CN116270986A - Cat蛋白的新用途、制剂 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术领域，公开了一种CAT蛋白用于抑制鹅星状病毒复制的用途，同时，本发明还公开了一种用于抑制鹅星状病毒复制的制剂。

Description

CAT蛋白的新用途、制剂

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种CAT蛋白的新用途、制剂。

背景技术

虽然阻断炎症是缓解人类痛风病症状的有效方法，但感染鹅星状病毒(gooseastrovirus，GAstV)引起雏鹅痛风(一种最近出现的疾病)的治疗和预防仍不清楚。

星状病毒是属于星形病毒科的小型、无包膜、单股正链RNA病毒。星状病毒的宿主范围很广，主要症状是腹泻或肠道疾病(Jakubczak等人，2021；Opriessnig等人，2020；Walter和Mitchell，2003；Wang等人，2021b；Wang等，2020)。近年来，痛风是鹅源性鹅星状病毒(GAstV)感染的主要症状，已在中国的一些鹅场出现，并给中国鹅业造成了持续的经济损失。中国研究人员进行了多角度流行病学调查以评估病毒(Wang等人，2022年；Wei等人，2020年；Yin等人，2021；Zhang等人，2021)。总结这些数据，实验性GAstV感染并未在所有感染的鹅中产生痛风症状，痛风发病率相对较低(Liu等人，2022)。与其他病毒和饮食因素的共同感染可以影响痛风症状的发展(Lin.等人，2017；Liu等人，2020；Liu et al.，2019)。然而，在消除这些因素后，一些结果仍然不符合科赫定律(Wang等人，2021a；Yin等人，2021；Zhang等人，2018)。一些学者认为，疾病进展差异的原因在于一些重要宿主基因的多态性(Habibzadeh等人，2018；Pabst等人，2009；Qing等人，2013)。然而，遗传多态性往往伴随着遗传背景、环境、饮食和其他因素的差异。在集中饲养的鹅中，遗传多态性对GAstV诱发的痛风几乎没有影响。

本发明认为，GAstV成功感染宿主后引发痛风的临界点就像跷跷板的支点。当支点向一侧倾斜时，就会出现相应的临床症状。这个支点可以是一个或多个重要的基因或/和信号通路。为了探索GAstV感染后不同临床症状的支点，对感染雏鹅肾脏组织中的mRNA进行了全面分析。使用转录组测序技术，结合代谢网络途径分析，广泛研究GAstV感染介导的宿主基因重编程。

在研究中，获得了一些新的、出乎意料的发现。

本案解决的技术问题是：如何抑制鹅星状病毒的复制。

发明内容

本发明的目的是提供一种CAT蛋白的新用途，该CAT蛋白(过氧化氢酶)可抑制鹅星状病毒的复制。

同时，本发明还公开了一种含CAT蛋白的用途。

需要进一步说明的是：在一些研究中，指出了CAT蛋白在治疗人的痛风、分解尿酸、抑制痛风引起的炎症的作用(参考CN115463109A一种仿生融合膜包裹尿酸酶和过氧化氢酶纳米粒及其制备方法)，但是我们认为这些研究均集中在人痛风产生的原因克服方面，而鹅星状病毒引起的雏鹅痛风的根源和人的痛风根源是截然不同的，并未有前人指出其在抑制鹅星状病毒的复制方面的用途。基于此，提出本发明。

如无特殊限定，M为摩尔/升；

本发明的技术方案为：

CAT蛋白用于抑制鹅星状病毒复制的用途。

需要指出的是，CAT蛋白即为本领域公知的过氧化氢酶，其氨基酸序列为：SEQ IDNO：2。CAT基因的序列如SEQ ID NO：3所示；

同时，本发明还提供了一种用于抑制鹅星状病毒复制的制剂，含有CAT蛋白。

在上述的制剂中，所述制剂为注射剂或口服剂。

作为注射剂，我们建议的制剂中CAT蛋白的浓度为1M～4M；

作为口服剂，我们建议的制剂中CAT蛋白的浓度为5mg/kg～20mg/kg。

在一些实施案例中，上述制剂可以作为饲料添加剂、饮水添加剂等形式加入。

本发明的有益效果如下：

本发明研究发现，CAT蛋白可抑制鹅星状病毒复制，这为由鹅星状病毒引起的雏鹅痛风提供了解决方案；

同时，本发明还提供了一种可抑制鹅星状病毒复制的制剂。

附图说明

图1为实施例1的实验例和对比例的GAstV病毒CT值的图表。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的技术方案作进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制。

在阐述本发明的方法之前，对于本发明的若干试剂来源予以说明：

LMH细胞：鸡肝癌细胞系LMH(ATCC CRL-2117)

F12/DMEM培养基：Gibco(C11330500BT)

GD-ZJ-21-01毒株：全序列参考SEQ ID NO：1。

实施例1

LMH细胞铺于12孔细胞培养板中，待细胞90％铺满时，将细胞用无菌PBS洗三遍，加入用无血清F12/DMEM培养基稀释的GD-ZJ-21-01毒株1ml，在37℃，5％CO₂细胞培养箱中孵育2小时后，将细胞用无菌PBS洗三遍，加入1ml含2％胎牛血清的F12/DMEM培养基，将CAT蛋白1μl(100μg/μl)加入LMH细胞中，对照组加1μl蛋白稀释液作为对照组；在37℃，5％CO₂细胞培养箱中孵育12小时后，提取细胞上清培养基的核酸，检测GAstV病毒CT值，qRT-PCR反应体系如下：

引物序列F:GGGTGATCCGCAAGGAAATA

引物序列R:AAGTTTCACCAGGGTTAGAG

用病毒核酸提取试剂盒提取细胞上清液中核酸，qRT-PCR所用试剂盒为(诺唯赞，HiScript II One Step qRT-PCR SYBR Green Kit)

qRT-PCR反应体系为20μl：

Roche公司

96荧光定量PCR仪，40个循环后，直接读取CT值，CT数值越大，说明病毒含量越低；CT数值越小，说明病毒含量越高。

结果如图1，图1中，孵育CAT蛋白的细胞上清液病毒CT值显著高于对照组病毒CT值，说明CAT蛋白可抑制鹅星状病毒复制。

实施例2

体内实验

9日龄鹅胚用于繁殖星状病毒，将繁殖第5代含10^4.0EID₅₀/0.5mL的GD-ZJ-21-01毒株原液1ml，腿肌注射4日龄仔鹅中，待仔鹅出现排出乳白色粘稠粪便、进食减少、站立不稳、精神不振等痛风症状时，一组(10只)腿肌注射CAT蛋白(6M浓度的CAT蛋白注射0.2ml)，另一组(10只)作为阳性对照，注射等体积无菌生理盐水。

1天后，观察注射CAT组仔鹅痛风症状明显好转，无明显痛风症状，死亡率和明显痛风症状率均为0。

阳性对照组仔鹅死亡率为30％，存活仔鹅痛风病情恶化。

通过实施例1和2可以证明：体内、体外实验证明CAT蛋白在星状病毒引起仔鹅痛风的治疗中有显著效果，即可证明，CAT蛋白能够抑制鹅星状病毒复制。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.CAT蛋白用于抑制鹅星状病毒复制的用途。

2.一种用于抑制鹅星状病毒复制的制剂，其特征在于，含有CAT蛋白。

3.根据权利要求2所述的制剂，其特征在于，所述制剂为注射剂或口服剂。

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