CN116298266A - 检测痛风标记物ca72-4的样品垫处理液、样品垫、样本检测液、试纸条及检测试剂盒 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种检测痛风标记物CA72‑4的样品垫处理液、样品垫、样本检测液、试纸条及检测试剂盒，本发明属于医学检验技术领域，所述样品垫处理液包括pH 8.0‑8.5缓冲液、表面活性剂S9、牛血清白蛋白、干扰消除蛋白和硼酸基化合物。本发明通过配制样品垫处理液对样品垫进行处理，通过对缓冲液、表面活性剂S9、干扰消除蛋白、牛血清白蛋白、4‑羧基苯硼酸的特定选择，使用所述样品垫处理液对用于检测CA72‑4的试纸条的样品垫进行处理，可以有效的消除时间分辨荧光免疫层析法中的假阳性，降低血液样本中的非特异性糖原蛋白对结果的影响。

Description

检测痛风标记物CA72-4的样品垫处理液、样品垫、样本检测 液、试纸条及检测试剂盒
技术领域
本发明属于医学检验技术领域，涉及一种用于检测CA72-4的样品垫处理液、样品垫、样本检测液、试纸条及检测试剂盒。
背景技术
CA72-4，即糖链抗原72-4，又称糖类抗原72-4、癌抗原72-4，本质是细胞表面黏蛋白类的高分子糖蛋白，广泛分布于上皮细胞和恶性肿瘤的细胞质内，分子量超过 1000kDa。糖类抗原72-4（ CA72-4）于1981年由Colcher等首次发现于一名乳腺癌转移肝癌患者中，是一种胃、结直肠、肝、肺、胰腺和卵巢等肿瘤相关抗原，在健康人群和良性肿瘤患者血清中含量很低，具有肿瘤早期预示、病情监测以及预后判断的作用。近年来血清CA72-4已经成为胃癌早期筛查、监测和预后评价的可靠标志物，其含量高低与胃癌临床分期、瘤体大小、淋巴结受累及浸润转移等密切相关，具有很高的特异性。
CA72-4在正常人血清含量一般＜6U/mL，而在消化道肿瘤（如胃癌、结直肠癌等）、卵巢癌中可显著升高。痛风是临床常见的内科疾病，是单钠尿酸盐沉积所导致的晶体相关性关节病，与嘌呤代谢紊乱与尿酸（UA）排泄减少所导致的高尿酸血症直接相关，主要包括急性发作性关节炎、痛风石形成、痛风石慢性关节炎、尿酸肾病及尿酸性尿路结石等一系列临床症状，严重患者可能出现关节残疾和肾脏功能不全，严重影响患者生活质量。对于痛风，目前尚无可靠而准确的指标反映其疾病程度和炎症活动情况。Bai等研究（Bai X, SunM, He Y, et al. Serum CA72-4 is specifically elevated in gout patients andpredicts flares[J] . Rheumatology(Oxford，England),2020,59(10) : 2872.）表明，相比于健康体检者和其他关节炎疾病患者，痛风性关节炎患者血清CA72-4表达显著增高。Zhang等研究（Zhang M，Dou H，Yang D, et al.Retrospective analysis ofglycanrelated biomarkers based on clinical laboratory data in two medicalcenters during the past 6 years [J]. Prog Mol Biol Transl Sci, 2019, 162 :141.）发现，相较于肿瘤患者与健康对照组，痛风及痛风性关节炎患者中CA72-4升高更明显，提示CA72-4与痛风性关节炎存在更为密切的关系，且认为CA72-4可能在炎症反应中起到未知但重要的作用。因此，推测CA72-4或许可作为标志物用于区分痛风与其他关节性疾病，具有一定的诊断意义。可见，急性痛风性关节炎患者如果出现CA72-4升高，除高度警惕肿瘤外，需密切动态观察CA72-4水平，避免过度医疗，浪费医疗资源。
在蛋白质的多种翻译后修饰中，糖基化（glycosylation）是非常重要的一种。糖基在酶的催化下，与蛋白质上的某些残基形成共价连接，通常是糖苷键。糖基可以通过多种方式与蛋白质相连，例如与天冬酰胺（Asn）侧链的酰胺键相连（N-糖基化），通过糖苷键与丝氨酸（Ser）、苏氨酸（Thr）、羟基赖氨酸（胶原）或Tyr（糖原蛋白）的羟基相连（O-糖基化），或通过C-C键连接到Trp的C2位置（C-甘露糖基化）。CA72-4、糖类抗原199（CA199）、糖类抗原125（CA125）、糖类抗原153（CA153）为一系列高分子糖蛋白类癌胚抗原，在本身抗原特异性识别位点基础上，还需要考虑糖基化端的非特异性结合导致假阳性的出现。
目前，临床实验室检测CA72-4的方法包括放射免疫分析、酶联免疫法、化学发光法以及电化学发光法等，尤以化学发光法和电化学发光法应用最为广泛。但化学发光法普遍存在成本高、检测时间、步骤长，操作专业性强等缺点。时间分辨荧光免疫层析法检测可以进行即时检测，成本可控，操作便捷。如何消除时间分辨荧光免疫层析法检测CA72-4时的假阳性是本领域亟待解决的问题。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种用于检测CA72-4的样本检测液、样品垫处理液、样品垫、试纸条及检测试剂盒。
为达此目的，本发明采用以下技术方案：
一方面，本发明提供一种用于检测痛风标记物CA72-4的试纸条的样品垫处理液，所述样品垫处理液包括pH 8.0-8.5缓冲液、表面活性剂S9、牛血清白蛋白（BSA-V）、干扰消除蛋白和硼酸基化合物。
在本发明中，通过样品垫处理液中增加pH 8.0-8.5缓冲液、表面活性剂S9、干扰消除蛋白、牛血清白蛋白（BSA-V）、硼酸基化合物的特定选择，使用所述样品垫处理液对用于检测CA72-4的试纸条的样品垫进行处理，可以有效的消除时间分辨荧光免疫层析法中的假阳性，降低血液样本中的非特异性糖原蛋白对CA72-4检测结果的影响。
优选地，所述缓冲液为Tris-HCL缓冲液或硼酸缓冲液。
优选地，所述缓冲液的浓度为10-200mM，例如10mM、30mM、50mM、80mM、100mM、130mM、150mM、180mM或200mM。
优选地，相对于每100mL的所述缓冲液，所述表面活性剂S9的添加量为0.01~1g（例如0.01g、0.03g、0.05g、0.08g、0.1g、0.3g、0.5g、0.8g或1g）。
优选地，相对于每100mL的所述缓冲液，所述BSA-V的添加量为0.05~10g（例如0.05g、0.08g、0.1g、0.5g、1g、2g、3g、5g、8g或10g）。
优选地，相对于每100mL的所述缓冲液，所述干扰消除蛋白的添加量为0.05~10mL（例如0.05mL、0.1mL、0.5mL、1mL、2mL、3mL、5mL、8mL或10mL）。
优选地，所述干扰消除蛋白选自MAK33IgG1或MAK33 IgG1/Ig G1 Poly或MAKIgG2b/Fab2a Poly。
优选地，相对于每100mL的所述缓冲液，所述硼酸基化合物的添加量为0.01~0.1g（例如0.01g、0.05g、0.1g）。
优选地，所述的硼酸基化合物为4-羧基苯硼酸、3-氨基苯硼酸、4-乙氧基苯硼酸或5-硼酸基-1-萘甲酸的一种或至少两种的组合。
另一方面，本发明提供了一种样品垫，所述样品垫采用如上所述的检测CA72-4的试纸条的样品垫处理液处理得到。
另一方面，本发明提供了一种样本检测液，所述样本检测液包括pH 8.0的10mM的硼酸缓冲液，通过硼酸溶液进行亲和处理，特异性结合不好的蛋白冲洗掉，提高特异性。
在本发明中，通过对样本检测液中的特殊硼酸处理，能结合到样本中的非特异性糖蛋白，提高特异性，降低血液样本对结果的影响。
另一方面，本发明提供了一种用于检测CA72-4的试纸条，所述试纸条包括底板、如上所述的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘附至底板上，所述结合垫上包被有CA72-4抗体标记荧光微球和鸡IgY抗体标记荧光微球，所述硝酸纤维素膜上按样品流动方向从前到后依次具有包被有CA72-4单克隆抗体的检测线T和包被驴抗鸡IgY单克隆抗体的质控线C。
优选地，形成所述结合垫时，CA72-4抗体标记荧光微球溶液浓度为0.13mg/mL，鸡IgY抗体标记荧光微球溶液浓度为0.07mg/mL，喷涂的CA72-4抗体标记荧光微球和鸡IgY抗体标记荧光微球的混合溶液的量为5-10μL/cm2（例如5μL/cm2、6μL/cm2、7μL/cm2、8μL/cm2、9μL/cm2或10μL/cm2）。
优选地，进行检测线T划线使用的CA72-4单克隆抗体的浓度为0.5-2mg/mL（例如0.5mg/mL、0.8mg/mL、1mg/mL、1.5mg/mL、1.8mg/mL或2mg/mL），划线的体积量为0.25～4.0μL/cm（例如0.25μL/cm、0.5μL/cm、0.8μL/cm、1.0μL/cm、1.3μL/cm、1.5μL/cm、3.0μL/cm、3.5μL/cm或4.0μL/cm）。
优选地，进行质控线C划线使用的驴抗鸡IgY单克隆抗体的浓度为0.3-0.5mg/mL（例如0.3mg/mL、0.4mg/mL、或0.5mg/mL），划线的体积量为0.25～4.0μL/cm（例如0.25μL/cm、0.5μL/cm、0.8μL/cm、1.0μL/cm、1.3μL/cm、1.5μL/cm、3.0μL/cm、3.5μL/cm或4.0μL/cm）。
优选地，所述荧光微球为表面羧基化的聚苯乙烯荧光微球。
优选地，所述底板为PVC底板。
优选地，所述吸水垫为含高分子吸水树脂的纤维素、脱脂棉、硅胶吸水垫或海绵吸水垫中的任意一种。
另一方面，本发明提供一种检测卡，所述检测卡包括如上所述的用于检测CA72-4的试纸条。
优选地，所述检测卡还包括卡壳。
优选地，所述卡壳包括相互卡接的上卡壳和下卡壳，下卡壳的内表面设置有用于放置所述试纸条的卡槽，上卡壳对应于试纸条的样品垫处设有加样口、对应于试纸条的硝酸纤维素膜处设有观测口，硝酸纤维素膜上的检测线T和质控线C均暴露于观测口处。
在本发明中，卡壳不仅保护了试纸条，避免其受损污染，还起到固定的作用，使得试纸条不易出现滑动，影响测定。上下卡壳能够将试纸条固定且压紧，保证液体流速均匀，从而进一步降低CV系数，提高精密度和准确性，同时操作方便，放平直接加样即可快速测试，对操作人员无硬性技术要求。另外该卡壳与检测设备能够配套使用，卡壳插入该检测设备（光景生物科技（苏州）有限公司生产的免疫荧光检测仪，LTRIC-600）相应的通道，然后自动稳定送样检测，进一步提高检测结果的准确性，蛋白含量测定值更加精确。
另一方面，本发明提供一种检测试剂盒，所述检测试剂盒包括如上所述的试纸条或检测卡。
优选地，所述检测试剂盒还包括定标卡。
优选地，定标卡带有CA72-4标准曲线。
优选地，所述检测试剂盒还包括样本检测液。
在本发明中，所述样本检测液包括pH 8.0的10mM的硼酸缓冲液。
在本发明中，测试时，将待检样本滴入测试卡的加样口内，室温反应15min后，用免疫荧光检测仪（LTRIC-600），在激发波长365nm、接收光波长605nm条件下，检测T检测线的荧光信号强度值，再根据定标卡的标准曲线计算，得到待检样本中CA72-4的浓度。
用样本检测液对样本进行稀释后滴加至检测卡进行检测。目标物质浓度：将根据标准曲线计算所得结果。
另一方面，本发明提供一种如上所述的试纸条或如上所述的检测卡或如上所述的检测试剂盒在制备痛风或肿瘤检测材料或装置中的应用。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
在本发明中，通过对样品垫进行处理，样品垫处理液中Tris-HCL或硼酸缓冲液配合表面活性剂S9、干扰消除蛋白、牛血清白蛋白（BSA-V）、硼酸基化合物的特定选择，使用所述样品垫处理液对用于检测CA72-4的试纸条的样品垫进行处理，并使用硼酸处理的样本检测液，可以有效的消除时间分辨荧光免疫层析法检测的非特异性结合，降低血液样本中非特异性糖原蛋白对CA72-4检测结果的影响。通过添加干扰蛋白，能降低非特异性糖原蛋白对CA72-4检测结果的影响，而添加硼酸基化合物，能够进一步消除非特异性糖原蛋白的影响，提高CA72-4检测的特异性。
附图说明
图1为以CA72-4浓度为横坐标，以T/C（检测T检测线的荧光信号强度和质控线C的荧光信号强度的比值）为纵坐标制作的标准曲线。
图2为应用实施例1中利用其检测试剂条检测样本中的CA72-4浓度与罗氏Cobase601型全自动电化学发光免疫分析仪检测样本中的CA72-4浓度的相关性结果图。
图3为应用实施例2中利用其检测试剂条检测样本中的CA72-4浓度与罗氏Cobase601型全自动电化学发光免疫分析仪检测样本中的CA72-4浓度的相关性结果图。
图4为应用实施例3中利用其检测试剂条检测样本中的CA72-4浓度与罗氏Cobase601型全自动电化学发光免疫分析仪检测样本中的CA72-4浓度的相关性结果图。
图5为应用对比例1中利用其检测试剂条检测样本中的CA72-4浓度与罗氏Cobase601型全自动电化学发光免疫分析仪检测样本中的CA72-4浓度的相关性结果图。
图6为应用对比例2中利用其检测试剂条检测样本中的CA72-4浓度与罗氏Cobase601型全自动电化学发光免疫分析仪检测样本中的CA72-4浓度的相关性结果图。
图7为应用对比例3中利用其检测试剂条检测样本中的CA72-4浓度与罗氏Cobase601型全自动电化学发光免疫分析仪检测样本中的CA72-4浓度的相关性结果图。
图8为应用对比例4中利用其检测试剂条检测样本中的CA72-4浓度与罗氏Cobase601型全自动电化学发光免疫分析仪检测样本中的CA72-4浓度的相关性结果图。
图9为应用对比例5中利用其检测试剂条检测样本中的CA72-4浓度与罗氏Cobase601型全自动电化学发光免疫分析仪检测样本中的CA72-4浓度的相关性结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实施例中提供一种用于检测CA72-4的试纸条的样品垫处理液以及样品垫，所述样品垫处理液包括pH为8.0，50mM的Tris-HCl缓冲液、表面活性剂S9（Pluracare 1307）、BSAV、MAK33 IgG1/Ig G1 Poly、4-羧基苯硼酸；其中，相对于每100 mL的Tris-HCl缓冲液，表面活性剂S9（Pluracare 1307）的添加量为0.5g，BSA V的添加量为0.5g，MAK33 IgG1/Ig G1Poly的添加量为2mL，4-羧基苯硼酸的添加量为0.05g。
该样品垫处理液的制备方法为：配制pH为8.0，50mM的Tris-HCL作为基础液，再添加 BSA V和 MAK33 IgG1/Ig G1 Poly以及表面活性剂S9（Pluracare 1307）、4-羧基苯硼酸。将配制好的样品垫处理液以浸泡的方式处理样品垫，并用37℃烘箱过夜烘干。
实施例2
本实施例中提供一种用于检测CA72-4的试纸条的样品垫处理液以及样品垫，所述样品垫处理液包括pH为8.5、10mM的硼酸缓冲液、表面活性剂S9（Pluracare 1307）、BSA V、MAK33 IgG1；其中，相对于每100mL的硼酸缓冲液，表面活性剂S9（Pluracare 1307）的添加量为1g，BSA V的添加量为5g，MAK33 IgG1的添加量为10mL，4-羧基苯硼酸的添加量为0.1g。将配制好的样品垫处理液以浸泡的方式处理样品垫，并用37℃烘箱过夜烘干。
实施例3
本实施例中提供一种用于检测CA72-4的试纸条的样品垫处理液以及样品垫，所述样品垫处理液包括pH为8.3，200mM的Tris-HCL、表面活性剂S9（Pluracare 1307）、BSA V、MAK IgG2b/Fab2a Poly；其中，相对于每100mL的Tris-HCL缓冲液，表面活性剂S9（Pluracare 1307）的添加量为0.01g，BSA V的添加量为10g，MAK IgG2b/Fab2a Poly的添加量为0.05mL、4-羧基苯硼酸0.01g。将配制好的样品垫处理液以浸泡的方式处理样品垫，并用37℃烘箱过夜烘干。
对比例1
该对比例与实施例1的区别仅在于，未添加4-羧基苯硼酸，干扰消除蛋白的添加量为实施例1中4-羧基苯硼酸和干扰消除蛋白的添加量之和。
对比例2
该对比例与实施例1的区别仅在于，未添加干扰消除蛋白，4-羧基苯硼酸的添加量为实施例1中4-羧基苯硼酸和干扰消除蛋白的添加量之和。
对比例3
该对比例与实施例1的区别仅在于，未添加干扰消除蛋白和4-羧基苯硼酸。
对比例4
该对比例与实施例1的区别仅在于，将BSA V替换为兔血清。
对比例5
该对比例与实施例1的区别仅在于，将MAK33 IgG1/Ig G1 Poly替换为羟丙基甲基纤维素。
应用实施例1
本实施例中提供一种用于检测CA72-4的试纸条，检测卡和检测试剂盒。
所述试纸条包括底板、如上所述的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘附至底板上，所述结合垫上包被有CA72-4抗体标记荧光微球和鸡IgY抗体标记荧光微球，所述硝酸纤维素膜上按样品流动方向从前到后依次具有包被有CA72-4单克隆抗体的检测线T和包被驴抗鸡IgY单克隆抗体的质控线C。
检测卡包括如上所述的用于检测CA72-4的试纸条和卡壳。所述卡壳包括相互卡接的上卡壳和下卡壳，下卡壳的内表面设置有用于放置所述试纸条的卡槽，上卡壳对应于试纸条的样品垫处设有加样口、对应于试纸条的硝酸纤维素膜处设有观测口，硝酸纤维素膜上的检测线T和质控线C均暴露于观测口处。
所述检测试剂盒包括所述检测卡和定标卡以及样本检测液，定标卡带有CA72-4标准曲线。
所述样本检测液包括pH 8.0的10mM的硼酸缓冲液。硼酸缓冲液的配制方案：以硼酸0.062g配成100mL溶液，硼砂0.0955g配成100mL溶液。临用时，二液按不同比例混合可得pH 8.0的缓冲液。
所述试剂条以及检测卡，可以通过如下制备方法制备得到：
（1）试纸条上NC膜的制备
自样品垫至吸水垫方向，NC膜（硝酸纤维素膜）上依次等间隔设置有T检测线和质控线C。T检测线上包被有CA72-4单克隆抗体（购自博岳生物科技有限公司，产品编号IP181129），包被浓度为1mg/mL；质控线C上包被驴抗鸡IgY单克隆抗体（购自Fitzgerald，产品编号41R-ID002），包被浓度为0.5mg/mL。在点膜仪上以1.0μL/cm的喷量喷涂在分析膜材上。
（2）试纸条上结合垫的制备
抗体标记：抗体标记荧光微球：微球活化：向1mg/mL荧光微球中加入用50mM，pH7.0 MES（2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物）溶解的5mg EDC（1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺）和5mg NHS（N-羟基琥珀酰亚胺），活化60min，15000rpm离心30min，弃上清，沉淀用pH7 .0的50mM PBS（磷酸盐缓冲液）重悬，得到1mg/mL活化的荧光微球溶液；抗体偶联：将1.0mg CA72-4标记抗体和鸡IgY分别加入1mg/mL活化的荧光微球溶液2mL 中，室温混匀1h，15000rpm离心30min，弃上清，沉淀用含5mg BSA（牛血清白蛋白）的50mM PBS（磷酸盐缓冲液）溶液封闭1h，搅拌混匀，15000rpm离心30min，收集的沉淀保存于pH7.0含0.5% BSA（牛血清白蛋白）的20mM Tris缓冲液中，得到浓度为1mg/mL CA72-4抗体标记荧光微球溶液、1mg/mL 鸡IgY标记荧光微球溶液；
结合垫制作：将得到的 CA72-4抗体标记物、鸡IgY标记物涂在结合膜材上，稀释CA72-4抗体标记荧光微球溶液浓度为0.13mg/mL，鸡IgY抗体标记荧光微球溶液浓度为0.07mg/mL，喷涂的CA72-4抗体标记荧光微球和鸡IgY抗体标记荧光微球的混合溶液的量为5μL/cm2，得到结合垫，干燥备用。
（3）样品垫的制备：实施例1制备得到的样品垫。
（4）组装
将样品垫、结合垫、NC膜和吸水垫依次搭接地粘贴在底板上且分别部分重合，即得CA72-4检测试剂条；将黏贴有样品垫、结合垫、分析膜和吸收垫的PVC底板裁切成长度为6.5cm，宽度为4mm的纸条，并装入卡壳以及包装中，即得CA72-4检测试剂条（试剂条可装入任意形式外卡壳，也可不装外卡壳直接使用）。
CA72-4标准曲线的制作包括如下步骤：
以PBS（10mM，pH 7.2）为溶剂，采集含有高浓度CA72-4的血清样本，配置成浓度分别为220U/mL、110U/mL、55U/mL、27.5U/mL、13.75U/mL、6.875U/mL、3.44U/mL、1.72U/mL的溶液。将各浓度的CA72-4标准品溶液滴入测试卡的加样口内，在室温反应15min。反应结束后，放进光景生物生产的免疫荧光检测仪（LTRIC-600）内，通过该免疫荧光检测仪 ，在激发光波长365nm、接收光波长605nm条件下，检测T检测线的荧光信号强度和质控线C的荧光信号强度。以CA72-4浓度为横坐标，以检测T检测线的荧光信号强度和质控线C的荧光信号强度的比值（T/C）为纵坐标，制作标准曲线，结果如图1，方程为y＝0 .0382x+ 0.1958，R2＝0.9939，其中x为CA72-4浓度，y为T/C。CA72-4的线性检测范围是1.7-220U/mL。
按照YY/T 1304.2-2015时间分辨荧光免疫检测系统第2部分：时间分辨荧光免疫分析定量测定试剂（盒）标准，通过测试20个阴性样本，计算均值加上两倍的标准差得到本实施例试剂盒对CA72-4的检出限为0.5U/mL。
搜集80例患者的血清样本，用该实施例的检测试剂条检测样本中的CA72-4浓度，罗氏Cobas e601型全自动电化学发光免疫分析仪检测样本中的CA72-4浓度。比较两者的数据相关性，结果如图2所示，结果总结于表1中。
表1
Figure SMS_1
Figure SMS_2
Figure SMS_3
由表1和图2可以看出，该样本检测液和样本处理液处理样本垫后的产品检测结果和对比试剂的检测结果具有较好的一致性（R2为0.9689）。
应用实施例2
与应用实施例1不同的是样品垫为实施例2制备的样品垫。进行与应用实施例1相同的检测，并与罗氏Cobas e601型全自动电化学发光免疫分析仪检测结果进行比较，结果如图3所示，表2中总结了其数据：
表2
Figure SMS_4
/>
Figure SMS_5
/>
Figure SMS_6
由表2和图3可以看出， 除12号样本和37号样本检测结果超过了线性范围外，其他的检测结果与对比试剂具有较好的一致性（R2为0.9478）。
应用实施例3
与应用实施例1不同的是样品垫为实施例3制备的样品垫。进行与应用实施例1相同的检测，并与罗氏Cobas e601型全自动电化学发光免疫分析仪检测结果进行比较，结果如图4所示，表3对其数据进行了总结：
表3
Figure SMS_7
/>
Figure SMS_8
/>
Figure SMS_9
由表3和图4可以看出，除12号样本和37号样本检测结果超过了线性范围外，其他的检测结果与对比试剂具有较好的一致性（R2为0.967）。
应用对比例1
与应用实施例1不同的是样品垫为对比例1制备的样品垫。进行与应用实施例1相同的检测，并与罗氏Cobas e601型全自动电化学发光免疫分析仪检测结果进行比较，同时验证癌胚抗原（CEA）、CA199、CA153、CA125的阳性样本。结果如表4所示。
表4
Figure SMS_10
由表4可以看出，当样品垫处理液中没有添加4-羧基苯硼酸时，检测CA72-4时，其他癌症的阳性样本会对CA72-4的检测结果产生一定的干扰，影响检测结果的准确性。
应用对比例2
与应用实施例1不同的是样品垫为对比例2制备的样品垫。进行与应用实施例1相同的检测，并与罗氏Cobas e601型全自动电化学发光免疫分析仪检测结果进行比较，同时验证CEA、CA199、CA153、CA125的阳性样本。结果如表5所示。
表5
Figure SMS_11
由表5可以看出，当样品垫处理液中没有添加干扰消除蛋白时，检测CA72-4时其他癌症的阳性样本会对CA72-4的检测结果产生一定的干扰，影响检测结果的准确性。
应用对比例3
与应用实施例1不同的是样品垫为对比例3制备的样品垫。进行与应用实施例1相同的检测，并与罗氏Cobas e601型全自动电化学发光免疫分析仪检测结果进行比较，结果如图7和表6所示。
表6
Figure SMS_12
/>
Figure SMS_13
/>
Figure SMS_14
由表6和图7可以看出，样品垫中缺少4-羧基苯硼酸和干扰消除蛋白，检测结果与对比试剂结果的一致性非常差，检测结果没有发挥两物质的协同效应，降低结果的特异性，导致一致性变差，R2为0.7207。说明4-羧基苯硼酸和干扰消除蛋白可以用于消除其他糖原蛋白对CA72-4的非特异性影响。
应用对比例4
与应用实施例1不同的是样品垫为对比例4制备的样品垫。进行与应用实施例1相同的检测，并与罗氏Cobas e601型全自动电化学发光免疫分析仪检测结果进行比较，结果如图8所示，表7中总结了其数据：
表7
Figure SMS_15
/>
Figure SMS_16
/>
Figure SMS_17
由表7和图8可以看出，替换BSA V为兔血清，由于兔血清中的一些干扰物质，对结果会产生一定的影响，与罗氏的对比性也比较差，R2为0.8036。
应用对比例5
与应用实施例1不同的是样品垫为对比例5制备的样品垫。进行与应用实施例1相同的检测，并与罗氏Cobas e601型全自动电化学发光免疫分析仪检测结果进行比较，结果如图9所示，表8中总结了其数据：
表8
Figure SMS_18
/>
Figure SMS_19
/>
Figure SMS_20
由表8和图9可以看出，样品垫中改变阻断剂，会导致蛋白的非特异性的结合，并与罗氏检测结果的一致性变差，R2为0.8484。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的检测痛风标记物CA72-4的样品垫处理液、样品垫、样本检测液、试纸条及检测试剂盒，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明所选用原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (10)

1.一种用于检测CA72-4的试纸条的样品垫处理液，其特征在于，所述样品垫处理液包括pH 8.0-8.5的缓冲液、表面活性剂S9、牛血清白蛋白、干扰消除蛋白和硼酸基化合物。
2.根据权利要求1所述的样品垫处理液，其特征在于，所述缓冲液为Tris-HCL缓冲液或硼酸缓冲液，所述缓冲液的浓度为10-200mM。
3.根据权利要求1所述的样品垫处理液，其特征在于，相对于每100mL的所述缓冲液，所述表面活性剂S9的添加量为0.01~1g；
相对于每100mL的所述缓冲液，所述牛血清白蛋白的添加量为0.05~10g；
相对于每100mL的所述缓冲液，所述干扰消除蛋白的添加量为0.05~10mL；
相对于每100mL的所述缓冲液，所述硼酸基化合物的添加量为0.01~0.1g；
所述干扰消除蛋白选自MAK33IgG1或MAK33 IgG1/Ig G1 Poly或MAK IgG2b/Fab2aPoly；
所述的硼酸基化合物为4-羧基苯硼酸、3-氨基苯硼酸、4-乙氧基苯硼酸或5-硼酸基-1-萘甲酸的一种或至少两种的组合。
4.一种样品垫，其特征在于，所述样品垫采用如权利要求1-3中任一项所述的样品垫处理液处理得到。
5.一种用于检测CA72-4的试纸条，其特征在于，所述试纸条包括底板、如权利要求4所述的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫，所述样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次粘附至底板上，所述结合垫上包被有CA72-4抗体标记荧光微球和鸡IgY抗体标记荧光微球，所述硝酸纤维素膜上按样品流动方向从前到后依次具有包被有CA72-4单克隆抗体的检测线T和包被驴抗鸡IgY单克隆抗体的质控线C。
6.根据权利要求5所述的试纸条，其特征在于，形成所述结合垫时，CA72-4抗体标记荧光微球溶液浓度为0.13mg/mL，鸡IgY抗体标记荧光微球溶液浓度为0.07mg/mL，喷涂的CA72-4抗体标记荧光微球和鸡IgY抗体标记荧光微球的混合溶液的量为5-10μL/cm2；
进行检测线T划线使用的CA72-4单克隆抗体的浓度为0.5-2mg/mL，划线的体积量为0.25～4.0μL/cm；
进行质控线C划线使用的驴抗鸡IgY单克隆抗体的浓度为0.3-0.5mg/mL，划线的体积量为0.25～4.0μL/cm。
7.根据权利要求5所述的试纸条，其特征在于，所述荧光微球为表面羧基化的聚苯乙烯荧光微球；
所述底板为PVC底板；
所述吸水垫为含高分子吸水树脂的纤维素、脱脂棉、硅胶吸水垫或海绵吸水垫中的任意一种。
8.一种检测卡，其特征在于，所述检测卡包括如权利要求5-7中任一项所述的用于检测CA72-4的试纸条；
所述检测卡还包括卡壳；
所述卡壳包括相互卡接的上卡壳和下卡壳，下卡壳的内表面设置有用于放置所述试纸条的卡槽，上卡壳对应于试纸条的样品垫处设有加样口、对应于试纸条的硝酸纤维素膜处设有观测口，硝酸纤维素膜上的检测线T和质控线C均暴露于观测口处。
9.一种检测试剂盒，其特征在于，所述检测试剂盒包括如权利要求5-7中任一项所述的试纸条或如权利要求8所述的检测卡；
所述检测试剂盒还包括定标卡，所述定标卡带有CA72-4标准曲线；
所述检测试剂盒还包括样本检测液，所述样本检测液包括pH 8.0的10mM的硼酸缓冲液。
10.根据权利要求5-7中任一项所述的试纸条或如权利要求8所述的检测卡或权利要求9所述的检测试剂盒在制备痛风或肿瘤检测材料或装置中的应用。
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