CN116298320A - 检测白血病抑制因子的试剂盒及检测方法 - Google Patents
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Abstract
本公开涉及检测白血病抑制因子的试剂盒及检测方法。所述试剂盒包括：第一试剂，所述第一试剂含有包被有第一抗人白血病抑制因子LIF抗体的固定相；第二试剂，所述第二试剂含有具有标记物的第二抗人LIF抗体，其中所述第二抗人LIF抗体不同于所述第一抗人LIF抗体；发光底物液，其中所述发光底物液含有能够与所述标记物反应产生化学发光的发光底物；和抗干扰剂，所述抗干扰剂含有鼠IgG和吐温20。该试剂盒能有效消除样本中的干扰而获得准确的结果。
Description
技术领域
本公开涉及血液分析领域，特别涉及用于检测白血病抑制因子的试剂盒以及白血病抑制因子的检测方法。
背景技术
人类白血病抑制因子(hLIF)是一种具有多种生物活性并对不同细胞类型均有影响的白细胞介素6型细胞因子，是一种具有202个氨基酸的多肽。与其他白细胞介素家族成员类似，白血病抑制因子(LIF)与含有GP130的受体复合物结合，激活类似的信号级联，如STAT3的磷酸化通路。已有研究证明，LIF的高表达水平和高血清水平在多种癌症的不良预后判断中具有一定的辅助作用。在胰腺导管腺癌中LIF是活化胰腺星状细胞，并激活癌细胞STAT3磷酸化的关键旁分泌因子。药理学上的LIF阻断和基因上的受体缺失都可以显著减缓肿瘤的进展，并增强化疗有效性。
然而还未见检测LIF的免疫学测定试剂盒在售。
因此，有必要提供利用免疫学方法准确检测LIF的试剂盒以及检测方法。
发明内容
有鉴于此，本公开意在提供一种检测白血病抑制因子的试剂盒及方法。该试剂盒利用免疫夹心法能够更准确检测白血病抑制因子，并且在存在干扰的情况下，特别是存在异嗜性抗体(HA)和/或自身抗体干扰的情况下下，能够有效抗干扰，而避免假性结果，或者偏高或偏低的不准确结果。
本公开的第一方面提供一种用于检测人类白血病抑制因子的试剂盒，其中所述试剂盒包括：
第一试剂，所述第一试剂含有包被有第一抗人白血病抑制因子LIF抗体的固定相；
第二试剂，所述第二试剂含有具有标记物的第二抗人LIF抗体，其中所述第二抗人LIF抗体不同于所述第一抗人LIF抗体；
发光底物液，其中所述发光底物液含有能够与所述标记物反应产生化学发光的发光底物；和
抗干扰剂，所述抗干扰剂含有鼠IgG和吐温20。
根据一种实施方式，所述第一试剂与所述抗干扰剂以混合形式提供在所述试剂盒中作为混合试剂。
所述混合试剂中，所述鼠IgG的浓度为100～1000μg/mL，且所述吐温20 的浓度为100～1000μg/mL。优选地，所述混合试剂中，所述鼠IgG的浓度为300～700μg/mL，且所述吐温20的浓度为300～700μg/mL。
根据一种实施方式，固定相为超顺磁性微粒。
根据一种实施方式，所述标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶和荧光素。优选所述标记物为碱性磷酸酶。
根据一种较优的实施方式，所述标记物为碱性磷酸酶，且所述发光底物为AMPPD。
本公开的第二方面提供一种检测人类白血病抑制因子LIF的方法，包括：
将一定量的第一试剂、抗干扰剂、第二试剂混合和样本混合均匀得到第一反应液，并孵育3～10分钟；
分离出固定相；
向所述固定相中加入一定量发光底物液混合均匀得到第二反应液，并孵育10～20分钟；
检测所述第二反应液中产生的光子数，其中所测得的光子数与所述样本中LIF的含量成正比。
其中所述第一试剂、所述第二试剂、所述抗干扰剂和所述发光底物液分别如以上所定义。
根据一种实施方式，所述方法进一步包括：将所测得的光子数与标准曲线比对，以获得样本中LIF含量。
所述样本为血清或血浆。
本公开提供的试剂盒包括能够与人LIF不同表位结合的两种抗体，通过双抗体夹心法能够更准确检测到样本中的LIF。此外，所述试剂盒中还包括抗干扰剂，通过鼠IgG和吐温20的配合能够很好地消除样品中干扰物对检测的影响，特别对异嗜性抗体干扰以及自身抗体干扰有优异的效果。因此，所述试剂盒能够对不同受试者的样本中的LIF进行准确的检测。
具体实施方式
下面将结合实施方式和实施例，对本公开的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的具体实施方式仅仅是一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于这些实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。
在文中，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的方法或者产品不仅包括所明确记载的要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者还包括为实施所述方法或者产品所固有的要素。
除非另有说明，否则如在本文中所使用的单数形式“一个/种”和“该/所述”包括所指名词的复数。
除非另有说明，否则在本文中所使用的％指质量百分数。
基于白血病抑制因子(LIF)的多种生理学活性，预期抑制LIF可产生抗肿瘤的效果。因此，在多种疾病，特别是针对癌症的治疗药物的研究中，LIF相关的研究是热点研究之一。正常健康个体中LIF的典型血浆或血清浓度为0-10pg/ml之间。但是，由于抗体/配体复合物的清除比游离配体的清除慢，因此一旦细胞因子与抗体结合，血浆中总LIF的水平可能会增加。对血液中存在的LIF进行准确检测能够辅助相关疾病的研究并监测治疗效果。
本发明人对众多样本中的LIF进行检测发现，LIF的检测容易受到样本中的干扰物影响，而出现假性结果，或者显著偏高或偏低的结果，影响临床应用。因此，本发明人提出了一种能够抗干扰的LIF检测试剂盒。该试剂盒采用双抗体免疫夹心法，利用化学发光体系进行检测，能够有效抗干扰而获得准确的结果。
根据本公开，提供一种用于检测人类白血病抑制因子的试剂盒。所述试剂盒包括：第一试剂，所述第一试剂含有包被有第一抗人白血病抑制因子LIF抗体的固定相；第二试剂，所述第二试剂含有具有酶标记物的第二抗人LIF抗体，其中所述第二抗人LIF抗体不同于所述第一抗人LIF抗体；发光底物液，其中所述发光底物液含有能够与所述标记物反应产生化学发光的发光底物；和抗干扰剂，所述抗干扰剂含有鼠IgG和吐温20。
根据一种优选的实施方式，抗干扰剂与第一试剂以混合试剂形式提供在所述试剂盒中。
所述试剂盒中包括两种抗人LIF抗体可以与LIF的不同免疫原性部位或表位结合，形成抗体-LIF-抗体的夹心结构。具体来说，第一抗人LIF抗体与固定相结合，以便于在后续步骤中进行分离；第二抗人LIF抗体则连接着标记物，该标记物后续能够与发光底物液中的发光底物结合，产生化学发光，以便于检测。所述试剂盒适用于免疫夹心检测法。首先，样本与包被有第一抗人LIF抗体的固定相以及具有酶标记物的第二抗人LIF抗体混合，在例如37℃下孵育一定时间，样本中的被测物LIF与固定相上的第一抗人LIF抗体以及具有酶标记物的第二抗人LIF抗体结合，形成抗体-LIF-抗体的夹心结构。将固定相与反应液分离并洗涤固定相，这样仅与LIF结合的第二抗人LI抗体随固定相被分离出来，而未反应的第二抗人LI抗体留在反应液中。将分离出来的固定相与发光底物液混合反应(例如在37℃下孵育一定时间)，通过检测化学发光信号，对照标准曲线，则可测得样本中LIF的含量。该方法的原理是技术人员所熟知的，然而该检测容易受到多种因素干扰，例如甘油三酯、胆红素、血红蛋白、总蛋白、生物素及抗体等的干扰，特别是异嗜性抗体和自身抗体的干扰。所述试剂盒通过进一步包括抗干扰剂，有效解决了上述干扰的问题。
根据本公开，抗干扰剂含有鼠IgG和吐温20。本发明人发现，在样本与抗体的反应液中单独加入鼠IgG具有一定的抗干扰效果，在一定程度上修正异常样本的检测结果，但是仍与准确结果有一定偏差。然而令人吃惊的是，进一步加入吐温20后，能够几乎完全消除各类常见的干扰，对异常样本也能获得准确的检测结果，而吐温20本身则没有抗干扰的效果。此外，其他表面活性剂，甚至吐温的其他系列产品，如吐温80，与鼠IgG一起添加时，对某些干扰物也有一定的辅助抗干扰作用，但是均没有吐温20的协同抗干扰效果全面。由此，本发明人提出了上述能够准确检测各种血液样本中LIF的试剂盒。
所述鼠IgG可为小鼠IgG。当抗干扰剂与第一试剂以混合形式提供时，在混合试剂中的鼠IgG的浓度为100～1000μg/mL，优选为300～700μg/mL，最优选500μg/mL。
当抗干扰剂与第一试剂以混合形式提供时，吐温20在混合试剂中的浓度为100～1000μg/mL，优选为300～700μg/mL，最优选500μg/mL。
抗干扰剂作为单独的试剂时，可进一步含有防腐剂、缓冲剂、渗透压调节剂等必要的添加剂。本公开对各添加剂没有特别限制，可根据需要添加。防腐剂可以选自ProClin系列、叠氮钠等，但不限于此。缓冲剂可选自磷酸及其盐、柠檬酸及其盐、乙酸及其盐、2-(N-吗啉代)乙磺酸等，但不限于此。渗透压调节剂可为盐类，如NaCl等。本公开对第一试剂中的防腐剂、缓冲剂、渗透压调节剂、牛血清白蛋白的添加量没有特别限制，但由于需要与第一试剂和第二试剂混和使用，各添加剂的添加量可以与第一试剂和第二试剂中一致。
抗干扰剂作为单独的试剂时，鼠IgG和吐温20的浓度可根据混合比不同而适当提高，本公开对此没有特别限制。
第一试剂中含有第一抗人LIF抗体，其中，第一抗人LIF抗体包被在固定相上。固定相可以是磁珠、链霉亲和素包被的孔板等。根据较优的实施方式，固定相优选磁珠，特别优选超顺磁性微粒。磁珠的表面可修饰有功能性基团，以便与第一抗人LIF抗体偶联。本公开对修饰的功能性基团没有特别限制，可以是诸如羧基、羟基、氨基等，但不限于此，其中较优选的是羟基。磁珠的粒径可以在0.5～4μm范围内，优选2μm。
本公开对第一抗人LIF抗体没有特别限制，已知的那些抗人LIF抗体均可用于本发明。优选使用单克隆抗体。举例来说，第一抗人LIF抗体可选自Anti-LIF antibody、LIFmonoclonal antibody、LIF抗体等。
第一试剂中，包被有第一LIF抗体的磁珠的含量为0.05～0.20％，优选0.10％。
第一试剂还包括防腐剂、缓冲剂、渗透压调节剂、封闭剂(如牛血清白蛋白)等必要的添加剂。本公开对各添加剂没有特别限制，可根据需要添加。防腐剂可以选自ProClin系列、叠氮钠等，但不限于此。缓冲剂可选自磷酸及其盐、柠檬酸及其盐、乙酸及其盐、2-(N-吗啉代)乙磺酸等，但不限于此。渗透压调节剂可为盐类，如NaCl等。本公开对第一试剂中的防腐剂、缓冲剂、渗透压调节剂、牛血清白蛋白的添加量没有特别限制，可根据需要添加。根据一个具体实施方式第一试剂包括以下组分：
包被着抗人LIF抗体的磁性微粒0.05～0.20％；
缓冲剂0.1～2％；
防腐剂0.05～0.5％；和
余量的水至100％。
优选地第一试剂包括以下组分：
包被着抗人LIF抗体的超顺磁性微粒0.10％；
2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES)0.58％；
ProClin300 0.05％；
叠氮钠0.09％；和
水99.18％。
第二试剂中含有第二抗人LIF抗体，其中所述第二抗人LIF抗体不同于所述第一抗人LIF抗体。第二抗人LIF抗体上结合有标记物。标记物可以是任何能够利用化学发光法进行检测的物质。可列举的标记物包括生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶、荧光素等，但不限于此。较优地，标记物是碱性磷酸酶。
本公开对第二抗人LIF抗体没有特别限制，已知的那些抗人LIF抗体均可用于本发明。优选使用单克隆抗体。可供选择的第二抗人LIF抗体的具体种类可以与第一抗人LIF抗体可选择的种类相同，只是第一和第二抗人LIF抗体不同，从而能够分别结合到LIF的不同抗原表位。
第二试剂中，结合有标记物的第二抗人LIF抗体的含量为0.005～0.02％，优选0.01％。
与第一试剂类似，第二试剂还包括防腐剂、缓冲剂等必要的添加剂，在此不再赘述。
根据一个具体实施方式第二试剂包括以下组分：
抗人LIF抗体-标记物 0.005～0.02％；
缓冲剂 0.1～2％；
防腐剂 0.05～1％；和
余量的水至100％。
第二试剂包括：
抗人LIF抗体-碱性磷酸酶标记物 0.01％
2-(N-吗啉代)乙磺酸(MES) 0.98％
ProClin300 0.05％；
叠氮钠 0.09％；
水 98.87％。
第二试剂中同样可包括防腐剂、缓冲剂、渗透压调节剂、封闭剂(如牛血清白蛋白)等必要的添加剂。这些添加剂的种类和添加量可与第一试剂相同，在此不再赘述。
所述发光底物液含有能够与所述标记物反应产生化学发光的发光底物。对应于不同的标记物，所述试剂盒包括含义不同的化学发光底物的发光底物液。举例来说，对应于碱性磷酸酶标记物，所述发光底物液可含有对硝基苯磷酸二钠(PNPP)、吖啶酯、鲁米诺、异鲁米诺、AMPPD、三丙胺、四甲基联苯胺及其他酶促化学发光底物液等，优选AMPPD。AMPPD与碱性磷酸酶混合时，AMPPD被碱性磷酸酶所分解并脱去一个磷酸基，生成不稳定的中间产物。该中间产物通过分子内电子转移产生间氧苯甲酸甲酯阴离子，处于激发态的间氧苯甲酸甲酯阴离子从激发态返回基态时，产生化学发光并用于检测。
发光底物液包含第二试剂中发光标记物的发光底物。本公开对发光底物液中发光底物的浓度没有特别限制。发光底物也可溶解在合适的溶剂中，只要该溶剂不干扰反应，且易于与其他试剂混合即可。所述试剂盒可用于检测来源于人的血清或血浆样本。
使用上述试剂盒对样本中的LIF进行检测。所述检测可在任何合适的化学发光检测设备上进行。本公开对检测方法的具体步骤没有特别限制，可根据具体情况选择适宜的检测步骤。示例性的，检测LIF的方法包括以下步骤。
将一定量的第一试剂、抗干扰剂和第二试剂混合，并加入样本混合均匀得到第一反应液，在约37℃下孵育3～10分钟；分离出固定相；向所述固定相中中加入一定量发光底物液混合均匀得到第二反应液，在约25℃下孵育10～20分钟；和检测所述第二反应液中产生的光子数，其中所测得的光子数与所述样本中LIF的含量成正比。
其中所述第一试剂、所述第二试剂、所述抗干扰剂和所述发光底物液分别如上所述。
所述方法进一步包括将所测得的光子数与标准曲线比对以获得样本中LIF含量的步骤。所述标准曲线通常为检测设备内置的标准信息(主曲线信息)。
根据具体的实施方式，所述样本为血清或血浆。
示例性的，可吸取含有第一试剂和抗干扰剂的混合试剂和第二试剂各50μL，加入反应杯。吸取10μL待测样本(血清或血浆)以及350μL清洗液加入反应杯并与所述试剂充分混匀。混合液在约37℃下孵育5分钟。分离出固定相(如磁珠微粒)，加入100μL底物液，混匀后在约25℃孵育15分钟。通过光电倍增管对反应中所产生的光子数进行测量，所产生光子数与样本内LIF抗原的浓度成正比。进一步通过与检测设备中事先存储的标准曲线对比，可获得待测样本中LIF的含量。
以下通过具体实施例进一步说明本发明。所述试剂除特别指出外，均为商购常规试剂。
实施例
实施例1
制备人类LIF检测试剂盒，该试剂盒包括以下试剂：
制备包含第一试剂和抗干扰剂的混合试剂，将以下组分混合形成混合试剂，，所述浓度为混合后浓度：
包被有第一抗人LIF抗体的超顺磁性微粒，其中第一抗人LIF抗体为MIlipore单克隆抗体，超顺磁性微粒为磁珠微粒(Thermo Fisher)，粒径为2μm，保存在Proclin-300缓冲液中，按照说明适量添加；浓度为500μg/mL的小鼠IgG，浓度为500μg/mL的吐温20；浓度为1g/L的叠氮钠；MES缓冲液(pH＝6.0)；0.5M NaCl；0.5％牛血清白蛋白(BSA)。
制备第二试剂：将以下组分混合以制备第二试剂，所述浓度为混合后浓度。
具有碱性磷酸酶标记物的第二抗人LIF抗体，其中第二抗人LIF抗体为Invirogen单克隆抗体，保存在Proclin-300缓冲液中，按照说明适量添加；包含浓度为1g/L的叠氮钠；MES缓冲液(pH＝6.0)；0.5M NaCl；和0.5％BSA。
制备发光底物液：3-(2-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3-磷氧酰)-苯基-1,2-二氧环乙烷(AMPPD)。
实施例2
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为抗干扰剂中含有100μg/mL的吐温20。
实施例3
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为抗干扰剂中含有300μg/mL的吐温20。
实施例4
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为抗干扰剂中含有700μg/mL的吐温20。
实施例5
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为抗干扰剂中含有1000μg/mL的吐温20。
对比例1
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为抗干扰剂中含有小鼠IgG而不含有吐温20。
对比例2
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为抗干扰剂中含有吐温20而不含有小鼠IgG。
对比例3
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为抗干扰剂中以浓度为500μg/mL的Brij 35替换吐温20。
对比例4
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为抗干扰剂中以浓度为8mg/mL的CHEMAL替换吐温20。
对比例5
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为抗干扰剂中以浓度为500μg/mL的吐温80替换吐温20。
对比例6
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为抗干扰剂中以浓度为500μg/mL的Triton X-100替换吐温20。
对比例7
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为抗干扰剂中以浓度为10mg/mL的CHAPS替换吐温20。
对比例8
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为抗干扰剂中以浓度为500μg/mL的甜菜碱替换吐温20。
对比例9
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为抗干扰剂中以浓度为0.1mol/L的硫酸铵替换吐温20。
对比例10
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为抗干扰剂中以浓度为1mg/mL的十二烷基肌氨酸钠替换吐温20。
对照例
按照实施例1相同的方法制备试剂盒，区别为试剂盒不包括抗干扰剂。
异常样本的准备
采用对照例中制备的试剂盒，检测多个人血清和EDTA抗凝的血浆样本中的LIF稀释回收率。具体地，各血清和血浆样本含有不同浓度的LIF，使用生理盐水将不同浓度范围的血液样本进行10倍稀释后用上述试剂盒进行检测，并以原始样本中LIF浓度相对于稀释后测定的LIF浓度的比值计算回收率(稀释后测定值×10与稀释前测定值的比值)，如下表1所示。可以看到大部分样本稀释回收率在100％±15％以内，但存在个别样本回收率较高，接近或超高200％。
表1：不同LIF浓度样本的稀释回收率
进一步对回收率异常的血清-2和血浆-4样本分别进行PEG沉淀检测和HBT孵育检测以确定其中的干扰物。具体地，PEG沉淀检测是将样本与PEG溶液(25％的聚乙二醇溶液)按1:1混匀后，静置数分钟后以3500rpm离心10min，取上清液用上述试剂盒再次进行测试。平行对照组，使用纯水按1:1的比例与样本混匀后进行相同的操作。HBT孵育检测是将样本(≤500μL)加入HBT管中常温孵育30-60min后用上述试剂盒再次测试。采用上述试剂盒测得的原样本中LIF的含量，以及进行PEG沉淀或进行HBT孵育后的测试的LIF的含量结果见下表2，并计算两次测试间的偏差。
表2：PEG沉淀和HBT孵育检测结果
PEG沉淀法针对测试结果明显偏高或偏低，且稀释回收率较差的样本进行测试，如果测试偏差较大，说明样本中存在自身抗体及大分子蛋白的干扰。而HBT是异嗜性抗体阻断剂，因此HBT孵育法测试针对测试结果明显偏高，且稀释回收率较差的样本进行测试，如果测试偏差较大，则说明样本中存在异嗜性抗体的干扰。由上表2结果可知，血清-2样本中存在明显的自身抗体干扰，而血浆-4样本中存在明显的异嗜性抗体干扰，并同时存在一些自身抗体干扰。
测试例
测试例1
用实施例1、对比例1、对比例2和对照例的试剂盒分别对异常的血清-2、异常的血浆-4、正常的血清-4、正常的血浆-8四个样本进行LIF检测。具体测试方法是：
将10μL的样本与试剂盒中50μL的混合试剂与50μL的第二试剂混合。其中混合试剂，在对照例中包含：包被有第一抗人LIF抗体的超顺磁性微粒、防腐剂、MES缓冲液；在对比例1中包含：包被有第一抗人LIF抗体的超顺磁性微粒、浓度为500μg/mL的鼠IgG、防腐剂、MES缓冲液；在对比例2中包含：包被有第一抗人LIF抗体的超顺磁性微粒、浓度为500μg/mL的吐温20、防腐剂、MES缓冲液；在实施例1中包含：包被有第一抗人LIF抗体的超顺磁性微粒、浓度为500μg/mL的吐温20、浓度为500μg/mL的鼠IgG、防腐剂、MES缓冲液。即，除小鼠IgG和吐温20外，其他组分及其含量在各试剂盒的混合试剂中均相同。
加入350μL清洗液并充分混匀，在37℃孵育5分钟。分离出超顺磁性微粒，加入100μL AMPPD底物液，混匀后在25℃孵育15分钟；使用CL-2000i化学发光仪器进行检测，通过仪器内光电倍增管对反应中所产生的光子数进行测量，并根据仪器内置主曲线信息(即标准曲线信息)计算出样本中的LIF浓度。各测试结果以及以对照例测试结果为基准计算测试偏差的结果见下表3。
表3：采用实施例1、对比例1-2和对照例的试剂盒对异常和正常样本的检测结果及偏差
由上表可见，各试剂盒对正常无干扰的样本(血清-4和血浆-8)的检测结果的偏差都很小，而对存在干扰的异常样本(血清-2和血浆-4)的检测结果的偏差发生很大差异。具体地，仅含鼠IgG的对比例1的试剂盒，对异常样本具有一定的抗干扰作用，相对于对照样本的检测结果产生了较大的偏差。而仅含吐温20的对比例2的试剂盒，对异常样本的抗干扰作用很弱，相对于对照样本的检测结果的偏差很小(即，对异常结果没有明显的修正)。与此不同，实施例1的含有鼠IgG和吐温20的抗干扰剂的试剂盒对不同的干扰均有显著的消除，相对于对照样本的检测结果产生了-80％以上，甚至-90％以上的偏差。该结果与以上表1所示的稀释回收率(异常样本在200％左右)相一致。且实施例1的试剂盒对正常样本的检测结果与对照例的试剂盒基本相同，说明抗干扰剂对测试没有不良影响。
测试例2
为考察不同表面活性剂与鼠IgG组合的抗干扰效果，用实施例1～5和对比例3～10的试剂盒按照测试例1相同的测试方法分别对添加了不同干扰物(3.5g/dL甘油三酯、70mg/dL胆红素、3.5g/dL血红蛋白、15g/dL人总蛋白、5μg/mL生物素)的血清样本进行LIF检测，结果见下表4，其中以未添加任何干扰物的样本为空白对照。
表4：实施例1～5和对比例3～10的试剂盒对外加干扰物的样本的检测结果
由上表4可以看出，不同表面活性剂与鼠IgG组合，均对不同干扰物有一定的抗干扰效果，但是针对不同干扰物的抗干扰的能力并不一致，对某种干扰物的抗干扰能力强一些，而对另一种干扰物的抗干扰能力弱一些。而吐温20对不同干扰物的抗干扰效果均较好，因而能够用于各种情况的样本，获得准确的检测结果。此外，不同浓度的吐温20与鼠IgG组合，均对不同干扰物有一定的抗干扰效果，其中500μg/mL的吐温20效果最佳。
以上所述仅为本发明的部分实施方式的实例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是在本发明的发明构思下，利用本发明说明书内容所作的等效结构变换，或直接/间接运用在其他相关的技术领域均包括在本发明的专利保护范围内。
Claims (10)
1.一种用于检测人类白血病抑制因子的试剂盒，其中所述试剂盒包括：
第一试剂，所述第一试剂含有包被有第一抗人白血病抑制因子LIF抗体的固定相；
第二试剂，所述第二试剂含有具有标记物的第二抗人LIF抗体，其中所述第二抗人LIF抗体不同于所述第一抗人LIF抗体；
发光底物液，其中所述发光底物液含有能够与所述标记物反应产生化学发光的发光底物；和
抗干扰剂，所述抗干扰剂含有鼠IgG和吐温20。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其中所述第一试剂与所述抗干扰剂以混合形式提供在所述试剂盒中作为混合试剂。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其中所述混合试剂中，所述鼠IgG的浓度为100～1000μg/mL，且所述吐温20的浓度为100～1000μg/mL。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其中所述混合试剂中，所述鼠IgG的浓度为300～700μg/mL，且所述吐温20的浓度为300～700μg/mL。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的试剂盒，其中固定相为超顺磁性微粒。
6.根据权利要求1～4中任一项所述的试剂盒，其中所述标记物选自生物素、地高辛、碱性磷酸酶、辣根过氧化物酶和荧光素，优选碱性磷酸酶。
7.根据权利要求1～4中任一项所述的试剂盒，其中所述标记物为碱性磷酸酶，且所述发光底物为AMPPD。
8.一种检测人类白血病抑制因子LIF的方法，包括：
将一定量的第一试剂、抗干扰剂、第二试剂和样本混合均匀得到第一反应液，并孵育3～10分钟；
分离出固定相；
向所述固定相中加入一定量发光底物液混合均匀得到第二反应液，并孵育10～20分钟；
检测所述第二反应液中产生的光子数，其中所测得的光子数与所述样本中LIF的含量成正比，
其中所述第一试剂、所述第二试剂、所述抗干扰剂和所述发光底物液分别如权利要求1～7中任一项所定义。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述方法进一步包括：将所测得的光子数与标准曲线比对，以获得样本中LIF含量。
10.根据权利要求8所述的方法，其中所述样本为血清或血浆。
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