CN116322769A - 用于治疗多发性骨髓瘤的方法 - Google Patents

Abstract

本发明描述了使用GPRC5DxCD3双特异性抗体治疗血液恶性肿瘤的方法。该血液恶性肿瘤可以是复发性或难治性多发性骨髓瘤，并且该GPRC5DxCD3双特异性抗体可以是塔奎妥单抗。

Description

用于治疗多发性骨髓瘤的方法

序列表

本申请包含已经以ASCII格式电子递交的序列表，并且据此全文以引用方式并入。所述ASCII副本创建于2021年8月3日，命名为“序列表065768_89US4txt”，并且大小为26.8千字节。

技术领域

公开了使用GPRC5DxCD3双特异性抗体治疗血液恶性肿瘤，特别是复发性或难治性多发性骨髓瘤的方法。

背景技术

G蛋白偶联受体C5家族亚型D(GPRC5D)是2001年首次鉴定出的孤儿非典C类GPCR(

-Osborne等人，Biochim Biophys Acta.,1518(3):237-248,2001)。GPRC5D及其他5族GPCR通常具有C类受体的较短氨基端结构域，并因此预测在构象上类似于A类受体。在这点上，它们是独特的，与C类GPCR具有序列同源性，并且预测结构拓扑学与A类受体相当。GPRC5D活化的功能结果尚未描述，并且配体仍然未知。其基因具有三个外显子并且位于人的染色体12p13.3上。GPRC5D受体在不同物种间高度保守并且与食蟹猴GPRC5D共享92％的同一性。

GPRC5D mRNA主要表达于MM患者的所有恶性浆细胞中(Atamaniuk J A等人，Eur JClin Invest,42(9)953-960；2012；Frigyesi-blood和Cohen等人，Hematology 18(6):348-35；2013)。GPRC5D的表达在患者间有差异并且与浆细胞负荷和遗传畸变如Rb-1缺失密切相关(Atamaniuk J A等人，Eur J Clin Invest,42(9)953-960；2012)。

多发性骨髓瘤(MM)是第二常见的血液恶性肿瘤，并且占所有癌症死亡的2％。MM是一种异质性疾病，并且主要由染色体易位引起，尤其是t(11；14)、t(4；14)、t(8；14)、del(13)、del(17)(Drach等人，Blood.1998；92(3):802-809；Gertz等人，Blood.2005；106(8).2837-2840；Facon等人，Blood.2001；第97卷第6期：第1566-1571页)。因为骨髓浸润、骨破坏、肾衰竭、免疫缺陷以及癌症诊断的心理负担，所以受MM影响的患者可能经历各种疾病相关症状。基于在2009年和2015年之间诊断患有MM的人，MM的5年相对存活率为大约51％。这突出了MM是难以治疗的疾病，其中目前没有足够的治愈选择。

复发性和难治性MM构成特定的未满足的医疗需求。患有复发性和难治性疾病的患者被定义为实现次要应答或更好应答然后在治疗时进展或在其最后一次治疗的60天内经历进展的那些患者。在接受免疫调节药物和蛋白酶体抑制剂两者之后进展的患者的选择有限。先前曾接受大量治疗的患者常常出现免疫系统受损，这可能导致自先前治疗后持续存在的其他疾病病症，诸如机会性感染和毒性(例如，骨髓抑制、周围神经病变、深部静脉血栓症)。此外，患有晚期MM的患者常常是老年人并且易受严重的治疗引发的不良事件(TEAE)的影响，并且继续暴露于这些疗法。在标准可用疗法(诸如蛋白酶体抑制剂、免疫调节药物和单克隆抗体)已经用完后，就没有标准疗法了。塞利尼索、BLENREP(贝兰他单抗莫福汀-blmf)、最近批准的与地塞米松组合施用的Melfufen(美法仑氟灭酰胺)以及最近批准的Ide-cel(idecabtagene viceleucel，以前称为bb2121)在美国被许可用于这种高度难治性疾病背景。这些患者的其他选择是进入临床试验，或者是可以用先前治疗方案给他们提供再治疗(如果用于再治疗的毒性情况允许的话)。但是通常情况下，如果没有其他治疗选择，则只能向他们提供姑息治疗以改善疾病相关症状。在干细胞移植通常不是可行选择的老年人群体中，以及在已耗竭所有可用疗法的患有顽固性疾病的患者中，中值总体生存期仅为8至9个月(Kumar等人，Leukemia,2012,26:149-157；Usmani等人，Oncolgist,2016,21:1355-1361)。对于患有对通常施用的蛋白酶体抑制剂和免疫调节药物难治的疾病的患者，中值总体生存期降低至仅5个月(Usmani等人，2016)。

因此，仍然存在开发用于MM患者的治疗选择的未满足的医学需要，特别是对于用先前的抗癌治疗剂进行的治疗复发或难治的那些。

发明内容

在一个一般方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的血液恶性肿瘤诸如多发性骨髓瘤的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的GPRC5DxCD3双特异性抗体或其抗原结合片段，其中该受试者对于用先前的抗癌疗法进行的治疗复发或难治。

在本申请方法的一个实施方案中，该GPRC5DxCD3双特异性抗体或其抗原结合片段包含GPRC5D结合结构域和CD3结合结构域，该GPRC5D结合结构域包含SEQ ID NO:4的HCDR1、SEQ ID NO:5的HCDR2、SEQ ID NO:6的HCDR3、SEQ ID NO:7的LCDR1、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3，并且该CD3结合结构域包含SEQ ID NO:14的HCDR1、SEQ ID NO:15的HCDR2、SEQ ID NO:16的HCDR3、SEQ ID NO:17的LCDR1、SEQ ID NO:18的LCDR2和SEQ ID NO:19的LCDR3。

在本申请方法的另一个实施方案中，该GPRC5D结合结构域包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区(VL)，并且该CD3结合结构域包含具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH和具有SEQ ID NO:21的氨基酸序列的VL。

在本申请方法的另一个实施方案中，该GPRC5DxCD3双特异性抗体是IgG4同种型，并且包含第一重链(HC1)中第405位处的苯丙氨酸和第409位处的精氨酸，以及第二重链(HC2)中第405位处的亮氨酸和第409位处的赖氨酸。

在本申请方法的另一个实施方案中，该GPRC5DxCD3双特异性抗体还包含HC1和HC2两者中第228位处的脯氨酸、第234位处的丙氨酸和第235位处的丙氨酸。

在本申请方法的另一个实施方案中，该GPRC5DxCD3双特异性抗体包含具有SEQ IDNO:12的氨基酸序列的HC1、具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的第一轻链(LC1)、具有SEQ IDNO:22的氨基酸序列的HC2和具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的第二轻链(LC2)。

在本申请方法的另一个实施方案中，该GPRC5DxCD3双特异性抗体是塔奎妥单抗。

在本申请方法的另一个实施方案中，该GPRC5DxCD3双特异性抗体以约0.2μg/kg至约1200μg/kg的剂量静脉内或皮下施用。

在本申请方法的另一个实施方案中，该GPRC5DxCD3双特异性抗体以约0.2μg/kg至约500μg/kg、优选地约1μg/kg至约300μg/kg、最优选地约10μg/kg至约200μg/kg，诸如约10μg/kg、20μg/kg、30μg/kg、40μg/kg、50μg/kg、60μg/kg、70μg/kg、80μg/kg、90μg/kg、100μg/kg、110μg/kg、120μg/kg、130μg/kg、140μg/kg、150μg/kg、160μg/kg、170μg/kg、180μg/kg、190μg/kg、200μg/kg或介于它们之间的任何值的剂量静脉内施用。该剂量可每月一次、每三周一次(即，每三周一剂)、每两周一次(即，每隔一周一剂)、每周一次、每周两次(即，每周两剂)施用。

在本申请方法的另一个实施方案中，该GPRC5DxCD3双特异性抗体以约0.5μg/kg至约2400μg/kg、约0.5μg/kg至约1200μg/kg、或约1μg/kg至约100μg/kg、或约10μg/kg至约800μg/kg，诸如约10μg/kg、20μg/kg、30μg/kg、40μg/kg、50μg/kg、60μg/kg、70μg/kg、80μg/kg、90μg/kg、100μg/kg、135μg/kg、150μg/kg、200μg/kg、250μg/kg、300μg/kg、350μg/kg、400μg/kg、405μg/kg、450μg/kg、500μg/kg、550μg/kg、600μg/kg、650μg/kg、700μg/kg、750μg/kg、800μg/kg、900μg/kg、950μg/kg、1000μg/kg、1050μg/kg、1100μg/kg、1150μg/kg、1200μg/kg或介于它们之间的任何值的剂量皮下施用。该剂量可每月一次、每三周一次、每两周一次、每周一次或每周两次施用。在某些实施方案中，该GPRC5DxCD3双特异性抗体以约10μg/kg至约1000μg/kg的剂量每周一次皮下施用，诸如以约10μg/kg、20μg/kg、30μg/kg、40μg/kg、50μg/kg、60μg/kg、70μg/kg、80μg/kg、90μg/kg、100μg/kg、135μg/kg、150μg/kg、200μg/kg、250μg/kg、300μg/kg、350μg/kg、400μg/kg、405μg/kg、450μg/kg、500μg/kg、550μg/kg、600μg/kg、650μg/kg、700μg/kg、750μg/kg、800μg/kg、900μg/kg、950μg/kg、1000μg/kg的剂量每周一次施用。在某些其他实施方案中，该GPRC5DxCD3双特异性抗体以约100μg/kg至约2400μg/kg的剂量每两周一次皮下施用，诸如以约100μg/kg、135μg/kg、150μg/kg、200μg/kg、250μg/kg、300μg/kg、350μg/kg、400μg/kg、405μg/kg、450μg/kg、500μg/kg、550μg/kg、600μg/kg、650μg/kg、700μg/kg、750μg/kg、800μg/kg、900μg/kg、950μg/kg、1000μg/kg、1100μg/kg、1200μg/kg、1300μg/kg、1400μg/kg、1500μg/kg、1600μg/kg、1700μg/kg、1800μg/kg、1900μg/kg、2000μg/kg、2100μg/kg、2200μg/kg、2300μg/kg或2400μg/kg或介于它们之间的任何剂量的剂量每两周一次施用。

在本申请方法的另一个实施方案中，施用GPRC5DxCD3双特异性抗体达足以实现完全应答、严格完全应答、非常良好的部分应答、部分应答、最小应答或疾病稳定状态的时间，并且可以继续直至疾病进展或缺乏患者益处。

在本申请方法的另一个实施方案中，施用GPRC5DxCD3双特异性抗体以实现阴性微小残留病(MRD)状态，优选地阴性MRD状态定义为10^-6个骨髓细胞中少于一个肿瘤细胞，如通过下一代测序(NGS)确定的，或至少20％诸如至少20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％或介于它们之间的任何值的总体应答率。

在本申请方法的另一个实施方案中，将GPRC5DxCD3双特异性抗体施用于有需要的受试者导致稳态平均Cmax为10ng/ml至25,000ng/ml诸如100ng/ml至20,000ng/ml或1000ng/ml-10,000ng/ml和稳态平均AUC_0-14d为1000ng h/ml至1,500,000ng h/ml诸如5000ng h/ml至1,000,000ng h/ml或10,000ng h/ml至1,000,000ng h/mL的GPRC5DxCD3双特异性抗体暴露。

在本申请方法的另一个实施方案中，先前抗癌疗法选自由以下项组成的组：沙利度胺、来那度胺、泊马度胺、硼替佐米、艾莎佐米、卡非佐米、帕比司他、氨羟二磷酸二钠、唑来膦酸、达雷木单抗、埃罗妥珠单抗(elotuzumab)、美法仑、塞利尼索、贝兰他单抗莫福汀-blmf、维奈托克、CC-92480(CELMoD(cereblon E3连接酶调节剂)剂)、CAR-T疗法、其他BCMA-定向疗法、其他CD38-定向疗法以及它们中的两种或更多种的组合。在一些实施方案中，该受试者对于用多于一种先前抗癌疗法进行的治疗复发或难治。例如，受试者可能对于2-20种先前抗癌疗法(诸如至少两种、三种、四种、五种、六种、七种、八种、九种、十种或更多种先前抗癌疗法)复发或难治。

在本申请方法的另一个实施方案中，该受试者是人。在某些实施方案中，该受试者患有复发性或难治性多发性骨髓瘤或对标准疗法不耐受。该受试者可以是先前用B细胞成熟抗原(BCMA)定向疗法进行过治疗的。在本申请方法的另一个实施方案中，该方法还包括向受试者施用一种或多种附加抗癌疗法。

在本申请方法的另一个实施方案中，该一种或多种附加抗癌疗法选自由以下项组成的组：自体干细胞移植(ASCT)、放射、手术、化学治疗剂、CAR-T疗法、细胞疗法、免疫调节剂、靶向癌症疗法以及它们中的两种或更多种的组合。

在上述方法中的任一种的另一个实施方案中，该一种或多种附加抗癌疗法选自由以下项组成的组：塞利尼索、贝兰他单抗莫福汀-blmf、伊沙妥昔单抗、维奈托克、来那度胺、沙利度胺、泊马度胺、硼替佐米、卡非佐米、埃罗妥珠单抗、艾莎佐米、美法仑、地塞米松、长春新碱、环磷酰胺、羟基柔红霉素、泼尼松(prednisone)、利妥昔单抗(rituximab)、伊马替尼、达沙替尼、尼洛替尼、博舒替尼、普纳替尼、巴非替尼、塞卡替尼、陶扎舍替、达鲁舍替、阿糖胞苷、柔红霉素、伊达比星、米托蒽醌、羟基脲、地西他滨、克拉屈滨、氟达拉滨、拓扑替康、依托泊苷6-硫鸟嘌呤、皮质类固醇、甲氨蝶呤、6-巯嘌呤、阿扎胞苷、三氧化二砷和全反式视黄酸以及它们中的两种或更多种的组合。

附图说明

当结合附图阅读时，将更好地理解上述发明内容以及下文本发明的详细描述。应当理解，本发明不限于附图中示出的精确实施方案。

图1A示出了潜在递增步骤的示意性示例。

图1B示出了共184名患者的1期研究的研究设计，其包括递增研究，其中每周一次(QW)皮下施用(SC)5μg/kg-800μg/kg塔奎妥单抗，或静脉内施用(IV)0.3μg/kg-180μg/kg塔奎妥单抗，具有和不具有递增给药，其中递增给药包含在全剂量之前的1周内施用于患者的1-3个递增剂量，例如在施用全剂量之前的1周内以10μg/kg和60μg/kg的递增剂量SC施用405μg/kg塔奎妥单抗。

图2A是示出在用60μg/kg的IV剂量(n＝5)和405μg/kg的SC剂量(n＝8)第一次治疗后的平均PK特性的图，并且图2B是示出在405μg/kg的第一SC剂量后增加数量的测试患者(n＝18)的平均PK特性的图，其中，EC₉₀值来自使用来自患有多发性骨髓瘤的患者的骨髓单核细胞(n＝6)的离体细胞毒性测定(EC₉₀，90％最大效应下的塔奎妥单抗浓度；max，最大；min，最小)。

图3A是示出在分析的截止日期2020年10月24日利用SC剂量诱导白介素-2受体亚基α(IL2Rα)的图，并且图3B是示出在分析的截止日期2021年4月18日利用SC剂量诱导程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)+T细胞的图。

图4是示出SC剂量的总体应答率的条形图，(CR，完全应答；ORR，总体应答率；PR，部分应答；sCR，严格完全应答；VGPR，非常良好的部分应答)。

图5A是示出在分析的截止日期2020年10月24日IV剂量的应答持续时间的图，图5B是示出在分析的截止日期2021年4月18日在45μg/kg至800μg/kg范围内的SC剂量的应答持续时间的图，图5C是示出在每周一次405μg/kg下SC的应答持续时间的图，并且图5D是示出在每两周一次800μg/kg下SC的应答持续时间的图(MR＝最小应答；SD＝疾病稳定；PD＝疾病进展)。

图6A和图6B是示出GPRC5D细胞表面表达特性的图。缩写：HD，健康供体；NDMM，新诊断的MM；RRMM，复发性/难治性MM；DARA-R MM，达雷木单抗难治性MM。使用流式细胞术分析骨髓单核细胞(BM-MNC)(HD n＝11，MM n＝74，*P<0.05；***P<0.001；****P<0.0001；ns＝不显著)。

图7是示出塔奎妥单抗介导的MM细胞裂解的图。将HD外周血MNC+荧光素酶转导的细胞系(比率10:1)与系列稀释的塔奎妥单抗一起温育，48小时后读出生物发光成像。

图8是示出原代MM细胞裂解的图。将新鲜分离的BM-MNC与系列稀释的塔奎妥单抗或对照抗体一起温育，48小时后读出FACS(EC₅₀＝50％最大效应下的塔奎妥单抗浓度)。

图9A-图9D是示出预处理和细胞遗传学异常对塔奎妥单抗介导的裂解的影响的图。将新鲜分离的BM-MNC与系列稀释的塔奎妥单抗一起温育(n＝45)，48小时后读出FACS。RRMM：先前系列＝3，88％来那度胺难治性，24％硼替佐米难治性。DARA-R MM：先前系列＝6，100％来那度胺难治性，60％硼替佐米难治性，100％达雷木单抗难治性。标准风险细胞遗传学n＝28，高风险n＝10。

图10A-图10C是示出塔奎妥单抗对肿瘤和免疫特性的影响的图。基于所指示变量的中值组-值将样品分组。

图11A-图11D是示出Treg对塔奎妥单抗功效的影响的图。(A)使用免疫磁性细胞分离试剂盒从健康供体来源的血沉棕黄层分离Treg和CD4+CD25-效应T细胞，并且通过流式细胞术确定基线免疫细胞频率和分离级分的纯度，描绘代表性密度图；(B)在抗CD3/CD28珠的存在下，将紫示踪剂标记的T细胞与或不与Treg一起温育5天，使用流式细胞术读出增殖(n＝3)。(C)将荧光素酶转导的RPMI-8226细胞系与4μg/mL塔奎妥单抗在不同条件下温育48小时(n＝3)。(D)分别使用流式细胞术和ELISA测量上清液中的细胞因子和粒酶B(*P<0.05；**P<0.01，***P<0.001；****P<0.0001)。

图12A和图12B是示出骨髓基质细胞(BMSC)对塔奎妥单抗功效的影响的图。(A)将荧光素酶转导的MM细胞系与患者来源的基质细胞(比率1:2)+HD PBMC(PBMC:MM比率10:1)和系列稀释的塔奎妥单抗一起温育48小时。(B)将基质细胞直接置于含有MM细胞和PBMC的孔中(直接)或置于transwell插入物中(间接)。

图13A-图13C是示出患者特异性因子可决定对靶向不同药剂的T细胞重定向剂的应答的图。在41个MM患者来源的BM样品中确定塔奎妥单抗和靶向BCMA的双特异性抗体特立妥单抗(仅在肿瘤结合结构域方面不同)两者的单一药剂活性(*P<0.05；**P<0.01，ns＝不显著)。

图14是示出在研究期间用每周一次(QW)皮下(SC)施用塔奎妥单抗治疗的患者中的最大细胞因子释放综合征(CRS)级别的图。RP2D代表推荐2期剂量，其以405μg/kg施用，递增剂量为10μg/kg和60μg/kg；CRS根据Lee等人Blood.2014.124:188进行分级。

具体实施方式

结合形成本公开一部分的附图，并参考以下具体实施方式，可更容易地理解本发明所公开的方法。应当理解，本发明所公开的方法不限于本文所描述和/或示出的具体方法，并且本文所用的术语仅用于以举例方式描述具体实施方案，并不旨在限制受权利要求书保护的方法。本文引用的所有专利、公布的专利申请和出版物均以引用方式并入本文，如同在本文中进行了充分阐述。

如本文所用，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数形式。

与说明书的各方面相关的各种术语在说明书和权利要求书中通篇使用。除非另外指明，否则此类术语被赋予本领域的普通含义。其他具体定义的术语应按照与本文所提供的定义相符的方式理解。

如本文所用，术语“约”相对于数值范围、截止值、特定值使用时，是指处于如本领域的普通技术人员所确定的特定值的可接受误差范围之内，其将部分取决于该值是如何测量或确定的，即测量系统的限制。在某一测定、结果或实施方案的上下文中，除非实施例或说明书其他地方内另有明确说明，否则“约”是指在根据本领域惯例的一个标准偏差之内或多至5％的范围(取较大者)。

如本文所用，术语“抗体”广义上是指并包括免疫球蛋白分子，具体包括单克隆抗体，包括鼠科动物单克隆抗体、人单克隆抗体、人源化单克隆抗体和嵌合单克隆抗体，抗原结合片段，多特异性抗体(诸如双特异性抗体、三特异性抗体、四特异性抗体等)，二聚、四聚或多聚抗体，单链抗体、结构域抗体，以及包含具有所需特异性的抗原结合位点的免疫球蛋白分子的任何其他经修饰构型。“全长抗体”包含由二硫键互连的两条重链(HC)与两条轻链(LC)以及它们的多聚体(例如IgM)。每条重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(由结构域CH1、铰链、CH2和CH3构成)构成。每条轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)构成。VH区和VL区可进一步细分为超变区，该超变区称为互补决定区(CDR)，散布其间的框架区(FR)。各个VH和VL由三个CDR和四个FR片段构成，并按以下顺序从氨基端至羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。免疫球蛋白可根据重链恒定结构域氨基酸序列被指定为五种主要种类，即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。IgA和IgG进一步亚分类为同种型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。基于其恒定域的氨基酸序列，可将任何脊椎物种的抗体轻链指定为两种完全不同的类型即κ和λ中的一种。

如本文所用，术语“抗原结合片段”或“抗原结合结构域”是指免疫球蛋白分子的结合抗原的部分。抗原结合片段可以是合成的、可酶促获得的或经遗传工程改造的多肽，并且含有：VH、VL、VH和VL、Fab、F(ab')2、Fd和Fv片段；由一个VH结构域或一个VL结构域组成的结构域抗体(dAb)；鲨鱼可变IgNAR结构域；驼峰化VH结构域；由模拟抗体的CDR(诸如FR3-CDR3-FR4部分、HCDR1、HCDR2和/或HCDR3以及LCDR1、LCDR2和/或LCDR3)的氨基酸残基组成的最小识别单元。VH和VL结构域可经由合成接头连接在一起以形成各种类型的单链抗体设计，其中在VH和VL结构域由单独的单链抗体构建体表达的情况下，VH/VL结构域可在分子内或分子间配对，以形成单价抗原结合位点，诸如单链Fv(scFv)或双价抗体；例如在国际专利公布号WO1998/44001、WO1988/01649、WO1994/13804和WO1992/01047中有所描述。

如本文所用，术语“双特异性”是指特异性地结合两个不同抗原或同一抗原内的两个不同表位的抗体。双特异性抗体可能对其他相关的抗原具有交叉反应性，例如，对来自其他物种(同源)(诸如人或猴，例如食蟹猴(Macaca cynomolgus)(cynomolgus,cyno)或黑猩猩(Pan troglodytes))的相同抗原具有交叉反应性，或者可结合两个或更多个不同抗原之间所共享的表位。

当在抗体或抗体片段的上下文中使用时，“特异性结合”或“特异地结合”或其衍生术语表示经由由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因的片段编码的结构域结合感兴趣的蛋白质的一个或多个表位，而不优先结合含有混合分子群的样本中的其他分子。通常，抗体与同源抗原结合的Kd小于约1×10^-6M，其为通过表面等离子体共振试验或细胞结合试验测得。短语诸如“[抗原]特异性”抗体(例如，GPRC5D特异性抗体)意在表达所述抗体特异性地结合所述抗原。

如本文所用，术语“CH3区域”或“CH3结构域”是指免疫球蛋白的CH3区域。人IgG1抗体的CH3区域对应于氨基酸残基341-446。然而，CH3区域也可以是如本文所述的其他抗体同种型中的任一种。

如本文所用，“GPRC5D×CD3抗体”为多特异性抗体，任选地为双特异性抗体，其包含两个不同的抗原结合区，其中一个结合区特异性地结合至抗原GPRC5D，并且其中另一个结合区特异性地结合至CD3。多特异性抗体可为双特异性抗体、双体抗体或类似分子(关于双体的描述，参见例如PNAS USA 90(14),6444-8(1993))。除GPRC5D的一部分之外，本文提供的双特异性抗体、双体抗体等可结合任何合适的靶。术语“双特异性抗体”应理解为具有由不同抗体序列限定的两个不同抗原结合区的抗体。这能够被理解为不同的靶结合，但也包括结合至一个靶中的不同表位。

如本文所用，术语“G蛋白偶联受体C5家族亚型D”和“GPRC5D”特别包括人GPRC5D蛋白，例如，如SEQ ID NO:1或GenBank登录号BC069341、NCBI参考序列：NP_061124.1和UniProtKB/Swiss-Prot登录号Q9NZD1中所述(还可参见Brauner-Osborne,H等人2001,Biochim.Biophys.Acta 1518,237-248)。

SEQ ID NO:1

MYKDCIESTGDYFLLCDAEGPWGIILESLAILGIVVTILLLLAFLFLMRKIQDCSQWNVLPTQLLFLLSVLGLFGLAFAFIIELNQQTAPVRYFLFGVLFALCFSCLLAHASNLVKLVRGCVSFSWTTILCIAIGCSLLQIIIATEYVTLIMTRGMMFVNMTPCQLNVDFVVLLVYVLFLMALTFFVSKATFCGPCENWKQHGRLIFITVLFSIIIWVVWISMLLRGNPQFQRQPQWDDPVVCIALVTNAWVFLLLYIVPELCILYRSCRQECPLQGNACPVTAYQHSFQVENQELSRARDSDGAEEDVALTSYGTPIQPQTVDPTQECFIPQAKLSPQQDAGGV

术语“CD3”是指人CD3蛋白质多亚基复合体。CD3蛋白质多亚基复合体由6个不同的多肽链构成。这些多肽链包括CD3γ链(SwissProt P09693)、CD3δ链(SwissProt P04234)、两条CD3ε链(SwissProt P07766)和一条CD3ζ链同源二聚体(SwissProt 20963)，并且该复合体与T细胞受体α和β链缔合。除非另有说明，否则术语“CD3”包括由细胞(包括T细胞)天然表达或者能够在用编码那些多肽的基因或cDNA转染的细胞上表达的任何CD3变体、同种型和物种同源物。例如，人CD3ε可包含SEQ ID NO:2的氨基酸序列。SEQ ID NO:3示出了人CD3ε的细胞外结构域。

SEQ ID NO:2

MQSGTHWRVLGLCLLSVGVWGQDGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDDKNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENCMEMDVMSVATIVIVDICITGGLLLLVYYWSKNRKAKAKPVTRGAGAGGRQRGQNKERPPPVPNPDYEPIRKGQRDLYSGLNQRRI

SEQ ID NO:3

DGNEEMGGITQTPYKVSISGTTVILTCPQYPGSEILWQHNDKNIGGDEDD

KNIGSDEDHLSLKEFSELEQSGYYVCYPRGSKPEDANFYLYLRARVCENC

MEMD

如本文所用，术语“癌症”是指广泛的各种疾病，其特征在于身体中异常细胞的不受控制的生长。不受控制的细胞分裂和生长导致形成侵入相邻组织的恶性肿瘤，并且还可通过淋巴系统或血流转移到身体的远侧部分。“癌症”或“癌症组织”可包括肿瘤。

如本文所用，术语“与……组合”意指将两种或更多种治疗剂以混合物一起、作为单一药剂同时或作为单一药剂以任何顺序依次施用给受治疗者。

如本文所用，术语“互补决定区”(CDR)是指结合抗原的抗体区域。CDR可使用各种描绘来定义，诸如Kabat(Wu等人，J Exp Med，第132卷：第211-250页，1970年)(Kabat等人，“Sequences of Proteins of Immunological Interest”，第5版，Public HealthService，National Institutes of Health，Bethesda,Md.，1991年)、Chothia(Chothia等人，J Mol Biol，第196卷：第901-917页，1987年)、IMGT(Lefranc等人，Dev Comp Immunol，第27卷：第55-77页，2003年)和AbM(Martin和Thornton，J Bmol Biol，第263卷：第800-815页，1996年)。各种描绘和可变区编号之间的对应关系描述于例如Lefranc等人Dev CompImmunol，第27卷：第55-77页，2003年；Honegger和Pluckthun，J Mol Biol，第309卷：第657-670页，2001年；国际免疫遗传学(IMGT)数据库；Dev Comp Immunol，第27卷：第55-77页，2003年；Honegger和Pluckthun，J Mol Biol，第309卷：第657-670页，2001年；国际免疫遗传学(IMGT)数据库；以及Web资源：http://www.imgt.org。可用程序(诸如UCL Business PLC的abYsis)可用于描绘CDR。除非说明书中另有明确地说明，否则如本文所用，术语“CDR”、“HCDR1”、“HCDR2”、“HCDR3”、“LCDR1”、“LCDR2”和“LCDR3”包括由任何上述方法(Kabat、Chothia、IMGT或AbM)定义的CDR。

如本文所用，术语“包含”旨在包括由术语“基本上由……组成”和“由……组成”涵盖的示例；类似地，如本文所用，术语“基本上由……组成”旨在包括由术语“由……组成”所涵盖的示例。除非上下文另有明确要求，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”、“包含”等应被理解为包含性意义，而不是排他性或穷举性意义；也就是说，“包括但不限于”的意义。

如本文所用，术语“增强”或“增强的”是指当与对照分子相比时一种测试分子的一种或多种功能增强，或当与一个或多个对照分子相比时测试分子组合的一种或多种功能增强。可测量的示例性功能是肿瘤细胞杀伤、T细胞活化、相对或绝对T细胞数、Fc介导的效应功能(例如，ADCC、CDC和/或ADCP)或与Fcγ受体(FcγR)或FcRn的结合。“增强的”可为约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更大的增强，或统计意义上显著的增强。

如本文所用，术语“Fcγ受体”(FcγR)是指熟知的FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIb或FcγRIII。活化FcγR包括FcγRI、FcγRIIa和FcγRIII。

如本文所用，术语“人类抗体”是指当施用于人受试者时被优化以具有最小限度的免疫应答的抗体。人抗体的可变区源自人免疫球蛋白序列。如果人抗体包含恒定区或恒定区的一部分，则该恒定区也源自人免疫球蛋白序列。如果人抗体的可变区由使用人种系免疫球蛋白或重排免疫球蛋白基因的系统获得，则该人抗体包含“源自”人起源序列的重链可变区和轻链可变区。此类示例性系统为在噬菌体上展示的人免疫球蛋白基因文库，以及转基因非人动物，诸如携带人免疫球蛋白基因座的小鼠或大鼠。因为用于获得人抗体和人免疫球蛋白基因座的系统之间的差异，所以体细胞突变的引入或有意将取代引入框架或CDR中或两者，因此“人抗体”与在人中表达的免疫球蛋白相比通常包含氨基酸差异。通常，“人抗体”的氨基酸序列与由人种系免疫球蛋白基因或重排免疫球蛋白基因编码的氨基酸序列具有至少约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％的同一性。在一些情况下，“人抗体”可以包含由人框架序列分析得出的共有框架序列(例如，如Knappik等人，2000年，J Mol Biol，第296卷：第57-86页中描述的)，或结合到展示在噬菌体上的人免疫球蛋白基因文库中的合成HCDR3(例如，如Shi等人，2010年，J Mol Biol，第397卷：第385-396页和国际专利公开WO2009/085462中所述。“人抗体”的定义中不包括至少一个CDR源自非人物种的抗体。

如本文所用，术语“人源化抗体”是指其中至少一个CDR来源于非人类物种并且至少一个框架来源于人免疫球蛋白序列的抗体。人源化抗体在框架中可包含取代，使得这些框架可能不是表达的人免疫球蛋白或人免疫球蛋白种系基因序列的精确拷贝。

如本文所用，术语“分离的”是指已经与分子产生于其中的系统(例如，重组细胞)中的其他组分基本上分离和/或从其中纯化出来的分子(诸如合成多核苷酸或蛋白质，如抗体)的同质群体，以及已经受至少一个纯化或分离步骤的蛋白质。如本文所用，术语“分离的抗体”是指基本上不含其他细胞材料和/或化学物质的抗体，并且涵盖分离至更高纯度，诸如80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％纯度的抗体。

如本文所用，术语“单克隆抗体”是指从抗体分子的基本上同质群体中获得的抗体，即，除了可能熟知的改变(诸如从抗体重链移除C末端赖氨酸)或翻译后修饰(诸如氨基酸异构化或脱酰胺、甲硫氨酸氧化或天冬酰胺或谷氨酰胺脱酰胺)之外，构成群体的各个抗体是相同的。单克隆抗体通常结合一个抗原表位。双特异性单克隆抗体结合两个不同的抗原表位。单克隆抗体可在抗体群体内具有异质糖基化。单克隆抗体可以是单特异性的或多特异性的，诸如双特异性的、单价的、二价的或多价的。

如本文所用，术语“突变”是指与参考序列相比，多肽或多核苷酸序列中工程化或天然存在的改变。该改变可以是一个或多个氨基酸或多核苷酸的取代、插入或缺失。

如本文所用，术语“多特异性”是指特异性结合地至少两个不同抗原或同一抗原内的至少两个不同表位的抗体。多特异性抗体可结合例如两个、三个、四个或五个不同抗原，或同一抗原内的不同表位。

当前的IMWG指南将“阴性微小残留病状态”或“阴性MRD状态”或“MRD阴性”定义为满足完全应答(CR)标准的患者中100000个骨髓细胞(10^-5)中少于一个肿瘤细胞。使用下一代测序(NGS)确定阴性微小残留病状态。

如本文所用，术语“药物组合物”是指包含活性成分和药学上可接受的载体的组合物。

如本文所用，术语“药学上可接受的载体”或“赋形剂”是指药物组合物中除活性成分之外的成分，该成分对受试者无毒。

如本文所用，术语“重组体”是指当将来自不同来源的片段连接以产生重组DNA、抗体或蛋白质时，通过重组手段制备、表达、形成或分离的DNA、抗体和其他蛋白质。

如本文所用，术语“降低”或“降低的”是指当与一种或多种对照分子相比时，与对照分子或测试分子的组合相比，测试分子的一种或多种功能的降低。可测量的示例性功能是肿瘤细胞杀伤、T细胞活化、相对或绝对T细胞数、Fc介导的效应功能(例如ADCC、CDC和/或ADCP)或与Fcγ受体(FcγR)或FcRn的结合。“降低的”可为约10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或更大的降低，或统计意义上显著的降低。

如本文所用，术语“难治性”是指对抗癌疗法无应答的癌症。

如本文所用，术语“复发性”是指对治疗有应答但治疗后复发的癌症。

如本文所用，术语“受试者”包括任何人或非人动物。“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人灵长类动物、绵羊、狗、猫、马、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。除非另外指出，术语“患者”或“受试者”可互换使用。

如本文所用，术语“T细胞重定向治疗剂”是指包含两个或更多个结合区的分子，其中这些结合区中的一个结合区特异性结合靶细胞或组织上的细胞表面抗原，并且其中分子的第二结合区特异性结合T细胞抗原。细胞表面抗原的示例包括肿瘤相关抗原，诸如GPRC5D。T细胞抗原的示例包括例如CD3。T细胞重定向治疗剂的这种双靶/多靶结合能力将T细胞募集到靶细胞或组织，诸如具有肿瘤相关抗原的靶细胞或组织，从而导致靶细胞或组织的根除。

如本文所用，术语“治疗有效量”是指在所需剂量和时间段有效实现期望的治疗结果的量。治疗有效量可根据以下因素变化：诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重，以及治疗剂或治疗剂组合在个体中引发期望的应答的能力。有效的治疗剂或治疗剂的组合的示例性指标包括例如改善患者的健康。

如本文所用，术语“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”是指治疗性治疗以及预防性或防御性措施两者，其中目标是防止或减缓(减轻)不期望的生理变化或障碍。有益或期望的临床结果包括症状的减轻、疾病程度的减弱、疾病的稳定(即，未恶化)状态、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态的改善或缓和，以及缓解(不论是部分缓解还是完全缓解)，不论是可检测的还是不可检测的。“治疗”也可意指与受试者未接受治疗时的预期生存期相比延长生存期。需要治疗的个体包括已患有病症或障碍的个体以及易患病症或障碍的个体或者要预防病症或障碍的个体。

如本文所用，术语“肿瘤细胞”或“癌细胞”是指在体内、离体或组织培养物中的癌性、癌前或转化的细胞，其具有自发或诱导的表型变化。这些变化未必涉及新遗传物质的摄取。尽管转化可由感染转化病毒以及掺入新基因组核酸引发，但外源核酸或其摄取也可自发地引发或在暴露于致癌物之后引发，从而使内源基因突变。转化/癌症示例为合适的动物宿主(诸如裸小鼠等)中体外、体内和离体的形态变化、细胞永生、异常生长控制、病灶形成、增殖、恶性肿瘤、肿瘤特异性标志物水平调节、侵入、肿瘤生长。

除非另有明确说明，否则在整个说明书中，根据EU索引进行抗体恒定区中的氨基酸残基的编号，如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD.(1991)中描述的。抗体恒定链编号可见于例如ImMunoGeneTics网站、IMGT Web资源、IMGT科学图表。

本文使用如表1中所示的常规单字母和三字母氨基酸代码。

表1

为了帮助本申请的读者，已将说明书分成各个段落或章节，或者涉及本申请的各个实施方案。这些分割不应被认为是将段落或章节或实施方案的实质与另一段落或章节或实施方案的实质拆开。相反，本领域技术人员将理解，本说明书具有广泛的应用，并且涵盖可设想到的各个章节、段落和句子的所有组合。对任何实施方案的讨论仅意图是示例性的，并且不旨在表明本公开(包括权利要求书)的范围限于这些示例。本申请设想了以任何组合使用可用于本申请的任何适用的组分和/或步骤，而不论是否明确描述特定组合。

GPRC5DxCD3双特异性抗体及其用途

GPRC5D在骨髓中的过表达与患有多发性骨髓瘤的患者的预后不良有关(参见例如，Atamaniuk等人，Eur.J.Clin.Invest.42:953-960(2012))。该GPRC5D在浆细胞谱系上的独有表达使其被指定为抗骨髓瘤抗体的理想靶标。抗GPRC5D抗体和针对GPRC5D和CD3的双特异性抗体描述于例如美国专利号10562968中，该专利的内容全文以引用方式并入本文。

本发明至少部分基于以下发现：GPRC5DxCD3双特异性抗体，诸如塔奎妥单抗，可用于治疗有需要的受试者的血液恶性肿瘤，诸如多发性骨髓瘤，优选地对于用先前的抗癌疗法进行的治疗复发或难治的受试者。

因此，在一个一般方面，本发明涉及一种治疗有需要的受试者的血液恶性肿瘤诸如多发性骨髓瘤的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的GPRC5DxCD3双特异性抗体以治疗血液恶性肿瘤，其中该受试者对于用先前的抗癌疗法进行的治疗复发或难治。

抗体

根据本公开，本领域技术人员已知的任何合适的GPRC5DxCD3双特异性抗体可用于本发明中。

各种双特异性抗体形式包括本文所述的形式和重组IgG样双靶向分子，其中该分子的两侧各自含有至少两种不同抗体的Fab片段或Fab片段的一部分；IgG融合分子，其中全长IgG抗体与额外的Fab片段或Fab片段的部分融合；Fc融合分子，其中单链Fv分子或稳定的双体抗体与重链恒定结构域、Fc区或其部分融合；Fab融合分子，其中不同的Fab片段融合在一起；基于ScFv和双价抗体的重链抗体(例如，结构域抗体、纳米抗体)，其中不同的单链Fv分子或不同的双价抗体或不同的重链抗体(例如，结构域抗体、纳米抗体)彼此融合或与另一蛋白或载体分子或通过臂交换生成的双特异性抗体融合。示例性双特异性形式包括双重靶向分子，包括双重靶向(DT)-Ig(GSK/Domantis)、二合一抗体(Genentech)和mAb2(F-Star)、双重可变结构域(DVD)-Ig(Abbott)、DuoBody(Genmab)、Ts2Ab(MedImmune/AZ)和BsAb(Zymogenetics)、HERCULES(Biogen Idec)和TvAb(Roche)、ScFv/Fc融合体(AcademicInstitution)、SCORPION(Emergent BioSolutions/Trubion，Zymogenetics/BMS)和双亲和重靶向技术(Fc-DART)(MacroGenics)、F(ab)2(Medarex/AMGEN)、双功能或Bis-Fab(Genentech)、对接锁定(DNL)(ImmunoMedics)、二价双特异性(Biotecnol)和Fab-Fv(UCB-Celltech)、双特异性T细胞衔接器(BITE)(Micromet)、串联双价抗体(Tandab)(Affimed)、双重亲和靶向技术(DART)(MacroGenics)、单链双价抗体(Academic)、TCR样抗体(AIT，ReceptorLogics)、人血清白蛋白ScFv融合体(Merrimack)和COMBODY(Epigen Biotech)、双重靶向纳米抗体(Ablynx)、双重靶向仅重链结构域抗体。各种形式的双特异性抗体已描述于例如Chames和Baty，2009年，Curr Opin Drug Disc Dev，第12卷，第276页和Nunez-Prado等人，2015年，Drug Discovery Today，第20卷第5期，第588-594页中。

在一些实施方案中，可用于本发明的GPRC5DxCD3双特异性抗体包含GPRC5D结合结构域，该GPRC5D结合结构域包含SEQ ID NO:4的重链互补决定区1(HCDR1)、SEQ ID NO:5的HCDR2、SEQ ID NO:6的HCDR3、SEQ ID NO:7的轻链互补决定区1(LCDR1)、SEQ ID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3。

在其他实施方案中，GPRC5DxCD3双特异性抗体还包含CD3结合结构域，该CD3结合结构域包含SEQ ID NO:14的HCDR1、SEQ ID NO:15的HCDR2、SEQ ID NO:16的HCDR3、SEQ IDNO:17的LCDR1、SEQ ID NO:18的LCDR2和SEQ ID NO:19的LCDR3。

除非本文另有说明，否则提及抗体可变结构域中的残基编号意指通过Kabat编号系统进行的残基编号。除非本文另有说明，否则提及抗体恒定结构域中的残基编号意指通过EU编号系统进行的残基编号。

在一个实施方案中，可用于本发明的GPRC5DxCD3双特异性抗体包含具有SEQ IDNO:10的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:11的轻链可变区(VL)的GPRC5D结合结构域，以及具有SEQ ID NO:20的VH和SEQ ID NO:21的VL的CD3结合结构域。

在另一个实施方案中，可用于本发明的GPRC5DxCD3双特异性抗体是IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型。在优选的实施方案中，双特异性抗体是IgG4同种型。示例性野生型IgG4Fc区包含SEQ ID NO:24的氨基酸序列。SEQ ID NO:24：

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK

可用于本发明的GPRC5DxCD3双特异性抗体可以是任何同种异型。预期同种异型对双特异性抗体的特性诸如结合或Fc介导的效应功能没有影响。治疗性抗体的免疫原性与增大的输液反应风险和减小的治疗反应持续时间相关联(Baert等人，(2003)N Engl J Med，第348卷：第602-608页)。治疗性抗体在宿主中诱导免疫应答的程度可部分通过抗体的同种异型来测定(Stickler等人，(2011)Genes and Immunity，第12卷：第213-221页)。抗体同种异型与抗体的恒定区序列中特定位置的氨基酸序列变异相关。表2示出了示例性IgG1、IgG2和IgG4同种异型。

表2

在另一个实施方案中，可用于本发明的GPRC5DxCD3双特异性抗体包含一个或多个Fc取代，这些取代降低了双特异性抗体与Fcγ受体(FcγR)的结合和/或降低Fc效应功能，诸如C1q结合、补体依赖性细胞毒性(CDC)、抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)或吞噬作用(ADCP)。特定取代可以与SEQ ID NO:24的野生型IgG4 Fc区进行比较。

可被取代以降低Fc与活化FcγR的结合并且随后降低效应功能的Fc位置包括但不限于以下取代：IgG1上的L234A/L235A、IgG2上的V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S、IgG4上的F234A/L235A、IgG4上的S228P/F234A/L235A、所有Ig同种型上的N297A、IgG2上的V234A/G237A、IgG1上的K214T/E233P/L234V/L235A/G236缺失/A327G/P331A/D365E/L358M、IgG2上的H268Q/V309L/A330S/P331S、IgG1上的S267E/L328F、IgG1上的L234F/L235E/D265A、IgG1上的L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S、IgG4上的S228P/F234A/L235A/G237A/P238S、以及IgG4上的S228P/F234A/L235A/G236缺失/G237A/P238S，其中残基根据EU索引进行编号。

可用于降低CDC的Fc取代包括但不限于K322A取代。取代，诸如S228P取代，还可在IgG4抗体中进行，以增强IgG4稳定性。

在另一个实施方案中，GPRC5DxCD3双特异性抗体可包含在第一CH3结构域中或在第二CH3结构域中或在第一CH3结构域和第二CH3结构域两者中的一个或多个非对称取代。

在另一个实施方案中，该一个或多个非对称取代包括但不限于选自由以下项组成的组的那些：F405L/K409R、野生型/F405L_R409K、T366Y/F405A、T366W/F405W、F405W/Y407A、T394W/Y407T、T394S/Y407A、T366W/T394S、F405W/T394S和T366W/T366S_L368A_Y407V、L351Y_F405A_Y407V/T394W、T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V、T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V、L351Y_Y407A/T366A_K409F、L351Y_Y407A/T366V_K409F、Y407A/T366A_K409F和T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W。

在另一个实施方案中，可用于本发明的GPRC5DxCD3双特异性抗体是IgG4同种型，并且包含第一重链(HC1)中第405位处的苯丙氨酸和第409位处的精氨酸，以及第二重链(HC2)中第405位处的亮氨酸和第409位处的赖氨酸。

在另一个实施方案中，可用于本发明的GPRC5DxCD3双特异性抗体还包含HC1和HC2两者中第228位处的脯氨酸、第234位处的丙氨酸和第235位处的丙氨酸。

在另一个实施方案中，可用于本发明的GPRC5DxCD3双特异性抗体包含SEQ ID NO:12的HC1、SEQ ID NO:13的第一轻链(LC1)、SEQ ID NO:22的HC2和SEQ ID NO:23的第二轻链(LC2)，其中LC1与HC1结合，LC2与HC2结合，并且HC1与HC2连接。

在另一个实施方案中，可用于本发明的GPRC5DxCD3双特异性抗体是塔奎妥单抗，其具有SEQ ID NO:12的HC1、SEQ ID NO:13的LC1、SEQ ID NO:22的HC2和SEQ ID NO:23的LC2。

癌症

本申请的方法可用于治疗癌症，优选地血液恶性肿瘤，更优选地复发性或难治性血液恶性肿瘤。

血液恶性肿瘤的示例可选自多发性骨髓瘤、冒烟型多发性骨髓瘤、未明确诊断意义的单克隆丙种球蛋白病(MGUS)、急性淋巴母细胞白血病(ALL)、弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)、伯基特淋巴瘤(BL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、华氏巨球蛋白血症、浆细胞白血病、轻链淀粉样变性(AL)、前体B细胞淋巴细胞白血病、前体B细胞淋巴细胞白血病、急性髓性白血病(AML)、骨髓增生异常综合征(MDS)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、B细胞恶性肿瘤、慢性髓性白血病(CML)、毛细胞白血病(HCL)、母细胞性浆细胞样树突状细胞瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、边缘区B细胞淋巴瘤(MZL)、粘膜相关淋巴组织淋巴瘤(MALT)、浆细胞白血病、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)、白血病或淋巴瘤。

在一个实施方案中，血液恶性肿瘤是多发性骨髓瘤。

在另一个实施方案中，受试者患有新诊断的多发性骨髓瘤。在另一个实施方案中，受试者对于用先前的抗癌治疗剂(诸如用于治疗多发性骨髓瘤或其他血液恶性肿瘤的治疗剂)进行的治疗复发或难治。

在另一个实施方案中，受试者对一种或多种先前抗癌治疗或疗法是难治性的或复发性的。示例性先前抗癌治疗或疗法包括但不限于

(沙利度胺)、

(来那度胺)、/>

(泊马度胺)、/>

(硼替佐米)、NINLARO(艾莎佐米)、/>

(卡非佐米)、/>

(帕比司他)、/>

(氨羟二磷酸二钠)、/>

(唑来膦酸)、/>

(达雷木单抗)、

(埃罗妥珠单抗)、美法仑、/>

(塞利尼索)、BLENREP(贝兰他单抗莫福汀-blmf)、/>

(维奈托克)、CAR-T疗法、其他BCMA-定向疗法、其他CD38-定向疗法或它们的任何组合。

可以使用各种定性和/或定量的方法来确定疾病的复发或难治性质。根据NCCN指南，“临床复发”被定义为发生下列中的一种或多种：存在癌症生长的直接迹象、器官损伤的迹象、浆细胞瘤或骨病变的数量增加(大至少50％)、钙水平的增加、血液中肌酸酐水平的增加或红细胞数量的减少，并且“从完全应答复发”被定义为在具有完全应答的患者中发生下列中的一种或多种：血液或尿液中M-蛋白的恢复，或骨髓瘤的其他迹象但不满足临床复发进行性疾病的标准。(“进行性疾病”被定义为发生不能由其他病症解释的下列中的一种或多种：血液或尿液中M-蛋白的量增加至少25％，骨髓中浆细胞的数量增加25％，骨损伤的大小或数量增加，或钙水平增加。)

在另一个实施方案中，多发性骨髓瘤是高危多发性骨髓瘤。已知患有高危多发性骨髓瘤的受试者早期复发并且预后和结果不佳。如果受试者患有以下细胞遗传学异常中的一种或多种，则可将受试者分类为患有高危多发性骨髓瘤：t(4；14)(p16；q32)、t(14；16)(q32；q23)、del17p、1qAmp、t(4；14)(p16；q32)和t(14；16)(q32；q23)、t(4；14)(p16；q32)和del17p、t(14；16)(q32；q23)和del17p、或t(4；14)(p16；q32)、t(14；16)(q32；q23)和del17p。在一些实施方案中，患有高危多发性骨髓瘤的受试者可具有一种或多种染色体异常，该一种或多种染色体异常包括：t(4；14)(p16；q32)、t(14；16)(q32；q23)、del17p、1qAmp、t(4；14)(p16；q32)和t(14；16)(q32；q23)、t(4；14)(p16；q32)和del17p、t(14；16)(q32；q23)和del17p；或t(4；14)(p16；q32)、t(14；16)(q32；q23)和del17p，或它们的任何组合。

细胞遗传学异常可例如通过荧光原位杂交(FISH)来检测。在两种染色体易位中，癌基因易位到染色体14q32上的IgH区，从而导致这些基因失调。t(4；14)(p16；q32)涉及成纤维细胞生长因子受体3(FGFR3)和含多发性骨髓瘤SET结构域蛋白(MMSET)(也称为WHSC1/NSD2)的易位，并且t(14；16)(q32；q23)涉及MAF转录因子C-MAF的易位。17p缺失(del17p)涉及p53基因座的丢失。

染色体重排可使用熟知的方法鉴定，例如荧光原位杂交、染色体核型分型、脉冲场凝胶电泳或测序。

组合物

用于本发明的GPRC5DxCD3双特异性抗体可被配制为包含约1mg/mL至约200mg/mL抗体的药物组合物。

在一个实施方案中，药物组合物还包含一种或多种赋形剂。在一些实施方案中，该一种或多种赋形剂包括但不限于缓冲剂、糖、表面活性剂、螯合剂、金属离子清除剂或它们的任何组合。

在另一个实施方案中，药物组合物包含：

约1mg/mL至约200mg/mL的GPRC5DxCD3双特异性抗体，诸如约1mg/mL、约5mg/mL、约10mg/mL、约15mg/mL、约20mg/mL、约25mg/mL、约30mg/mL、约35mg/mL、约40mg/mL、约45mg/mL、约50mg/mL、约60mg/mL、约70mg/mL、约80mg/mL、约90mg/mL、约100mg/mL、约110mg/mL、约120mg/mL或介于它们之间的任何值的GPRC5DxCD3双特异性抗体；

约5mM至约20mM的缓冲剂，诸如约5mM、约10mM、约15mM、约20mM或介于它们之间的任何值的磷酸钠、KH₂PO₄、乙酸钠、组氨酸或柠檬酸钠；

约1％w/v至约20％w/v的糖，诸如约1％w/v、约2％w/v、约3％w/v、约4％w/v、约5％w/v、约6％w/v、约7％w/v、约8％w/v、约9％w/v、约10％w/v、约15％w/v、约20％w/v或介于它们之间的任何值的葡萄糖、蔗糖或纤维二糖；

约0.01％w/v至约2％w/v的表面活性剂，诸如约0.01％w/v、约0.02％w/v、约0.03％w/v、约0.04％w/v、约0.05％w/v、约0.06％w/v、约0.07％w/v、约0.08％w/v、约0.09％w/v、约0.1％w/v、约0.5％w/v、约1％w/v、约1.5％w/v、约2％w/v或介于它们之间的任何值的聚山梨酯80(PS-80)或PS-20；和

约5mM至约40mM的乙二胺四乙酸(EDTA)，诸如约5mM、约10mM、约15mM、约20mM、约25mM、约30mM、约35mM、约40mM或介于它们之间的任何值的EDTA或乙二胺四乙酸盐，pH为约5至6，诸如约5、约5.1、约5.2、约5.3、约5.4、约5.5、约5.6、约5.7、约5.8、约5.9、约6或介于它们之间的任何值。

本文所公开的药物组合物还可包含约0.1mg/mL至约5mg/mL的氨基酸，诸如约0.1mg/mL、约0.2mg/mL、约0.3mg/mL、约0.4mg/mL、约0.5mg/mL、约0.6mg/mL、约0.7mg/mL、约0.8mg/mL、约0.9mg/mL、约1mg/mL、约2mg/mL、约3mg/mL、约4mg/mL、约5mg/mL或介于它们之间的任何值的甲硫氨酸或精氨酸。

在一个实施方案中，可用于本发明的药物组合物包含5mg/ml至20mg/ml诸如5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或介于它们之间的任何值的GPRC5DxCD3双特异性抗体(诸如塔奎妥单抗)、20mM的磷酸钠、10％重量/体积(w/v)的蔗糖、0.06％(w/v)的PS80和25μg/mL的pH为5.4的EDTA。

在另一个实施方案中，本文所公开的药物组合物包含5mg/ml至20mg/ml诸如5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或介于它们之间的任何值的GPRC5DxCD3双特异性抗体(诸如塔奎妥单抗)、10mM至15mM的乙酸钠、8％(w/v)的蔗糖、0.04％(w/v)的PS20和20μg/mL的pH为5.2的EDTA。

在另一个实施方案中，本文所公开的药物组合物包含5mg/ml至20mg/ml诸如5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml或介于它们之间的任何值的GPRC5DxCD3双特异性抗体(诸如塔奎妥单抗)、15mM的KH₂PO₄、10％(w/v)的纤维二糖、0.05％(w/v)的PS20和25μg/mL的pH为5.1的EDTA。

在另一个实施方案中，本文所公开的药物组合物包含2mg/ml至40mg/ml诸如5mg/ml、10mg/ml、15mg/ml、20mg/ml、30mg/ml、40mg/ml或介于它们之间的任何值的GPRC5DxCD3双特异性抗体(诸如塔奎妥单抗)、15mM的组氨酸、8％(w/v)的蔗糖、0.04％(w/v)的PS20和20μg/mL的pH为5.2的EDTA。

施用

根据本发明，GPRC5DxCD3双特异性抗体可通过静脉内输注或皮下注射施用于受试者。

给予患有血液恶性肿瘤诸如多发性骨髓瘤的受试者的GPRC5DxCD3双特异性抗体的剂量足以减轻或至少部分抑制所治疗的疾病。可用于本发明的剂量的示例包括约0.2μg/kg至约1200μg/kg，例如约0.5μg/kg至100μg/kg、约1μg/kg至约800μg/kg、约1μg/kg至约500μg/kg的抗体。合适的剂量包括例如约0.2μg/kg、约0.6μg/kg、约1.2μg/kg、约2.4μg/kg、约4.8μg/kg、约9.6μg/kg、约19.2μg/kg、约20μg/kg、约38.4μg/kg、约40μg/kg、约57.6μg/kg、约60μg/kg、约80μg/kg、约120μg/kg、约180μg/kg、约240μg/kg、约270μg/kg、约300μg/kg、约460μg/kg、约720μg/kg、约800μg/kg、约1000μg/kg、约1200μg/kg、约1600μg/kg、约2000μg/kg、约2400μg/kg或介于它们之间的任何剂量。

在一个实施方案中，GPRC5DxCD3双特异性抗体以约0.2μg/kg至约200μg/kg、或约0.5μg/kg至约180μg/kg、或约1μg/kg至约150μg/kg、或约5μg/kg至约100μg/kg、或约10μg/kg至约70μg/kg的剂量静脉内施用于受试者。用于静脉内施用的剂量的示例包括例如约10μg/kg、20μg/kg、30μg/kg、40μg/kg、50μg/kg、60μg/kg、70μg/kg、80μg/kg、90μg/kg、100μg/kg、110μg/kg、120μg/kg、130μg/kg、140μg/kg、150μg/kg、160μg/kg、170μg/kg、180μg/kg、190μg/kg、200μg/kg或介于它们之间的任何值。该剂量可每月一次、每三周一次、每两周一次、每周一次、每周两次或介于它们之间的任何频率静脉内施用。

在另一个实施方案中，GPRC5DxCD3双特异性抗体以约0.5μg/kg至约2400μg/kg、约0.5μg/kg至约1200μg/kg、或约1μg/kg至约800μg/kg、或约10μg/kg至约500μg/kg的剂量皮下施用于受试者。用于皮下施用的剂量的示例包括例如约10μg/kg、50μg/kg、100μg/kg、135μg/kg、150μg/kg、200μg/kg、250μg/kg、300μg/kg、350μg/kg、400μg/kg、405μg/kg、450μg/kg、500μg/kg、550μg/kg、600μg/kg、650μg/kg、700μg/kg、750μg/kg、800μg/kg、850μg/kg、900μg/kg、950μg/kg、1000μg/kg、1050μg/kg、1100μg/kg、1150μg/kg、1200μg/kg、1600μg/kg、2000μg/kg、2400μg/kg或介于它们之间的任何值。该剂量可每月一次、每三周一次、每两周一次、每周一次、每周两次或介于它们之间的任何频率皮下施用。

也可给予固定单位剂量的GPRC5DxCD3双特异性抗体，例如每次施用50mg、100mg、200mg、500mg或1000mg或介于它们之间的任何值。剂量也可以基于患者的表面积，例如500mg/m²、400mg/m²、300mg/m²、250mg/m²、200mg/m²或100mg/m²或介于它们之间的任何值。可施用多个剂量来治疗血液恶性肿瘤，诸如多发性骨髓瘤，诸如可给予2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个剂量。

GPRC5DxCD3双特异性抗体可在一天、两天、三天、四天、五天、六天、一周、两周、三周、一个月、五周、六周、七周、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月或更长时间之后重复施用。也可以重复治疗过程，按照慢性施用一样。重复施用可为相同剂量或不同剂量。例如，GPRC5DxCD3双特异性抗体可以第一剂量施用第一时间段，随后以第二剂量施用第二时间段。在一个实施方案中，GPRC5DxCD3双特异性抗体可两周一次(即，每两周一次)施用一定周数，随后以第二剂量每周一次(即，每周一次)再施用一定周数，随后以第三剂量每周一次再施用一定周数。

可施用GPRC5DxCD3双特异性抗体，诸如每周一次，持续所需的时段。例如，GPRC5DxCD3双特异性抗体可在治疗开始后第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或40天中的至少一天，或者另选地，在第1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20周中的至少一周，或它们的任何组合，采用单次剂量或者每24、12、8、6、4或2小时一次的分次剂量，或它们的任何组合，以约0.2μg/kg至约2400μg/kg、0.2μg/kg至约1000μg/kg例如约0.3μg/kg至约1000μg/kg、约0.6μg/kg至约600μg/kg、约1.2μg/kg至约500μg/kg的量每2至4天一次提供(例如，用于递增剂量)，然后每周一次、每两周一次、每三周一次或每月一次提供(例如，用于全剂量)。

在一个实施方案中，GPRC5DxCD3双特异性抗体可以约0.3μg/kg、约0.5μg/kg、约1.0μg/kg、约1.5μg/kg、约2.25μg/kg、约2.5μg/kg、约2.75μg/kg、约3μg/kg、约3.25μg/kg、约3.38μg/kg、约3.5μg/kg、约3.75μg/kg、约4μg/kg、约4.25μg/kg、约4.5μg/kg、约4.75μg/kg、约5μg/kg、约7.5μg/kg、约10μg/kg、约11.25μg/kg、约20μg/kg、约30μg/kg、约40μg/kg、约50μg/kg、约60μg/kg、约80μg/kg、约120μg/kg、约180μg/kg、约200μg/kg或介于它们之间的任何剂量的量每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每月一次或介于它们之间的任何频率静脉内施用。

在另一个实施方案中，GPRC5DxCD3双特异性抗体可以约0.3μg/kg、约0.6μg/kg、约1.2μg/kg、约1.5μg/kg、约2.5μg/kg、约5μg/kg、约10μg/kg、约15μg/kg、约20μg/kg、约25μg/kg、约30μg/kg、约40μg/kg、约45μg/kg、约50μg/kg、约55μg/kg、约60μg/kg、约80μg/kg、约120μg/kg、约135μg/kg、约180μg/kg、约240μg/kg、约270μg/kg、约300μg/kg、约350μg/kg、约400μg/kg、约405μg/kg、约720μg/kg、约800μg/kg、约1000μg/kg、约1200μg/kg、约1600μg/kg、约2000μg/kg、约2400μg/kg或介于它们之间的任何剂量的量每周两次、每周一次、每两周一次、每三周一次、每月一次或介于它们之间的任何频率皮下施用。

在一些实施方案中，GPRC5DxCD3双特异性抗体以逐渐增加剂量水平的一次或多次引发施用的方式施用。引发剂量策略可有效用于双特异性T细胞衔接物抗体诸如GPRC5DxCD3双特异性抗体，这是由于这些抗体在初始剂量下引起更显著的急性毒性的潜力。可使用一个或多个引发剂量来确保安全性，获得期望的T细胞适应效果，降低细胞因子水平，并且降低在大多数被治疗的受试者中的症状性细胞因子释放综合征(CRS)的发生率。在每两周一次、每周一次、三周一次或每月一次剂量计划的第1天之前以较高剂量施用引发剂量。

因此，在一个实施方案中，GPRC5DxCD3双特异性抗体以递增(或“引发”)剂量静脉内施用，随后以更高剂量每周一次、每两周一次、每三周一次或每月一次静脉内或皮下施用。例如，GPRC5DxCD3双特异性抗体可以约0.3μg/kg、约0.5μg/kg、约0.6μg/kg、约1.0μg/kg、约1.5μg/kg、约2.25μg/kg、约2.4μg/kg、约3.0μg/kg、约3.38μg/kg、约3.5μg/kg、约3.75μg/kg、约4μg/kg、约4.25μg/kg、约4.5μg/kg、约4.75μg/kg、约5μg/kg或介于它们之间的任何剂量的引发剂量静脉内施用。在引发施用后，GPRC5DxCD3双特异性抗体可以更高剂量诸如约1.0μg/kg、约1.5μg/kg、约2.25μg/kg、约2.5μg/kg、约2.75μg/kg、约3μg/kg、约3.25μg/kg、约3.38μg/kg、约3.5μg/kg、约3.75μg/kg、约4μg/kg、约4.25μg/kg、约4.5μg/kg、约4.75μg/kg、约5μg/kg、约7.5μg/kg、约10μg/kg、约11.25μg/kg、约20μg/kg、约30μg/kg、约40μg/kg、约50μg/kg、约60μg/kg、约80μg/kg、约120μg/kg、约180μg/kg、约200μg/kg或介于它们之间的任何剂量每周一次、每两周一次、每三周一次或每月一次静脉内施用。

在另一个实施方案中，在引发施用后，GPRC5DxCD3双特异性抗体以更高剂量诸如约1.2μg/kg、约1.5μg/kg、约2.5μg/kg、约5μg/kg、约10μg/kg、约15μg/kg、约20μg/kg、约25μg/kg、约30μg/kg、约40μg/kg、约45μg/kg、约50μg/kg、约55μg/kg、约60μg/kg、约80μg/kg、约120μg/kg、约135μg/kg、约180μg/kg、约240μg/kg、约270μg/kg、约300μg/kg、约350μg/kg、约400μg/kg、约405μg/kg、约720μg/kg、约800μg/kg、约1000μg/kg、约1200μg/kg、约1600μg/kg、约2000μg/kg、约2400μg/kg或介于它们之间的任何剂量每周一次、每两周一次、每三周一次或每月一次皮下施用。

在另一个实施方案中，GPRC5DxCD3双特异性抗体以第一递增剂量静脉内施用，随后以第二更高的递增剂量施用，随后以第三更高的剂量每周一次、每两周一次、每三周一次或每月一次施用。例如，GPRC5DxCD3双特异性抗体可以约0.5μg/kg、约1.0μg/kg、约1.5μg/kg、约2.25μg/kg、约2.5μg/kg、约2.75μg/kg、约3.0μg/kg、约3.25μg/kg、约3.5μg/kg或介于它们之间的任何剂量的递增剂量静脉内施用，随后以约5μg/kg、约7.5μg/kg、约10μg/kg、约12.5μg/kg、约15μg/kg或介于它们之间的任何剂量的第二递增剂量静脉内施用，随后以约15μg/kg、约20μg/kg、约30μg/kg、约40μg/kg、约50μg/kg、约60μg/kg、约80μg/kg、约120μg/kg、约180μg/kg或介于它们之间的任何剂量的剂量每周一次静脉内施用。

在另一个实施方案中，GPRC5DxCD3双特异性抗体以第一递增剂量静脉内施用，随后以第二更高的递增剂量施用，随后以第三更高的递增剂量施用，随后以第四更高的剂量每周一次、每两周一次、每三周一次或每月一次施用。例如，GPRC5DxCD3双特异性抗体可以约0.3μg/kg、约0.6μg/kg、约1.2μg/kg、约1.5μg/kg、约1.75μg/kg、约2.0μg/kg、约2.25μg/kg、约2.5μg/kg、约2.75μg/kg、约3μg/kg或介于它们之间的任何剂量的第一递增剂量静脉内施用，随后以约5μg/kg、约7.5μg/kg、约10μg/kg、约12.5μg/kg、约15μg/kg或介于它们之间的任何剂量的第二递增剂量静脉内施用，随后以约40μg/kg、约50μg/kg、约60μg/kg、约70μg/kg、约80μg/kg或介于它们之间的任何剂量的递增剂量静脉内施用，随后以约150μg/kg、约180μg/kg、约200μg/kg或介于它们之间的任何剂量的剂量每周一次、每两周一次、每三周一次或每月一次静脉内施用。

在另一个实施方案中，GPRC5DxCD3双特异性抗体以递增剂量皮下施用，随后以更高剂量每周一次、每两周一次、每三周一次或每月一次施用。例如，GPRC5DxCD3双特异性抗体可以约1.5μg/kg、约5μg/kg、约10μg/kg、约20μg/kg、约40μg/kg、约45μg/kg、约60μg/kg或介于它们之间的任何剂量的递增剂量皮下施用，随后以约5μg/kg、约10μg/kg、约15μg/kg、约20μg/kg、约25μg/kg、约30μg/kg、约40μg/kg、约45μg/kg、约50μg/kg、约55μg/kg、约60μg/kg、约80μg/kg、120μg/kg、约135μg/kg、约180μg/kg、约240μg/kg、约300μg/kg、约270μg/kg、约360μg/kg、约400μg/kg、约405μg/kg、约420μg/kg、约480μg/kg、约540μg/kg、约600μg/kg、约760μg/kg、约920μg/kg、约1000μg/kg、约1200μg/kg、约1600μg/kg、约2000μg/kg、约2400μg/kg或介于它们之间的任何剂量的剂量每周一次皮下施用。

在另一个实施方案中，GPRC5DxCD3双特异性抗体以第一递增剂量皮下施用，随后以第二更高的递增剂量施用，随后以第三更高的剂量每周一次、每两周一次、每三周一次或每月一次施用。例如，GPRC5DxCD3双特异性抗体可以约1.5μg/kg、约5μg/kg、约10μg/kg、约15μg/kg或介于它们之间的任何剂量的递增剂量皮下施用，随后以约30μg/kg、约40μg/kg、约45μg/kg、约60μg/kg或介于它们之间的任何剂量的更高递增剂量皮下施用，随后以约100μg/kg、约135μg/kg、约240μg/kg、约300μg/kg、约400μg/kg、约405μg/kg、约800μg/kg、约1000μg/kg、约1200μg/kg、约1600μg/kg、约2000μg/kg、约2400μg/kg或介于它们之间的任何剂量的剂量每周一次皮下施用。

在另一个实施方案中，GPRC5DxCD3双特异性抗体以第一递增剂量皮下施用，随后以第二更高的递增剂量施用，随后以第三更高的递增剂量施用，随后以第四更高的剂量每周一次、每两周一次、每三周一次或每月一次施用。例如，GPRC5DxCD3双特异性抗体可以约1.5μg/kg、约4μg/kg、约6μg/kg、约8μg/kg、约10μg/kg、约12μg/kg、约14μg/kg、约16μg/kg、约18μg/kg、约20μg/kg或介于它们之间的任何剂量的第一递增剂量皮下施用，随后以约30μg/kg、约45μg/kg、约60μg/kg、约75μg/kg、约100μg/kg或介于它们之间的任何剂量的第二递增剂量皮下施用，随后以约150μg/kg、约200μg/kg、约250μg/kg、约300μg/kg、约350μg/kg、约400μg/kg或介于它们之间的任何剂量的第三递增剂量皮下施用，随后以约500μg/kg、600μg/kg、约700μg/kg、约800μg/kg、约900μg/kg、约1000μg/kg、约1200μg/kg、约1600μg/kg、约2000μg/kg、约2400μg/kg或介于它们之间的任何剂量的剂量每周一次皮下施用。

在另一个实施方案中，施用GPRC5DxCD3双特异性抗体达足以实现完全应答、严格完全应答、非常良好的部分应答、部分应答、最小应答或疾病稳定状态的时间，并且可以继续直至疾病进展或缺乏患者益处。根据本公开，可以通过本领域技术人员已知的任何合适方法来确定疾病状态，该方法包括例如血清和尿液单克隆蛋白浓度、M-蛋白水平、GPRC5D水平的分析。

在某些实施方案中，施用GPRC5DxCD3双特异性抗体达足以实现完全应答的时间，该完全应答的特征在于阴性微小残留病(MRD)状态。根据本公开，可以通过本领域技术人员已知的任何合适方法确定阴性MRD状态。在一些实施方案中，使用下一代测序(NGS)确定阴性MRD状态。在其他实施方案中，使用EuroFlow(一种灵敏的流式细胞术测试)确定阴性MRD状态。在一些实施方案中，确定阴性MRD状态处于10^-4个细胞、10^-5个细胞或10^-6个细胞。在一些实施方案中，GPRC5DxCD3的施用可在实现阴性MRD状态后作为维持疗法继续进行。在另一个实施方案中，在实现阴性MRD状态后中止GPRC5DxCD3的施用。

还可以预防性地施用GPRC5DxCD3双特异性抗体，以便降低罹患癌症诸如冒烟型多发性骨髓瘤(SMM)的风险、延迟癌症进展中事件发生率的发作以及/或者在癌症缓解后降低复发的风险。

组合

在某些实施方案中，本申请的方法还包括向受试者施用一种或多种其他抗癌疗法。

该一种或多种其他抗癌疗法可包括但不限于自体干细胞移植(ASCT)、放射、手术、化学治疗剂、CAR-T疗法、细胞疗法、免疫调节剂、靶向癌症疗法以及它们的任何组合。在某些实施方案中，本申请的方法还包括向受试者施用减少或耗竭Treg的疗法，诸如低剂量环磷酰胺。

该一种或多种其他抗癌疗法还可包括但不限于塞利尼索、贝兰他单抗莫福汀-blmf、伊沙妥昔单抗(isatuximab)、维奈托克、来那度胺、沙利度胺、泊马度胺、硼替佐米、卡非佐米、埃罗妥珠单抗、艾莎佐米、美法仑、CC-92480、地塞米松、长春新碱(vincristine)、环磷酰胺、羟基柔红霉素、泼尼松(prednisone)、利妥昔单抗(rituximab)、伊马替尼、达沙替尼、尼洛替尼、博舒替尼、普纳替尼、巴非替尼、塞卡替尼、陶扎舍替、达鲁舍替、阿糖胞苷、柔红霉素、伊达比星、米托蒽醌、羟基脲、地西他滨、克拉屈滨、氟达拉滨、拓扑替康、依托泊苷6-硫鸟嘌呤、皮质类固醇、甲氨蝶呤、6-巯嘌呤、阿扎胞苷、三氧化二砷和全反式视黄酸和它们的任何组合。

因此，本文提供了用于治疗血液恶性肿瘤(诸如MM，优选地对先前的抗癌疗法复发或难治的MM)的有效量的GPRC5DxCD3双特异性抗体和有效量的其他抗癌疗法的组合。

如本文所用，在向受试者施用两种或更多种疗法或组分的上下文中的术语和短语“组合”、“与……组合”、“共同递送”和“与……一起施用”是指两种或更多种疗法或组分的同时施用、重叠施用或相继施用。“同时施用”是指在同一治疗期内施用两种或更多种疗法或组分。当两种组分“在同一治疗期内”施用时，它们可根据它们自己的施用计划在单独的组合物中施用，只要两种组分的施用期在大约同一天结束或在短时间内诸如在1天、1周或1个月内结束。“重叠施用”是指两种或更多种疗法或组分的施用不在相同的总治疗期内，但具有至少一个重叠治疗期。“相继施用”是指在不同的治疗期期间一个接一个地施用两种或更多种疗法或组分。术语“与……组合”的使用并不限制疗法或组分施用于受试者的次序。例如，第一疗法或组分可在第二疗法或组分施用之前、伴随或同时、或之后施用。

术语“BLRM模型”是指Neuenschwander等人Stat Med.2008.27(13):2420-39中描述的贝叶斯逻辑回归模型。在第1部分(剂量递增)中，根据采用EWOC(药物增量合并药物过量控制)原则的BLRM的剂量限制性毒性(DLT)的概率指导剂量递增。采用EWOC原则的BLRM也将在第2部分(剂量扩展)中实施。当受试者在第一周期期间的计划最大剂量为d时，以下双参数BLRM是DLT概率计算的核心：

其中，π是当塔奎妥单抗在第一周期期间以计划最大剂量＝d给予作为单个药剂时在DLT评价时段期间DLT发生的概率，

并且d*是在第一周期期间的参考计划最大剂量。

虽然已经概括地描述了本发明，但是本发明的实施方案还将在以下实施例中进一步公开，以下实施例不应理解为限制权利要求的范围。

实施例

提供以下实施例以进一步描述本文所公开的实施方案中的一些。这些实施例旨在说明而非限制本发明所公开的实施方案。

抗体和试剂

完全人源化的IgG4抗GPRC5D/抗CD3双特异性抗体塔奎妥单抗(描述于美国专利号10,562,968中，该专利的内容全文以引用方式并入本文)由Janssen Pharmaceuticals制备。它通过培养重组中国仓鼠卵巢细胞，随后分离、色谱纯化和配制而产生。塔奎妥单抗包含GPRC5D结合臂GC5B596和CD3结合臂CD3B219，它们的氨基酸序列分别在表3和表4中示出。

表3.塔奎妥单抗的GPRC5D结合臂的序列

表4.塔奎妥单抗的CD3结合臂的序列

实施例1：塔奎妥单抗在多发性骨髓瘤中的抗性机制和应答决定因素

在该研究中，证明了通过流式细胞术测量的GPRC5D细胞表面表达在该疾病的不同阶段(新诊断(ND)、复发性/难治性(RR)和达雷木单抗难治性(DARA-R))的恶性浆细胞上比在来自健康供体的正常浆细胞上显著更高(图6A)。GPRC5D在MM细胞上的表达也高于在其他免疫细胞上的表达(图6B)。这种选择性表达使其成为免疫疗法的有吸引力的靶标。此外，塔奎妥单抗在GPRC5D+细胞系中显示出显著的活性(图7)。

接下来，分离来自45个MM患者的骨髓单核细胞(BM-MNC)(含有MM细胞、效应细胞和免疫抑制细胞)，并通过流式细胞术分析肿瘤和免疫细胞特性。随后，将细胞与系列稀释的塔奎妥单抗一起温育48小时，之后通过流式细胞术确定CD138+MM细胞的裂解。最高剂量下的平均裂解为61％(图8)，但范围为-5％至97％。然后进一步研究了塔奎妥单抗的抗性机制和应答决定因素。

进一步发现预处理和细胞遗传学异常对塔奎妥单抗介导的裂解没有影响(图9A-图9D)。具体地，在ND-dara幼稚RR和DARA-R MM患者之间的剂量-应答曲线中没有发现差异。尽管塔奎妥单抗介导的T-细胞活化(由CD25+定义)在源自ND患者的样品中略高于dara幼稚RR患者，但组间T细胞脱粒(由CD107+定义)没有差异。重要的是，高风险细胞遗传学异常的存在不损害塔奎妥单抗介导的MM细胞裂解。这表明重度预处理和/或高风险患者可受益于靶向GPRC5D的双特异性抗体疗法。

图10A-图10C示出了肿瘤和免疫特性的影响。靶表达的水平是应答的重要决定因素，如当与较低的GPRC5D表达(较浅点)相比时具有高于中值GPRC5D表达(较深点)的样品中优异的MM细胞裂解所证实的。在具有低T细胞计数或低效应物:靶(E:T)比率的样品中，以及在具有高频率Treg、PD-1+T细胞、HLA-DR+活化T细胞的那些样品中，以及在老年患者中观察到较差的MM细胞裂解。这些应答决定因素也影响塔奎妥单抗介导的T细胞活化和脱粒。GPR5D表达和Treg计数的可变性对塔奎妥单抗功效的影响最大。

如图11A-图11D中所示，进行了附加的细胞系实验并且进一步研究了Treg对塔奎妥单抗功效的影响。从血沉棕黄层纯化Treg和CD4+CD25-效应T细胞。Treg损害T细胞增殖，从而证实它们的抑制功能。与CD4+CD25-T细胞相比，当通过塔奎妥单抗重定向时，Treg杀伤MM细胞的效力显著降低(图11C)。这伴随着IFN-γ、TNF-α、IL-2和粒酶B的分泌减少。具有高Treg计数的患者可受益于Treg耗竭策略，诸如低剂量环磷酰胺。

为了评价BM基质细胞(BMSC)对塔奎妥单抗活性的影响，将MM细胞系与PBMC和患者来源的BMSC共温育。直接的细胞-细胞接触阻碍MM细胞裂解，而间接接触(Transwell)不影响塔奎妥单抗活性(图12A和图12B)。这表明需要细胞-细胞接触来减少塔奎妥单抗介导的MM细胞裂解，而单独的BMSC来源的可溶性因子不损害塔奎妥单抗的活性。由BMSC赋予的针对塔奎妥单抗介导的裂解的保护可能是由于MM细胞的获得性抗性(例如，粘附相互作用后改变的靶表达)和/或T细胞抑制。附加的实验表明，与BMSC接触导致GPRC5D在RPMI-8226和MM.1S细胞上的表达降低，但在UM9细胞上不表达，这与RPMI-8226和MM.1S但不是UM9的BMSC介导的塔奎妥单抗抗性相关。然而，塔奎妥单抗介导的裂解被BMSC抑制，而T细胞活化和脱粒没有减少，表明BMSC诱导了针对T细胞的细胞毒性机制的细胞内在抗性机制。当分别分析CD4和CD8 T细胞时获得类似的结果。虽然不希望受理论的束缚，MM细胞与BMSC的直接接触有助于塔奎妥单抗抗性的诱导，至少部分通过降低GPRC5D在MM细胞上的表达。与已建立的抗MM药剂的组合策略可改善靶向GPRC5D的双特异性的功效。

由于本领域正在研究更多的靶向不同肿瘤相关抗原的T细胞重定向双特异性抗体，因此问题是在双特异性之间是否存在共享的应答决定簇。在塔奎妥单抗和靶向BCMA的双特异性特立妥单抗(仅在肿瘤结合结构域方面不同)两者的41个BM样品中进行单一药剂活性的同时评价(图13A-图13C)。由两种药剂诱导的MM细胞裂解是强相关的。在7个样品中，两种药剂都表现出差的活性(<50％裂解)，而在9个样品中观察到非常好的活性(>80％裂解)。这些组之间的特性比较显示低E:T比率和高频率的Treg显著损害了两种BsAb的功效(图13B)。还显示LDH水平在表现出差的双特异性抗体活性的患者中显著更高(图13C)。总之，这提示患者特异性因子可决定对靶向不同抗原的T细胞重定向剂的应答。

概括地说，GPRC5D是用于免疫治疗策略的有希望的靶标，并且塔奎妥单抗显示出显著的离体抗MM活性，而与疾病阶段或细胞遗传学风险无关。观察到肿瘤相关因子(GPRC5D表达)和BM微环境组成的差异(包括E:T比率和Treg的％)，促成了对塔奎妥单抗应答的可变性。数据还表明旨在优化E:T比率(例如，诱导疗法)或Treg耗竭的策略可改善MM中对双特异性抗体的应答。

实施例2：塔奎妥单抗的非临床药理学研究

双特异性抗体塔奎妥单抗是通过来自两种亲本抗体的受控片段抗原结合臂交换产生的；GC5B596，一种源自使用人GPRC5D DNA和过表达GPRC5D的大鼠嗜碱性白血病细胞的小鼠免疫的抗GPRC5D抗体；和CD3B219，一种源自公共结构域抗体SP34的抗CD3ε抗体，其被进一步人源化并且亲和力成熟。塔奎妥单抗结合人和食蟹猴CD3和GPRC5D，并结合啮齿动物GPRC5D，但不结合啮齿动物CD3(参见例如美国专利号10,562,968)。

塔奎妥单抗与多发性骨髓瘤细胞系的结合

塔奎妥单抗以剂量依赖性方式特异性结合内源性表达GPRC5D的多发性骨髓瘤细胞系，如通过流式细胞术对所有测试的GPRC5D阳性细胞系(H929、MM.1R和OPM-2)所测量的。相比之下，塔奎妥单抗不结合GPRC5D阴性细胞系，即NALM-6和Daudi细胞。

塔奎妥单抗介导的GPRC5D阳性细胞系的体外T细胞依赖性细胞毒作用

在基于流式细胞术的细胞毒性测定中确定塔奎妥单抗在多发性骨髓瘤细胞中的T细胞依赖性杀伤潜力。将渐增浓度的塔奎妥单抗与来自6名健康供体的泛T细胞(3种GPRC5D阳性和2种GPRC5D阴性细胞系)以5:1的效应物:靶(E:T)比率一起温育。这些发现揭示，48小时后塔奎妥单抗在GPRC5D阳性细胞系中诱导细胞死亡，H929、MM.1R、OPM-2的平均半最大有效浓度(EC₅₀)(或20％最大有效浓度-EC₂₀)值分别为0.057(0.029)、0.015(0.007)和0.214(0.091)nM。在阴性对照(GPRC5D-阴性)细胞系或带有与GPRC5D或CD3配对的不相关臂(无效)的对照抗体中没有观察到细胞裂解。为了评估塔奎妥单抗的T细胞活化潜力，在温育48小时后从该测定中收获细胞，并通过流式细胞术分析T细胞活化标记物(CD25)的表达。当与GPRC5D-阳性多发性骨髓瘤细胞和健康供体泛T细胞一起温育时，塔奎妥单抗(而不是阴性对照无效分子)诱导有效的T细胞活化，其中H929、MM.1R、OPM-2的平均EC₅₀值(EC₂₀)分别为0.082(0.035)、0.014(0.006)和0.288(0.168)nM。在2种阴性对照细胞(NALM-6和Daudi)中情况并非如此。在来自T细胞介导的杀伤测定(使用来自6个健康供体的T细胞)的上清液中用H929细胞评估体外细胞因子释放。平均EC₅₀(EC₂₀)的观察值如下：干扰素(IFN)-γ：1.120(0.615)pg/mL；肿瘤坏死因子(TNF)-α：1.545(0.805)pg/mL；白介素(IL)-1β：0.720(0.462)pg/mL；IL-2：1.962(1.380)pg/mL；IL-4：1.867(1.733)pg/mL；IL-6：0.684(0.441)pg/mL；IL-8：0.440(0.273)pg/mL；IL-10：1.082(0.670)pg/mL。在不存在靶GPRC5D阳性细胞的情况下，在体外或在全血测定中，塔奎妥单抗不引起T细胞的显著活化。这些发现证明了塔奎妥单抗的特异性。还在使用来自健康供体的全血的体外测定中测试了塔奎妥单抗对细胞毒性、T细胞活化和细胞因子释放的作用。将全血与GPRC5D-阳性(H929)多发性骨髓瘤细胞以5:1的E:T比率与渐增浓度的塔奎妥单抗一起温育48小时。48小时后塔奎妥单抗在GPRC5D阳性细胞系中诱导细胞死亡。健康供体的平均EC₅₀(EC₂₀)值如下：细胞毒性0.389(0.131)nM，细胞因子IL-10 0.107(0.032)nM，和T细胞活化0.236(0.083)nM。

塔奎妥单抗介导的原代多发性骨髓瘤细胞样品的T细胞依赖性细胞毒性

还在离体测定中使用来自患有多发性骨髓瘤的患者(n＝6)的冷冻骨髓(单核细胞)样品和来自健康供体的T细胞(以1:1比率)评价塔奎妥单抗的细胞毒性作用。结果揭示，塔奎妥单抗促进GPRC5D阳性原代多发性骨髓瘤细胞的剂量依赖性降低，这与48小时后的T细胞活化相关。平均EC₅₀(EC₂₀)值如下：细胞毒性0.127(0.041)nM；T细胞活化0.061(0.016)nM。对照无效抗体对细胞毒性或T细胞活化没有作用，表明诱导的细胞死亡作用是塔奎妥单抗特异性的。

塔奎妥单抗对杀伤和T细胞活化的浓度依赖性

为了评估高浓度的塔奎妥单抗是否可导致靶细胞或T细胞上的表位饱和并抑制突触形成，使用H929细胞用高达532nM的渐增浓度的塔奎妥单抗进行T细胞介导的细胞毒性测定。在高达532nM的最高浓度时塔奎妥单抗显示出剂量依赖性细胞毒和T细胞活化，并且没有观察到表位饱和效应。

塔奎妥单抗在多发性骨髓瘤异种移植物模型中的体内作用

在外周血单核细胞(PBMC)-人源化NOD scidγ(NSG，NOD.Cg-Prkdcscid)小鼠中的3种GPRC5D-阳性人多发性骨髓瘤模型中评价GPRC5D×CD3双特异性抗体塔奎妥单抗的功效。使用两种模型：在肿瘤细胞植入时开始治疗的预防性模型(H929)，或在形成可触知肿瘤后开始治疗的建立模型(MM.1S和RPMI 8226)。

对于H929预防性多发性骨髓瘤模型，在用5×10⁶个H929细胞皮下接种肿瘤前一周给小鼠移植1千万个PBMC。立即开始用每只小鼠0.1μg、1μg或10μg(对应于0.005mg/kg、0.05mg/kg或0.5mg/kg)的塔奎妥单抗治疗，并且此后每3至4天重复一次，共5次剂量。塔奎妥单抗在10μg/小鼠或1μg/小鼠的剂量水平下引起肿瘤形成的完全阻断，并且与用磷酸盐缓冲盐水(PBS)处理的对照小鼠相比，0.1μg/小鼠阻断肿瘤形成或显著抑制生长(与对照小鼠相比，97.6％的平均肿瘤生长抑制，p<0.01)。

对于建立的MM.1S多发性骨髓瘤模型，用1×10⁷个细胞皮下接种NSG小鼠。一周后移植1千万个PBMC。肿瘤细胞植入后两周，开始用GPCR5D×CD3双特异性抗体塔奎妥单抗(每只小鼠0.1μg、1μg、10μg或50μg)、CD3×无效或GPRC5D×无效(每只小鼠10μg)处理，此后每3至4天重复一次，共7次剂量。用10μg/动物体和50μg/动物体剂量水平的塔奎妥单抗双特异性抗体观察到抗肿瘤功效，每组中10个完全应答(CR)中有10个(100％肿瘤消退)。此外，与PBS处理的对照动物相比，1μg/小鼠剂量显著抑制肿瘤生长65％(p≤0.05)，而在模型中CD3×无效双特异性抗体或GPRC5D×无效双特异性抗体均未能抑制肿瘤生长。

使用表达最小GPRC5D蛋白的RPMI 8226靶细胞和来自健康供体的人纯化T细胞作为效应细胞的单独回归研究显示塔奎妥单抗对肿瘤消退没有作用。GPRC5D以低水平存在。关于MM中塔奎妥单抗的临床前活性和应答决定因素的附加研究描述于Verkleij等人，Blood Advances,2021,5(8):2196-2215，该文献的内容全文以引用方式并入本文。

实施例3：毒理学和安全性药理学

毒理学

在食蟹猴中的非良好实验室实践(GLP)耐受性研究中，每周一次IV施用塔奎妥单抗达4周，并且在高达30mg/kg时是良好耐受的。没有塔奎妥单抗相关的临床征象、显著的药效学作用(例如，细胞因子释放)或对安全性参数的不良作用。其他显著的变化是非不利的，并且通常与塔奎妥单抗的预期作用机制一致，并且包括淋巴细胞计数的瞬时和轻微降低。已确定，与人相比，在食蟹猴中塔奎妥单抗对GPRC5D的体内药理活性低大约100倍。基于在该研究中观察到的差的交叉反应性、无不良作用和最小药效学作用，在食蟹猴中使用塔奎妥单抗的进一步非临床安全性研究被认为不能用于人风险评估。

因此，在食蟹猴中的危害鉴定研究是用对cGPRC5D具有交叉反应性的替代分子塔奎妥单抗进行的，并且其在食蟹猴细胞中的功能活性类似于塔奎妥单抗在人细胞中的活性，并且被认为在食蟹猴中是药理学相关的。在探索性2周耐受性研究(0mg/kg、0.3mg/kg、3mg/kg和10mg/kg的2周剂量)和包括安全性药理学评估的关键1个月GLP研究(0mg/kg、10mg/kg和30mg/kg的4周剂量)中，塔奎妥单抗被良好耐受并且没有注意到对安全性药理学参数(心血管、呼吸或中枢神经系统功能)的影响。

总之，在食蟹猴中使用研究药物(塔奎妥单抗)没有强烈的药效学或毒理学应答，这通常是该类分子在测试的高剂量下所预期的。使用替代分子的最小药效学应答潜在地归因于健康食蟹猴中的低靶表达或低靶细胞(浆细胞)数量。因此，结果突出了食蟹猴对提供关于患有多发性骨髓瘤的患者中与靶向GPRC5D相关的风险评估的有用信息的限制(即，这些非临床毒性发现对可能携带更大靶细胞负荷的患者的翻译能力有限)。

局部耐受性

在局部耐受性研究中，单次皮下(SC)注射塔奎妥单抗(20mg)在雄性新西兰白兔中是良好耐受的。在注射部位没有不利的皮肤观察结果(在给药后直至72小时进行评价)，并且在注射部位或引流淋巴结中没有肉眼可见的或显微镜可见的发现。由于兔不是通过塔奎妥单抗靶向GPRC5D的药理学相关物种，该研究仅评估了制剂的耐受性。

组织交叉反应性、血清、溶血和细胞因子潜能(体外研究)

人组织中的体外GLP组织交叉反应性研究显示出人淋巴样组织(淋巴结、脾、胸腺、扁桃体、肺中支气管相关淋巴样组织和胃肠道中肠相关淋巴样组织)中单核白细胞的膜和胞质上的生物素化塔奎妥单抗染色(可能由于结合CD3)，并选择非淋巴样组织(膀胱、乳腺、结肠、输卵管、肾脏、肝脏、卵巢、甲状旁腺、外周神经、垂体、胎盘、前列腺、唾液腺、甲状腺、输尿管和子宫(子宫颈、子宫内膜)中的单核细胞)。没有观察到不可预料的交叉反应性。

使用可溶相测定形式测定来评估塔奎妥单抗在人供体血液中诱导细胞因子释放的能力。还测试了固相测定形式。在可溶性相形式中，相对于对照，塔奎妥单抗诱导IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13、IFNγ和TNFα的统计学显著的剂量依赖性增加。塔奎妥单抗的群体EC₂₀值估计为：对于IL-1β为346.39nM，对于IL-2为195.49nM，对于IL-8为519.20nM，对于IFNγ为6616.99nM，并且对于TNFα为859.97nM。由于缺乏4-参数曲线拟合，所以不能计算IL-6、IL-10和IL-13的EC₂₀值。在相对于对照的固相形式测定中，塔奎妥单抗诱导10种细胞因子(IL-1β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-13、IFNγ和TNFα)中的9种的统计学显著释放。然而，由于缺乏4-参数曲线拟合，不能计算任何诱导的细胞因子的群体EC₂₀估计值。因为应答的性质(例如，双相应答、差的曲线拟合和与阴性对照类似的特性)，所以固相测定的生物学相关性是不清楚的。塔奎妥单抗在人全血中不引起溶血，并且在介于0.10mg/mL和10mg/mL之间的浓度下与人血清相容。

在食蟹猴中，全身塔奎妥单抗暴露(最大观测血清浓度[C_max]和血清浓度对时间曲线下的面积[AUC])在药代动力学研究中以0.5mg/kg和5mg/kg的单一剂量在rHSA制剂中或以0.5mg/kg在制剂缓冲液中IV施用塔奎妥单抗后以大致与剂量成比例的方式随剂量增加。在探索性4周耐受研究中，在每周0.5mg/kg至30mg/kg的剂量后，塔奎妥单抗暴露也以大致与剂量成比例的方式随剂量增加。在食蟹猴中，塔奎妥单抗的血清半衰期估计为9至12天。

实施例4：非临床免疫原性

对塔奎妥单抗的免疫原性风险进行初步评价。考虑到塔奎妥单抗与天然人单克隆抗体的相似性，预期免疫原性的风险是低至中等的，类似于其他人治疗性单克隆抗体。在塔奎妥单抗的非GLP单剂量药代动力学研究中，免疫原性结果显示用塔奎妥单抗处理的12只动物中有8只测试为抗药物抗体(ADA)阳性。在塔奎妥单抗的非GLP多剂量研究中，数据表明存在ADA(12只动物中有2只)。然而，在这些研究中都没有监测到ADA。当与相同剂量组中的ADA阴性动物相比时，所有ADA阳性动物在第22天的最后一剂之前表现出较低的药物暴露或在给药后表现出较快的浓度降低。

实施例5：作为复发性或难治性多发性骨髓瘤的单一疗法施用的塔奎妥单抗的1期 研究

对施用塔奎妥单抗的患有复发性或难治性多发性骨髓瘤的成年受试者进行首次人体(FIH)、1期、开放标记、多中心研究(NCT03399799)。该研究以2个部分进行，分别用于IV和SC施用：剂量递增(第1部分)和剂量扩展(第2部分)。该研究的总体目标是评价塔奎妥单抗的安全性。安全性由研究评价小组(SET)监测。图1中提供了剂量递增方案的图表。

受试者群体

本研究中招募受试者的纳入和排除标准在下文中描述。

纳入标准

≥18岁。

根据国际骨髓瘤工作组(IMWG)诊断标准记录的多发性骨髓瘤的初步诊断。

患有可测量的多发性骨髓瘤的受试者已在所有可用的已建立的疗法上进展或对其不能耐受。

东部肿瘤协作组(ECOG)体能状态等级为0或1。

筛选时的临床实验室值：

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具有生育潜力的女性(WOCBP)在筛选时并且在第一剂研究药物之前，必须有使用高灵敏度妊娠测试(或者血清(β人类绒毛膜促性腺激素[β-hCG])或者尿液)的阴性妊娠测试结果。

在第一剂研究药物之前：性活跃的具有生育潜力的女性和具有生殖能力的男性必须同意在研究期间和最后一剂研究药物后100天内使用高度有效的避孕方法(<1％/年失败率)。

签署知情同意书(ICF)，表明他或她了解研究的目的和所需的程序并且愿意且能够参与该研究。在开始不属于受试者疾病护理标准的任何与研究相关的测试或程序之前，应获得同意。

愿意并且能够遵守该方案中规定的禁止事项和限制条款。

排除标准

任何满足以下标准中的任一者的潜在受试者将被排除在参与本研究之外：

与任何T细胞重定向(例如，CD-3重定向技术或CAR-T细胞疗法)或任何先前GPRC5D靶向疗法相关的先前3级或更高级CRS。

先前的抗肿瘤疗法如下，在第一剂研究药物之前：

3个月内的基因修饰的过继细胞疗法(例如嵌合抗原受体修饰的T细胞、自然杀伤[NK]细胞)。

在21天或至少5个半衰期(以较短者为准)内的靶向疗法、表观遗传疗法或使用研究性药物或侵入式研究性医疗装置的治疗。

在21天内的多发性骨髓瘤的单克隆抗体治疗。

在21天内的细胞毒性疗法。

在14天内的蛋白酶体抑制剂疗法。

在7天内的免疫调节剂疗法。

在21天内的放射疗法。然而，如果放射入口覆盖≤5％的骨髓储量，则无论放射疗法的结束日期如何，受试者都具有资格。

在塔奎妥单抗的4周内或如产品制造商所推荐的在第一剂前、治疗期间或在最后一剂的100天内接种活的减毒疫苗。

应已消退至基线水平或消退至1级或更低级的来自先前抗癌疗法的毒性，除了脱发或外周神经病变之外。

在第一剂研究药物前的14天时间段内接受过相当于≥140mg的泼尼松的累积剂量的皮质类固醇。

接收下列中的任一项：

在第一剂研究药物前6个月内的同种异体干细胞移植。接受同种异体移植的受试者必须停止所有免疫抑制药物达6周并且没有GVHD体征。

在第一剂研究药物前≤12周的自体干细胞移植。

多发性骨髓瘤的中枢神经系统(CNS)受累或脑膜受累的临床体征。如果怀疑其中任一项，则需要进行负全脑磁共振成像(MRI)和腰椎细胞学检查。

浆细胞白血病(>2.0×10⁹/L的浆细胞，依据标准差异)、华氏巨球蛋白血症、POEMS综合征(多神经病、器官肿大、内分泌病、单克隆蛋白[M-蛋白]和皮肤变化)或原发性淀粉样轻链型(AL)淀粉样变性。

已知对人类免疫缺陷病毒或获得性免疫缺陷综合征呈血清反应阳性。

根据美国临床肿瘤学会指南定义的乙型肝炎感染。在感染状况不清楚的情况下，需要定量水平来确定感染状态。活动性丙型肝炎感染，如阳性HCV-RNA测试所测量的。具有丙型肝炎病毒抗体阳性史的受试者必须进行HCV-RNA测试。

肺部损害需要补充氧气以维持足够的氧合作用。

已知对塔奎妥单抗或其赋形剂过敏、超敏或不耐受。

任何严重的基础医学病症，诸如：

严重活动性病毒、细菌或不受控制的全身性真菌感染的证据；

活动性自身免疫性疾病或记录的自身免疫性疾病史

精神病症(例如，酒精或药物滥用)、严重痴呆或精神状态改变；以及

会损害受试者在研究地点接受或耐受计划治疗、了解知情同意的能力的任何其他问题，或者研究者认为参与对受试者而言不是最有利的(例如，损害福祉)或可能防止、限制、或混淆方案指定评估的任何状况。

怀孕、哺乳或计划在本研究招募时或在研究药物最后一次给药后100天内怀孕。

计划在本研究招募时或在研究药物最后一次给药后100天内成为孩子父亲。

在第一剂2周内的大手术，或者尚未从手术中完全恢复，或者计划在预期受试者参与研究期间或在施用研究药物的最后一个剂量后2个月内进行手术。(注意：计划在局部麻醉下进行外科手术的受试者可参与)。

受试者必须同意在研究期间以及最后一剂研究药物之后的100天内不献血或不捐献血液成分。

注意：确保在筛选时和在第一剂研究药物之前已满足所有研究纳入/排除标准。如果受试者的临床状态在筛选后但在给予第一剂研究药物之前改变(包括任何可获得的实验室结果或附加医疗记录的接收)，使得他或她不再满足所有合格标准，则如果必要，可根据当地护理标准施用支持性治疗，使得可满足合格标准并且可重复一次实验室测试，以确定受试者是否有资格进行研究。如果进一步评价后不满足纳入/排除标准，则应将受试者排除在参与研究之外。

药代动力学、免疫原性和受体占用率

评价

收集血液和血清样品用于塔奎妥单抗药代动力学、受体占用率(RO)和免疫原性(抗塔奎妥单抗抗体评估)。此外，在研究期间观察到疑似输注相关反应(IRR)或细胞因子释放综合征(CRS)事件(在CRS事件的情况下，将在开始时、24小时和72小时收集样品)的任何时间将收集药代动力学/免疫原性样品。此外，在研究药物中止后的治疗结束访视时收集药代动力学和免疫原性样品。将血液取样的确切日期和时间记录在实验室申请表中。将收集的样品储存在“实验室手册”中指示的温度的特定受控条件下。

收集静脉血样用于测量塔奎妥单抗的血清浓度。将血清样品均匀地分成2个等分试样(1份用于药代动力学；1份用于备用)。在评价血清浓度和抗塔奎妥单抗抗体的时间点，收集1份抽血，并将血清均匀地分成3个等分试样(药代动力学、针对研究药物的抗体和备用各1份)。

收集血样用于RO。如果可行，还可分析骨髓抽吸物的药代动力学。数据用于机械药代动力学/药效学建模。所收集的用于分析塔奎妥单抗血清浓度和抗塔奎妥单抗抗体的样品可用于评价可溶性B细胞成熟抗原(sBCMA)或评价安全性或功效方面，其解决了在进一步表征免疫原性的研究期期间或之后出现的担忧。

分析程序

药代动力学：由申办方或在申办方的监督下使用验证过的、特异性的和灵敏的测定法来分析血清样品以确定塔奎妥单抗的浓度。

免疫原性：由申办方或在申办方的监督下使用验证过的或适当合格的测定法来进行抗塔奎妥单抗抗体的检测和表征。收集用于检测抗塔奎妥单抗抗体的所有样品也将针对塔奎妥单抗血清浓度进行评价，以使得能够解释抗体数据。

药代动力学参数

从所有受试者收集血样用于测量血清塔奎妥单抗浓度以进行药代动力学分析。估计个体的药代动力学参数，并且计算每个剂量水平的描述性统计。还可探究C_max和AUC与剂量的关系。药代动力学参数包括但不限于AUC_inf、AUC_(0-t)、AUC_tau、C_max、T_1/2、达到C_max的时间(T_max)、CL(用于IV施用)、CL/F(用于SC施用)、稳态下的分布体积(用于IV施用的[Vss])；如果有足够的数据可用于估计，则计算Vss/F(用于SC施用)参数。(AUC：血清浓度对时间曲线下面积；AUC_inf：从时间0到外推终末期的无穷大的血清浓度对时间曲线下面积；AUC_(0-t)：从时间零到时间t的浓度-时间曲线下面积；AUC_tau：稳态下的剂量间隔时间段期间血清浓度对时间曲线下的面积(tau)；C_max：最大观测血清浓度；T_1/2：半衰期；T_max：达到C_max的时间(多剂量)；CL：静脉内施用后药物的总全身清除率；Vss：稳态下的分布体积)。

免疫原性评估/抗塔奎妥单抗抗体

根据计划表，在从所有受试者收集的血清样品中评价抗塔奎妥单抗抗体。另外，还在最终访视时从中止治疗或退出研究的受试者中收集血清样品。这些样品由申办方或申办方的指定人员进行测试。

筛选血清样品中结合塔奎妥单抗的抗体，并且报告确认的阳性样品的滴度。测试ADA阳性(抗药物抗体阳性)样品以中和抗塔奎妥单抗抗体。如果认为必要，可对在其他时间点收集的药代动力学样品进行免疫应答分析。

受体占用率(RO)

经由流式细胞术分析全血样品的RO。收集样品以评价RO，从而定量治疗剂与细胞表面上的CD3的结合。如果来自第1部分的RO样品结果对于药物应答是全面的和有意义的，则在第2部分中收集RO样品。基于出现的数据，在第一静脉内(IV)引发剂量之前和对于用更高皮下(SC)剂量治疗的一些受试者，从所有受试者收集样品。

生物标记物评价

在第1部分和第2部分两者中完成生物标记物评价。生物标记物评估集中于几个主要目的：1)评价响应于研究药物施用的细胞因子产生；2)评价指示T细胞重定向的免疫应答对研究药物应答的潜在贡献；3)确定研究药物在具有细胞遗传学修饰(del17p、t(4；14)、t(14；16)或其他高风险分子亚型)的受试者中的临床益处；以及4)确定研究药物在具有至少完全应答(CR)的受试者中减少微小残留病(MRD)的能力。所有生物标记物评估在中心实验室进行。如果变得必要，可收集附加的生物标记物样品以帮助理解未解释的事件，并且特别地，在研究期间观察或报告怀疑的IRR或CRS事件的任何时间将收集细胞因子的附加样品。

生物标记物分析取决于适当的生物标记物测定的可用性，并且如果在研究期间或结束时，很明显分析将不具有用于生物标记物评估的足够的科学价值，或者如果没有足够的样品或应答者以允许进行足够的生物标记物评估，则生物标记物分析可被推迟或不进行。在研究早期终止或显示不良的初步临床抗肿瘤活性的情况下，生物标记物评估的完成基于数据的合理性和预期效用。

附加收集

基于新出现的科学证据，申办方可在研究完成期间或之后从先前收集的骨髓样品请求附加的材料以用于回顾性分析。在这种情况下，此类分析对于与研究药物或被研究疾病相关的研究是特定的。

药效学标记物

在按计划以递增或全治疗剂量施用塔奎妥单抗之前和之后的多个时间点收集血清样品。

使用多重分析物组(Luminex或MEsoScaleDiscovery technology)检测和测量细胞因子。所监测的分析包括但不限于TNF-α、IL-2、IL-6、INF-γ、IL-10和IL-2Rα，其可告知免疫细胞的相对活化。

可分析全血样品和骨髓抽吸物样品，以通过流式细胞术和/或飞行时间细胞术(CyTOF)评价肿瘤和免疫细胞群体，以便确定用塔奎妥单抗治疗是否通过重定向T细胞介导的GPRC5D阳性多发性骨髓瘤细胞的杀伤和细胞毒性T细胞的活化增加而导致抗肿瘤活性增加。也可进行全血T细胞功能性测定以研究这如何影响药物应答。

对于这些分析，使用多色流式细胞术分析在塔奎妥单抗施用前后收集的全血样品以评估免疫群体，包括但不限于CD8+、CD4+总T细胞和调节性T细胞，以及幼稚和记忆T细胞亚群。此外，还在CD8+和CD4+总T细胞和幼稚/记忆T细胞亚群上测量了包括CD25、PD-1、TIM-3、LAG-3、HLA-DR和CD38的活化/耗竭标记物。

预测性生物标记物

已知一些遗传突变/易位在多发性骨髓瘤治疗和抗性中赋予不良预后。因此，可进行来自肿瘤细胞的DNA/RNA测序，用于易位/突变/基因组分析以评估特定的分子亚群诸如del17p、t(4；14)、t(14；16)或其他风险相关突变/易位是否对治疗有应答，并鉴定应答和/或抗性的潜在预测性生物标记物。

基线时浆细胞上GPRC5D和PD-L1表达也可通过对骨髓样品中多发性骨髓瘤细胞进行流式细胞术来测量，以确定抗原表达水平或检查点配体上调是否是应答的预测性生物标记物。

还可对骨髓抽吸物进行包括但不限于T细胞亚群的频率和活化/耗竭的基线免疫表型分型，以确定应答和/或抗性的潜在预测性生物标记物。

微小残留病

在该领域中评价了微小残留病阴性作为无进展生存期(PFS)的潜在替代物。基线骨髓抽吸物将用于确定骨髓瘤克隆，并且治疗后样品将用于评价经历CR/严格完全应答(sCR)的那些受试者中的MRD阴性。在临床可行的情况下，在筛选时收集新鲜的骨髓抽吸物。如果在筛选时不能获得骨髓抽吸物，则必须提供未脱钙的诊断组织，诸如未脱钙的载玻片(骨髓抽吸物、接触制备物或凝块选择)或福尔马林固定的石蜡包埋块(仅凝块切片，无骨髓活检)来代替MRD评估。使用对骨髓抽吸物DNA的下一代测序来监测受试者中的微小残留病。如果该方法不可用，或者被确定为在科学上较差，则可利用用于MRD评估的另选方法。

药代动力学/药效动力学评价

探索药代动力学/药效学建模以理解和表征暴露-应答关系。

功效评估

在每个治疗周期结束时和下一个周期开始之前进行疾病评价。在施用研究药物之前，应当收集计划用于治疗天数的疾病评价。疾病评价将由中心实验室进行直至疾病进展。该研究将使用基于2016IMWG的应答标准。如果确定研究药物干扰免疫固定测定，则CR将被定义为在免疫固定时与多发性骨髓瘤相关的原始M-蛋白的消失，并且CR的确定将不受继发于研究药物的无关M-蛋白的影响。复发的受试者不应停止治疗，并且疾病评价将继续直至确认疾病进展。

必须在临床研究中心一致地记录疾病进展。注意：在第1周期期间观察到的新的或大小增加的软组织浆细胞瘤和溶骨性病变的发作将不被认为是疾病进展。申办方将使用验证过的计算机算法来评估对治疗的应答。

血清和尿液中骨髓瘤蛋白的测量

用于M-蛋白测量的血液和24小时尿液样品由中心实验室分析。需要以下测试：

血清蛋白电泳；

筛选时和此后当M-蛋白不可定量时的血清免疫固定电泳；

血清FLC测定；

通过电泳定量24小时尿液M-蛋白；

筛选时和此后当M-蛋白不可定量时的尿液免疫固定电泳；

筛选时血清β-微球蛋白；以及

筛选时血清定量免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM、IgE和IgD)。

还在筛选时和此后每4周一次收集血清定量免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM、IgE和IgD)的样品以进行局部分析。

收集血液和24小时尿液样品，直到出现确定的疾病进展。仅基于实验室测试之一的疾病进展通过1至3周后进行的至少1次重复研究来确认。疾病评价将在从CR复发后继续，直到确认疾病进展。在筛选时和此后当怀疑CR时(当血清或24小时尿液M-蛋白电泳[通过血清蛋白电泳或通过电泳的尿液M-蛋白定量(UPEP)]为0或不可定量时)，进行血清和尿液免疫固定和血清游离轻链(FLC)测定。血清和尿液免疫固定测试都将常规地对患有轻链多发性骨髓瘤的受试者进行。

白蛋白校正的血清钙

收集用于计算针对白蛋白校正的血清钙的血样并在中心实验室进行分析，直到出现确定的疾病进展。高钙血症的出现(校正的血清钙>11.5mg/dL[>2.8mmol/L])可指示疾病进展或复发，如果它不是归因于任何其他原因的话。钙与白蛋白结合，并且仅未结合(游离)的钙具有生物活性；因此，必须针对异常的白蛋白水平调节血清钙水平(“校正的血清钙”)。

测量游离离子钙是用于确定高钙血症的校正血清钙的可接受的替代方法。对于该研究，大于正常上限(ULN)的游离离子钙水平被认为是高钙血的。

骨髓检查

对于所有受试者，进行骨髓抽吸物或活组织检查用于临床评估和生物标记物评价。临床分期(形态学、细胞遗传学和免疫组织化学或免疫荧光或流式细胞术)可由本地实验室进行。需要骨髓抽吸物样品来确认CR和sCR；必须在下一次计划剂量的研究药物之前收集样品并获得结果。如果临床指示，还在周期3的第1天和病情进展时收集骨髓抽吸物样品。

此外，MRD可在疑似CR/sCR时进行评估，并且对于具有确认的CR/sCR的受试者，在C1D1后12个月(±1个月)和此后每年一次(±1个月)获得附加的骨髓抽吸物。

骨骼调查

在筛选阶段进行完整的骨骼调查(包括颅骨、整个脊柱、骨盆、胸部、肱骨、股骨和研究者怀疑因疾病受累的任何其他骨)，并通过X线照相术或低剂量CT扫描而不使用IV造影剂进行局部评价。在治疗阶段期间，并且在确认疾病进展之前，每当基于症状进行临床指示时，将局部地进行X射线或CT扫描以记录应答或进展。磁共振成像是用于评价骨疾病的可接受的方法，并且可根据研究者的判断而包括在内；然而，它不能代替骨骼调查。如果在筛选时除了完整的骨骼调查外还使用放射性核素骨扫描，则必须使用两种方法来记录疾病状态。这些测试必须同时进行。注意：放射性核素骨扫描将不能代替完整的骨骼调查。

受试者可能呈现出由骨变化引起的疼痛症状所表现的疾病进展。因此，在这些情况下，根据受试者所经历的症状，可通过骨骼调查或其他射线照片记录疾病进展。如果通过射线照相研究对疾病进展的诊断是显而易见的，则不需要确认性X射线。在变化较细微的情况下，可能需要在1至3周内重复X射线。

髓外浆细胞瘤的记录

在筛选阶段必须记录已知髓外浆细胞瘤的部位。临床检查或MRI可用于记录疾病的髓外部位。如果对于使用IV造影剂没有禁忌症，则CT扫描评价是可接受的替代方案。如果单独的CT不可用，则允许正电子发射断层摄影(PET)-CT。超声测试对于记录髓外浆细胞瘤的大小是不可接受的。

通过临床检查或放射学成像对具有浆细胞瘤史或如果在筛选时临床指示的所有受试者评估髓外浆细胞瘤。对于具有浆细胞瘤史的受试者或在治疗期间如临床指示的其他受试者，每4周一次进行一次髓外疾病的可测量部位的评估、测量和局部评价(用于体检)，直到出现确认的CR或确认的疾病进展。如果只能放射性地进行评估，则髓外质浆细胞瘤的评价可每12周(±2周)一次进行。对于每个受试者，用于评价各种疾病部位的方法在所有访视中是一致的。照射或切除的病变将被认为是不可测量的，并且将仅监测疾病进展。

为了符合部分应答(PR)或最小应答(MR)，现有髓外浆细胞瘤的垂直直径的乘积总和必须分别降低至少50％或25％，并且必须不能发展新的浆细胞瘤。为了符合疾病进展，现有髓外浆细胞瘤的垂直直径的乘积总和必须增加至少50％，或者必须发展新的浆细胞瘤，除了在第1周期中之外。在没有报告所有存在的髓外浆细胞瘤但所报告的浆细胞瘤的垂直直径的乘积总和增加至少50％的情况下，这也将符合疾病进展。

对多发性骨髓瘤治疗的应答的标准

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目标和终点

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CBR：临床受益率；DOR：应答持续时间；TTR：应答时间；PFS：无进展生存期；MRD：微小残留病。

第1部分(剂量递增部分)-给药计划

IV施用：使用来自健康人供体的全血体外测定系统来估计基于最小预期生物效应水平(MABEL)的起始剂量。基于来自T细胞活化、细胞毒性和细胞因子释放中最相关测定的最低平均EC₂₀，选择每2周一次在大约4小时内施用的0.5μg/kg IV的剂量。基于对所有可获得的数据(包括但不限于药代动力学、药效学、安全性和初步抗肿瘤活性数据)的回顾来选择随后的每两周一次IV剂量水平。在每两周一次IV给药塔奎妥单抗后，来自3名受试者的初步第一剂量药代动力学结果(剂量范围为0.5μg/kg至1.0μg/kg)显示T_1/2范围为2.12至6.47天。基于安全性特性和初步药代动力学数据，开始每周一次IV给药塔奎妥单抗。基于统计模型，使用所有可获得的数据来选择随后的剂量水平，以鉴定安全且可耐受的推定RP2D，其定义为用于在第2部分中表征的塔奎妥单抗的剂量和计划。

SC施用：按每周一次给药计划皮下(SC)施用塔奎妥单抗。SC给药组群的剂量递增开始于在第-7天SC施用1.5μg/kg引发剂量，随后在21天周期的第1、8和15天SC施用5μg/kg的全剂量。基于统计模型，使用所有可获得的数据来选择随后的SC剂量水平，以鉴定安全和可耐受的推定RP2D，其定义为用于在第2部分中表征的塔奎妥单抗的剂量。

在182名患者中测试了以下剂量水平，并且分析的截止日期为2021年4月18日：

研究设计也参见图1B。

第1部分的结果(剂量递增)(分析的截止日期2020年10月24日)

合格的患者具有根据国际骨髓瘤工作组(IMWG)标准的可测量MM，并且已在已建立的疗法上进展或对其不能耐受。剂量递增阶段的主要目标是表征塔奎妥单抗的安全性并确定推荐2期剂量(RP2D)。评估了具有和不具有递增给药的IV或SC塔奎妥单抗(0.5μg/kg-800μg/kg)的递增剂量。关键次要目标包括表征塔奎妥单抗的药代动力学(PK)、药效学和初步抗肿瘤活性。使用不良事件(AE)通用术语标准v4.03对AE进行分级，并且根据Lee等人(Blood 2014；124:188)对细胞因子释放综合征(CRS)进行分级。研究者根据IMWG标准评估应答。

在评价的受试者中，102名通过IV接受塔奎妥单抗，29名通过SC接受塔奎妥单抗。中值年龄为65岁(范围33-80；32％≥70)且23％患有国际分期系统III期疾病。先前疗法的中值数量为6(范围2-20)，87％的受试者对最后一种疗法是难治性的，80％为三级难治性，75％为五级暴露，以及33％为五级难治性。十三名(10％)受试者先前接受了塞利尼索疗法，并且21名(15％)先前接受了BCMA定向疗法。

最常见的全级血液学AE是贫血(52％)、中性粒细胞减少症(47％)和淋巴细胞减少症(41％)。最常见的全级非血液学AE是CRS(47％)、味觉障碍(33％)和疲劳(32％)。报告了在胰腺浆细胞瘤的环境中增加脂肪酶的4级无临床症状的两种剂量限制性毒性(7.5μg/kgIV；未消退)和3级斑丘疹(135μg/kg SC；3天后消退)。在50％的患者中报告了治疗相关的3-4级AE，其中最常见的是淋巴细胞减少症(21％)和中性粒细胞减少症(16％)。在38％的患者中报告了感染，并且在16％中报告了治疗相关的输注/注射部位反应(IV和SC)。

在48％的患者中报告了CRS，并且所有事件为1-2级，除了4(3％)个3级严重程度的事件之外。CRS通常局限于第一周期，并且通过实施递增给药和SC施用，严重程度似乎得到减轻。在7名(5％)患者中报告了神经毒性；4名具有1-2级事件，3名具有3级谵妄(n＝2)和混乱(n＝1)。在CRS的背景下，在4名患者中发生神经毒性事件。

来自IV给药的PK结果表明塔奎妥单抗的半衰期支持每周一次给药。SC结果显示较低的C_max，具有与IV给药(以类似剂量)相当的谷水平，这使其成为有利的施用选择。

塔奎妥单抗治疗导致支持作用机制的药效学变化，包括T细胞活化和细胞因子诸IL-10、IL-2Rα和IL-6的增加。在IV和SC给药时观察到相当的药效学标记物的诱导。

IV和SC组群的总体应答率分别为32％和36％。在最近的剂量递增组群中，应答率已持续改善(IV：20μg/kg[67％]、60μg/kg[100％]；SC：135μg/kg[50％]，405μg/kg[100％])。在1.0μg/kg剂量下早期注意到应答，并且在1.5μg/kg剂量下开始实现严格完全应答。

表5：最佳总体应答的总结

CR：完全应答；IV：静脉注射；MR：最小应答；QW，每周一次；Q2W：每2周一次；ORR：总体应答率；PD：疾病进展；PR：部分应答；SC：皮下；sCR：严格完全应答；SD：疾病稳定；VGPR：非常良好的部分应答。

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进一步的数据分析提供了RP2D的药代动力学数据支持(例如，图2A、图3A和图3B)、SC剂量的总体应答率和应答持续时间(例如，图5A-图5D)。第一治疗剂量后的平均PK特性(图2A)显示在5μg/kg-405μg/kg SC组群中，第一剂量后的暴露与剂量成比例。405μg/kg SC组群具有比60μg/kg IV组群更低的峰/谷比，并且维持暴露超过最大EC₉₀。因此，存在较不频繁的SC给药的机会。此外，患者的ADA(抗药物抗体)率对于IV为12％(11/95)，并且对于SC为8％(3/38)。ADA似乎不影响安全性、PK或功效。并且如图3A和图3B所证明的，在>45μg/kg SC的剂量下观察到细胞因子(IL-10、IL-6、IL2Rα)的一致诱导；在外周诱导PD-1⁺T细胞，这表明T细胞活化；并且在405μg/kg SC的RP2D下观察到一致的T细胞活化。

数据分析还证明，1)在20μg/kg-180μg/kg IV和235μg/kg-800μg/kg SC的大多数活性剂量下，ORR为66％(33/50)，≥VGPR为42％，并且应答随时间加深；2)在405μg/kg SC的RP2D下，ORR为69％(9/13)，首次确认应答的中值时间为1个月(1-2)，6/9(67％)的应答者为三级难治性，并且2/9(22％)的应答者为五种药物难治性。另外，应答持续时间(DPR)数据(图5A，IV组群的数据在分析时更成熟)显示应答持久且随时间加深，并且在所有剂量中首次确认应答的中值时间为1个月(0.2-3)。在持续时间>12个月的应答者中，9/10仍有应答，其中6≥CR，并且有4名DOR>2年。剂量≥60μg/kg IV下的6名应答者中有1名在中值7.4个月(5.1-7.8)随访时进展。剂量≥405μg/kg SC的17名应答者中没有一个在中值3.7个月(1.4-6.5)随访时进展。

第1部分(剂量递增部分)：附加的患者和SC施用的更长随访(分析截止日期2021年 4月18日)

使用与上述相同的研究设计，在附加的组群和更长的随访时间中评估具有和不具有递增给药的递增剂量的塔奎妥单抗的皮下(SC)施用(5μg/kg-800μg/kg)(图1B)。患者必须具有可测量的疾病并且已在所有可用的已建立的疗法上进展或对其不能耐受。允许先前的BCMA靶向治疗。术前用药(即，糖皮质激素、抗组胺剂和退热剂)限于递增剂量和第一全剂量；然而，在第一全剂量后不需要类固醇。

在所评价的总共82名SC受试者中，30名通过SC接受塔奎妥单抗，每周一次(QW)，RP2D为405μg/kg，递增剂量为10μg/kg和60μg/kg。其他患者QW或每两周一次SC接受5μg/kg、15μg/kg、45μg/kg、135μg/kg或800μg/kg的塔奎妥单抗剂量。所评价的82名受试者的中值年龄范围为63岁(范围42-80；27％≥70)，自诊断以来的中值时间为5.9岁(范围1-20岁)，并且16％患有国际分期系统III期疾病。先前疗法的中值数量为6(范围2-17)，84％的受试者对最后一种疗法是难治性的，76％为三级难治性，78％为五级暴露，以及28％为五级难治性。二十(24％)名受试者先前接受了BCMA定向疗法。受试者的人口统计学和疾病特征的总结示于表9中。

表9：患者人口统计学和疾病特征的总结(SC、QW)

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BCMA＝B细胞成熟抗原CAR-T＝嵌合抗原受体T细胞；IMiD＝免疫调节药物；ISS＝国际分期系统；mAb＝单克隆抗体；PI＝蛋白酶体抑制剂；QW＝每周一次；RP2D＝推荐2期剂量；SC＝皮下

^a递增剂量为10μg/kg和60μg/kg。^b不包括基于骨的浆细胞瘤的软组织成分。^c根据SC总计n＝76和n＝29在RP2D下计算的百分比。^d根据总计n＝66SC和n＝27在RP2D下计算的百分比。^eBCMA CAR-T疗法或BCMA非CAR-T疗法。^f≥1种PI、≥1种IMiD以及1种抗CD38 mAb。^g≥2种PI、≥2种IMiD以及1种抗CD38 mAb。^h硼替佐米、卡非佐米和/或艾莎佐米。^j沙利度胺、来那度胺和/或泊马度胺。^j达雷木单抗和/或伊沙妥昔单抗。

研究显示塔奎妥单抗在405μg/kg的RP2D下具有可耐受的安全性特性。在RP2D下没有观察到剂量限制性毒性和由AE引起的死亡。血细胞减少症主要限于分步给药以及第一治疗周期和第二治疗周期。中性粒细胞减少症通常在一周内消退，并且限于第一治疗周期和第二治疗周期。在所评价的37％的患者(9％为3级或4级)和32％的RP2D患者(3％为3级或4级)中观察到感染。在4名SC给药的患者(均为1级或2级)和2名RP2D患者(7％)中观察到神经毒性。在17％的患者中发生注射部位反应(包括在RP2D下)，但是轻微的且可管理的(均为1级或2级)。在67％的患者和77％的RP2D患者中发生皮肤相关的AE(包括皮肤剥脱、瘙痒、皮疹和指甲障碍)(大多数为1级或2级)。在21％的患者(27％的RP2D患者)中发生指甲障碍(包括脱甲症和指甲营养不良)。

最常见的全级血液学AE是中性粒细胞减少症(57％为任何级别，49％为3或4级)、贫血(45％为任何级别，28％为3或4级)、白细胞减少症(26％为任何级别，20％为3或4级)和血小板减少症(28％为任何级别，18％为3或4级)。最常见的全级非血液学AE是CRS(67％为任何级别，1％为3或4级)、味觉障碍(46％为任何级别，3级或4级不适用)和疲劳(32％为任何级别，0％为3或4级)。在405μg/kg的RP2D下观察到的最常见的全级非血液学AE是CRS(73％为任何级别，2％为3或4级)、味觉障碍(60％为任何级别，3级或4级NA)和吞咽困难(37％为任何级别，0％为3或4级)。塔奎妥单抗的安全性特性的总结示于表10中。

表10：塔奎妥单抗的安全性特性(第2部分，SC，QW)

AE＝不良事件，CRS＝细胞因子释放综合征；DLT＝剂量限制性毒性；NA＝不适用；RP2D＝推荐2期剂量；SC＝皮下

^a递增剂量为10μg/kg和60μg/kg。^b包括皮肤剥脱、瘙痒、皮疹和指甲障碍^c包括指甲障碍、脱甲症和指甲营养不良。

所有受试者中的CRS通常限于1或2级(除了一名患者具有3级CRS)，并且通过实施递增给药和SC施用，严重程度似乎得到减轻(图14)。CRS发作的中值时间为2天(范围1-22天)并且CRS的中值持续时间为2天(范围1-7天)。在用SC塔奎妥单抗治疗的82名患者中，67％接受了支持性措施来治疗他们的CRS(例如，托珠单抗、类固醇、通过鼻插管的低流量氧气以及血管加压剂)。大多数患者仅具有1个剂量的托珠单抗作为CRS的支持性措施。关于经历CRS的患者的数据的总结示于表11中。

表11：用塔奎妥单抗治疗后发生的细胞因子释放综合征(第2部分， SC，QW)

CRS＝细胞因子释放综合征；QW＝每周一次；RP2D＝推荐2期剂量；SC＝皮下^a递增剂量为10μg/kg和60μg/kg。^b相对于最近的剂量。c患者可接受>1种支持疗法。d允许托珠单抗用于1级CRS^e根据Lee等人Blood.2014.124:188进行分级。

将405μg/kg SC QW的RP2D施用于30名患者，其中对应答者的中值随访为6.3个月(范围为1.4-12个月)。数据分析(图4)证明，对于在75名患者中递增剂量的塔奎妥单抗(5μg/kg-800μg/kg)，注意并非所有82名患者都可用于评价，ORR为53.3％(40/75)且≥VGPR为44％；2)在405μg/kg SC的RP2D下，ORR为70％(21/30)，≥VGPR为60％，首次确认应答的中值时间为1个月(范围为0.2-3.8个月)，15/23(65.2％)的应答者为三级难治性，并且5/6(83.3％)的应答者为五种药物难治性。根据2011国际骨髓瘤工作组应答标准，在具有≥1个剂量的塔奎妥单抗和≥1次基线后疾病评价的可评价患者中评估ORR。在跨IV和SC组群的6名可评价患者中，4名在10^-6下具有阴性MRD CR/sCR，包括RP2D组群中的1名受试者。在1名可评价患者中，阴性MRD在完全应答后维持7个月。

另外，应答的持续时间(图5B)显示，在用45μg/kg至800μg/kg范围内的SC剂量的塔奎妥单抗治疗的40名患者中，应答持久且随时间加深。在405μg/kg SC QW的RP2D下(图5C)，没有达到应答的中值持续时间，并且在6.3个月的中值随访(范围为1.4-12.2+个月)之后，17/21的应答者(81％)存活并且保持塔奎妥单抗治疗。在所有SC组群中，在6.8个月的中值随访(范围1.4-16.3+个月)后，31/40的应答者(78％)保持塔奎妥单抗治疗。IV组群的数据(图5A)更成熟，并且甚至在亚治疗剂量下，在具有更长随访的患者中，应答在22+个月时仍在进行。

进一步的数据分析提供了405μg/kg的SC RP2D的药代动力学(PK)数据支持(图2B)。RP2D表现出低的峰/谷比并且保持暴露超过最大EC₉₀。在用SC塔奎妥单抗治疗的50名患者中的6名(12％)中，患者表现出通常具有低滴度的抗药物抗体。另外，抗药物抗体似乎不影响安全性、PK或功效。塔奎妥单抗施用后，在外周诱导PD-1阳性T细胞，这表明T细胞活化(图3B)。在RP2D组群中观察到PD-1+T细胞的一致诱导。此外，在剂量大于45μg/kg SC时观察到细胞因子(即，IL-10、IL-6、IL-2Rα)的一致诱导。

除405μg/kg外，800μg/kg的塔奎妥单抗也被良好耐受且高度有效。每周一次或每两周一次用800μg/kg塔奎妥单抗治疗患者。

第一次数据截止时的结论

塔奎妥单抗在所评估的所有剂量中均具有可管理的安全性特性：大多数CRS事件(67％)均为1-2级并且通常局限于第一递增和全剂量；递增给药减轻高级CRS；主要为1至2级的神经毒性事件的发生率低。在67％的患者中发生塔奎妥单抗特异性皮肤相关AE(包括皮肤剥脱、瘙痒、皮疹和指甲障碍)。

在更高的剂量下达到更大的应答：该数据分析证明，对于在75名患者中递增剂量的塔奎妥单抗(5μg/kg-800μg/kg)，注意并非所有82名患者都可用于评价，ORR为53.3％(40/75)且>VGPR为44％；2)在405μg/kg SC的RP2D下，ORR为70％。另外，应答的持续时间数据显示应答持久且随时间加深。

第1部分和第2部分：附加的患者和SC施用的更长随访(分析截止日期2021年7月19 日)

截至2021年7月19日，已在第1和第2部分中招募97名受试者用于塔奎妥单抗SC给药并接受至少1个剂量的塔奎妥单抗。已招募三十名受试者(包括第2部分受试者)接受10μg/kg和60μg/kg递增剂量，随后每周一次接受405μg/kg SC治疗剂量(第一次选择的RP2D)。已招募二十三名受试者(包括第2部分受试者)接受10μg/kg、60μg/kg和300μg/kg递增剂量，随后每两周一次接受800μg/kg SC治疗剂量(第二次选择的RP2D)。

每周一次接受405μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗SC的30名受试者的中值年龄为61.5岁(范围：46至80岁)，其中7名(23.3％)受试者≥70岁。先前治疗方案的中值数量为6(范围：2至14)。所有30名受试者(100％)是先前三次暴露的(先前疗法包括PI、IMiD和抗CD38单克隆抗体)，并且80.0％是先前五次暴露的(先前疗法包括2种或更多种PI、2种或更多种IMiDs和抗CD38单克隆抗体)。值得注意的是，所有30名受试者对抗CD38单克隆抗体疗法是难治性的，76.7％是三重难治性的，并且20.0％是五重难治性的。

每两周一次接受800μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗SC的23名受试者的中值年龄为60.0岁(范围：47至84岁)，其中7名(30.4％)受试者≥70岁。先前治疗方案的中值数量为5(范围：1至17)。二十二名受试者(95.7％)是先前三次暴露的(先前疗法包括PI、IMiD和抗CD38单克隆抗体)，并且69.6％是先前五次暴露的(先前疗法包括2种或更多种PI、2种或更多种IMiDs和抗CD38单克隆抗体)。值得注意的是，78.3％对抗CD38单克隆抗体疗法是难治性的，65.2％是三重难治性的，并且21.7％是五重难治性的。

接受任何剂量的塔奎妥单抗SC的97名受试者的中值年龄为64.0岁(范围：39至84岁)，其中28名(28.9％)受试者≥70岁。先前治疗方案的中值数量为6(范围：1至17)。九十六名受试者(99.0％)是先前三次暴露的(先前疗法包括PI、IMiD和抗CD38单克隆抗体)，并且78.4％是先前五次暴露的(先前疗法包括2种或更多种PI、2种或更多种IMiDs和抗CD38单克隆抗体)。值得注意的是，90.7％的受试者对抗CD38单克隆抗体疗法是难治性的，71.1％是三重难治性的，并且22.7％是五重难治性的。

在该研究中，另外102名受试者已用塔奎妥单抗IV剂量治疗。塔奎妥单抗IV的功效和安全性特性与塔奎妥单抗SC的功效和安全性特性相当。

疗效

每周一次405μg/kgSC的RP2D的塔奎妥单抗

由研究者基于2011IMWG应答标准进行疾病评估。截至资料截止时，用每周一次405μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗治疗的所有30名受试者具有≥1次给药后疾病评价(即，应答可评价群体)。30名受试者的截至数据截止时的中值随访为11.27个月(范围为4.2至15.2个月)，并且ORR为70.0％(表12)。其中，作为最佳确认应答，2名受试者(6.7％)具有sCR，1名受试者(3.3％)具有CR，14名受试者(46.7％)具有VGPR，并且4名受试者(13.3％)具有PR。没有受试者具有进行性疾病作为最佳确认应答，并且9名受试者(30.0％)具有稳定的疾病(表12)。在应答者中，首次确认应答(PR或更好)的中值时间为0.92个月(范围：0.2至5.4个月)，并且还没有达到截至数据截止时的中值应答持续时间。

每两周一次800μg/kgSC的RP2D的塔奎妥单抗

在接受每两周一次800μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗的23名受试者中，18名受试者具有研究者可评价的应答。30名受试者的截至数据截止时的中值随访为3.65个月(范围为0.0至12.0个月)，并且ORR为66.7％(表12)。其中，作为最佳确认应答，2名受试者(11.1％)具有sCR，2名受试者(11.1％)具有CR，5名受试者(27.8％)具有VGPR，并且3名受试者(16.7％)具有PR。没有受试者具有进行性疾病作为最佳确认应答，并且6名受试者(33.3％)具有稳定的疾病(表12)。在应答者中，首次确认应答(PR或更好)的中值时间为1.17个月(范围：0.4至11.1个月)，并且应答的中值持续时间为5.62个月(95％ CI 3.71，NE)。

所有塔奎妥单抗SC组群

在接受任何剂量的塔奎妥单抗SC的97名受试者中(中值随访7.46个月[范围为0.0至18.0个月])，84名受试者具有研究者可评价的应答。这84名受试者的ORR为56.0％。其中，作为最佳确认应答，6名受试者(7.1％)具有sCR，4名受试者(4.8％)具有CR，26名受试者(31.0％)具有VGPR，并且11名受试者(13.1％)具有PR(表12)。在应答者中，首次确认应答(PR或更好)的中值时间为1.15个月(范围：0.2至11.1个月)，并且还没有达到截至数据截止时的中值应答持续时间。

表12基于研究者评估的总体最佳确认应答的总结；研究者对应答可评价的应答者受试者(数据截止2021年7月19日)

表12基于研究者评估的总体最佳确认应答的总结；研究者对应答可评价的应答者受试者(数据截止2021年7月19日)

安全性

治疗引发的不良事件

在IV和SC两种施用途径中评价塔奎妥单抗，其表现出类似的安全性特性。SC施用为患者和医护人员提供了更方便的治疗选择，仅SC施用正在向前发展。因此，下面呈现的数据总结了塔奎妥单抗SC施用的经验。

每周一次405μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗

截至数据截止日期时，每周一次接受405μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗的所有30名受试者具有至少1个TEAE(表13)。

每周一次用405μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗治疗的受试者的最频繁报告的TEAE(≥20％的受试者)为细胞因子释放综合征(CRS)(76.7％)；中性粒细胞减少症(66.7％)；贫血、味觉障碍(各60.0％)；淋巴细胞减少症、白细胞减少症(各40.0％)；血小板减少症、吞咽困难、皮肤剥脱(各36.7％)；疲劳、指甲障碍(各30.0％)；口干、低磷血症、瘙痒(各26.7％)；头痛、腹泻、恶心、皮疹、体重下降(各23.3％)；发热、皮肤干燥、丙氨酸转氨酶增加、γ-谷氨酰转移酶增加、口咽疼痛(各20.0％)。

每周一次接受405μg/kg SC的RP2D的受试者没有导致治疗中止的TEAE(表13)。

每两周一次800μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗

在截至数据截止日期时每两周一次接受800μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗的23名受试者中，91.3％具有至少1个TEAE(表13)。

每两周一次用800μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗治疗的受试者的最频繁报告的TEAE(≥20％的受试者)为CRS(78.3％)；中性粒细胞减少症、口干(各43.5％)；味觉障碍、疲劳、皮肤剥脱、天冬氨酸转氨酶增加(各30.4％)；贫血、皮肤干燥、丙氨酸转氨酶增加(各26.1％)；以及淋巴细胞减少症、血小板减少症、食欲下降、低钾血症(各21.7％)。

每两周一次接受800μg/kg SC的RP2D的受试者没有导致治疗中止的TEAE(表13)。

所有塔奎妥单抗SC组群

在截至数据截止时接受任何剂量的塔奎妥单抗SC的97名受试者中，95.9％具有至少1个TEAE(表13)。

最频繁报告的TEAE(≥20％的受试者)为CRS(70.1％)；中性粒细胞减少症(54.6％)；贫血(46.4％)；味觉障碍(45.4％)；血小板减少症、皮肤剥脱(各30.9％)；淋巴细胞减少症、白细胞减少症、疲劳(各28.9％)；口干(25.8％)；发热(23.7％)；吞咽困难、丙氨酸转氨酶增加(各22.7％)；恶心、指甲障碍(各21.6％)；腹泻、体重下降(各20.6％)。

两名受试者(2.1％)具有导致治疗中止的TEAE(表13)：1名受试者经历与先前化疗方案相关的3级心力衰竭(与研究药物无关)，1名受试者经历1级斑丘疹(与研究药物有关；最差的级别为3级；受试者撤回同意，同时事件改善至1级)。

表13.治疗引发的不良事件的总体总结；安全性分析组(数据截止2021年7月19日)

表13.治疗引发的不良事件的总体总结；安全性分析组(数据截止2021年7月19日)

表13.治疗引发的不良事件的总体总结；安全性分析组(数据截止2021年7月19日)

关键词：TEAE＝治疗引发的不良事件，CRS＝细胞因子释放综合征。

^a在治疗CRF页结束时由于不良事件而中止治疗。

^b在相同输注后，将相同受试者的CRS事件联系起来。如果一个CRS事件之后是另一个，其开始日期与前一个CRS的结束日期相同或在其结束日期之后1天，并且CRS的任何特征(即：毒性级别/严重程度/采取的行动)在CRS事件之间是不同的，则将这些CRS事件联系在一起并且被认为是一个事件。

^c由于不良事件CRF页上的不良事件引起的死亡。

^d被鉴定为潜在神经毒性事件的优选术语是健忘症、失声、思想迟钝、混乱状态、谵妄、意识水平低下、定向障碍、构音障碍、脑病、感觉异常、幻觉、嗜睡、记忆损伤、发热、嗜睡、VIth神经麻痹。

^e神经毒性被定义为研究者认为相关的潜在神经毒性事件。

以每组中的受试者数量作为分母来计算百分比。

*包括第2部分受试者。

剂量限制性毒性(DLT)

仅在第1部分(剂量递增)中评价DLT。在第1部分中，每周一次接受405μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗的受试者没有经历DLT，并且每两周一次接受800ug/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗的1名受试者经历DLT(表13)。第2部分中没有受试者经历满足DLT标准的TEAE。

在接受任何剂量的SC塔奎妥单抗的受试者中已报告了三个DLT(表13)。一名受试者在接受每周一次两个135μg/kg塔奎妥单抗SC治疗剂量后报告3级斑丘疹的SAE(认为非常可能与塔奎妥单抗相关)。截至数据截止时，SAE改善到1级。一名受试者在接受单次800μg/kg治疗剂量(每周一次计划)的塔奎妥单抗SC后经历了3级斑丘疹，其被认为可能是相关的。一名受试者在接受单次800ug/kg治疗剂量(每两周一次计划)后经历了3级皮疹，其被认为是非常可能相关的。这两个事件都消退并且受试者继续治疗并且在截至数据截止时保持治疗。

3级或更高级的治疗引发的不良事件

每周一次405μg/kgSC的RP2D的塔奎妥单抗

每周一次接受405μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗的二十五名(83.3％)受试者具有3级或更高级的TEAE。各自每周一次接受405μg/kg SC的RP2D的1名受试者(3.3％)报告了3级CRS和感染相关的TEAE。没有受试者具有3级或更高级的神经毒性事件或输注/注射反应。没有受试者具有致命的(5级)TEAE(表13)。

每两周一次800μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗

每两周一次接受800μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗的十七名(73.9％)受试者具有3级或更高级的TEAE。每两周一次接受800μg/kg SC的RP2D的1名受试者(4.3％)报告了3级感染相关的TEAE。没有受试者具有3级或更高级的CRS、神经毒性事件、或全身施用相关反应、或局部注射部位反应。一名受试者具有5级TEAE(表13)。

所有塔奎妥单抗SC组群

接受任何剂量的SC塔奎妥单抗的七十九名(81.4％)受试者具有3级或更高级的TEAE。1名(1.0％)受试者和9名(9.3％)受试者分别报告了3级或更高级的CRS和感染相关的TEAE。没有受试者具有3级或更高级的神经毒性事件、输注/注射反应(表13)。一名受试者具有研究者认为与研究治疗无关的5级神经内分泌癌，并且1名受试者具有5级TEAE(表13)。

严重不良事件

每周一次405μg/kgSC的RP2D的塔奎妥单抗

在每周一次接受405μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗SC的30名受试者中，10名受试者报告了严重的TEAE(33.3％)。在超过1名受试者中报告为严重的唯一事件是CRS(2名受试者，6.7％)。

每两周一次800μg/kgSC的RP2D的塔奎妥单抗

在每两周一次接受800μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗SC的23名受试者中，5名受试者报告了严重的TEAE(21.7％)。在超过1名受试者中报告为严重的唯一事件是发热(2名受试者，8.7％)。

所有塔奎妥单抗SC组群

接受塔奎妥单抗SC的37名受试者(38.1％)报告了严重的TEAE(表13)。超过1名受试者报告的严重不良事件是CRS(6名受试者，6.2％)、发热(5名受试者，5.2％)、高钙血症、发热性中性粒细胞减少症、骨痛(3名受试者，3.1％)、流行性感冒、尿道感染、嗜睡(2名受试者，2.1％)。十三名(13.4％)受试者具有研究药物相关的严重不良事件；其中，CRS(7.3％)和发热(3.7％)由超过1名受试者报告。

死亡

所有塔奎妥单抗SC组群

七名接受塔奎妥单抗SC的受试者在截至数据截止日期时死亡：3名受试者由于疾病进展，1名受试者由于被认为与研究药物无关的神经内分泌癌的TEAE，以及3名受试者由于未知原因在最后一次给药的100天内没有进行后续抗癌治疗。

细胞因子释放综合征(CRS)

塔奎妥单抗的作用机制是基于在瘤环境中T细胞的结合和活化以及细胞因子的释放，因此预期在接受塔奎妥单抗的患者中存在CRS，并且在所有正在进行和计划的临床研究中，CRS是对于塔奎妥单抗适当采用缓解策略的重要鉴定风险。为了降低CRS的风险，受试者接受递增剂量的塔奎妥单抗，并且在每个方案的每个递增剂量和首次治疗剂量的塔奎妥单抗之前接受术前用药(糖皮质激素、抗组胺剂和退热剂)。

每周一次405μg/kgSC的RP2D的塔奎妥单抗

在每周一次接受405μg/kg SC的RP2D的23名受试者(76.7％)中报告了CRS，主要为1级(60.0％)或2级(1033％)(表13)。一名患者(3.3％)经历了3级CRS事件；患者恢复并继续治疗。仅在第1周期的早期剂量期间观察到CRS，并且CRS的中值持续时间为2天(范围：1至3天)。二十二名受试者(73.3％)接受作为CRS治疗的支持性措施(18名[60％]接受托珠单抗，1名受试者[3.3％]各自接受皮质类固醇、血管加压剂和补充氧气)。

每两周一次800μg/kgSC的RP2D的塔奎妥单抗

在每两周一次接受800μg/kg SC的RP2D的18名受试者(78.3％)中报告了CRS，全部为1级(52.2％)或2级(26.1％)(表13)。仅在第1周期的早期剂量期间观察到CRS，并且CRS的中值持续时间为2天(范围：1至5天)。十七名受试者(73.9％)接受作为CRS治疗的支持性措施(15名[65.2％]接受托珠单抗，1名受试者[4.3％]各自接受皮质类固醇和补充氧气)。

所有塔奎妥单抗SC组群

在接受塔奎妥单抗SC的70.1％受试者中报告了CRS，主要为1级(50.5％)或2级(18.6％)(表13)。一名受试者(1.0％)表现出3级CRS事件。CRS和相关症状的发生率似乎是剂量依赖性的。仅在第1周期的早期剂量期间观察到CRS，并且CRS的中值持续时间为2天(范围：1至5天)。六十五名受试者(67.0％)接受作为CRS治疗的支持性措施(50名[51.5％]接受托珠单抗，4名受试者[4.1％]接受类固醇，2名受试者[2.1％]接受血管加压剂，并且8名受试者[8.2％]接受补充氧气)。

神经系统不良事件

基于塔奎妥单抗的作用模式，神经毒性被鉴定为重要的潜在风险。在2018年6月，ASTCT的成员开发了由CAR-T细胞诱导的CRS和ICANS事件的严重程度分级系统，并且可应用于其他生物制剂。其公布于2019年4月。该研究开始于2018年1月；因此，该研究的第1部分和第2部分中的TEAE没有使用ASTCT指南进行编码。为了回顾性地管理这一点，申请人的医疗团队经由针对预定列表回顾在神经系统障碍和精神障碍的系统器官类别中报告的TEAE来鉴定潜在的神经毒性事件(不管研究者评估的关联性)。由研究者判断为塔奎妥单抗相关的这些事件的子集被认为是神经毒性事件。该研究的第3部分和其他正在进行或计划的研究中的TEAE将遵循ASTCT指南进行编码，并使用术语ICANS用于神经毒性报告。

每周一次405μg/kgSC的RP2D的塔奎妥单抗

在每周一次接受405μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗SC的30名受试者中，在2名(6.7％)受试者中报告了神经毒性事件。在所报告的神经毒性事件中，没有一个被超过一名受试者报告。

每两周一次800μg/kgSC的RP2D的塔奎妥单抗

在每周一次接受405μg/kg SC的RP2D的塔奎妥单抗SC的23名受试者中，没有报告神经毒性事件。

所有塔奎妥单抗SC组群

在截至数据截止时接受任何剂量的塔奎妥单抗SC的97名受试者中，在5名(5.2％)受试者中报告了神经毒性事件。在所报告的神经毒性事件中，没有一个被超过一名受试者报告。

药代动力学

截至2021年3月25日(该研究中PK数据的截止)，PK数据可得自来自MonumenTAL-1的用剂量范围为每周一次5μg/kg至800μg/kg和每两周一次800μg/kg的SC塔奎妥单抗治疗的69名受试者。PK数据也可得自用剂量范围为每两周一次0.5μg/kg至3.38μg/kg和每周一次1.5μg/kg至180μg/kg的IV塔奎妥单抗治疗的100名受试者。基于安全性、功效和PK，每周一次SC施用405μg/kg被鉴定为推定的RP2D，并且在MonumenTAL-1的第2部分和第3部分中进行评价(为了操作便利400μg/kg)。

IV施用后，初步结果证明C_max出现在IV输注结束时。塔奎妥单抗水平快速下降，消除半衰期(t_1/2)为大约7天。在IV治疗之后，在1.5μg/kg至180μg/kg的范围内，暴露以大致剂量成比例的方式增加。

每周一次或每两周一次皮下施用塔奎妥单抗后，进一步评价塔奎妥单抗的PK。在每周一次SC施用后，浓度-时间曲线显示较少波动和更持续的模式。初步结果提示个体T_max出现在第2天至第8天。在塔奎妥单抗的类似剂量水平下，C_max比IV治疗低大约5.6倍；塔奎妥单抗谷水平在IV和SC施用之间是相当的。申办方承认，与每两周一次800μg/kg SC相比，每周一次400μg/kg SC将导致稳态下更高的平均C_trough、更低的平均C_max和类似的平均C_avg。然而，塔奎妥单抗PK的受试者间变异性是显著的，例如，大多数PK参数的CV高于50％。因此，稳态下的C_trough和C_max在每周一次400μg/kg SC和每两周一次800μg/kg SC之间基本上重叠。基于观察到的功效和安全性，每周一次400μg/kg SC和每两周一次800μg/kg SC均被鉴定为RP2D。由于塔奎妥单抗的独特和新颖的作用机制，尚不清楚C_max是否是功效的驱动力。然而，来自两种剂量方案的塔奎妥单抗C_谷与离体细胞毒性测定中鉴定的最大效应(EC₉₀)值相当或更高。此外，在等于或高于每周一次405μg/kg和每两周一次800μg/kg的剂量水平下，平均塔奎妥单抗浓度高于使用来自多发性骨髓瘤患者(n＝6)的骨髓单核细胞的离体细胞毒性测定获得的最大EC₉₀。该测定评估了使用来自患有多发性骨髓瘤的患者的骨髓样品的单核细胞与来自健康供体的T细胞共培养的塔奎妥单抗诱导杀伤的能力。基于在第3周期中可获得的稳态数据，SC每周一次给药后的平均累积比(基于AUC_tau)在1.7至5.1的范围内。此外，初步群体PK分析和非隔室分析显示SC每周一次施用后的平均生物利用度为48％。

截至2021年3月25日在每周一次(400μg/kg)和每两周一次(800μg/kg)多次SC给药后的第1周期和第3周期的塔奎妥单抗PK参数的总结提供于表14中。

表14.在多次SC每周一次给药(400μg/kg)和每两周一次给药(800μg/kg)塔奎妥单抗后的第1周期和第3周期的塔奎妥单抗PK参数的初步总结

^a对于q1w，AUC_tau＝AUC_0-168hr；对于q2w，AUC_tau＝AUC_0-336hr ^b组合来自组群20和23的PK参数

免疫原性

截至2021年4月7日(研究64007957MMY1001中免疫原性数据的截止)，评价来自161名受试者(IV和SC治疗)的样品的免疫原性。初步结果显示，对于IV施用(高达180μg/kg)的100名受试者中有12名(12％)和对于SC施用(高达800μg/kg)的61名受试者中有7名(11％)针对塔奎妥单抗为ADA阳性的。除了2名受试者之外，大多数受试者的滴度是低的(等于测定的最小所需稀释度[20])。基于初步评价，ADA似乎不影响塔奎妥单抗的暴露。

作为初始科学建议的一部分，CHMP强调需要提供关于免疫原性的1年数据以用于销售授权。免疫原性数据已从该研究获得(第1部分和第2部分)并且将从第3部分(2期)收集。在提交时，1年数据将可从1年后仍在研究中的第1部分和第2部分中的受试者获得。此外，将包括来自该研究的第3部分中的受试者的大约6个月的免疫原性数据。

药效学

截至2021年2月5日的数据截止，可获得在MomenTAL-1中以RP2D治疗的28名参与者的药效学数据。接受405μg/kg SC塔奎妥单抗的受试者证明药效学变化与所提出的作用机制一致。这些包括细胞因子诸如IL-10(中值最大倍数变化8.582；范围：[1.42-73.82])、IL-2Rα(3.866；1.47-27.84)和IL-6(87.800；1.45-1841.25)的一致增加。此外，在405μg/kg组群中也观察到T细胞活化的诱导，如通过CD3+T细胞上活化标记物诸如CD25(中值最大倍数变化1.87[范围：0.72至9.76])、PD-1(1.94；1.09-6.51)、HLA-DR(1.324；0.76-5.64)、CD38(2.952；0.6-11.30)、LAG-3(3.221；1.16-11.36)、TIM-3(3.442；1.06-15.09)的表达增加所证明的，以及如通过总T细胞绝对计数的变化(0.623；0.2-4.18)所指示的T细胞重新分布。

更新数据截止时的结论

截至2021年7月19日，95名患者已接受SC塔奎妥单抗。RP2D最初被鉴定为405μg/kg塔奎妥单抗的每周SC给药，其中递增剂量为10μg/kg和60μg/kg。继续研究需要较低频率施用的另选给药计划。每两周一次RP2D也被鉴定为800μg/kg塔奎妥单抗的SC给药，其中递增剂量为10μg/kg、60μg/kg和300μg/kg。

30名患者接受405μg/kg每周给药计划(中值年龄：61.5岁[范围：46-80]；63％男性；100％三级暴露；80％五种药物暴露；77％三级难治性，20％五种药物难治性；30％先前BCMA定向疗法)。23名患者接受800μg/kg每两周给药计划(中值年龄：60.0岁[范围：47-84]；52％女性；96％三级暴露；70％五种药物暴露；65％三级难治性，22％五种药物难治性；17％先前BCMA定向疗法)。

在任一种RP2D下都没有由AE引起的治疗中止。在405μg/kg每周剂量下最常见的AE为CRS(73％；3/4级：3％)、中性粒细胞减少症(67％；3/4级：60％)和味觉障碍(60％；均为1/2级)；在77％的患者中发生皮肤相关的AE(指甲障碍：30％)，并且在37％的患者中发生感染(3/4级：3％)。800μg/kg每两周剂量下的最常见的AE为CRS(78％；均为1/2级)、口干(44％；均为1/2级)和中性粒细胞减少症(44％；3/4级：35％)；在65％的患者中发生皮肤相关的AE(指甲障碍：17％)，并且在13％的患者中发生感染(3/4级：4％)。

在7.5个月的中值随访(范围：0.9-15.2)时，在用405μg/kg每周剂量治疗的30名应答可评价患者中，总体应答率(ORR)为70％(非常良好的部分应答或更好[≥VGPR]：57％)。在3.7个月的中值随访(范围0.0-12.0)时，在接受800μg/kg每两周剂量的17名应答可评价患者中，ORR为71％(≥VGPR：53％)。在两个组群中，应答持久且随时间加深(图)；未达到应答持续时间中值。大多数应答维持在6个月，其中66％(10/15)和85％(7/8)的患者分别在405μg/kg每周组群和800μg/kg每两周组群中继续治疗。塔奎妥单抗的血清谷水平在两种RP2D下是相当的。来自以两种剂量水平治疗的组群的药效学数据显示一致的外周T细胞活化和细胞因子诱导，证明了塔奎妥单抗的作用机制。

这些发现指示SC塔奎妥单抗在两种RP2D下是良好耐受的和高度有效的。来自800μg/kg每两周组群的初步数据指示，较低频率、较高剂量的SC塔奎妥单抗对先前描述的安全性特性没有负面影响。

药代动力学模拟

进一步的资料模拟提供了在第1周期和第2周期施用800μg/kg的RP2D的药代动力学(PK)数据支持。基于模拟结果，用第2周期的800μg/kg治疗的患者的最大平均血清浓度(C_max)为4233.4ng/mL(范围1247.4ng/mL-12710.1ng/mL)并且血液中塔奎妥单抗的最低平均浓度(C_min)为2670.4ng/mL(范围662.7ng/mL-8100.4ng/mL)。在第2周期4种不同剂量的塔奎妥单抗(包括800μg/kg)的模拟暴露量度(C_max、C_min和AUC(曲线下面积))的总结示于表15中。

表15：在第2周期塔奎妥单抗的不同给药方案中模拟暴露量度平均C_max、C_min和AUC 的总结。

预测的中值(第5和第95百分位数)

^a对于第2周期计算的暴露量度

^b在第2剂量后计算的暴露量度

在稳态下用800μg/kg塔奎妥单抗治疗的患者的平均C_max为4808.9ng/mL(范围1329.0ng/mL-18938.7ng/mL)并且平均C_min为3908.3ng/mL(范围751.2ng/mL-16766.7ng/mL)。在稳态下塔奎妥单抗的不同给药方案(包括800μg/kg)中的模拟暴露量度(C_max、C_min和AUC)的总结示于表16中。

表16：在稳态下塔奎妥单抗的不同给药方案中的暴露量度平均C_max、C_min和AUC的总 结。

预测的中值(第5和第95百分位数)

第2部分(剂量扩展部分)-给药计划

在第1部分中鉴定用于塔奎妥单抗的推定RP2D后，在第2部分(NCT04634552)中治疗受试者。

SC施用：在鉴定用于SC施用的推定RP2D后，受试者用405μg/kg作为药剂扩展中的SC QW RP2D(其中递增剂量为10μg/kg和60μg/kg)进行治疗，以进一步证明安全性和表征初步抗肿瘤活性。另一亚组的受试者用800μg/kg作为剂量扩展中的SC每两周RP2D剂量(其中递增剂量为10μg/kg、60μg/kg和300μg/kg)进行治疗。

在第2部分中，可招募多达40名受试者，并用IV或SC塔奎妥单抗以405μg/kg或800μg/kg的RP2D进行治疗。另外，在第1部分中推荐的相同给药计划可用于进一步表征在附加的受试者中在感兴趣的RP2D剂量下的初步抗肿瘤活性和安全性。将在研究的第1部分中使用的相同的支持性护理措施应用于在第2部分中治疗的受试者。SET(研究评价小组)可停止进一步招募到剂量扩展组群中，直到任何SET审查的结果，或如果确定治疗引发的毒性导致受试者风险或益处的不利变化。

停止规则

对于第2部分中的到达施用途径，大约每5名受试者(例如，第5名、第10名等)将在推定的RP2D完整治疗第1周期或较早中止后评价剂量限制性毒性(DLT)数据。将拟合BLRM模型，包括来自第1部分(剂量递增)和第2部分(剂量扩展)的受试者的所有累积数据。如果DLT比率在[0.25-1]范围内的后验概率大于或等于25％(即，Prob[p)TOX，推定RP2D)>0.25数据]≥0.25)，则申办方将停止针对特定推定RP2D组群的附加招募。当拟合BLRM模型以计算后验概率时，将考虑在第1周期或第2周期期间直到当前时间点发生的所有DLT。如果基于SET审查停止对当前推定RP2D的招募，则可探索较低剂量水平下的其他扩展组群。

第3部分(2期，研究名称：MonumenTAL-1)

在第3部分中，将招募三个不同的组群，组群A、组群B和组群C。组群A、B和C代表具有有限治疗选择的复发性/难治性多发性骨髓瘤患者的亚组。这些组群定义如下：

组群A(400μg/kg每周一次SC)将招募患有多发性骨髓瘤的受试者，这些受试者先前已接受了≥3种包括至少一种蛋白酶体抑制剂(PI)、一种免疫调节性酰亚胺药物(IMiD)和抗CD38单克隆抗体的先前系列疗法，并且尚未暴露于T细胞重定向疗法诸如CAR-T或双特异性抗体。

组群B(400μg/kg每周一次SC)将招募患有多发性骨髓瘤的受试者，这些受试者先前已接受了≥3种包括至少一种PI、一种IMiD和抗CD38单克隆抗体的先前系列疗法，并且已暴露于T细胞重定向疗法诸如CAR-T或双特异性抗体。

群组C(800μg/kg每两周一次SC)将招募患有多发性骨髓瘤的受试者，这些受试者先前已接受了≥3种包括至少一种PI、一种IMiD和抗CD38单克隆抗体的先前系列疗法，并且尚未暴露于T细胞重定向疗法诸如CAR-T或双特异性抗体。

将在大约20名受试者已用400μg/kg或800μg/kg的RP2D的SC塔奎妥单抗治疗至少一个周期后招募组群A和组群B。申办方还可确定在进行到第3部分之前需要附加的受试者来进一步评估安全性和剂量。将在20名受试者已用800μg/kg的RP2D的SC塔奎妥单抗每两周一次治疗至少1个周期后开始招募组群C。与第2部分相反，第3部分选择的RP2D为400μg/kg每周一次和800μg/kg每两周一次SC塔奎妥单抗，直到病情进展。第2部分中的推定RP2D为405μg/kg每周一次和800μg/kg每两周一次SC塔奎妥单抗，直到病情进展。

在第3部分中，当受试者表现出完全应答(CR)或更好达最少6个月时，将允许受试者从每周一次400μg/kg SC给药计划转换为每两周一次800μg/kg SC给药。基于这2个给药计划的可比较的初步PK、安全性和功效数据，给药计划的改变也必须由申办方批准。第3部分中的引发剂量计划将由2个剂量(10μg/kg和60μg/kg)组成，每个剂量间隔2至4天，并且将在第一治疗剂量之前2至4天完成(即，如果治疗没有延迟，则在第一治疗剂量之前5至8天施用第一引发剂量(10μg/kg)，并且在第一治疗剂量之前2至4天施用第二引发剂量(60μg/kg))。还将评价第3部分中患者的生物标记物。

第3部分特别感兴趣的不良事件是≥2级的神经毒性(即，ICANS(免疫效应细胞相关的神经毒性综合征)、ICANS的症状和非ICANS神经毒性)。关于第3部分的T&E神经学检查，在引发剂量1时进行评估，而在筛选时没有评估。

本领域的技术人员将会知道可对本发明的优选实施方案作出许多改变和修改，而且此类改变和修改可在不脱离本发明的实质的情况下进行。因此，所附权利要求书旨在覆盖落入本发明的真实实质和范围内的所有此类等同变化。

本文档所引用或描述的每项专利、专利申请和公布的公开内容均据此全文以引用方式并入本文。

序列表

<110> Janssen Pharmaceutica NV

<120> 用于治疗多发性骨髓瘤的方法

<130> PRD4096

<150> US 63/079,294

<151> 2020-09-16

<150> US 63/116,549

<151> 2020-11-20

<150> US 63/187,888

<151> 2021-05-12

<160> 24

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 345

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 1

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20 25 30

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Val Val Cys Ile Ala Leu Val Thr Asn Ala Trp Val Phe Leu Leu Leu

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260 265 270

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<210> 2

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<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 2

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<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

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<220>

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Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln

370 375 380

Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly

385 390 395 400

Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln

405 410 415

Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn

420 425 430

His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

435 440 445

<210> 13

<211> 210

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> GC5B596 LC

<400> 13

Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Ala Thr His

20 25 30

Val Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile

35 40 45

Tyr Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Arg Tyr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Lys Ala Ala Pro Ser

100 105 110

Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala

115 120 125

Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val

130 135 140

Ala Trp Lys Gly Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr

145 150 155 160

Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu

165 170 175

Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln

180 185 190

Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu

195 200 205

Cys Ser

210

<210> 14

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3B219 HCDR1

<400> 14

Thr Tyr Ala Met Asn

1 5

<210> 15

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3B219 HCDR2

<400> 15

Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser

1 5 10 15

Val Lys Gly

<210> 16

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3B219 HCDR3

<400> 16

His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 17

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3B219 LCDR1

<400> 17

Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser Asn Tyr Ala Asn

1 5 10

<210> 18

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3B219 LCDR2

<400> 18

Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro

1 5

<210> 19

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3B219 LCDR3

<400> 19

Ala Leu Trp Tyr Ser Asn Leu Trp Val

1 5

<210> 20

<211> 125

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3B219 VH

<400> 20

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120 125

<210> 21

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3B219 VL

<400> 21

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro

100 105 110

<210> 22

<211> 452

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3B219 HC

<400> 22

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr

20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Tyr Asn Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Ser

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Ala Arg His Gly Asn Phe Gly Asn Ser Tyr Val Ser Trp Phe

100 105 110

Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr

115 120 125

Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser

130 135 140

Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu

145 150 155 160

Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His

165 170 175

Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser

180 185 190

Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys

195 200 205

Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu

210 215 220

Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala

225 230 235 240

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu

245 250 255

Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser

260 265 270

Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu

275 280 285

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr

290 295 300

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn

305 310 315 320

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser

325 330 335

Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln

340 345 350

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val

355 360 365

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val

370 375 380

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro

385 390 395 400

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu Leu Tyr Ser Lys Leu Thr

405 410 415

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val

420 425 430

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu

435 440 445

Ser Leu Gly Lys

450

<210> 23

<211> 215

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> CD3B219 LC

<400> 23

Gln Thr Val Val Thr Gln Glu Pro Ser Leu Thr Val Ser Pro Gly Gly

1 5 10 15

Thr Val Thr Leu Thr Cys Arg Ser Ser Thr Gly Ala Val Thr Thr Ser

20 25 30

Asn Tyr Ala Asn Trp Val Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Gly

35 40 45

Leu Ile Gly Gly Thr Asn Lys Arg Ala Pro Gly Thr Pro Ala Arg Phe

50 55 60

Ser Gly Ser Leu Leu Gly Gly Lys Ala Ala Leu Thr Leu Ser Gly Val

65 70 75 80

Gln Pro Glu Asp Glu Ala Glu Tyr Tyr Cys Ala Leu Trp Tyr Ser Asn

85 90 95

Leu Trp Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly Gln Pro

100 105 110

Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu Glu Leu

115 120 125

Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe Tyr Pro

130 135 140

Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val Lys Ala

145 150 155 160

Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys Tyr Ala

165 170 175

Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser His Arg

180 185 190

Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu Lys Thr

195 200 205

Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser

210 215

<210> 24

<211> 327

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 野生型IgG4

<400> 24

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

Claims (23)

1.一种治疗有需要的受试者的血液恶性肿瘤、优选地多发性骨髓瘤的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的GPRC5DxCD3双特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述受试者对于用先前的抗癌治疗进行的治疗复发或难治。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述GPRC5DxCD3双特异性抗体以约0.2μg/kg至约2400μg/kg的剂量静脉内或皮下施用。

3.根据权利要求2所述的方法，包括：

(1)以0.5μg/kg至10μg/kg，诸如0.5μg/kg、1.0μg/kg、1.5μg/kg、

2.25μg/kg、2.5μg/kg、2.75μg/kg、3.0μg/kg、3.25μg/kg、

3.38μg/kg、3.5μg/kg、3.75μg/kg、4μg/kg、4.5μg/kg、5μg/kg、

6μg/kg、7μg/kg、8μg/kg、9μg/kg、10μg/kg或介于它们之间的任何值的第一引发剂量，优选地每2至4天一次，向所述受试者静脉内或皮下施用所述GPRC5DxCD3双特异性抗体，以及

(2)随后以高于所述第一引发剂量的治疗剂量，优选地每月一次、每三周一次、每两周一次、每周一次或每周两次，向所述受试者皮下施用所述GPRC5DxCD3双特异性抗体，所述治疗剂量在1.5μg/kg至2400μg/kg或1.5μg/kg至1000μg/kg的范围内，诸如1.5μg/kg、5μg/kg、10μg/kg、15μg/kg、30μg/kg、45μg/kg、100μg/kg、135μg/kg、200μg/kg、300μg/kg、400μg/kg、405μg/kg、500μg/kg、600μg/kg、700μg/kg、800μg/kg、900μg/kg、1000μg/kg、1200μg/kg、1600μg/kg、2000μg/kg、

2400μg/kg或介于它们之间的任何值，

任选地，所述方法还包括以高于所述第一引发剂量但低于所述治疗剂量的一个或多个附加引发剂量向所述受试者皮下施用所述GPRC5DxCD3双特异性抗体，其中所述一个或多个附加引发剂量在所述第一引发剂量之后但在所述治疗剂量的所述施用之前施用。

4.根据权利要求2所述的方法，其中所述GPRC5DxCD3双特异性抗体以约0.2μg/kg至约500μg/kg、优选地约1μg/kg至约300μg/kg、最优WO 2022/058445A1

选地约10μg/kg至约200μg/kg，诸如约10μg/kg、20μg/kg、30μg/kg、

40μg/kg、50μg/kg、60μg/kg、70μg/kg、80μg/kg、90μg/kg、

100μg/kg、110μg/kg、120μg/kg、130μg/kg、140μg/kg、150μg/kg、

160μg/kg、170μg/kg、180μg/kg、190μg/kg、200μg/kg或介于它们之间的任何值的剂量，优选地每月一次、每三周一次、每两周一次、每周一次或每周两次静脉内施用。

5.根据权利要求4所述的方法，包括：

(1)以0.5μg/kg至5μg/kg，诸如0.5μg/kg、1.0μg/kg、1.5μg/kg、

2.25μg/kg、2.5μg/kg、2.75μg/kg、3.0μg/kg、3.25μg/kg、

3.38μg/kg、3.5μg/kg、3.75μg/kg、4μg/kg、4.5μg/kg、5μg/kg或介于它们之间的任何值的第一引发剂量，优选地每2至4天一次，向所述受试者静脉内施用所述GPRC5DxCD3双特异性抗体，以及

(2)随后以高于所述第一引发剂量的治疗剂量，优选地每月一次、每三周一次、每两周一次、每周一次或每周两次，向所述受试者静脉内施用所述GPRC5DxCD3双特异性抗体，所述治疗剂量在1.5μg/kg至200μg/kg的范围内，诸如1.5μg/kg、2.25μg/kg、

3.38μg/kg、5μg/kg、7.5μg/kg、11.25μg/kg、20μg/kg、40μg/kg、60μg/kg、80μg/kg、100μg/kg、120μg/kg、140μg/kg、160μg/kg、180μg/kg、200μg/kg或介于它们之间的任何值，

任选地，所述方法还包括以高于所述第一引发剂量但低于所述治疗剂量的一个或多个附加引发剂量向所述受试者静脉内施用所述GPRC5DxCD3双特异性抗体，其中所述一个或多个附加引发剂量在所述第一引发剂量之后但在所述治疗剂量的所述施用之前施用。

6.根据权利要求2所述的方法，其中所述GPRC5DxCD3双特异性抗体以约0.5μg/kg至约2400μg/kg、或约1μg/kg至约2400μg/kg、或约10μg/kg至约2400μg/kg，诸如约10μg/kg、50μg/kg、100μg/kg、

150μg/kg、200μg/kg、250μg/kg、300μg/kg、350μg/kg、400μg/kg、

450μg/kg、500μg/kg、550μg/kg、600μg/kg、650μg/kg、700μg/kg、

750μg/kg、800μg/kg、850μg/kg、900μg/kg、950μg/kg、1000μg/kg、

1200μg/kg、1600μg/kg、2000μg/kg、2400μg/kg或介于它们之间的任WO 2022/058445A1

何值的剂量，优选地每月一次、每三周一次、每两周一次、每周一次或每周两次皮下施用。

7.根据权利要求6所述的方法，包括：

(1)以0.3μg/kg至400μg/kg的一个或多个引发剂量，优选地每2至4天一次，向所述受试者施用所述GPRC5DxCD3双特异性抗体，以及

(2)随后以高于所述引发剂量的治疗剂量，诸如1μg/kg至2400μg/kg，优选地每月一次、每三周一次、每两周一次、每周一次或每周两次，向所述受试者施用所述GPRC5DxCD3双特异性抗体。

8.一种治疗有需要的受试者的多发性骨髓瘤的方法，包括每周一次或每两周一次向所述受试者皮下施用405μg/kg的GPRC5DxCD3双特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述受试者对于用先前的抗癌治疗进行的治疗复发或难治，优选地，所述405μg/kg的GPRC5DxCD3双特异性抗体或其抗原结合片段的初始施用发生在向所述受试者施用一个或多个引发剂量的所述抗体或其抗原结合片段之后，诸如在每周一次或每两周一次皮下施用10μg/kg、60μg/kg和300μg/kg的一个或多个引发剂量之后。

9.一种治疗有需要的受试者的多发性骨髓瘤的方法，包括每周一次或每两周一次向所述受试者皮下施用800μg/kg的GPRC5DxCD3双特异性抗体或其抗原结合片段，其中所述受试者对于用先前的抗癌治疗进行的治疗复发或难治，优选地，所述800μg/kg的GPRC5DxCD3双特异性抗体或其抗原结合片段的初始施用发生在向所述受试者施用一个或多个引发剂量的所述抗体或其抗原结合片段之后，诸如在每周一次或每两周一次皮下施用10μg/kg、60μg/kg和300μg/kg的一个或多个引发剂量之后。

10.根据权利要求1至9中任一项所述的方法，其中所述GPRC5DxCD3双特异性抗体或其抗原结合片段包含GPRC5D结合结构域和CD3结合结构域，所述GPRC5D结合结构域包含SEQID NO:4的HCDR1、SEQ ID NO:5的HCDR2、SEQ ID NO:6的HCDR3、SEQ ID NO:7的LCDR1、SEQID NO:8的LCDR2和SEQ ID NO:9的LCDR3，所述WO 2022/058445A1

CD3结合结构域包含SEQ ID NO:14的HCDR1、SEQ ID NO:15的HCDR2、SEQ ID NO:16的HCDR3、SEQ ID NO:17的LCDR1、SEQID NO:18的LCDR2和SEQ ID NO:19的LCDR3。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的方法，其中所述GPRC5D结合结构域包含具有SEQ ID NO:10的氨基酸序列的重链可变区(VH)和具有SEQ ID NO:11的氨基酸序列的轻链可变区(VL)，并且所述CD3结合结构域包含具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的VH和具有SEQID NO:21的氨基酸序列的VL。

12.根据实施方案1至11中任一项所述的方法，其中所述GPRC5DxCD3双特异性抗体是IgG4同种型并且包含第一重链(HC1)中第405位处的苯丙氨酸和第409位处的精氨酸，以及第二重链(HC2)中第405位处的亮氨酸和第409位处的赖氨酸，其中残基根据EU索引进行编号。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中所述GPRC5DxCD3双特异性抗体还包含所述HC1和所述HC2两者中第228位处的脯氨酸、第234位处的丙氨酸和第235位处的丙氨酸。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中所述GPRC5DxCD3双特异性抗体包含具有SEQ ID NO:12的氨基酸序列的HC1、具有SEQ ID NO:13的氨基酸序列的第一轻链(LC1)、具有SEQ ID NO:22的氨基酸序列的HC2和具有SEQ ID NO:23的氨基酸序列的第二轻链(LC2)。

15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中所述GPRC5DxCD3双特异性抗体是塔奎妥单抗。

16.根据权利要求1至15中任一项所述的方法，其中所述治疗实现完全应答、严格完全应答、非常良好的部分应答、部分应答、最小应答或疾病稳定状态，并且能够继续直至疾病进展或缺乏患者益处。

17.根据权利要求16所述的方法，其中所述治疗实现完全应答，所述完全应答的特征在于阴性微小残留病(MRD)状态，优选地处于10^-6个细胞下的阴性MRD状态，如通过下一代测序(NGS)所确定的，或至少20％诸如至少20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、WO2022/058445A1

60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％或介于它们之间的任何值的总体应答率。

18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中所述治疗导致稳态平均Cmax为10ng/ml至25,000ng/ml诸如100ng/ml至20,000ng/ml或1000ng/ml-10,000ng/ml和稳态平均AUC_0-14d为1000ng h/ml至1,500,000ng h/ml诸如5000ng h/ml至1,000,000ng h/ml或10,000ng h/ml至1,000,000ng h/mL的GPRC5DxCD3双特异性抗体暴露。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述先前的抗癌治疗选自由以下项组成的组：沙利度胺、来那度胺、泊马度胺、硼替佐米、艾莎佐米、卡非佐米、帕比司他、氨羟二磷酸二钠、唑来膦酸、达雷木单抗、埃罗妥珠单抗、美法仑、塞利尼索、贝兰他单抗莫福汀-blmf、维奈托克、CC-92480、CAR-T疗法、其他BCMA-定向疗法、其他CD38-定向疗法以及它们中的两种或更多种的组合。

20.根据权利要求1至19中任一项所述的方法，其中所述受试者是需要治疗多发性骨髓瘤并且对于用多发性骨髓瘤的所述先前治疗进行的治疗复发或难治的人。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的方法，还包括向所述受试者施用一种或多种附加抗癌疗法。

22.根据权利要求21所述的方法，其中所述一种或多种附加抗癌疗法选自由以下项组成的组：自体干细胞移植(ASCT)、放射、手术、化学治疗剂、CAR-T疗法、细胞疗法、免疫调节剂、靶向癌症疗法、减少或耗竭Treg的疗法以及它们中的两种或更多种的组合。

23.根据权利要求21所述的方法，其中所述一种或多种附加抗癌疗法选自由以下项组成的组：塞利尼索、贝兰他单抗莫福汀-blmf、伊沙妥昔单抗、维奈托克、来那度胺、沙利度胺、泊马度胺、硼替佐米、卡非佐米、埃罗妥珠单抗、艾莎佐米、美法仑、地塞米松、长春新碱、环磷酰胺、羟基柔红霉素、泼尼松、利妥昔单抗、伊马替尼、达沙替尼、CC-92480、尼洛替尼、博舒替尼、普纳替尼、巴非替尼、塞卡替尼、陶扎舍替、达鲁舍替、阿糖胞苷、柔红霉素、伊达比星、米托蒽醌、羟基脲、地西他滨、克拉屈滨、氟达拉滨、拓扑替康、依托泊苷6-硫WO 2022/058445A1

鸟嘌呤、皮质类固醇、甲氨蝶呤、6-巯嘌呤、阿扎胞苷、三氧化二砷和全反式视黄酸以及它们中的两种或更多种的组合。

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