色固体状化合物19b(3.2g，收率31％)。
步骤2：3-((2-氯-4-氰基-3-巯基苯基)硫基)丙酸甲酯(19c)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入化合物19b(1.10g，4.02mmol)和二甲基亚砜(22mL)。该反应混合物于70℃搅拌20分钟，将九水硫化钠(1.45g，6.03mmol)加入并继续搅拌30分钟。将反应液降至室温，加冰醋酸将反应液pH调至6，向反应混合物中加入水(100mL)，用乙酸乙酯(2x 100mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(300mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色固体状化合物19c(1.16g)，粗产品直接用于下一步。
步骤3：3-((3-溴-7-氯苯并[d]异噻唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(19d)的制备
实验操作流程同实施例16步骤1，但以反应物3-((2-氯-4-氰基-3-巯基苯基)硫基)丙酸甲酯(19c)(1.16g，4.03mmol)代替2-氯-6-巯基苯甲腈(16a)，收率19％。
MS-ESI计算值[M+H]+：365.9，367.9，369.9，实测值：366.0，368.0，370.0。
步骤4：3-((7-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯并[d]异噻唑-6-基)硫基)丙酸甲基酯(19e)的制备
向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物19d(50mg，0.14mmol)、无水1,4-二氧六环(3mL)，再加入二甲基亚磺酰亚胺(13mg，0.14mmol)、碳酸铯(89mg，0.27mmol)、(SP-4-1)-[1,3-双[2,6-双(1-乙基丙基)苯基]-4,5-二氯-1,3-二氢-2H-咪唑-2-亚基]二氯(2-甲基吡啶)钯(11mg，0.01mmol)。该反应混合物在氮气氛下，于80℃搅拌16小时。反应液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)，得到白色固体状化合物19e(45mg，收率87％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：379.0，381.0，实测值：379.0，381.0。
步骤5：((7-氯-6-巯基苯并[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(19f)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((7-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯并[d]异噻唑-6-基)硫基)丙酸甲基酯(19e)(45mg，0.12mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率86％。
MS-ESI计算值[M+H]+：293.0，295.0，实测值：293.1，295.2。
步骤6：(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((7-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯并[d]异噻唑-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(19g)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((7-氯-6-巯基苯并[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(19f)(35mg，0.12mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率39％。
MS-ESI计算值[M+H]+：643.1，645.1，实测值：643.3，645.3。
步骤7：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-7-氯苯[d]异噻唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(19)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((7-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯并[d]异噻唑-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(19g)(30mg，0.04mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(5-(4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)吲哚-1-基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(7f)，收率18％。
MS-ESI计算值[M+H]+：539.1，541.1，实测值：539.2，541.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.46(d,J＝1.5Hz,1H),8.32(d,J＝1.2Hz,1H),8.23(s,1H),7.69(d,J＝8.4Hz,1H),7.01(d,J＝8.4Hz,1H),4.18-4.10(m,1H),4.05-3.92(m,2H),3.78-3.74(m,1H),3.58-3.54(m,1H),3.49(s,6H),3.44-3.26(m,4H),3.07(d,J＝5.1Hz,1H),1.84-1.49(m,4H),1.13(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例20：1-((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)六氢-1λ6-硫代吡喃-1-氧化物甲酸盐(20)的制备
步骤1：1-((3-溴-2-氯苯基)亚氨基)六氢-1λ6-硫代吡喃1-氧化物(20a)的制备
实验操作流程同实施例15步骤1，但以反应物1-亚氨基六氢-1λ6-硫吡喃1-氧化物(260mg，0.81mmol)代替4-亚氨基-1,4λ6-氧硫杂环4-氧化物，收率85％。
MS-ESI计算值[M+H]+：322.0，324.0，326.0，实测值：322.1，324.1，326.1。
步骤2：3-((2-氯-3-((1-氧化四氢-2H-1λ6-硫代吡喃-1-亚基)氨基)苯基)硫基)丙酸甲酯(20b)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物1-((3-溴-2-氯苯基)亚氨基)六氢-1λ6-硫代吡喃1-氧化物(20a)(260mg，0.81mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率75％。
MS-ESI计算值[M+H]+：362.1，364.1，实测值：362.1，364.1。
步骤3：1-((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)六氢-1λ6-硫代吡喃1-氧化物(20c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((2-氯-3-((1-氧化四氢-2H-1λ6-硫代吡喃-1-亚基)氨基)苯基)硫基)丙酸甲酯(20b)(140mg，0.39mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率96％。
步骤4：(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((2-氯-3-((1-氧化四氢-2H-1λ6-硫代吡喃-1-亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(20d)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物1-((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)六氢-1λ6-硫代吡喃1-氧化物(20c)(103mg，0.39mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率58％。
MS-ESI计算值[M+H]+：626.2，628.2，实测值：626.2，628.2。
步骤5：1-((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)六氢-1λ6-硫代吡喃-1-氧化物甲酸盐(20)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((2-氯-3-((1-氧化四氢-2H-1λ6-硫代吡喃-1-亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(20d)(140mg，0.22mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(5-(4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)吲哚-1-基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(7f)，收率31％。
MS-ESI计算值[M+H]+：522.2，524.2，实测值：522.2，524.2。
1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.54(s,1H),8.18(s,1H),8.09(s,1H),7.08-7.02(m,1H),6.90-6.83(m,1H),6.38(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),4.25-4.05(m,3H),3.88(d,J＝9.0Hz,1H),3.75(d,J＝9.0Hz,1H),3.39-3.28(m,2H),3.25-2.22(m,1H),3.18-3.04(m,4H),2.05-1.84(m,4H),1.80-1.44(m,6H),1.18(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例21：((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(21)的制备
步骤1：((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(21b)的制备
在氮气氛下，向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物1g(80mg，0.32mmol)、2-氨基-3-溴-6-氯吡嗪(21a)(98mg，0.47mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)(29mg，0.03mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(36mg，0.06mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(203mg，1.58mmol)和1,4-二氧六环(2mL)。该反应混合物在氮气氛下，100℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温。减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到黄色固体状的化合物21b(70mg，收率58％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：381.0，383.0，385.0，实测值：381.1，383.1，385.1。
步骤2：((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(21)的制备
实验操作流程同实施例2步骤5，但以反应物((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(21b)(150mg，0.39mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)，收率30％。
MS-ESI计算值[M+H]+：515.1，517.1，实测值：515.2，517.2。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.50(s,1H),7.54(s,1H),6.97-6.90(m,1H),6.42-6.37(m,1H),4.32-4.12(m,3H),3.96(d,J＝9.2Hz,1H),3.83(d,J＝9.2Hz,1H),3.35(d,J＝4.4Hz,1H),3.25(s,6H),3.22-3.06(m,2H),1.85-1.73(m,3H),1.71-1.62(m,1H),1.30(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例22：((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(22)的制备
步骤1：((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(22a)的制备
实验操作流程同实施例21步骤1，但以反应物((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2d)(300mg，1.27mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率99％。
MS-ESI计算值[M+H]+：363.0，365.0，367.0，实测值：363.0，365.0，367.0。
步骤2：((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(22)的制备
实验操作流程同实施例2步骤5，但以反应物((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(22a)(50mg，0.14mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)，收率24％。
MS-ESI计算值[M+H]+：497.2，499.2，实测值：497.0，499.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.62(s,1H),7.00-6.94(m,2H),6.14(dd,J＝7.2,2.0Hz,1H),6.03(s,2H),4.10-4.04(m,1H),3.88-3.79(m,2H),3.68(d,J＝8.4Hz,1H),3.49(d,J＝8.4Hz,1H),3.38-3.35(m,2H),3.28-3.18(m,8H),2.91(d,J＝5.2Hz,1H),1.76-1.70(m,1H),1.66-1.60(m,1H),1.55-1.43(m,2H),1.09(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例23：1-((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)四氢-1H-1λ6-噻吩-1-氧化物(23)的制备
步骤1：1-((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)四氢-1H-1λ6-噻吩1-氧化物(23a)的制备
实验操作流程同实施例21步骤1，但以反应物1-((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)四氢-1H-1λ6-噻吩1-氧化物(3c)(150mg，0.29mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率89％。
MS-ESI计算值[M+H]+：389.0，391.0，393.0，实测值：389.0，391.0，393.0。
步骤2：1-((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)四氢-1H-1λ6-噻吩-1-氧化物(23)的制备
实验操作流程同实施例2步骤5，但以反应物1-((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)四氢-1H-1λ6-噻吩1-氧化物(23a)(100mg，0.26mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)，收率17％。
MS-ESI计算值[M+H]+：523.2，525.2，实测值：523.1，525.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.62(s,1H),7.01-6.96(m,1H),6.89(d,J＝7.8Hz,1H),6.15(d,J＝8.0Hz,1H),6.03(s,2H),4.11-4.04(m,1H),3.88-3.80(m,2H),3.68(d,J＝8.4Hz,1H),3.50(d,J＝8.4Hz,1H),3.41-3.36(m,3H),3.30-3.24(m,4H),2.92(d,J＝5.2Hz,1H),2.27-2.11(m,5H),1.76-7.70(m,1H),1.66-1.60(m,1H),1.55-1.44(m,2H),1.09(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例24：((3-((6-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(24)的制备
步骤1：((3-((6-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(24a)的制备
在氮气氛下，向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物2d(1.03g，4.37mmol)、6-溴-3-氯吡嗪-2-胺(911mg，4.37mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)(400mg，0.44mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(506mg，0.87mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(1.13g，8.74mmol)和1,4-二氧六环(20mL)。该反应混合物在氮气氛下，85℃搅拌1小时。反应混合物冷却至室温。减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/3)，得到黄色固体状的化合物24a(570mg，收率35％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：363.0，365.0，367.0，实测值：363.0，365.0，367.0。
步骤2：((3-((6-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(24)的制备
实验操作流程同实施例1步骤8，但以反应物((3-((6-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(24a)(570mg，1.57mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1h)，收率38％。
MS-ESI计算值[M+H]+：497.1，499.1，实测值：497.2，499.2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.19(s,1H),7.48(s,1H),7.06(d,J＝4.8Hz,2H),6.63-6.58(m,1H),6.27(s,2H),4.22-4.14(m,1H),3.79(d,J＝8.8Hz,1H),3.63(d,J＝8.8Hz,1H),3.39-3.32(m,3H),3.27(s,8H),2.87-2.76(m,2H),1.96-1.85(m,2H),1.72-1.59(m,2H),1.21(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例25：((3-((4-氨基-6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)哒嗪-3-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(25)的制备
步骤1：((3-((4-氨基-6-氯哒嗪-3-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(25a)的制备
在氮气氛下，向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物2d(100mg，0.42mmol)、3,6-二氯哒嗪-4-胺(70mg，0.42mmol)、氯化烯丙基钯(II)二聚物(16mg，0.04mmol)、1,1'-双(二苯基膦)二茂铁(47mg，0.08mmol)、叔丁醇钠(82mg，0.85mmol)和甲苯(3mL)。该反应混合物在氮气氛下，120℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温。减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/3)，得到黄色固体状的化合物25a(140mg，收率90％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：363.0，365.0，367.0，实测值：362.7，365.0，367.0。
步骤2：((3-((4-氨基-6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)哒嗪-3-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(25)的制备
实验操作流程同实施例1步骤8，但以反应物((3-((4-氨基-6-氯哒嗪-3-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(25a)(80mg，0.22mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1h)，收率30％。
MS-ESI计算值[M+H]+：497.1，499.1，实测值：497.2，499.2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),6.98(d,J＝4.8Hz,2H),6.26(s,1H),6.13-6.03(m,3H),4.20-4.11(m,1H),4.00(d,J＝13.6Hz,1H),3.90(d,J＝13.6Hz,1H),3.88-3.86(m,2H),3.81(d,J＝8.8Hz,1H),3.61(d,J＝8.8Hz,1H),3.26(s,6H),3.22-3.12(m,3H),1.78-1.68(m,2H),1.66-1.49(m,2H),1.17(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例26：((4-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-3-氯吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(26)的制备
步骤1：((4-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-3-氯吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(26a)的制备
实验操作流程同实施例21步骤1，但以反应物((3-氯-4-巯基吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(9c)(300mg，1.27mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率71％。
MS-ESI计算值[M+H]+：364.0，366.0，368.0，实测值：364.0，366.0，368.0。
步骤2：((4-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-3-氯吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(26)的制备
实验操作流程同实施例1步骤8，但以反应物((4-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫代)-3-氯吡啶-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(26a)(100mg，0.28mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1h)，收率46％。
MS-ESI计算值[M+H]+：498.1，500.1，实测值：498.2，500.2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),7.77(d,J＝5.6Hz,1H),7.65(s,1H),6.14(s,2H),5.97(d,J＝5.6Hz,1H),4.13-4.09(m,1H),3.96-3.89(m,4H),3.73(d,J＝8.8Hz,1H),3.53(d,J＝8.8Hz,1H),3.40(s,6H),3.35-3.20(m,2H),3.02(d,J＝5.2Hz,1H),1.79-1.61(m,2H),1.60-1.44(m,2H),1.11(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例27：((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2,6-二氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(27)的制备
步骤1：((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2,6-二氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(27a)的制备
实验操作流程同实施例21步骤1，但以反应物((2,6-二氯-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(10g)(300mg，1.11mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率79％。
MS-ESI计算值[M+H]+：396.9，398.9，400.9，402.9，404.9，实测值：396.9，398.9，400.9，402.9，404.9。
步骤2：((3-((3-氨基-5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-2,6-二氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(27)的制备
实验操作流程同实施例1步骤8，但以反应物((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2,6-二氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(27a)(100mg，0.25mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1h)，收率26％。
MS-ESI计算值[M+H]+：531.1，533.1，535.1，实测值：531.2，533.1，535.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),7.63(s,1H),7.26(d,J＝8.8Hz,1H),6.23(d,J＝8.8Hz,1H),6.11(s,2H),4.13-4.05(m,1H),3.92-3.85(m,3H),3.71(d,J＝8.4Hz,1H),3.52(d,J＝8.5Hz,1H),3.41-3.28(m,2H),3.23(s,7H),2.99(d,J＝5.2Hz,1H),1.77-1.59(m,2H),1.58-1.42(m,2H),1.10(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例28：(S)–((3-((3-氨基-5-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(28)的制备
/>
步骤1：(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(28b)的制备
向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物22a(50mg，0.14mmol)、无水N-甲基吡咯烷酮(1mL)、碳酸钾(95mg，0.69mmol)和(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(28a)(根据专利申请WO2018172984中公开的方法制备)(63mg，0.21mmol)，在100℃搅拌16小时。反应液减压浓缩，残余物通过反相液相制备色谱法(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：5％-59％，40分钟)分离纯化，得到白色固体状的化合物28b(48mg，收率55％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：633.2，635.2，实测值：633.2，635.2。
步骤2：(S)-((3-((3-氨基-5-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(28)的制备
向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物28b(67mg，0.11mmol)、无水二氯甲烷(1mL)和盐酸/1,4-二氧六环(1mL，4M)，室温搅拌1小时。反应液减压浓缩，残余物通过反相液相制备色谱法(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：5％-59％，35分钟)分离纯化，得到黄色固体状的化合物28(20mg，收率36％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：529.2，531.2，实测值：529.1，531.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.64(s,1H),7.33-7.31(m,1H),7.21-7.14(m,3H),7.01-6.94(m,2H),6.16(dd,J＝7.6,2.0Hz,1H),6.04(s,2H),4.23-4.17(m,2H),3.85(s,1H),3.27(s,6H),3.18-3.06(m,5H),2.64(d,J＝15.6Hz,1H),1.79-1.76(m,1H),1.69-1.62(m,1H),1.51(d,J＝13.2Hz,1H),1.11(d,J＝13.2Hz,1H)。
实施例29：((3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(29)的制备
步骤1：(1-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯三氟乙酸盐(29b)的制备
实验操作流程同实施例21步骤1，但以反应物((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2d)(60mg，0.25mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)和以反应物(1-(6-氨基-5-溴吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(29a)(根据专利申请WO2015107494中公开的方法制备)(98mg，0.25mmol)代替2-氨基-3-溴-6-氯吡嗪(21a)，收率79％。
MS-ESI计算值[M+H]+：541.2，543.2，实测值：541.6，543.6。
步骤2：((3-((3-氨基-5-(4-氨基-4-甲基哌啶-1-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮三氟乙酸盐(29)的制备
实验操作流程同实施例14步骤5，但以反应物(1-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯三氟乙酸盐(29b)(110mg，0.20mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((5-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)-1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(14e)，收率10％。
MS-ESI计算值[M+H]+：441.1，443.1，实测值：441.0，443.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.02(s,2H),7.66(s,1H),7.03-6.93(m,2H),6.15(dd,J＝6.4,2.8Hz,1H),4.09-4.00(m,2H),3.81-3.74(m,2H),3.34-3.24(m,2H),3.26(s,6H),1.76-1.68(m,4H),1.39(s,3H)。
实施例30：(S)-((3-((5-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(30)的制备
步骤1：(R)-N-((S)-1'-(5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(30a)的制备
实验操作流程同实施例28步骤1，但以反应物((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)(115mg，0.33mmol)代替((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(22a)，收率34％。
MS-ESI计算值[M+H]+：618.2，620.2，实测值：618.3，620.2。
步骤2：(S)-((3-((5-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(30)的制备
实验操作流程同实施例28步骤2，但以反应物(R)-N-((S)-1'-(5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(30a)(70mg，0.11mmol)代替(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(28b)，收率52％。
MS-ESI计算值[M+H]+：514.2，516.2，实测值：514.1，516.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.44(s,1H),8.22(s,1H),7.32(d,J＝6.4Hz,1H),7.18(d,J＝7.2Hz,3H),7.02(d,J＝4.4Hz,2H),6.36-3.28(m,1H),4.27(s,2H),3.86(s,1H),3.28(s,6H),3.26-3.02(m,5H),2.65(d,J＝15.6Hz,1H),1.82-1.72(m,1H),1.70-1.58(m,1H),1.55(d,J＝13.2Hz,1H),1.14(d,J＝13.6Hz,1H)。
实施例31：(S)-1-((3-((3-氨基-5-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基-2-氯苯基)亚氨基)四氢-1H-λ6-噻吩1-氧化物(31)的制备
步骤1：(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((1-氧化四氢-1λ6-噻吩-1-亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(31a)的制备
实验操作流程同实施例28步骤1，但以反应物1-((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)四氢-1H-1λ6-噻吩1-氧化物(23a)(75mg，0.19mmol)代替((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(22a)，收率51％。
MS-ESI计算值[M+H]+：659.2，661.2，实测值：659.2，661.2。
步骤2：(S)-1-((3-((3-氨基-5-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基-2-氯苯基)亚氨基)四氢-1H-λ6-噻吩1-氧化物(31)的制备
实验操作流程同实施例28步骤2，但以反应物(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((1-氧化四氢-1λ6-噻吩-1-亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(31a)(65mg，0.10mmol)代替(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(28b)，收率43％。
MS-ESI计算值[M+H]+：555.2，557.2，实测值：555.1，557.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.64(s,1H),7.32(s,1H),7.18(d,J＝8.0Hz,3H),7.01(s,1H),6.89(d,J＝8.0Hz,1H),6.17(d,J＝7.6Hz,1H),6.04(s,2H),4.21(s,2H),3.85(s,1H),3.50-3.33(m,6H),3.15-2.98(m,3H),2.68-2.52(m,1H),2.22-2.10(m,4H),1.78(s,1H),1.66(s,1H),1.53(s,1H),1.11(d,J＝13.2Hz,1H)。
实施例32：(S)-((3-((3-氨基-5-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二乙基-λ6-硫酮(32)的制备
步骤1：((3-溴-2-氯苯基)亚氨基)二乙基-λ6-硫酮(32a)的制备
实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物1,3-二溴-2-氯苯(2a)(500mg，1.85mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)和以反应物二乙基亚磺酰亚胺(224mg，1.85mmol)代替二甲基亚磺酰亚胺，收率87％。
MS-ESI计算值[M+H]+：310.0，312.0，314.0，实测值：310.0，312.0，314.0。
步骤2：3-((2-氯-3-((二乙基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)丙酸甲酯(32b)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((3-溴-2-氯苯基)亚氨基)二乙基-λ6-硫酮(32a)(505mg，1.63mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率58％。
MS-ESI计算值[M+H]+：350.1，352.1，实测值：350.0，352.0。
步骤3：((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)二乙基-λ6-硫酮(32c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((2-氯-3-((二乙基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)丙酸甲酯(32b)(330mg，0.94mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率56％。
MS-ESI计算值[M+H]+：264.0，266.0，实测值：264.1，266.1。
步骤4：((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二乙基-λ6-硫酮(32d)的制备
实验操作流程同实施例21步骤1，但以反应物((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)二乙基-λ6-硫酮(32c)(100mg，0.38mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率67％。
MS-ESI计算值[M+H]+：391.0，393.0，395.0，实测值：391.0，393.0，395.0。
步骤5：(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二乙基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(32e)的制备
实验操作流程同实施例28步骤1，但以反应物((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二乙基-λ6-硫酮(32d)(100mg，0.26mmol)代替((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(22a)，收率41％。
MS-ESI计算值[M+H]+：661.2，663.2，实测值：661.1，663.1。
步骤6：(S)-((3-((3-氨基-5-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二乙基-λ6-硫酮(32)的制备
实验操作流程同实施例28步骤2，但以反应物(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二乙基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(32e)(70mg，0.11mmol)代替(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(28b)，收率52％。
MS-ESI计算值[M+H]+：557.2，559.2，实测值：557.1，559.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.64(s,1H),7.32(d,J＝6.4Hz,1H),7.22-7.14(m,3H),6.97(s,2H),6.14(dd,J＝6.4,2.8Hz,1H),6.05(s,2H),4.21(s,2H),3.87(s,1H),3.37-3.29(m,6H),3.17-3.04(m,3H),2.68-2.52(m,1H),1.83-1.72(m,1H),1.64(d,J＝13.2Hz,1H),1.51(d,J＝13.2Hz,1H),1.30-1.19(m,6H),1.12(d,J＝13.2Hz,1H)。
实施例33：(S)-((3-((6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(33)的制备
步骤1：3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(33b)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(33a)(200mg，1.29mmol)、乙酸钾(152mg，1.55mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)，再加入N-溴代丁二酰亚胺(276mg，1.55mmol)。该反应混合物在室温搅拌1小时。将反应混合物倒入水(30mL)中，用乙酸乙酯(3x 30mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到黄色油状化合物33b(200mg，收率66％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：232.9，234.9，236.9，实测值：232.9，234.9，236.9。
步骤2：(R)-N-((S)-1'-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(33c)的制备
实验操作流程同实施例28步骤1，但以反应物3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(33b)(200mg，0.86mmol)代替((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(22a)，收率34％。
MS-ESI计算值[M+H]+：503.1，505.1，实测值：503.0，505.0。
步骤3：(R)-N-((S)-1'-(3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(33d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤7，但以反应物((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2d)(100mg，0.42mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)和以反应物(R)-N-((S)-1'-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(33c)(200mg，0.40mmol)代替2-溴-5-氯吡嗪，收率42％。
MS-ESI计算值[M+H]+：658.2，660.2，实测值：658.0，660.0。
步骤4：(S)-((3-((6-(1-氨基-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(33)的制备
实验操作流程同实施例28步骤2，但以反应物(R)-N-((S)-1'-(3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(33d)(200mg，0.30mmol)代替(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(28b)，收率18％。
MS-ESI计算值[M+H]+：554.1，556.1，实测值：554.1，556.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6,a drop of D2O)δ8.37(s,1H),7.35-7.28(m,1H),7.21-7.11(m,3H),6.95-6.81(m,2H),6.17(d,J＝7.6Hz,1H),4.31-4.22(m,2H),3.23(s,9H),3.07(d,J＝15.6Hz,1H),2.65(d,J＝15.6Hz,1H),1.82-1.71(m,1H),1.68-1.55(m,1H),1.52(d,J＝13.2Hz,1H),1.19(d,J＝13.2Hz,1H)。
实施例34：((3-((2-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡啶并[2,3-b]吡嗪-6-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(34)的制备
步骤1：6-溴吡啶并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮(34a)的制备
向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入6-溴吡啶-2,3-二胺(1.00g，5.32mmol)和1,4-二氧六环(10mL)，在室温逐滴加入乙醛酸乙酯(1.09g，10.63mmol)。反应混合液先在室温搅拌1小时，然后升温至100℃搅拌1小时。将反应混合液降至室温，加入乙醚(20mL)，过滤生成的固体，用乙醚(2x 5mL)洗涤。将滤饼置于真空干燥箱中烘干，得到黄色固体状化合物34a(1.00g，收率68％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：226.0，228.0，实测值：225.9，227.9。
步骤2：6-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡啶并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮(34b)的制备
实验操作流程同实施例1步骤7，但以反应物((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2d)(521mg，2.21mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)和以反应物6-溴吡啶并[2,3-b]吡嗪-2(1H)-酮(34a)(500mg，2.21mmol)代替2-溴-5-氯吡嗪，收率72％。
MS-ESI计算值[M+H]+：381.0，383.0，实测值：381.0，383.0。
步骤3：(R)-N-((3S,4S)-8-(6-((2-氯-3-((甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡啶并[2,3-b]吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙-2-亚磺酰胺(34d)的制备
向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物34b(150mg，0.39mmol)、(R)-2-甲基-N-((3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-丙-2-亚磺酰胺(7h)(根据专利申请WO2019158019公开的方法制备)(109mg，0.39mmol)、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基六氟磷酸盐(PyBOP)(409mg，0.79mmol)、1.8-二氮杂环[5.4.0]十一烯(DBU)(300mg，1.97mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(3mL)。反应混合物在室温搅拌2小时，然后通过反相液相制备色谱法(C18柱，流动相A：水(0.05％甲酸)，流动相B：乙腈，梯度：40％-60％，20分钟)分离纯化，得到绿色固体状的化合物34d(205mg，收率79％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：637.2，639.2，实测值：637.2，639.2。
步骤4：((3-((2-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡啶并[2,3-b]吡嗪-6-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(34)的制备
实验操作流程同实施例28步骤2，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(6-((2-氯-3-((甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡啶并[2,3-b]吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙-2-亚磺酰胺(34d)(180mg，0.28mmol)代替(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(28b)，收率49％。
MS-ESI计算值[M+H]+：533.1，535.1，实测值：533.2，535.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.93(s,1H),8.25(s,1H),7.90(d,J＝8.7Hz,1H),7.33(dd,J＝6.6,3.0Hz,1H),7.26-7.17(m,3H),4.16-4.12(m,3H),3.77-3.74(m,2H),3.55(d,J＝8.7Hz,2H),3.51-3.40(m,2H),3.31(s,6H),3.04(d,J＝5.1Hz,1H),1.82-1.49(m,4H),1.16-1.09(m,3H)。
实施例35：(S)-((3-((6-(4-氨基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(35)的制备
步骤1：(3S,4S)-8-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(35a)的制备
实验操作流程同实施例2步骤5，但以反应物3-溴-6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(33b)(200mg，0.86mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)，收率76％。
MS-ESI计算值[M+H]+：367.1，369.1，实测值：367.0，369.0。
步骤2：(S)-((3-((6-(4-氨基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(35)的制备
在氮气氛下，向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物35a(200mg，0.55mmol)、化合物2d(128mg，0.55mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(Pd2(dba)3)(50mg，0.06mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(63mg，0.11mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(211mg，1.64mmol)和1,4-二氧六环(5mL)。该反应混合物在氮气氛下，100℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法(二氯甲烷/甲醇＝10/1)。减压浓缩后，残余物通过反相液相制备色谱法(C18柱，流动相A：水(0.05％甲酸)，流动相B：乙腈，梯度：10％-50％，20分钟)分离纯化，减压浓缩后，得到黄色固体状的标题化合物35(47.1mg，收率15％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：522.1，524.1，实测值：522.2，524.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6,a drop of D2O)δ8.32(d,J＝5.1Hz,1H),6.98-6.83(m,2H),6.16(d,J＝7.5Hz,1H),4.06-3.86(m,2H),3.73-3.29(m,5H),3.21(s,6H),2.87(d,J＝4.8Hz,1H),1.83-1.41(m,4H),1.04(d,J＝8.4Hz,3H)。
实施例36：((3-((2-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)喹喔啉-6-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(36)的制备
步骤1：(3S,4S)-8-(6-溴喹啉-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(36b)的制备
实验操作流程同实施例2步骤5，但以反应物6-溴-2-氯喹啉(36a)(200mg，0.82mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)，收率70％。
MS-ESI计算值[M+H]+：377.1，379.1，实测值：377.0，379.0。
步骤2：((3-((2-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)喹啉-6-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(36)的制备
实验操作流程同实施例35步骤2，但以反应物(3S,4S)-8-(6-溴喹啉-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(36b)代替(3S,4S)-8-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(35a)，收率19％。
MS-ESI计算值[M+H]+：532.2，534.2，实测值：532.2，534.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.95(s,1H),8.30(s,1H),7.86(d,J＝2.1Hz,1H),7.75(d,J＝8.7Hz,1H),7.59(dd,J＝8.7,2.1Hz,1H),7.12-6.97(m,2H),6.42(dd,J＝7.2,2.1Hz,1H),4.48-4.38(m,2H),4.29-4.21(m,3H),3.96(d,J＝9.0Hz,1H),3.68(d,J＝9.0Hz,1H),3.40-3.31(m,3H),3.30-3.28(s,6H),1.98-1.60(m,4H),1.25(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例37：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(37)的制备
步骤1：((2-氯-3-((5-氯咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(37b)的制备
实验操作流程同实施例35步骤2，但以反应物8-溴-5-氯咪唑并[1,2-a]吡嗪(37a)(根据专利申请WO2016185342中公开的方法制备)(200mg，0.86mmol)代替(3S,4S)-8-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(35a)，收率86％。
MS-ESI计算值[M+H]+：387.0，389.0，391.0，实测值：387.1，389.1，391.1。
步骤2：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(37)的制备
实验操作流程同实施例1步骤8，但以反应物((2-氯-3-((5-氯咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(37b)(200mg，0.52mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1h)，收率22％。
MS-ESI计算值[M+H]+：521.1，523.1，实测值：521.2，523.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.26(s,1H),7.91(d,J＝1.2Hz,1H),7.78(d,J＝1.2Hz,1H),7.36-7.24(m,2H),7.24-7.13(m,2H),4.18-4.04(m,1H),3.71(d,J＝8.4Hz,1H),3.61-3.51(m,3H),3.30(s,6H),3.26-3.16(m,2H),3.03(d,J＝5.1Hz,1H),2.94-2.88(m,2H),1.97-1.81(m,2H),1.69-1.62(m,2H),1.12(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例38：((3-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)苯并[d]异噁唑-7-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(38)的制备
步骤1：(3S,4S)-8-(7-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(38b)的制备
实验操作流程同实施例2步骤5，但以反应物7-溴-3-氯苯并[d]异噁唑(38a)(200mg，0.86mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)，收率30％。
MS-ESI计算值[M+H]+：366.1，368.1，实测值：366.1，368.1。
步骤2：((3-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)苯并[d]异噁唑-7-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(38)的制备
实验操作流程同实施例35步骤2，但以反应物(3S,4S)-8-(7-溴苯并[d]异噁唑-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(38b)(75mg，0.21mmol)代替(3S,4S)-8-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(35a)，收率35％。
MS-ESI计算值[M+H]+：521.1，523.1，实测值：521.2，523.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.24(s,1H),8.11(dd,J＝8.1,1.2Hz,1H),7.64(dd,J＝7.5,0.9Hz,1H),7.40-7.36(m,1H),7.07(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),7.02-6.95(m,1H),6.23(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),4.14-4.08(m,1H),3.83-3.67(m,2H),3.64-3.43(m,4H),3.37-3.21(m,8H),3.05(d,J＝5.1Hz,1H),1.86-1.78(m,2H),1.64-1.58(m,2H),1.12(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例39：((3-((8-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-5-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(39)的制备
步骤1：(3S,4S)-8-(5-氯咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(39a)的制备
实验操作流程同实施例2步骤5，但以反应物8-溴-5-氯咪唑并[1,2-a]吡嗪(37a)(700mg，3.01mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)，收率12％。
MS-ESI计算值[M+H]+：322.1，324.1，实测值：322.1，324.1。
步骤2：((3-((8-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-5-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(39)的制备
实验操作流程同实施例35步骤2，但以反应物(3S,4S)-8-(5-氯咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(39a)(80mg，0.25mmol)代替(3S,4S)-8-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(35a)，收率6％。
MS-ESI计算值[M+H]+：521.1，523.1，实测值：521.2，523.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.31(s,1H),7.78(s,1H),7.67(d,J＝1.2Hz,1H),7.57(d,J＝1.2Hz,1H),7.02(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),6.94(t,J＝7.8Hz,1H),6.09(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),4.81(s,2H),4.15-4.06(m,1H),3.99-3.69(m,3H),3.56(d,J＝8.4Hz,1H),3.51-3.44(m,2H),3.29(s,6H),3.04-2.96(m,1H),1.90-1.50(m,4H),1.11(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例40：((3-((4-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(40)的制备
步骤1：7-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4(3H)-酮(40b)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4(3H)-酮(40a)(1.00g，7.40mmol)和三氟乙酸(10mL)，再加入N-溴代丁二酰亚胺(1.32g，7.40mmol)。该反应混合物在室温搅拌2小时，减压浓缩。向得到的残余物中加入正己烷(10mL)和四氢呋喃(1mL)打浆，过滤生成的固体，用乙醚(2x 15mL)洗涤，干燥。得到黄色油状化合物40b(1.40g，收率89％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：214.0，216.0，实测值：213.8，215.8。
步骤2：7-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-4(3H)-酮(40c)的制备
实验操作流程同实施例35步骤2，但以反应物7-溴吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-4(3H)-酮(40b)(500mg，2.34mmol)代替(3S,4S)-8-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(35a)，收率64％。
MS-ESI计算值[M+H]+：369.0，371.0，实测值：369.0，371.0。
步骤3：(R)-N-((3S,4S)-8-(7-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(40d)的制备
向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物40c(200mg，0.54mmol)、(R)-2-甲基-N-((3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-丙-2-亚磺酰胺(7h)(根据专利申请WO2019158019公开的方法制备)(149mg，0.54mmol)、苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基六氟磷酸盐(PyBOP)(562mg，1.08mmol)、1.8-二氮杂环[5.4.0]十一烯(DBU)(410mg，2.70mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(5mL)。反应混合物在室温搅拌2小时，然后通过反相液相制备色谱法(C18柱，流动相A：水(0.05％甲酸)，流动相B：乙腈，梯度：40％-60％，20分钟)分离纯化，得到绿色固体状的化合物40d(280mg，收率74％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：625.2，627.2，实测值：625.1，627.1。
步骤4：((3-((4-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡咯并[2,1-f][1,2,4]三嗪-7-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(40)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(7-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡咯[2,1-f][1,2,4]三嗪-4-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(40d)(180mg，0.29mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(5-(4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)吲哚-1-基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(7f)，收率42％。
MS-ESI计算值[M+H]+：521.1，523.1，实测值：521.2，523.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.25(s,1H),7.98(s,1H),7.18(d,J＝4.8Hz,1H),7.11(d,J＝4.8Hz,1H),6.95(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),6.90-6.84(m,1H),5.68(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),4.39-4.26(m,2H),4.20-4.05(m,1H),3.78(d,J＝8.7Hz,1H),3.71(d,J＝11.1Hz,1H),3.67-3.48(m,4H),3.28(s,6H),3.08(d,J＝5.2Hz,1H),1.93-1.51(m,4H),1.13(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例41：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(41)的制备
步骤1：((2-氯-3-((5-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(41b)的制备
实验操作流程同实施例35步骤2，但以反应物5-氯-8-碘代咪唑并[1,2-a]吡啶(41a)(根据专利申请WO2008065199中公开的方法制备)(400mg，1.44mmol)代替(3S,4S)-8-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(35a)，收率68％。
MS-ESI计算值[M+H]+：386.0，388.0，390.0，实测值：386.1，388.1，390.1。
步骤2：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(41)的制备
实验操作流程同实施例1步骤8，但以反应物((2-氯-3-((5-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-8-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(41b)(150mg，0.41mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1h)，收率22％。
MS-ESI计算值[M+H]+：520.2，522.2，实测值：520.2，522.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.21(s,1H),7.75(d,J＝1.5Hz,1H),7.59(d,J＝1.2Hz,1H),7.33(d,J＝7.5Hz,1H),7.03(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),6.98-6.92(m,1H),6.49(d,J＝7.8Hz,1H),6.29(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),4.20-4.05(m,1H),3.74(d,J＝8.4Hz,1H),3.57(d,J＝8.4Hz,1H),3.30-3.25(m,10H),3.07(d,J＝5.1Hz,1H),2.99-2.86(m,2H),2.06-1.54(m,4H),1.13(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例42：((3-((6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(42)的制备
步骤1：6-氯-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(42a)的制备
向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(33a)(100mg，0.65mmol)、碳酸钾(180mg，1.29mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，再加入碘甲烷(184mg，1.29mmol)。该反应混合物在室温搅拌2小时。将反应混合物倒入水(30mL)中，用乙酸乙酯(3x 30mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得到黄色油状化合物42a(100mg，收率91％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：169.0，171.0，实测值：169.0，171.0。
步骤2：6-氯-3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(42b)的制备
向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物42a(500mg，2.97mmol)、乙腈(5mL)、氟硼酸(625mg，7.12mmol)和N-碘代丁二酰亚胺(667mg，2.97mmol)。反应混合物在氮气氛下，80℃搅拌2小时。反应混合物用饱和碳酸氢钠水溶液调至pH＝8，过滤生成的固体，用水(2x30mL)洗涤，干燥。得到白色固体状化合物42b(200mg，收率23％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：294.9，296.9，实测值：294.9，296.9。
步骤3：(3S,4S)-8-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(42c)的制备
实验操作流程同实施例2步骤5，但以反应物6-氯-3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(42b)(200mg，0.68mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)，收率93％。
MS-ESI计算值[M+H]+：429.1，实测值：429.1。
步骤4：((3-((6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(42)的制备
实验操作流程同实施例35步骤2，但以反应物(3S,4S)-8-(3-碘-1-甲基-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(42c)(270mg，0.63mmol)代替(3S,4S)-8-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(35a)，收率19％。
MS-ESI计算值[M+H]+：536.2，538.2，实测值：536.2，538.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.44(s,1H),8.26(d,J＝3.3Hz,1H),6.97(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),6.92-6.86(m,1H),6.21(dd,J＝7.8,1.5Hz,1H),4.12-4.06(m,2H),3.94(s,3H),3.74(d,J＝8.7Hz,2H),3.58-3.44(m,5H),3.28(s,6H),3.02(d,J＝5.1Hz,1H),1.80-1.48(m,4H),1.12(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例43和实施例44：((3-((3-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-7-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(43)和((3-((3-((3S,4R)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-7-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(44)的制备
步骤1：7-溴-3-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪(43b)的制备
实验操作流程同实施例33步骤1，但以反应物3-氯-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪(43a)(1.00g，6.51mmol)代替6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(33a)，收率75％。
MS-ESI计算值[M+H]+：231.9，233.9，235.9，实测值：232.0，234.0，236.0。
步骤2：7-溴-3-氯-5-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪(43c)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入化合物43b(1.10g，4.73mmol)和四氢呋喃(30mL)，反应混合物降至0℃，分批加入氢化钠(280mg，7.10mmol，60％)，继续搅拌30分钟后，加入(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(950mg，5.68mmol)。反应混合物在氮气氛下，室温搅拌3小时。反应混合物用饱和氯化铵水溶液(50mL)淬灭，用乙酸乙酯(3x 100mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝12/1)，得到黄色固体状化合物43c(1.50g，收率87％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：362.0，364.0，366.0，实测值：362.0，364.0，366.0。
步骤3：(R)-N-((3S,4S)-8-(7-溴-5-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(43d)的制备
实验操作流程同实施例7步骤1，但以反应物7-溴-3-氯-5-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪(43c)代替2,5-二溴吡嗪(7g)，收率24％。
MS-ESI计算值[M+H]+：600.2，602.2，实测值：600.2，602.2。
步骤4：(R)-N-((3S,4S)-8-(7-溴-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(43e)的制备
在氮气氛下，向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物43d(100mg，0.17mmol)、二氯甲烷(0.3mL)和三氟乙酸(0.1mL)。该反应混合物于室温搅拌3小时。反应混合物减压浓缩，将得到的残余物通过反相液相制备色谱法(C18柱，流动相A：水(10mM碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：20％-45％，25分钟)分离纯化，得到黄色固体状化合物43e(60mg，收率76％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：470.1，472.1，实测值：470.1，472.1。
步骤5：(R)-N-((3S,4S)-8-(7-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(43f)的制备
实验操作流程同实施例35步骤2，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(7-溴-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(43e)(80mg，0.22mmol)代替(3S,4S)-8-(3-溴-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-6-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(35a)，收率16％。
MS-ESI计算值[M+H]+：625.2，627.2，实测值：625.2，627.2。
步骤6：((3-((3-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-7-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(43)和((3-((3-((3S,4R)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-7-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(44)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(7-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(43f)(16mg，0.02mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(5-(4-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)吲哚-1-基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(7f)，标题化合物43收率31％和44收率31％。
标题化合物43:MS-ESI计算值[M+H]+：521.1，523.1，实测值：521.1，523.1。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.88(s,1H),8.28(s,1H),7.02-6.95(m,2H),6.86(s,1H),6.16(dd,J＝6.3,3.3Hz,1H),4.12-4.02(m,1H),3.86(d,J＝10.8Hz,2H),3.68(d,J＝8.4Hz,1H),3.50-3.45(m,5H),3.27(s,6H),2.90(d,J＝5.1Hz,1H),1.85-1.42(m,4H),1.08(d,J＝6.3Hz,3H)。
标题化合物44:MS-ESI计算值[M+H]+：521.1，523.1，实测值：521.2，523.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ11.98(s,1H),8.20(s,1H),7.72(s,1H),6.95-6.80(m,2H),6.11(dd,J＝7.5,2.1Hz,1H),4.12-4.02(m,1H),3.85(s,2H),3.68(d,J＝8.4Hz,1H),3.51-3.47(m,4H),3.26(s,6H),3.17(d,J＝4.5Hz,1H),2.90(d,J＝5.1Hz,1H),1.87-1.41(m,4H),1.09(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例45：((3-(3-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-7-基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(45)的制备
步骤1：((2-氯-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(45a)的制备
在氮气氛下，向干燥的1L圆底烧瓶中依次加入化合物2b(10.00g，35.39mmol)、双联频哪醇硼酸酯(8.99g，35.39mmol)、1,1-二(二苯磷基)二茂铁二氯化钯(II)(Pd(dppf)Cl2)(2.59g，3.54mmol)、乙酸钾(10.42g，106.16mmol)和1,4-二氧六环(200mL)。该反应混合物在氮气氛下，80℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到棕色固体状化合物45a(6.00g，收率51％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：330.1，332.1，实测值：330.2，332.2。
步骤2：(3S,4S)-8-(7-溴-5-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(45b)的制备
实验操作流程同实施例2步骤5，但以反应物7-溴-3-氯-5-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪(43c)(400mg，1.10mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)，收率16％。
MS-ESI计算值[M+H]+：496.2，498.2，实测值：496.2，498.2。
步骤3：((3-(3-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-5-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5H-吡咯[2,3-b]吡嗪-7-基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(45c)的制备
在氮气氛下，向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物45b(90mg，0.18mmol)、化合物45a(66mg，0.20mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(Pd(dppf)Cl2)(13mg，0.02mmol)、碳酸钾(50mg，0.36mmol)、1,4-二氧六环(3mL)和水(0.5mL)。该反应混合物在氮气氛下，100℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到绿色固体状化合物45c(50mg，收率39％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：619.3，621.3，实测值：619.3，621.3。
步骤4：((3-(3-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-7-基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(45)的制备
实验操作流程同实施例43步骤4，但以反应物((3-(3-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-5-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5H-吡咯[2,3-b]吡嗪-7-基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(45c)(50mg，0.08mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(7-溴-5-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(43d)，收率43％。
MS-ESI计算值[M+H]+：489.2，491.2，实测值：489.2，491.2。
1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),8.10(s,1H),7.56(s,1H),7.38(dd,J＝7.2,2.1Hz,1H),7.32-7.17(m,2H),4.61(s,1H),4.36-4.12(m,3H),3.99(d,J＝9.0Hz,1H),3.87(d,J＝9.0Hz,1H),3.27(s,6H),3.31-3.11(m,2H),2.01-1.66(m,4H),1.32(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例46：((3-(6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(46)的制备
步骤1：((3-(6-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪-3-基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(46)的制备
在氮气氛下，向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物35a(120mg，0.33mmol)、化合物45a(118mg，0.36mmol)、甲烷磺酸(2-二环己基膦基-2',4',6'-三-异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(XPhos Pd G3)(28mg，0.03mmol)、2-二环己基磷-2',4',6'-三异丙基联苯(XPhos)(16mg，0.03mmol)、磷酸钾(139mg，0.65mmol)、1,4-二氧六环(3mL)和水(0.5mL)。该反应混合物在氮气氛下，70℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)。减压浓缩后，残余物通过高效液相制备色谱法(XBridge C18柱，流动相A：水(0.1％甲酸)，流动相B：乙腈，梯度：35％-70％，10分钟,检测波长：254nm，保留时间：21.35分钟)分离纯化，得到黄色固体状的标题化合物46(37.9mg，收率23％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：490.2，492.2，实测值：490.2，492.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6,a drop of D2O)δ8.39(s,1H),7.34-7.18(m,2H),7.14(dd,J＝7.2,1.8Hz,1H),4.23-4.03(m,1H),3.96(dd,J＝13.5,5.7Hz,2H),3.69(d,J＝8.4Hz,1H),3.52-3.44(m,3H),3.30(s,6H),2.91(d,J＝5.1Hz,1H),1.87-1.40(m,4H),1.07(d,J＝9.0Hz,3H)。
实施例47：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)甲基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(47)的制备
步骤1：(3S,4S)-8-(5-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(47a)的制备
实验操作流程同实施例2步骤5，但以反应物2-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)-5-氯吡嗪(212mg，0.82mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚胺)二甲基-λ6-硫酮(2e)，收率34％。
MS-ESI计算值[M+H]+：393.3，实测值：393.3。
步骤2：(5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)甲醇(47b)的制备
实验操作流程同实施例43步骤4，但以反应物(3S,4S)-8-(5-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺(47a)(200mg，0.51mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(7-溴-5-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(43d)，收率95％。
MS-ESI计算值[M+H]+：279.2，实测值：279.2。
步骤3：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)甲基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(47)的制备
向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物47b(86mg，0.31mmol)和二氯甲烷(4mL)。在0℃加入氯化亚砜(1mL)，反应混合液在室温搅拌4小时。减压浓缩，将残余物溶于N,N-二甲基甲酰胺(2mL)，室温向反应混合液中依次加入化合物2d(115mg，0.49mmol)和碳酸铯(318mg，0.97mmol)。反应混合液在80℃搅拌16小时。降温至室温后，反应混合物用高效液相色谱法(Xselect CSH氟苯基柱，流动相A：水(0.05％甲酸)，流动相B：乙腈，梯度：8％-35％，7分钟，检测波长：254nm，保留时间：6.6分钟)分离纯化，得到黄色固体状的化合物47(3.2mg，收率2％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：496.2，498.2，实测值：496.2，498.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ7.71(s,1H),7.35(s,1H),7.27(s,1H),6.36-6.20(m,3H),3.57-3.23(m,5H),3.16(d,J＝9.3Hz,1H),3.04(d,J＝9.3Hz,1H),2.58-2.53(m,3H),2.45-2.16(m,7H),1.87(s,1H),1.10-0.78(m,4H),0.51(d,J＝6.6Hz,3H)。
实施例48：((3-(1-(5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)乙烯基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(48)的制备
步骤1：((2-氯-3-(1-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(48a)的制备
在氮气氛下，向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物45a(500mg，1.52mmol)、三氟甲磺酸钠(782.88mg，4.55mmol)和四氢呋喃(13mL)。在0℃，向反应混合物中依次加入乙酸烯丙酯(182.22mg，1.82mmol)、乙酸钯(8mg，0.04mmol)和三环己基膦(21mg，0.08mmol)。将反应混合物加热至60℃并搅拌4小时。反应混合物降温至室温，加入水(50mL)淬灭。将含水的混合物用乙酸乙酯(2x 50mL)萃取。合并有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压蒸馏。残余物通过反相液相制备色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：20％-60％，30分钟)，得到黄色固体状的化合物48a(200mg，收率37％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：356.1，358.1，实测值：356.1，358.1。
步骤2：((2-氯-3-(1-(5-氯吡嗪-2-基)乙烯基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(48b)的制备
在氮气氛下，向干燥的50mL圆底烧瓶中依次加入化合物48a(850mg，2.39mmol)、2-溴-5-氯吡嗪(462mg，2.39mmol)、磷酸钾(1.52g，7.17mmol)、[(正丁基二(1-金刚烷基)膦)-2-(2-氨基联苯)]钯(II)(cataCXlum A-Pd-G2)(160mg，0.24mmol)、正丁基二(1-金刚烷基)膦(171mg，0.48mmol)、水(1mL)和甲苯(12mL)。该反应混合物在氮气氛下，80℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/2)，得到黄色固体状化合物48b(560mg，收率68％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：342.0，344.0，346.0，实测值：341.7，343.7，345.7。
步骤3：((3-(1-(5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)乙烯基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(48)的制备
实验操作流程同实施例2步骤5，但以反应物((2-氯-3-(1-(5-氯吡嗪-2-基)乙烯基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(48b)(100mg，0.29mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)，收率26％。
MS-ESI计算值[M+H]+：476.2，478.2，实测值：476.1，478.0。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.48(s,1H),8.19(d,J＝1.6Hz,1H),7.74(d,J＝1.6Hz,1H),7.31(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.26-7.19(m,1H),7.01(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),6.12(d,J＝1.6Hz,1H),5.23(d,J＝1.6Hz,1H),4.33-4.11(m,3H),3.96(d,J＝9.2Hz,1H),3.83(d,J＝9.2Hz,1H),3.34(d,J＝4.4Hz,1H),3.22(s,8H),1.87-1.58(m,4H),1.29(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例49：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-6-(1H-咪唑-1-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(49)的制备
步骤1：5-溴-2-氯-3-(1H-咪唑-1-基)吡嗪(49a)的制备
在氮气氛下，向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入3,5-二溴-2-氯吡嗪(1.00g，3.67mmol)、咪唑(275mg，4.04mmol)、甲烷磺酸(2-二叔丁基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(292mg，0.37mmol)、2-二-叔丁膦基-2',4',6'-三异丙基联苯(156mg，0.37mmol)、碳酸铯(2.40g，7.34mmol)和1,4-二氧六环(20mL)。该反应混合物在氮气氛下，90℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/2)，得到黄色固体状的化合物49a(270mg，收率28％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：258.9，260.9，262.9，实测值：258.9，260.9，262.9。
步骤2：((2-氯-3-((5-氯-6-(1H-咪唑-1-基)吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(49b)的制备
实验操作流程同实施例1步骤7，但以反应物((2-氯-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2d)(250mg，1.060mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)和以反应物5-溴-2-氯-3-(1H-咪唑-1-基)吡嗪(49a)(250mg，0.96mmol)代替2-溴-5-氯吡嗪，收率75％。
MS-ESI计算值[M+H]+：414.0，416.0，418.0，实测值：414.0，416.0，418.0。
步骤3：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-6-(1H-咪唑-1-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(49)的制备
实验操作流程同实施例2步骤5，但以反应物((2-氯-3-((5-氯-6-(1H-咪唑-1-基)吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(49b)(150mg，0.36mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)，收率36％。
MS-ESI计算值[M+H]+：548.2，550.2，实测值：548.0，550.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.28-8.20(m,3H),7.69-7.62(m,1H),7.19-7.07(m,3H),6.79(dd,J＝7.6,1.6Hz,1H),4.10-3.99(m,1H),3.65(d,J＝8.4Hz,1H),3.46-3.42(m,4H),3.27(s,6H),3.15-3.10(m,2H),2.98(d,J＝5.2Hz,1H),2.86-2.79(m,1H),1.84-1.39(m,4H),1.09(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例50：((3-(1-(5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)乙基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(50)的制备
向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物48(32mg，0.07mmol)和甲醇(2mL)，在氮气氛下，加入雷尼镍(10mg)。反应混合物在氢气氛下室温搅拌16小时。然后过滤，滤饼用甲醇(2x 5mL)洗涤，滤液减压蒸馏，残余物用高效液相色谱法(XSelect CSH C18柱，流动相A：水(0.05％甲酸)，流动相B：乙腈，梯度：5％-25％，7分钟，检测波长：254nm，保留时间：6.15分钟)分离纯化，得到白色固体状的化合物50(14mg，收率43％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：478.2，480.2，实测值：478.2，480.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.24(d,J＝1.5Hz,1H),7.94(d,J＝1.5Hz,1H),7.14-6.99(m,2H),6.87(dd,J＝7.2,2.4Hz,1H),4.62-4.54(m,1H),4.20-3.98(m,1H),3.77(s,2H),3.65(d,J＝8.4Hz,1H),3.47(d,J＝8.4Hz,1H),3.38-3.26(m,3H),3.23(d,J＝2.4Hz,6H),2.88(d,J＝5.1Hz,1H),2.11-1.83(m,1H),1.78-1.40(m,7H),1.07(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例51：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-6-(羟甲基)-3-甲基吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(51)的制备
步骤1：((3S,4S)-8-(5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)-3-(羟基甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)氨甲酸叔丁酯(51b)的制备
在氮气氛下，向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入((3S,4S)-8-(5-溴-3-(羟基甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)氨甲酸叔丁酯(51a)(根据专利申请WO2018013597公开的方法制备)(50mg，0.11mmol)、化合物2d(28mg，0.12mmol)、1,1-二(二苯磷基)二茂铁二氯化钯(10mg，0.01mmol)、4，5-双二苯基膦-9，9-二甲基氧杂蒽(12mg，0.02mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(27mg，0.21mmol)和1,4-二氧六环(2mL)。该反应混合物在氮气氛下，120℃搅拌2小时。反应混合物冷却至室温。减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/2)，得到白色固体状的化合物51b(45mg，收率67％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：626.2，628.2，实测值：626.2，628.2。
步骤2：((3-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-6-(羟甲基)-3-甲基吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(51)的制备
实验操作流程同实施例43步骤4，但以反应物((3S,4S)-8-(5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)-3-(羟基甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)氨甲酸叔丁酯(51b)(45mg，0.07mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(7-溴-5-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(43d)，收率39％。
MS-ESI计算值[M+H]+：526.2，528.2，实测值：526.2，528.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),7.07-6.95(m,2H),6.26(dd,J＝6.3,3.0Hz,1H),4.45(s,2H),4.18 -4.04(m,1H),3.73(d,J＝8.7Hz,1H),3.66(s,5H),3.64-3.51(m,1H),3.28(s,6H),3.24-3.05(m,2H),3.10-3.03(m,1H),2.41(s,3H),1.90-1.39(m,4H),1.13(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例52：((3-(5-(3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-6-(羟甲基)-3-甲基吡嗪-2-基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(52)的制备
步骤1：((3S,4S)-8-(5-(2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)-3-(羟基甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)氨甲酸叔丁酯(52a)的制备
在氮气氛下，向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物51a(50mg，0.11mmol)、化合物45a(38mg，0.12mmol)、1,1-二(二苯磷基)二茂铁二氯化钯(II)(Pd(dppf)Cl2)(8mg，0.01mmol)、碳酸钾(30mg，0.21mmol)、水(0.2mL)和1,4-二氧六环(1.8mL)。该反应混合物在氮气氛下，100℃搅拌4小时。反应混合物冷却至室温。减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/2)，得到黄色固体状的化合物52a(52mg，收率82％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：594.2，596.2，实测值：594.2，596.2。
步骤2：((3-(5-(3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-6-(羟甲基)-3-甲基吡嗪-2-基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(52)的制备
实验操作流程同实施例43步骤4，但以反应物((3S,4S)-8-(5-(2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)-3-(羟基甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)氨甲酸叔丁酯(52a)(50mg，0.08mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(7-溴-5-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲基)-5H-吡咯并[2,3-b]吡嗪-3-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(43d)，收率21％。
MS-ESI计算值[M+H]+：494.2，496.2，实测值：494.2，496.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.23(s,1H),7.32-7.18(m,2H),6.89(dd,J＝6.6,2.7Hz,1H),4.50(s,2H),4.17-4.07(m,1H),3.73(d,J＝8.7Hz,1H),3.64-3.49(m,7H),3.28(s,6H),3.12-2.94(m,2H),2.18(s,3H),1.93-1.55(m,4H),1.13(d,J＝6.3Hz,3H)。
实施例53：(S)-((3-((3-氨基-5-(1-氨基-4,6-二氟-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(53)的制备
步骤1：(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-4,6-二氟-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(53b)的制备
实验操作流程同实施例28步骤1，但以(R)-N-((S)-4,6-二氟-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙-2-亚磺酰胺(53a)(根据专利申请WO2019183367公开的方法制备)(150mg，0.44mmol)代替(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(28a)，收率27％。
MS-ESI计算值[M+H]+：669.2，671.2，实测值：669.2，671.2。
步骤2：(S)-((3-((3-氨基-5-(1-氨基-4,6-二氟-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(53)的制备
实验操作流程同实施例28步骤2，但以(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-4,6-二氟-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(53b)(80mg，0.12mmol)代替(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(28b)，收率31％。
MS-ESI计算值[M+H]+：565.1，567.1，实测值：565.0，567.0。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.64(s,1H),7.02-6.95(m,4H),6.15(dd,J＝7.6,2.0Hz,1H),6.04(s,2H),4.19(d,J＝10.2Hz,2H),3.87(s,1H),3.46-3.33(m,2H),3.27(s,6H),3.17(d,J＝13.2Hz,1H),3.10(d,J＝15.2Hz,2H),2.59(d,J＝15.6Hz,1H),1.80-1.72(m,1H),1.71-1.60(m,1H),1.55(d,J＝13.2Hz,1H),1.10(d,J＝13.6Hz,1H)。
实施例54：(R)-((3-((3-氨基-5-(2-氨基-2,3-二氢螺[茚-1,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(54)的制备
步骤1：(R)-N-((R)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-2,3-二氢螺[茚-1,4'-哌啶]-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(54b)的制备
实验操作流程同实施例28步骤1，但以(R)-N-((R)-2,3-二氢螺[茚-1,4'-哌啶]-2-基)-2-甲基丙-2-亚磺酰胺(54a)(根据专利申请WO2018172984公开的方法制备)(70mg，0.23mmol)代替(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(28a)，收率48％。
MS-ESI计算值[M+H]+：633.2，635.2，实测值：633.2，635.2。
步骤2：(R)-((3-((3-氨基-5-(2-氨基-2,3-二氢螺[茚-1,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(54)的制备
实验操作流程同实施例28步骤2，但以(R)-N-((R)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6--硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-2,3-二氢螺[茚-1,4'-哌啶]-2-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(54b)(75mg，0.12mmol)代替(R)-N-((S)-1'-(6-氨基-5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(28b)，收率32％。
MS-ESI计算值[M+H]+：529.2，531.2，实测值：529.2，531.2。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.65(s,1H),7.36-7.28(m,1H),7.26-7.18(m,1H),7.22-7.10(m,2H),7.04-6.96(m,1H),6.96(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),6.17(dd,J＝7.6,2.0Hz,1H),6.06(s,2H),4.10-4.03(m,1H),3.97-3.89(m,1H),3.58-3.50(m,3H),3.41-3.33(m,2H),3.27(s,6H),3.16(dd,J＝16.0,6.4Hz,1H),2.60(dd,J＝16.0,4.4Hz,1H),2.07-1.96(m,1H),1.71-1.60(m,2H),1.58-1.44(m,1H)。
实施例55：(R)-((3-((5-(5-氨基-5,7-二氢螺[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(55)的制备
步骤1：(R)-N-((R)-1'-(5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙-2-亚磺酰胺(55b)的制备
实验操作流程同实施例28步骤1，但以反应物(R)-N-((R)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙-2-亚磺酰胺(55a)(根据专利申请WO2020108590中公开的方法制备)(36mg，0.12mmol)代替(R)-N-((S)-1,3-二氢螺[茚-2,4'-哌啶]-1-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(28a)和以反应物((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(2e)(49mg，0.14mmol)代替((3-((3-氨基-5-氯吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(22a)，收率76％。
MS-ESI计算值[M+H]+：619.2，621.2，实测值：619.2，621.2。
步骤2：(R)-((3-((5-(5-氨基-5,7-二氢螺[b]吡啶-6,4'-哌啶]-1'-基)吡嗪-2-基)硫基)-2-氯苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(55)的制备
实验操作流程同实施例14步骤5，但以反应物(R)-N-((R)-1'-(5-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)苯基)硫基)吡嗪-2-基)-5,7-二氢螺[环戊[b]吡啶-6,4'-哌啶]-5-基)-2-甲基丙-2-亚磺酰胺(55b)(40mg，0.12mmol)代替(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((5-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-1-甲基-1H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚硫酰胺(14e)，收率33％。
MS-ESI计算值[M+H]+：515.1，517.1，实测值：515.2，517.1。
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(d,J＝5.2Hz,1H),8.38(s,1H),8.29(d,J＝1.6Hz,1H),8.20(d,J＝1.6Hz,1H),7.92(d,J＝7.6Hz,1H),7.37(dd,J＝7.6,5.2Hz,1H),7.12(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),7.05-6.68(m,1H),6.55(dd,J＝8.0,1.6Hz,1H),4.59(s,1H),4.42(d,J＝12.8Hz,2H),4.32(d,J＝14.4Hz,1H),3.36(d,J＝11.6Hz,1H),3.26(s,1H),3.23(s,6H),3.17(d,J＝17.2Hz,1H),1.86(s,2H),1.67(d,J＝13.2Hz,2H)。
实施例56：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-7-氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(56)的制备
步骤1：6-溴-7-氯-1H-苯并[d]咪唑-2-胺(56b)的制备
向干燥的1L圆底烧瓶中依次加入化合物56a(15.0g，67.73mmol)、乙腈(450mL)和水(90mL)，分批加入溴化氰(7.90g，74.50mmol)。反应混合液在室温搅拌16小时，减压浓缩。残余物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：25％-50％，25分钟)，得到黄色固体状的化合物56b(13.0g，收率78％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：245.9，247.9，249.9，实测值：246.0，248.0，250.0。
步骤2：2-氨基-6-溴-7-氯-1H-苯并[d]咪唑-1-羧酸叔丁酯(56c)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入56b(3.00g，12.17mmol)、三乙胺(1.60g，15.82mmol)、四氢呋喃(60mL)和二叔丁基二碳酸酯(2.92g，13.39mmol)。该反应混合物在50℃搅拌5小时。反应液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到黄色固体状化合物56c(3.50g，收率83％)。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.60(s,2H),7.43(d,J＝8.5Hz,1H),7.32(d,J＝8.5Hz,1H),1.65(s,9H)。
步骤3：2-氨基-7-氯-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-苯并[d]咪唑-1-羧酸叔丁酯(56d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物2-氨基-6-溴-7-氯-1H-苯并[d]咪唑-1-羧酸叔丁酯(56c)(1.14g，9.52mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率33％。
MS-ESI计算值[M+H]+：386.1，388.1，实测值：386.1，388.1。
步骤4：2-溴-7-氯-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-苯并[d]咪唑-1-羧酸叔丁酯(56e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤4，但以反应物2-氨基-7-氯-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-苯并[d]咪唑-1-羧酸叔丁酯(56d)(3.50g，9.07mmol)代替((3-氨基-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1d)，收率27％。
1H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.81(d,J＝8.7Hz,1H),7.45(d,J＝8.7Hz,1H),3.69(s,3H),3.22(t,J＝7.4Hz,2H),2.61(t,J＝7.4Hz,2H),1.73(s,9H)。
步骤5：7-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-苯并[d]咪唑-1-羧酸叔丁酯(56f)的制备
实验操作流程同实施例19步骤4，但以反应物2-溴-7-氯-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-苯并[d]咪唑-1-羧酸叔丁酯(56e)(1.10g，2.44mmol)代替3-((3-溴-7-氯苯并[d]异噻唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(19d)，收率40％。
MS-ESI计算值[M+H]+：462.1，464.1，实测值：462.1，464.1。
步骤6：((7-氯-6-巯基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(56g)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物7-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-苯并[d]咪唑-1-羧酸叔丁酯(56f)(300mg，0.65mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率95％。
MS-ESI计算值[M+H]+：276.0，278.0，实测值：276.0，278.0。
步骤7：(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((7-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(56h)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((7-氯-6-巯基-1H-苯并[d]咪唑-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(56g)(150mg，0.54mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率53％。
MS-ESI计算值[M+H]+：626.2，628.2，实测值：626.2，628.2。
步骤8：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-7-氯-1H-苯并[d]咪唑-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(56)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((7-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-1H-苯并[d]咪唑-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(56h)(130mg，0.21mmol)代替化合物7f，收率39％。
MS-ESI计算值[M+H]+：522.1，524.1，实测值：522.1，524.1。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.44(s,1H),8.10(d,J＝1.5Hz,1H),7.85(d,J＝1.4Hz,1H),7.22(s,2H),4.31-4.22(m,1H),4.18(dd,J＝12.2,2.7Hz,1H),4.13-4.06(m,1H),3.94(d,J＝9.2Hz,1H),3.82(d,J＝9.2Hz,1H),3.48(s,6H),3.36(d,J＝4.2Hz,1H),3.17-3.01(m,2H),1.86-1.74(m,3H),1.65(d,J＝12.7Hz,1H),1.35-1.22(m,4H),0.99(s,1H)。
实施例57：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-5-氯异喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(57)的制备
步骤1：6-溴-5-氯-4-碘异喹啉(57b)的制备
向干燥的1L圆底烧瓶中依次加入化合物57a(7.00g，28.86mmol)、N-碘代丁二酰亚胺(NIS)(6.49g，28.86mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(100mL)。在氮气氛下，反应混合液在80℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩。残余物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：70％-85％，25分钟)，得到黄色固体状的化合物57b(4.6g，收率78％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：367.8，369.8，371.8，实测值：367.8，369.8，371.8。
步骤2：((6-溴-5-氯异喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(57c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物6-溴-5-氯-4-碘异喹啉(57b)(100mg，0.27mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4-硝基苯(1b)，收率46％。
MS-ESI计算值[M+H]+：331.9，334.9，336.9，实测值：331.9，334.9，336.9。
步骤3：3-((5-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(57d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物6-溴-5-氯-4-碘异喹啉((6-溴-5-氯异喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(57c)(106mg，0.88mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率75％。
MS-ESI计算值[M+H]+：373.0，375.0，实测值：373.1，375.1。
步骤4：((5-氯-6-巯基异喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(57e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((5-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(57d)(205mg，0.55mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率90％。
MS-ESI计算值[M+H]+：287.0，289.0，实测值：286.9，288.9。
步骤5：(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((5-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(57f)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((5-氯-6-巯基异喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(57e)(155mg，0.54mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率69％。
MS-ESI计算值[M+H]+：637.2，639.2，实测值：637.3，639.3。
步骤6：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-5-氯异喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(57)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((5-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(57f)(240mg，0.38mmol)代替化合物7f，收率9％。
MS-ESI计算值[M+H]+：533.1，535.1，实测值：533.1，535.1。
1H NMR(300MHz,Methanol-d4)δ8.75(s,1H),8.51(s,1H),8.42 -8.27(m,3H),7.79(d,J＝8.8Hz,1H),7.01(d,J＝8.8Hz,1H),4.41-4.23(m,2H),4.00(d,J＝9.1Hz,1H),3.88(d,J＝9.1Hz,1H),3.38(d,J＝4.3Hz,1H),3.29(s,6H),3.34-3.19(m,1H),1.94-1.80(m,3H),1.75(d,J＝13.5Hz,1H),1.33(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例58：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-6-(羟甲基)-3-甲基吡嗪-2-基)硫基)-7-氯苯并[d]噻唑-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(58)的制备
步骤1：3-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-8-基)-6-溴-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(58d)的制备
向干燥的50mL三口瓶中依次加入6溴-3-氯-5-甲基吡嗪-2-羧酸乙酯(58b)(400mg，1.43mmol)、(3S,4S)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-胺二盐酸盐(1i)(382mg，1.57mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(370mg，2.86mmol)和N,N-二甲基乙酰胺(DMA)(5mL)。在氮气氛围下，反应混合物在55℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，减压浓缩。残余物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：20％-50％，30分钟)，得到浅黄色油状化合物58d(180mg，28％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：413.1，415.1，416.1，实测值：413.1，415.1，416.1。
步骤2：6-溴-3-((3S,4S)-4-((叔丁基羰基)氨基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-8-基)-5-甲基吡嗪-羧酸乙酯(58e)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入化合物58d(540mg，1.30mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(338mg，2.61mmol)、1,4-二氧六环(10mL)和二叔丁基二碳酸酯(342mg，1.56mmol)。该反应混合物在室温搅拌2小时。反应液减压浓缩，残余物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：30％-80％，30分钟)，得到黄色固体状化合物58e(550mg，82％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：513.2，515.2，516.2，实测值：513.2，515.2，516.2。
步骤3：((3S,4S)-8-(5-溴-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)氨基甲酸叔丁基酯(58c)的制备
在氮气氛围下，向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入化合物58e(500mg，0.97mmol)和二氯甲烷(10mL)。在-78℃，向反应混合物中逐滴加入二异丁基氢化铝(554mg，3.90mmol)。反应混合物在室温搅拌3小时，加入饱和氯化铵水溶液(100mL)淬灭，用二氯甲烷(3x 50mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：30％-80％，30分钟)，得到黄色固体状化合物58c(240mg，52％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：471.2，473.2，474.2，实测值：471.1，473.1，474.1。
步骤4：((3S,4S)-8-(5-((7-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)苯并[d]噻唑-6-基)硫基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)氨基甲酸叔丁基酯(58a)的制备
实验操作流程同实施例18步骤5，但以反应物((3S,4S)-8-(5-溴-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)氨基甲酸叔丁基酯(58c)(111mg，0.23mmol)代替化合物7e，收率68％。
MS-ESI计算值[M+H]+：683.2，685.2，实测值：683.3，685.3。
步骤5：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)-6-(羟甲基)-3-甲基吡嗪-2-基)硫基)-7-氯苯并[d]噻唑-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(58)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物((3S,4S)-8-(5-((7-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)苯并[d]噻唑-6-基)硫基)-3-(羟甲基)-6-甲基吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)氨基甲酸叔丁基酯(58a)(102mg，0.15mmol)代替化合物7f，收率38％。
MS-ESI计算值[M+H]+：583.1，585.1，实测值：583.1，585.1。
1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.53(s,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,1H),7.35(d,J＝8.4Hz,1H),4.50(s,2H),4.31-4.20(m,1H),3.90(d,J＝9.0Hz,1H),3.78(d,J＝9.0Hz,1H),3.52(s,8H),3.28(d,J＝4.4Hz,1H),3.01(m,2H),2.49(s,3H),1.86(m,3H),1.68(d,J＝12.8Hz,1H),1.27(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例59：((7-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(59)的制备
步骤1：7-溴-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶(59b)的制备
向干燥的50mL三口瓶中依次加入4-溴-3-氯吡啶-2-胺(59a)(1.0g，4.82mmol)和乙醇(10mL)。在0℃，氮气氛围下，分批加入氯乙醛(0.57g，7.23mmol)。反应混合物在80℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，倒入冰水(50mL)中，用乙酸乙酯(3x 50mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)，得到黄色固体状的化合物59b(580mg，收率52％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：230.9，232.9，234.9，实测值：231.0，233.0，235.0。
步骤2：7-溴-8-氯-3-碘咪唑并[1,2-a]吡啶(59c)的制备
向干燥的50mL三口瓶中依次加入7-溴-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶(59b)(420mg，1.86mmol)和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(5mL)。在0℃，氮气氛围下，分批加入N-碘代丁二酰亚胺(853.87mg，3.72mmol)。反应混合物在室温搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，倒入冰水(50mL)中，用乙酸乙酯(3x 50mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到黄色固体状的化合物59c(500mg，收率75％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：356.8，358.8，360.8，实测值：357.0，359.0，361.0。
步骤3：((7-溴-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(59d)的制备
实验操作流程同实施例19步骤4，但以反应物7-溴-8-氯-3-碘咪唑并[1,2-a]吡啶(59c)(500mg，1.40mmol)代替3-((3-溴-7-氯苯并[d]异噻唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(19d)，收率31％。
MS-ESI计算值[M+H]+：321.9，323.9，325.9，实测值：321.9，323.9，325.9。
步骤4：3-((8-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫基)丙酸甲酯(59e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((7-溴-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(59d)(140mg，0.43mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率70％。
MS-ESI计算值[M+H]+：362.0，364.0，实测值：362.2，364.2。
步骤5：((8-氯-7-巯基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(59f)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((8-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-7-基)硫基)丙酸甲酯(59e)(110mg，0.30mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率85％。
MS-ESI计算值[M+H]+：276.0，278.0，实测值：276.2，278.2。
步骤6：((8-氯-7-巯基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((8-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-7)-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(59g)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((8-氯-7-巯基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(59f)(84mg，0.30mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率42％。
MS-ESI计算值[M+H]+：626.2，628.2，实测值：626.3，628.3。
步骤7：((7-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-8-氯咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(59)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物((8-氯-7-巯基咪唑并[1,2-a]吡啶-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((8-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)咪唑并[1,2-a]吡啶-7)-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(59g)(50mg，0.08mmol)代替化合物7f，收率32％。
MS-ESI计算值[M+H]+：522.1，524.1，实测值：522.1，524.1。
1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.04(d,J＝7.3Hz,1H),7.14(s,1H),6.56(d,J＝7.3Hz,1H),4.43-4.17(m,3H),4.01(d,J＝9.2Hz,1H),3.89(d,J＝9.3Hz,1H),3.45(d,J＝4.1Hz,1H),3.33(s,8H),3.30-3.09(m,2H),2.00-1.66(m,4H),1.34(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例60：((7-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-8-氯喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(60)的制备
步骤1：7-溴-8-氯喹啉-4-醇(60b)的制备
在氮气氛围下，向干燥的50mL三口瓶中依次加入3-溴-2-氯苯胺(60a)(500mg，2.42mmol)、5-(甲氧基亚甲基)-2,2-二甲基-1,3-二噁烷-4,6-二酮(496mg，2.66mmol)和乙醇(10mL)。反应混合物在85℃搅拌3小时。将反应混合物冷却至室温，过滤，滤饼用乙醚(3x50mL)洗涤，滤液减压浓缩。将粗品溶解在二苯醚(10mL)中，反应混合物在240℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至室温，过滤，滤饼用乙醚(3x 50mL)洗涤，滤液减压浓缩，得到棕色固体状的化合物60b(290mg，收率46％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：257.9，259.9，261.9，实测值：258.0，260.0，262.0。
步骤2：3-((8-氯-4-羟基喹啉-7-基)硫基)丙酸甲酯(60c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物7-溴-8-氯喹啉-4-醇(60b)(2.0g，7.74mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率89％。
MS-ESI计算值[M+H]+：298.0，300.0，实测值：298.0，300.0。
步骤3：3-((8-氯-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)喹啉-7-基)硫基)丙酸甲酯(60d)的制备
在氮气氛围下，向干燥的50mL三口瓶中依次加入3-((8-氯-4-羟基喹啉-7-基)硫基)丙酸甲酯(60c)(1.0g，3.36mmol)、三乙胺(1.02g，10.08mmol)和二氯甲烷(20mL)。在0℃，逐滴向反应混合物加入三氟甲磺酸酐(1.90g，6.72mmol)。反应混合物在室温搅拌2小时。将反应混合物倒入冰水(50mL)中，用乙酸乙酯(3x 50mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝2/1)，得到白色固体状的化合物60d(710mg，收率49％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：430.0，432.0，实测值：430.0，432.0。
步骤4：3-((8-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹啉-7-基)硫基)丙酸甲酯(60e)的制备
实验操作流程同实施例19步骤4，但以反应物3-((8-氯-4-(((三氟甲基)磺酰基)氧基)喹啉-7-基)硫基)丙酸甲酯(60d)(400mg，0.93mmol)代替3-((3-溴-7-氯苯并[d]异噻唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(19d)，收率49％。
MS-ESI计算值[M+H]+：373.0，375.0，实测值：373.1，375.1。
步骤5：((8-氯-7-巯基喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(60f)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((8-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹啉-7-基)硫基)丙酸甲酯(60e)(160mg，0.43mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率80％。
MS-ESI计算值[M+H]+：287.0，289.0，实测值：287.0，289.0。
步骤6：(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((8-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹啉-7-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(60g)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((8-氯-7-巯基喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(60f)(120mg，0.42mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率26％。
MS-ESI计算值[M+H]+：637.2，638.2，实测值：637.2，638.2。
步骤7：((7-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-8-氯喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(60)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((8-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹啉-7-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(60g)(70mg，0.11mmol)代替化合物7f，收率32％。
MS-ESI计算值[M+H]+：533.1，535.1，实测值：533.1，535.1。
1H NMR(300MHz,CD3OD)δ8.53(d,J＝5.4Hz,1H),8.40(s,2H),8.34-8.28(m,2H),8.15(d,J＝9.0Hz,1H),7.20(d,J＝5.3Hz,1H),6.94(d,J＝9.0Hz,1H),4.38-4.21(m,3H),3.98(d,J＝9.2Hz,1H),3.87(d,J＝9.1Hz,1H),3.43(s,6H),3.41(d,J＝4.2Hz,1H),3.30-3.12(m,2H),1.90-1.78(m,3H),1.72(d,J＝13.2Hz,1H),1.32(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例61：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-7-氯苯并[d]噁唑-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(61)的制备
步骤1：7-氯苯并[d]噁唑-2-胺(61b)的制备
向干燥的1L圆底烧瓶中依次加入化合物61a(5.0g，34.83mmol)、二(1H-咪唑-1-基)甲亚胺(10.10g，62.69mmol)和四氢呋喃(500mL)。在氮气氛下，反应混合液在70℃搅拌3小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩。残余物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mmol/L碳酸氢铵)，流动相B：乙腈，梯度：40％-60％，20分钟)，得到黄色固体状的化合物61b(4.6g，收率78％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：169.0，171.0，实测值：169.2，171.2。
步骤2：6-溴-7-氯苯并[d]噁唑-2-胺(61c)的制备
向干燥的250mL圆底烧瓶中依次加入化合物61b(3.0g，17.80mmol)、醋酸(30mL)和水(30mL)。在0℃，逐滴加入溴素(1.42g，8.90mmol)。反应混合液在室温搅拌2小时。反应混合物倒入饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)中，用乙酸乙酯(3x 50mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/2)，得到黄色固体状的化合物61c(3.1g，收率70％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：246.9，248.9，250.9，实测值：247.1，249.1，251.1。
步骤3：3-((2-氨基-7-氯苯并[d]噁唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(61d)的制备实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物6-溴-7-氯苯并[d]噁唑-2-胺(61c)(3.0g，12.12mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率63％。
MS-ESI计算值[M+H]+：287.0，289.0，实测值：287.2，289.2。
步骤4：3-((2-溴-7-氯苯并[d]噁唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(61e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤4，但以反应物3-((2-氨基-7-氯苯并[d]噁唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(61d)(2.2g，7.67mmol)代替((3-氨基-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1d)，收率44％。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.55(d,J＝8.4Hz,1H),7.44(d,J＝8.4Hz,1H),3.69(s,3H),3.23(t,J＝7.4Hz,2H),2.64(t,J＝7.4Hz,2H)。
步骤5：3-((7-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)苯并[d]噁唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(61f)的制备
实验操作流程同实施例19步骤4，但以反应物3-((2-溴-7-氯苯并[d]噁唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(61e)(1.2g，3.42mmol)代替3-((3-溴-7-氯苯并[d]异噻唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(19d)，收率31％。
MS-ESI计算值[M+H]+：363.0，365.0，实测值：363.0，365.0。
步骤6：((7-氯-6-巯基苯并[d]噁唑-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(61g)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((7-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)苯并[d]噁唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(61f)(390mg，1.08mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率90％。
MS-ESI计算值[M+H]+：277.0，279.0，实测值：277.2，279.2。
步骤7：(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((7-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)苯并[d]噁唑-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(61h)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((7-氯-6-巯基苯并[d]噁唑-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(61g)(83mg，0.30mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率50％。
MS-ESI计算值[M+H]+：627.2，629.2，实测值：627.2，629.2。
步骤8：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-7-氯苯并[d]噁唑-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(61)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((7-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)苯并[d]噁唑-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(61h)(90mg，0.14mmol)代替化合物7f，收率30％。
MS-ESI计算值[M+H]+：523.1，525.1，实测值：523.1，525.1。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.33-8.23(m,2H),8.07(d,J＝1.4Hz,1H),7.33(d,J＝8.3Hz,1H),7.20(d,J＝8.3Hz,1H),4.14-4.04(m,1H),3.95-3.82(m,2H),3.71(d,J＝8.6Hz,1H),3.57(s,6H),3.28(m,2H),3.00(d,J＝5.1Hz,1H),1.77-1.44(m,4H),1.10(d,J＝6.4Hz,3H)。
实施例62：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-5-氯喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(62)的制备
步骤1：6-溴-5-氯喹啉(62b)的制备
在0℃，向干燥的250mL圆底烧瓶中依次加入化合物62a(5.00g，24.22mmol)、3-硝基苯磺酸钠(9.27g，41.17mmol)、甘油(8.47g，92.02mmol)和70％硫酸水溶液(34mL)。反应混合液在140℃搅拌6小时。反应混合物冷却至室温，倒入饱和碳酸氢钠水溶液(500mL)中，用乙酸乙酯(3x 500mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(1000mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到白色固体状的化合物62b(5.20g，收率88％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：241.9，243.9，245.9，实测值：242.1，244.1，246.1。
步骤2：6-溴-5-氯-3-碘喹啉(62c)的制备
向干燥的500mL圆底烧瓶中依次加入化合物62b(14.0g，57.73mmol)、醋酸(280mL)和N-碘代丁二酰亚胺(25.98g，115.46mmol)。反应混合物在氮气氛下，80℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到白色固体状的化合物62c(7.6g，收率36％)。
1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ9.09(d,J＝2.0Hz,1H),8.99(dd,J＝2.0,0.8Hz,1H),7.97-7.85(m,2H)。
步骤3：((6-溴-5-氯喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(62d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物6-溴-5-氯-3-碘喹啉(62c)(1.00g，2.71mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)，收率56％。
MS-ESI计算值[M+H]+：332.9，334.9，336.9，实测值：333.1，335.1，337.1。
步骤4：3-((5-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(62e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((6-溴-5-氯喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(62d)(430mg，1.29mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率73％。
MS-ESI计算值[M+H]+：373.0，375.0，实测值：373.2，375.2。
步骤5：3-((5-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(62f)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((5-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(62e)(350mg，0.94mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率85％。
MS-ESI计算值[M+H]+：287.0，289.0，实测值：287.2，289.2。
步骤6：(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((5-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹啉-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(62g)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物3-((5-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(62f)(180mg，0.63mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率57％。
MS-ESI计算值[M+H]+：637.2，639.2，实测值：637.3，639.3。
步骤7：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-5-氯喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(62)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((5-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹啉-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺环[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(62g)(200mg，0.31mmol)代替化合物7f，收率39％。
MS-ESI计算值[M+H]+：533.1，535.1，实测值：533.1，535.1。
1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ8.54(d,J＝2.5Hz,1H),8.48(s,1H),8.34-8.28(m,2H),8.15(dd,J＝2.5,0.9Hz,1H),7.72(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.09(d,J＝8.9Hz,1H),4.42-4.20(m,3H),4.00(d,J＝9.1Hz,1H),3.88(d,J＝9.1Hz,1H),3.43(s,1H),3.38(s,6H),3.31-3.12(m,2H),1.86(m,3H),1.73(d,J＝13.1Hz,1H),1.33(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例63：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-7-氯-1H-吲哚-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(63)的制备
步骤1：6-溴-7-氯-1H-吲哚(63b)的制备
在氮气氛下，向干燥的500mL圆底烧瓶中依次加入化合物63a(5.0g，21.14mmol)和四氢呋喃(100mL)。在-40℃，逐滴加入乙烯基溴化镁(11.10g，84.58mmol)。反应混合液在-40℃搅拌3小时，用饱和氯化铵(200mL)水溶液淬灭，并用乙酸乙酯(2x 200mL)萃取。将合并的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝10/1)，得到橘色固体状的化合物63b(2.40g，收率49％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：229.9，231.9，233.9，实测值：229.9，231.9，233.9。
步骤2：6-溴-7-氯-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(63c)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入化合物63b(2.10g，9.11mmol)、4-二甲氨基吡啶(111mg，0.91mmol)、四氢呋喃(30mL)和二叔丁基二碳酸酯(2.98g，13.67mmol)。该反应混合物在室温搅拌16小时。反应液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到黄色固体状化合物63c(2.80g，收率93％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：330.0，332.0，334.0，实测值：330.1，332.1，334.1。
步骤3：7-氯-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(63d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物6-溴-7-氯-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(63c)(400mg，1.21mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率40％。
MS-ESI计算值[M+H]+：370.1，372.1，实测值：370.1，372.1。
步骤4：3-溴-7-氯-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(63e)的制备
向干燥的25mL圆底烧瓶中依次加入化合物63d(180mg，0.49mmol)和二氯甲烷(3mL)。在0℃，分批加入N-溴代丁二酰亚胺(104mg，0.58mmol)。该反应混合物在40℃搅拌3小时。反应液减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到紫色固体状化合物63e(109mg，收率50％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：448.0，450.0，452.0，实测值：448.0，450.0，452.0。
步骤5：7-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(63f)的制备
实验操作流程同实施例19步骤4，但以反应物3-溴-7-氯-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(63e)(350mg，0.78mmol)代替3-((3-溴-7-氯苯并[d]异噻唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(19d)，收率33％。
MS-ESI计算值[M+H]+：461.1，463.1，实测值：461.1，463.1。
步骤6：7-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-6-巯基-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(63g)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物7-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(63f)(120mg，0.26mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率72％。
步骤7：(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((7-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-1H-吲哚-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(63h)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物7-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-6-巯基-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(63g)(112mg，0.26mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率31％。
MS-ESI计算值[M+H]+：625.2，627.2，实测值：625.2，627.2。
步骤8：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-7-氯-1H-吲哚-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(63)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((7-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-1H-吲哚-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(63h)(60mg，0.09mmol)代替化合物7f，收率8％。
MS-ESI计算值[M+H]+：521.1，523.1，实测值：521.1，523.1。
1H NMR(300MHz,Methanol-d4)δ8.47(s,1H),8.12(d,J＝1.5Hz,1H),7.90(d,J＝1.5Hz,1H),7.51(d,J＝8.3Hz,1H),7.09-7.04(m,2H),4.27(dd,J＝6.5,4.3Hz,1H),4.20(d,J＝13.7Hz,1H),4.12(d,J＝13.6Hz,1H),3.95(d,J＝9.2Hz,1H),3.83(d,J＝9.2Hz,1H),3.35(d,J＝4.3Hz,1H),3.16-3.04(m,2H),1.85-1.75(m,3H),1.66(d,J＝12.9Hz,1H),1.29(d,J＝6.5Hz,3H),1.00(s,1H)。
实施例64：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-7-氯-1H-吲唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(64)的制备
步骤1：6-溴-7-氯-1H-吲唑(64b)的制备
在氮气氛下，向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入化合物64a(3.0g，12.38mmol)、水合肼(6mL)和乙醇(30mL)。反应混合液在90℃搅拌16小时，逐滴加入三乙胺(2.64g，24.76mmol)，反应混合液继续在90℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩。残余物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(0.1％ FA)，流动相B：乙腈，梯度：10％-95％，30分钟)，得到黄色固体状的化合物64b(1.90g，收率65％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：230.9，232.9，234.9，实测值：231.0，233.0，235.0。
步骤2：3-((7-氯-1H-吲唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(64c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物6-溴-7-氯-1H-吲唑(64b)(2.10g，8.91mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率89％。
MS-ESI计算值[M+H]+：271.0，273.0，实测值：270.9，272.9。
步骤3：3-((3-溴-7-氯-1H-吲唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(64d)的制备
实验操作流程同实施例63步骤4，但以反应物3-((7-氯-1H-吲唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(64c)(1.80g，5.14mmol)代替7-氯-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(63d)，收率97％。
MS-ESI计算值[M+H]+：348.9，350.9，352.9，实测值：348.8，350.8，352.8。
步骤4：3-溴-7-氯-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(64e)的制备
实验操作流程同实施例63步骤2，但以反应物3-((3-溴-7-氯-1H-吲唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(64d)(1.20g，1.43mmol)代替6-溴-7-氯-1H-吲哚(63b)，收率80％。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ7.51(d,J＝8.4Hz,1H),7.35(d,J＝8.5Hz,1H),3.72(s,3H),3.31(t,J＝7.5Hz,2H),2.72(t,J＝7.5Hz,2H),1.69(s,9H)。
步骤5：7-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(64f)的制备
实验操作流程同实施例19步骤4，但以反应物3-溴-7-氯-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(64e)(800mg，1.74mmol)代替3-((3-溴-7-氯苯并[d]异噻唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(19d)，收率73％。
MS-ESI计算值[M+H]+：462.1，464.1，实测值：462.2，464.2。
步骤6：((7-氯-6-巯基-1H-吲唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(64g)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物7-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(64f)(50mg，0.10mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率80％。
MS-ESI计算值[M+H]+：276.0，278.0，实测值：276.2，278.2。
步骤7：((7-氯-6-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-1H-吲唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(64h)的制备
实验操作流程同实施例1步骤7，但以反应物((7-氯-6-巯基-1H-吲唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(64g)(23mg，0.12mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率63％。
MS-ESI计算值[M+H]+：388.0，389.0，实测值：388.0，389.0。
步骤8：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-7-氯-1H-吲唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(64)的制备
实验操作流程同实施例1步骤8，但以反应物((7-氯-6-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-1H-吲唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(64h)(20mg，0.05mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1h)，收率13％。
MS-ESI计算值[M+H]+：522.1，524.1，实测值：522.8，524.8。
1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ8.51(s,1H),8.25(d,J＝1.5Hz,1H),8.18(d,J＝1.4Hz,1H),7.53(d,J＝8.4Hz,1H),6.78(d,J＝8.4Hz,1H),4.35-4.13(m,3H),3.98(d,J＝9.2Hz,1H),3.85(d,J＝9.1Hz,1H),3.40(s,6H),3.30-3.07(m,2H),1.91-1.64(m,4H),1.31(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例65：((7-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-8-氯异喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(65)的制备
步骤1：7-溴-8-氯异喹啉(65b)的制备
在氮气氛围下，向干燥的100mL三口瓶中依次加入化合物65a(1.0g，4.56mmol)、2,2-二甲氧基乙烷-1-胺(0.57g，5.47mmol)和甲苯(20mL)。反应混合物在100℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，减压浓缩。将粗品溶解在浓硫酸(5mL)中，反应混合物在140℃搅拌0.5小时。将反应混合物冷却至室温，倒入冰水(50mL)中淬灭，过滤，用二氯甲烷(2x40mL)萃取。水相用氢氧化钠水溶液调节至pH为8，用二氯甲烷(2x 40mL)萃取，将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到白色固体状的化合物65b(400mg，收率36％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：241.9，243.9，245.9，实测值：242.1，244.1，246.1。
步骤2：7-溴-8-氯-4-碘异喹啉(65c)的制备
实验操作流程同实施例62步骤2，但以反应物7-溴-8-氯异喹啉(65b)(400mg，1.65mmol)代替6-溴-5-氯-喹啉(62b)，收率67％。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ9.60(s,1H),9.04(s,1H),7.95(d,J＝9.1Hz,1H),7.85(dd,J＝9.1,0.8Hz,1H)。
步骤3：((7-溴-8-氯异喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(65d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤2，但以反应物7-溴-8-氯-4-碘异喹啉(65c)(185mg，0.50mmol)代替2-溴-3-氯-1-氟-4硝基苯(1b)，收率89％。
MS-ESI计算值[M+H]+：332.9，334.9，336.9，实测值：333.1，335.1，337.1。
步骤4：3-((8-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-7-基)硫基)丙酸甲酯(65e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((7-溴-8-氯异喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(65d)(150mg，0.45mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率80％。
MS-ESI计算值[M+H]+：373.0，375.0，实测值：373.2，375.2。
步骤5：((8-氯-7-巯基异喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(65f)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((8-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-7-基)硫基)丙酸甲酯(65e)(135mg，0.36mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率90％。
MS-ESI计算值[M+H]+：287.0，289.0，实测值：287.2，289.2。
步骤6：(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((8-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-7-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(65g)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((8-氯-7-巯基异喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(65f)(100mg，0.35mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率63％。
MS-ESI计算值[M+H]+：637.2，639.2，实测值：637.3，639.3。
步骤7：((7-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-8-氯异喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(65)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((8-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-7-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(65g)(140mg，0.22mmol)代替化合物7f，收率59％。
MS-ESI计算值[M+H]+：533.1，535.1，实测值：533.1，535.1。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ9.06(d,J＝0.9Hz,1H),8.44(d,J＝1.4Hz,1H),8.35-8.20(m,3H),8.12(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.19(d,J＝9.0Hz,1H),4.10(q,J＝6.0Hz,1H),3.74(d,J＝8.6Hz,1H),3.54(d,J＝8.6Hz,1H),3.35(s,6H),3.04(d,J＝5.1Hz,1H),1.83-1.58(m,1H),1.52(d,J＝15.1Hz,1H),1.16-1.08(m,3H)。
实施例66：((7-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-8-氯异喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(66)的制备
/>
步骤1：(3-溴-2-氯苯基)甲胺(66b)的制备
在氮气氛下，向干燥的1L三口瓶中依次加入化合物66a(47.0g，224.16mmol)、过氧化二苯甲酰(571.56mg，2.36mmol)和四氯化碳(500mL)。分批加入N-溴代丁二酰亚胺(50.40g，268.99mmol)，反应混合物在80℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，减压浓缩。将粗品溶解在氯仿(200mL)中，过滤，滤饼用氯仿(3x 50mL)洗涤，滤液减压浓缩。在氮气氛下，残余物溶解在氨甲醇(500mL，17.62mol)中，反应混合物在室温搅拌3小时。减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到黄色固体状的化合物66b(28.0g，收率55％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：219.9，221.9，223.9，实测值：220.0，222.0，224.0。
步骤2：7-溴-8-氯异喹啉-3-醇(66c)的制备
在氮气氛围下，向干燥的100mL三口瓶中依次加入化合物66b(13.0g，53.06mmol)、2,2-二乙氧基乙酸乙酯(11.81g，63.68mmol)、三乙胺(7.07g，66.33mmol)和甲醇(15mL)。反应混合物在80℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，倒入水(100mL)中，用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物溶解在浓硫酸(72.22g，721.67mmol)中，反应混合物在50℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，倒入冰水(50mL)中淬灭，用乙酸乙酯(3x 300mL)萃取。水相用氢氧化钠水溶液调节至pH为8，用二氯甲烷(2x 40mL)萃取，将合并的有机相用饱和食盐水(500mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到棕黄色固体状的化合物66c(4.30g，收率31％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：257.9，259.9，261.9，实测值：258.0，260.0，262.0。
步骤3：7-溴-8-氯异喹啉-3-基三氟甲磺酸盐(66d)的制备
在氮气氛下，向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入化合物66c(2.0g，7.58mmol)、N-苯基双(三氟甲烷磺酰)亚胺((3421.47mg，9.10mmol)、三乙胺(2422.87mg，22.74mmol)和甲苯(35mL)。反应混合液在100℃搅拌1小时，冷却至室温，减压浓缩。残余物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(10mmol/LNH4HCO3)，流动相B：乙腈，梯度：50％-95％，30分钟)，得到黄色固体状的化合物64b(1.80g，收率59％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：389.9，391.9，393.9，实测值：389.9，391.9，393.9。
步骤4：((7-溴-8-氯异喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(66e)的制备
在氮气氛围下，向干燥的250mL三口瓶中依次加入化合物66d(2.0g，5.12mmol)、二甲基亚磺酰亚胺(0.38g，4.10mmol)、1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(BINAP)(0.32g，0.51mmol)、氯(1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦)(2-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)(BINAP PDG2)(0.48g，0.51mmol)、碳酸铯(3.34g，10.242mmol)和1,4-二氧六环(80mL)。反应混合物在100℃搅拌5小时。将反应混合物冷却至室温，倒入冰水(50mL)中，用乙酸乙酯(3x 50mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到淡黄色固体状的化合物66e(1.30g，收率74％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：332.9，334.9，336.9，实测值：333.0，335.0，337.0。
步骤5：3-((8-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-7-基)硫基)丙酸甲酯(66f)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((7-溴-8-氯异喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(66e)(1.90mg，5.69mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率64％。
MS-ESI计算值[M+H]+：373.0，375.0，实测值：373.2，375.2。
步骤6：((8-氯-7-巯基异喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(66g)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((8-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-7-基)硫基)丙酸甲酯(66f)(200mg，0.53mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率85％。
MS-ESI计算值[M+H]+：287.0，289.0，实测值：287.2，289.2。
步骤7：(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((8-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-7-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(66h)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((8-氯-7-巯基异喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(66g)(761mg，2.60mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率48％。
MS-ESI计算值[M+H]+：637.2，638.2，实测值：637.4，638.4。
步骤8：((7-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-8-氯异喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(66)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((8-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-7-基)硫基)吡嗪-2–基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(66h)(120mg，0.18mmol)代替化合物7f，收率28％。
MS-ESI计算值[M+H]+：533.1，535.1，实测值：533.1，535.1。
1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ9.25(d,J＝1.0Hz,1H),8.50(s,1H),8.23(dd,J＝9.4,1.4Hz,2H),7.51(d,J＝8.9Hz,1H),7.20(d,J＝8.9Hz,1H),7.03(d,J＝0.9Hz,1H),4.32-4.14(m,3H),3.95(d,J＝9.1Hz,1H),3.83(d,J＝9.1Hz,1H),3.45(s,6H),3.30-3.10(m,3H),1.87-1.77(m,3H),1.69(d,J＝13.3Hz,1H),1.29(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例67：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-5-氯喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(67)的制备
步骤1：6-溴-5-氯喹啉-4-醇(67b)的制备
实验操作流程同实施例60步骤1，但以反应物4-溴-3-氯苯胺(67a)(10.0g，48.43mmol)代替3-溴-2-氯苯胺(60a)，收率19％。
MS-ESI计算值[M+H]+：257.9，259.9，261.9，实测值：257.8，259.8，261.8。
步骤2：6-溴-5-氯喹啉-4-基三氟甲磺酸酯(67c)的制备
在氮气氛围下，向干燥的100mL三口瓶中依次加入化合物67b(1.60g，5.57mmol)、2,6-二甲基吡啶(2.20g，19.50mmol)、4-二甲氨基吡啶(0.07g，0.55mmol)和二氯甲烷(40mL)。逐滴加入三氟甲磺酸酐(4.96g，16.71mmol)，反应混合物在室温搅拌16小时。倒入冰水(50mL)中，用乙酸乙酯(3x 50mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)，得到棕黄色固体状的化合物67c(1.50g，收率62％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：389.9，391.9，393.9，实测值：390.2，392.2，394.4。
步骤3：((6-溴-5-氯喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(67d)的制备
实验操作流程同实施例66步骤4，但以反应物6-溴-5-氯喹啉-4-基三氟甲磺酸酯(67c)(800mg，1.84mmol)代替7-溴-8-氯异喹啉-3-基三氟甲磺酸盐(66d)，收率61％。
MS-ESI计算值[M+H]+：332.9，334.9，336.9，实测值：333.1，335.1，336.1。
步骤4：3-((5-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(67e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((6-溴-5-氯喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(67d)(370g，0.99mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率58％。
MS-ESI计算值[M+H]+：373.0，375.0，实测值：373.0，375.0。
步骤5：((5-氯-6-巯基喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(67f)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((5-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(67e)(230mg，0.60mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率90％。
MS-ESI计算值[M+H]+：287.0，289.0，实测值：286.9，288.9。
步骤6：N-((3S,4S)-8-(5-((5-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹啉-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(67g)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((5-氯-6-巯基喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(67f)(150mg，0.51mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率60％。
MS-ESI计算值[M+H]+：637.2，638.2，实测值：637.3，638.3。
步骤7：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-5-氯喹啉-4-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(67)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物N-((3S,4S)-8-(5-((5-氯-4-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹啉-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(67g)(200mg，0.31mmol)代替化合物7f，收率32％。
MS-ESI计算值[M+H]+：533.1，535.1，实测值：533.1，535.1。
1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ8.43(d,J＝5.3Hz,1H),8.40-8.34(m,2H),8.32(d,J＝1.3Hz,1H),7.65(d,J＝9.0Hz,1H),7.27(d,J＝5.3Hz,1H),7.11(d,J＝9.0Hz,1H),4.43-4.24(m,3H),4.02(d,J＝9.2Hz,1H),3.90(d,J＝9.2Hz,1H),3.44(s,1H),3.42(s,6H),3.31-3.16(m,2H),1.95-1.81(m,3H),1.74(d,J＝13.2Hz,1H),1.34(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例68：((5-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-4-氯-1H-吲唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(68)的制备
步骤1：5-溴-4-氯-1H-吲唑(68b)的制备
在0℃，向干燥的500mL三口瓶中依次加入化合物68a(10.0g，45.35mmol)、亚硝酸钠(4.69g，68.03mmol)和醋酸(200mL)。在氮气氛下，反应混合物在室温搅拌2小时，减压浓缩。用乙酸乙酯(3x 500mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(500mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到棕黄色固体状的化合物67c(6.00g，收率57％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：230.9，232.9，234.9，实测值：230.8，232.8，234.8。
步骤2：3-((4-氯-1H-吲唑-5-基)硫基)丙酸甲酯(68c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物5-溴-4-氯-1H-吲唑(68b)(2.50g，10.80mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率55％。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.14(d,J＝1.0Hz,1H),7.54(d,J＝8.6Hz,1H),7.38(dd,J＝8.6,1.0Hz,1H),3.67(s,3H),3.18(t,J＝7.4Hz,2H),2.60(t,J＝7.4Hz,2H)。
步骤3：3-((3-溴-4-氯-1H-吲唑-5-基)硫基)丙酸甲酯(68d)的制备
实验操作流程同实施例63步骤4，但以反应物3-((4-氯-1H-吲唑-5-基)硫基)丙酸甲酯(68c)(1.0g，3.69mmol)代替7-氯-6-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲哚-1-羧酸叔丁酯(63d)，收率89％。
1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ7.57(d,J＝8.7Hz,1H),7.42(d,J＝8.7Hz,1H),3.71(s,3H),3.22(t,J＝7.4Hz,2H),2.64(t,J＝7.4Hz,2H)。
步骤4：3-溴-4-氯-5-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(68e)的制备
实验操作流程同实施例63步骤2，但以反应物3-((3-溴-4-氯-1H-吲唑-5-基)硫基)丙酸甲酯(68d)(600mg，1.72mmol)代替6-溴-7-氯-1H-吲哚(63b)，收率78％。
1H NMR(400MHz,氯仿-d)δ8.11(d,J＝8.9Hz,1H),7.61(d,J＝8.9Hz,1H),3.69(s,3H),3.23(t,J＝7.4Hz,2H),2.63(t,J＝7.4Hz,2H),1.71(s,9H)。
步骤5：4-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-5-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(68f)的制备
实验操作流程同实施例19步骤4，但以反应物3-溴-4-氯-5-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(68e)(800mg，1.78mmol)代替3-((3-溴-7-氯苯并[d]异噻唑-6-基)硫基)丙酸甲酯(19d)，收率18％。
MS-ESI计算值[M+H]+：462.1，464.1，实测值：462.2，464.2。
步骤6：((二硫烷二基双(4-氯-1H-吲唑-5,3-二基))双(氮杂亚甲基))双(二甲基-λ6-硫酮)(68g)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物4-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-5-((3-甲氧基-3-氧代丙基)硫基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(68f)(145mg，0.31mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率46％。
MS-ESI计算值[M+H]+：548.0，549.0，550.0，实测值：548.1，549.1，550.1。
步骤7：5-((1-(叔丁氧基羰基)-4-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-1H-吲唑-5-基)二硫基)-4-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(68h)的制备
实验操作流程同实施例63步骤2，但以反应物((二硫烷二基双(4-氯-1H-吲唑-5,3-二基))双(氮杂亚甲基))双(二甲基-λ6-硫酮)(68g)(80mg，0.14mmol)代替6-溴-7-氯-1H-吲哚(63b)，收率37％。
MS-ESI计算值[M+H]+：749.1，750.1，751.1，实测值：749.3，750.3，751.3。
步骤8：4-氯-5-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(68i)的制备
实验操作流程同实施例1步骤7，但以化合物68h(40mg，0.05mmol)代替((2-氯-6-氟-3-巯基苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1g)，收率61％。
MS-ESI计算值[M+H]+：488.0，490.0，实测值：488.2，490.2。
步骤9：((5-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-4-氯-1H-吲唑-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(68)的制备
实验操作流程同实施例1步骤8，但以反应物4-氯-5-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)-1H-吲唑-1-羧酸叔丁酯(68i)(16mg，0.03mmol)代替((2-氯-3-((5-氯吡嗪-2-基)硫基)-6-氟苯基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1h)，收率10％。
MS-ESI计算值[M+H]+：522.1，524.1，实测值：522.1，524.1。
1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ8.14(d,J＝1.5Hz,1H),7.95(d,J＝1.4Hz,1H),7.38(d,J＝8.7Hz,1H),7.26(d,J＝8.7Hz,1H),4.62(s,1H),4.38-4.24(m,1H),4.24-4.06(m,2H),3.96(d,J＝9.1Hz,1H),3.83(d,J＝9.1Hz,1H),3.39(s,6H),3.18(td,J＝13.6,6.3Hz,2H),2.68(s,1H),1.82(t,J＝5.8Hz,3H),1.68(d,J＝13.6Hz,1H),1.30(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例69：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-5-氯异喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(69)的制备
步骤1：(4-溴-3-氯苯基)甲胺(69b)的制备
向干燥的500mL三口瓶中依次加入化合物69a(40.0g，184.79mmol)和四氢呋喃(200mL)。在0℃，逐滴加入1mol/L硼烷四氢呋喃溶液(369mL，369.58mmol)，反应混合物在室温搅拌16小时。加入3mol/L盐酸水溶液(400mL)淬灭，用乙醚(3x 500mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(500mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到灰白色固体状的化合物69b(36.0g，收率88％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：219.9，221.9，223.9，实测值：219.9，221.9，223.9。
步骤2：N-(4-溴-3-氯苄基)-2,2-二乙氧基乙酰胺(69c)的制备
实验操作流程同实施例66步骤2，但以反应物(4-溴-3-氯苯基)甲胺(69b)(5.0g，22.68mmol)代替(3-溴-2-氯苯基)甲胺(66b)，收率94％。
MS-ESI计算值[M+H]+：350.0，352.0，354.0，实测值：350.0，352.0，354.0。
步骤3：6-溴-5-氯异喹啉-3-醇(69d)的制备
在0℃，向干燥的50mL三口瓶中依次加入化合物69c(7.50g，21.39mmol)和浓硫酸(10mL)。反应混合物在60℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，倒入冰水(150mL)中淬灭，用饱和碳酸钠水溶液调节至pH为8，用乙酸乙酯(2x 40mL)萃取。水相用氢氧化钠水溶液调节至pH为8，用二氯甲烷(3x 400mL)萃取，将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(二氯甲烷/甲醇＝10/1)，得到白色固体状的化合物69d(2.20g，收率40％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：257.9，259.9，261.9，实测值：257.9，259.9，261.9。
步骤4：6-溴-5-氯异喹啉-3-基三氟甲磺酸盐(69e)的制备
实验操作流程同实施例66步骤3，但以反应物6-溴-5-氯异喹啉-3-醇(69d)(1.80g，6.96mmol)代替7-溴-8-氯异喹啉-3-醇(66c)，收率28％。
MS-ESI计算值[M+H]+：389.9，391.9，393.9，实测值：390.0，392.0，394.0。
步骤5：((6-溴-5-氯异喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(69f)的制备
实验操作流程同实施例66步骤4，但以反应物6-溴-5-氯异喹啉-3-基三氟甲磺酸盐(69e)(720mg，1.84mmol)代替7-溴-8-氯异喹啉-3-基三氟甲磺酸盐(66d)，收率31％。
MS-ESI计算值[M+H]+：332.9，334.9，336.9，实测值：334.0，335.0，337.0。
步骤6：3-((5-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(69g)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((6-溴-5-氯异喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(69f)(190mg，0.57mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率84％。
MS-ESI计算值[M+H]+：373.0，375.0，实测值：373.1，373.1。
步骤7：((5-氯-6-巯基异喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(69h)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((5-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(69g)(180mg，0.48mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率97％。
MS-ESI计算值[M+H]+：287.0，289.0，实测值：287.0，289.0。
步骤8：(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((5-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)异喹啉-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(69i)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((5-氯-6-巯基异喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(69h)(130mg，0.45mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率69％。
MS-ESI计算值[M+H]+：637.2，639.2，实测值：637.2，639.2。
步骤9：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-5-氯异喹啉-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(69)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以化合物69i(200mg，0.31mmol)代替化合物7f，收率21％。
MS-ESI计算值[M+H]+：533.1，535.1，实测值：533.2，535.2。
1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ8.94(d,J＝0.8Hz,1H),8.49(d,J＝1.4Hz,1H),8.35(d,J＝1.3Hz,1H),8.22(s,1H),7.79(dd,J＝8.8,0.9Hz,1H),7.02(d,J＝1.0Hz,1H),6.73(d,J＝8.7Hz,1H),4.20-4.09(m,2H),3.99(s,2H),3.77(d,J＝8.7Hz,1H),3.57(d,J＝8.7Hz,1H),3.44(s,6H),3.41-3.29(m,2H),3.10(d,J＝5.0Hz,1H),1.82-1.50(m,4H),1.17-1.09(m,4H)。
实施例70：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-5-氯喹喔啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(70)的制备
步骤1：6-溴-5-氯喹喔啉-2-醇(70g)的制备
向干燥的500mL三口瓶中依次加入化合物70f(3.00g，13.54mmol)、乙醛酸一水合物(1.31g，14.22mmol)和乙醇(75mL)。反应混合物在70℃搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(2x 100mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)，得到黄色固体状的化合物70g(527mg，收率15％)。
MS-ESI计算值[M-H]-：256.9，258.9，259.9，实测值：256.9，258.9，259.9。
步骤2：6-溴-5-氯喹喔啉-2-基三氟甲磺酸盐(70a)的制备
实验操作流程同实施例60步骤3，但以反应物6-溴-5-氯喹喔啉-2-醇(70g)(3.0g，11.56mmol)代替3-((8-氯-4-羟基喹啉-7-基)硫基)丙酸甲酯(60c)，收率24％。
1H NMR(300MHz,CDCl3)δ8.89(s,1H),8.12(d,J＝9.1Hz,1H),7.91(d,J＝9.1Hz,1H)。
步骤3：((6-溴-5-氯喹喔啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(70b)的制备
实验操作流程同实施例66步骤4，但以反应物6-溴-5-氯喹喔啉-2-基三氟甲磺酸盐(70a)(2.0g，5.11mmol)代替7-溴-8-氯异喹啉-3-基三氟甲磺酸盐(66d)，收率40％。
MS-ESI计算值[M+H]+：333.9，335.9，337.9，实测值：334.0，336.0，338.0。
步骤4：3-((5-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹喔啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(70c)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((6-溴-5-氯喹喔啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(70b)(675mg，2.01mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率89％。
MS-ESI计算值[M+H]+：374.0，376.0，实测值：374.1，376.1。
步骤5：((5-氯-6-巯基喹喔啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(70d)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((5-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹喔啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(70c)(200mg，0.53mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率97％。
MS-ESI计算值[M+H]+：288.0，290.0，实测值：287.9，289.9。
步骤6：N-((3S,4S)-8-(5-((5-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹喔啉-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(70e)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((5-氯-6-巯基喹喔啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(70d)(154mg，0.53mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率76％。
MS-ESI计算值[M+H]+：638.2，640.2，实测值：638.3，640.3。
步骤7：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-5-氯喹喔啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(70)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以化合物70e(150mg，0.23mmol)代替化合物7f，收率31％。
MS-ESI计算值[M+H]+：534.1，536.1，实测值：534.2，536.2。
1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ8.49(s,1H),8.37-8.32(m,2H),8.29(s,1H),7.66(d,J＝8.9Hz,1H),6.97(d,J＝8.8Hz,1H),4.42-4.22(m,3H),4.01(d,J＝9.1Hz,1H),3.88(d,J＝9.1Hz,1H),3.64(s,6H),3.41(d,J＝4.2Hz,1H),3.23(m,2H),1.86(m,3H),1.74(d,J＝13.2Hz,1H),1.36-1.30(m,3H)。
实施例71：((7-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-8-氯喹喔啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮甲酸盐(71)的制备
/>
步骤1：7-溴-8-氯喹喔啉-2-醇(71b)的制备
向干燥的250mL三口瓶中依次加入化合物71a(3.0g，13.54mmol)、2-氧代乙酸(1.31g，14.22mmol)和乙醇(75mL)。反应混合物在70℃搅拌3小时。将反应混合物冷却至室温，减压浓缩。残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)，得到白色固体状的化合物71b(3.20g，收率91％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：258.9，260.9，262.9，实测值：258.9，260.9，262.9。
步骤2：7-溴-8-氯喹喔啉-2-基三氟甲磺酸盐(71c)的制备
实验操作流程同实施例60步骤3，但以反应物7-溴-8-氯喹喔啉-2-醇(71b)(5.0g，19.27mmol)代替3-((8-氯-4-羟基喹啉-7-基)硫基)丙酸甲酯(60c)，收率26％。
1H NMR(300MHz,氯仿-d)δ8.89(s,1H),8.12(d,J＝9.1Hz,1H),7.91(d,J＝9.1Hz,1H)。
步骤3：((7-溴-8-氯喹喔啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(71d)的制备
在氮气氛围下，向干燥的250mL圆底烧瓶中依次加入化合物71c(1.05g，2.68mmol)、二甲基亚磺酰亚胺(0.20g，2.15mmol)、碳酸铯(1.75g，5.36mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)(1.78g，3.08mmol)、氯[(4,5-双(二苯基膦)-9,9-二甲基氧杂蒽)-2-(2-氨基联苯)]钯(II)(Xantphos Pd G2)(0.24g，0.27mmol)和1,4-二氧六环(50mL)。该反应混合物在氮气氛围下，90℃搅拌4小时。反应混合物冷却至室温，减压浓缩，将得到的残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到黄色固体状的化合物71d(500mg，收率61％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：333.9，335.9，337.9，实测值：333.9，335.9，337.9。
步骤4：3-((5-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹喔啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(71e)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((7-溴-8-氯喹喔啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(71d)(550mg，1.64mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率54％。
MS-ESI计算值[M+H]+：374.0，376.0，实测值：374.1，376.1。
步骤5：((8-氯-7-巯基喹喔啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(71f)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((5-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹喔啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(71e)(150mg，0.40mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率85％。
MS-ESI计算值[M+H]+：288.0，290.0，实测值：288.0，290.0。
步骤6：(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((5-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹喔啉-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(71g)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((8-氯-7-巯基喹喔啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(71f)(115mg，0.40mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率8％。
MS-ESI计算值[M+H]+：638.2，640.2，实测值：638.2，640.2。
步骤7：((7-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-8-氯喹喔啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(71)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(R)-N-((3S,4S)-8-(5-((5-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹喔啉-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(71g)(20mg，0.03mmol)代替化合物7f，收率32％。
MS-ESI计算值[M+H]+：534.1，536.1，实测值：534.1，536.1。
1H NMR(300MHz,甲醇-d4)δ8.37(s,1H),8.31-8.26(m,2H),7.62(d,J＝9.0Hz,1H),7.29(d,J＝8.9Hz,1H),4.37-4.18(m,3H),3.99(d,J＝9.1Hz,1H),3.87(d,J＝9.1Hz,1H),3.55(s,6H),3.37(d,J＝4.3Hz,1H),3.29-3.15(m,2H),1.92-1.80(m,3H),1.72(d,J＝13.2Hz,1H),1.32(d,J＝6.5Hz,3H)。
实施例72：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-5-氯喹唑啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(72)的制备
步骤1：(2-氨基-6-氯苯基)甲醇(72b)的制备
在氮气氛下，向干燥的250mL三口瓶中依次加入化合物72a(10.0g，58.28mmol)和四氢呋喃(120mL)。在0℃，逐滴加入四氢铝锂(4.42g，116.56mmol)，反应混合物在室温搅拌2小时。倒入冰水(150mL)中淬灭，过滤，滤饼用二氯甲烷(50mL)洗涤，滤液用二氯甲烷(3x100mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩得到淡黄色固体状的化合物72b(9.10g)，粗产品直接用于下一步。
MS-ESI计算值[M+H]+：158.0，160.0，实测值：158.0，160.0。
步骤2：2-氨基-6-氯苯甲醛(72c)的制备
向干燥的250mL三口瓶中依次加入化合物72b(9.0g，57.11mmol)、二氧化锰(42.80g，285.53mmol)和二氯甲烷(100mL)。反应混合物在35℃搅拌16小时。过滤，滤饼用二氯甲烷(100mL)洗涤，减压浓缩得到黄色固体状的化合物72c(8.5g)，粗产品直接用于下一步。
MS-ESI计算值[M+H]+：156.0，158.0，实测值：156.1，158.1。
步骤3：6-氨基-3-溴-2-氯苯甲醛(72d)的制备
实验操作流程同实施例33步骤1，但以反应物2-氨基-6-氯苯甲醛(72c)(1.00g，6.43mmol)代替6-氯-1H-吡唑并[3,4-b]吡嗪(33a)，收率93％。
MS-ESI计算值[M+H]+：233.9，235.9，237.9，实测值：234.0，236.0，238.0。
步骤4：6-溴-5-氯喹唑啉-2(1H)-酮(72e)的制备
在氮气氛下，向干燥的25mL三口瓶中依次加入化合物72c(1.40g，5.97mmol)和脲素(3.59g，59.71mmol)。反应混合物在170℃搅拌1.5小时。反应混合物冷却至室温，用水(3x100mL)洗涤，减压浓缩得到黄色固体状的化合物72e(1.50g，收率96％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：258.9，260.9，262.9，实测值：258.9，260.9，262.9。
步骤5：6-溴-2,5-二氯喹唑啉(72f)的制备
向干燥的250mL圆底烧瓶中依次加入化合物72e(4.00g，15.41mmol)和三氯氧磷(80mL)。该反应混合物于110℃搅拌1.5小时。将反应混合物冷却至室温，减压浓缩。用饱和碳酸氢钠水溶液调节至pH为7，用二氯甲烷(3x 500mL)萃取，将合并的有机相用饱和食盐水(1000mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，残余物通过硅胶柱层析色谱法纯化(石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，得到白色固体状化合物72f(1.50g，收率35％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：276.9，278.9，280.9，实测值：277.0，279.0，281.0。
步骤6：((6-溴-5-氯喹唑啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(72g)的制备
向干燥的100mL圆底烧瓶中依次加入化合物72f(500mg，1.80mmol)、二甲基亚磺酰亚胺(1675mg，17.99mmol)、N,N-二异丙基乙胺(DIEA)(1162mg，8.99mmol)和二甲基亚砜(15mL)。该反应混合物在100℃搅拌16小时。反应混合物冷却至室温，反应混合物通过反相液相色谱法纯化(C18柱，流动相A：水(0.1％甲酸)，流动相B：乙腈，梯度：10％-50％，30分钟)，得到黄色固体状化合物72g(500mg，收率83％)。
MS-ESI计算值[M+H]+：333.9，335.9，337.9，实测值：334.0，336.0，338.0。
步骤7：3-((5-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹唑啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(72h)的制备
实验操作流程同实施例1步骤5，但以反应物((6-溴-5-氯喹唑啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(72g)(150mg，0.45mmol)代替((3-溴-2-氯-6-氟苯)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(1e)，收率77％。
MS-ESI计算值[M+H]+：374.0，376.0，实测值：374.1，376.1。
步骤8：((5-氯-6-巯基喹唑啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(72i)的制备
实验操作流程同实施例1步骤6，但以反应物3-((5-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹唑啉-6-基)硫基)丙酸甲酯(72h)(130mg，0.35mmol)代替3-((2-氯-3-((二甲基(氧代)-λ6-硫烷亚基)氨基)-4-氟苯基)硫基)丙酸甲酯(1f)，收率90％。
MS-ESI计算值[M+H]+：288.0，290.0，实测值：288.0，289.0。
步骤9：(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((5-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹唑啉-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(72j)的制备
实验操作流程同实施例11步骤4，但以反应物((5-氯-6-巯基喹唑啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(72i)(130mg，0.45mmol)代替((4-巯基噻吩-3-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(11d)，收率38％。
MS-ESI计算值[M+H]+：638.2，640.2，实测值：638.2，640.2。
步骤10：((6-((5-((3S,4S)-4-氨基-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-8-基)吡嗪-2-基)硫基)-5-氯喹唑啉-2-基)亚氨基)二甲基-λ6-硫酮(72)的制备
实验操作流程同实施例7步骤6，但以反应物(S)-N-((3S,4S)-8-(5-((5-氯-2-((二甲基(氧代)-λ6-亚硫基)氨基)喹唑啉-6-基)硫基)吡嗪-2-基)-3-甲基-2-氧杂-8-氮杂螺[4.5]癸-4-基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(72j)(50mg，0.08mmol)代替化合物7f，收率14％。
MS-ESI计算值[M+H]+：534.1，536.1，实测值：534.2，536.2。
1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ9.51(d,J＝0.8Hz,1H),8.43(s,1H),8.29-8.22(m,2H),7.53(dd,J＝9.1,0.8Hz,1H),7.47(d,J＝9.0Hz,1H),4.34-4.24(m,2H),4.22(d,J＝14.2Hz,1H),3.97(d,J＝9.2Hz,1H),3.85(d,J＝9.2Hz,1H),3.52(s,6H),3.37(d,J＝4.3Hz,1H),3.30-3.12(m,2H),1.87-1.76(m,3H),1.70(d,J＝13.2Hz,1H),1.30(d,J＝6.5Hz,3H).
生物学测试
测试例1：SHP2(全长)酶活性测试评价
该试验方案用于测试化合物对SHP2(全长)酶活性的抑制作用。该方案是基于SHP2(全长)酶和底物DIFMUP的反应。SHP2(全长)酶去除DIFMUP中的磷酸基团，产生荧光DIFMU。SHP2(全长)酶活性可以通过荧光强度的变化来确定。
具体测试步骤：
用DMSO将化合物溶至10mM并储存在-20℃。取100％ DMSO将化合物储液稀释2.5倍至4000μΜ，在384稀释板中(pp-200，labcyte)以1：3进行等比稀释，化合物的梯度浓度为：4000、1333.333、444.444、148.148、49.383、16.461、5.487、1.830、0.610、0.203μM。使用Echo550将50nL化合物稀释液转移到试验板(384孔板，784075，Greiner)的每个孔中。将试验板密封，1000rpm离心1min。加入10μL 2x SHP2(全长)酶(SHP-2，His-Tag，BPSBioscience Cat#79018)和SHP2激活肽(SHP-2Activating Peptide，Sangon，Cat#P16778)的混合液至试验板的每个孔中。试验板1000rpm离心1min，25℃孵育1h。
加入10μL 2x DIFMUP工作液(DIFMUP，Invitrogen,lot:1825397Cat#D6567)至反应板中起始反应。SHP2(全长)反应体系包括：0.032ng/μL SHP2(全长)、0.25μM SHP2激活肽、10μM DIFMUP。测试化合物终浓度：10、3.3333、1.1111、0.3704、0.1235、0.0412、0.0137、0.0046、0.0015、0.0005μM。DMSO的最终浓度为0.55％。将试验板于1000rpm离心1min，25℃孵育1h后，在Victor Nivo35(PerkinElmer)上检测荧光信号。
SHP2(全长)工作液和底物工作液均由试验缓冲液制备。缓冲液由50mM HEPES、100mM NaCl、5mM DTT、2mM EDTA、0.05％ BSA组成。求取每个浓度的数据以及阳性和阴性对照组数据(阳性对照:1000nM RMC4550(Selleck，S8718)；阴性对照:0.55％ DMSO)的平均值，并计算标准差。根据以下公式计算百分抑制率：100×[1–(化合物-阳性对照平均值)/(阴性对照平均值-阳性对照平均值)。
用GraphPad Prism 6软件，利用以下非线性拟合公式来得到化合物的IC50：
Y＝Bottom+(Top–Bottom)/(1+10^((Log IC50–X)×HillSlope))，
其中：X为化合物浓度的对数值；Y为抑制率；Top：最大抑制率；Bottom：最小抑制率；HillSlope：斜率。
测试例2：SHP2(PTP片段)酶活性测试评价
本试验方案用于测试化合物对SHP2(PTP片段)酶活性的抑制能力。方案基于SHP2(PTP片段)酶和底物DIFMUP的反应。SHP2(PTP片段)酶在反应中去除DIFMUP中的磷酸基团，从而产生荧光DIFMU。SHP2(PTP片段)酶活性可以通过此荧光强度的变化来测定。
具体测试步骤：
将10mM化合物储液(用DMSO将化合物溶至10mM并储存在-20℃)用100％DMSO进行2.5倍稀释至4000μΜ，在96孔稀释板中(249944，Nunc)以1：3进行等比稀释，化合物的梯度浓度为：4000、1333.33、444.44、148.1、49.38、16.46、5.49、1.83、0.61、0.203、0.0677、0.0225μM。使用Echo 550将50nl化合物稀释液转移到384孔试验板的对应孔中。密封384孔试验板，以1000rpm离心1min。在预冷的分析缓冲液(50mM Tris-HCl(PH＝7.0)；150mMNacl；5mM DTT；1mM EDTA；0.01％BSA；ddH2O)中制备2X SHP2(PTP片段)酶(SHP2Fragement，abcam，Cat#ab42578)。将10μL 2X SHP2(PTP片段)加入分析板的单个孔中。密封试验板，以1000rpm离心试验板1min。
准备2X DIFMUP工作液(DIFMUP Invitrogen，lot:1825397Cat#D6567)。在分析板的每个孔中加入10μL DIFMUP工作液开始反应。SHP2 PTP反应体系中各成分终浓度：0.001ng/μL SHP2(PTP片段)，10μM DIFMUP。测试化合物终浓度：10、3.33、1.11、0.37、0.123、0.0411、0.0137、0.00457、0.00152、0.00051、0.00017、0.000056μM。DMSO终浓度为0.3％(v/v)。以1000rpm离心1min，室温孵育4小时后，在Victor Nivo35检测荧光信号。
SHP2(PTP片段)工作液和底物工作液均由试验缓冲液制备。缓冲液由50mM HEPES、100mM NaCl、5mM DTT、2mM EDTA、0.05％ BSA组成。求取每个浓度的数据以及阳性和阴性对照组(阳性对照：8000nM BVT948(Abcam，ab141304)；阴性对照：0.3％ DMSO)数据的平均值，并计算标准差。根据以下公式计算百分抑制率：100×[1–(化合物-阳性对照平均值)/(阴性对照平均值-阳性对照平均值)。
用GraphPad Prism 6软件，利用以下非线性拟合公式来得到化合物的IC50：
Y＝Bottom+(Top–Bottom)/(1+10^((Log IC50–X)×HillSlope))，
其中：X为化合物浓度的对数值；Y为抑制率；Top：最大抑制率；Bottom：最小抑制率；HillSlope(斜率)。
测试例3：SHP1酶活性测试评价
本试验方案用于测试化合物对SHP1(全长)酶活性的抑制能力。方案基于SHP1(全长)酶和底物DIFMUP的反应。SHP1(全长)酶在反应中去除DIFMUP中的磷酸基团，从而产生荧光DIFMU。SHP1(全长)酶活性可以通过此荧光强度的变化来测定。
具体测试步骤：
将10mM化合物储液(用DMSO将化合物溶至10mM并储存在-20℃冰箱)用100％DMSO进行5倍稀释至2000μΜ，在96孔稀释板中(249944，Nunc)以1：3进行等比稀释，化合物的梯度浓度为：2000、666.7、222.2、74.1、24.7、8.23、2.74、0.914、0.305、0.102、0.0339、0.0113μM。使用Echo 550将100nL化合物稀释液转移到384孔试验板的对应孔中。密封384孔试验板，以1000rpm离心1min。在预冷的分析缓冲液(50mM Tris-HCl(PH＝7.0)；150mM Nacl；5mMDTT；1mM EDTA；0.01％BSA；ddH2O)中制备2X SHP1(全长)酶(BPS Bioscience，Cat#181219)。将10μL 2X SHP1(全长)加入分析板的单个孔中。密封试验板，以1000rpm离心试验板1min。
准备2X DIFMUP工作液(DIFMUP Invitrogen，lot:1825397Cat#D6567)。在分析板的每个孔中加入10μL DIFMUP工作液开始反应。SHP1反应体系中各成分终浓度：0.05ng/μLSHP1(全长)，5μM DIFMUP。测试化合物终浓度：10、3.33、1.11、0.37、0.123、0.0411、0.0137、0.00457、0.00152、0.00051、0.00017、0.000056μM。DMSO终浓度为0.525％(v/v)。以1000rpm离心1分钟，室温孵育4小时后在Victor Nivo35检测荧光信号。
SHP1(全长)工作液和底物工作液均由实验缓冲液制备。缓冲液由50mM Tris-Hcl、mM NaCl、5mM DTT、1mM EDTA、0.01％ BSA组成。求取每个浓度的数据以及阳性和阴性对照组(阳性对照：250000nM NSC87877(Selleck，S8182)；阴性对照：0.525％ DMSO)数据的平均值，并计算标准差。根据以下公式计算百分抑制率：100×[1–(化合物-阳性对照平均值)/(阴性对照平均值-阳性对照平均值)。
用GraphPad Prism 6软件，利用以下非线性拟合公式来得到化合物的IC50：Y
＝Bottom+(Top–Bottom)/(1+10^((Log IC50–X)×HillSlope))，
其中：X为化合物浓度的对数值；Y为抑制率；Top：最大抑制率；Bottom：最小抑制率；HillSlope(斜率)。
测试例4：ERK蛋白磷酸化检测
具体测试步骤：
将表达KRAS-G12C蛋白的H358细胞(ATCC，CRL-5807)按6000个细胞每孔接种于多聚赖氨酸包被的384孔细胞培养板中(Corning，BD356663)，培养基成分为RPMI1640(Gibco，A10491-01)、10％ FBS(Gibco，10099141C)和1％Pen/Strep(Gibco，15140-122)。于5％二氧化碳细胞培养箱中培养3小时。
用Echo550将200nl梯度稀释的化合物加入到细胞培养基中，DMSO终浓度为0.5％，继续在5％二氧化碳细胞培养箱中培养3小时。用Apricot加入40μL/孔的8％多聚甲醛(Solarbio，P1112)，室温孵育20分钟。用40μL PBS洗两次后加入40μL/孔冷的100％甲醇，室温渗透10分钟。用40μL PBS洗一次后加入20μL/孔的封闭液(LI-COR，927-40000)，室温封闭1小时。去除封闭液，用新封闭液按1:1000稀释兔抗phospho-p44/42MAPK(T202/Y204)抗体(CST，4370S)，按1:2000稀释鼠抗GAPDH(D4C6R)抗体(CST，97166S)，按20μL/孔加入细胞中，于4℃封闭过夜。
PBST洗3次，每次孵育2分钟，之后用封闭液按1:2000稀释羊抗兔800CW抗体(LI-COR，926-32211)和羊抗鼠680RD抗体(LI-COR，926-68070)，按20μL/孔加入细胞中，室温孵育45分钟。PBST洗3次，每次孵育2分钟，最后将细胞培养板倒扣离心，1000rpm，1分钟。之后用Odyssey CLx读取荧光信号值。根据以下公式计算ERK磷酸化的相对表达量：(化合物的荧光信号比值–阳性对照平均值)/(阴性对照平均值-阳性对照平均值)。
数据由XLFit 5.0按4参数公式拟合计算IC50值:
Y＝Bottom+(Top–Bottom)/(1+10^((Log IC50–X)×HillSlope))
其中：阳性对照为MRTX849(Selleck，S8884)组，阴性对照为DMSO组，X为化合物浓度的对数值；Y为ERK磷酸化相对表达量；Top：最大响应；Bottom：基线响应；HillSlope：斜率。
本发明化合物对SHP2(全长)、SHP2(PTP片段)、SHP1和ERK蛋白磷酸化的抑制活性如表1所示。IC50值<10nM标记为A，10-100nM标记为B，100-1000nM标记为C，1000-10000nM标记为D，>10000nM标记为E。
表1本发明化合物对SHP2(全长)、SHP2(PTP片段)、SHP1和ERK蛋白磷酸化的抑制活性
/>
/>
结果显示本发明化合物具有良好的SHP2酶抑制活性以及ERK蛋白磷酸化抑制活性。
测试例5：细胞增殖抑制试验
取对数生长期的H358细胞(ATCC，CRL-5807)和A2058细胞(ATCC，CRL-5807)，以3000个/孔的密度分别接种于96孔细胞培养板(Corning，CLS4520)中，置于95％空气，5％CO2，37℃的水浴培养箱(Thermo Scientific，371)中培养过夜。随后分别向各培养细胞中加入待测溶液，使化合物终浓度分别为10000、3333、1111、370.3、123.4、41.1、13.7、4.6、1.5、0nM。将细胞置于培养箱中继续培养120小时，随后每孔移出100μL培养基，加入100μL检测工作液(Promega，G9683)。将细胞培养板置于平板摇床(其林贝尔，QB-9002)上振摇10分钟后室温避光孵育50分钟，随后利用多功能酶标仪(PerkinElmer，EnVision 2105)进行测试。
用GraphPad Prism 6软件，利用以下非线性拟合公式来得到化合物的IC50：Y＝Bottom+(Top–Bottom)/(1+10^((Log IC50–X)×HillSlope))，
其中：X为化合物浓度的对数值；Y为相对荧光强度；Top：最大抑制率；Bottom：最小抑制率；HillSlope(斜率)。
本发明化合物对H358和A2058细胞生长抑制活性如表2所示。IC50值<50nM标记为A，50-200nM标记为B，200-1000nM标记为C，1000-10000nM标记为D，>10000nM标记为E。
表2本发明化合物对H358和A2058细胞的生长抑制活性
/>
结果显示本发明化合物对依赖于SHP2的H358细胞具有良好的生长抑制活性对非依赖于SHP2的A2058细胞无生长抑制活性。
测试例6：肝微粒体代谢稳定性测试
本测试分为以下两个部分：
a)NADPH存在条件：分别吸取10μ在含有20mg/mL的不同种属肝微粒体(人，Corning，452117；大鼠，Corning，452501；小鼠，Corning，452701)和40μ和浓度为10mM的NADPH(Merk，481973)，加入到350μL的缓冲工作液中(磷酸盐，100mM；MgCl2，5mM)，在37℃共同孵育，肝微粒体终浓度为0.5mg/mL，NADPH终浓度为1mM。
b)NADPH不存在条件：分别吸取10μ别含有20mg/mL的不同种属肝微粒体(人，Corning，452117；大鼠，Corning，452501；小鼠，Corning，452701)和40μ5超纯水，加入到350μ0的缓冲工作液中，在37℃共同孵育，肝微粒体终浓度为0.5mg/mL。
向各反应体系中加入4各反浓度为200μM的化合物溶液，使其终浓度为2μ液。分别在0、15、30、45和60分钟时吸取50μ钟反应体系，向其中加入4倍体积的预冷乙腈，混合均匀后在3,220g下离心40分钟(Eppendorf AG，5810R)。吸取100μ0离心上清溶液与100μ0超纯水混合均匀后利用LC-MS/MS(Shimadzu，LC-30AD；AB Inc，Triple QuadTM 6500+)进行分析。
利用MicroSoft Excel软件根据以下公式进行计算：
半衰期：T1/2＝-(0.693/k)
斜率值k由实施例剩余百分比与孵育时间曲线的自然对数线性回归确定。本发明化合物在不同种属肝微粒体中的稳定性如表3所示。
表3本发明化合物在不同种属肝微粒体中的稳定性
结果显示本发明化合物在不同种属的肝微粒体中较为稳定，清除率较低。
测试例7：肝微粒体代谢稳定性测试
将密度为1.5×106细胞/mL肝细胞(人，Corning，452117；大鼠，Corning，452501；小鼠，Corning，452701)加入96孔培养板中，每孔198μL。随后向每孔中加入2μL的100μM化合物溶液，使待测化合物最终浓度均为1μM。将培养板置于37℃开始反应。分别在0、15、30、60、90、120分钟，吸取25μL反应体系，向其中加入6倍体积的预冷乙腈，混合均匀后在3,220g下离心40分钟(Eppendorf AG，5810R)。吸取100μL离心上清溶液与100μL超纯水混合均匀后利用LC-MS/MS(Shimadzu，LC-30AD；AB Inc，Triple QuadTM 6500+)进行分析。
利用Micro Soft Excel软件根据以下公式进行计算：
半衰期：T1/2＝-(0.693/k)
斜率值k由实施例剩余百分比与孵育时间曲线的自然对数线性回归确定。
本发明化合物在不同种属肝微粒体中的稳定性如表4所示。
表4本发明化合物在不同种属肝细胞中的稳定性
结果显示本发明化合物在不同种属的肝细胞中较为稳定，清除率较低。
测试例8：人工膜片钳系统对hERG的抑制性测试
将hERG稳定表达HEK 293细胞株(Invitrogen，K1236)在含有85％ DMEM培养基(Gibco，10569)、10％胎牛血清(Biosun，BS-0005-500)、0.1mM非必须氨基酸(Gibco，11140)、25mM HEPES(Gibco，15630080)、100U/mL青霉素-链霉素(Gibco，15140-122)、5μg/mL杀稻瘟菌素(Gibco，R21001)和400μg/mL遗传霉素(Gibco，10131-035)体系中培养，使用TrypLETMExpress(Gibco，12604)进行细胞分裂，并保持在40％-80％的融合程度。实验前，将细胞以5×105个/皿的密度培养于盖玻片上，以1μg/mL的强力霉素诱导48h。
使用10×物镜观察细胞，在细胞平面上方聚焦，定位电极尖端。随后切换到40×物镜，利用机械手精细控制，小幅接近单元表面。通过电极夹的侧口轻柔吸入，形成千兆赫的密封。
使用Cfast去除与电压阶跃一致的容量电流。通过重复的、短暂的、强烈的吸力直到膜片破裂来获得整个细胞结构。设置膜电位为-60mv，确保hERG通道不打开。然后使用放大器上的Cslow来消除容量电流的尖峰。保持电势设置为-90mV，持续500ms，记录电流为20千赫，滤波器为10千赫。泄漏电流在-80毫伏下测试500毫秒。记录电流120秒，评估电流稳定性。记录参数高于阈值的稳定细胞用于给药处理。
先对未经过处理的细胞进行测试，建立基线作为对照值。随后向各组细胞中分别加入10μM的化合物，记录5分钟的hERG电流，以达到稳定状态。其中阳性对照品为浓度150nM的多非利特(Innochem，GC41670)，最高浓度的实施例化合物作为内部本底对照以归一化百分比抑制。
电流抑制百分比计算公式如下。
/>
用Graphpad Prism 6.0绘制抑制率-反应曲线，计算IC50值。本发明化合物hERG的抑制活性如表5所示。
表5本发明化合物对hERG的抑制活性
结果显示本发明部分化合物对于hERG活性抑制较弱。
测试例9：细胞色素P450抑制测试
配制工作溶液(MgCl2，5mM；磷酸缓冲盐，100mM；人肝微粒体0.2mg/mL)。吸取178μL工作液，加入1μL 2mM的化合物溶液。随后向各反应体系中加入1μL下述基质药物：对于CYP2A6测试，加入香豆素(400μM，Aladdin，C104165)；对于CYP2B6测试，加入安非他酮(10mM，Alladdin，B129446)；对于CYP2C8测试，加入紫杉醇(1mM，Macklin，P815862)；对于CYP2C9测试，加入甲苯磺丁脲(40mM，Macklin，T836669)；对于CYP2C19测试，加入(s)美芬妥英(10mM，Alladdin，M335343)；对于CYP2D6测试，加入右美沙芬(2mM，WEKEM，WK15025)；对于CYP2E1测试，加入氯唑沙宗(10mM，Macklin，C838423)；对于CYP3A4测试，分别加入咪达唑仑(1mM，Cayman，10385)和睾酮(10mM，Innochem，A81277)。将混合物在37℃预热5min，加入终浓度为1mM的10mM NADPH溶液20μL，37℃进行反应。
在指定的时间点(香豆素：5分钟；安非他酮：20分钟；紫杉醇：10分钟；甲苯磺丁脲：20分钟；(s)美芬妥因：20分钟；右美沙芬：20分钟；氯唑沙宗：20分钟；咪达唑仑：5分钟；睾酮：10分钟)，将样品涡旋5分钟，4℃，3220g离心40分钟。然后将上清液100μL转移到96孔板上，加100μL超纯水后LC-MS/MS分析。
抑制百分比按照如下公式进行计算：
表6本发明化合物对细胞色素P450的抑制活性
结果显示本发明化合物对于细胞色素P450抑制活性较弱。
测试例10：血浆蛋白结合测试
将14.2g/L的Na2HPO4和8.77g/L的NaCl溶于去离子水中配制成碱性溶液。将12.0g/L的Na2HPO4和8.77g/L的NaCl溶于去离子水中配制成酸性溶液。碱性溶液与酸性溶液滴定至pH 7.4。
在室温下解冻血浆(人，HMN322310；大鼠，RAT412117；小鼠，MSE337887)，血浆3220g离心10分钟，收集上清于新鲜管中。
利用DMSO溶解实施例化合物及对照化合物酮康唑(Macklin，K822880)，配制成终浓度为200μM工作液。取3μL工作液与597μL血浆混合，使最终浓度达到1μM(0.5％ DMSO)。
将透析袋在超纯水中浸泡60分钟以分离条带，然后在20％乙醇中浸泡20分钟，最后在透析缓冲液中浸泡20分钟。向每个透析袋加入120μL血浆样品，在等量的透析缓冲液(PBS)中透析。随后将透析板密封，置于培养箱中，37℃，5％ CO2，100rpm孵育6小时。孵育结束后，去除密封，将缓冲室和透析袋中的50μL样品转移到96孔板的孔中。
每个缓冲样品加空白血浆50μL，收集的血浆样品加等量PBS。沉淀蛋白加入300μL室温淬灭液(含内标物乙腈(IS,100nM阿普唑仑，500nM拉贝他洛尔，2μM酮洛芬))。涡旋5分钟，4℃ 3220g离心30分钟。取上清液100μL转移至96孔板，加超纯水100μL进行LC-MS/MS分析。
所有计算均使用Microsoft Excel进行。根据峰面积比确定缓冲室和透析袋中实施例化合物和对照化合物的浓度，按如下公式计算血浆蛋白结合率(％)
表7本发明化合物的血浆蛋白结合率
结果显示本发明化合物具有较强的血浆蛋白结合率。
测试例11：体外渗透性测定
用含有10％ FBS(Gibco，10099141C)和1％ Pen/Strep(Gibco，15140-122)的DMEM细胞培养基(Corning，10-017-CV)将Caco-2细胞(ATCC，HTB-37)稀释至6.86х105个/mL，取细胞悬浮液50μL放入96孔Transwell培养板(Corning，3391)的过滤孔中，置于细胞培养箱在37℃，5％ CO2，95％相对湿度，培养14-18天。
利用DMSO(索莱宝，D8371)将待测化合物进行溶解，得到浓度为10mM的原液。将待测化合物的原液用DMSO稀释至1mM溶液，再用HBSS(10mM HEPES，pH 7.4)稀释至5μM工作液。DMSO在培养体系中的最终浓度为0.5％。
测试前将培养板从培养箱中取出，用预热的HBSS(10mM HEPES，pH 7.4)洗涤两次。
测定化合物在滤膜顶侧(AP)向基底侧(BL)的转运率。向Transwe滤膜顶侧加入125μL 5μM的待测化合物工作液，立即从滤膜顶侧吸取50μL培养基转移到新的96孔板中作为供体端初始液，同时利用235μL HBSS(10mM HEPES，pH7.4)补充到基底侧作为接收液。37℃孵育2小时。
测定化合物在基底侧(BL)向滤膜顶侧(AL)的转运率。取5μM待测化合物工作液285μL加入基底侧，立即从基底侧吸取50μL培养基转移到新的96孔板中作为供体端初始液，同时利用75μL HBSS(10mM HEPES，pH 7.4)补充到基底侧作为接收液。37℃孵育2小时。
孵育结束时，分别取供体侧和受体侧50μL样品移入新的96孔板孔中，然后加入4倍体积的冷乙腈。将样品涡旋5分钟，然后3,220g离心40分钟，取100μL的上清液与适量的超纯水混合后利用LC-MS/MS(岛津，LC-30AD；AB，Triple QuadTM 6500)进行检测。
表观渗透系数(Papp)，可以用以下公式计算:
Papp＝(VA×受体端药物浓度)/(膜表面积×时间×供体端初始药物浓度)
其中VA为受体端孔内体积(单位:mL)，96孔Transwell膜表面积为0.143cm2，时间为总转运时间(单位：秒)。
流出比率将使用以下公式确定：
流出比率＝Papp(B-A)/Papp(A-B)
式中Papp(B-A)表示从基底侧向滤膜顶侧的表观渗透系数，Papp(A-B)表示从滤膜顶侧向基底侧的表观渗透系数。
表8本发明化合物的体外渗透性参数
测试例12：小鼠药代动力学测试
试验用雄性C57BL/6J小鼠(维通利华)共12只，分成4组，每组3只小鼠。其中2组动物分别尾静脉注射1mg/kg的实施例1和实施例66化合物溶液(给药溶媒：10％二甲基亚砜/50％/聚乙二醇400/45％“含10％羟丙基-β-环糊精水溶液”；给药体积：5mL/kg)；另外2组动物分别灌胃给予10mg/kg的实施例1和实施例66化合物的混悬溶液(给药溶媒：含0.5％甲基纤维素和1％吐温-80的生理盐水溶液；给药体积：10mL/kg)。静脉注射组分别于给药后5min、15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h和24h采集全血样本并制备血浆；灌胃给药组分别于给药后15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h、和24h采集全血样本并制备血浆。应用LC-MS/MS方法，分别测定实施例1化合物和实施例66化合物的血药浓度，并根据体内实测的血浆药物浓度计算小鼠体内的药代动力学参数。
表9本发明化合物的小鼠药代动力学参数
实施例1和实施例66化合物在小鼠体内呈现较低的清除率CL(mL/min/kg)，较高的系统暴露量AUClast(h*ng/mL)。
测试例13：小鼠NCI-H358人源细胞肺癌模型药效实验
使用NCI-H358的人源肺癌异种移植模型来评价本发明化合物的体内抗肿瘤作用。实验所用小鼠品系为BALB/c nude，购买于北京安凯毅博生物技术有限公司。
具体操作如下：取处于对数生长期的NCI-H358细胞(ATCC，CRL-5807)重悬于无血清RPMI-1640培养液中，每只实验动物接种包含5×106个细胞的100ul悬液在右侧胁肋部皮下。接种后监测动物的肿瘤体积，待肿瘤长至约157mm3时进行分组给药，每组6只，共6组。分别为：溶剂对照组；实施例1化合物剂量为3mg/kg、10mg/kg和30mg/kg给药组；实施例66化合物剂量10mg/kg和20mg/kg给药组。各组每天灌胃给药1次，给药28天，共给药28次。给药过程中每隔3天量取肿瘤体积，直至给药结束。
通过以下公式计算肿瘤抑制率(TGI)和治疗组瘤体积/对照组瘤体积(T/C)：
TGI＝(1-T/C)×100％
T/C＝100％×(给药组终末肿瘤体积－给药组初始肿瘤体积)/(溶剂对照组终末肿瘤体积－溶剂对照组初始肿瘤体积)
表10本发明化合物在小鼠NCI-H358人源细胞肺癌模型中抗肿瘤效果
注：P值为给药组与对照组之间的统计学差异，其中**＝p≤0.01，***＝p≤0.001，****＝p≤0.0001，ns＝不具有统计学意义。
图1为实施例1和实施例66化合物在H358荷瘤小鼠中的抗肿瘤效果。
结果表明本发明实施例1化合物在10mg/k和30mg/kg，实施例66化合物在10mg/kg和20mg/kg均对NCI-H358的BALB/c nude人源肺癌异种移植模型产生了较强的抑制作用。
测试例14：小鼠Miapaca-2人源胰腺癌模型药效实验
使用Miapaca-2的人源胰腺癌异种移植模型来评价本发明化合物的体内抗肿瘤作用。实验所用小鼠品系为BALB/c nude，购买于北京安凯毅博生物技术有限公司。
具体操作如下：取处于对数生长期的Miapaca-2细胞(ATCC，CRL-1420)重悬于无血清RPMI-1640培养液中，每只实验动物接种包含5×106个细胞的100ul悬液在右侧胁肋部皮下。接种后监测动物的肿瘤体积，待肿瘤长至约190mm3时进行分组给药，每组6只，共4组。分别为：溶剂对照组；实施例1化合物剂量为3mg/kg,10mg/kg和30mg/kg给药组。各组每天灌胃给药1次，给药28天，共给药28次。给药过程中每隔3天量取肿瘤体积，直至给药结束。
通过以下公式计算肿瘤抑制率(TGI)和治疗组瘤体积/对照组瘤体积(T/C)：
TGI＝(1-T/C)×100％
T/C＝100％×(给药组终末肿瘤体积－给药组初始肿瘤体积)/(溶剂对照组终末肿瘤体积－溶剂对照组初始肿瘤体积)
表11本发明化合物在小鼠Miapaca-2人源细胞肺癌模型中抗肿瘤效果
注：P值为给药组与对照组之间的统计学差异，其中****＝p≤0.0001，ns＝不具有统计学意义。
图2为实施例1化合物在Miapaca-2荷瘤小鼠中的抗肿瘤效果。
结果表明本发明实施例1化合物在10mg/k和30mg/kg，对Miapaca-2的BALB/c nude人源胰腺癌异种移植模型产生了较强的抑制作用。

Claims (6)

1.一种化合物或其可药用盐，其选自：
2.一种药物组合物，其包含根据权利要求1所述的化合物或其可药用盐，以及药学可接受的赋形剂或载体。
3.根据权利要求1所述的化合物或其可药用盐或者根据权利要求2所述的药物组合物在制备含Src同源区2结构域蛋白酪氨酸磷酸酶2(SHP2)抑制剂中的用途。
4.根据权利要求1所述的化合物或其可药用盐或者根据权利要求2所述的药物组合物在制备用于预防和/或治疗与SHP2活性相关的疾病的药物中的用途。
5.根据权利要求4所述的用途，其中所述与SHP2活性相关的疾病选自努南综合征、豹纹综合征、糖尿病、肥胖和癌症。
6.根据权利要求5所述的用途，其中所述癌症选自神经母细胞瘤、急性骨髓白血病、青少年白血病、青少年骨髓单核细胞性白血病、肺癌、肝癌、胃癌、喉癌、口腔癌、乳癌、结肠直肠癌。
CN202280006844.XA 2021-09-27 2022-09-27 磺胺酮类化合物及其制备方法和医药用途 Active CN116323566B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111135326 2021-09-27
CN2021111353261 2021-09-27
PCT/CN2022/121712 WO2023046198A1 (zh) 2021-09-27 2022-09-27 磺胺酮类化合物及其制备方法和医药用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN116323566A CN116323566A (zh) 2023-06-23
CN116323566B true CN116323566B (zh) 2024-05-17

Family

ID=85720153

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280006844.XA Active CN116323566B (zh) 2021-09-27 2022-09-27 磺胺酮类化合物及其制备方法和医药用途

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN116323566B (zh)
WO (1) WO2023046198A1 (zh)

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116568308A (zh) * 2021-01-29 2023-08-08 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 一类杂环类shp2抑制剂、其制备方法及用途

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109983001B (zh) * 2016-07-12 2023-04-04 锐新医药公司 作为变构shp2抑制剂的2,5-双取代型3-甲基吡嗪及2,5,6-三取代型3-甲基吡嗪
US11591336B2 (en) * 2017-05-26 2023-02-28 D. E. Shaw Research, Llc Substituted pyrazolo[3,4-b]pyrazines as SHP2 phosphatase inhibitors
MX2020009782A (es) * 2018-03-21 2021-01-20 Relay Therapeutics Inc Inhibidores de la fosfatasa shp2 y métodos para su uso.
TW202028183A (zh) * 2018-10-10 2020-08-01 大陸商江蘇豪森藥業集團有限公司 含氮雜芳類衍生物調節劑、其製備方法和應用
WO2021088945A1 (zh) * 2019-11-08 2021-05-14 南京圣和药业股份有限公司 作为shp2抑制剂的化合物及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116568308A (zh) * 2021-01-29 2023-08-08 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 一类杂环类shp2抑制剂、其制备方法及用途

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023046198A1 (zh) 2023-03-30
CN116323566A (zh) 2023-06-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2555224T3 (es) Inhibidores de aminopirimidina cinasa
EP2331530B1 (en) Fused multicyclic compounds as protein kinase inhibitors
JP5400626B2 (ja) 置換イミダゾおよびトリアゾロピリミジン類
CN115353509A (zh) 含氮杂芳类衍生物调节剂、其制备方法和应用
JP5134548B2 (ja) 過剰増殖性疾患の処置のためのＥｒｂＢＩ型受容体チロシンキナーゼ阻害剤としてのＮ４−フェニルキナゾリン−４−アミン誘導体および関連化合物
ES2797955T3 (es) Moduladores de la ruta de hedgehog
CN113061132B (zh) 一类稠环内酰胺类化合物、制备方法和用途
PT1973910E (pt) Inibidores de pirrolo [3,2-c] piridina-4-ona 2-indolinona proteína cinase
JP2023510929A (ja) ヘテロアリール誘導体、その製造方法およびその使用
JP6594571B2 (ja) マルチキナーゼ阻害剤化合物、並びにその結晶形及びその使用
EP3772513A1 (en) Shp2 inhibitors
AU2005289644A1 (en) Imidazo{4,5-b}pyrazinone inhibitors of protein kinases
BR112013014914B1 (pt) Composto, composição farmacêutica e uso de um composto
CN113166156B (zh) 酪氨酸激酶抑制剂、组成及其方法
JP2024521895A (ja) ユビキチンリガーゼに結合しｍｃｌ－１タンパク質を標的とする二官能性化合物を用いた標的タンパク質分解
WO2019062329A1 (zh) 4,6,7-三取代1,2-二氢吡咯并[3,4-c]吡啶/嘧啶-3-酮衍生物及用途
KR101937529B1 (ko) 신규한 피리미딘-2,4-디아민 유도체 및 이를 유효성분으로 함유하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
CN116323566B (zh) 磺胺酮类化合物及其制备方法和医药用途
CN113164481A (zh) 环烷-1,3-二胺衍生物
EP4358954A1 (en) Cdk2 inhibitors and methods of using the same
CN117677614A (zh) 具有akt激酶抑制活性的杂环化合物及其制备方法和医药用途
MX2008009811A (en) Benzazole derivatives, compositions, and methods of use as aurora kinase inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant