CN116265458A - 苯并噻吩类衍生物、及其制备方法和用途 - Google Patents

苯并噻吩类衍生物、及其制备方法和用途 Download PDF

Info

Publication number
CN116265458A
CN116265458A CN202111555326.7A CN202111555326A CN116265458A CN 116265458 A CN116265458 A CN 116265458A CN 202111555326 A CN202111555326 A CN 202111555326A CN 116265458 A CN116265458 A CN 116265458A
Authority
CN
China
Prior art keywords
preparation
mmol
compound
phenoxy
difluoroethyl
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202111555326.7A
Other languages
English (en)
Inventor
杨玉社
陆征宇
张丹
曹阳芷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Original Assignee
Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Institute of Materia Medica of CAS filed Critical Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Priority to CN202111555326.7A priority Critical patent/CN116265458A/zh
Priority to PCT/CN2022/134097 priority patent/WO2023109461A1/zh
Publication of CN116265458A publication Critical patent/CN116265458A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/38—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom
    • A61K31/381—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom having five-membered rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/397—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having four-membered rings, e.g. azetidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4025—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. cromakalim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/415—1,2-Diazoles
    • A61K31/4162—1,2-Diazoles condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/50—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D333/52—Benzo[b]thiophenes; Hydrogenated benzo[b]thiophenes
    • C07D333/62—Benzo[b]thiophenes; Hydrogenated benzo[b]thiophenes with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C07D333/64—Oxygen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D409/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D409/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings
    • C07D409/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems

Abstract

本发明公开了一种苯并噻吩类衍生物、及其制备方法和用途，该苯并噻吩类衍生物结构如通式I所示，各取代基的定义如说明书和权利要求书所述。本发明的苯并噻吩类衍生物，作为选择性雌激素受体拮抗剂/降解剂，用于治疗雌激素受体阳性疾病。

Description

苯并噻吩类衍生物、及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于医药领域，具体涉及一类苯并噻吩类衍生物，其外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物、其药学上可接受的盐、前体药、含有其的药物组合物，及其制备方法和其在医药上的应用。特别地，本发明涉及通式(I)所示的苯并噻吩类衍生物、其外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物、其药学上可接受的盐、前体药、含有其的药物组合物，作为选择性雌激素受体拮抗剂/降解剂的疾病治疗用途，所述的疾病特别是雌激素受体阳性(ER+)疾病。
背景技术
根据世界卫生组织国际癌症研究机构(IARC)发布的2020年全球最新癌症负担数据，2020年全球新发乳腺癌达到226万例，首次超过肺癌(221万例)成为全球第一大癌症。乳腺癌是一种雌激素依赖性肿瘤，雌激素通过与雌激素受体作用促进乳腺癌细胞的增殖。雌激素受体是甾体激素受体，属于核受体超家族，介导了大部分已知的雌激素效应。ER存在两种亚型，其中ERα分布于乳腺、子宫、骨骼、主动脉、肝脏等组织，ERβ则在睾丸、卵巢颗粒细胞、骨髓和大脑中高度表达。研究表明，ERα在约74％乳腺癌患者中高表达，且是乳腺癌细胞增殖的主要驱动因素。除此之外，雌激素作为一种重要的信号分子，参与男性和女性多种组织类型的发育和稳态。雌激素与雌激素受体结合，通过细胞质信号通路或激活细胞核转录，调节基因表达、代谢、细胞生长和增殖等基本功能。雌激素水平的异常表达(过高或过低)已被证明在许多疾病的发病发生和发展中发挥关键作用，包括卵巢癌，结肠癌，前列腺癌，子宫内膜癌，骨质疏松症，神经退行性疾病，心血管疾病，红斑狼疮，子宫内膜异位症及肥胖症。
在ER+的乳腺癌患者中，内分泌治疗是主要的治疗手段。传统的内分泌治疗药物包括芳香化酶抑制剂(AIs)如来曲唑和阿那曲唑(抑制/降低内源性雌激素的生物合成)，以及选择性雌激素受体调节剂(SERMs)如他莫昔芬、雷洛昔芬(与雌激素竞争性结合ER)。尽管内分泌疗法取得了巨大的进步，但是30-50％的患者在内分泌治疗5年内会出现耐药进而发生疾病进展、转移，5年生存率仅20％左右，中位总生存时间也只有2～3年。这些耐药的乳腺癌中，癌细胞的增殖仍然依赖于ERα信号通路的活性。
选择性雌激素受体降解剂(SERDs)不仅具有更强的雌激素受体信号通路阻断能力，还能够诱导雌激素受体降解，从而克服因受体突变或过表达导致的耐药性。其中氟维司群是雌二醇7α-烷基化的类似物，与雌激素竞争性结合ER，并将疏水性部分附加到受体的表面，模拟部分未折叠蛋白状态，利用胞质蛋白未折叠响应(unfolded protein response，UPR)系统来降解靶标ER。氟维司群是目前FDA批准的唯一SERD，每月肌肉注射500/250mg剂量，用于内分泌治疗后复发或疾病进展的ER+局部晚期或转移性绝经后乳腺癌患者，或既往未接受过内分泌治疗的绝经后HR+(孕激素受体阳性)/HER2-(人表皮生长因子受体-2阴性)局部进展期/转移性乳腺癌患者的治疗。除此之外还有多个候选SERDs药物分子处于临床研究不同阶段，公开结构的选择性雌激素受体降解剂/拮抗剂专利申请包括LSZ-102(US9322746)，G1T48(WO2018148576)、GDC-0927(WO2016097073)、SAR439859(CN108884079)、AZD9833(WO2019002442)、GDC9545(CN107108611)。
Figure BDA0003418925170000021
虽然SERDs在乳腺癌等与ER相关的疾病治疗方面显示出令人欣喜的临床疗效，但氟维司群因为口服吸收差，生物利用度低，仅能肌肉注射给药，使得病人的顺应性差，并且给药后需要3-6个月时间来实现平稳的血浆浓度，难以达到抗肿瘤最佳疗效所需的体内药物浓度。到目前为止还没有口服有效的小分子SERDs获批上市。
本领域尚需进一步研发获得口服有效、安全性好且顺应性更好的ER拮抗剂/降解剂，以满足临床治疗需求。
发明内容
本发明的目的在于提供一类结构新颖、口服有效的强效ER降解剂/拮抗剂(双功能化合物)，用于与ER信号通路相关疾病，特别是乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、前列腺癌、子宫内膜癌的治疗。
本发明的第一方面，提供一种通式(I)所示的化合物，或其前药、对映异构体、非对映异构体、外消旋体，或其药学上可接受的盐，
Figure BDA0003418925170000022
式中，R1选自：-COOH、-B(OH)2、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基；R2选自：H、卤素、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基；或者R1、R2与相连的苯环形成
Figure BDA0003418925170000031
p为0、1、2、3或4；q为0、1、2或3；
各R3、各R4独立地选自：氢、卤素、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、-SO2NH2、-C(O)NH2；
R5、R6各自独立地选自：氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基，或R5、R6与相连的碳形成C3-C6碳环或3-6元杂环；
R7选自：卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基；
Z1为-O-、-NH-、-S-、-CH2O-、-CO-、-SO2-、-SO-、-CH＝CH-、-C≡C-、C1-C4亚烷基；
o为0、1、2、3或4；
Z2、Z3各自独立地为-CH-或-N-；
n为0、1、2、3或4；m为0、1、2、3或4；
R8为卤素、氰基、羟基、羧基或氨基。
在另一优选例中，R1选自：-COOH、-B(OH)2、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基；R2选自：H、卤素、氰基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基；
或者R1、R2与相连的苯环形成
Figure BDA0003418925170000032
在另一优选例中，R5、R6各自独立地选自：氢、卤素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基，或R5、R6与相连的碳形成C3-C5碳环或3-5元杂环；
R7选自：卤素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基。
在另一优选例中，Z1为-O-、-NH-、-S-、-CH2O-、-CO-、-SO2-、-SO-、-CH＝CH-、-C≡C-、C1-C2亚烷基。
在另一优选例中，R1为-COOH、-B(OH)2；R2为H；或者R1、R2与相连的苯环形成
Figure BDA0003418925170000033
p为0、1、2或3；各R3独立地选自：氢、氟、氯、溴、氰基、C1-C2烷基、C1-C2烷氧基、C1-C2卤代烷基、C1-C2卤代烷氧基；
q为0、1或2；各R4独立地选自：氢、氟、氯、溴；
R5、R6各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、C1-C3烷基、C1-C2卤代烷基，或R5、R6与相连的碳形成C3-C5碳环；
R7选自：氢、氟、氯、溴、C1-C4烷基、C1-C2卤代烷基；
Z1为-O-、-NH-、-S-、-CH2O-、-CO-、-SO2-、-SO-、-CH＝CH-、-C≡C-、-CH2-、-CH2CH2-；
o为0、1、2或3；
Z2、Z3各自独立地为-CH-或-N-；
n为1、2或3；
m为0、1、2或3；
R8为氟、氯、溴或氰基。
在另一优选例中，-CR5R6R7选自：-CF2CH3、-CH(CF3)CH3、-CH2CF3、-CF(CH3)2、-CF(CF3)CH3、-C(CH3)2CF3、
Figure BDA0003418925170000041
在另一优选例中，所述药学上可接受的盐是化合物与有机酸或无机酸形成的盐，所述的无机酸选自盐酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、硝酸；所述有机酸选自L-酒石酸、富马酸、L-苹果酸、D-苹果酸、柠檬酸、L-焦谷氨酸、醋酸、对甲苯磺酸盐、苯磺酸、甲磺酸、苯甲酸、乳酸、扁桃酸、马来酸、草酸、丁二酸。
在另一优选例中，所述化合物或其药学上可接受的盐选自实施例1-实施例48制备的任一化合物。
本发明的第二方面，提供第一方面所述的化合物的制备方法，其中，R1为-B(OH)2，R2为氢，所述制备方法包括以下步骤：
Figure BDA0003418925170000042
(i1)A1与有机硼试剂发生选择性Miyaura偶联反应得到A2，其中，所述的有机硼试剂选自：硼酸、联硼酸频那醇酯、频那醇硼烷、联硼酸新戊二醇酯；
(i2)A2氧化开环得到A3；
(i3)A3与A4发生亲核取代反应得到A5所示的式I化合物，
或者R1为-COOH，R2为氢，所述制备方法包括以下步骤：
Figure BDA0003418925170000043
(ii1)B1与B2发生亲核加成消除反应得到B3；
(ii2)B3经过还原溴化得到B4；
(ii3)B4与B5发生Suziki偶联反应得到B6；
(ii4)B6脱除保护基得到B7；
(ii5)B7与B8发生亲核取代反应得到B9；
(ii6)B9经Pinnick氧化得到B10所示的式I化合物，
或者R1、R2与相连的苯环形成
Figure BDA0003418925170000051
时，所述制备方法包括以下步骤：
Figure BDA0003418925170000052
(iii1)中间体int1与D1发生亲核加成消除反应得到D2；
(iii2)D2经过还原得到D3；
(iii3)D3与D4发生偶联反应得到D5；
(iii4)D5经溴化得到D6；
(iii5)D6与D7发生Suzuki偶联得到D8；
(iii6)D8脱除保护基后与D9发生亲核取代反应得到D10所示的式I化合物，
各式中R3、R4、R5、R6、R7、R8、Z1、Z2、Z3、m、n、o、p、q如前所述；
X，Y分别为离去基团，各自独立地选自：卤素、三氟甲磺酸酯基、甲磺酸酯基、对甲苯磺酸酯基。
本发明的第三方面，提供一种药物组合物，包含：第一方面所述的化合物，或其前药、对映异构体、非对映异构体、外消旋体，或其药学上可接受的盐；和药学上可接受的载体。
本发明的第四方面，提供第一方面所述的化合物，或其前药、对映异构体、非对映异构体、外消旋体，或其药学上可接受的盐或第三方面所述的药物组合物的用途，用于制备治疗和/或预防与雌激素受体相关的疾病的药物。在另一优选例中，所述与雌激素受体相关的疾病选自：癌症，骨质疏松症，神经退行性疾病，心血管疾病，红斑狼疮，子宫内膜异位症及肥胖症。在另一优选例中，所述癌症选自：乳腺癌，卵巢癌，结肠癌，前列腺癌，子宫内膜癌。
应理解，在本发明范围内，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。说明书中所揭示的各个特征，可以被任何提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。限于篇幅，在此不再一一赘述。
附图说明
图1示出不同浓度化合物对MCF-7Tam1细胞增殖抑制作用
图2示出不同浓度化合物对ERα突变体Y537S和D538G的拮抗作用
图3示出不同浓度化合物对MCF-7(Y537S)ERα蛋白降解的作用。
图4为子宫湿重重量实验结果图，其中A示出不同实验组子宫重量与体重的平均比值，*p<0.05,**p<0.01；B为各实验组的子宫横切面组织学图像，子宫内膜表面上皮高度用黑线标示。
图5为化合物对MCF-7小鼠皮下肿瘤模型的生长抑制实验结果图，**p<0.01。
具体实施方式
本申请的发明人经过广泛而深入的研究，开发出一种具有通式I所示结构的化合物，具有ER拮抗和ER降解双重功能，是完全的ER拮抗剂，理论上比具有部分激动活性的SERD能更好的切断ER信号通路，实现对ER+相关疾病更好的治疗效果。因此，本发明式(I)化合物适用于治疗和/或预防与雌激素受体相关的疾病的药物中的用途。在此基础上，完成了本发明。
术语
除非有相反陈述，否则下列用在说明书和权利要求书中的属于具有下述含义。
本发明化合物中的“氢”、“碳”、“氧”包括其所有同位素。同位素应理解为包括具有相同原子数但具有不同质量数的哪些原子。举例来说，氢的同位素包括氚和氘，碳的同位素包括13C和14C，氧的同位素包括16O和18O等；
“卤素”指氟、氯、溴或碘；
“氰基”指-CN
“羧基”指-C(＝O)OH；
“烷基”指仅由C和H两种元素组成的饱和碳氢化合物在任何碳原子失去一个氢原子后形成的基团，包括直链和支链的脂肪烃，非限制性实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、仲丁基；
“烯基”指由至少两个碳原子和至少一个碳-碳双键组成的如上定义的烷基，例如乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基等；
“环烷基”指饱和或部分不饱和单环或多环环状烃取代基。多环环烷烃包括螺环、稠环和桥环的环烷基；
“烷氧基”指-O-(烷基)和-O-(环烷基)，其中烷基和环烷基的定义如上所述；
“取代”指基团中的一个或多个氢原子独立地被相应数目的取代基所代替；
“独立地”指当取代基的个数超过一个时，这些取代基可以相同也可以不同；
本发明的“异构体”指具有相同分子式的但在性质上或在其原子的键序列上或在其原子的空间排列上不同的化合物。立体异构体是其原子在空间排列上不同的异构体。彼此不成镜像的立体异构体是非对映体并且互相是非重叠的镜像的立体异构体是对映体。手性化合物可以作为单一的对映体或其混合物存在。包含对映体的相等比例的混合物称作“外消旋混合物”。
本发明的“药学上可接受的盐”指本发明化合物的盐，这类盐用于哺乳动物体内时具有安全性和有效性，且具有应有的生物活性。
具有通式(I)的化合物的体内作用可以部分地由在给予具有通式(I)的化合物之后在人体或动物体内形成的一种或多种代谢物来发挥。如上所述，具有通式(I)的化合物的体内作用也可以经由前体化合物“前体药”代谢来发挥。本发明的“前体药”是指在生物体中的生理条件下，由于与酶、胃酸等反应而转化成式(I)的化合物的化合物，即通过酶的氧化、还原、水解等转化成式(I)的化合物的化合物和/或通过胃酸等的水解反应等转化成式(I)的化合物的化合物。具有羧基的具有通式(I)的化合物的适合的药学上可接受的前体药为例如其体内可裂解的酯。对于羧基的适合的药学上可接受的酯包括烷基酯，如甲基酯、乙基酯和叔丁基酯、烷氧基甲基酯如甲氧基甲基酯；链烷酰氧基甲基酯，如新戊酰氧基酯；3-酞基酯；环烷基羰氧基烷基酯，如环戊基羰氧基甲基酯和1-环己基羰氧基乙基酯；2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯基(dioxolenyl)甲基酯，如5-甲基-2-氧代-1，3-二氧杂环戊烯-4-基甲基酯；以及烷氧基羰氧基烷基酯，如甲氧基羰氧基甲基酯和1-甲氧基羰氧基乙基酯。具有羧基的具有通式(I)的化合物的适合的药学上可接受的前药为例如体内可裂解的酰胺，诸如N-烷基酰胺和N，N-二烷基酰胺，如N-甲基酰胺、N-乙基酰胺、N-丙基酰胺、N，N-二甲基酰胺、N-乙基-N-甲基酰胺或N，N-二乙基酰胺。
本发明化合物的制备方法
本发明提供通式(I)所示化合物的通用制备方法。根据以下所描述的方法、以及有机合成化学家通常使用的方法和这些方法的组合或变化来合成通式(I)所述化合物。本发明中的化合物的合成路线不限于以下所总结的方法，个别化合物可能需要调节操作条件以满足各种官能团的要求。本领域技术人员已知的各种保护基团可能是必要的。另外，本文的各个具体实施例也说明了合成本发明化合物的方法。
在本发明化合物通式(I)的一优选例中，R1为-B(OH)2；R2为氢；通式(I)所示的化合物其外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物、其药学上可接受的盐、前体药可通过路线1制备。
路线1：
Figure BDA0003418925170000081
其中R3、R4、R5、R6、R7、R8、Z1、Z2、Z3、m、n、o、p、q如通式(I)所述；
X，Y为离去基团，包括但不限于卤素、三氟甲磺酸酯基、甲磺酸酯基、对甲苯磺酸酯基，优选X为三氟甲磺酸酯基，Y为溴；
A2通过A1在钯催化剂、有机硼试剂、碱存在条件下发生选择性Miyaura偶联得到。其中所述的钯催化剂包括但不限于[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯、四(三苯基膦)钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、双(二亚芐基丙酮)钯、双三苯基磷二氯化钯、二(三叔丁基膦)钯、
双(三环己基膦)钯、醋酸钯；所述的有机硼试剂包括但不限于硼酸、联硼酸频那醇酯、频那醇硼烷、联硼酸新戊二醇酯；所述的碱包括但不限于乙酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、磷酸氢二钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、氟化钾、氟化铯、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺；
A3通过A2进行氧化反应得到。所述的氧化剂包括但不限于高碘酸钠；
A5通过A3与A4在碱性条件下发生亲核取代反应得到，所述的碱包括但不限于乙酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、磷酸氢二钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、氟化钾、氟化铯、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺。
在本发明化合物通式(I)的另一优选例中，通式(I)所述化合物中R1为-COOH；R2为氢；通式(I)所示的化合物其外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物、其药学上可接受的盐、前体药可通过路线2制备。
路线2：
Figure BDA0003418925170000091
其中R3、R4、R5、R6、R7、R8、Z1、Z2、Z3、m、n、o、p、q如通式(I)所述；
Y为离去基团，包括但不限于卤素、三氟甲磺酸酯基、甲磺酸酯基、对甲苯磺酸酯基，优选Y为溴；
B3通过B1与B2在碱性条件下发生亲核加成消除反应得到，所述的碱包括但不限于乙酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、磷酸氢二钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、氟化钾、氟化铯、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺；
B4通过B3经过砜基还原，芳香溴化得到，其中还原剂包括但不限于二异丁基氢化铝、氢化铝锂、三甲基碘硅烷、二氢双(2-甲氧乙氧基)铝酸钠，硼氢化钠、氰基硼氢化钠、三乙酰氧基硼氢化钠，优选为二异丁基氢化铝；溴化试剂包括但不限于N-溴代丁二酰亚胺、液溴、三溴吡啶嗡盐，优选为N-溴代丁二酰亚胺；
B6通过B4与B5在碱性条件下发生Suziki偶联反应得到，所用钯催化剂包括但不限于[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯、四(三苯基膦)钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、双(二亚芐基丙酮)钯、双三苯基磷二氯化钯、二(三叔丁基膦)钯、双(三环己基膦)钯、醋酸钯，所用的碱包括但不限于乙酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、磷酸氢二钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、氟化钾、氟化铯、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺；
B7经过B6在酸性条件下的保护基脱除得到，其中所述的酸包括但不限于甲酸、乙酸、甲磺酸、盐酸、硫酸、硝酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸、三氯化硼、三溴化硼、三氯化铝；
B9通过B7与B8在碱性条件下发生亲核取代反应得到，所述的碱包括但不限于乙酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、磷酸氢二钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、氟化钾、氟化铯、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺；
B10通过B9的pinnick氧化得到。
在本发明化合物通式(I)的另一优选例中，当通式(I)所述化合物中R1，R2关环形成吡唑
Figure BDA0003418925170000101
时，通式(I)所示的化合物其外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物、其药学上可接受的盐、前体药可通过路线3制备。
路线3：
Figure BDA0003418925170000102
其中R3、R4、R5、R6、R7、R8、Z1、Z2、Z3、m、n、o、p、q如通式(I)所述；
X，Y分别为离去基团，包括但不限于卤素、三氟甲磺酸酯基、甲磺酸酯基、对甲苯磺酸酯基，优选X为碘，Y为碘；
D2从关键中间体int1出发，在碱性条件下与D1发生亲核加成消除反应，所述的碱包括但不限于乙酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、磷酸氢二钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、氟化钾、氟化铯、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺；
D3经过D2还原得到，其中还原剂包括但不限于二异丁基氢化铝、氢化铝锂、三甲基碘硅烷、二氢双(2-甲氧乙氧基)铝酸钠，优选为二异丁基氢化铝；
D5通过D3与D4发生偶联反应。其中偶联所用钯催化剂包括但不限于[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯、四(三苯基膦)钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、双(二亚芐基丙酮)钯、双三苯基磷二氯化钯、二(三叔丁基膦)钯、双(三环己基膦)钯、醋酸钯、氯(2-二环己基膦基-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)[2-(2-氨基乙基苯基)]钯(II)、甲烷磺酸(2-二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(II)，所用的碱包括但不限于乙酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、磷酸氢二钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、氟化钾、氟化铯、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺；
D6通过D5选择性芳香溴化得到；溴化试剂包括但不限于N-溴代丁二酰亚胺、液溴、三溴吡啶嗡盐，优选为N-溴代丁二酰亚胺；
D8通过D6与D7发生Suzuki偶联得到。其中Suzuki偶联所用钯催化剂包括但不限于[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯、四(三苯基膦)钯、三(二亚苄基丙酮)二钯、双(二亚芐基丙酮)钯、双三苯基磷二氯化钯、二(三叔丁基膦)钯、双(三环己基膦)钯、醋酸钯，所用的碱包括但不限于乙酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、磷酸氢二钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、氟化钾、氟化铯、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺；
D10通过D8酸性条件下保护基脱除，进一步与D9在碱性条件下发生亲核取代反应后得到。所述的酸包括但不限于甲酸、乙酸、甲磺酸、盐酸、硫酸、硝酸、三氟乙酸、三氟甲磺酸、三氯化硼、三溴化硼、三氯化铝；所述的碱包括但不限于乙酸钾、氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钠、碳酸钾、磷酸钾、磷酸氢二钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾、甲醇钠、氟化钾、氟化铯、1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯、三乙胺、N,N-二异丙基乙胺；
本发明化合物药学上可接受的盐的制备
Figure BDA0003418925170000111
将通式(I)化合物溶于适当溶剂中，1当量酸溶于相同溶剂或水中。随后将酸溶液滴加至通式(I)化合物的溶液中，搅拌30分钟，冻干。将冻干粉末悬浮于甲基叔丁基醚或正己烷中，打浆30分钟，过滤，真空干燥得相应的盐。
其中所用酸为有机酸或无机酸，所述的无机酸包括但不限于盐酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、硝酸；有机酸包括但不限于L-酒石酸、富马酸、L-苹果酸、D-苹果酸、柠檬酸、L-焦谷氨酸、醋酸、对甲苯磺酸盐、苯磺酸、甲磺酸、苯甲酸、乳酸、扁桃酸、马来酸、草酸、丁二酸。
其中所述的溶剂包括但不限于乙腈、丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷、四氢呋喃、甲醇、乙醇、异丙醇、1,4-二氧六环、氯仿、乙醚。
含有本发明的化合物的药物组合物和药物剂型
本发明还一种药物组合物，其含有通式(I)的化合物及其外消旋体、对映异构体、非对映异构体及其混合物、其药学上可接受的盐、前体药，与药学上可接受的载体、佐剂或赋形剂相混合。
本发明的药物组合物可根据需要配置成适用于口服、胃肠外(包括皮下、肌肉、皮层和静脉)施予、支气管施予或鼻施予的剂型。其中，优选地，本发明的药物组合物被配置成适用于口服的剂型。
这些组合物还可以包含各种赋形剂，例如，防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂。
用于口服的固体剂型包括胶囊、药片、药丸、粉末和颗粒。在这些固体剂型中，将活性化合物与至少一种惰性赋形剂(或载体)混合，其中还可以包括：(a)填料或混合剂；(b)粘结剂；(c)保湿剂；(d)崩解剂；(e)溶液阻滞剂；(f)吸收促进剂；(g)润湿剂；(h)吸附剂；(i)润滑剂；
用于口服的液体剂型包括药学上可接受乳液、溶液、分散液、糖浆或酏剂。出了活性化合物意外，液体剂型可以包含本领域中通常使用的惰性稀释剂(例如，水货其他溶剂)、增溶剂和乳化剂。
本发明的化合物的应用
本发明的化合物具有ER拮抗和ER降解双重功能，是完全的ER拮抗剂，理论上比具有部分激动活性的SERD能更好的切断ER信号通路，实现对ER+相关疾病更好的治疗效果。因此，本发明式(I)化合物适用于治疗和/或预防与雌激素受体相关的疾病的药物中的用途。其中所述的用途与雌激素受体相关的疾病包括但不限于：癌症(乳腺癌，卵巢癌，结肠癌，前列腺癌，子宫内膜癌)，骨质疏松症，神经退行性疾病，心血管疾病，红斑狼疮，子宫内膜异位症，及肥胖症等。
下面代表性的实施例是为了更好地说明本发明，而非用于限制本发明的保护范围。以下实施例中使用的材料如无特殊说明均为商购获得。
化合物的结构通过核磁共振(NMR)来确定。NMR的测定是用BRUKER AVANCE III400或BRUKER AVANCE III 500或BRUKER AVANCE III 600核磁共振波谱仪，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)或氘代氯仿(CDCl3)或氘代甲醇(CD3OD)，化学位移以δ(ppm)表示；质谱的测定是用Finnigan LTQ线性离子阱质谱仪或Angilent UHPLC-QTOF高分辨质谱仪。分离用硅胶，未说明均为200-300目，洗脱剂的配比均为体积比。
中间体制备A1的制备
Figure BDA0003418925170000121
3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6- 酚的制备
Figure BDA0003418925170000122
步骤1：2,3-二溴-6-羟基苯并[b]噻吩1,1-二氧化物的制备
Figure BDA0003418925170000123
将2,3-二溴-6-甲氧基苯并[b]噻吩1,1-二氧化物(5g，14.12mmol)溶于超干二氯甲烷(50mL)，氩气保护，0℃下滴加三溴化硼的二氯甲烷溶液(1M，42.35mL)，随后升至室温，反应24h。将反应液冷至0℃，缓慢滴加甲醇淬灭，加水(100mL)稀释，二氯甲烷(80mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。将固体残留物悬浮于石油醚/乙酸乙酯(5/1，50mL)的混合溶液中，搅拌打浆0.5h，过滤，石油醚(50mL)淋洗固体，真空干燥得淡黄色粉末4.086g，收率85.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.43(dd,J＝8.3,1.1Hz,1H),7.25(d,J＝1.9Hz,2H),7.05(d,J＝7.6Hz,1H).
步骤2：2,3-二溴-6-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲氧基)苯并[b]噻吩1,1-二氧化物的制备
Figure BDA0003418925170000131
将上步所得2,3-二溴-6-羟基苯并[b]噻吩1,1-二氧化物(0.4g，1.18mmol)溶于乙腈中(10mL)，加入碳酸钾(0.422g，1.3mmol)，氩气保护，随后滴加2-(三甲基硅烷基)乙氧甲基氯(0.23mL，1.3mmol)，室温反应3h。将反应液浓缩，随后加水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1)纯化后，浓缩得浅橙色固体437mg，收率78.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.48–7.45(m,2H),7.25(dd,J＝7.9,1.5Hz,1H),5.28(s,2H),3.77–3.72(t,2H,8.2Hz),0.98–0.92(t,2H,8.2Hz),0.00(s,9H).
步骤3：2-溴-3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-6-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲氧基)苯并[b]噻吩1,1-二氧化物的制备
Figure BDA0003418925170000132
将上步所得2,3-二溴-6-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲氧基)苯并[b]噻吩1,1-二氧化物(1.05g，2.23mmol)溶于四氢呋喃中(20mL)，加入4-(2-溴乙氧基)苯酚(0.58g，2.68mmol)，碳酸铯(2.18g，6.69mmol)，随后室温搅拌过夜。加水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂，得橙色粗品油状物，不经纯化直接进行下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.50(d,1H),7.41(d,J＝8.5Hz,1H),7.18(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),7.10(d,J＝8.8Hz,2H),6.92(d,J＝8.8Hz,2H),5.28(s,2H),4.30(t,J＝6.2Hz,2H),3.75(d,J＝8.4Hz,2H),3.66(t,J＝6.2Hz,2H),0.96(d,J＝8.1Hz,2H),0.01(t,J＝0.8Hz,9H).
步骤4：3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-6-(2-(三甲基硅基)乙氧基)甲氧基)苯并[b]噻吩1,1-二氧化物的制备
Figure BDA0003418925170000133
将上一步所得2-溴-3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-6-((2-(三甲基硅基)乙氧基)甲氧基)苯并[b]噻吩1,1-二氧化物粗品(2.23mmol)溶于甲醇/二甲基亚砜的混合溶剂中(1/3，20mL)，将反应液冷至0℃，随后加入硼氢化钠(253mg，6.69mmol)，室温搅拌反应5h。0℃下加水(20mL)淬灭反应，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，用水(30mL×3)和饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂，得粗品油状物，不经纯化直接进行下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.44(d,J＝2.0Hz,1H),7.23(d,J＝8.7Hz,1H),7.13(d,J＝8.6Hz,2H),6.96(d,J＝8.7Hz,2H),5.41(s,1H),5.29(s,2H),4.31(t,J＝6.2Hz,2H),3.76(d,J＝8.2Hz,2H),3.66(t,J＝6.1Hz,2H),0.96(d,J＝8.2Hz,2H),0.01(s,9H).
步骤5：(2-((3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-基)氧基)甲氧基)乙基)三甲基硅烷的制备
Figure BDA0003418925170000141
将上步所得3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-6-(2-(三甲基硅基)乙氧基)甲氧基)苯并[b]噻吩1,1-二氧化物粗品(2.23mmol)溶于超干四氢呋喃(20mL)和二氯甲烷(10mL)的混合溶剂中，氩气保护，在0℃下滴加二异丁基氢化铝的正己烷溶液(1M，13.4mL)，75℃回流2h。将反应液冷至0℃，加入乙酸乙酯(20mL)稀释，随后缓慢加入饱和酒石酸钾钠溶液(30mL)，剧烈搅拌5分钟，移除冰浴，继续搅拌直至澄清。用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-20/1)纯化后，浓缩得黄色油状物388mg，三步收率35.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.65(dd,J＝8.8,0.5Hz,1H),7.48(dd,J＝2.5,0.5Hz,1H),7.10–7.06(m,3H),6.90(d,J＝9.1Hz,2H),6.32(s,1H),5.28(s,2H),4.28(t,J＝6.3Hz,2H),3.81–3.76(m,2H),3.64(t,J＝6.2Hz,2H),1.01–0.96(m,2H),0.01(s,9H).
步骤6：2-溴-3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-酚的制备
Figure BDA0003418925170000142
将上步所得(2-((3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-基)氧基)甲氧基)乙基)三甲基硅烷(380mg，0.77mmol)溶于乙腈中(10mL)，加入N-溴代丁二酰亚(150mg，0.84mmol)，氩气保护，避光条件下，反应5h。饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1-5/1)纯化后，浓缩得浅紫色油状物300mg，收率87.7％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.29(d,J＝8.7Hz,1H),7.15(d,J＝2.0Hz,1H),6.89(d,J＝9.1Hz,2H),6.86–6.77(m,3H),4.24(d,J＝6.1Hz,2H),3.62(d,J＝6.1Hz,2H).
步骤7：3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-酚的制备
Figure BDA0003418925170000151
将上步所得2-溴-3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-酚(800mg，1.8mmol)，2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(1030mg，3.6mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(132mg，0.18mmol)，碳酸钾(995mg，7.2mmol)溶于乙二醇二甲醚(10mL)和水(2mL)的混合溶剂中，110℃微波反应25分钟。反应液加水(15mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝30/1-10/1)纯化后，浓缩得橙色油状物1.2g，收率63.7％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.34–7.26(m,3H),7.23–7.21(m,1H),7.03(td,J＝8.1,2.6Hz,1H),6.84(dd,J＝8.7,2.2Hz,1H),6.79–6.70(m,4H),4.20(t,J＝6.2Hz,2H),3.59(t,J＝6.2Hz,2H),1.88(t,J＝18.5Hz,3H).
步骤8：3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-基三氟甲烷磺酸酯的制备
Figure BDA0003418925170000152
将上步所得3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-酚(1.2g，2.29mmol)溶于超干二氯甲烷(15mL)中，氩气保护，0℃下滴加三乙胺(0.48mL，3.44mmol)和三氟甲磺酸酐(0.46mL，2.75mmol)，保持0℃下反应5h。加水(10mL)淬灭反应，用二氯甲烷(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-20/1)纯化后，浓缩得浅黄油状物1.316g，收率87.9％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.76(d,J＝2.2Hz,1H),7.52(dd,J＝8.8,0.5Hz,1H),7.37–7.29(m,2H),7.24(dd,J＝8.8,2.2Hz,1H),7.09(td,J＝8.1,2.7Hz,1H),6.81–6.73(m,4H),4.23(t,J＝6.2Hz,2H),3.62(t,J＝6.2Hz,2H),1.92(t,J＝18.5Hz,3H).
实施例1：(2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(2-(3-(氟甲基)氮杂环丁烷- 1-基)乙氧基)苯氧基)苯并噻吩-6-基)硼酸的制备
步骤1：2-(3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷的制备
Figure BDA0003418925170000153
将3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-基三氟甲烷磺酸酯(580mg，0.887mmol)，联硼酸频那醇酯(248mg，0.976mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化(32mg，0.044mmol)，1,1'-双(二苯基膦)二茂铁(24mg，0.044mmol)，乙酸钾(261mg，2.661mmol)溶于1,4-二氧六环(10mL)中，氩气保护，80℃反应24h。反应液中加水(10mL)，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1-5/1)纯化后，浓缩得无色油状物442mg，收率78.7％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.29(d,J＝0.9Hz,1H),7.71(dd,J＝8.1,1.0Hz,1H),7.43(dd,J＝8.1,0.8Hz,1H),7.34–7.27(m,2H),7.03(td,J＝8.1,2.8Hz,1H),6.77–6.69(m,4H),4.19(t,J＝6.2Hz,2H),3.58(t,J＝6.2Hz,2H),1.86(t,J＝18.5Hz,3H),1.36(s,12H).
步骤2：(3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-基)硼酸的制备
Figure BDA0003418925170000161
将上步所得2-(3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(400mg，0.632mmol)溶于丙酮(10mL)和水(10mL)的混合溶剂中，加入高碘酸钠(270mg，1.263mmol)，乙酸铵(171mg，2.212mmol)，室温反应16h。反应结束后，向反应液中加入1N盐酸溶液酸化，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1-1/1)纯化后，浓缩得黄白色粉末160mg，收率46％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.73(d,J＝0.9Hz,1H),8.16(dd,J＝8.1,1.0Hz,1H),7.60–7.56(m,1H),7.39–7.32(m,2H),7.08(td,J＝8.2,2.9Hz,1H),6.84–6.71(m,4H),4.21(t,J＝6.2Hz,2H),3.60(t,J＝6.2Hz,2H),1.92(t,J＝18.5Hz,3H).
步骤3：(2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(2-(3-(氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)乙氧基)苯氧基)苯并噻吩-6-基)硼酸的制备
Figure BDA0003418925170000162
将上步所得(3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-基)硼酸(40mg，0.073mmol)溶于乙腈(5mL)中，加入碳酸钾(30mg，0.219mmol)，碘化钾(2mg，0.015mmol)，3-(氟甲基)氮杂环丁烷盐酸盐(18mg，0.145mmol)，80℃回流10h。反应结束后，过滤除盐，加入1N盐酸溶液调pH至8-10，减压浓缩，残留物用制备液相分离(流动相：乙腈/水(1‰三氟乙酸)＝30/70-90/10)。冻干得白色粉末20mg，为目标产物的三氟乙酸盐，收率49％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.31(s,1H),8.35(s,1H),8.25(s,2H),7.73(d,J＝8.2Hz,1H),7.57–7.52(m,1H),7.50(dd,J＝9.9,2.8Hz,1H),7.38(t,J＝8.2Hz,1H),7.26(d,J＝8.1Hz,1H),6.88–6.79(m,4H),4.58(d,J＝46.9Hz,2H),4.23–4.12(m,2H),4.10–4.03(m,2H),4.00–3.87(m,2H),3.56–3.41(m,2H),3.17–3.03(m,1H),1.95(t,J＝19.0Hz,3H).MS(ESI-LR)m/z:560.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C28H27[11B]F4NO4S,560.1684；found 560.1681.
实施例2：(R)-(2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(2-(3-(氟甲基)吡咯烷- 1-基)乙氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-基)硼酸的制备
Figure BDA0003418925170000171
以(R)-3-(氟甲基)吡咯烷盐酸盐(56mg，0.4mmol)为原料，按照实施例1中步骤3所述方法制备，得到白色粉末48mg，收率为41.9％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.32(s,1H),7.70(d,J＝8.3Hz,1H),7.56–7.45(m,2H),7.36(td,J＝8.3,2.7Hz,1H),7.28(d,J＝8.1Hz,1H),6.83–6.75(m,4H),4.28(ddd,J＝47.7,6.9,4.1Hz,2H),3.95(t,J＝5.7Hz,2H),2.79–2.69(m,2H),2.61–2.32(m,5H),1.94(t,J＝19.0Hz,3H),1.89–1.77(m,1H),1.43–1.33(m,1H).MS(ESI-LR)m/z:574.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C29H29[11B]F4NO4S,574.1841；found 574.1833.
中间体B1的制备
Figure BDA0003418925170000172
步骤1：3-溴苯并噻吩-6-甲醛的制备
Figure BDA0003418925170000173
将3-溴苯并噻吩-6-甲腈(6585mg，27.64mmol)溶于超干二氯甲烷(80mL)，氩气保护，0℃下滴加二异丁基氢化铝的正己烷溶液(1M，30.42mL)，随后转移至室温反应3h。将反应液冷至0℃，加入乙酸乙酯(100mL)稀释，随后缓慢加入饱和酒石酸钾钠溶液(100mL)，剧烈搅拌5分钟，移除冰浴，继续搅拌直至澄清。用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-20/1)纯化后，浓缩得黄白色粉末6160mg，收率为92.44％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.14(s,1H),8.38(d,J＝1.0Hz,1H),7.98(t,J＝1.3Hz,2H),7.72(d,J＝0.7Hz,1H).
步骤2：2-(3-溴苯并噻吩-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环乙烷的制备
Figure BDA0003418925170000174
将上步所得3-溴苯并噻吩-6-甲醛(2g，8.3mmol)溶于甲苯(20mL)，加入对甲苯磺酸一水合物(79mg，0.415mmol)和频哪醇(2941mg，24.89mmol)，搭建Dean-Stark装置除去反应过程中生成的水，120℃反应4h。将反应液冷至室温，加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭，分液，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-20/1)纯化后，浓缩得橙色油状物，收率为98.9％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.99(s,1H),7.82(d,J＝8.3Hz,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.44(d,J＝1.4Hz,1H),6.13(s,1H),1.35(s,6H),1.28(s,6H).
步骤3：3-溴-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯并[b]噻吩1,1-二氧化物的制备
Figure BDA0003418925170000181
将上步所得2-(3-溴苯并噻吩-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧杂环乙烷(2.8g，8.2mmol)溶于二氯甲烷(30mL)，冷至0℃，15分钟内分批加入间氯过氧苯甲酸(4164mg，20.5mmol)，加毕反应液移至室温，继续反应5h。反应液过滤除去过量的间氯过氧苯甲酸，滤液用饱和硫代硫酸钠溶液淬灭，随后将用二氯甲烷(50mL×3)萃取，合并有机相，有机相依次用饱和碳酸钠溶液(50mL)和饱和氯化钠溶液(50mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。残留物悬浮于纯石油醚中(50mL)，搅拌打浆0.5h，过滤，石油醚淋洗，红外干燥得黄白色粉末2528mg，收率82.6％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.87(s,1H),7.76(d,J＝7.8Hz,1H),7.53(d,J＝7.8Hz,1H),6.96(d,J＝1.1Hz,1H),5.99(s,1H),1.32(s,6H),1.20(s,6H).
实施例3：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(2-(3-(氟甲基)氮杂环丁烷- 1-基)乙氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸的制备
步骤1：3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧六环-2-基)苯并噻吩1,1-二氧化物的制备
Figure BDA0003418925170000182
以3-溴-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊环-2-基)苯并[b]噻吩1,1-二氧化物(760mg，2.03mmol)和4-(2-溴乙氧基)苯酚(530mg，2.44mmol)为原料，按照中间体A1制备方法中步骤3所述方法制备，不经纯化，得到棕褐色固体，直接进行下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.91(s,1H),7.75(d,J＝7.9Hz,1H),7.71(d,J＝7.8Hz,1H),7.14(d,J＝8.9Hz,2H),6.97(d,J＝8.9Hz,2H),6.01(s,1H),5.50(s,1H),4.31(t,J＝6.2Hz,2H),3.66(t,J＝6.2Hz,2H),1.33(s,6H),1.23(s,6H).
步骤2：2-(3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊环的制备
Figure BDA0003418925170000183
以上步所得3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧六环-2-基)苯并噻吩1,1-二氧化物(2.03mmol)为原料，按照中间体A1制备方法中步骤5所述方法制备，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-10/1)纯化后，浓缩得无色油状物720mg，两步收率为74.3％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.94(s,1H),7.75(d,J＝8.4Hz,1H),7.49(dd,J＝8.3,1.4Hz,1H),7.10–7.03(m,2H),6.93–6.86(m,2H),6.51(s,1H),6.11(s,1H),4.28(t,J＝6.2Hz,2H),3.64(t,J＝6.2Hz,2H),1.35(s,6H),1.29(s,6H).
步骤3：2-(2-溴-3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊环的制备
Figure BDA0003418925170000191
以上步所得2-(3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊环(720mg，1.51mmol)为原料，按照中间体A1制备方法中步骤6所述方法制备，得浅橙色油状物605mg，收率为72.5％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.85(s,1H),7.43(d,J＝8.3Hz,1H),7.39(dd,J＝8.3,1.4Hz,1H),6.90–6.85(m,2H),6.85–6.81(m,2H),6.05(s,1H),4.24(t,J＝6.2Hz,2H),3.61(t,J＝6.2Hz,2H),1.34(s,6H),1.27(s,6H).
步骤4：2-(3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊环的制备
Figure BDA0003418925170000192
将上步所得2-(2-溴-3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊环(600mg，1.08mmol)，2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(617mg，2.16mmol)，四三苯基膦钯(125mg，0.108mmol)，碳酸钾(746mg，5.4mmol)溶于甲苯(10mL)和水(1mL)的混合溶剂中，90℃反应30h。反应液中加水(15mL)，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-10/1)纯化后，浓缩得橙色油状物540mg，收率为78.7％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.94(s,1H),7.42(d,J＝1.0Hz,2H),7.35–7.27(m,2H),7.03(td,J＝8.2,2.7Hz,1H),6.78–6.69(m,4H),6.09(s,1H),4.19(t,J＝6.3Hz,2H),3.58(t,J＝6.3Hz,2H),1.86(t,J＝18.5Hz,3H),1.35(s,6H),1.30(s,6H).
步骤5：3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-甲醛的制备
Figure BDA0003418925170000193
将上步所得2-(2-溴-3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3-二氧戊环(560mg，0.88mmol)溶于四氢呋喃(10mL)，随后加入4M盐酸(0.66mL)，加热至50℃反应过夜。旋去四氢呋喃，加水(15mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-10/1)纯化后，浓缩得浅黄油状物330mg，收率为70％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ10.10(s,1H),8.32(s,1H),7.82(d,J＝8.3,1.1Hz,1H),7.57(d,J＝8.3Hz,1H),7.36–7.28(m,2H),7.07(td,J＝8.1,2.8Hz,1H),6.78–6.72(m,4H),4.20(t,J＝6.2,0.8Hz,2H),3.59(t,J＝0.8,6.2Hz,2H),1.90(t,J＝18.5Hz,3H).
步骤6：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(2-(3-(氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)乙氧基)苯氧基)苯并噻吩-6-甲醛的制备
Figure BDA0003418925170000201
以上步所得3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-甲醛(120mg，0.224mmol)和3-(氟甲基)氮杂环丁烷盐酸盐(56mg，0.448mmol)为原料，按照实施例1制备方法中步骤3所述方法制备。旋去乙腈，加水(15mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝200/1-50/1)纯化后，浓缩得浅黄油状物120mg，收率为82.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.10(s,1H),8.32(dd,J＝1.4,0.7Hz,1H),7.81(dd,J＝8.3,1.3Hz,1H),7.56(d,J＝8.3Hz,1H),7.35–7.27(m,2H),7.06(td,J＝8.2,2.7Hz,1H),6.77–6.67(m,4H),4.50(dd,J＝47.4,5.6Hz,2H),3.87(t,J＝5.4Hz,2H),3.50(t,J＝7.6Hz,2H),3.15(t,J＝7.0Hz,2H),2.93–2.74(m,3H),1.89(t,J＝18.4Hz,3H).
步骤7：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(2-(3-(氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)乙氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸的制备
Figure BDA0003418925170000202
将上步所得2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(2-(3-(氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)乙氧基)苯氧基)苯并噻吩-6-甲醛(65mg，0.119mmol)溶于叔丁醇(5mL)，加入四氢呋喃(2mL)助溶，随后加入2-甲基-2-丁烯(80μL，0.952mmol)。将亚氯酸钠(22mg，0.239mmol)和磷酸二氢钠一水合物(82mg，0.595mmol)溶于水(2mL)中，滴加至反应液中，室温反应0.5h。旋去四氢呋喃，加水(15mL)稀释，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品用制备液相分离(流动相：乙腈/水(1‰三氟乙酸)＝30/70-90/10)。冻干得白色粉末28mg，收率42％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.61(d,J＝1.3Hz,1H),7.89(dd,J＝8.4,1.4Hz,1H),7.53(ddd,J＝17.9,9.2,4.2Hz,2H),7.42–7.35(m,2H),6.85–6.74(m,4H),4.50(dd,J＝47.5,6.1Hz,2H),3.85(t,J＝5.4Hz,2H),3.41(t,J＝7.4Hz,2H),3.10(dd,J＝7.7,6.1Hz,2H),2.82–2.68(m,3H),1.95(t,J＝19.0Hz,3H).MS(ESI-LR)m/z:560.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd forC29H26F4NO4S,560.1513；found 560.1518.
实施例4：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(2-(3-(氟甲基)氮杂环丁烷- 1-基)乙氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸的制备
步骤1：3,6-二溴苯并[b]噻吩1,1-二氧化物的制备：
Figure BDA0003418925170000211
以3,6-二溴苯并噻吩(6.1g，20.89mmol)为原料，按照中间体B1制备方法中步骤3所述方法制备，得黄白色粉末5137mg，收率为75.9％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.34(d,J＝1.8Hz,1H),8.10(s,1H),8.02(dd,J＝8.1,1.7Hz,1H),7.55(d,J＝8.2Hz,1H).
步骤2：3-(4-(苄氧基)苯氧基)-6-溴苯并[b]噻吩1,1-二氧化物的制备：
Figure BDA0003418925170000212
将上步所得3,6-二溴苯并[b]噻吩1,1-二氧化物(1.784g，5.51mmol)，4-(苄氧基)苯酚(1211mg，6.05mmol)和碳酸铯(5376mg，16.5mmol)溶于四氢呋喃(50mL)，50℃搅拌过夜。加入等体积石油醚搅拌稀释反应液，硅胶砂芯漏斗过滤除盐，用四氢呋喃/石油醚＝1/1约300mL淋洗固体，减压浓缩滤液，得到油状物粗品。向残留物中加入乙酸乙酯/石油醚＝1/1混合溶剂约100mL，搅拌打浆0.5h，过滤，固体红外干燥，得白色粉末2271mg，收率为93.1％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.29(d,J＝1.7Hz,1H),7.99(dd,J＝8.1,1.8Hz,1H),7.76(d,J＝8.1Hz,1H),7.50–7.45(m,2H),7.44–7.39(m,2H),7.38–7.29(m,3H),7.16–7.11(m,2H),6.23(s,1H),5.13(s,2H).
步骤3：3-(4-(苄氧基)苯氧基)-6-溴苯并噻吩的制备：
Figure BDA0003418925170000213
以上步所得3-(4-(苄氧基)苯氧基)-6-溴苯并[b]噻吩1,1-二氧化物(2200mg，2.44mmol)为原料，按照中间体A1制备方法中步骤5所述方法制备，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-10/1)纯化后，浓缩得浅黄粉末1771mg，两步收率为87％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.93(d,J＝1.6Hz,1H),7.67(d,J＝8.6Hz,1H),7.50–7.32(m,6H),7.13–7.06(m,2H),7.01–6.95(m,2H),6.41(s,1H),5.06(s,2H).
步骤4：3-(4-(苄氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸的制备：
Figure BDA0003418925170000221
将上步所得3-(4-(苄氧基)苯氧基)-6-溴苯并噻吩(2.6g，6.34mmol)，醋酸钯(43mg，0.19mmol)，4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(110mg，0.19mmol)，N,N'-二环己基碳二亚胺(262mg，1.27mmol)加至封管中，加入超干N,N-二甲基甲酰胺(15mL)，氩气保护，在气氛下加入甲酸(1.67ml，44.4mmol)和三乙胺(1.76mL，12.68mmol)，密闭条件下100℃反应20h。反应结束后向反应液中加入水(50mL)，用四氢呋喃/乙酸乙酯＝1/3(60mL×3)萃取，合并有机相，用水(60mL×3)和饱和氯化钠溶液(60mL)依次洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝50/1-10/1)纯化后，浓缩得黄色粉末2150mg，收率为86％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.10(s,1H),8.60(s,1H),7.96(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),7.79(d,J＝8.4Hz,1H),7.47–7.30(m,5H),7.17–6.98(m,5H),5.07(s,2H).
步骤5：3-(4-(苄氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯的制备：
Figure BDA0003418925170000222
将上步所得3-(4-(苄氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸(2.5g，6.64mmol)和碳酸钾(913mg，6.64mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)，随后加入碘甲烷(0.8mL，13.28mL)，80℃反应4h。反应结束后向反应液中加入水(30mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，用水(50mL×3)和饱和氯化钠溶液(50mL)依次洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝30/1-10/1)纯化后，浓缩得白色粉末2g，收率为80.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(d,J＝1.5Hz,1H),8.04(dt,J＝8.4,1.4Hz,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,1H),7.47–7.37(m,4H),7.37–7.32(m,1H),7.11–7.08(m,2H),7.00–6.96(m,2H),6.63(d,J＝1.2Hz,1H),5.07(s,2H),3.97(s,3H).
步骤6：3-(4-羟基苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯的制备：
Figure BDA0003418925170000223
将上步所得3-(4-(苄氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯(1.9g，4.87mmol)溶于四氢呋喃(20mL)，加入氢氧化钯/碳(3.8g，20％wt)，在氢气氛下50℃反应6h，反应液经过硅藻土过滤，四氢呋喃(60mL)淋洗。滤液减压浓缩后得到粗品，不经纯化直接投下一步。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(dd,J＝1.5,0.7Hz,1H),8.03(dd,J＝8.4,1.4Hz,1H),7.85(dd,J＝8.4,0.8Hz,1H),7.08–7.03(m,2H),6.88–6.82(m,2H),6.61(s,1H),4.92(s,1H),3.97(s,3H).
步骤7：3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003418925170000231
将上步所得3-(4-羟基苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯(4.87mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中，加入1-叔丁氧羰基-3-碘氮杂环丁烷(1654mg，5.844mmol)，碳酸铯(4760mg，14.61mmol)，130℃反应0.5h。反应结束后向反应液中加入乙酸乙酯(50mL)稀释，随后加水(50mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，用水(50mL×3)和饱和氯化钠溶液(50mL)依次洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)纯化后，浓缩得黄白色粉末1940mg，收率为87.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(s,1H),8.03(dd,J＝8.4,1.4Hz,1H),7.83(d,J＝8.4Hz,1H),7.12–7.06(m,2H),6.78–6.71(m,2H),6.65(s,1H),4.86(tt,J＝6.3,4.1Hz,1H),4.29(ddd,J＝9.6,6.4,1.0Hz,2H),4.04–3.99(m,2H),3.96(s,3H),1.45(s,9H).
步骤8：2-溴-3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003418925170000232
以上步所得3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯(720mg，1.58mmol)为原料，按照中间体A1制备方法中步骤6所述方法制备，得浅黄色油状物260mg，收率为30.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.43(dd,J＝1.4,0.7Hz,1H),7.93(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),7.49(dd,J＝8.4,0.7Hz,1H),6.90–6.84(m,2H),6.69–6.64(m,2H),4.81(tt,J＝6.4,4.1Hz,1H),4.25(ddd,J＝9.7,6.4,1.0Hz,2H),4.00–3.93(m,5H),1.44(s,9H).
步骤9：3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)-2-((1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003418925170000233
将上步所得2-溴-3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯(150mg，0.28mmol)，2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(161mg，0.56mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(26mg，0.028mmol)，2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(27mg，0.056mmol)，磷酸钾(178mg，0.84mmol)溶于1,4-二氧六环(5mL)和水(0.5mL)的混合溶剂中，110℃微波反应1.5h。反应结束后，直接将反应液旋干硅胶拌样，经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-10/1)纯化后，浓缩得橙色油状物100mg，收率为58.2％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(dd,J＝1.5,0.7Hz,1H),7.96(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),7.48(dd,J＝8.5,0.8Hz,1H),7.34–7.27(m,2H),7.05(td,J＝8.1,2.7Hz,1H),6.77–6.73(m,2H),6.58–6.53(m,2H),4.80–4.72(m,1H),4.26–4.20(m,2H),3.97–3.92(m,5H),1.88(t,J＝18.4Hz,3H),1.44(s,9H).
步骤10：3-(4-(氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯盐酸盐的制备
Figure BDA0003418925170000241
将上步所得3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)-2-((1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯(110mg，0.161mmol)溶于1,4-二氧六环(5mL)中，加入盐酸的1,4-二氧六环溶液(4M，2mL)，40℃反应过夜。直接将反应液旋干，得粗品不经纯化直接下一步。MS(ESI-LR)m/z:513.2(M+1)+.
步骤11：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苯氧基)苯并噻吩-6-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003418925170000242
将上步所得3-(4-(氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯盐酸盐(0.16mmol)悬浮于乙腈(5mL)中，加入三乙胺(67μL，0.48mmol)，氩气保护，室温搅拌20分钟后加入1-氟-3-碘丙烷(25μL，0.24mmol)，50℃反应过夜，TLC(二氯甲烷/甲醇＝10/1)监测反应完全并补加1-氟-3-碘丙烷和三乙胺直至反应完全。反应结束后直接向反应液中加入硅胶拌样，经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/1-100/3)纯化后，浓缩得无色油状物40mg，收率为43.6％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.53–8.51(m,1H),7.95(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,1H),7.34–7.27(m,2H),7.05(td,J＝8.1,2.8Hz,1H),6.75–6.70(m,2H),6.60–6.55(m,2H),4.67(p,J＝5.8Hz,1H),4.49(dt,J＝47.2,5.9Hz,2H),3.96(s,3H),3.78(td,J＝6.2,1.9Hz,2H),3.08–3.02(m,2H),2.63(t,J＝7.1Hz,2H),1.88(t,J＝18.5Hz,3H),1.83–1.70(m,2H).
步骤12：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苯氧基)苯并噻吩-6-羧酸的制备
Figure BDA0003418925170000243
将上步所得2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苯氧基)苯并噻吩-6-羧酸甲酯(35mg，0.061mmol)溶于四氢呋喃(5mL)和水(3mL)的混合溶剂中，随后加入氢氧化锂一水合物(8mg，0.183mmol)，室温搅拌过夜。减压浓缩除去四氢呋喃，加水(3mL)稀释，1N盐酸调节pH约为5-6有固体析出。过滤，固体用水淋洗，收集固体后用制备液相分离(流动相：乙腈/水(1‰三氟乙酸)＝30/70-90/10)。流出液旋去大部分乙腈后，饱和碳酸氢钠调节pH至7-8，随后乙酸乙酯萃取，饱和氯化钠洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。残留物冻干得白色粉末16mg，收率为46.9％。1HNMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.62(s,1H),7.93–7.88(m,1H),7.51(ddd,J＝18.1,9.3,4.2Hz,2H),7.43–7.34(m,2H),6.84–6.76(m,2H),6.72–6.66(m,2H),4.68(p,J＝5.7Hz,1H),4.44(dt,J＝47.4,6.0Hz,2H),3.73(dd,J＝8.2,5.9Hz,2H),2.98(dd,J＝8.3,5.4Hz,2H),2.55(t,J＝7.0Hz,2H),1.95(t,J＝19.0Hz,3H),1.67(dp,J＝25.8,6.5Hz,2H).MS(ESI-LR)m/z:560.4(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C29H26F4NO4S,560.1513；found 560.1517.
实施例5：(S)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)吡咯烷- 3-基)氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸的制备
步骤1：(S)-3-(4-(1-Boc-3-羟基吡咯烷-3-氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003418925170000251
将实施例4步骤6所得3-(4-羟基苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯(450mg，1.5mmol)，(R)-1-叔丁氧羰基-3-羟基吡咯烷(421mg，2.25mmol)，三丁基膦(1.5mL，6mmol)溶于甲苯(10mL)中，氩气保护，0℃下加入偶氮二甲酰胺(1033mg，6mmol)，随后升温至60℃，搅拌反应过夜。反应结束后向反应液中加入乙酸乙酯(20mL)稀释，随后加水(20mL)，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)纯化后，浓缩得黄白色粉末534mg，收率为75.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(d,J＝1.4Hz,1H),8.04(dd,J＝8.4,1.4Hz,1H),7.85(d,J＝8.4Hz,1H),7.12–7.06(m,2H),6.91–6.84(m,2H),6.65(d,J＝4.8Hz,1H),4.86(s,1H),3.97(s,3H),3.70–3.47(m,4H),2.23–2.06(m,2H),1.47(s,9H).
步骤2：(S)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)吡咯烷-3-基)氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸的制备
Figure BDA0003418925170000252
制备方法类似于实施例4的制备方法，不同的是将步骤8中的原料3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯替换为(S)-3-(4-(1-叔丁氧羰基-3-羟基吡咯烷-3-氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯，制得标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.60(d,J＝1.4Hz,1H),7.90(dd,J＝8.4,1.4Hz,1H),7.51(ddd,J＝17.0,9.2,4.2Hz,2H),7.41–7.33(m,2H),6.87–6.77(m,2H),6.77–6.71(m,2H),4.76(q,J＝4.9,2.8Hz,1H),4.46(dt,J＝47.3,5.9Hz,2H),2.92(dd,J＝10.8,5.9Hz,1H),2.76(q,J＝7.7Hz,1H),2.67(dd,J＝10.4,2.7Hz,1H),2.61–2.52(m,3H),2.19(dq,J＝14.1,7.3Hz,1H),1.94(t,J＝18.9Hz,3H),1.89–1.68(m,3H).MS(ESI-LR)m/z:574.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H28F4NO4S,574.167；found 574.1666.
实施例6：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷- 3-基)氨基)苯氧基)苯并噻吩-6-羧酸的制备
步骤1：3-(4-(苄氧基)苯氧基)-2-溴苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003418925170000261
以实施例4步骤5所得3-(4-(苄氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯(860mg，2.2mmol)为原料，按照中间体A1制备方法中步骤6所述方法制备，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-20/1)纯化后，浓缩得浅紫粉末900mg，收率为87.2％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.45–8.40(m,1H),7.93(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),7.50(dd,J＝8.4,0.7Hz,1H),7.43–7.31(m,5H),6.93–6.86(m,4H),5.01(s,2H),3.95(s,3H).
步骤2：3-(4-(苄氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003418925170000262
以上步所得3-(4-(苄氧基)苯氧基)-2-溴苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯(90mg，0.192mmol)为原料，按照实施例4制备方法中步骤9所述方法制备，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-10/1)纯化后，浓缩得黄色油状物70mg，收率为66.5％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(t,J＝1.0Hz,1H),7.96(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),7.49(d,J＝8.5Hz,1H),7.42–7.27(m,7H),7.04(td,J＝8.1,2.7Hz,1H),6.82–6.69(m,4H),4.97(s,2H),3.96(s,3H),1.88(t,J＝18.5Hz,3H).
步骤3：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-羟基苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003418925170000263
以上步所得3-(4-(苄氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯(1g，1.82mmol)为原料，按照实施例4制备方法中步骤6所述方法制备，滤液减压浓缩后得到粗品，不经纯化直接投下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.52(d,J＝1.0Hz,1H),7.95(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),7.49(d,J＝8.5Hz,1H),7.31(ddd,J＝9.7,8.2,4.1Hz,2H),7.05(td,J＝8.1,2.7Hz,1H),6.73–6.62(m,4H),4.91(s,1H),3.96(s,3H),1.88(t,J＝18.5Hz,3H).
步骤4：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((三氟甲基)磺酰基)氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003418925170000271
将上步所得2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-羟基苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯(1.82mmol)溶于超干二氯甲烷(15mL)，随后氩气保护，0℃下加入吡啶(0.22mL，2.73mmol)，再缓慢滴加三氟甲磺酸酐(0.37Ml,2.18mmol)，。反应结束后向反应液中加入水(15mL)淬灭，用二氯甲烷(15mL×3)萃取，合并有机相，依次用1N盐酸(20mL)和饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝30/1)纯化后，浓缩得无色油状物938mg，收率为87.3％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.55(d,J＝1.4Hz,1H),8.01(dd,J＝8.5,1.5Hz,1H),7.49(d,J＝8.4Hz,1H),7.33–7.27(m,2H),7.12–7.03(m,3H),6.90–6.84(m,2H),3.97(s,3H),1.89(t,J＝18.4Hz,3H).
步骤5：3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氨基)苯氧基)-2-((1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003418925170000272
将上步所得2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((三氟甲基)磺酰基)氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯(295mg，0.5mmol)，1-叔丁氧羰基-3-氨基氮杂环丁烷(172mg，1mmol)，
甲烷磺酸(2-二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)(45mg，0.05mmol)，碳酸铯(407mg，1.25mmol)溶于1,4-二氧六环(5mL)，氩气保护，微波110℃反应6h，反应结束后向反应液中加入水(15mL)，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1-3/1)纯化后，浓缩得白色泡沫153mg，收率为49.9％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.51(dd,J＝1.5,0.7Hz,1H),7.95(dd,J＝8.4,1.5Hz,1H),7.49(d,J＝8.5Hz,1H),7.31(ddd,J＝9.6,6.3,4.0Hz,2H),7.05(td,J＝8.1,2.7Hz,1H),6.72–6.66(m,2H),6.38–6.30(m,2H),4.23(dd,J＝8.9,7.1Hz,2H),4.15–4.04(m,1H),3.96(s,3H),3.80(d,J＝6.8Hz,1H),3.67(dd,J＝9.1,4.7Hz,2H),1.88(t,J＝18.5Hz,3H),1.43(s,9H).
步骤6：3-(4-(氮杂环丁烷-3-氨基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯盐酸盐的制备
Figure BDA0003418925170000273
将上步所得3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氨基)苯氧基)-2-((1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯(125mg，0.204mmol)溶于异丙醇(5mL)，随后加入盐酸(2mL，5Min IPA)，50℃搅拌反应过夜。反应完全应结束后，直接将反应液旋干，得粗品不经纯化直接下一步。MS(ESI-LR)m/z:513.1(M+1)+.
步骤7：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)苯氧基)苯并噻吩-6-羧酸的制备
Figure BDA0003418925170000281
将上步所得3-(4-(氮杂环丁烷-3-氨基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯盐酸盐(0.204mmol)悬浮于乙腈中(10mL)，随后加入碳酸钾(70mg，0.51mmol)，氩气保护，室温搅拌20分钟。之后向反应液中依次加入三乙胺(71μL，0.51mmol)和1-氟-3-碘丙烷(31μL，0.306mmol)，50℃搅拌反应过夜，TLC(二氯甲烷/甲醇＝10/1)监测反应完全并补加1-氟-3-碘丙烷和三乙胺直至反应完全。反应结束后向反应液中加水(15mL)，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝100/1-100/3)纯化后，浓缩得黄色油状物112mg，收率为95.9％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.51(d,J＝1.5Hz,1H),7.94(dd,J＝8.5,1.4Hz,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,1H),7.35–7.26(m,2H),7.06(td,J＝8.2,2.7Hz,1H),6.73–6.64(m,2H),6.45–6.37(m,2H),4.52(dt,J＝47.0,5.7Hz,2H),4.22(s,1H),4.02(t,J＝8.0Hz,2H),3.95(s,3H),3.47–3.32(m,2H),2.97(t,J＝7.4Hz,2H),2.03–1.82(m,5H).
步骤8：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)苯氧基)苯并噻吩-6-羧酸的制备
Figure BDA0003418925170000282
将上步所得2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)苯氧基)苯并噻吩-6-羧酸(105mg，0.184mmol)为原料，按照实施例4制备方法中步骤12所述方法制备，得浅黄白色粉末68mg，收率为66.2％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.59(s,1H),7.88(d,J＝8.4Hz,1H),7.54(dd,J＝8.6,5.6Hz,1H),7.49(dd,J＝9.9,2.8Hz,1H),7.42–7.36(m,2H),6.66(d,J＝8.6Hz,2H),6.36(d,J＝8.4Hz,2H),5.82(d,J＝6.8Hz,1H),4.44(dt,J＝47.4,6.0Hz,2H),3.84(q,J＝6.1Hz,1H),3.63(t,J＝6.8Hz,2H),3.48–3.41(m,0H),2.75(t,J＝6.8Hz,2H),1.94(t,J＝19.0Hz,3H),1.65(dp,J＝25.8,6.6Hz,2H).MS(ESI-LR)m/z:559.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C29H27F4N2O3S,559.1673；found 559.1678.
中间体int1，3-溴-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑1,1-二氧化 物的制备
Figure BDA0003418925170000291
步骤1：4-氟-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-甲腈的制备
Figure BDA0003418925170000292
将5-溴-4-氟-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H吲唑(13.35g，44.63mmol)，氰化锌(5.24g，44.63mmol)和四三苯基膦钯(5.157g，4.463mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(150mL)，氩气保护下100℃反应6h。反应结束后向反应液中加入乙酸乙酯(50mL)稀释，硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(150mL淋洗)。随后向滤液中加水(150mL)，用乙酸乙酯(100mL×3)萃取，合并有机相，用水(150mL×3)和饱和氯化钠溶液(150mL)依次洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1-5/1)纯化后，浓缩得白色粉末8g，收率为73.1％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.18(s,1H),7.50–7.48(m,2H),5.74(dd,J＝8.9,2.7Hz,1H),4.02–3.94(m,1H),3.80–3.69(m,1H),2.55–2.41(m,1H),2.20–2.07(m,2H),1.85–1.64(m,3H).
步骤2：3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-2-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003418925170000293
将上步所得的4-氟-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-5-甲腈(8g，32.6mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(100mL)，加入碳酸钾(18.023g，130.4mmol)和巯基乙酸甲酯(3.2mL，35.86mmol)，升温至65℃，搅拌反应15h。反应结束后，将反应液倾倒至搅拌的冰水中(200mL)，析出大量固体，继续搅拌10分钟。随后将反应液抽滤，滤饼用水淋洗2-3遍，固体红外干燥，得黄白色粉末8.564g，收率为79.3％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.18(d,J＝0.7Hz,1H),7.59(d,J＝9.2Hz,1H),7.54(d,J＝9.0Hz,1H),5.78(dd,J＝9.2,2.7Hz,1H),4.07–3.99(m,1H),3.90(s,3H),3.81–3.74(m,1H),2.63–2.51(m,1H),2.26–2.04(m,2H),1.85–1.66(m,3H).
步骤3：3-溴-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-2-羧酸甲酯的制备
Figure BDA0003418925170000294
将上步所得的3-氨基-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-2-羧酸甲酯(10.9g，32.9mmol)，CuBr2(11.02g，49.35mmol)溶于乙腈(100mL)中，氩气保护下升温至65℃，随后在加热条件下滴加亚硝酸叔丁酯(5.8mL，49.35mmol)，继续加热搅拌反应45分钟。反应结束后将反应液冷却至室温，倒至冰水中(200mL)，搅拌析出大量固体。随后将反应液抽滤，滤饼用水淋洗2-3遍，固体红外干燥。将固体悬浮于石油醚/乙酸乙酯＝5/1的混合溶剂(100mL)中，搅拌打浆0.5h，倾析除去上层清液，固体重复打浆步骤3次后，抽滤，滤饼用石油醚淋洗，红外干燥，得黄绿色粉末8.4g，收率为64.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(s,1H),7.98(dd,J＝9.2,0.8Hz,1H),7.90(d,J＝9.1Hz,1H),6.00(dd,J＝9.6,2.3Hz,1H),3.91(s,3H),3.91–3.87(m,1H),3.83–3.75(m,1H),2.47–2.37(m,1H),2.09–1.98(m,2H),1.83–1.72(m,1H),1.64–1.56(m,2H).
步骤4：3-溴-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-2-羧酸的制备
Figure BDA0003418925170000301
将上步所得的3-溴-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-2-羧酸甲酯(7.905g，20mmol)溶于四氢呋喃(100mL)和水(60mL)的混合溶剂中，随后加入氢氧化锂一水合物(2517mg，60mmol)，室温搅拌过夜。反应结束后，减压浓缩除去大部分四氢呋喃，残留物中加水(100mL)稀释，在冰浴下用4N盐酸调pH至3-4，有大量固体析出。随后将反应液抽滤，滤饼用水淋洗2-3遍，固体红外干燥，得灰白色粉末7.5g，收率为98.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.80(s,1H),8.55(s,1H),7.95(d,J＝9.1Hz,1H),7.87(d,J＝9.1Hz,1H),5.98(dd,J＝9.6,2.3Hz,1H),3.94–3.84(m,1H),3.82–3.74(m,1H),2.46–2.38(m,1H),2.09–1.96(m,2H),1.85–1.69(m,1H),1.65–1.57(m,2H).
步骤5：3-溴-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000302
将上步所得的3-溴-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-2-羧酸(7624mg，20mmol)，氧化亚铜(1717mg，12mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(100mL)，140℃加热搅拌反应2h。反应结束后，冷至室温，加入乙酸乙酯(50mL)稀释，硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯淋洗(100mL)。随后向滤液中加水(100mL)，用乙酸乙酯(50mL×3)萃取，合并有机相，用水(100mL×3)和饱和氯化钠溶液(100mL)依次洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-10/1)纯化后，浓缩得浅橙色粉末4g，收率为59.3％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(d,J＝0.9Hz,1H),7.80(d,J＝9.0Hz,1H),7.68(dd,J＝8.9,0.8Hz,1H),7.36(s,1H),5.81(dd,J＝9.3,2.7Hz,1H),4.04(ddd,J＝10.2,3.9,2.2Hz,1H),3.83–3.73(m,1H),2.67–2.53(m,1H),2.23–2.08(m,2H),1.86–1.65(m,3H).
步骤6：3-溴-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑1,1-二氧化物的制备
Figure BDA0003418925170000303
将上步所得的3-溴-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(5.3g，15.71mmol)为原料，按照中间体B1制备方法中的步骤3制备，得黄白色粉末5.462g，收率为94.2％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.34(d,J＝0.9Hz,1H),7.92(dd,J＝8.7,0.9Hz,1H),7.57(d,J＝8.7Hz,1H),6.93(s,1H),5.83(dd,J＝8.4,2.8Hz,1H),3.97–3.90(m,1H),3.80–3.71(m,1H),2.56–2.46(m,1H),2.20–2.09(m,2H),1.84–1.68(m,3H).
实施例7：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(2-(3-(氟甲基)氮杂环丁烷- 1-基)乙氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
步骤1：3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑1,1-二氧化物的制备
Figure BDA0003418925170000311
以3-溴-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑1,1-二氧化物(1216mg，3.29mmol)和4-(2-溴乙氧基)苯酚(857mg，3.95mmol)为原料，按照中间体A1制备方法中步骤3所述方法制备，不经纯化，得到土黄色固体，直接进行下一步。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.35(d,J＝0.9Hz,1H),7.92(dd,J＝8.7,0.9Hz,1H),7.75(d,J＝8.7Hz,1H),7.21–7.15(m,2H),7.01–6.96(m,2H),5.84(dd,J＝8.4,2.7Hz,1H),5.46(s,1H),4.32(t,J＝6.2Hz,2H),3.99–3.93(m,1H),3.81–3.72(m,1H),3.67(t,J＝6.2Hz,2H),2.59–2.48(m,1H),2.22–2.09(m,2H),1.87–1.70(m,3H).
步骤2：3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000312
以上步所得得到的3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑1,1-二氧化物(3.29mmol)为原料，按照中间体A1制备方法中步骤5所述方法制备，粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-10/1)纯化后，浓缩得黄色泡沫状固体1117mg，两步收率为71.7％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(d,J＝0.8Hz,1H),7.74(d,J＝8.9Hz,1H),7.58(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.14–7.07(m,2H),6.95–6.87(m,2H),6.39(s,1H),5.79(dd,J＝9.4,2.7Hz,1H),4.28(t,J＝6.2Hz,2H),4.08–4.01(m,1H),3.81–3.73(m,1H),3.64(t,J＝6.2Hz,2H),2.67–2.54(m,1H),2.24–2.06(m,2H),1.85–1.66(m,3H).
步骤3：2-溴-3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000313
以上步所得3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(424mg，0.896mmol)为原料，按照中间体A1制备方法中步骤5所述方法制备，得浅黄色油状物343mg，收率为69.8％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16(d,J＝0.9Hz,1H),7.50(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.41(d,J＝9.0Hz,1H),6.94–6.87(m,2H),6.86–6.81(m,2H),5.75(dd,J＝9.2,2.7Hz,1H),4.24(t,J＝6.2Hz,2H),4.01(d,J＝11.7Hz,1H),3.80–3.70(m,1H),3.61(t,J＝6.2Hz,2H),2.63–2.51(m,1H),2.25–2.07(m,2H),1.85–1.63(m,3H).
步骤4：3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000321
以上步所得2-溴-3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(330mg，0.598mmol)为原料，按照实施例3中步骤4所述方法制备，得到浅黄色泡沫固体130mg，收率为34.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.21(d,J＝0.8Hz,1H),7.53(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.40(d,J＝9.0Hz,1H),7.37–7.31(m,2H),7.04(td,J＝8.3,2.9Hz,1H),6.79–6.69(m,4H),5.77(dd,J＝9.3,2.7Hz,1H),4.20(t,J＝6.2Hz,2H),4.03(d,J＝11.6Hz,1H),3.79–3.71(m,1H),3.59(t,J＝6.2Hz,2H),2.64–2.53(m,1H),2.24–2.07(m,2H),1.87(t,J＝18.5Hz,3H),1.80–1.63(m,3H).
步骤5：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(2-(3-(氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)乙氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000322
以上步所得的3-(4-(2-溴乙氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(130mg，0.205mmol)和3-(氟甲基)氮杂环丁烷盐酸盐(52mg，0.412mmol)为原料，按照实施例1制备方法中步骤3所述方法制备。粗品经柱层析(二氯甲烷/甲醇＝200/1-50/1)纯化后，浓缩得浅黄油状物120mg，收率为91.5％。1HNMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(s,1H),7.52(d,J＝9.0Hz,1H),7.40(d,J＝8.9Hz,1H),7.37–7.30(m,2H),7.04(td,J＝8.1,2.8Hz,1H),6.78–6.66(m,4H),5.77(dd,J＝9.3,2.7Hz,1H),4.50(dd,J＝47.4,5.1Hz,2H),4.03(d,J＝11.5Hz,1H),3.93(t,J＝5.3Hz,2H),3.80–3.70(m,1H),3.65(t,J＝7.9Hz,2H),3.28(t,J＝7.4Hz,2H),3.01–2.87(m,3H),2.65–2.51(m,1H),2.21–2.05(m,2H),1.86(t,J＝18.5Hz,3H),1.81–1.62(m,3H).
步骤6：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(2-(3-(氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)乙氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000323
将上步所得的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(2-(3-(氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)乙氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(120mg，0.188mmol)溶于甲醇(5mL)，随后加入盐酸的甲醇溶液(0.4mL，4M)，室温搅拌反应过夜，TLC(二氯甲烷/甲醇＝10/1)监测反应完全。旋去甲醇，加水(10mL)稀释，饱和碳酸氢钠调节pH至8-10，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品用制备液相分离(流动相：乙腈/水(1‰三氟乙酸)＝30/70-90/10)，用碳酸氢钠溶液游离后。冻干得白色粉末50mg，收率47.9％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.51(s,1H),8.39(s,1H),7.58–7.52(m,2H),7.49(dd,J＝9.9,2.8Hz,1H),7.38(td,J＝8.3,2.8Hz,1H),7.25(d,J＝8.9Hz,1H),6.84–6.79(m,2H),6.79–6.75(m,2H),4.49(dd,J＝47.6,6.2Hz,2H),3.81(t,J＝5.6Hz,2H),3.30(t,J＝7.3Hz,2H),2.99(t,J＝6.6Hz,2H),2.75–2.65(m,3H),1.95(t,J＝19.0Hz,3H).MS(ESI-LR)m/z:556.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C29H26F4N3O2S,556.1676；found 556.1692.
实施例8：2-(1-(2-(4-((2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲 唑-3-基)氧基)苯氧基)乙基)氮杂环丁-3-基)乙腈的制备
步骤1：2-(1-(2-(4-(2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-3-基)氧基)苯氧基)乙基)氮杂丁-3-基)乙腈的制备
Figure BDA0003418925170000331
制备方法类似于实施例7的步骤5，不同的是将步骤5中的原料3-(氟甲基)氮杂环丁烷盐酸盐替换为3-(氰甲基)氮杂环丁烷盐酸盐，制得标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(d,J＝0.9Hz,1H),7.52(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.40(d,J＝9.0Hz,1H),7.38–7.28(m,2H),7.04(td,J＝8.1,2.7Hz,1H),6.78–6.70(m,2H),6.73–6.65(m,2H),5.77(dd,J＝9.3,2.7Hz,1H),4.03(d,J＝11.7Hz,1H),3.86(t,J＝5.3Hz,2H),3.75(t,J＝9.7Hz,1H),3.53(t,J＝7.6Hz,2H),3.08(dd,J＝7.6,6.0Hz,2H),2.84–2.74(m,3H),2.62(d,J＝7.4Hz,2H),2.59–2.52(m,1H),2.22–2.07(m,2H),1.86(t,J＝18.5Hz,3H),1.78–1.64(m,3H).
步骤2：2-(1-(2-(4-((2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-3-基)氧基)苯氧基)乙基)氮杂环丁-3-基)乙腈的制备
Figure BDA0003418925170000332
将上步得到的2-(1-(2-(4-(2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-3-基)氧基)苯氧基)乙基)氮杂丁-3-基)乙腈(105mg，0.162mmol)溶于二氯甲烷(5mL)，随后滴加三氟乙酸(0.24mL，3.23mmol)，室温搅拌反应过夜。旋去三氟乙酸，加水(10mL)稀释，饱和碳酸氢钠调节pH至8-10，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品用制备液相分离(流动相：乙腈/水(1‰三氟乙酸)＝30/70-90/10)，用碳酸氢钠溶液游离后。冻干得白色粉末27mg，收率27.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.53(s,1H),8.39(s,1H),7.58–7.52(m,2H),7.49(dd,J＝9.3,2.8Hz,1H),7.37(td,J＝8.4,2.7Hz,1H),7.25(d,J＝8.9Hz,1H),6.85–6.79(m,2H),6.79–6.73(m,2H),3.81(t,J＝5.5Hz,2H),3.36(t,J＝10.6Hz,2H),2.90(t,J＝6.7Hz,2H),2.73(d,J＝6.8Hz,2H),2.69–2.58(m,3H),1.95(t,J＝19.0Hz,3H).MS(ESI-LR)m/z:563.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H26F3N4O2S,563.1723；found 563.1722.
实施例9：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(2-氟-4-(2-(3-(氟甲基)氮杂环 丁烷-1-基)乙氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000341
制备方法类似于实施例7的制备方法，不同的是将步骤1中的原料4-(2-溴乙氧基)苯酚替换为4-(2-溴乙氧基)-2-氟苯酚，制得标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.54(s,1H),8.39(s,1H),7.59(dd,J＝8.9,1.0Hz,1H),7.53–7.44(m,2H),7.39–7.32(m,2H),6.87(dd,J＝12.9,2.9Hz,1H),6.76(t,J＝9.4Hz,1H),6.50(ddd,J＝9.1,3.0,1.4Hz,1H),4.49(dd,J＝47.5,6.1Hz,2H),3.84(t,J＝5.4Hz,2H),3.35–3.28(m,2H),3.03(t,J＝6.8Hz,2H),2.80–2.65(m,3H),1.93(t,J＝19.0Hz,3H).19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ-73.46,-81.72(q,J＝19.0Hz),-110.71–-111.15(m),-131.11(t,J＝11.4Hz).MS(ESI-LR)m/z:574.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C29H25F5N3O2S,574.1582；found 574.1584.
实施例10：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(2，6-二氟-4-(2-(3-(氟甲基)氮 杂环丁烷-1-基)乙氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000342
制备方法类似于实施例7步骤1-6的制备方法，不同的是将步骤1中的原料4-(2-溴乙氧基)苯酚替换为4-(2-溴乙氧基)-2，6-二氟苯酚，制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.55(s,1H),8.37(s,1H),7.66(s,2H),7.46–7.11(m,3H),6.57(d,J＝11.5Hz,2H),4.50(d,J＝47.6Hz,2H),3.83(s,2H),3.28(s,2H),2.96(s,2H),2.77–2.55(m,3H),1.84(t,J＝18.9Hz,3H).MS(ESI-LR)m/z:592.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd forC29H24F6N3O2S,592.1491；found 592.1488.
实施例11：(E)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(3-(3-(氟甲基)氮杂环 丁烷-1-基)丙-1-烯-1-基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
步骤1：3-(4-溴苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000343
制备方法类似于实施例7步骤1-2的制备方法，不同的是将步骤1中的原料4-(2-溴乙氧基)苯酚替换为4-溴苯酚，制得标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.21(d,J＝0.8Hz,1H),7.64–7.55(m,2H),7.47–7.40(m,2H),7.03–6.96(m,2H),6.64(s,1H),5.79(dd,J＝9.3,2.7Hz,1H),4.04(d,J＝11.4Hz,1H),3.81–3.72(m,1H),2.67–2.53(m,1H),2.23–2.07(m,2H),1.86–1.64(m,3H).
步骤2：(E)-3-(4-((6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-E]吲唑-3-基)氧基)苯基)丙烯酸甲酯的制备
Figure BDA0003418925170000351
将上步得到的3-(4-溴苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(250mg，0.582mmol)，丙烯酸甲酯(0.42mL，4.658mmol)，双三苯基膦二氯化钯(82mg，0.116mmol)，三乙胺(0.48ml，3.492mmol)溶于N’,N’-二甲基甲酰胺(5mL)，氩气保护，微波120℃反应1h。反应结束后，加水(10mL)，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝20/1-5/1)纯化后，浓缩得黄色粉末125mg，收率为49.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.22(d,J＝0.7Hz,1H),7.67(d,J＝16.0Hz,1H),7.60–7.55(m,2H),7.51–7.48(m,2H),7.10–7.07(m,2H),6.76(s,1H),6.35(d,J＝16.0Hz,1H),5.78(dd,J＝9.3,2.8Hz,1H),4.06–4.01(m,1H),3.80(s,3H),3.79–3.73(m,1H),2.63–2.55(m,1H),2.21–2.09(m,2H),1.83–1.73(m,2H),1.69–1.65(m,1H).
步骤3：(E)-3-(4-(2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-3-基)氧基)苯基)丙烯酸甲酯的制备
Figure BDA0003418925170000352
以上步得到的(E)-3-(4-((6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-E]吲唑-3-基)氧基)苯基)丙烯酸甲酯为原料，制备方法类似于实施例3的步骤3至4，制得标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.22(d,J＝0.8Hz,1H),7.59(d,J＝16.0Hz,1H),7.54(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.41–7.31(m,5H),7.05(td,J＝8.1,2.7Hz,1H),6.88–6.82(m,2H),6.28(d,J＝16.0Hz,1H),5.78(dd,J＝9.3,2.6Hz,1H),4.06–3.99(m,1H),3.78(s,3H),3.77–3.70(m,1H),2.65–2.52(m,1H),2.23–2.07(m,2H),1.88(t,J＝18.5Hz,3H),1.80–1.64(m,1H),0.91–0.80(m,2H).
步骤3：(E)-3-(4-((2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-E]吲唑-3-基)氧基)苯基)丙-2-烯-1-醇的制备
Figure BDA0003418925170000353
将上步得到的(E)-3-(4-(2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-3-基)氧基)苯基)丙烯酸甲酯(180mg，0.304mmol)溶于超干二氯甲烷(10mL)，冷至-78℃，随后滴加二异丁基氢化铝(1.06mL，1M in hexane)，滴加完毕，保持该温度反应30分钟，随后缓慢升温至0℃继续反应1h。0℃下，加乙酸乙酯(10mL)稀释，随后加入饱和酒石酸钾钠(20mL)搅拌至澄清，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1-1/1)纯化后，浓缩得黄白色膏状物79mg，收率为46％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.22(d,J＝1.5Hz,1H),7.52(d,J＝9.0Hz,1H),7.41–7.31(m,3H),7.20(dd,J＝7.1,5.2Hz,2H),7.03(td,J＝8.2,2.6Hz,1H),6.82–6.76(m,2H),6.51(d,J＝15.9Hz,1H),6.25–6.16(m,1H),5.77(dd,J＝9.3,2.5Hz,1H),4.27(d,J＝5.8Hz,2H),4.02(d,J＝11.3Hz,1H),3.79–3.71(m,1H),2.58(q,J＝12.2,11.2Hz,1H),2.22–2.07(m,2H),1.95–1.62(m,6H).
步骤4：(E)-3-(4-((2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-E]吲唑-3-基)氧基)苯基)甲磺酸烯丙基酯的制备
Figure BDA0003418925170000361
将上步得到的(E)-3-(4-((2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-E]吲唑-3-基)氧基)苯基)丙-2-烯-1-醇(100mg，0.177mmol)溶于超干二氯甲烷(5mL)，氩气保护，0℃下加入三乙胺(49μL，0.354mmol)和甲磺酰氯(21μL，0.266mmol)，随后室温反应3h。0℃下，加水(10mL)淬灭反应，用二氯甲烷(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品不经纯化，直接下一步。
步骤5：(E)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(3-(3-(氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)丙-1-烯-1-基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000362
以上步得到的(E)-3-(4-((2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-E]吲唑-3-基)氧基)苯基)甲磺酸烯丙基酯为原料，按照实施例7制备方法中步骤5-6所述方法制备。得白色粉末20mg，收率95.4％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.55(s,1H),8.41(s,1H),7.58–7.46(m,3H),7.35(dt,J＝8.5,4.8Hz,1H),7.31–7.27(m,2H),7.23(d,J＝8.9Hz,1H),6.87–6.83(m,2H),6.41(d,J＝15.9Hz,1H),6.00(dt,J＝15.9,6.2Hz,1H),4.49(dd,J＝47.6,6.1Hz,2H),3.26(t,J＝7.3Hz,2H),3.11(d,J＝5.9Hz,2H),2.95(t,J＝6.6Hz,2H),2.71(dt,J＝18.8,6.2Hz,1H),1.96(t,J＝19.0Hz,3H).MS(ESI-LR)m/z:552.0(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H26F4N3O2S,552.1727；found 552.1717.
实施例12：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((2-(3-(氟甲基)氮杂环丁 烷-1-基)乙氧基)甲基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
步骤1：2-((4-((2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-3-基)氧基)苄基)氧基)乙烷-1-醇的制备
Figure BDA0003418925170000371
制备方法类似于实施例3步骤1-4的制备方法，不同的是将步骤1中的原料4-(2-羟乙基)苯酚替换为4-((2-羟基乙氧基)甲基)苯酚，制得标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.21(s,1H),7.52(d,J＝9.0Hz,1H),7.40–7.30(m,3H),7.16(d,J＝8.3Hz,2H),7.03(td,J＝8.2,2.7Hz,1H),6.82(d,J＝8.1Hz,2H),5.77(dd,J＝9.4,2.7Hz,1H),4.45(s,2H),4.02(d,J＝11.4Hz,1H),3.78–3.71(m,3H),3.56(t,J＝4.5Hz,2H),2.66–2.49(m,1H),2.21–2.07(m,2H),1.88(t,J＝18.5Hz,3H),1.81–1.69(m,3H).
步骤2：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((2-(3-(氟甲基)氮杂环丁烷-1- 基)乙氧基)甲基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000372
制备方法类似于实施例11步骤4-5的制备方法，不同的是将步骤4中的(E)-3-(4-((2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-E]吲唑-3-基)氧基)苯基)丙-2-烯-1-醇替换为2-((4-((2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-3-基)氧基)苄基)氧基)乙烷-1-醇，制得标题化合物。1H NMR(400MHz,Methanol-d4)δ8.26(s,1H),7.46(d,J＝8.9Hz,1H),7.41–7.32(m,3H),7.15(d,J＝8.5Hz,2H),7.08(dt,J＝8.3,4.2Hz,1H),6.83–6.76(m,2H),4.50–4.32(m,4H),3.43–3.37(m,4H),3.08(ddd,J＝9.9,6.9,2.8Hz,2H),2.77(dt,J＝20.4,6.7Hz,1H),2.62(t,J＝5.4Hz,2H),1.88(t,J＝18.6Hz,3H).MS(ESI-LR)m/z:570.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H28F4N3O2S,570.1833；found 570.1842.
实施例13：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((2-(3-(氟甲基)氮杂环丁 烷-1-基)乙基)磺酰基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
步骤1：3-(4-碘苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000373
制备方法类似于实施例7步骤1-2的制备方法，不同的是将4-(2-溴乙氧基)苯酚替换为4-碘苯酚，制得标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.21(s,1H),7.65–7.55(m,4H),6.91–6.85(m,2H),6.66(s,1H),5.78(dd,J＝9.3,2.7Hz,1H),4.04(d,J＝11.4Hz,1H),3.81–3.72(m,1H),2.59(q,J＝11.8,10.8Hz,1H),2.23–2.06(m,2H),1.83–1.66(m,3H).
步骤2：3-(4-((2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)磺酰基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000381
将上步得到的3-(4-碘苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(380mg，0.8mmol)，焦亚硫酸钠(304mg，1.6mmol)，(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(576mg，2.4mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯(60mg，0.08mmol)，1,1'-双(二苯基膦)二茂铁(88mg，0.16mmol)，锡粉(284mg，2.4mmol)，磷酸氢二钾一水合物(364mg，1.6mmol)和四丁基溴化铵(388mg，1.2mmo)溶于二甲基亚砜(10mL)，氩气保护，100℃加热反应10h，，TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)监测反应。反应结束后硅藻土过滤，滤饼用乙酸乙酯(20mL)淋洗，加水，乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，依次用水(30mL×3)和饱和氯化钠溶液(30mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-10/1)纯化后，浓缩得浅黄色油状物360mg，收率为78.6％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.23(d,J＝0.8Hz,1H),7.87–7.82(m,2H),7.57(dd,J＝8.9,0.8Hz,1H),7.48(d,J＝8.9Hz,1H),7.17–7.13(m,2H),6.89(s,1H),5.79(dd,J＝9.3,2.7Hz,1H),4.06–3.97(m,3H),3.76(ddd,J＝11.4,10.0,3.0Hz,1H),3.35(t,J＝6.3Hz,2H),2.64–2.53(m,1H),2.23–2.07(m,2H),1.84–1.67(m,3H),0.80(s,9H),-0.02(s,6H).
步骤3：2-((4-((2-溴-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-3-基)氧基)苯基)磺酰基)乙烷-1-醇的制备
Figure BDA0003418925170000382
将上步得到的3-(4-((2-((叔丁基二甲基硅基)氧基)乙基)磺酰基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(410mg，0.715mmol)溶于乙腈(5mL)中，随后加入N-溴代丁二酰亚胺(140mg，0.787mmol)，氩气保护。避光条件下，室温搅拌过夜，，TLC(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)监测反应。饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(15mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝5/1-1/2)纯化后，浓缩得白色泡沫状固体196mg，收率51％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.19(d,J＝0.8Hz,1H),7.90–7.85(m,2H),7.55(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.36(d,J＝8.9Hz,1H),7.13–7.08(m,2H),5.77(dd,J＝9.2,2.7Hz,1H),4.05–3.97(m,3H),3.80–3.69(m,1H),3.39–3.31(m,2H),2.62–2.50(m,1H),2.23–2.05(m,2H),1.84–1.67(m,3H).
步骤4：2-((4-((2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-3-基)氧基)苯基)磺酰基)乙烷-1-醇的制备
Figure BDA0003418925170000391
制备方法类似于实施例4步骤9的制备方法，不同的是将3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)-2-((1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯替换为2-((4-((2-溴-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-3-基)氧基)苯基)磺酰基)乙烷-1-醇，制得标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.22(d,J＝0.9Hz,1H),7.78–7.75(m,2H),7.58(dd,J＝8.9,0.9Hz,1H),7.36–7.30(m,3H),7.07(td,J＝8.1,2.7Hz,1H),7.03–6.99(m,2H),5.79(dd,J＝9.2,2.8Hz,1H),4.05–4.00(m,1H),3.99–3.96(m,2H),3.78–3.73(m,1H),3.32–3.29(m,2H),2.72(t,J＝6.5Hz,1H),2.61–2.55(m,1H),2.21–2.15(m,1H),2.12(dd,J＝13.7,3.6Hz,1H),1.90(t,J＝18.4Hz,3H),1.82–1.76(m,2H),1.71–1.66(m,1H).
步骤5：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((2-(3-(氟甲基)氮杂环丁烷-1-基)乙基)磺酰基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑
Figure BDA0003418925170000392
制备方法类似于实施例11步骤4-5的制备方法，不同的是将步骤4中的(E)-3-(4-((2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-E]吲唑-3-基)氧基)苯基)丙-2-烯-1-醇替换为2-((4-((2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-3-基)氧基)苯基)磺酰基)乙烷-1-醇，制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.57(s,1H),8.43(s,1H),7.80–7.76(m,2H),7.60–7.56(m,2H),7.50(dd,J＝9.8,2.8Hz,1H),7.36(td,J＝8.4,2.6Hz,1H),7.27(d,J＝8.9Hz,1H),7.16–7.12(m,2H),4.36(dd,J＝47.6,6.3Hz,2H),3.25(t,J＝7.0Hz,2H),3.04(t,J＝7.5Hz,2H),2.76–2.71(m,2H),2.58–2.51(m,3H),1.97(t,J＝19.0Hz,3H).MS(ESI-LR)m/z:604.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C29H26F4N3O3S2,604.1346；found 604.1369.
实施例14：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷- 3-基)氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
步骤1：3-(4-(苄氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000393
制备方法类似于实施例7步骤1至步骤2的制备方法，不同的是将4-(2-溴乙氧基)苯酚替换为4-苄氧基苯酚，制得标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(d,J＝0.9Hz,1H),7.76(d,J＝8.9Hz,1H),7.59(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.47–7.32(m,5H),7.14–7.08(m,2H),7.01–6.93(m,2H),6.38(d,J＝0.6Hz,1H),5.79(dd,J＝9.3,2.7Hz,1H),5.06(s,2H),4.08–4.01(m,1H),3.84–3.72(m,1H),2.66–2.52(m,1H),2.22–2.09(m,2H),1.84–1.65(m,3H).
步骤2：4-((6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-3-基)氧基)苯酚的制备
Figure BDA0003418925170000401
制备方法类似于实施例4步骤6的制备方法，不同的是将3-(4-(苄氧基)苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯替换为3-(4-(苄氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑，制得标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(d,J＝0.9Hz,1H),7.76(d,J＝8.9Hz,1H),7.59(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.08–7.02(m,2H),6.85–6.78(m,2H),6.35(s,1H),5.80(dd,J＝9.4,2.6Hz,1H),5.12(s,1H),4.06(dd,J＝11.6,3.0Hz,1H),3.83–3.73(m,1H),2.61(tdd,J＝13.4,10.0,4.0Hz,1H),2.23–2.06(m,2H),1.84–1.65(m,3H).
步骤3：2-溴-3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000402
制备方法类似于实施例4步骤7至步骤8的制备方法，不同的是将3-(4-羟基苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯替换为4-((6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-3-基)氧基)苯酚，制得标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.16(d,J＝0.8Hz,1H),7.50(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.40(d,J＝9.0Hz,1H),6.91–6.85(m,2H),6.68–6.63(m,2H),5.75(dd,J＝9.3,2.7Hz,1H),4.80(tt,J＝6.4,4.1Hz,1H),4.30–4.21(m,2H),4.04–3.91(m,3H),3.78–3.68(m,1H),2.62–2.50(m,1H),2.20–2.06(m,2H),1.85–1.64(m,3H),1.44(s,9H).
步骤4：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000403
将上步得到的2-溴-3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(4.2g，7mmol)，2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(2.6g，9.1mmol)，[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯二氯甲烷络合物(1135mg，1.4mmol)和碳酸铯(4564mg，14mmol)溶于1,4-二氧六环(60mL)和水(6mL)的混合溶剂中，氩气保护，100℃加热反应18h。反应结束后，加水(100mL)，用乙酸乙酯(60mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(100mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1-3/1)纯化后，浓缩得黄白色泡沫状固体2874mg，收率为60.4％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(d,J＝0.8Hz,1H),7.53(dd,J＝9.0,0.7Hz,1H),7.39(d,J＝9.0Hz,1H),7.36–7.30(m,2H),7.04(td,J＝8.1,2.7Hz,1H),6.78–6.73(m,2H),6.57–6.52(m,2H),5.77(dd,J＝9.3,2.6Hz,1H),4.75(td,J＝6.1,3.0Hz,1H),4.22(dd,J＝9.7,6.4Hz,2H),4.08–3.99(m,1H),3.94(dd,J＝9.8,4.1Hz,2H),3.81–3.70(m,1H),2.58(q,J＝11.9,11.4Hz,1H),2.21–2.08(m,2H),1.87(t,J＝18.5Hz,3H),1.81–1.72(m,2H),1.70–1.66(m,1H),1.43(s,9H).
步骤5：3-(4-(氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑盐酸盐的制备
Figure BDA0003418925170000411
将上步得到的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(2.8g，4.12mmol)溶于异丙醇(50mL)，随后加入氯化氢的异丙醇溶液(41mL，4M)，50℃加热搅拌反应过夜，TLC(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)监测反应完全应结束后，直接将反应液旋干，得粗品不经纯化，直接下一步。MS(ESI-LR)m/z:496.1(M+1)+.
步骤6：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000412
将上步得到的3-(4-(氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯盐酸盐(4mmol)悬浮于乙腈(50mL)中，加入碳酸钾(1382mg，10mmol)，氩气保护，室温搅拌20分钟。随后依次加入三乙胺(1.4mL，10mmol)，1-氟-3-碘丙烷(0.6mL，6mmol)，50℃反应过夜，TLC(二氯甲烷/甲醇＝10/1)监测反应完全并补加1-氟-3-碘丙烷和三乙胺直至反应完全。将反应液过滤除盐，乙酸乙酯(100mL)淋洗滤饼，滤液旋干拌样。经柱层析(乙酸乙酯/甲醇/二乙胺＝100/0.5/1-100/2/1)纯化后，浓缩得白色泡沫状固体1.5g，收率为67.5％。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.52(s,1H),8.39(s,1H),7.57–7.51(m,2H),7.48(dd,J＝9.9,2.8Hz,1H),7.36(td,J＝8.3,2.8Hz,1H),7.27(d,J＝8.9Hz,1H),6.84–6.80(m,2H),6.73–6.64(m,2H),4.65(p,J＝5.6Hz,1H),4.44(dt,J＝47.5,6.1Hz,2H),3.66(td,J＝6.1,1.9Hz,2H),2.92–2.82(m,2H),2.55–2.39(m,2H),1.94(t,J＝19.0Hz,3H),1.64(dp,J＝25.7,6.5Hz,2H).MS(ESI-LR)m/z:556.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C29H26F4N3O2S,556.1676；found 556.1688.
实施例15：(S)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)吡咯烷- 3-基)氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
步骤1：(S)-3-(4-(1-Boc-3-羟基吡咯烷-3-氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000421
制备方法类似于实施例5步骤1的制备方法，不同的是将3-(4-羟基苯氧基)苯并[b]噻吩-6-羧酸甲酯替换为4-((6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑-3-基)氧基)苯酚，制得标题化合物。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.20(s,1H),7.74(d,J＝9.0Hz,1H),7.59(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.10(dd,J＝8.4,5.3Hz,2H),6.91–6.82(m,2H),6.40(s,1H),5.79(dd,J＝9.3,2.7Hz,1H),4.84(s,1H),4.07–4.01(m,1H),3.77(ddd,J＝13.5,8.6,3.0Hz,1H),3.63–3.47(m,4H),2.66–2.54(m,1H),2.23–2.15(m,2H),2.15–2.02(m,2H),1.84–1.74(m,2H),1.71–1.66(m,1H),1.47(s,9H).
步骤2：(S)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)吡咯烷-3-基)氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000422
制备方法类似于实施例15步骤3至步骤6的制备方法，制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.52(s,1H),8.39(s,1H),7.57–7.51(m,2H),7.48(dd,J＝10.0,2.8Hz,1H),7.35(td,J＝8.3,2.7Hz,1H),7.28(d,J＝8.9Hz,1H),6.82(d,J＝8.7Hz,2H),6.75(d,J＝8.6Hz,2H),4.77(d,J＝6.7Hz,1H),4.47(dt,J＝47.4,6.0Hz,2H),2.94–2.54(m,6H),2.21(dq,J＝14.5,7.2Hz,1H),1.94(t,J＝18.9Hz,3H),1.87–1.72(m,3H).MS(ESI-LR)m/z:570.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H28F4N3O2S,570.1833；found570.1836.
实施例16：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷- 3-基)氧基)-2-甲氧基苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000423
制备方法类似于实施例14的制备方法，不同的是将步骤1中的4-苄氧基苯酚替换为4(苄氧基)-2-甲氧基苯酚，制得标题化合物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.63–13.42(m,1H),8.37(s,1H),7.56(d,J＝8.9Hz,1H),7.45(dd,J＝8.8,5.6Hz,2H),7.38–7.26(m,2H),6.59(d,J＝8.8Hz,1H),6.49(d,J＝2.8Hz,1H),6.10(dd,J＝8.8,2.9Hz,1H),4.67(p,J＝5.5Hz,1H),4.44(dt,J＝47.4,6.1Hz,2H),3.71(s,3H),3.66(t,J＝7.0Hz,2H),2.93–2.84(m,2H),2.49(dd,J＝12.6,5.4Hz,2H),1.95(t,J＝19.0Hz,3H),1.65(dp,J＝25.8,6.6Hz,2H).MS(ESI-LR)m/z:586.1(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H28F4N3O3S,586.1782；found586.1786.
实施例17：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(3-氟-4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000431
制备方法类似于实施例14的制备方法，不同的是将步骤1中的4-苄氧基苯酚替换为4-(苄氧基)-3-氟苯酚，制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.54(s,1H),8.40(s,1H),7.60–7.54(m,2H),7.49(dd,J＝9.9,2.8Hz,1H),7.38(td,J＝8.3,2.8Hz,1H),7.28(d,J＝8.9Hz,1H),6.91(dd,J＝12.2,3.0Hz,1H),6.82(t,J＝9.3Hz,1H),6.63(ddd,J＝9.0,3.0,1.4Hz,1H),4.74(p,J＝5.7Hz,1H),4.44(dt,J＝47.4,6.0Hz,2H),3.75(d,J＝7.2Hz,2H),3.08(d,J＝7.5Hz,2H),2.58(d,J＝7.2Hz,2H),1.95(t,J＝19.0Hz,3H),1.67(dp,J＝25.8,6.5Hz,2H).MS(ESI-LR)m/z:574.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd forC29H25F5N3O2S,574.1582；found 574.1585.
实施例18：2-(4-氟-2-(1-氟环丙基)苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3- 基)氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000432
制备方法类似于实施例14的制备方法，不同的是将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换2-(4-氟-2-(1-氟环丙基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.54(s,1H),8.40(s,1H),7.60–7.52(m,2H),7.46(dt,J＝9.5,2.2Hz,1H),7.32(td,J＝8.5,2.8Hz,1H),7.28(d,J＝8.9Hz,1H),6.87–6.83(m,2H),6.77–6.73(m,2H),4.87(p,J＝5.7Hz,1H),4.50(dt,J＝47.1,5.8Hz,2H),4.34–4.27(m,2H),3.85–3.74(m,2H),3.11(t,J＝7.6Hz,2H),1.85(dp,J＝26.4,6.2Hz,2H),1.28(dd,J＝18.3,7.1Hz,2H),1.10–1.05(m,2H).MS(ESI-LR)m/z:550.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H27F3N3O2S,550.1771；found 550.1771.
实施例19：2-(4-氟-2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯基)-3-(4-(1-(3-氟丙基)氮杂 环丁烷-3-基)氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000433
制备方法类似于实施例14的制备方法，不同的是将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换2-(2-(1,1,1-三氟丙烷-2-基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.61–13.50(m,1H),8.42(s,1H),7.61–7.53(m,2H),7.40(dd,J＝10.2,2.7Hz,1H),7.33(d,J＝8.9Hz,1H),7.27(td,J＝8.4,2.7Hz,1H),6.80–6.75(m,2H),6.71–6.65(m,2H),4.64(p,J＝5.6Hz,1H),4.43(dt,J＝47.4,6.0Hz,2H),3.93(p,J＝8.4Hz,1H),3.66(dd,J＝8.2,5.8Hz,2H),2.89(t,J＝6.7Hz,2H),2.48(t,J＝7.0Hz,2H),1.63(dp,J＝25.7,6.5Hz,2H),1.40(d,J＝7.1Hz,3H).MS(ESI-LR)m/z:588.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcdfor C30H227F5N3O2S,588.1739；found 588.1741.
实施例20：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷- 3-基)氨基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
步骤1：3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氨基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑
Figure BDA0003418925170000441
将实施例13中步骤1所得3-(4-碘苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(320mg，0.67mmol)，1-叔丁氧羰基-3-氨基氮杂环丁烷(172mg，1mmol)，甲烷磺酸(2-二环己基膦)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯)(2'-氨基-1,1'-联苯-2-基)钯(33mg，0.036mmol)，碳酸铯(429mg，1.32mmol)溶于1,4-二氧六环(5mL)，氩气保护，微波100℃反应6h，反应结束后向反应液中加入水(15mL)，用乙酸乙酯(15mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1-3/1)纯化后，浓缩得土黄色粉末228mg，收率为65.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.39(s,1H),7.78(d,J＝9.0Hz,1H),7.72(d,J＝8.9Hz,1H),7.05–6.98(m,2H),6.58–6.52(m,3H),6.25(d,J＝6.1Hz,1H),5.94(dd,J＝9.6,2.4Hz,1H),4.24–4.08(m,3H),3.90(d,J＝11.6Hz,1H),3.83–3.72(m,1H),3.67–3.58(m,2H),2.47–2.38(m,1H),2.09–1.96(m,2H),1.85–1.69(m,1H),1.64–1.54(m,2H),1.38(s,9H).
步骤2：3-(4-((1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-基)-N-叔丁氧羰基氨基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000442
将3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氨基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(600mg，1.15mmol)溶于甲醇(15mL)，随后加入二碳酸二叔丁酯(26.5mL，115.3mmol)，65℃加热回流过夜。反应结束，加水(30mL)，用乙酸乙酯(20mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(20mL)洗涤有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1-3/1)纯化后，浓缩得黄色油状物578mg，收率为80.9％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.21(d,J＝0.8Hz,1H),7.65(d,J＝8.9Hz,1H),7.57(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.11–7.04(m,4H),6.66(s,1H),5.79(dd,J＝9.4,2.7Hz,1H),4.82–4.71(m,1H),4.09–4.02(m,3H),3.85–3.72(m,3H),2.59(q,J＝12.5,11.2Hz,1H),2.19–2.06(m,2H),1.84–1.68(m,3H),1.60(s,9H),1.41(s,9H).
步骤3：2-溴-3-(4-((1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-基)-N-叔丁氧羰基氨基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000451
将上步得到的3-(4-((1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-基)-N-叔丁氧羰基氨基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(75mg，0.12mmol)溶于乙腈(5mL)中，随后加入N-溴代丁二酰亚胺(24mg，0.13mmol)，氩气保护。避光条件下，室温搅拌过夜。饱和硫代硫酸钠溶液(10mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(10mL×3)萃取，合并有机相，用饱和氯化钠溶液(10mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，减压蒸馏除去溶剂。粗品经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝10/1-5/1)纯化后，浓缩得无色油状物75mg，收率89.3％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.17(s,1H),7.52(d,J＝9.0Hz,1H),7.41(d,J＝9.0Hz,1H),7.06–6.98(m,2H),6.97–6.89(m,2H),5.76(dd,J＝9.3,2.6Hz,1H),4.75(s,1H),4.04(q,J＝8.9Hz,3H),3.83–3.72(m,3H),2.57(q,J＝9.3,8.5Hz,1H),2.25–2.05(m,2H),1.82–1.68(m,3H),1.41(s,18H).
步骤4：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-基)-N-叔丁氧羰基氨基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000452
将上步得到的2-溴-3-(4-((1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-基)-N-叔丁氧羰基氨基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(158mg，0.226mmol)，2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷(123mg，0.43mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(20mg，0.022mmol)，2-二环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(20mg，0.042mmol)，磷酸钾(137mg，0.65mmol)溶于1,4-二氧六环(5mL)和水(0.5mL)的混合溶剂中，110℃微波反应2h。反应结束后，直接将反应液旋干硅胶拌样，经柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝50/1-10/1)纯化后，浓缩得粉白色泡沫状固体126mg，收率为56.6％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.24(d,J＝0.8Hz,1H),7.57(dd,J＝9.0,0.9Hz,1H),7.44(d,J＝8.9Hz,1H),7.40–7.32(m,2H),7.07(td,J＝8.1,2.7Hz,1H),6.93(d,J＝8.8Hz,2H),6.85–6.81(m,2H),5.81(dd,J＝9.3,2.7Hz,1H),4.75(s,1H),4.07–4.02(m,3H),3.75(s,3H),2.66–2.56(m,1H),2.20–2.09(m,2H),1.90(t,J＝18.5Hz,3H),1.82–1.71(m,3H),1.42(s,18H).
步骤5：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000461
制备方法类似于实施例14中步骤5-6的制备方法，不同的是将步骤5中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-(1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-氧基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑替换为2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-叔丁氧羰基氮杂环丁烷-3-基)-N-叔丁氧羰基氨基)苯氧基)-6-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑，制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.48(s,1H),8.36(s,1H),7.56–7.50(m,2H),7.48(dd,J＝9.9,2.8Hz,1H),7.37(td,J＝8.3,2.8Hz,1H),7.27(d,J＝8.9Hz,1H),6.67(d,J＝8.5Hz,2H),6.36(d,J＝8.7Hz,2H),5.76(d,J＝7.2Hz,1H),4.44(dt,J＝47.4,6.1Hz,2H),3.81(h,J＝6.6Hz,1H),3.58(t,J＝6.8Hz,2H),2.68(t,J＝6.7Hz,2H),2.44(t,J＝7.0Hz,2H),1.93(t,J＝18.9Hz,3H),1.63(dp,J＝25.7,6.5Hz,2H).MS(ESI-LR)m/z:555.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C29H27F4N4OS,555.1836；found555.1846.
实施例21：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷- 3-基)氨基)-6-氟苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000462
制备方法类似于实施例20的制备方法，不同的是将4-碘苯酚替换为2-氟-4-碘苯酚制得标题化合物。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.24(s,1H),7.56(d,J＝8.9Hz,1H),7.53(d,J＝9.0Hz,1H),7.34–7.26(m,2H),7.06(td,J＝8.3,2.8Hz,1H),6.60(t,J＝9.0Hz,1H),6.27(dd,J＝13.1,2.7Hz,1H),6.08(dd,J＝8.9,2.7Hz,1H),4.49(dt,J＝47.3,5.7Hz,2H),4.09(p,J＝6.3Hz,1H),4.02(t,J＝8.0Hz,2H),3.31(t,J＝7.5Hz,2H),2.93(t,J＝7.5Hz,2H),1.90–1.78(m,5H).MS(ESI-LR)m/z:573.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd forC29H26F5N4OS,573.1742；found 573.1759.
实施例22：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷- 3-基)氨基)-6-氟苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000463
制备方法类似于实施例20的制备方法，不同的是将4-碘苯酚替换为2-三氟甲基-4-碘苯酚制得标题化合物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.71–13.45(s,1H),8.40(s,1H),7.58(ddd,J＝12.4,8.7,4.7Hz,2H),7.48(dd,J＝9.8,2.8Hz,1H),7.37(t,J＝8.5Hz,1H),7.18(dd,J＝9.0,5.3Hz,1H),6.79(t,J＝3.9Hz,1H),6.69(dd,J＝8.9,3.1Hz,1H),6.56(dt,J＝7.2,3.3Hz,1H),6.32(t,J＝6.4Hz,1H),4.45(dt,J＝47.4,6.0Hz,2H),3.98(p,J＝6.6Hz,1H),3.75(t,J＝7.2Hz,2H),2.99–2.89(m,2H),2.62(t,J＝7.1Hz,2H),1.94(t,J＝18.9Hz,3H),1.69(dp,J＝26.0,6.7Hz,2H).MS(ESI-LR)m/z:623.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H26F7N4OS,623.171；found 623.172.
实施例23：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷- 3-基)氨基)-6-甲氧基苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000471
制备方法类似于实施例20的制备方法，不同的是将4-碘苯酚替换为2-甲氧基-4-碘苯酚制得标题化合物。1H NMR(600MHz,Methanol-d4)δ8.22(s,1H),7.56(d,J＝8.9Hz,1H),7.48(d,J＝8.9Hz,1H),7.29(dd,J＝9.8,2.7Hz,1H),7.24(dd,J＝8.5,5.7Hz,1H),7.01(td,J＝8.2,2.7Hz,1H),6.48(d,J＝8.6Hz,1H),6.14(d,J＝2.5Hz,1H),5.82(dd,J＝8.7,2.5Hz,1H),4.45(dt,J＝47.3,5.8Hz,2H),3.99(p,J＝6.7Hz,1H),3.78(t,J＝7.4Hz,2H),3.62(s,3H),2.98(t,J＝7.4Hz,2H),2.68(t,J＝7.5Hz,2H),1.85(t,J＝18.7Hz,3H),1.75(dt,J＝25.9,6.8Hz,2H).19F NMR(471MHz,MeOD)δ-84.22,-113.70(q,J＝8.2Hz),-221.38(tt,J＝48.9,26.0Hz).MS(ESI-LR)m/z:585.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd forC30H29F4N4O2S,585.1942；found 585.1935.
实施例24：(S)-2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)吡咯烷- 3-基)氨基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000472
制备方法类似于实施例20的制备方法，不同的是将步骤1中的1-叔丁氧羰基-3-氨基氮杂环丁烷替换为(R)-3-氨基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯制得标题化合物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.52(s,1H),8.37(s,1H),7.54(dt,J＝9.0,4.4Hz,2H),7.48(dd,J＝9.9,2.8Hz,1H),7.37(d,J＝8.5Hz,1H),7.30(dt,J＝8.9,2.5Hz,1H),6.69(d,J＝8.3Hz,2H),6.42(d,J＝8.3Hz,2H),5.52–5.47(m,1H),4.48(dt,J＝47.3,5.9Hz,2H),3.84–3.79(m,1H),3.01–2.92(m,1H),2.85–2.76(m,1H),2.72–2.60(m,3H),2.55–2.51(m,1H),2.16(dq,J＝14.5,7.3Hz,1H),1.93(t,J＝19.0Hz,3H),1.89–1.79(m,2H),1.60(dq,J＝12.8,6.3Hz,1H).MS(ESI-LR)m/z:569.1(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H29F4N4OS,569.1993；found 569.1933.
实施例25：2-(2-(4-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氨基)-苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000481
制备方法类似于实施例20的制备方法，不同的是将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-(2-(4-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.54(s,1H),8.40(s,1H),7.57–7.53(m,2H),7.38–7.33(m,2H),7.28(td,J＝8.4,2.8Hz,1H),6.67–6.63(m,2H),6.37–6.32(m,2H),5.76(d,J＝7.1Hz,1H),4.43(dt,J＝47.4,6.1Hz,2H),3.84–3.76(m,3H),3.59(td,J＝6.3,1.7Hz,2H),2.70(t,J＝6.8Hz,2H),2.45(t,J＝7.0Hz,2H),1.63(dp,J＝25.7,6.5Hz,2H).19F NMR(471MHz,DMSO)δ-63.25(t,J＝11.2Hz),-112.59(q,J＝8.5,8.1Hz),-217.95–-218.33(m).MS(ESI-LR)m/z:573.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C29H25F5N4OS,573.3822；found 573.3833.
实施例26：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4,5-二氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氨基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000482
制备方法类似于实施例20的制备方法，不同的是将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-(2-(1,1-二氟乙基)-4,5-二氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.58(s,1H),8.37(s,1H),7.73(dd,J＝11.6,8.0Hz,1H),7.63(dd,J＝10.8,7.9Hz,1H),7.55(d,J＝8.9Hz,1H),7.29(d,J＝8.9Hz,1H),6.76(d,J＝8.5Hz,2H),6.44(d,J＝8.5Hz,2H),6.25(d,J＝7.0Hz,1H),4.53(dt,J＝47.1,5.7Hz,2H),4.42–4.15(m,3H),3.90–3.78(m,2H),3.29(t,J＝7.6Hz,2H),2.00–1.83(m,5H).19F NMR(471MHz,DMSO)δ-80.60(q,J＝19.1Hz),-136.00(dt,J＝20.7,9.9Hz),-136.34(dt,J＝20.9,9.6Hz),-219.24(tt,J＝48.5,26.5Hz).MS(ESI-LR)m/z:573.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd forC29H26F5N4OS,573.1742；found 573.1742.
实施例27：2-((2-(4-氟-2-(2-氟丙烷-2-基)苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氨基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000483
制备方法类似于实施例20的制备方法，不同的是将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-((2-(4-氟-2-(2-氟丙烷-2-基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.23(s,1H),7.46(d,J＝8.8Hz,1H),7.40(d,J＝9.0Hz,1H),7.30(dd,J＝10.9,2.8Hz,1H),7.21(dd,J＝8.5,5.9Hz,1H),6.88(td,J＝8.1,2.8Hz,1H),6.67–6.62(m,2H),6.44–6.39(m,2H),4.46(dt,J＝47.3,5.8Hz,2H),4.05(p,J＝6.6Hz,1H),3.90(td,J＝7.0,1.8Hz,2H),3.19–3.13(m,2H),2.80(t,J＝7.4Hz,2H),1.85–1.72(m,2H),1.63(d,J＝23.0Hz,6H).19F NMR(471MHz,Methanol-d4)δ-113.91(dt,J＝12.5,6.7Hz),-127.64(h,J＝22.8Hz),-221.46(tt,J＝47.5,26.3Hz).MS(ESI-LR)m/z:551.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H30F3N4OS,551.2087；found 551.2097.
实施例28：2-((2-(4-氟-2-(1,1,1,2-四氟丙烷-2-基)苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙 基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000491
制备方法类似于实施例20的制备方法，不同的是将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-((2-(4-氟-2-(1,1,1,2-四氟丙烷-2-基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.48(s,1H),8.36(s,1H),7.52(dd,J＝8.7,5.8Hz,2H),7.48(d,J＝10.5Hz,1H),7.36(td,J＝8.2,2.7Hz,1H),7.28(d,J＝8.9Hz,1H),6.65(d,J＝8.4Hz,2H),6.36(d,J＝8.6Hz,2H),5.75(d,J＝7.2Hz,1H),4.44(dt,J＝47.4,6.0Hz,2H),3.83(h,J＝6.6Hz,1H),3.60(t,J＝6.8Hz,2H),2.71(t,J＝6.7Hz,2H),2.47(t,J＝7.0Hz,2H),1.88(d,J＝24.2Hz,3H),1.64(dp,J＝25.8,6.5Hz,2H).MS(ESI-LR)m/z:605.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H27F6N4OS,605.1804；found 605.1801.
实施例29：2-((2-(4-氟-2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)苯基)-3-(4-((1-(3- 氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氨基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000492
制备方法类似于实施例20的制备方法，不同的是将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-((2-(4-氟-2-(1,1,1-三氟-2-甲基丙烷-2-基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.52(s,1H),8.37(s,1H),7.60–7.46(m,2H),7.38(d,J＝9.1Hz,1H),7.29–7.13(m,2H),6.69(d,J＝8.3Hz,2H),6.38(d,J＝8.4Hz,2H),5.89(s,1H),4.60–4.34(m,2H),3.88(d,J＝57.5Hz,3H),3.13–2.93(m,2H),2.81–2.60(m,2H),1.72(d,J＝25.3Hz,2H),1.58(s,3H),1.41(s,3H).MS(ESI-LR)m/z:601.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C31H30F5N4OS,601.2055；found 601.205.
实施例30：2-(2-(4-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氨基)-6-氟苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000501
制备方法类似于实施例20的制备方法，不同的是将4-碘苯酚替换为2-氟-4-碘苯酚，将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-(2-(4-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.54(s,1H),8.40(s,1H),7.61(d,J＝8.9Hz,1H),7.50–7.44(m,2H),7.30(dd,J＝9.9,2.7Hz,1H),7.24(td,J＝8.5,2.8Hz,1H),6.59(t,J＝9.2Hz,1H),6.28(dd,J＝13.6,2.7Hz,1H),6.10–6.01(m,2H),4.43(dt,J＝47.4,6.0Hz,2H),3.82(q,J＝6.6Hz,1H),3.73(q,J＝11.1Hz,2H),3.58(t,J＝6.7Hz,2H),2.70(t,J＝6.7Hz,2H),2.45(t,J＝7.0Hz,2H),1.63(dq,J＝25.7,6.5Hz,2H).MS(ESI-LR)m/z:591.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C29H25F6N4OS,591.1648；found 591.1661.
实施例31：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4,5-二氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氨基)-6-氟苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000502
制备方法类似于实施例20的制备方法，不同的是将4-碘苯酚替换为2-氟-4-碘苯酚，将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-(2-(1,1-二氟乙基)-4,5-二氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.55(s,1H),8.38(s,1H),7.70(dd,J＝11.7,8.1Hz,1H),7.59(dd,J＝8.8,1.0Hz,1H),7.52(dd,J＝10.9,7.9Hz,1H),7.43(d,J＝8.9Hz,1H),6.66(t,J＝9.2Hz,1H),6.29(dd,J＝13.7,2.7Hz,1H),6.14(d,J＝7.0Hz,1H),6.10–6.03(m,1H),4.44(dt,J＝47.4,6.1Hz,2H),3.83(h,J＝6.5Hz,1H),3.58(td,J＝6.3,1.7Hz,2H),2.71–2.61(m,2H),2.45(t,J＝7.0Hz,2H),1.89(t,J＝19.0Hz,3H),1.64(dp,J＝25.6,6.6Hz,2H).19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ-80.84(q,J＝19.0Hz),-132.08(t,J＝11.9Hz),-136.10(dt,J＝20.5,9.7Hz),-136.52(dt,J＝21.1,9.7Hz),-218.14(tt,J＝48.4,25.1Hz).MS(ESI-LR)m/z:591.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C29H25F6N4OS,591.1648；found 591.1653.
实施例32：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4,5-二氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氨基)-6-甲氧基苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000511
制备方法类似于实施例20的制备方法，不同的是将4-碘苯酚替换为2-甲氧基-4-碘苯酚，将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-(2-(1,1-二氟乙基)-4,5-二氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ13.52(s,1H),8.34(s,1H),7.64(dd,J＝11.6,8.1Hz,1H),7.56(d,J＝8.8Hz,1H),7.43(d,J＝8.9Hz,1H),7.38(dd,J＝10.8,7.9Hz,1H),6.52(d,J＝8.6Hz,1H),6.13(d,J＝2.6Hz,1H),5.83–5.77(m,2H),4.44(dt,J＝47.4,6.1Hz,2H),3.85(h,J＝6.6Hz,1H),3.63(s,3H),3.59(t,J＝6.7Hz,2H),2.69(t,J＝6.6Hz,2H),2.45(t,J＝6.9Hz,2H),1.89(t,J＝19.0Hz,3H),1.64(dp,J＝25.7,6.5Hz,2H).19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ-80.49(p,J＝26.1,19.3Hz),-136.53(dt,J＝21.2,10.0Hz),-136.72(dt,J＝21.3,9.7Hz),-218.10(tt,J＝48.0,25.3Hz).MS(ESI-LR)m/z:603.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H28F5N4O2S,603.1848；found 603.1851.
实施例33：2-(2-(4-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氨基)-6-甲氧基苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000512
制备方法类似于实施例20的制备方法，不同的是将4-碘苯酚替换为2-甲氧基-4-碘苯酚，将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-(2-(4-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.55(s,1H),8.37(s,1H),7.57(dd,J＝9.0,2.6Hz,1H),7.47–7.39(m,2H),7.27(dd,J＝9.8,2.8Hz,1H),7.22(td,J＝8.4,2.8Hz,1H),6.45(dd,J＝8.7,2.5Hz,1H),6.12(t,J＝2.6Hz,1H),5.88(d,J＝7.3Hz,1H),5.79(dd,J＝8.7,2.6Hz,1H),4.46(dt,J＝47.3,6.0Hz,2H),3.91(q,J＝6.7Hz,1H),3.77–3.70(m,4H),3.68(s,3H),2.94–2.81(m,2H),2.60(t,J＝7.1Hz,2H),1.69(dp,J＝26.0,6.6Hz,2H).MS(ESI-LR)m/z:603.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H28F5N4O2S,603.1848；found603.1861.
实施例34：2-(2-(4-氟-2-(2-氟丙烷-2-基)苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氨基)-6-甲氧基苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000513
制备方法类似于实施例20的制备方法，不同的是将4-碘苯酚替换为2-甲氧基-4-碘苯酚，将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-((2-(4-氟-2-(2-氟丙烷-2-基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷得标题化合物。1H NMR(500MHz,Methanol-d4)δ8.21(d,J＝2.4Hz,1H),7.52(dd,J＝8.9,2.4Hz,1H),7.47(dd,J＝9.1,3.4Hz,1H),7.26(dt,J＝11.0,2.8Hz,1H),7.08(dd,J＝8.6,5.5Hz,1H),6.81(tdd,J＝8.1,5.1,2.8Hz,1H),6.46(dd,J＝8.6,2.2Hz,1H),6.17(d,J＝2.5Hz,1H),5.83(dd,J＝8.6,2.9Hz,1H),4.45(dtd,J＝47.2,5.9,2.7Hz,2H),4.03(td,J＝6.7,2.7Hz,1H),3.86(q,J＝7.8,6.1Hz,2H),3.61(s,3H),3.14–3.06(m,2H),2.76(td,J＝7.7,4.0Hz,2H),1.85–1.71(m,2H),1.61(d,J＝23.2,6H).19F NMR(471MHz,Methanol-d4)δ-113.97(dtd,J＝34.3,17.8,8.7Hz),-126.77–-127.41(m),-220.88–-221.38(m).MS(ESI-LR)m/z:581.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C31H32F3N4O2S,581.2193；found581.2193.
实施例35：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4,5-二氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氧基)-6-甲氧基苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000521
制备方法类似于实施例14的制备方法，不同的是将步骤1中的4-苄氧基苯酚替换为2-甲氧基-4-苄氧基苯酚，将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-((2-(1,1-二氟乙基)-4,5-二氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷得标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.51(s,1H),8.36(s,1H),7.69(dd,J＝11.6,8.1Hz,1H),7.57(d,J＝8.9Hz,1H),7.48(dd,J＝10.9,8.0Hz,1H),7.36(d,J＝8.9Hz,1H),6.65(d,J＝8.8Hz,1H),6.49(d,J＝2.8Hz,1H),6.10(dd,J＝8.9,2.8Hz,1H),4.70(p,J＝5.7Hz,1H),4.45(dt,J＝47.4,6.0Hz,2H),3.77–3.65(m,5H),3.02–2.88(m,2H),2.60–2.51(m,2H),1.92(t,J＝19.0Hz,3H),1.67(dp,J＝25.6,6.5Hz,2H).19FNMR(471MHz,DMSO-d6)δ-73.50,-80.63(q,J＝19.4Hz),-135.93–-136.73(m),-218.29(tt,J＝47.9,25.3Hz).MS(ESI-LR)m/z:604.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd forC30H26F5N3O3S,604.379；found 604.3796.
实施例36：2-(2-(4-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氧基)-6-氟苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000522
制备方法类似于实施例14的制备方法，不同的是将步骤1中的4-苄氧基苯酚替换为2-氟-4-苄氧基苯酚，将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-((2-(4-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷得标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.55(s,1H),8.42(s,1H),7.62(d,J＝8.9Hz,1H),7.52–7.42(m,2H),7.32(dd,J＝9.9,2.6Hz,1H),7.26(td,J＝8.5,2.7Hz,1H),6.79–6.71(m,2H),6.39(dd,J＝8.8,2.9Hz,1H),4.68(q,J＝5.7Hz,1H),4.44(dt,J＝47.4,6.0Hz,2H),3.74(q,J＝11.2Hz,2H),3.68–3.58(m,2H),2.87(t,J＝6.6Hz,2H),2.50–2.43(m,2H),1.64(dp,J＝25.4,6.4Hz,2H).19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ-62.85–-63.63(m),-112.12,-130.49,-218.12(tt,J＝49.5,25.6Hz).MS(ESI-LR)m/z:592.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C29H24F6N3O2S,592.1488；found 592.1493.
实施例37：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷- 3-基)氧基)-6-氟苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000531
制备方法类似于实施例14的制备方法，不同的是将步骤1中的4-苄氧基苯酚替换为2-氟-4-苄氧基苯酚，制得标题化合物。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.54(s,1H),8.39(s,1H),7.59(d,J＝8.9Hz,1H),7.51–7.44(m,2H),7.37(d,J＝8.8Hz,1H),7.33(dd,J＝8.4,2.8Hz,1H),6.83–6.72(m,2H),6.43(dd,J＝8.9,3.6Hz,1H),4.71(p,J＝5.7Hz,1H),4.45(dt,J＝47.4,6.0Hz,2H),3.84–3.69(m,2H),3.11–2.92(m,2H),2.63–2.54(m,2H),1.92(t,J＝19.0Hz,3H),1.67(dq,J＝25.6,6.5Hz,2H).19F NMR(471MHz,Methanol-d4)δ-84.73,-112.94(d,J＝25.5Hz),-131.64(q,J＝17.0,11.1Hz),-221.40(tq,J＝48.8,27.7,25.4Hz).MS(ESI-LR)m/z:574.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C29H25F5N3O2S,574.1582；found574.1592.
实施例38：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4,5-二氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氧基)-6-氟苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000532
制备方法类似于实施例14的制备方法，不同的是将步骤1中的4-苄氧基苯酚替换为2-氟-4-苄氧基苯酚，将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-(2-(1,1-二氟乙基)-4,5-二氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.55(s,1H),8.41(s,1H),7.72(dd,J＝11.6,7.9Hz,1H),7.63–7.54(m,2H),7.41(d,J＝8.8Hz,1H),6.87–6.76(m,2H),6.44(d,J＝9.1Hz,1H),4.70(p,J＝5.5Hz,1H),4.44(dt,J＝47.4,6.1Hz,2H),3.66(t,J＝6.9Hz,2H),2.87(t,J＝6.5Hz,2H),2.49–2.46(m,2H),1.91(t,J＝18.9Hz,3H),1.65(dq,J＝25.4,6.6Hz,2H).19F NMR(471MHz,DMSO-d6)δ-80.73,-130.23,-135.91(d,J＝250.1Hz),-217.68–-218.69(m).MS(ESI-LR)m/z:592.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcdfor C29H24F6N3O2S,592.1488；found 592.1494.
实施例39：2-(2-(4-氟-2-(2-氟丙烷-2-基)苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氧基)-6-氟苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000541
制备方法类似于实施例14的制备方法，不同的是将步骤1中的4-苄氧基苯酚替换为2-氟-4-苄氧基苯酚，将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-(2-(1,1-二氟乙基)-4,5-二氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.52(s,1H),8.37(s,1H),7.58(d,J＝8.9Hz,1H),7.39–7.30(m,3H),7.12(td,J＝8.2,2.8Hz,1H),6.81–6.72(m,2H),6.43(dd,J＝9.0,2.9Hz,1H),4.69(p,J＝5.7Hz,1H),4.44(dt,J＝47.4,6.1Hz,2H),3.68(t,J＝7.0Hz,2H),2.92(t,J＝6.7Hz,2H),2.53–2.50(m,2H),1.70–1.57(m,8H).MS(ESI-LR)m/z:570.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H28F4N3O2S,570.1833；found570.1829.
实施例40：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4,5-二氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氧基)-6-氟苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000542
制备方法类似于实施例14的制备方法，不同的是将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-(2-(1,1-二氟乙基)-4,5-二氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.53(s,1H),8.39(s,1H),7.73(dd,J＝11.5,8.0Hz,1H),7.68–7.59(m,1H),7.55(d,J＝8.9Hz,1H),7.29(d,J＝8.9Hz,1H),6.85(d,J＝8.5Hz,2H),6.69(d,J＝8.6Hz,2H),4.66(p,J＝5.8Hz,1H),4.44(dt,J＝47.4,6.1Hz,2H),3.67(t,J＝6.8Hz,2H),2.89(t,J＝6.6Hz,2H),2.50–2.46(m,2H),1.93(t,J＝18.9Hz,3H),1.64(dp,J＝25.9,6.6Hz,2H).MS(ESI-LR)m/z:574.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C29H25F5N3O2S,574.1582；found574.1577.
实施例41：2-(2-(4-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氧基)-6-甲氧基苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000551
制备方法类似于实施例14的制备方法，不同的是将步骤1中的4-苄氧基苯酚替换为2-甲氧基-4-苄氧基苯酚，将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-(2-(4-氟-2-(2,2,2-三氟乙基)苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.51(s,1H),8.38(s,1H),7.58(d,J＝8.9Hz,1H),7.46–7.40(m,2H),7.27(dd,J＝9.8,2.8Hz,1H),7.23(td,J＝8.5,2.8Hz,1H),6.57(d,J＝8.8Hz,1H),6.43(d,J＝2.8Hz,1H),6.07(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),4.66(p,J＝5.7Hz,1H),4.44(dt,J＝47.4,6.1Hz,2H),3.77–3.69(m,5H),3.68–3.63(m,2H),2.85(t,J＝6.8Hz,2H),2.50–2.46(m,2H),1.65(dp,J＝25.6,6.5Hz,2H).MS(ESI-LR)m/z:604.2(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C30H27F5N3O3S,604.1688；found604.1695.
实施例42：2-(2-(4-氟-2-(2-氟丙烷-2-基)苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环 丁烷-3-基)氧基)-6-甲氧基苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑的制备
Figure BDA0003418925170000552
制备方法类似于实施例14的制备方法，不同的是将步骤1中的4-苄氧基苯酚替换为2-甲氧基-4-苄氧基苯酚，将步骤4中的2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷替换为2-(2-(4-氟-2-(2-氟丙烷-2-基)苯基基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.49(s,1H),8.35(s,1H),7.54(d,J＝8.9Hz,1H),7.36–7.27(m,3H),7.11(td,J＝8.2,2.8Hz,1H),6.58(d,J＝8.8Hz,1H),6.50(d,J＝2.8Hz,1H),6.10(dd,J＝8.9,2.8Hz,1H),4.67(p,J＝5.7Hz,1H),4.44(dt,J＝47.4,6.1Hz,2H),3.71(s,3H),3.70–3.66(m,2H),2.90(t,J＝6.7Hz,2H),2.52–2.49(m,2H),1.70–1.58(m,8H).MS(ESI-LR)m/z:582.3(M+1)+.HRMS(ESI):Anal.Calcd for C31H31F3N3O3S,582.2033；found 582.2033.
实施例43：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷- 3-基)氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑L-酒石酸盐的制备
2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑(55mg，0.1mmol)溶于乙腈(1.5mL)，随后滴加L-酒石酸(15mg，0.1mmol)的水(0.5mL)溶液，室温搅拌30min，随后冻干。将冻干粉末悬浮于甲基叔丁基醚(2mL)，室温搅拌30min，过滤，滤饼35℃真空干燥得白色粉末56mg，收率80％。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.50(s,1H),8.39(s,1H),7.56–7.52(m,2H),7.49(dd,J＝9.9,2.8Hz,1H),7.37(td,J＝8.3,2.8Hz,1H),7.25(d,J＝8.8Hz,1H),6.84–6.80(m,2H),6.71–6.68(m,2H),4.69(q,J＝5.7Hz,1H),4.45(dt,J＝47.4,6.0Hz,2H),4.20(s,2H),3.78(t,J＝7.2Hz,2H),3.09–3.00(m,2H),2.60(t,J＝7.1Hz,2H),1.94(t,J＝19.0Hz,3H),1.67(dq,J＝25.7,6.5Hz,2H).
实施例44：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷- 3-基)氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑甲磺酸盐的制备
制备方法类似于实施例43中的制备方法，不同的是将L-酒石酸的水溶液替换为甲磺酸的乙腈溶液，制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.52(s,1H),9.93(s,1H),8.39(s,1H),7.57–7.53(m,2H),7.50(dd,J＝9.9,2.8Hz,1H),7.38(td,J＝8.3,2.8Hz,1H),7.25(d,J＝8.9Hz,1H),6.89–6.85(m,2H),6.76–6.72(m,2H),4.97–4.85(m,1H),4.56–4.32(m,4H),4.07–3.88(m,2H),3.27–3.16(m,2H),2.31(s,3H),1.95(t,J＝19.0Hz,3H),1.86(dt,J＝26.7,7.0Hz,2H).
实施例45：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷- 3-基)氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑马来酸盐的制备
制备方法类似于实施例43中的制备方法，不同的是将L-酒石酸替换为马来酸，制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.51(s,1H),8.40(s,1H),7.57–7.52(m,2H),7.50(dd,J＝9.9,2.8Hz,1H),7.38(td,J＝8.3,2.8Hz,1H),7.25(d,J＝8.9Hz,1H),6.87(d,J＝8.6Hz,2H),6.74(d,J＝8.6Hz,2H),6.03(s,2H),4.96–4.84(m,1H),4.57–4.36(m,4H),4.14–3.88(m,2H),3.28–3.17(m,2H),2.00–1.80(m,5H).
实施例46：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷- 3-基)氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑柠檬盐的制备
制备方法类似于实施例43中的制备方法，不同的是将L-酒石酸替换为柠檬酸，制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.50(s,1H),8.39(s,1H),7.57–7.52(m,2H),7.49(dd,J＝9.9,2.8Hz,1H),7.37(td,J＝8.3,2.8Hz,1H),7.25(d,J＝8.9Hz,1H),6.86–6.81(m,2H),6.73–6.68(m,2H),4.76(p,J＝5.7Hz,1H),4.46(dt,J＝47.2,5.9Hz,2H),4.05–3.91(m,2H),3.40–3.30(m,2H),2.85–2.73(m,2H),2.66(d,J＝15.3Hz,2H),2.58(d,J＝15.2Hz,2H),1.94(t,J＝19.0Hz,3H),1.73(dp,J＝26.2,6.6Hz,2H).
实施例47：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷- 3-基)氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑盐酸盐的制备
制备方法类似于实施例43中的制备方法，不同的是将L-酒石酸替换为盐酸，制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ13.55(s,1H),10.90(d,J＝66.9Hz,1H),8.39(s,1H),7.59–7.47(m,3H),7.39(d,J＝8.5Hz,1H),7.28–7.22(m,1H),6.87(d,J＝7.8Hz,2H),6.76(d,J＝10.7Hz,2H),4.95(d,J＝71.9Hz,1H),4.66–4.33(m,4H),4.10(d,J＝51.6Hz,2H),3.32–3.23(m,2H),2.04–1.84(m,5H).
实施例48：2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-3-(4-((1-(3-氟丙基)氮杂环丁烷- 3-基)氧基)苯氧基)-6H-噻吩并[2,3-e]吲唑磷酸盐的制备
制备方法类似于实施例43中的制备方法，不同的是将L-酒石酸替换为磷酸，制得标题化合物。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.39(s,1H),7.56–7.52(m,2H),7.49(dd,J＝9.9,2.8Hz,1H),7.37(td,J＝8.3,2.8Hz,1H),7.25(d,J＝8.9Hz,1H),6.84–6.80(m,2H),6.72–6.67(m,2H),4.69(p,J＝5.6Hz,1H),4.45(dt,J＝47.4,6.0Hz,2H),3.78(t,J＝7.1Hz,2H),3.07–2.98(m,2H),2.63–2.54(m,2H),1.94(t,J＝19.0Hz,3H),1.68(dp,J＝25.8,6.5Hz,2H).
本发明所述的代表性化合物的药理学活性评价
实验一：本发明代表性化合物体外抗乳腺癌MCF-7细胞增殖活性评价
通过CTG法检测化合物对MCF-7细胞增殖的影响并计算化合物的IC50，CellTiter-Glo简称CTG，是通过对ATP进行定量来测定培养物中活细胞数目的一种快速均质检测方法。ATP是活细胞新陈代谢的关键指标，均质的检测使得细胞裂解和产生的发光信号与存在的ATP量成正比，而ATP量直接与培养物中的细胞数量成正比。
MCF-7细胞用DMEM+10％FBS培养。细胞置于37℃孵箱中5％CO2条件下培养。细胞传代、复苏及冻存均按常规方法进行。MCF-7细胞生长至80％左右聚合度，胰蛋白酶消化细胞，以每孔4×103个细胞接种到96孔板中，接种体积为每孔90μL，37℃孵箱中培养过夜。第二天，加入浓度梯度的药物，每孔10μL。化合物最高检测浓度为10μM，4倍稀释，10个浓度。将96孔板置于5％CO2，37℃孵箱中培养6天。96孔培养板中每孔加入50μL的CTG试剂，在振荡器上震荡5min，室温避光放置10min，取60μL转移至384孔Opti-plate。使用多功能酶标仪读取发光(luminescence)信号。信号强度用于表征活细胞数量。各加药组数据以对照组均值为100％进行标化，用GraphPad Prism软件按以下公式进行曲线拟合及IC50(半数抑制浓度)计算：
Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))
表1：本发明代表性化合物体外抗乳腺癌MCF-7细胞增殖活性
化合物 IC50(nM) 化合物 IC50(nM) 化合物 IC50(nM)
LSZ102 4.22 SAR439859 9.07 实施例1 1.92
实施例2 1.54 实施例7 1.06 实施例8 2.38
实施例9 3.25 实施例14 1.01 实施例15 2.56
实施例16 0.93 实施例19 2.23 实施例20 1.13
实施例21 0.75 实施例23 0.58 实施例24 0.61
实施例25 0.82 实施例26 1.12 实施例27 1.02
实施例28 1.74 实施例31 3.09 实施例32 1.67
实施例33 1.7 实施例34 0.66 实施例35 1.15
实施例36 1.44 实施例37 0.77 实施例38 2.83
实施例39 1.44 实施例40 1.57 实施例41 0.55
实施例42 0.48
从表1的实验结果可见，本发明的化合物对MCF-7乳腺癌细胞增殖有很强的抑制活性，且抗增殖活性明显优于临床I期对照药物LSZ102，远远优于临床III期对照药物SAR439859。特别是实施例42，41，23，24化合物抗肿瘤活性比对照LSZ-102和SAR439859分别提高7倍和15倍以上。
实验二：本发明代表性化合物体外抗他莫昔芬耐药乳腺癌细胞MCF-7Tam1增殖活性评价
MCF-7Tam1细胞通过MCF-7细胞长期暴露于他莫昔芬的活性代谢产物4-羟基他莫昔芬，同时伴有长期雌激素剥夺的培养条件而建立的，具有对他莫昔芬和芳香化酶抑制剂的抗性。
MCF-7Tam1细胞传代培养，培养条件为含有青霉素(终浓度为100U/mL)、链霉素(终浓度为100μg/mL)、10μg/mL人胰岛素、1μM 4-羟基他莫昔芬以及10％FBS的DMEM培养基，当细胞融合至90％时，弃去旧培养基，用2ml PBS洗涤细胞2次，弃去PBS后加入2mL 0.25％胰蛋白酶-0.02％EDTA混合消化液，置显微镜下观察，约30s，当细胞变圆后迅速加入2ml完全培养基终止消化，轻轻吹打，收集细胞。800rpm，4℃，离心5min，弃去上清，用完全培养基重悬细胞，分瓶培养，隔天换液。化合物最高检测浓度为10μM，10倍稀释，8个浓度。使用适合进行化学发光检测的96孔板，每孔接种100μl细胞(1×104cells/ml)。按试验分组将各组细胞使用含对应浓度化合物的培养基孵育5天。取出细胞培养板，室温平衡10min。96孔板每孔加入100μl CTG检测试剂，室温孵育10min。酶标仪检测各组RFU值。抑制率计算方式为：抑制率＝(对照组OD值-给药组OD值)/对照组OD值。使用GraphPad计算各化合物对MCF-7Tam1细胞的IC50。
表2：本发明代表性化合物体外抗他莫昔芬耐药乳腺癌细胞MCF-7Tam1增殖活性
化合物 IC50(nM)
LSZ102 9.6
SAR439859 17.63
实施例14 3.19
实施例20 5.2
如图1和表2所示，与LSZ102和SAR439859相比，本发明实施例14和实施例20均对MCF-7Tam1有更强的增殖抑制作用，特别是实施例14抗肿瘤活性是LSZ102的3倍，是SAR439859的5倍，具备强效抗MCF-7耐他莫昔芬乳腺癌细胞增殖的能力。
实验三：本发明代表性化合物体外基于细胞水平的ERα降解活性评价
通过基于细胞的高内涵成像方法分析本发明中所述的化合物引起的ER降解的程度。
MCF-7细胞培养基：88％RPMI 1640,10％FBS,1％P/S和1％GlutaMax.
MCF-7播种培养基：88％RPMI 1640,10％FBS,1％P/S和1％GlutaMax.
第一天：用细胞播种培养基稀释细胞悬浮液至8.75×104cells/mL，随后将40μL细胞悬液滴入每孔检测板，置于37℃CO2培养箱中。第三天：化合物稀释4倍连续稀释，转移500μL，10个浓度点。用20μL培养基稀释化合物，用Bravo转10μL至板上，在37℃培养箱中培养24小时。第四天：在测定板中加入50μL 8％多聚甲醛，室温下放置40分钟。每孔用100μL PBS洗涤检测板两次，然后在检测板中加入50μL 0.1％TritonX-100的PBS，室温下放置15分钟。每孔用100μL PBS洗涤检测板5次，然后加入含0.1％Tween 20的封闭缓冲液50μL，室温下放置1小时。弃掉检测板中的溶液，用阻断缓冲液按1:1000的比例稀释一抗，加入25μL检测板，4℃孵育过夜。第五天：每孔用100μL PBS洗涤检测板5次，然后用阻断缓冲液稀释二抗(1:1000)和DRAQ5(1:2000)，加入25μL至检测板，室温孵育1小时。每孔用100μL PBS冲洗检测板5次，在Odyssey红外成像系统上读取检测板。然后将数据标准化，将800通道(ER)的综合强度除以700通道(DNA)的综合强度。背景减法是将所有归一化实验值减去归一化阴性对照井(无一抗体)的平均值。然后通过将每个实验值除以DMSO控制值的平均值(％响应＝(实验值/DMSO控制值)×100)计算归一化/背景减除数据的百分比响应。使用GraphPad Prismv6.02软件(GraphPad,San Diego,CA)生成剂量响应曲线、EC50和百分比ERα剩余值。
表3：本发明代表性化合物体外ERα降解活性
化合物 EC50(nM) 化合物 EC50(nM) 化合物 EC50(nM)
LSZ102 1.01 SAR439859 1.7 实施例1 1.18
实施例7 1.25 实施例8 0.41 实施例9 0.83
实施例14 1.13 实施例15 0.69 实施例16 0.40
实施例20 1.16 实施例21 1.28 实施例23 1.07
实施例24 0.95 实施例27 1.35 实施例34 1.27
实施例37 1.29 实施例41 1.78 实施例42 1.41
从表3的实验结果可见，本发明的化合物对MCF-7细胞内ERα蛋白具有明显的降解作用，且降解活性和临床I期药物LSZ102相当或更优，远优于临床III期对照药物SAR439859，其中实施例8，9，15，16化合物相比SAR439859提高了2-4倍活性。
实验四：MCF-7细胞荧光报告基因实验检测化合物对野生型ERα拮抗活性
ERα报告基因构建原理：HEK293/GAL4/ERα，细胞株利用分子克隆方法将雌激素受体LBD区域(化合物结合区域)和GAL4 DBD区域(DNA结合区域)进行融合蛋白表达。当配体激活ERα时，ERα-GAL4融合蛋白启动下游luciferase基因表达，读板机检测到化学发光信号。ERα配体刺激浓度和化学发光信号呈剂量依赖关系。
将HEK293/GAL4/ERα细胞悬液收集起来，1000转/分钟离心5分钟，去掉上清，用预热的培养基(DMEM(无酚红)，含碳吸附血清10％，即500mL细胞培养基中包含450mL DMEM，50mL碳吸附血清)重悬，计数后用培养基稀释细胞悬液，按照40000细胞/孔接种到96孔细胞培养板中，每孔接种80μL细胞悬液，37℃，5％CO2培养箱，孵育过夜。实验当天，每孔加入10μL化合物工作液到细胞板中，37℃，5％CO2培养箱，继续孵育1小时，再每孔加入10μL含有激动剂的培养基(10nM Estradiol)，Estradiol终浓度为1nM，DMSO终浓度为0.5％。细胞板在37℃，5％CO2培养箱中继续孵育24小时。结束孵育后，去掉细胞上清，细胞板每孔加入50μLBright Glo检测试剂，25℃，孵育2分钟。结束孵育后，使用EnVision进行发光信号检测。
数据根据如下公式计算化合物处理后的抑制率：％抑制率＝100-(RFU化合物–RFU空白对照)/(RFU阴性对照–RFU空白对照)×100％。阴性对照：激动剂处理的细胞；空白对照：无激动剂处理的细胞，然后利用Prism作图计算化合物的IC50值。
表4：本发明代表性化合物对野生型ERα拮抗活性
Figure BDA0003418925170000591
Figure BDA0003418925170000601
a数据来源于Mol.Cancer Ther.2021,20,250-262.
从表4的实验结果可见，本发明的化合物对野生型ERα有很强的拮抗作用，明显优于临床I期药物LSZ102和临床III期药物SAR439859。其中实施例16，23，24化合物对野生型ERα的拮抗活性相比LSZ102提高10倍以上，实施例7，14，20，21，27，37，41，42化合物对野生型ERα的拮抗活性相比LSZ-102提高6倍以上。
综合实验一、二、三、四结果表明本发明所述化合物对ERα具有很强的拮抗/降解双重功能，并且对雌激素依赖的MCF-7细胞和他莫昔芬耐药的MCF-7Tam1细胞增殖均具有显著的抗增殖活性，表现出了极强的抗肿瘤药效，且明显优于临床对照化合物LSZ102和SAR439859。
实验五：本发明代表性化合物体外对ERα突变体Y537S和D538G的拮抗作用
与野生型ERα不同，ERα配体结合域中的Y537S和D538G突变导致在没有雌二醇的情况下自发募集共活化因子，例如过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子和类固醇受体共激活因子，证实这些突变导致ERα的组成型激活。在这种激活的构象中，突变的ERα对雌二醇的亲和力增加，而对拮抗剂的亲和力降低。
SK-BR-3细胞培养基：89％1640不含酚红，10％活性炭处理FBS和1％GlutaMax
第一天：1.将80μL细胞悬液和30000个细胞接种到检测板的每孔中，37℃5％CO2孵育24小时。第二天：制备转染试剂，室温放置15分钟。测定板每孔加入10μL转染试剂，37℃5％CO2孵育24h。第三天：将10μL培养基(100nMβ-雌二醇，10μL培养基)加入检测板，37℃5％CO2孵育24h。第四天：1.从每孔中取出50μL培养基，将50μL荧光素酶检测试剂加入检测板中，室温振荡20分钟，然后在Envision上读数。2.将50μL Stop&Glo试剂加入检测板，室温振荡20分钟，然后在Envision上读数。使用XL-fit软件(供应商：ID Business SolutionsLtd.，软件版本：XL fit 5.0)分析数据，％Effect＝(样品值–空白对照)/(阳性对照-空白对照)*100。
表5：本发明代表性化合物体外对ERα突变体Y537S和D538G的拮抗活性
ER突变体 SAR439859 实施例14 实施例20
Y537S(nM) 57.67 10.25 13.13
D538G(nM) 17.22 16.08 16.55
从图2和表5的实验结果可见，实施例14和实施例20对ERα突变体Y537S和D538G有很强的拮抗作用，其中针对Y537S突变体实施例14和实施例20相比SAR43959具有4-5倍的活性提高，而针对D538G突变体实施例14和实施例20与SAR439859具有相当的拮抗活性。
实验六：本发明代表性化合物体外对ERα突变体(Y537S)降解活性评价
1.蛋白样品的制备
MCF-7(Y537S)细胞按照80万细胞/孔铺到6孔板中，每孔1mL。铺板第二天加入1mL化合物，给药终浓度为1000nM、100nM、10nM、1nM和0.1nM。药物处理4小时，收集细胞，提取总蛋白，进行BCA测定。将提取的蛋白上清与5ⅹ蛋白上样缓冲液充分混合，金属浴：100℃，10min，变性完后冷却至室温再放入-80℃保存。
2.电泳
将制备好的胶固定到电泳槽上，储液池中倒入电泳液。用微量加样器将制备好的蛋白样品和Marker加入上样孔，各样品总蛋白量为50μg。转膜条件：300mA 30min(ERα66kDa和a-Tublin 55kDa)。用含5％脱脂奶粉的TBST(封闭液)浸泡PVDF膜，37℃摇床封闭1.5h。用封闭液稀释相应的一抗，使PVDF膜浸泡于一抗孵育液中，4℃孵育过夜。TBST充分洗涤PVDF膜3次，5min/次。用TBST稀释HRP标记羊抗兔二抗按照1:4000稀释，使PVDF膜浸泡于二抗孵育液中，室温摇床孵育1h。TBST充分洗涤PVDF膜3次，5min/次。将ECL试剂中增强液与稳定的过氧化物酶溶液按1:1比例混匀，滴加工作液于PVDF膜上，显影。
实验结果如图3所示，与LSZ102相比，实施例14能够在更低浓度下(10nM-100nMvs100nM-1000nM)诱导更强的ERα(Y537S)突变蛋白的降解，表明本发明化合物具有治疗内分泌耐药的雌激素受体突变(Y537S)乳腺癌的潜力。
实验七：化合物药代动力学性质评价
小鼠/大鼠按体重随机分组，给药前1天禁食不禁水12～14h，给药后4h给食。每只动物每次通过眼眶取0.1mL血液，EDTAK2抗凝，采集时间点为：给予受试物后0,5,15,30min,1,2,4,6,8,24h。血液样本采集后置于冰上，并于30分钟之内离心分离血浆(离心条件：5000转/分钟，10分钟，4℃)。分析前存放于–80℃。数据采集及控制系统软件为Analyst1.5.1软件(Applied Biosystem)。图谱样品峰积分方式为自动积分；采用样品峰面积和内标峰面积的比值作为指标，和样品的浓度进行回归。回归方式：线性回归，权重系数为1/X2。药代动力学参数用WinNonlin Professional v6.3(Pharsight,USA)用非房室模型分析处理。Cmax为实测的最大血药浓度，血药浓度-时间曲线下面积AUC(0→t)由梯形法计算得到，Tmax为给药后血药浓度达峰时间。实验数据用“均数±标准差”(Mean±SD,n≥3)或“均数”(Mean,n＝2)表示。
表6：本发明部分代表性化合物药代动力学参数
Figure BDA0003418925170000611
a数据来源于J.Med.Chem.2018,61,2837-2864.Dose:1mg/kg iv,3mg/kg p.o.
由表6可知，本发明化合物代谢性质优越，表现出良好的药物暴露和较低的清除率(远低于LSZ102文献报道的28mL/min/kg)，生物利用度达到66.6％，是对照药物LSZ102的5倍以上，预示本发明化合物能够口服给药实现抗肿瘤的目标。
实验八：化合物对小鼠子宫增重的影响评价
试验动物：SPF级雌性不成熟SD大鼠，21天龄，由常州卡文斯实验动物有限公司提供，饲养于SPF级饲养环境中，室内温度控制在23±2℃，自由饮食和摄水。动物总数30只。实验前适应性饲养3天。
实验分组：空白组：每天口服2％吐温-80/0.5％羟甲基纤维素(10mg/kg)，连续3天。空白+17α-乙炔雌二醇组：每天口服17α-乙炔雌二醇(0.1mg/kg)，连续3天。4-羟基他莫昔芬组：每天口服4-羟基他莫昔芬组(60mg/kg)，连续3天。实施例14组：每天口服实施例14(10mg/kg)，连续3天。实施例16组：每天口服实施例16(10mg/kg)，连续3天。实施例20组：每天口服实施例20(10mg/kg)，连续3天。
最后一次给药24h后，二氧化碳法处死大鼠，解剖取子宫，仔细剔除无关组织，用D-Hanks液洗涤2～3次，洗去血液，沥干水分保存，称取重量。
HE实验：1)将固定好的子宫组织切成4μm厚的切片，将切片放在烘箱中1h；2)将干燥的石蜡切片进行常规二甲苯脱蜡，下行梯度乙醇水化，蒸馏水洗；3)加入苏木精染色10min～30min，然后用流水洗去苏木精染液；4)1％盐酸乙醇褪色，见切片变红，颜色较浅即可，在放入自来水流水中使其恢复蓝色。5)伊红染0色1min，流水冲洗；6)切片经梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封片。7)随机选择一个视野使用显微镜(200×)拍照。数据组间统计学差异采用one-way ANOVA和Tukey’s检验，P值小于0.05认为有显著性差异。
表7：本发明代表性化合物对未成熟大鼠子宫重量的影响
组别 空白组 空白+17α-乙炔雌二醇 4-羟基他莫昔芬 实施例14 实施例20
平均体重(g) 53.19 54.3 54.59 50.92 57.89
平均子宫湿重(mg) 30.64 75.50 59.10 16.94 21.37
子宫湿重：体重 0.06％ 0.14％ 0.11％ 0.03％ 0.04％
实验结果如图4和表7所示，与空白对照相比，17α-乙炔雌二醇和4-羟基他莫昔芬(他莫昔芬体内的活性代谢形式)与体重的比值显著分别增加了约2.5倍和2倍，表明对子宫组织的ERα有激动作用。但是本发明实施例均展示出了有效的减小子宫重量的作用，其中实施例14使子宫湿重与体重的比值降低约2倍，表明对ERα有拮抗/反向激动作用。此外，用苏木精和伊红对子宫内膜进行染色，以进行组织学评估。17α-乙炔雌二醇和4-羟基他莫昔芬增加了子宫湿重，上皮细胞呈高柱状表型。这与空白对照和实施例14中上皮的低立方表型形成鲜明对比，证实了化合物是一个完全的拮抗剂，没有发生宫内膜癌的风险。
实验九：化合物对MCF-7小鼠皮下肿瘤模型的生长抑制评价
试验试剂：
胎牛血清(SH30070.03)(FBS,Hyclone,Logan,UT,USA)；青霉素(I9532)(Sigma,St.Louis,MO,USA)；链霉素(85886)(Sigma,St.Louis,MO,USA)；重组人胰岛素(91077C)(Sigma,St.Louis,MO,USA)；EMEM培养基(30-2003)(ATCC,Rockville,MD,USA)；胰蛋白酶(15090046)(Gibco,Grand Island,NY,USA)；HBSS(H6648)、DMSO(D8418)、PEG400(8074851000)、PEG300(8074841000)、PBS(806552)、Solutol HS-15(42966)(Sigma,St.Louis,MO,USA)；Matrigel Matrix(BD Bioscience,USA)；雌激素微丸(0.36mg雌二醇，60天释放)(SE-121)(Innovative Research of America,Florida,USA)；PVDF膜(0.45μm)(Millipore,Schwalbach,德国)；StarSignal Western Protein Marker(10-200kDa)(M227-01)(GenStar,北京,中国)；丽春红、吐温20、丙烯酰胺、十二烷基硫酸钠、PMSF(Solon,OH,USA)；蛋白印迹膜再生液(ZN1923,Biolab,北京,中国)；蛋白裂解液(RIPA)、1.5mol/L Tris HCl(pH6.8)、1.5mol/L Tris HCl(pH8.8)(Beyotime,上海,中国)；ECL发光液(Thermo Fisher Scientific,Pittsburgh,PA,USA)；Anti-ERα抗体(21244-1-AP)购自Proteintech公司(Proteintech,湖北,中国)；Goat Anti-Rabbit IgG H&L(HRP)(ab6721)购自Abcam公司(Abcam,Cambridge,UK)。
细胞的培养条件：
MCF-7细胞传代培养，培养条件为含有青霉素(终浓度为100U/mL)、链霉素(终浓度为100μg/mL)、human recombinant insulin(终浓度为0.01mg/mL)以及10％FBS的EMEM培养基，当细胞融合至90％时，弃去旧培养基，用2ml PBS洗涤细胞2次，弃去PBS后加入2mL0.25％胰蛋白酶-0.02％EDTA混合消化液，置显微镜下观察，约30s，当细胞变圆后迅速加入2ml完全培养基终止消化，轻轻吹打，收集细胞。800rpm，4℃，离心5min，弃去上清，用完全培养基重悬细胞，分瓶培养，隔天换液。
小鼠移植瘤模型构建：
在肿瘤植入前3天，用无菌的套管针将雌激素微丸(0.36mg雌二醇，60天释放)植入小鼠肩胛骨之间的皮下。取对数生长期的MCF-7细胞，使用胰蛋白酶将MCF-7细胞消化，使用50％HBSS和50％Matrigel混合液将MCF-7细胞重悬成107cells/mL细胞悬液。每只小鼠于右侧腋窝乳腺脂肪垫区域皮下注射200μL MCF-7细胞悬液，每3天测量肿瘤体积(宽2×长×π/6)和体重；肿瘤平均体积达到约200mm3时，将小鼠随机分组并灌胃给药。
试验分组：
空白组：10％PEG300+25％of 20％Solutol+65％PBS，小鼠MCF-7移植瘤模型建立且肿瘤平均体积达到约200mm3后，每日灌胃给药，灌胃体积为0.1ml/10g，连续给药21天(N＝8)；
LSZ102(15mg/kg)组：小鼠MCF-7移植瘤模型建立且肿瘤平均体积达到约200mm3后，每日灌胃给药LSZ102，给药剂量为15mg/kg，灌胃体积为0.1ml/10g，连续给药21天(N＝8)；
实施例14(15mg/kg)组：小鼠MCF-7移植瘤模型建立且肿瘤平均体积达到约200mm3后，每日灌胃给药实施例14，给药剂量为15mg/kg，灌胃体积为0.1ml/10g，连续给药21天(N＝8)；
实施例14(5mg/kg)组：小鼠MCF-7移植瘤模型建立且肿瘤平均体积达到约200mm3后，每日灌胃给药实施例14，给药剂量为5mg/kg，灌胃体积为0.1ml/10g，连续给药21天(N＝8)；
造模开始每3天早上固定时间称量各组小鼠体重并测量小鼠肿瘤体积大小(宽2×长×π/6)；化合物的抑瘤疗效用肿瘤生长抑制率TGI(％)来评价。TGI(％)＝[(1-(某处理组给药结束时平均瘤体积-该处理组开始给药时平均瘤体积)/(溶剂对照组给药结束时平均瘤体积-溶剂对照组开始给药时平均瘤体积)]×100％。
表8：本发明代表性化合物皮下移植瘤模型肿瘤体积
Figure BDA0003418925170000641
实验结果如图5和表8所示，和空白组相比，LSZ102(15mg/kg)、实施例14(15mg/kg)、实施例14(5mg/kg)组的小鼠MCF-7肿瘤体积显著下降(p<0.01)，实施例14(15mg/kg)组的肿瘤抑制率最高，对肿瘤的抑制作用最好，体内抗肿瘤活性约为LSZ102的3倍。
以上结果显示本发明的化合物可以通过拮抗/降解雌激素受体来治疗或预防与雌激素有关的多种疾病，例如癌症(乳腺癌、卵巢癌、结肠癌、前列腺癌、子宫内膜癌)，骨质疏松症，神经退行性疾病，心血管疾病，红斑狼疮，子宫内膜异位症及肥胖症等。
尽管以上已经对本发明作了详细描述，但是本领域技术人员理解，在不偏离本发明的精神和范围内的前提下可以对本发明进行各种修改和改变。本发明的权利范围并不限于上文所作的详细描述，而是如在所附权利要求中阐述的那样。

Claims (10)

1.一种通式(I)所示的化合物，或其前药、对映异构体、非对映异构体、外消旋体，或其药学上可接受的盐，
Figure FDA0003418925160000011
式中，R1选自：-COOH、-B(OH)2、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基；
R2选自：H、卤素、氰基、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基；
或者R1、R2与相连的苯环形成
Figure FDA0003418925160000012
p为0、1、2、3或4；
q为0、1、2或3；
各R3、各R4独立地选自：氢、卤素、氰基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基、-SO2NH2、-C(O)NH2；
R5、R6各自独立地选自：氢、卤素、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基，或R5、R6与相连的碳形成C3-C6碳环或3-6元杂环；
R7选自：卤素、C1-C6烷氧基、C1-C6卤代烷基、C1-C6卤代烷氧基；
Z1为-O-、-NH-、-S-、-CH2O-、-CO-、-SO2-、-SO-、-CH＝CH-、-C≡C-、C1-C4亚烷基；
o为0、1、2、3或4；
Z2、Z3各自独立地为-CH-或-N-；
n为0、1、2、3或4；
m为0、1、2、3或4；
R8为卤素、氰基、羟基、羧基或氨基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R1选自：-COOH、-B(OH)2、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基；
R2选自：H、卤素、氰基、C1-C4烷基、C1-C4卤代烷基；
或者R1、R2与相连的苯环形成
Figure FDA0003418925160000013
3.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R5、R6各自独立地选自：氢、卤素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基，或R5、R6与相连的碳形成C3-C5碳环或3-5元杂环；
R7选自：卤素、C1-C4烷氧基、C1-C4卤代烷基、C1-C4卤代烷氧基。
4.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，Z1为-O-、-NH-、-S-、-CH2O-、-CO-、-SO2-、-SO-、-CH＝CH-、-C≡C-、C1-C2亚烷基。
5.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，R1为-COOH、-B(OH)2；R2为H；或者R1、R2与相连的苯环形成
Figure FDA0003418925160000021
p为0、1、2或3；各R3独立地选自：氢、氟、氯、溴、氰基、C1-C2烷基、C1-C2烷氧基、C1-C2卤代烷基、C1-C2卤代烷氧基；
q为0、1或2；各R4独立地选自：氢、氟、氯、溴；
R5、R6各自独立地选自：氢、氟、氯、溴、C1-C3烷基、C1-C2卤代烷基，或R5、R6与相连的碳形成C3-C5碳环；
R7选自：氢、氟、氯、溴、C1-C4烷基、C1-C2卤代烷基；
Z1为-O-、-NH-、-S-、-CH2O-、-CO-、-SO2-、-SO-、-CH＝CH-、-C≡C-、-CH2-、-CH2CH2-；
o为0、1、2或3；
Z2、Z3各自独立地为-CH-或-N-；
n为1、2或3；
m为0、1、2或3；
R8为氟、氯、溴或氰基。
6.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述化合物或其药学上可接受的盐选自下组：
Figure FDA0003418925160000022
Figure FDA0003418925160000031
Figure FDA0003418925160000041
7.如权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，R1为-B(OH)2，R2为氢，所述制备方法包括以下步骤：
Figure FDA0003418925160000042
(i1)A1与有机硼试剂发生选择性Miyaura偶联反应得到A2，其中，所述的有机硼试剂选自：硼酸、联硼酸频那醇酯、频那醇硼烷、联硼酸新戊二醇酯；
(i2)A2氧化开环得到A3；
(i3)A3与A4发生亲核取代反应得到A5所示的式I化合物，
或者R1为-COOH，R2为氢，所述制备方法包括以下步骤：
Figure FDA0003418925160000051
(ii1)B1与B2发生亲核加成消除反应得到B3；
(ii2)B3经过还原溴化得到B4；
(ii3)B4与B5发生Suziki偶联反应得到B6；
(ii4)B6脱除保护基得到B7；
(ii5)B7与B8发生亲核取代反应得到B9；
(ii6)B9经Pinnick氧化得到B10所示的式I化合物，
或者R1、R2与相连的苯环形成
Figure FDA0003418925160000052
时，所述制备方法包括以下步骤：
Figure FDA0003418925160000053
(iii1)中间体int1与D1发生亲核加成消除反应得到D2；
(iii2)D2经过还原得到D3；
(iii3)D3与D4发生偶联反应得到D5；
(iii4)D5经溴化得到D6；
(iii5)D6与D7发生Suzuki偶联得到D8；
(iii6)D8脱除保护基后与D9发生亲核取代反应得到D10所示的式I化合物，
各式中R3、R4、R5、R6、R7、R8、Z1、Z2、Z3、m、n、o、p、q如权利要求1所述；
X，Y分别为离去基团，各自独立地选自：卤素、三氟甲磺酸酯基、甲磺酸酯基、对甲苯磺酸酯基。
8.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含：
权利要求1所述的化合物，或其前药、对映异构体、非对映异构体、外消旋体，或其药学上可接受的盐；和
药学上可接受的载体。
9.如权利要求1所述的化合物，或其前药、对映异构体、非对映异构体、外消旋体，或其药学上可接受的盐或权利要求8所述的药物组合物的用途，其特征在于，用于制备治疗和/或预防与雌激素受体相关的疾病的药物。
10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述与雌激素受体相关的疾病选自：癌症，骨质疏松症，神经退行性疾病，心血管疾病，红斑狼疮，子宫内膜异位症及肥胖症。
CN202111555326.7A 2021-12-17 2021-12-17 苯并噻吩类衍生物、及其制备方法和用途 Pending CN116265458A (zh)

Priority Applications (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111555326.7A CN116265458A (zh) 2021-12-17 2021-12-17 苯并噻吩类衍生物、及其制备方法和用途
PCT/CN2022/134097 WO2023109461A1 (zh) 2021-12-17 2022-11-24 苯并噻吩类衍生物、及其制备方法和用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202111555326.7A CN116265458A (zh) 2021-12-17 2021-12-17 苯并噻吩类衍生物、及其制备方法和用途

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116265458A true CN116265458A (zh) 2023-06-20

Family

ID=86743867

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202111555326.7A Pending CN116265458A (zh) 2021-12-17 2021-12-17 苯并噻吩类衍生物、及其制备方法和用途

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN116265458A (zh)
WO (1) WO2023109461A1 (zh)

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RS57106B1 (sr) * 2013-02-19 2018-06-29 Novartis Ag Derivati benzotiofena i njihove kompozicije kao selektivni degraderi estrogenskog receptora
WO2016097071A1 (en) * 2014-12-18 2016-06-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Estrogen receptor modulators and uses thereof
AU2019321677A1 (en) * 2018-08-16 2021-03-11 G1 Therapeutics, Inc. Benzothiophene estrogen receptor modulators to treat medical disorders

Also Published As

Publication number Publication date
WO2023109461A1 (zh) 2023-06-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11433064B2 (en) Methods of using c-Met modulators
US9714221B1 (en) Substituted 6,7-dihydro-5H-benzo[7]annulene compounds, processes for their preparation and therapeutic uses thereof
KR101882328B1 (ko) 거세-저항성 전립선 암 및 골형성성 뼈전이의 치료용 met 및 vegf 이중 억제제들
US9861624B2 (en) Method of treating cancer
US9090583B2 (en) Benzopyrone estrogen receptor regulator
JP2013540759A (ja) 去勢抵抗性前立腺癌および造骨性転移の治療のためのｍｅｔおよびｖｅｇｆの二元阻害薬
JP2011518174A (ja) エストロゲン受容体に関連する疾患を処置するための化合物及び方法
WO2019223732A1 (zh) 作为钾通道调节剂的对二氨基苯衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
JP2022515890A (ja) エストロゲン受容体タンパク質分解薬
CN112243437B (zh) 含丙烯酰基的核转运调节剂及其用途
CN116265458A (zh) 苯并噻吩类衍生物、及其制备方法和用途
WO2022161166A1 (zh) 靶向嵌合化合物、含其的药物组合物及其制备方法和用途
WO2019129114A1 (zh) 吲哚胺2,3-双加氧酶抑制剂以及它们在医学上的应用
RU2496769C2 (ru) Производные бензоциклогептана и бензоксепина
CN115677662A (zh) 吲唑类化合物、其制备方法及其在医药上的应用
WO2020098516A1 (zh) 4-(苯并噻唑-2-基)芳胺类化合物治疗胃癌的用途
WO2022174796A1 (zh) 作为Wee-1抑制剂的嘧啶化合物
CN117924262A (zh) 二氢苯并噻喃类衍生物及其制备方法和用途
WO2022237904A1 (zh) 一种含萘环的化合物、含其的药物组合物及其应用
WO2023198905A1 (en) Novel substituted fluorinated vinyl-n-propyl-pyrrolidine compounds, processes for their preparation and therapeutic uses thereof
JP2016216446A (ja) ピロリジン−２，５−ジオン誘導体の多形形態、医薬組成物、およびｉｄｏ１阻害薬としての使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication