CN116251160B - 一种具有抑菌作用的药物组合物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了下述重量配比的原料药制备的药物组合物与氯己定、甜茶提取物联合使用在制备治疗或/和预防口腔疾病的药物、口腔清洁护理用品、日用品、局部环境消毒杀菌等抑菌消杀产品中的用途，所述的原料药、氯己定、甜茶提取物的重量配比为：黄芩5‑15份、川芎5‑15份、当归5‑15份、栀子5‑15份、郁金6‑20份、薤白6‑20份、柴胡5‑15份、龙胆草3‑10份、生地黄6‑20份、党参6‑20份、车前子3‑15份、甜茶提取物0.1～15份、氯己定0.04～7.50份。本发明还提供了一种具有抑菌作用的组合物。本发明原料组方，配伍科学，协同增效，中药提取物能显著提高氯己定的抗菌活性，又可消炎修复，具有口腔杀菌、去除口腔异臭、清洁护齿等功能，可用于防治龋齿、口腔护理、口臭防治、牙周病防治、口腔溃疡治疗等，能有效维护口腔健康，临床效果显著，且制备方法简单，质量可控，适用于工业化生产。

Description

一种具有抑菌作用的药物组合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种具有抑菌作用的药物组合物及其制备方法和用途，属药物领域。

背景技术

当细菌、真菌、病毒等致病微生物入侵感染机体时，会引起组织损伤、炎症及各种病理变化，甚至大规模传染病；目前主要使用抗生素、激素等药物治疗，或使用抑菌、消毒产品对皮肤或封闭空间进行消杀来阻断传染病传播，通常这类产品极易引起耐药性、全身不良反应等严重的不良后果。

口臭、龋齿、牙周疾病等常见口腔问题的发生发展与口腔病原菌群密切相关。口臭主要源于口腔微生态平衡被打破，造成厌氧菌比例升高；具核梭杆菌(Fusobacteriumnucleatum)和牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis)等分解食物残渣产生的挥发性硫化物是导致口臭的主要气体。龋病是以变形链球菌、乳酸杆菌等细菌为始动因子的一种感染性疾病，细菌发酵膳食中碳水化合物产生酸性副产物对局部硬组织产生慢性破坏，菌群失衡引起釉质脱矿等，龋病接续发展；菌斑牙龈炎以牙龈卟啉单胞菌、中间普氏菌、梭形杆菌等菌斑微生物在牙齿颈部及牙龈沟内堆积明显增高，菌斑微生物及其产物作用于牙龈导致的牙龈炎症反应。目前，多采用氟化物预防龋病，采用头孢类、硝基咪唑类、红霉素、四环素等抗生素治疗该类口腔问题。但长期使用会产生耐药菌，导致口腔及肠道菌群失调等不良后果。

研究发现某些植物提取物能显著提高化学抗菌剂对细菌、真菌、病毒的抑制、杀灭作用，能降低抗菌剂的起效浓度；植物提取物与抗菌剂相互配伍可协同增效，起到消炎修复的作用，相同疗效下可减少化学药品的用量，增加安全性，降低细胞毒性及耐药性的发生。但是并不是所有的植物提取物都可以与抗菌剂复配，复配后是否有协同作用，也是无法预料的。

申请号201410458323.5，发明名称：一种治疗口腔粘膜病变的中药制剂及制备方法和用途，本发明公开了一种治疗口腔粘膜病变的中药制剂，该中药制剂是由以下重量份数比的原料组成：黄芩10-100份、川芎8-80份、当归8-80份、栀子8-80份、生地黄5-60份、车前子5-60份、郁金5-60份、薤白5-60份、柴胡3-30份、龙胆草3-30份、党参3-30份。本发明还进一步公开了该中药制剂的制备方法及用途。通过实验证明本发明中药制剂对口腔粘膜病变口腔扁平苔藓和口腔溃疡患者均具有较好的临床治疗作用。该专利的原料是纯中药，用于口腔粘膜性疾病(属于中医口疮范畴)，且是以口服给药，使用领域局限。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供了一种具有抑菌作用的药物组合物及其制备方法和用途。

下述重量配比的原料药制备的药物组合物与氯己定、甜茶提取物联合使用在制备治疗或/预防口腔疾病的药物、口腔清洁护理用品、局部环境消毒杀菌的抑菌消杀产品中的用途，所述的原料药、氯己定、甜茶提取物的重量配比为：

黄芩5-15份、川芎5-15份、当归5-15份、栀子5-15份、郁金6-20份、薤白6-20份、柴胡5-15份、龙胆草3-10份、生地黄6-20份、党参6-20份、车前子3-15份、甜茶提取物0.1～15份、氯己定0.04～7.50份。

进一步优选地，所述的氯己定是醋酸氯己定，与原料药、甜茶提取物的重量配比为：黄芩9份、川芎9份、当归9份、栀子9份、郁金10份、薤白10份、柴胡9份、龙胆草6份、生地黄12份、党参12份、车前子10份、甜茶提取物2.0份、醋酸氯己定0.3份。

其中，所述的药物组合物与氯己定、甜茶提取物联合，或/加上可接受的辅料制备而成的制剂。所述的可接受的辅料为芳香性挥发油、香精、甜味剂可矫正气味和味道的辅料；所述的辅料包括薄荷脑、薄荷素油、茉莉花油、柠檬油、甜橙油、桂花精油；橘子香精、香蕉香精、薄荷香精；三氯蔗糖、甜蜜素、甜菊糖、阿司帕坦。

其中，所述的药物是抑制细菌的药物；所述的细菌为大肠埃希杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿脓假单胞菌、白色念珠菌、口腔变形链球菌、具核梭杆菌、牙龈卟啉单胞菌。

其中，所述的药物是治疗或预防牙周病、口腔溃疡、口臭、龋齿的药物。

本发明还提供了一种具有抑菌作用的组合物，它是由下述重量配比的原料制备而成：

黄芩5-15份、川芎5-15份、当归5-15份、栀子5-15份、郁金6-20份、薤白6-20份、柴胡5-15份、龙胆草3-10份、生地黄6-20份、党参6-20份、车前子3-15份、甜茶提取物0.1～15份、氯己定0.04～7.50份。

进一步优选地，它是由下述重量配比的原料药制备而成：

黄芩9份、川芎9份、当归9份、栀子9份、郁金10份、薤白10份、柴胡9份、龙胆草6份、生地黄12份、党参12份、车前子10份、甜茶提取物2.0份、醋酸氯己定0.3份。

其中，所述的制剂是口腔用制剂。所述的口腔用制剂是贴片、消毒液、漱口水。

本发明还提供了所述的具有抑菌作用的组合物的制备方法，包括如下步骤：

a、取各重量配比的原料；

b、加水浸泡中药后煎煮，滤过，得药液和药渣；

c、将b步骤制备的药渣加4-8倍30％-100％乙醇(V/V)，回流提取1-3次，每次1～4小时，滤过，得醇提液；

d、醇提液加入配制量0.005％～0.5％的氯己定，减压浓缩挥去乙醇，加水稀释；取甜茶提取物0.1～15份，加至上述药液中，混匀，加入为配制量0.05％～0.5％的吐温-80，混匀，调pH值至5.8～10.0，加水稀释至800～6000份，离心，取上清液，灭菌，灌封，即得。

其中，步骤c所述的药渣加4倍95％乙醇(V/V)，回流提取2次，每次1小时，滤过，得醇提液；步骤d所述的醇提液加入0.3份醋酸氯己定，减压浓缩挥去乙醇。加水稀释至1100～1300份，取甜茶提取物2.0份，加至上述药液中加入3份吐温-80，混匀，调pH值至6.5～7.0，加水稀释至1500份。

本发明提供的一种抗菌杀毒消炎中药制剂的制备方法及其应用，该制剂可用于口腔黏膜消毒、牙周病防治、龋齿防治、口腔日常护理、口腔清洁及局部环境消毒杀菌等。

本发明原料组方中，黄芩中含有的黄芩苷、汉黄芩苷和汉黄芩素等黄酮类化合物具有抗菌、抗病毒、抗炎、抗过敏等多种药理作用；桅子中含有的桅子苷具有抗菌、抗病毒、抗炎的作用；川芎含有的挥发油、生物碱、多糖等具有镇痛、抗炎、抗食源性致病菌等药理作用；当归含有的含挥发油、多糖类、黄酮类等具有抗炎、促进造血功能、增强免疫等作用；龙胆草中的生物碱、糖苷等具有抗菌、抗炎等药理作用；郁金含有的挥发油、姜黄素类、生物碱等具有抗炎、镇痛、抗病毒等作用。薤白含有挥发油、黄酮、苯丙素等多类活性成分，薤白挥发油对酿酒酵母菌、青霉菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌4种常见的菌种都有明显的抑制作用；柴胡含有的皂苷、多糖、黄酮等成分具有抗炎、保护内脏等药理作用。地黄中的生地黄色素能抑制枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌活性，其中对枯草芽孢杆菌的抑制作用最强。党参含有生物碱、炔类、萜类、黄酮类、糖类等成分，具有抗菌、抗病毒等药理作用，党参乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、枯草芽胞菌、炭疽芽胞杆菌、大肠埃希氏菌、伤寒沙门氏菌等常见细菌有显著的抑制作用；车前子含有的多糖类、苯乙醇苷类、环烯醚萜类等能消炎、调血脂、抗氧化、调节免疫等；甜茶提取物含有甜茶苷、茶多酚等多种成分，是一种天然防龋甜味剂，具有抗炎、抗氧化、抑菌的作用，特别是能抑制变形链球菌的粘附作用，含有的茶多酚与多种成分协同，增强抑菌，抗氧化作用。氯己定具有广谱抑菌、杀菌作用，能快速吸附在细胞表面，破坏细胞膜，使细胞质成分渗漏，抑制细菌脱氢酶活性，对革兰阳性和阴性菌均具有较强的杀灭作用。

本发明原料组方，配伍科学，协同增效，中药提取物能显著提高氯己定的抗菌活性，又可消炎修复，具有口腔杀菌、去除口腔异臭、清洁护齿等功能，具有协同增效作用，可用于防治龋齿、口腔护理、口臭治疗、牙周病治疗等，能有效维护口腔健康，临床效果显著，且制备方法简单，质量可控，适用于工业化生产。

具体实施方式

实施例1：本发明组合物(以下简称：芩芎消毒液)的制备

1.原料：黄芩9g、川芎9g、当归9g、栀子9g、郁金10g、薤白10g、柴胡9g、龙胆草6g、生地黄12g、党参12g、车前子10g(包煎)。

2.提取工艺研究

2.1醇提工艺考察

采用单因素考察，以成分含量为评价指标，分别考察乙醇浓度及用量对提取工艺的影响，确定提取工艺，并进行工艺验证。

乙醇浓度考察

1)以提取液性状、干膏率、栀子苷及黄芩苷含量为评价指标，考察不同醇度溶媒对提取的影响。称取黄芩9g、川芎9g、当归9g、栀子9g、郁金10g、薤白10g、柴胡9g、龙胆草6g、生地黄12g、党参12g、车前子10g(包煎)；煎煮两次，每次加入6倍水，煎煮30min，滤过，第一次煎煮前浸泡30min。平行制备3份药渣。药渣分别加4倍体积浓度为30％、60％、95％乙醇溶液，回流提取1h，测定醇提液干膏率、栀子苷及黄芩苷含量(以一个处方总量计)，结果见表1。

表1乙醇浓度考察结果(n＝3)

试验结果表明，乙醇浓度越高，提取液越澄清，干膏率越低，栀子苷、黄芩苷含量无明显差异，故优选浓度为95％乙醇。

2)乙醇用量考察

以提取液干膏率、栀子苷及黄芩苷含量为评价指标，考察乙醇的用量。称取黄芩9g、川芎9g、当归9g、栀子9g、郁金10g、薤白10g、柴胡9g、龙胆草6g、生地黄12g、党参12g、车前子10g(包煎)；煎煮两次，每次加入6倍水，煎煮30min，滤过，第一次煎煮前浸泡30min。平行制备3份药渣，分别加4倍、6倍、8倍体积量的95％乙醇溶液，回流提取1h，测定醇提取液干膏率、栀子苷及黄芩苷含量(以一个处方总量计)，结果见表2。

表2乙醇用量考察结果(n＝3)

试验结果表明，干膏率随乙醇用量的增加略有增加，栀子苷及黄芩苷的含量随乙醇用量的增加差异较小，乙醇用量越小，后续浓缩工艺的耗时越短，环境污染越小，故优选4倍用量的95％乙醇。

3)提取时间考察

以提取液干膏率、栀子苷及黄芩苷含量为评价指标，考察提取时间。称取黄芩9g、川芎9g、当归9g、栀子9g、郁金10g、薤白10g、柴胡9g、龙胆草6g、生地黄12g、党参12g、车前子10g(包煎)；煎煮两次，每次加入6倍水，煎煮30min，滤过，第一次煎煮前浸泡30min。平行制备3份药渣，加4倍体积量的95％乙醇溶液，分别回流提取0.5h、1.0h、2.0h。测定醇提取液干膏率、栀子苷及黄芩苷含量(以一个处方总量计)，结果见表3。

表3提取时间考察结果(n＝3)

试验结果表明，干膏率随回流提取时间的延长无明显变化，栀子苷、黄芩苷的含量随回流提取时间的延长略有增加，回流提取1.0h与提取2.0h含量差异较小。从能耗等方面考虑优选提取1.0h。

4)提取次数考察

以提取液栀子苷、黄芩苷含量为评价指标，考察提取次数。称取黄芩9g、川芎9g、当归9g、栀子9g、郁金10g、薤白10g、柴胡9g、龙胆草6g、生地黄12g、党参12g、车前子10g(包煎)；煎煮两次，每次加入6倍水，煎煮30min，滤过，第一次煎煮前浸泡30min。平行制备3份药渣，第一次加4倍体积量的95％乙醇溶液，回流提取1.0h。第二次加4倍体积量的95％乙醇溶液，回流提取1.0h。第三次加4倍体积量的95％乙醇溶液，回流提取1.0h。测定醇提取液中栀子苷、黄芩苷含量(以一个处方总量计)，结果见表4。

表4提取次数考察结果(n＝3)

试验结果表明，增加一次回流提取，栀子苷、黄芩苷的含量增加，第二次醇提液含量约为第一次醇提液含量的40％，第三次醇提液含量约为前两次醇提液总含量的8.0％，含量较低，因此前两次提取就可提取较为完全，故选择两次提取。

3浓缩终点考察

醇液对口腔有刺激，酒精过敏特异质患者或司机等应尽量避免使用含有酒精的药物，故该消毒剂制成无醇制剂。醇提液减压浓缩，浓缩至无乙醇味，即为浓缩终点。醇溶液由棕色澄明液体变为黄棕浑浊水溶液。可能是因为栀子苷、黄芩苷、黄芩素等黄酮类成分在水溶液中溶解度低析出。可通过加入吐温-80、司盘等增溶剂增加溶解度，改变溶液性状。

4 甜茶提取物考察

4.1 甜茶溶解性考察

甜茶提取物采用40％乙醇渗滤提取，渗滤液浓缩干燥即得甜茶提取物，提取物多为黄酮类物质，溶解性较差，采用稀释法考察甜茶提取物的溶解度。称取甜茶提取物0.5g，分别加水10ml、20ml、40ml、50ml、100ml观察溶液性状。结果见表5。

表5甜茶提取物溶解度考察结果

试验结果表明，随着水量的增加，甜茶提取物不断溶解，当加水量大于或等于50ml时，溶液澄清，甜茶提取物在水中溶解度不大于1.0g/100ml。

4.2甜茶提取物用量考察

甜茶提取物提取得率约为20％。单个处方甜茶药材的加入量应为5～15g较为合理，提取物的加入量约为1.0～3.0g。配制体积大于300ml时，甜茶提取物溶解完全。以药液性状及口感为考察指标考察甜茶的加入量。取单倍处方量的浓缩液3份，加水稀释至1000ml，分别加入1.0g、2.0g、3.0g甜茶提取物，观察药液性状、鼻闻气味及口尝味道，结果见表6。

表6甜茶提取物用量的考察

药液颜色随甜茶提取物加入量的增多而加深，浑浊程度略有增加；苦味随甜茶提取物加入量的减少，回甜味增加；当加入量为2.0g与3.0g时，药液颜色、气味、味道上无明显差异；综合考虑，确定甜茶提取物的加入量为2.0g。

5氯己定的配制工艺考察

醋酸氯己定微溶于水，溶解于乙醇溶液，抑菌圈实验考察醋酸氯己定加入顺序是否影响抑菌效果。口腔环境偏中性(pH值为6.6～7.1)，为适宜口腔环境，调pH值至中性，中药提取组分在水中溶解性较差，通过加入吐温-80增加溶解度。取单倍处方量乙醇提取液，均分为3份。

5.1氯己定加入工序考察

样品1：醇液加入0.10g醋酸氯己定(到配置量浓度为0.02％)，搅拌1min，浓缩至无醇，加水稀释至400ml，加入甜茶提取物0.67g，加入1.0g吐温-80，混匀，调pH值为6.5～7.0，加水至500ml，搅拌均匀，在3500r/min转速下离心5min，取上清液，煮沸10min。

样品2：醇液浓缩至无醇，加水稀释至400ml，加入甜茶提取物0.67g，加入1.0g吐温-80，混匀，调pH值为6.5～7.0，加入0.10g醋酸氯己定(到配置量浓度为0.02％)，充分搅拌(10min)，加水至500ml，搅拌均匀，在3500r/min转速下离心5min，取上清液，煮沸10min。

样品3：醇液浓缩至无醇，加水稀释至400ml，加入甜茶提取物0.67g，加入1.0g吐温-80，混匀，调pH值为6.5～7.0，加水至500ml，搅拌均匀，在3500r/min转速下离心5min，取上清液，煮沸10min。

以抑菌圈实验考察抑菌效果，5mm直径的滤纸圆片灭菌后，浸泡吸收药液后(不滴药液为度)分别贴于涂布接种了金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的营养琼脂平板上，置培养箱内37℃培养24h后，观察和测量抑菌圈。样品1的抑菌圈最大，明显大于样品2、样品3，样品2的抑菌圈大于样品3。结果见表7。

表7：醋酸氯己定加入顺序对抑菌效果的影响

注：与样品2组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

试验结果表明，样品3药液有一定的抑菌作用，样品1和样品2药液加入醋酸氯己定后抑菌作用增强；当醋酸氯己定加入到乙醇提取液中，再经浓缩配制工序后，其抑菌效果比直接加入到配制工序药液中的效果好。

5.2氯己定加入量考察

取单倍处方量乙醇提取液，均分为3份。分别加入醋酸氯己定0.05g(0.01％)、0.10g(0.02％)、0.25g(0.05％)，搅拌1min，浓缩至无醇，加水稀释至400ml，加入甜茶提取物0.67g，加入1.0g吐温-80，混匀，调pH值为6.5～7.0，加水至500ml，搅拌均匀，在3500r/min转速下离心5min，取上清液，煮沸10min。

5mm直径的滤纸圆片灭菌后，浸泡吸收药液后(不滴药液为度)分别贴于涂布接种了金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的营养琼脂平板上，置培养箱内37℃培养24h后，观察和测量抑菌圈。结果见表8。

表8：醋酸氯己定加入量对抑菌效果的影响

注：与醋酸氯己定0.02％的浓度相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

试验结果表明，抑菌效果随醋酸氯己定加入量的增加而增强，醋酸氯己定加入量为0.02％与0.05％时，抑菌圈直径差异不大，因此确定醋酸氯己定的加入量定为0.02％。

6配制工艺考察

6.1吐温-80用量考察

取单倍处方乙醇提取液(约820ml)，加入醋酸氯己定240mg，浓缩至无醇，加入甜茶提取物2.0g，加水至1200ml，混匀，均分为4份，分别加入0.15g(0.05％)、0.3g(0.10％)、0.6g(0.20％)、1.5g(0.50％)吐温-80(聚山梨酯-80)，混匀，观察溶液性状，测定栀子苷和醋酸氯己定的含量(以一个处方总量计)。结果见表9。

表9吐温-80用量的考察

试验结果表明，吐温-80有增溶作用，加入吐温-80前，氯己定的含量为30.74mg(浓度为0.0256mg/ml)，远小于其单独溶于水(20℃)的含量，进一步说明药液中的某些成分影响醋酸氯己定的溶解性；加入吐温-80后，溶液由黄棕色浑浊液体变为浅黄棕色浑浊液体，栀子苷含量及醋酸氯己定含量随吐温-80加入量的增大，溶解度增加，吐温-80加入量为0.1％～0.5％时药液性状、栀子苷及醋酸氯己定含量无明显差异，吐温-80入口有明显涩味，用量不宜过大，故吐温-80浓度优选0.1～0.2％。吐温-80加入量过少，增溶效果差，故暂定吐温-80浓度为0.2％。

3.3pH值考察

取单倍处方乙醇提取液，醋酸氯己定240mg，浓缩至无醇，加水稀释至1200ml，加入甜茶提取物2.0g，混匀，加入2.4g吐温-80，混匀，溶液为浅黄棕色浑浊液体。

溶液的pH值可影响溶液溶解度和稳定性，可通过调pH值改变溶液性状。以溶液性状、栀子苷及醋酸氯己定的含量为评价指标考察pH值。

分别用10％盐酸和10％氢氧化钠溶液调节药液pH值(药液pH值约为5.5)；滴加10％盐酸，盐酸溶液接触药液时，明显有浅黄色沉淀析出，搅拌混匀后溶液更浑浊，离心过滤仍浑浊，栀子苷含量无明显变化，醋酸氯己定含量由163.23mg下降为151.39mg，略有降低；滴加10％氢氧化钠溶液，氢氧化钠溶液接触药液时，由浅黄棕色浑浊液体变为红棕色澄清液体，搅拌混匀后，有棕色沉淀析出，离心过滤后澄清，栀子苷含量无明显变化，醋酸氯己定含量由163.23mg下降为155.39mg，略有降低；故药液需调碱。

口腔环境偏中性(pH值为6.6～7.1)，为适宜口腔环境，分别用10％氢氧化钠溶液，10％磷酸氢二钠溶液，10％柠檬酸钠溶液调药液pH值至7.0，药液性状随pH调节剂加入量的增加而越澄清，栀子苷含量无明显变化，醋酸氯己定含量略有降低。滴加10％氢氧化钠接触药液时发生明显颜色及性状变化，有棕色沉淀析出，药液有略有刺激气味且有轻微油腻感，离心后滤液为红棕色澄清液体；滴加10％磷酸氢二钠接触药液时发生明显颜色变化，有黄棕色沉淀析出，离心后滤液为红棕色澄清液体，颜色比氢氧化钠调PH的浅。滴加10％柠檬酸钠触药液时未发生明显颜色及性状变化，有浅黄棕色沉淀析出，离心后滤液为红棕色澄清液体，颜色比磷酸氢二钠调节的浅。故优选柠檬酸钠为pH调节剂。用20％柠檬酸钠溶液调药液pH值至7.0，药液未出现因局部碱液浓度过高发生颜色及性状变化，考虑调节剂溶液用量及调碱时间，故用20％柠檬酸钠溶液调pH值。

取单倍处方乙醇提取液，加入醋酸氯己定240mg，浓缩至无醇，加水稀释至1200ml，加入甜茶提取物2.0g，加入2.4g吐温-80，混匀，均分为4份，用20％柠檬酸钠溶液调pH值分别至6.5、7.0、7.5、8.0，测定栀子苷及醋酸氯己定含量(以一个处方总量计)，结果见表10。

表10pH值考察

药液性状随pH调节剂加入量的增加而越澄清，颜色略有加深，含量略有下降的趋势，离心后溶液颜色及澄清度无明显差异，口腔环境偏中性(pH值为6.6～7.1)，故暂定pH值为6.5～7.0。

3.4除杂工艺考察

以溶液性状、栀子苷及醋酸氯己定的含量为评价指标，考察滤纸滤过和离心(4000r/min，5分钟)两种方式除去杂质，结果表明两种方式处理前后栀子苷及醋酸氯己定的含量无明显差异；采用滤纸滤过时，药液浑浊，澄清度差，采用离心法处理药液时，溶液澄清，故选用离心的方式去除杂质。

3.4.1离心转速考察

取单倍处方量乙醇提取液，醋酸氯己定240mg，浓缩至无醇，加水至1200ml，加入甜茶提取物2.0g，加入2.4g吐温-80，混匀，20％柠檬酸钠调pH值为6.5～7.0，均分为3份，采用高速离心机在2000r/min、3000r/min、4000r/min转速下离心5min，以溶液澄清度、栀子苷及醋酸氯己定的含量(以一个处方总量计)为考察指标考察转速。结果见表11.

表11离心转速考察

转速在3000r/min～4000r/min，药液澄清度较好，无明显差异，栀子苷及醋酸氯己定的含量无明显差异。因此暂定离心转速定为3000～4000r/min。

3.4.2离心时间考察

取单倍处方量取单倍处方量乙醇提取液，醋酸氯己定240mg，浓缩至无醇，加水至1200ml，加入甜茶提取物2.0g，加入2.4g吐温-80，混匀，20％柠檬酸钠调pH值为6.5～7.0，均分为3份，在相同的转速(3500r/min)下分别离心3min、5min、10min。以溶液澄清度、栀子苷及醋酸氯己定的含量(以一个处方总量计)为考察指标考察离心时间。结果见表12。

表12离心时间考察

离心5～10min，药液澄清度较好，目测无明显差异，栀子苷及醋酸氯己定的含量无明显差异。大生产批量大，考虑到时间及能耗，暂定离心时间为5min。

3.5配制体积考察

以药液澄清度、颜色等性状为评价指标考察配制体积；取单倍处方量乙醇提取液，加入配制量的0.02％的醋酸氯己定，减压浓缩至无醇，加水稀释至配置体积的80％，加入甜茶提取物2.0g，加入配制量0.2％的吐温-80，混匀，20％柠檬酸钠调pH值为6.5～7.0，加水稀释至配置量800ml、1200ml、1600ml、2000ml，在3500r/min转速下离心5min。结果见表13。

表13配制体积考察

配制量在1200ml～2000ml时药液澄清度较好，颜色较浅，可接受，故配制体积暂定为1500ml。

3.6灭菌工艺考察

采用煮沸灭菌，考察不同的煮沸时间的灭菌效果。取单倍处方量乙醇提取液，加入醋酸氯己定300mg，减压浓缩至无醇，加水稀释至1100ml～1300ml，加入甜茶提取物2.0g，加入3.0g吐温-80，混匀，20％柠檬酸钠调pH值为6.5～7.0，加水稀释至1500ml在3500r/min转速下离心5min，取上清液。均分成5份，其中4份分别煮沸5min、10min、20min、30min，观察煮沸及冷却过程药液性状变化，检测灭菌前后药液微生物限度、pH值、栀子苷及醋酸氯己定的含量(一个处方总量计)。药液在煮沸过程中澄清度降低，冷却后与灭菌前无明显差异，这可能与吐温-80发生“起昙”现象有关，试验结果见表14。

表14灭菌工艺参数考察

试验结果表明，煮沸5～30min，微生物限度均符合要求，微生物数随煮沸时间的延长而减少，药液性状、栀子苷及醋酸氯己定的含量无明显变化，pH值略有降低。为控制风险，每1ml需氧菌总数不得过80cfu，霉菌和酵母菌总数不得过8cfu，不得检出大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿单胞菌，选择煮沸时间为10～30min，考虑生产实际，加热至煮沸的时间较长，故优选煮沸时间为10min。

综上研究结果确定芩芎消毒剂的制备工艺为：

按重量比称取黄芩9份、川芎9份、当归9份、栀子9份、郁金10份、薤白9份、柴胡9份、龙胆草6份、生地黄12份、党参12份、车前子10份。煎煮2次，每次加入6倍水，第一次煎煮前浸泡30min，每次煎煮30min，滤过(另用)。药渣加4倍95％乙醇(V/V)，回流提取2次，每次1小时，滤过，得醇提液。醇提液加入为配制量的0.02％的氯己定，减压浓缩挥去乙醇。加水稀释至1100～1300份，取甜茶提取物2.0份，加至上述药液中加入为配制量的0.2％的吐温-80，混匀，调pH值至6.5～7.0，加水稀释至1500份，离心，取上清液，灭菌，灌封，即得。

以下通过药效试验证明本发明的有益效果。

试验例1本发明药物抑菌实验

1供试药液配制

1.1芩芎消毒剂的配制

称取黄芩9g、川芎9g、当归9g、栀子9g、郁金10g、薤白9g、柴胡9g、龙胆草6g、生地黄12g、党参12g、车前子10g。煎煮2次，每次加入6倍水，第一次煎煮前浸泡30min，每次煎煮30min，滤过(另用)。药渣加4倍95％乙醇(V/V)，回流提取2次，每次1小时，滤过，得醇提液。醇提液加入醋酸氯己定0.3g(配制量浓度为0.2mg/ml)，减压浓缩至无醇。加水稀释至1100～1300ml，取甜茶提取物2.0g加入上述药液中，加入3.0g吐温-80(为配制量的0.2％)，混匀，调pH值至6.5～7.0，加水稀释至1500ml，离心，取上清液，煮沸10min，冷却，灌封，即得。测定醋酸氯己定的含量为0.14mg/ml。

1.2对比药液(醋酸氯己定溶液)的配制

取0.2g醋酸氯己定溶于1000ml水中，煮沸10min，冷却，即得。测定醋酸氯己定的含量为0.19mg/ml。

2常见致病菌的抑菌实验

试验菌种：大肠埃希菌；金黄色葡萄球菌；铜绿脓假单胞菌；白色念珠菌。

试验方法：采用纸片法测定抑菌效果，采用二倍稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)。

2.1供试菌液准备

用接种环分别从大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿脓假单胞菌、白色念珠菌的供试菌斜面培养基上挑取菌落一环，接种到营养肉汤培养基内，震荡均匀后，放入摇床增殖，于37℃，130r/min，培养约12h后，取出，以McFarland标准用细菌浊度液调菌悬液浓度至10⁵～10⁶CFU/ml备用。

2.2供试品溶液的制备

芩芎消毒剂及醋酸氯己定溶液用无菌水等倍稀释2倍、4倍、8倍、16倍、32倍备用。

2.3纸片法抑菌实验

吸取50μl菌液均匀涂布于营养琼脂培养基平板，5mm直径的滤纸圆片灭菌后，浸泡吸收芩芎消毒剂、醋酸氯己定溶液后(不滴药液为度)贴在平板上，每个平板均匀贴3张含药滤纸片及1张空白滤纸片。每组设置3个平行。37℃静置培养24h后分别测量抑菌圈直径，并计算平均值和标准差。

2.4最小抑菌浓度(MIC)的测定

采用二倍稀释法对芩芎消毒剂、醋酸氯己定溶液进行梯度稀释。在各稀释管中加入100μl浓度为10⁵～10⁶CFU/ml的菌悬液，混匀。置培养箱内37℃培养24h后，每管吸取100μl涂布于营养琼脂培养基上，置培养箱内37℃培养20～24h，以平板供试菌无菌落生成的最低浓度，作为该菌的最小抑菌浓度(MIC)。

2.5实验结果与结论

测定芩芎消毒剂及醋酸氯己定溶液的抑菌圈及最小抑菌浓度。芩芎消毒剂和醋酸氯己定溶液对4种供试菌都有抑制作用，对大肠杆菌的抑制作用最强，芩芎消毒剂的抑菌圈明显大于醋酸氯己定溶液的抑菌圈，最小稀释抑菌浓度低于醋酸氯己定溶液。结果见表15。

表15消毒液的抑菌作用及最小抑菌浓度

注：与醋酸氯己定溶液组相比，^*P＜0.05，^**P＜0.01。

芩芎消毒剂中醋酸氯己定的含量明显低于醋酸氯己定溶液，但抑菌效果明显强于醋酸氯己定溶液，表明本发明中药组分与醋酸氯己定联合使用，可以达到显著的抑菌效果，配伍后可协调增效。

3口腔变形链球菌、具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌抑菌实验

3.1菌悬液制备

将口腔变形链球菌、具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌复苏后转种至含5％(V/V)脱纤维羊血的厌氧琼脂平板上，置厌氧环境中(80％N₂，10％H₂，10％CO₂)，35℃培养48h，用生理盐水制备菌悬液，以McFarland标准用细菌浊度液调菌悬液浓度至10⁵～10⁶CFU/ml备用。

3.2微量肉汤法测定芩芎消毒液、醋酸氯己定溶液对口腔变形链球菌、具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌的抑制作用。

取96孔微量板，采用二倍稀释法，用厌氧肉汤培养基将芩芎消毒液、醋酸氯己定溶液稀释成4个浓度(1∶2，1∶4，1∶8，1∶16)，平行测定两次。阳性对照：不加药液，只加菌液和等量厌氧肉汤。阴性对照：不加菌液，只加等量芩芎消毒液和厌氧肉汤或醋酸氯己定溶液和厌氧肉汤。将试验管和对照管置于厌氧环境中，37℃培养48h。

3.3实验结果与结论

阳性对照管因有细菌生长而呈明显浑浊，阴性对照管无细菌生长而保持澄清。试验组中试管外观澄清的最小药物浓度即为该药物的最小抑菌浓度(MIC)。结果见表16。

表16消毒液的抑菌作用及最小抑菌浓度

注：“—”表示无抑菌活性。

实验结果表明，芩芎消毒液对口腔变形链球菌、具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌有抑制作用，醋酸氯己定溶液仅对变形链球菌有抑制作用，芩芎消毒液对口腔变形链球菌、具核梭杆菌和牙龈卟啉单胞菌的MIC分别是稀释8倍、稀释8倍和稀释4倍。醋酸氯己定溶液对变形链球菌的MIC是稀释2倍。

试验例2本发明药物临床疗效

1对牙周炎的治疗效果

1.1选取成都某口腔医院2022年1月至2022年12月符合牙周炎诊断标准的患者120例，男性72例，女性48例，年龄20～55岁，病程4周～2年。按随机平行对照法分为芩芎消毒液组、复方氯己定含漱液组和康复新液组，每组40例。三组患者的一般资料经比较性别、年龄、病程、病情轻重，其差异无统计显著性(P>0.05)，具有可比性。

1.2纳入标准：(1)牙周探针检查时牙龈出血确诊，符合牙周炎相关诊断标准。(2)可见软垢、菌斑等附着于牙颈部；(3)近期未接受药物抗炎等治疗。

1.3排除标准:(1)合并牙髓炎者；(2)有牙齿矫正史者；(3)有全身性疾病者。

1.4治疗方法

各组组患者均早晚刷牙后含漱，15ml/次、3min/次，漱后30min内禁食水，连续治疗5天。

1.5观察指标

以治疗前后牙龈指标(牙龈炎症、龈沟出血指数评分)为观察指标，比较3组的总有效率。

牙龈指数：通过Mazza改良牙龈指数表进行评估，总分0～5分，得分越高表明患者炎症、龈沟出血情况越严重。

牙龈指数评价标准：0分表示无明显炎性反应和出血现象；1分为牙龈颜色炎性改变，探诊不出血；2分为牙龈颜色炎性改变，未见水肿，探诊点状出血；3分为牙龈颜色炎性改变，轻度水肿，探诊发现牙龈缘明显出血扩散；4分为牙龈颜色炎性改变明显，水肿明显，探诊后有出血溢出；5分为为牙龈颜色炎性改变明显，水肿，可见溃疡变化，探诊自动出血。

1.6疗效标准

刷牙出血情况消失，牙龈炎症指数下降为显效；刷牙出血情况基本消失，牙龈炎症指数下降为有效；刷牙出血情况无改善，甚至恶化，牙龈炎症指数无明显变化。

总有效率＝(显效+有效)/总例数×100％。

1.7统计学方法

采用SPSS 17.0版统计学软件分析，数据资料采用均值±标准误表示，组间数据的比较采用t检验或x²检验。

1.8研究结果

与复方氯己定含漱液组和康复新液组比较，芩芎消毒液组的显效人数及总有效率均高于复方氯己定含漱液组和康复新液组。结果见表17。

表17牙周炎患者治疗有效率比较

实验结果表明，芩芎消毒液治疗牙周炎优于复方氯己定含漱液组及康复新液。

2对口腔溃疡的治疗作用。

2.1选取2022年3月至2022年9月成都某医院确诊的口腔溃疡患者60例，男性32例，女性28例，年龄16～60岁。溃疡发生至就诊时间不超过7天，随机分为对照组和治疗组，每组30例。两组性别、年龄、疾病严重程度、病程等一般资料比较无显著性差异(P>0.05)，具有可比性。

2.2纳入标准

符合《口腔黏膜病学》中口腔溃疡的诊断标准：口腔黏膜局限性溃疡，呈圆形或椭圆形，中间凹陷、周边充血、覆盖黄色分泌物，伴白色脓包，局部有灼痛感，可伴发热、头痛、淋巴结肿大；单或多个大小不一、分散溃疡面，直径1～10mm；反复发作，且有自限性。排除合并手足口病、口腔结核等口腔黏膜感染性疾病，或白塞病、创伤性溃疡、放射性口炎等口腔黏膜溃疡类疾病者。48小时内应用过镇痛药、消炎药、抗生素、免疫抑制剂、皮质类固醇的患者。

2.3治疗方法

对照组采用意可贴(醋酸地塞米松粘贴片)贴于患处。一次1片，一日总量不超过3片。治疗组采用芩芎消毒液含漱，15ml/次、3min/次，每天三次，漱后30min内禁食水，连续治疗5天。

2.4观察指标

1、症状改善时间：治疗后观察比较2组溃疡疼痛缓解时间、溃疡愈合时间、食欲改善时间；2、溃疡面积。轻(2分)为直径＜3mm，中(4分)为3mm≤直径≤5mm，重(6分)为直径＞5mm；3、充血程度：轻(2分)为微红，中(4分)为深红，重(6分)为紫红；4、疼痛程度：采用疼痛视觉模拟评分法(VAS)评估溃疡疼痛程度，总分10分，0为无痛，1～3分为轻微，4～6分为中度，7～10分为重度，分数越高疼痛越明显。

2.5疗效标准

显效：3d内口腔溃疡愈合，黏膜充血、疼痛程度消退；有效：5d内溃疡创面面积减少≥2/3，轻度黏膜充血，疼痛减轻；无效：溃疡面局部充血、肿痛、渗出情况无改善甚至加重。总有效率＝(显效+有效)例数/总例数×100％。

2.6研究结果

芩芎消毒液能改善口腔溃疡的症状，治疗组的显效人数及总有效率均高于对照组，对照组总有效率为80.0％，治疗组为83.3％。结果见表18。

表18对口腔溃疡治疗效果

3对口臭的治疗效果实验

3.1选取成都某口腔医院2022年1月至2022年12月就诊的40名口臭患者。其中女14例，男26例；年龄18～60岁。

3.2纳入标准

使用Halimeter口气测量仪测定口气中挥发性硫化物(VSC)的质量浓度(ppb)。受试者只要掌握吹气方法，测定结果可靠。当VSC值＞110ppb时即诊断为口臭，并以150ppb、200ppb、300ppb、500ppb、700ppb为分界点将口臭分为I～VI度。

3.3治疗方法

含漱3次/天，15ml/次、3min/次，疗程1周。

3.4评价标准

比较患者使用消毒液治疗前后VSC情况。评价口臭的治疗效果。

4研究结果

口臭患者治疗后挥发性硫化物的质量浓度显著下降；口臭值在治疗后也出现显著下降趋势。表明患者使用消毒液进行治疗后，口臭明显得到改善，差异具有统计学意义(P<0.01)。结果见表19。

表19治疗前后口腔中VSC含量的变化对比表(n＝40)

注：与治疗前相比，^**P＜0.01。

本发明是多种中药经提取与化学药物配伍制备而成，经实验验证配伍科学，协调增效，抑菌作用明确，不易产生耐药性；该制剂为无醇制剂，pH值偏中性，与口腔环境相适，不易破坏口腔微生物平衡，具有刺激小、不良反应少、适用人群广的优势；可用于口臭、牙周炎、龋齿等口腔疾病的防治及口腔清洁护理。

Claims (5)

1.一种用于治疗或预防牙周病、口腔溃疡、口臭的口腔用制剂，其特征在于：由下述用量的原料制备而成：

黄芩9份、川芎9份、当归9份、栀子9份、郁金10份、薤白10份、柴胡9份、龙胆草6份、生地黄12份、党参12份、车前子10份、甜茶提取物2.0份、醋酸氯己定0.3份。

2.根据权利要求1所述的口腔用制剂，其特征在于：所述的口腔用制剂的剂型为贴片或漱口水。

3.根据权利要求1或2所述的口腔用制剂，其特征在于：还包括药学上可接受的辅料。

4.根据权利要求3所述的口腔用制剂，其特征在于：所述的辅料包括薄荷脑、薄荷素油、茉莉花油、柠檬油、甜橙油、桂花精油、橘子香精、香蕉香精、薄荷香精、三氯蔗糖、甜蜜素、甜菊糖、阿司帕坦中的一种或多种。

5.权利要求1或2所述的口腔用制剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

a、取各重量配比的原料；

b、加水浸泡中药后煎煮，滤过，得药液和药渣；

c、将b步骤制备的药渣加4倍95%乙醇，回流提取2次，每次1小时，滤过，得醇提液；

d、醇提液加入醋酸氯己定0.3份，减压浓缩挥去乙醇，加水稀释至1100～1300份；取甜茶提取物2.0份，加至稀释液中，混匀，加入3.0份吐温-80，混匀，调pH值至6.5~7.0，加水稀释至1500份，离心，取上清液，灭菌，灌封，即得。