CN116249551A - 抗cd5抗体组合物及其用途 - Google Patents

抗cd5抗体组合物及其用途 Download PDF

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Abstract

本文尤其提供了能够结合CD5的抗体(例如，人源化抗体、单克隆抗体)和抗体组合物(例如，嵌合抗原受体、双特异性抗体)。本文提供的抗体和抗体组合物包含新的轻链和重链结构域CDR和框架区，并以高的效率和特异性结合CD5，从而有效地靶向表达CD5的细胞。本文提供的抗体可以形成重组蛋白的一部分，所述重组蛋白在本文中也被称为抗体组合物(例如，嵌合抗原受体或双特异性抗体)，尤其用于治疗癌症应用。

Description

抗CD5抗体组合物及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求2020年8月21日提交的美国临时申请第63/068,780号的优先权，该申请的公开以其整体并且出于所有目的并入本文。
对“序列表”、表格或在光盘上提交的计算机程序列表附录的引用
在文件048440-771001WO_SequenceListing_ST25.txt中编写的序列表，创建于2021年8月19日，12,288字节，机器格式IBM-PC，MS-Windows操作系统，据此出于所有目的通过引用以其整体并入。
就联邦资助的研究和开发中的发明权利的声明
这项发明是在政府的支持下在美国国立卫生研究院授予的第CA122976号资助下完成的。政府在本发明中具有某些权利。
背景技术
CD5已经被证明在肿瘤相关的B和T细胞中激活STAT3，导致免疫抑制。在本领域中需要有效的检查点抑制剂来激活T细胞和B细胞，并在有此需要的患者中引发抗癌免疫应答。本文提供的组合物和方法解决了本领域中的这些和其他需求。
发明内容
在一个方面，提供了一种抗CD5抗体，所述抗CD5抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中所述轻链可变结构域包含：如在SEQ ID NO:1中所示的CDR L1、如在SEQID NO:2中所示的CDR L2和如在SEQ ID NO:3中所示的CDR L3；并且其中所述重链可变结构域包含：如在SEQ ID NO:4中所示的CDR H1、如在SEQ ID NO:5中所示的CDR H2和如在SEQID NO:6中所示的CDR H3。
在一个方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的本文提供的抗体(包含其实施例)和药学上可接受的赋形剂。
在一个方面，提供了一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包含向受试者施用组合有效量的本文提供的抗体(包含其实施例)和PD-1抑制剂，从而在受试者中治疗癌症。
在一个方面，提供了一种重组蛋白，所述重组蛋白包含：(i)抗体区，所述抗体区包含：(a)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含如在SEQ ID NO:1中所示的CDR L1、如在SEQ ID NO:2中所示的CDR L2和如在SEQ ID NO:3中所示的CDR L3；和(b)重链可变结构域，所述重链可变结构域如在SEQ ID NO:4中所示的CDR H1、如在SEQ ID NO:5中所示的CDR H2和如在SEQ ID NO:6中所示的CDR H3；和(ii)跨膜结构域。
在一个方面，提供了一种分离的核酸，所述分离的核酸编码本文提供的重组蛋白，包含其实施例。
在一个方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的本文提供的重组蛋白(包含其实施例)和药学上可接受的赋形剂。
在一个方面，提供了一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包含向受试者施用治疗有效量的本文提供的重组蛋白(包含其实施例)，从而在受试者中治疗癌症。
在一个方面，提供了一种重组蛋白，所述重组蛋白包含：(i)能够结合效应细胞配体的第一抗体区；和(ii)第二抗体区，所述第二抗体区包含：(a)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含如在SEQ ID NO:1中所示的CDR L1、如在SEQ ID NO:2中所示的CDR L2和如在SEQ ID NO:3中所示的CDR L3；和(b)重链可变结构域，所述重链可变结构域如在SEQ IDNO:4中所示的CDR H1、如在SEQ ID NO:5中所示的CDR H2和如在SEQ ID NO:6中所示的CDRH3。
在一个方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的本文提供的重组蛋白(包含其实施例)和药学上可接受的赋形剂。
在一个方面，提供了一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包含向受试者施用治疗有效量的本文提供的重组蛋白(包含其实施例)，从而在受试者中治疗癌症。
附图说明
图1A-1C呈现了说明性数据，其显示CD5+B细胞通过T细胞抑制促进B16黑色素瘤进展。图1A是肿瘤生长曲线，其显示当CD5-B细胞被包含在过继转移的T细胞中时，Rag1-/-小鼠中B16肿瘤生长的抑制。所示出的结果代表了两个独立的实验(n＝6)。*P<0.05。图1B是显示ELISA的条形图，该ELISA评估在存在经照射的B16肿瘤细胞的情况下从与CD5+或CD5-脾B细胞共培养的小鼠T细胞产生IFN-γ，平均值SEM(n＝3)。**P<0.01。图1C显示条形图，其显示ELISA检测在存在经照射的B16肿瘤细胞的情况下从与CD5+或CD5-脾B细胞共培养的小鼠树突细胞产生IL-10和IL-12。数据表示平均值±SEM(n＝3)。**P<0.01。
图2A-2E呈现了说明性数据，其显示CD5和PD1表达介导了肿瘤CD8+TEFF细胞抑制，并且CD5封闭抗体增强了IFNy表达并且显著增加了PDL1阻断诱导的CD8+T细胞效应功能。图2A是荧光辅助细胞分选(FACS)图，其显示通过流式细胞术分析从来自PyMT小鼠的肿瘤制备的单细胞悬浮液的CD5、PD1表达以及CD8+T细胞和在CD8+T细胞的不同亚类中颗粒酶B产生。图2B是显示流式细胞术分析的统计结果的条形图，其显示CD8+T细胞中颗粒酶B+细胞的频率。图2C是显示C57BU6小鼠CD8+T细胞未被刺激(UT)或与包被的抗CD3和可溶性抗CD8抗体、T细胞共刺激因子和IL2(Tcc)、或具有CD5封闭抗体或IgG对照的Tcc(Tcc+CD5 Ab、Tcc+IgG2a)一起孵育48小时的条形图。通过ELISA在来自CD8+T细胞培养的培养基基的上清液中确定IFNy的产生。数据显示为平均值±SEM(n＝3)。数据显示为平均值±SEM(n＝4)。图2D是显示来自脾的小鼠CD8+T细胞被抗CD3/CD28激活两天的条形图，激活的CD8+T细胞与经照射的肿瘤细胞在同种型对照或抗体的存在下共培养48小时。通过ELISA在来自共培养的培养基的上清液中确定IFN-γ的产生。图2E是显示来自脾的小鼠CD8+T细胞被抗CD3/CD28激活两天的条形图，激活的CD8+T细胞与经照射的肿瘤细胞在同种型对照或抗体的存在下共培养48小时。通过ELISA在来自共培养的培养基的上清液中确定颗粒酶的产生。
图3A-3B呈现了显示9F2A11的结合性质的说明性数据。图3A是荧光辅助细胞分选图，其显示了对在人T细胞上与CD5结合的9F2A11或UCHT2(通过例如Biolegend可商购获得)的流式细胞术分析。图3B是显示使用HRP缀合的抗人Fab抗体和添加显色底物(OD 450)在96孔板上检测结合的9F2A11的图，该96孔板先前涂布有0.5ug/孔的重组人CD5。每个数据点是两次重复的平均值。数据代表三个独立实验。
图4A-4B呈现了9F2A11抗体轻链和重链可变基因区域的核酸序列和氨基酸序列。图4A示出了顶部的9F2A11的轻链可变(VL)核酸序列(SEQ ID NO:31)和底部的9F2A11的轻链可变(VL)氨基酸序列(SEQ ID NO:15)。图4B示出了顶部的9F2A11的重链可变(VH)核酸序列(SEQ ID NO:32)和底部的9F2A11的重链可变(VH)氨基酸序列(SEQ ID NO:16)。
图5是显示CD5封闭抗体(9F2A11)相对于同种型对照αPD1、UCHT2(通过例如Biolegend可商购获得)和L17F12(αCD5，通过例如Biolegend可商购获得)增加IL-2分泌的条形图。将2×105人PBMC在如所指示的同种型对照或抗体的存在下培养72小时。通过ELISA在来自培养的培养基的上清液中确定IL-2的产生。
图6A-B CD5封闭抗体(9F2A11)增加通过人CD8+T细胞的IFNγ和GZMB的产生。(A-B)通过用抗CD8抗体进行阳性选择来分离来自人PBMC的人CD8+T细胞。人CD8+T细胞被抗CD3/CD28激活2天，激活的人CD8+T细胞与肿瘤细胞(BxPC3)在如所指示的同种型对照或抗体的存在下共培养48小时。通过ELISA在来自共培养的培养基的上清液中确定IFN-γ(A)和颗粒酶B(B)的产生。
图7A-B CD5封闭抗体(9F2A11)增加通过人CD8+T细胞的IFNγ和GZMB的产生。(A-B)通过用抗CD8抗体进行阳性选择来分离来自人PBMC的人CD8+T细胞。人CD8+T细胞被抗CD3/CD28激活2天，激活的人CD8+T细胞与肿瘤细胞(BxPC3)在如所指示的同种型对照或抗体的存在下共培养48小时。通过ELISA在来自共培养的培养基的上清液中确定IFN-γ(A)和颗粒酶B(B)的产生。直方图从左到右对应于供体A、供体B、供体C和供体D。
图8CD5封闭抗体(9F2A11)增强通过人CD4+T细胞的IFNγ的产生。纯化的人CD4+T细胞与同种异体单核细胞衍生的DC在9F2A11抗体或同种型对照抗体的存在下共培养3天。通过ELISA在来自共培养的培养基的上清液中确定IFNγ的产生量。直方图从左到右对应于供体A、供体B和供体C。
图9CD5封闭抗体(9F2A11)增加通过人PBMC的IFNγ的分泌。将2×105人PBMC在如所指示的同种型对照或抗体的存在下培养72小时。通过ELISA在来自培养的培养基的上清液中确定IFNγ的产生量。直方图从左到右对应于供体A、供体B和供体C。
具体实施方式
虽然在本文中示出和描述了本发明的各个实施例和方面，但是本领域的技术人员将清楚的是仅作为举例而提供此类实施例和方面。所属领域的技术人员现在将在不脱离本发明的情况下意识到大量变型、变化以及取代。应理解，本文所描述的本发明的实施例的各个替代方案都可以用于实践本发明。
本文使用的章节标题仅用于组织目的，并且不应被解释为限制所描述的主题。本申请中引用的所有文献或部分文献，包含但不限于专利、专利申请、文章、书籍、手册和论文，出于任何目的以全文引用的方式明确并入。
描述
除非另外定义，否则本文所用的技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常所理解相同的含义。参见，例如Singleton等人,《微生物学和分子生物学词典(DICTIONARYOF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY)》,第2版,约翰威立出版公司(J.Wiley&Sons)(纽约州纽约市(New York、NY)1994)；Sambrook等人,《分子克隆，实验室手册(MOLECULARCLONING，A LABORATORY MANUAL)》,冷泉港出版社(Cold Springs Harbor Press)(纽约冷泉港(Cold Springs Harbor,NY)1989)。类似于或等同于本文描述的那些的任何方法、装置和材料都可以用于实施本发明。提供以下定义以便于理解本文中频繁使用的某些术语，且不意在限制本公开的范围。
“核酸”是指单链或双链形式的脱氧核糖核苷酸或核糖核苷酸及其聚合物，以及它们的互补物。术语“多核苷酸”是指核苷酸的线性序列。术语“核苷酸”通常是指多核苷酸的单个单元，即单体。核苷酸可以是核糖核苷酸、脱氧核糖核苷酸或其修饰形式。本文考虑的多核苷酸的实例包含单链和双链DNA、单链和双链RNA(包含siRNA)，以及具有单链和双链DNA和RNA的混合物的杂合分子。如本文所用的核酸还指具有与自然存在的核酸相同的基本化学结构的核酸。此类类似物具有经修饰的糖和/或经修饰的环取代基，但保留与自然存在的核酸相同的基本化学结构。核酸模拟物是指具有与核酸的一般化学结构不同的结构但以与天然存在的核酸相似的方式起作用的化合物。此类类似物的实例包含但不限于硫代磷酸酯、氨基磷酸酯、甲基膦酸酯、手性甲基膦酸酯、2-O-甲基核糖核苷酸和肽核酸(PNAs)。
术语“氨基酸”是指天然存在的和合成氨基酸，以及以与天然存在的氨基酸类似的一种方式起作用的氨基酸类似物和氨基酸模拟物。天然存在的氨基酸是那些由遗传密码编码的氨基酸，以及那些后来被修饰的氨基酸，例如羟脯氨酸、γ-羧基谷氨酸和O-磷酸丝氨酸。氨基酸类似物是指具有与天然存在氨基酸相同的基本化学结构(即与氢、羧基、氨基以及R基团结合的α碳)的化合物，例如高丝氨酸、正亮氨酸、蛋氨酸亚砜、蛋氨酸甲基锍。此类类似物具有修饰的R基团(例如，正亮氨酸)或修饰的肽骨架，但保留了与天然存在的氨基酸相同的基本化学结构。氨基酸模拟物是指具有与氨基酸的一般化学结构不同的结构但以与天然存在的氨基酸类似的方式起作用的化合物。
氨基酸在本文中可以由它们通常已知的三个字母的符号或者通过由IUPAC-IUB生化命名委员会推荐的一个字母的符号来提及。同样地，核苷酸可以由其通常接受的单字母密码来提及。
术语“多肽”、“肽”和“蛋白质”在本文中可互换使用以指氨基酸残基的聚合物。该术语适用于氨基酸聚合物，其中一个或多个氨基酸残基是相应天然存在的氨基酸的人造化学模拟剂，以及适用于天然存在的氨基酸聚合物和非天然存在的氨基酸聚合物。
氨基酸或核苷酸碱基的“位置”用数字表示，该数字基于其相对于N-末端(或5'-端)的位置顺序地鉴定参考序列中的每个氨基酸(或核苷酸碱基)。由于在确定最佳比对时可能会考虑的缺失、插入、截短、融合等，因此，通常仅通过从N-末端进行计数而确定的测试序列中的氨基酸残基数目不一定与参考序列中其对应位置的数目相同。例如，在变异体相对于比对参考序列具有缺失的情况下，变异体中不存在对应于参考序列中缺失位点的位置的氨基酸。当所比对的参考序列中存在插入时，该插入不对应于参考序列中所编号的氨基酸位置。在截短或融合的情况下，参考序列或比对序列中可能存在不对应于相应序列中任何氨基酸的氨基酸段。
当在给定氨基酸或多核苷酸序列的编号的上下文中使用时，术语“编号参考”或“对应于”是指当给定氨基酸或多核苷酸与参考序列进行比较时所指定参考序列的残基的编号。当蛋白质中的氨基酸残基占据蛋白质内与给定残基相同的基本结构位置时，该氨基酸残基“对应”于给定残基。例如，当所选的残基占据与Kabat位置40处的轻链苏氨酸相同的必需空间或其他结构关系时，所选的抗体(或Fab结构域)中的所选残基对应于Kabat位置40处的轻链苏氨酸。在一些实施例中，当所选的蛋白质与抗体(或Fab结构域)的轻链进行最大同源性比对时，在与苏氨酸40比对的经比对的所选蛋白中的位置被称为对应于苏氨酸40。代替一级序列比对，也可以使用三维结构比对，例如，将所选蛋白的结构与Kabat位置40处的轻链苏氨酸进行最大对应性比对，并且比较整体结构。在这种情况下，在结构模型中占据与苏氨酸40相同的基本位置的氨基酸被称为对应于苏氨酸40残基。
“经保守修饰的变体”适用于氨基酸序列和核酸序列两者。关于特定核酸序列，“经保守修饰的变异体”是指编码相同或基本上相同的氨基酸序列的那些核酸。由于遗传密码的简并，多个核酸序列将编码任何给定的蛋白。例如，密码子GCA、GCC、GCG和GCU均编码氨基酸丙氨酸。因此，在由密码子指定丙氨酸的每一位置处，密码子可以更改为对应密码子中的任一个而不更改所编码的多肽。该核酸变异为“沉默变异”，其为保守修饰的变异的一个物种。本文中的编码多肽的每个核酸序列还描述核酸的每个可能沉默变异。技术人员将认识到，核酸中的每个密码子(除通常为甲硫氨酸的唯一密码子的AUG和通常为色氨酸的唯一密码子TGG外)可以进行修饰以得到功能上相同的分子。因此，编码多肽的核酸的每种沉默变异隐含在每个所描述的序列中。
关于氨基酸序列，技术人员将认识到改变、添加或缺失编码序列中的单个氨基酸或较小百分比的氨基酸的核酸、肽、多肽或蛋白质序列的个别取代、缺失或添加是“经保守修饰的变异体”，其中该改变引起氨基酸经化学上类似的氨基酸取代。提供功能上类似的氨基酸的保守取代表在本领域中众所周知。此类经保守修饰的变异体是除本发明的多晶型变异体、种间同源物和等位基因之外的，但不排除这些。
以下八组各自含有彼此保守取代的氨基酸：
1)丙氨酸(A)、甘氨酸(G)；
2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；
3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；
4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；
5)异白氨酸(I)、白氨酸(L)、蛋氨酸(M)、缬氨酸(V)；
6)苯丙氨酸(F)，酪氨酸(Y)，色氨酸(W)；
7)丝氨酸(S)，苏氨酸(T)；和
8)半胱氨酸(C)、蛋氨酸(M)
(参见，例如，Creighton,《蛋白质(Proteins)》(1984))。
在两种或更多种核酸或多肽序列的上下文中，术语“相同”或“同一性”百分比是指这样的两种或更多种序列或子序列，当在比较窗口或指定的区域上进行比较和比对以获得最大对应性时，如使用以下序列比较算法之一或通过手工比对和目视检查所测量的，它们是相同的或具有规定百分比的相同的氨基酸残基或核苷酸(即，在规定的区域(例如，本发明的完整多肽序列或本发明多肽的单独的结构域的规定的区域)上60％同一性，任选地65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、98％或99％同一性)。此类序列被认为是“基本上相同的”。这个定义也指测试序列的互补序列。任选地，同一性存在于长度至少约50个核苷酸的区域上，或更优选地存在于长度为100-500个或1000个或更多个核苷酸的区域上。
通过在比较窗中比较两个最佳对准的序列来确定“序列同一性百分比”，其中比较窗中的多核苷酸或多肽序列部分与参考序列(不包括添加或缺失)相比可以包括添加或缺失(即空位)以使两个序列达到最佳对准。百分比通过以下来计算：测定两个序列中出现核酸碱基或氨基酸残基相同的位置数以获得匹配位置数，将匹配位置数除以比较窗中的总位置数并将结果乘以100以获得序列一致性百分比。
对于序列比较，通常一个序列充当参考序列，测试序列与该参考序列进行比较。当使用序列比较算法时，将测试和参考序列输入计算机，如果需要，指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。可以使用默认的程序参数，或者可以指定替代的参数。然后，序列比较算法基于程序参数计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。
如本文所用，“比较窗”包含提及选自由以下组成的群组的连续位置数中的任一个的区段：例如全长序列或20至600、约50至约200或约100至约150个氨基酸或核苷酸，其中在两个序列最佳比对之后，可以将序列与具有相同数目个连续位置的参考序列进行比较。用于比较的序列比对方法在所属领域中众所周知。可以通过以下进行用于比较的序列的优化比对，例如Smith和Waterman(1970)《应用数学和力学进展(Adv.Appl.Math.)》2:482c的局部同源性算法对，Needleman和Wunsch(1970)《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》48:443的同源性比对算法，Pearson和Lipman(1988)《美国国家科学院院刊(Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA)》85:2444的搜索相似性方法，这些算法的计算机化实现(威斯康星州遗传学软件包(Wisconsin Genetics Software Package)中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，遗传学计算机小组(Genetics Computer Group)，575Science Dr.、Madison、WI)，或手动比对和目视检查(参见，例如，Ausubel等人,《分子生物学中的当前协议(Current Protocols inMolecular Biology)》(1995补刊))。
适合于确定百分比序列同一性和序列相似性的算法的实例是BLAST和BLAST 2.0算法，其分别描述于Altschul等人(1977)《核酸研究(Nuc.Acids Res.)》25:3389-3402和Altschul等人(1990)《分子生物学杂志》215:403-410。用于进行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心公开获得(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)。此算法涉及通过识别查询序列中长度为W的短字来首先识别高评分序列对(HSP)，该短字当与数据库序列中相同长度的字比对时匹配或满足某些正值阈值分数T。T被称作邻域字得分阈值(Altschul等人、同上)。这些初始邻近字命中点充当开始检索以找到含有其的更长HSP的种子。字命中沿每个序列在两个方向上扩展，直到累积比对得分可以增加为止。对于核苷酸序列，使用参数M(一对匹配残基的奖励分数；总是>0)和N(不匹配残基的空隙分数；始终<0)来计算累积分数。对于氨基酸序列来说，使用计分矩阵计算累积分数。当以下情况时：累积比对分数从其达到的最大值下降了数量X；由于一个或多个负得分残基比对的累积，累积得分变为零或更低；或者到达任一序列的结尾，字命中在每个方向上的延伸停止。BLAST算法参数W、T和X决定比对的灵敏度和速度。BLASTN程序(用于核苷酸序列)默认使用11的字长(W)、期望值(E)或10、M＝5、N＝-4以及两条链的比较。对于氨基酸序列，BLASTP程序默认使用3的字长、10的期望值(E)和BLOSUM62评分矩阵(参见Henikoff和Henikoff(1989)《美国国家科学院院刊》89:10915)50的比对(B)，10的期望值(E)，M＝5，N＝-4，以及两条链的比较。
BLAST算法还对两个序列之间的相似性执行统计分析(参见，例如，Karlin和Altschul(1993)，《美国国家科学院院刊》，90:5873-5787)。由BLAST算法提供的一种相似性度量为最小总和机率(P(N))，其提供两个核苷酸或氨基酸序列之间随机出现匹配的机率的指示。例如，如果测试核酸与参考核酸的比较中最小和概率约低于0.2，更优选地约低于0.01，并且最优选地约低于0.001，则认为核酸类似于参考序列。
如下所述，两个核酸序列或多肽基本上相同的指示是，由第一核酸编码的多肽与针对由第二核酸编码的多肽产生的抗体具有免疫交叉反应性。因此，多肽通常与第二多肽基本上相同，例如，其中两种肽仅通过保守取代而不同。两个核酸序列基本上一致的另一个指示是，两个分子或其互补序列在严格条件下彼此杂交，如下文所述。两个核酸序列基本相同的又一个指示是，相同引物可以用于扩增序列。
抗体是大的复杂的分子(分子量为约150,000或约1320个氨基酸)，具有错综复杂的内部结构。自然抗体分子含有两对同一的多肽链，每对都有一条轻链和一条重链。每个轻链和重链又由两个区域组成：参与结合靶抗原的可变(“V”)区域和与免疫系统其他组分相互作用的恒定(“C”)区域。轻链和重链可变区(在本文中分别也称为轻链可变(VL)结构域和重链可变(VH)结构域)在3维空间中结合在一起以形成结合抗原(例如，细胞表面上的受体)的可变区。在每个轻链或重链可变区内，有三个称为互补决定区(“CDR”)的短节段(长度平均为10个氨基酸)。抗体可变结构域中的六个CDR(三个来自轻链，三个来自重链)在3维空间中折叠在一起，形成与靶抗原对接的实际抗体结合位点。CDR的位置和长度已经由Kabat,E.等人在美国卫生与公众服务部1983，1987出版的《免疫学感兴趣的蛋白质序列(Sequencesof Proteins of Immunological Interest)》中精确定义。CDR中未包含的可变区的部分被称为框架(“FR”)，它构成CDR的环境。
如本文所提供的“抗体变体”是指能够结合抗原并且包含抗体或其片段的一个或多个结构域(例如，轻链可变结构域、重链可变结构域)的多肽。抗体变体的非限制性实例包含单结构域抗体或纳米抗体、单特异性Fab2、双特异性Fab2、三特异性Fab3、单价IgGs、scFv、双特异性抗体、双特异性双抗体、三特异性三抗体、scFv-Fc、小抗体、IgNAR、V-NAR、hcIgG、VhH或肽体。本文所提供的“肽体”是指附着(通过共价或非共价接头)到抗体的Fc结构域的肽部分。本领域已知的抗体变体的其他非限制性实例包含由软骨鱼或骆驼科动物产生的抗体。来自骆驼科动物的抗体及其可变区以及其生产、分离和使用的方法的一般描述可以在文献WO97/49805和WO 97/49805中找到，其以全文引用的方式并入本文中并且用于所有目的。同样，来自软骨鱼的抗体及其可变区和用于它们的产生、分离和使用的方法可以在WO2005/118629中找到，该文献通过引用以其整体并出于所有目的并入本文。
如本文提供的术语“CDR L1”、“CDR L2”和“CDR L3”是指抗体的可变轻(L)链的互补决定区(CDR)1、2和3。在实施例中，本文提供的可变轻链在N-末端至C-末端方向上包含CDR L1、CDR L2和CDR L3。同样，如本文提供的术语“CDR H1”、“CDR H2”和“CDR H3”是指抗体的可变重(H)链的互补决定区(CDR)1、2和3。在实施例中，本文提供的可变重链在N-末端至C-末端的方向上包含CDR H1、CDR H2和CDR H3。
如本文提供的术语“FR L1”、“FR L2”、“FR L3”和“FR L4”根据它们在本领域中的共同含义使用，并且是指抗体的可变轻(L)链的框架区(FR)1、2、3和4。在实施例中，本文提供的可变轻链在N-末端至C-末端方向上包含FR L1、FR L2、FR L3和FR L4。同样，如本文提供的术语“FR H1”、“FR H2”、“FR H3”和“FR H4”根据它们在本领域中的共同含义使用，并且是指抗体的可变重(H)链的框架区(FR)1、2、3和4。在实施例中，本文提供的可变重链在N-末端到C-末端的方向上包含FR H1、FR H2、FR H3和FR H4。
示例性的免疫球蛋白(抗体)结构单元包括四聚体。每个四聚体由两个相同的多肽链对组成，每个对具有一条“轻”链(约25kD)和一条“重”链(约50-70kD)。每条链的N末端限定了约100个到110个或更多个氨基酸的主要负责抗原识别的可变区。术语可变轻链(VL)、可变轻链(VL)结构域或轻链可变区和可变重链(VH)、可变重链(VH)结构域或重链可变区分别是指这些轻链和重链区域。本文所称的术语可变轻链(VL)、可变轻链(VL)结构域和轻链可变区可以互换使用。本文所称的术语可变重链(VH)、可变重链(VH)结构域和重链可变区可以互换使用。Fc(即片段可结晶区)是免疫球蛋白的“碱基”或“尾部”，并且通常由两条重链组成，根据抗体的种类，这些重链贡献两个或三个恒定结构域。通过与特定蛋白质结合，Fc区确保每种抗体对给定的抗原产生适当的免疫应答。Fc区也结合至各种细胞受体，如Fc受体和其他免疫分子，如补体蛋白。
术语“抗体”根据其在本领域中公知的含义使用抗体例如以完整的免疫球蛋白形式存在或以各种肽酶消化产生的许多充分表征的片段形式存在。因此，例如，胃蛋白酶消化铰链区中的二硫键下方的抗体，以产生F(ab)'2，即Fab的二聚体，其本身是通过二硫键与VH-CH1连接的轻链。F(ab)'2可以在温和条件下还原，以破坏铰链区中的二硫键，从而将F(ab)'2二聚体转化为Fab'单体。Fab'单体实质上是含有部分铰链区的Fab(参见，《基础免疫学(Fundamental Immunology)》，(Paul编辑，第3版，1993)。虽然各种抗体片段是根据完整抗体的消化来定义的，但是本领域技术人员将理解这些片段可以通过化学方法或通过使用重组DNA方法从头合成。因此，如本文所用的术语抗体还包含通过修饰完整抗体产生的抗体片段或使用重组DNA方法(例如，单链Fv)从头合成的抗体片段或使用噬菌体展示文库鉴定的抗体片段(参见，例如，McCafferty等人,《自然(Nature)》,348:552-554(1990))。如本文所指的术语“抗体”还包含抗体变体，如单结构域抗体。因此，在实施例中，抗体包含单个单体可变抗体结构域。因此，在实施例中，抗体包含可变轻链(VL)结构域或可变重链(VH)结构域。在实施例中，抗体是可变轻链(VL)结构域或可变重链(VH)结构域。所识别的免疫球蛋白基因包含κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因以及无数免疫球蛋白可变区基因。轻链分类为κ或λ。重链被分类为γ、μ、α、δ或ε，这进而分别限定免疫球蛋白类别IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。
为了制备单克隆抗体或多克隆抗体，可以使用本领域中已知的任何技术(参见，例如Kohler和Milstein,《自然》256:495-497(1975)；Kozbor等人,《今日免疫学(ImmunologyToday)》4:72(1983)；Cole等人,《单克隆抗体与癌症治疗(Monoclonal Antibodies andCancer Therapy)》第77-96页(1985))。“单克隆”抗体(mAb)是指来源于单个克隆的抗体。用于生产单链抗体的技术(美国专利第4,946,778号)可以适于产生针对本发明的多肽的抗体。此外，转基因小鼠或其他生物(比如其他哺乳动物)也可用于表达人源化抗体。可替代地，噬菌体展示技术可以用于鉴定特异性地结合至所选抗原的抗体和异源性Fab片段(参见，例如McCafferty等人,《自然》348:552-554(1990)；Marks等人,《生物技术(Biotechnology)》10:779-783(1992))。
mAb的表位是mAb结合至的其抗原的区域。如果两种抗体各自竞争性地抑制(阻断)另一抗体与抗原的结合，那么这两种抗体与相同或重叠的表位结合。也就是说，一种抗体的lx、5x、10x、20x或100x过量抑制另一种抗体的结合至少30％，但优选地50％、75％、90％或者甚至99％，如在竞争性结合测定中测量的(参见，例如，Junghans等人,《癌症研究(CancerRes.)》50:1495,1990)。可替代地，如果抗原中减少或消除一种抗体的结合的基本上所有氨基酸突变减少或消除另一种抗体的结合，则两种抗体具有相同的表位。如果减少或消除一种抗体的结合的一些氨基酸突变减少或消除另一种抗体的结合，则两种抗体具有重叠的表位。
单链可变片段(scFv)通常是免疫球蛋白的重链(VH)和轻链(VL)的可变区的融合蛋白，其与10至约25个氨基酸的短接头肽连接。接头为了柔韧性常常富含甘氨酸，为了溶解性也常常富含丝氨酸或苏氨酸。接头可以将VH的N-末端与VL的C-末端连接，或者反之亦然。
对于本发明的合适的抗体的制备和根据本发明的用途，例如重组抗体、单克隆抗体或多克隆抗体，可以使用本领域中已知的许多技术(参见，例如，Kohler和Milstein,《自然》256:495-497(1975)；Kozbor等人,《今日免疫学》4:72(1983)；Cole等人,《单克隆抗体与癌症治疗》第77-96页,Alan R.Liss,Inc.(1985)；Coligan,《现代免疫学实验指南(CurrentProtocols in Immunology)》(1991)；Harlow和Lane,《抗体：实验室手册(Antibodies,ALaboratory Manual)》(1988)；以及Goding,《单克隆抗体：原则与实践(MonoclonalAntibodies:Principles and Practice)》(第2版1986))。编码目标抗体的重链和轻链的基因可以从细胞中克隆，例如，编码单克隆抗体的基因可以从杂交瘤中克隆并用于产生重组单克隆抗体。编码单克隆抗体重链和轻链的基因文库也可由杂交瘤或浆细胞制成。重链和轻链基因产物的随机组合产生具有不同抗原特异性的大量抗体(参见，例如，Kuby,《免疫学(Immunology)》(第3版1997))。用于生产单链抗体或重组抗体的技术(美国专利4,946,778，美国专利第4,816,567号)可以适于生产针对本发明的多肽的抗体。此外，转基因小鼠或其他生物体如其他哺乳动物可以用于表达人源化抗体或人抗体(参见，例如，美国专利号5,545,807、5,545,806、5,569,825、5,625,126、5,633,425、5,661,016，Marks等人,《生物/技术(Bio/Technology)》10:779-783(1992)；Lonberg等人,《自然》368:856-859(1994)；Morrison,《自然》368:812-13(1994)；Fishwild等人,《自然生物技术(NatureBiotechnology)》14:845-51(1996)；Neuberger,《自然生物技术》14:826(1996)；以及Lonberg和Huszar,《国际免疫学评论(Intern.Rev.Immunol.)》13:65-93(1995))。可替代地，噬菌体展示技术可用于标识特异性结合至所选抗原的抗体和异源性Fab片段(参见，例如，McCafferty等人,《自然》348:552-554(1990)；Marks等人,《生物技术》10:779-783(1992))。还可以将抗体制备成双特异性的，即，能够识别两种不同的抗原(参见，例如，WO93/08829，Traunecker等人,《欧洲分子生物学学会杂志(EMBO J.)》10:3655-3659(1991)；以及Suresh等人,《酶学方法(Methods in Enzymology)》121:210(1986))。抗体也可以是复共轭对配合物，例如两个共价连接的抗体，或免疫毒素(参见，例如，美国专利第4,676,980号，WO91/00360；WO 92/200373；和EP 03089)。
用于对非人抗体进行人源化或灵长类化的方法是本领域中熟知的(例如，美国专利号4,816,567；5,530,101；5,859,205；5,585,089；5,693,761；5,693,762；5,777,085；6,180,370；6,210,671；和6,329,511；WO 87/02671；欧洲专利申请0173494；Jones等人,(1986)《自然》321:522；以及Verhoyen等人,(1988)《科学》239:1534)。人源化抗体进一步描述于例如Winter和Milstein(1991)《自然》349:293中。通常，人源化抗体具有从作为非人类的来源引入被其中的一个或多个氨基酸残基。这些非人氨基酸残基往往被称为输入残基，其通常取自输入可变结构域。人源化基本上可以通过用啮齿动物CDR或CDR序列取代人抗体的对应序列按照Winter和同事的方法进行(参见，例如，Morrison等人,《美国国家科学院院刊(PNAS USA)》,81:6851-6855(1984)，Jones等人,《自然》321:522-525(1986)；Riechmann等人,《自然》，332:323-327(1988)；Morrison和Oi,《免疫学进展(Adv.Immunol.)》,44:65-92(1988)，Verhoeyen等人,《科学(Science)》239:1534-1536(1988)以及Presta,《结构生物学的最新观点(Curr.Op.Struct.Biol.)》2:593-596(1992)，Padlan,《分子免疫学(Molec.Immun)》28:489-498(1991)；Padlan,《分子免疫学》31(3):169-217(1994))。因此，此类人源化抗体是嵌合抗体(美国专利第4,816,567号)，其中基本上少于完整的人可变结构域已经被来自非人类物种的相应序列取代。实际上，人源化抗体通常是一些CDR残基和可能一些FR残基被来自啮齿动物抗体中的类似位点的残基取代的人类抗体。例如，包括针对人源化免疫球蛋白框架区编解码的第一序列和针对所需免疫球蛋白互补决定区编解码的第二序列集的多核苷酸可以以合成方法或通过组合合适的cDNA和基因组DNA节段来产生。人恒定区DNA序列可以按照众所周知的程序从各种人细胞中分离。
“嵌合抗体”是这样的抗体分子，其中(a)恒定区或其一部分被改变、取代或交换，使得抗原结合位点(可变区)与不同的或改变的类别、效应子功能和/或物种的恒定区连接，或者与赋予嵌合抗体新的性质的完全不同的分子(例如酶、毒素、激素、生长因子、药物等)连接；或(b)可变区或其一部分被具有不同的或改变的抗原特异性的可变区改变、取代或交换。本发明的优选抗体和根据本发明的供使用的优选抗体包含人源化和/或嵌合单克隆抗体。
用于将治疗剂与抗体缀合的技术是熟知的(参见，例如，Arnon等人,在《单克隆抗体和癌症疗法(Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy)》中的“用于癌症疗法中药物的免疫靶向的单克隆抗体(Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of DrugsIn Cancer Therapy)”，Reisfeld等人(编辑),第243-56页(Alan R.Liss,Inc.1985)；Hellstrom等人,在《受控药物递送(Controlled Drug Delivery)》(第2版)，Robinson等人(编辑),第623-53页(Marcel Dekker、Inc.1987)中的“用于药物递送的抗体”在控制药物递送；Thorpe,《单克隆抗体'84:生物学和临床应用(Monoclonal Antibodies'84:BiologicalAnd Clinical Applications)》中的“癌症疗法中细胞毒性药物的抗体载剂：综述(Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review)”，Pinchera等人(编辑),第475-506页(1985)；以及Thorpe等人,“抗体-毒素缀合物的制备和细胞毒性性质(The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates)”,《免疫学评论(Immunol.Rev.)》,62:119-58(1982))。如本文所用，术语“抗体-药物缀合物”或“ADC”是指与抗体缀合或以其他方式与抗体共价结合的治疗剂。
如本文所提及的“治疗剂”是可用于治疗或预防疾病如癌症(例如，白血病)的组合物。在实施例中，治疗剂为抗癌剂。“抗癌剂”按照其普通常规的含义使用，并且是指具有抗肿瘤性质或抑制细胞的生长或增殖能力的组合物(例如，化合物、药物、拮抗剂、抑制剂、调节剂)。在实施例中，抗癌剂是化疗剂。在实施例中，抗癌剂是本文中鉴定的在治疗癌症的方法中具有效用的试剂。在实施例中，抗癌剂是由FDA或美国以外的国家的类似监管机构批准的用于治疗癌症的试剂。
短语“特异性地(或选择性地)结合”至抗体或“与……特异性(或选择性)免疫反应”，当提及蛋白质或肽时，是指决定蛋白质的存在的结合反应，通常在蛋白质和其他生物的异源群体中。因此，在指定免疫测定条件下，特定抗体与特定蛋白质的结合是背景的至少两倍，并且更通常是背景的10到100倍以上。在这种条件下与抗体的特异性结合需要选择对特定蛋白质具有特异性的抗体。例如，可以选择多克隆抗体以仅获得与所选抗原特异性免疫反应而不与其他蛋白特异性免疫反应的抗体亚群。这一选择可以通过减去与其他分子交叉反应的抗体来实现。可以使用多种免疫测定形式来选择与特定蛋白质发生特异性免疫反应的抗体。例如，常规地使用固相ELISA免疫测定来选择与蛋白质特异性免疫反应的抗体(参见例如，Harlow和Lane，《使用抗体，实验室手册(Using Antibodies,A LaboratoryManual)》(1998)，以描述可以用于确定特异性免疫反应性的免疫测定方式和条件)。
“配体”是指能够结合至受体或抗体、抗体变体、抗体区或其片段的药剂，例如多肽或其他分子。
如本文使用的术语“CD5”是指维持CD5活性(例如，与CD5相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的分化簇5(CD5)或其变体或同源物的任何重组的或天然存在的形式。在实施例中，与天然存在的CD5多肽相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如10、20、50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，CD5与由UniProt参考编号043866所识别的蛋白质质或与其具有基本同一性的变体或同源物基本上相同。在实施例中，CD5是由UniProt参考编号043866识别的蛋白质或与其具有基本同一性的变体或同源物。
“标记物(label)”或“可检测部分”是可通过光谱手段、光化学手段、生物化学手段、免疫化学手段、化学手段或其他物理手段检测的组合物。例如，有用的标记物包含32P、荧光染料、电子致密试剂、酶(例如，如通常在ELISA中使用的)、生物素、洋地黄毒苷(digoxigenin)或半抗原和蛋白质或可以使得被检测的其他实体，例如通过将放射性标记物并入到与靶标肽特异性反应的肽或抗体中。可以使用本领域已知的用于使抗体与标记结合的任何适当方法，例如使用以下文献中描述的方法：Hermanson,《生物缀合物技术(Bioconjugate Techniques)》1996,学术出版社公司(Academic Press,Inc.),圣地亚哥。
“接触”根据其普通常规的含义使用，并且是指允许至少两种不同物种(例如抗体和抗原)变得足够接近以进行反应、相互作用或物理接触的过程。然而，应该理解，所得到的反应产物可以直接由添加的试剂之间的反应产生，或者由来自可以在反应混合物中产生的一种或多种添加的试剂的中间体产生。
术语“接触”可以包含允许两种物质反应、相互作用或物理接触，其中两种物质可以为例如如本文提供的药物组合物和细胞。在实施例中，接触包含，例如，允许本文描述的药物组合物与细胞相互作用。
如本文所用的“细胞”是指执行足以保存或复制其基因组DNA的代谢或其他功能的细胞。细胞可通过本领域中众所周知的方法来鉴定，包含例如存在完整膜、特定染料染色、能够产生后代或在配子的情况下能够与第二配子组合以产生活的后代。细胞可以包含原核细胞和真核细胞。原核细胞包含但不限于细菌。真核细胞包含但不限于酵母细胞以及来源于植物和动物的细胞，例如哺乳动物、昆虫(例如，甜菜夜蛾(spodoptera))和人类细胞。
如本文提供的“干细胞”是指以通过有丝分裂细胞分裂进行自我更新的能力和分化为组织或器官的潜力为特征的细胞。在哺乳动物干细胞中，可以区分胚胎干细胞(ES细胞)和体干细胞(例如，HSC)。胚胎干细胞存在于囊胚中并产生胚胎组织，而为了组织再生和修复的目的，体干细胞驻留于成体组织中。在实施例中，干细胞是白血病干细胞(LSC)。本文提供的“白血病干细胞”或“LSC”是指在移植到免疫缺陷动物中时能够引发疾病(白血病)并且可以通过在连续移植中引起白血病而自我更新并且还可以部分分化成类似于原始疾病但不能自我更新的非LSC体细胞的细胞。LSC可能携带基因突变并能够通过有丝分裂细胞分裂自我更新和分化成携带该基因突变体或LSC的造血谱系可保留为未成熟祖细胞，也称为胚细胞。在实施例中，LSC表达CD34。
“B细胞”或“B淋巴细胞”是指它们在本领域中的标准用法。B细胞是淋巴细胞，即一种发育成产生抗体的浆细胞(“成熟B细胞”)的白血细胞(白细胞)。“未成熟B细胞”是指能够发育成成熟B细胞的细胞。通常，祖B细胞经受免疫球蛋白重链重新布置以变成祖B前B细胞，并且进一步经受免疫球蛋白轻链重新布置以变成未成熟B细胞。未成熟B细胞包含T1和T2 B细胞。
本文所用的“T细胞”或“T淋巴细胞”是在细胞介导的免疫中起主要作用的一类淋巴细胞(白细胞的一种亚型)。通过在细胞表面上存在T细胞受体，可以将它们与其他淋巴细胞(如B细胞和自然杀伤细胞)区分开来。T细胞包含例如，自然杀伤T(NKT)细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)、调控性T(Treg)细胞和T辅助细胞。不同类型的T细胞可以通过使用T细胞检测剂来区分。
如本文所定义，涉及蛋白-抑制剂(例如，A2A受体拮抗剂或PD-1信号传导通路抑制剂)相互作用的术语“抑制(inhibition)”、“抑制(inhibit)”、“抑制(inhibiting)”等意指相对于在不存在抑制剂(例如，A2A受体拮抗剂或PD-1信号传导通路抑制剂)的情况下蛋白的活性或功能而言，负面地影响(例如，降低)该蛋白的活性或功能(例如，降低A2A受体或PD-1蛋白或PD-L1蛋白的活性)。在一些实施例中，抑制是指疾病(例如癌症)或疾病的症状减少。因此，抑制至少部分地包含部分地或全部地阻断刺激、降低、防止或延迟活化、或失活、脱敏、或下调信号转导或酶促活性或蛋白质(例如，A2A受体或PD-1蛋白或PD-L1蛋白质)的量。类似地，“抑制剂”是抑制A2A受体或PD-1蛋白或PD-L1蛋白的化合物或蛋白，例如通过结合、部分地或全部地阻断、降低、防止、延迟、失活、脱敏或下调活性(例如，A2A受体活性或PD-1蛋白活性或PD-L1蛋白活性)。
如本文所提及的“PD-1蛋白”或“PD-1”包含重组或天然存在形式的程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)中的任一者，也被称为分化簇279(CD 279)或其保持PD-1蛋白活性(例如，与PD-1蛋白相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的变体或同源物。在一些方面，与天然存在的PD-1蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，PD-1蛋白与由UniProt参考编号Q15116识别的蛋白质或与其具有基本同一性的变体或同源物基本上相同。在实施例中，PD-1蛋白与由UniProt参考编号Q02242识别的蛋白质或与其具有基本同一性的变体或同源物基本上相同。在实施例中，PD-1抑制剂是纳武单抗(Nivolumab)、帕博利珠单抗(Pembrolizumab)或西米普利单抗(Cemiplimab)。在实施例中，PD-1抑制剂是纳武单抗。在实施例中，PD-1抑制剂是帕博利珠单抗。在实施例中，PD-1抑制剂是西米普利单抗。
如本文提供的术语“西米普利单抗”是指能够结合程序性死亡受体-1(PD-1)的单克隆抗体。在通常和习惯意义上，“西米普利单抗”是指由Cas登记号1801342-60-8鉴定的抗体。
如本文提供的术语“帕博利珠单抗”是指能够结合程序性死亡受体-1(PD-1)的人源化抗体。在通常和习惯意义上，“帕博利珠单抗”是指由Cas登记号1374853-91-4鉴定的抗体。
如本文提供的术语“纳武单抗”是指能够结合程序性死亡受体-1(PD-1)的单克隆抗体。在通常和习惯意义上，“纳武单抗”是指由Cas登记号946414-94-4鉴定的抗体。
如本文所提及的术语“CD34”包含重组或天然存在形式的分化簇34蛋白中的任一者，或其保持CD34活性(例如，与CD34相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的变体或同源物。在一些方面，与天然存在的CD34蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，CD34蛋白与由UniProt参考编号P28906识别的蛋白质或与其具有基本同一性的变体或同源物基本上相同。
当与参考例如细胞或核酸、蛋白质或载体一起使用时，术语“重组”表示细胞、核酸、蛋白质或载体已经通过引入异源核酸或蛋白质或改变天然核酸或蛋白质而被修饰，或细胞源自如此修饰的细胞。因此，例如，重组细胞表达在天然(非重组)形式的细胞内未发现的基因，或表达以其他方式异常表达、表达不足或根本不表达的天然基因。转基因细胞和植物是那些表达异源基因或编码序列的细胞和植物，通常是重组方法的结果。
术语“异源的”当用于提及核酸的部分时，表示该核酸包括两个或更多个在性质中彼此不具有相同关系的子序列。例如，核酸通常是重组产生的，具有来自不相关基因的两个或更多个序列，这些序列被排列成产生新的功能性核酸，例如来自一个来源的启动子和来自另一个来源的编码区。类似地，异源蛋白质指示蛋白质包括两个或更多个在自然界中彼此之间没有相同关系的子序列(例如，融合蛋白)。
术语“外源的”是指来源于给定的细胞或生物体外部的分子或物质(例如，化合物、核酸或蛋白质)。例如，本文所指的“外源启动子”是不来源于其表达的细胞或生物体的启动子。相反，术语“内源的”或“内源启动子”是指给定细胞或生物体原生的或源于给定细胞或生物体内的分子或物质。
如本文所定义的，术语“抑制(inhibition)”、“抑制(inhibit)”、“抑制(inhibiting)”等在提及细胞增殖(例如，癌细胞增殖)时是指负面地影响(例如减少增殖)或杀死细胞。在一些实施例中，抑制是指减轻疾病或疾病的症状(如癌症、癌细胞增殖)。因此，抑制至少部分地包含部分地或完全地阻断刺激、降低、防止或延迟激活、或失活、脱敏、或下调信号转导或酶促活性或蛋白质的量。类似地，“抑制剂”是例如通过结合、部分或完全阻断、降低、预防、延迟、失活、脱敏或下调活性(例如，受体活性或蛋白质活性)来抑制受体或另一蛋白质的化合物或蛋白质。
“生物样品”或“样品”是指从受试者或患者获得或衍生的材料。生物样品包含组织切片，如活检和尸检样品，以及用于组织学目的的冷冻切片。此类样品包含体液如血液和血液级分或产物(例如，血清、血浆、血小板、红细胞等)、痰、组织、培养的细胞(例如，原代培养物、外植体和转化的细胞)、粪便、尿液、滑液、关节组织、滑膜组织、滑膜细胞、成纤维细胞样滑膜细胞、巨噬细胞样滑膜细胞、免疫细胞、造血细胞、成纤维细胞、巨噬细胞、T细胞等。生物样品通常获自真核生物体，如哺乳动物，如灵长类动物，例如黑猩猩或人；牛；狗；猫；啮齿动物，例如豚鼠、大鼠、小鼠；兔子；或鸟；爬行动物；或鱼。
“对照”或“标准对照”是指用作参考(通常是已知的参考)的样品、测量值或值，用于与测试样品、测量值或值进行比较。例如，可以从怀疑患有给定疾病(例如癌症)的患者中获取测试样品，并且与已知的正常(未患病)个体(例如标准对照受试者)进行比较。标准对照也可以代表从没有给定疾病的相似个体(例如标准对照受试者)的群体(即标准对照群体)收集的平均测量值或值，该没有给定疾病的相似个体例如具有相似医学背景、相同年龄、体重等的健康个体。标准对照值也可以从同一个体中获得，例如从疾病发作前患者的早期获得的样品中获得。例如，可以设计对照，以基于药理学数据(例如，半衰期)或治疗措施(例如，副作用的比较)比较治疗益处。对照对于确定数据的显著性也是有价值的。例如，如果给定参数的值在对照中变化很大，则测试样品中的变化将不被认为是显著的。本领域技术人员将认识到，可以设计标准对照用于评估任何数量的参数(例如，RNA水平、蛋白质水平、特定细胞类型、特定体液、特定组织、滑膜细胞、滑液、滑膜组织、成纤维细胞样滑膜细胞、巨噬细胞样滑膜细胞等)。
本领域技术人员将理解，在给定情形下哪种标准对照是最适合的，且能够基于与标准对照值的比较来分析数据。标准对照对于确定数据的显著性(例如，统计显著性)也是有价值的。例如，如果标准对照中给定参数的值广泛变化，那么测试样品的变化将不被视为显著的。
“患者”或“有此需要的受试者”是指患有或易于患有可以通过施用如本文提供的组合物或药物组合物治疗的疾病或病况的活生物体。非限制性实例包含人、其他哺乳动物、牛科动物、大鼠、小鼠、狗、猴、山羊、绵羊、牛、鹿和其他非哺乳动物。在一些实施例中，患者是人。
术语“疾病”或“病况”是指能够用本文提供的化合物或方法治疗的患者或受试者的生存状态或健康状况。该疾病可以是癌症。在一些其他示例中，“癌症”是指人癌症和癌瘤、肉瘤、腺癌、淋巴瘤、白血病等，包含实体癌和淋巴癌、肾癌、乳癌、肺癌、膀胱癌、结肠癌、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、脑癌、头颈癌、皮肤癌、子宫癌、睾丸癌、神经胶质瘤、食道癌和肝癌(包含肝癌瘤)、淋巴瘤(包含B型急性淋巴母细胞淋巴瘤)、非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphomas)(例如，伯基特氏(Burkitt's)淋巴瘤、小细胞淋巴瘤和大细胞淋巴瘤)、霍奇金氏淋巴瘤、白血病(包含急性髓性白血病(AML)、ALL和CML)或多发性骨髓瘤。
如本文所用，术语“癌症”是指在哺乳动物(例如，人类)中发现的所有类型的癌症、赘生物或恶性肿瘤，包含白血病、癌和肉瘤。可用本文提供的化合物或方法治疗的示范性癌症包含乳腺癌、结肠癌、肾癌、白血病、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌、前列腺癌、胰腺癌、脑癌、肝癌、胃癌或肉瘤。
术语“白血病”广泛地是指造血器官的进行性的恶性疾病，并且通常以血液和骨髓中白细胞及其前体的扭曲增殖和发育为特征。白血病在临床上通常基于以下进行分类：(1)疾病的持续时间和特征—急性或慢性；(2)所涉及的细胞的类型；髓性(髓性)、淋巴性(淋巴性)或单核细胞性；和(3)血液中的异常细胞-白血型或非白血型(亚白血病的)的数目的增加或非增加。可以用本文提供的化合物或方法治疗的示例性的白血病包含，例如，急性髓性白血病、急性非淋巴细胞性白血病、慢性淋巴细胞性白血病、急性粒细胞性白血病、慢性粒细胞性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、成人T细胞白血病、非白血性白血病、白血性白血病、嗜碱性白血病(basophylic leukemia)、胚细胞性白血病、牛白血病、慢性粒细胞性白血病、皮肤白血病、胚胎细胞性白血病、嗜酸性粒细胞性白血病、格罗斯白血病、毛细胞白血病、成血细胞性白血病(hemoblastic leukemia)、血胚细胞性白血病(hemocytoblasticleukemia)、组织细胞白血病、干细胞性白血病、急性单核细胞性白血病、白细胞减少性白血病(leukopenic leukemia)、淋巴性白血病、淋巴母细胞性白血病、淋巴细胞性白血病、淋巴源性白血病、淋巴样白血病、淋巴肉瘤细胞性白血病、肥大细胞白血病、巨核细胞性白血病、小成髓细胞性白血病(micromyeloblastic leukemia)、单核细胞性白血病、成髓细胞性白血病、髓细胞性白血病、髓性粒细胞性白血病、髓单核细胞性白血病、内格利白血病、浆细胞性白血病、多发性骨髓瘤、浆细胞性白血病、早幼粒细胞性白血病、李德尔氏细胞性白血病(Rieder cell leukemia)、希林氏白血病(Schilling's leukemia)、干细胞性白血病、亚白血病性白血病或未分化细胞性白血病。
术语“肉瘤”通常是指由如胚胎结缔组织的物质组成的肿瘤，并且通常由包埋在纤维状或均质物质中的紧密堆积的细胞组成。可以用本文提供的化合物或方法治疗的肉瘤包含软骨肉瘤、纤维肉瘤、淋巴肉瘤、黑色素肉瘤、粘液肉瘤、骨肉瘤、艾伯内西氏肉瘤、脂肪肉瘤(adipose sarcoma)、脂肪肉瘤(liposarcoma)、腺泡状软组织肉瘤、成釉细胞肉瘤、葡萄状肉瘤、绿色肉瘤、绒毛膜癌、胚胎性肉瘤、肾母细胞瘤肉瘤、子宫内膜肉瘤、间质肉瘤、尤因肉瘤、筋膜肉瘤、成纤维细胞肉瘤、巨细胞肉瘤、粒细胞肉瘤、霍奇金氏肉瘤、特发性多发性色素出血性肉瘤、B细胞的免疫母细胞肉瘤、淋巴瘤、T细胞的免疫母细胞肉瘤、詹森氏肉瘤(Jensen's sarcoma)、卡波西氏肉瘤、枯氏细胞肉瘤(Kupffer cell sarcoma)、血管肉瘤、白血病性肉瘤、恶性间叶瘤肉瘤、骨旁肉瘤、网状细胞肉瘤、劳斯肉瘤、浆液囊性肉瘤、滑膜肉瘤或毛细血管扩张性肉瘤。
术语“黑色素瘤”是指源自皮肤和其他器官的黑色素细胞系统的肿瘤。可以用本文提供的化合物或方法治疗的黑色素瘤包含，例如，肢端雀斑样痣性黑色素瘤、无色素性黑色素瘤、良性幼年黑色素瘤、克劳德曼氏黑色素瘤(Cloudman's melanoma)、S91黑色素瘤、Harding-Passey黑色素瘤、幼年黑色素瘤、恶性雀斑样黑色素瘤、恶性黑色素瘤、结节性黑色素瘤、趾甲下黑色素瘤(subungal melanoma)或浅表扩散性黑色素瘤。
术语“癌”是指由上皮细胞组成的恶性新生物，其倾向于浸润周围组织并引起转移。可以用本文提供的化合物或方法治疗的示例性的癌症包含，例如，甲状腺髓样癌、家族性甲状腺髓样癌、腺泡癌、腺泡状癌、腺囊性癌、腺样囊性癌、腺癌(carcinomaadenomatosum)、肾上腺皮质癌、肺泡癌、肺泡细胞癌、基底细胞癌(basal cellcarcinoma)、基质细胞癌(carcinoma basocellulare)、基底细胞样癌、基底鳞状细胞癌、细支气管肺泡癌、支气管癌、支气管源性癌、髓样癌、胆管细胞癌、绒毛膜癌、胶质细胞癌、粉刺癌、子宫体癌、筛状癌、铠甲状癌、癌疮、柱状细胞癌、圆柱细胞癌、导管癌、硬癌、胚胎性癌、髓样癌、腺样上皮细胞癌、腺样上皮癌(carcinoma epitheliale adenoides)、外植癌、溃疡性癌、纤维癌、胶样癌(gelatiniforni carcinoma)、胶状癌、巨细胞癌(giant cellcarcinoma)、巨细胞癌(carcinoma gigantocellulare)、腺癌、颗粒细胞癌、毛基质癌、多血癌、肝细胞癌、嗜酸性细胞癌(Hurthle cell carcinoma)、粘液癌、肾细胞癌(hypernephroid carcinoma)、幼稚型胚胎性癌、原位癌、表皮内癌、上皮内癌、克罗姆佩柯赫尔肿瘤、库尔契茨基细胞癌、大细胞癌、透镜状癌、豆状癌、脂瘤样癌、淋巴上皮癌、髓腔癌、髓样癌、黑色素癌、软癌、粘液癌(mucinous carcinoma)、粘液癌(carcinomamuciparum)、克鲁肯伯格瘤(carcinoma mucocellulare)、粘液表皮样癌、粘液癌(carcinoma mucosum)、粘液癌(mucous carcinoma)、粘液瘤样癌、鼻咽癌、燕麦细胞癌、骨化性癌、类骨质癌、乳头状癌、门脉周癌、浸润前癌、棘细胞癌、粉刺癌、肾的肾细胞癌、储备细胞癌、肉瘤样癌、鼻腔鼻窦内翻性乳头状瘤(Schneiderian瘤)、硬癌、阴囊癌、印戒细胞癌、单纯癌、小细胞癌、马铃薯状癌(solanoid carcinoma)、球状细胞癌、梭形细胞癌、尿道海绵体癌、鳞状癌、鳞状细胞癌、绳捆癌、毛血管扩张性癌、血管扩张性癌、移行细胞癌、结节性皮癌(carcinoma tuberosum)、结节性皮癌(tuberous carcinoma)、疣状癌或绒毛状癌。
如本文所用，术语“癌转移”、“转移性”和“转移性癌症”可以互换使用，且指增殖性疾病或病症(例如癌症)从一个器官或另一个不相邻的器官或身体部分的扩散。癌症发生在起源部位，例如乳腺，该部位称为原发性肿瘤，例如原发性乳腺癌。原发性肿瘤或起源部位中的一些癌细胞获得了穿透和浸润局部区域周围正常组织的能力，和/或穿透淋巴系统或通过系统循环的血管系统的壁至身体内的其他部位和组织的能力。由原发性肿瘤的癌细胞形成的第二种临床上可检测的肿瘤称为转移性或继发性肿瘤。当癌细胞转移时，推测转移性肿瘤及其细胞与原始肿瘤的细胞相似。因此，如果肺癌转移至乳房，那么乳房部位的继发性肿瘤由异常的肺细胞而不是异常的乳房细胞组成。乳房中的继发性肿瘤是指转移性肺癌。因此，短语转移性癌症是指其中受试者患有或曾经患有原发性肿瘤且患有一种或多种继发性肿瘤的疾病。短语非转移性癌症或患有非转移性癌症的受试者是指其中受试者患有原发性肿瘤但不患有一种或多种继发性肿瘤的疾病。例如，转移性肺癌是指患有原发性肺肿瘤或具有原发性肺肿瘤的病史且在例如乳房中第二位置或多个位置处具有一个或多个继发性肿瘤的受试者的疾病。
在与疾病(例如，癌症(例如，白血病、急性髓性白血病))相关联的物质或物质活性或功能的上下文中，术语“相关联的”或“与……相关联的”意指疾病(例如，癌症(例如，白血病、急性髓性白血病))是由(全部或部分)物质或物质活性或功能引起的，或者疾病的症状是由(全部或部分)物质或物质活性或功能引起的。可替代地，该物质(例如，CD5)可以是疾病(例如，癌症(例如，白血病、急性髓性白血病))的指标。因此，相关物质可用作靶向疾病组织(例如，癌细胞(例如，白血病干细胞、急性髓性白血病细胞))的手段。
如本文所用的，“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”病况、疾病或病症或与病况、疾病或病症相关联的症状是指获得有益或期望的结果(包含临床结果)的方法。有益或期望的临床结果可以包含但不限于减轻或改善一种或多种症状或病况，减轻病况、病症或疾病的程度，稳定病况、病症或疾病的状态，预防病况、病症或疾病，预防病况、病症或疾病的传播，延迟或减缓病况、病症或疾病进展，延迟或减慢病况、病症或疾病发作，改善或减轻病况、病症或疾病状态，以及缓解，无论是部分还是全部。“治疗”还可以意指将受试者的存活时间延长至超出未进行治疗时预期的存活时间。“治疗”还可以意指抑制病况、病症或疾病的进展，暂时减缓病况、病症或疾病的进展，尽管在某些情况下，它涉及永久地停止病况、病症或疾病的进展。如本文所用，术语“治疗(treatment)”、“治疗(treat)”或“治疗(treating)”是指降低以蛋白酶表达为特征的疾病或病况的一种或多种症状或者以蛋白酶表达为特征的疾病或病况的症状的影响的方法。因此，在所公开的方法中，治疗可以指已建立的疾病、病况或该疾病或病况的症状的严重程度的10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％的减少。例如，如果在受试者中的疾病的一个或多个症状与对照相比存在10％的减少，则用于治疗疾病的方法被认为是治疗。因此，减少可以是与天然或对照水平相比的10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％或10％与100％之间的任何百分比减少。应当理解，治疗并不一定指疾病、病况或该疾病、病况的症状的治愈或完全消除。此外，如本文中所用，提及减少、降低或抑制包含与对照水平相比的10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或更大的变化，并且此类术语可以包含完全消除，但不一定包含完全消除。
术语“剂量(dose)”和“剂量(dosage)”在本文中可互换使用。剂量是指每次施用时给予个体的活性成分的量。剂量将根据许多因素而变化，包含给定疗法的正常剂量的范围、施用频率；个体的大小和公差；病况的严重程度；副作用的风险；以及施用途径。本领域技术人员将认识到，剂量可以根据上述因素或基于治疗进展进行改动。术语“剂型”是指药物或药物组合物的特定形式，并且取决于施用途径。例如，剂型可以是用于雾化，例如用于吸入剂的液体形式，可以是例如用于经口递送的片剂或液体，也可以是例如用于注射的盐水溶液。
如本文所用的“治疗有效剂量或量”是指对其的施用产生作用(例如治疗或预防疾病)的剂量。确切的剂量和配方将取决于治疗的目的，并且将由本领域技术人员使用已知的技术确定(参见，例如，Lieberman,《药物剂型(Pharmaceutical Dosage Forms)》(第1-3卷,1992)；Lloyd,《药物复合的艺术、科学和技术(The Art,Science and Technology ofPharmaceutical Compounding)》(1999)；《雷明顿：药学的科学与实践(Remington:TheScience and Practice of Pharmacy)》,第20版,Gennaro,编辑(2003)，以及Pickar,《剂量计算(Dosage Calculations)》(1999)。例如，对于给定的参数，治疗有效量将显示至少5％、10％、15％、20％、25％、40％、50％、60％、75％、80％、90％或至少100％的增加或减少。治疗功效也可以表示为“倍数”增加或减少。例如，治疗有效量效果可以是标准对照的效果的至少1.2倍、1.5倍、2倍、5倍或更多倍。治疗有效剂量或量可以改善疾病的一种或多种症状。当施用治疗有效剂量或量效果是治疗处于发展疾病的风险的人时，治疗有效量或量可以预防或延缓疾病或疾病的一种或多种症状的发作。
如本文所用，术语“施用”意指向个体口服施用，以栓剂形式施用、局部接触、静脉内、腹膜内、肌肉内、病灶内、鞘内、鼻内或皮下施用，或植入缓慢释放装置(例如微型渗透泵)。可以通过任何途径施用，包含肠胃外和经粘膜(例如，颊、舌下、腭、牙龈、鼻、阴道、直肠或经皮)。肠胃外施用包含例如静脉内、肌肉内、小动脉内、皮内、皮下、腹膜内、心室内和颅内。其他递送方式包含但不限于使用脂质体配方、静脉输注、经皮贴剂等。“共同施用”意指本文所描述的组合物在施用一种或多种另外的疗法例如，癌症疗法如化学疗法、激素疗法、放射疗法或免疫疗法的同时、之前或之后施用。本发明的化合物可以单独施用或可以联合施用于患者。共施用意指包含化合物(多于一种化合物)单独或以组合形式同时或依序被施用。因此，当需要时，该制剂也可以与其他活性物质组合(例如，以减少代谢降解)。本发明的组合物可以通过透皮、局部途径递送、配制成涂抹棒、溶液、悬浮液、乳液、凝胶、乳膏、软膏、糊剂、凝胶剂、涂料、粉末和气雾剂形式施用。
本发明的组合物可以另外包含提供持续释放和/或舒适性的组分。此类组分包含高分子量、阴离子类粘液状聚合物、胶凝多糖、和精细分散的药物载体底物。这些组分更详细地讨论于美国专利号4,911,920；5,403,841；5,212,162；和4,861,760。出于所有目的，这些专利的全部内容通过引用以其整体并且本文。本发明的组合物还可以作为微球递送以在体内缓慢释放。例如，可以经由真皮内注射含有药物的微球来施用微球，该微球在皮下缓慢释放(参见Rao,《生物材料科学杂志：聚合物版(J.Biomater Sci.Polym.Ed.)》7:623-645,1995；作为可生物降解和可注射的凝胶配方(参见，例如，Gao,《药学研究(Pharm.Res.)》12:857-863,1995)；或者作为用于口服施用的微球(参见，例如，Eyles,《制药和药理学杂志(J.Pharm.Pharmacol.)》49:669-674,1997)。在实施例中，本发明的组合物的制剂可以通过采用与细胞膜融合或被胞吞的脂质体来递送，即通过使用附着到脂质体的受体配体，其结合至细胞的表面膜蛋白受体，导致胞吞。通过使用脂质体，特别是当脂质体表面携带对靶细胞特异的受体配体，或以其他方式优先针对具体器官时，可以将本发明的组合物的递送集中于体内靶细胞。(参见，例如Al-Muhammed,《微胶囊杂志(J.Microencapsul.)》13:293-306,1996；Chonn,《生物技术的当前观点(Curr.Opin.Biotechnol.)》6:698-708,1995；Ostro,《美国医院药学杂志(Am.J.Hosp.Pharm.)》46:1576-1587,1989)。本发明的组合物还可以作为纳米颗粒递送。
如本文所用，术语“药学上可接受的”与“生理学上可接受的”和“药理学上可接受的”同义使用。药物组合物通常会包括用于缓冲和储存保存的媒剂，并且可以包含用于适当递送的缓冲液和携带体，这取决于施用途径。
“药学上可接受的赋形剂”和“药学上可接受的载剂”是指有助于向受试者施用活性剂和由受试者吸收的物质，并且可以包含在本发明的组合物中而不会对患者造成显著的不良毒理学效应。药学上可接受的赋形剂的非限制性实例包含水、NaCl、生理盐水溶液、乳酸化林格氏溶液、正常蔗糖、正常葡萄糖、粘合剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、包衣剂、甜味剂、调味剂、盐溶液(例如林格氏溶液)、醇、油、明胶、碳水化合物如乳糖、直链淀粉或淀粉、脂肪酸酯、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮和着色剂等。此类制剂可以进行灭菌，并且如果需要，可以与不与本发明的化合物有害地反应的助剂混合，该助剂如润滑剂、防腐剂、稳定剂、润湿剂、乳化剂、用于影响渗透压的盐、缓冲液、着色物质和/或芳香物质等。本领域技术人员将认识到其他药物赋形剂可用于本发明。
术语“药学上可接受的盐”是指衍生自本领域熟知的各种有机抗衡离子和无机抗衡离子的盐，并且仅作为实例，包含钠、钾、钙、镁、铵、四烷基铵等；并且当分子含有碱性官能团时，有机酸或无机酸的盐，如盐酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、醋酸盐、马来酸盐、草酸盐等。
术语“制备”旨在包含用作为载体的包封材料调配活性化合物，得到其中具有或不具有其他载体的活性组分被载体包围，因此与其联合的胶囊。类似地，包含了扁囊剂和锭剂。片剂、粉剂、胶囊、丸剂、扁囊剂、以及锭剂可以用作适用于口服施用的固体施用形式。
该药物制剂任选地为单位剂型。在这种形式中，该制剂被细分成含有适当量的活性组分的单位剂量。单位剂型可以是包装的制剂，该包装含有离散量的制剂，如小瓶或安瓿中的包装片剂、胶囊和粉末。此外，单位剂型可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者它可以是适当数量的包装形式的这些中的任一者。单位剂型可以是冷冻分散体。
本文所用的“协同量”是指第一量(例如，本文提供的化合物的量)和第二量(例如，治疗剂)的总和，其导致协同效应(即，大于累加效应的效应)。因此，本文中可互换使用的术语“协同作用(synergy)”、“协同性(synergism)”、“协同(synergistic)”、“组合协同量”和“协同治疗作用”是指组合施用的化合物的测量效果，其中测量效果大于本文所提供的每种化合物作为单一药剂单独施用的单独效果的总和。
抗体组合物
CD5激活肿瘤相关B细胞和T细胞中的STAT3，导致免疫抑制。申请人表明，本文提供的抗体组合物(例如，抗体、嵌合抗原受体、双特异性抗体)和方法有效地阻断肿瘤相关T细胞中的CD5，并且可能比使用PD-1抗体具有更强的免疫刺激作用。本文提供的抗体组合物能够引发人T细胞活化，并且优于其他先前已知的CD5抗体。申请人进一步证明，当本文提供的抗体组合物(包含其实施例)与抗PD-1抗体组合使用时，可以检测到人T细胞活化的协同作用。
本文尤其是提供了能够结合CD5的抗体(例如，人源化抗体、单克隆抗体)和抗体组合物(例如，嵌合抗原受体、双特异性抗体)。本文提供的抗体和抗体组合物包含新的轻链和重链结构域CDR和框架区，并且以高的效和特异性结合CD5，从而有效地靶向表达CD5的细胞。本文提供的抗体的轻链和重链结构域可以形成重组蛋白的一部分，该重组蛋白在本文中也被称为抗体组合物(例如，嵌合抗原受体或双特异性抗体)，该抗体组合物尤其用作癌症治疗剂和用于诊断目的。
在一个方面，提供了抗分化簇5(CD5)抗体，其包含轻链可变结构域和重链可变结构域，其中该轻链可变结构域包含：如在SEQ ID NO:1中所示的CDR L1、如在SEQ ID NO:2中所示的CDR L2和如在SEQ ID NO:3中所示的CDR L3；并且其中该重链可变结构域包含：如在SEQ ID NO:4中所示的CDR H1、如在SEQ ID NO:5中所示的CDR H2和如在SEQ ID NO:6中所示的CDR H3。
如上所述，本文提供的“轻链可变(VL)结构域”是指抗体、抗体变体或其片段的轻链的可变区。同样地，如本文提供的“重链可变(VH)结构域”是指抗体、抗体变体或其片段的重链可变区。轻链可变结构域和重链可变结构域一起形成结合抗原(表位)的互补位。互补位或抗原结合位点形成于抗体、抗体变体或其片段的N-末端。在实施例中，轻链可变(VL)结构域包含抗体轻链的CDR L1、CDR L2、CDR L3和FR L1、FR L2、FR L3和FR L4(框架区)。在实施例中，重链可变(VH)结构域包含抗体重链的CDR H1、CDR H2、CDR H3和FR H1、FR H2、FRH3和FR H4(框架区)。在实施例中，轻链可变(VL)结构域和轻链恒定(CL)结构域形成抗体轻链的一部分。在实施例中，重链可变(VH)结构域和重链恒定(CH1)结构域形成抗体重链的一部分。在实施例中，重链可变(VH)结构域和一个或多个重链恒定(CH1、CH2或CH3)结构域形成抗体重链的一部分。因此，在实施例中，轻链可变(VL)结构域形成抗体的一部分。在实施例中，重链可变(VH)结构域形成抗体的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)结构域形成治疗性抗体的一部分。在实施例中，重链可变(VH)结构域形成治疗性抗体的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)结构域形成人源性抗体的一部分。在实施例中，重链可变(VH)结构域形成人源性抗体的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)结构域形成人源化抗体的一部分。在实施例中，重链可变(VH)结构域形成人源化抗体的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)结构域形成嵌合抗体的一部分。在实施例中，重链可变(VH)结构域形成嵌合抗体的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)结构域形成抗体片段的一部分。在实施例中，重链可变(VH)结构域形成抗体片段的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)结构域形成抗体变体的一部分。在实施例中，重链可变(VH)结构域形成抗体变体的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)结构域形成Fab的一部分。在实施例中，重链可变(VH)结构域形成Fab的一部分。在实施例中，轻链可变(VL)结构域形成scFv的一部分。在实施例中，重链可变(VH)结构域形成scFv的一部分。
在实施例中，轻链可变结构域包含如在SEQ ID NO:7中所示的FR L1、如在SEQIDNO:8中所示的FR L2、如在SEQ ID NO:9中所示的FR L3和如在SEQ ID NO:10中所示的FRL4。在实施例中，重链可变结构域包含如在SEQ ID NO:11中所示的FR H1、如在SEQ ID NO:12中所示的FR H2、如在SEQ ID NO:13中所示的FR H3和如在SEQ IDNO:14中所示的FR H4。
在实施例中，轻链可变结构域包含：如在SEQ ID NO:1中所示的CDR L1、如在SEQID NO:2中所示的CDR L2、如在SEQ ID NO:3中所示的CDR L3、如在SEQ ID NO:7中所示的FRL1、如在SEQ ID NO:8中所示的FR L2、如在SEQ ID NO:9中所示的FR L3和如在SEQ ID NO:10中所示的FR L4，并且重链可变结构域包含：如在SEQ ID NO:4中所示的CDR H1、如在SEQID NO:5中所示的CDR H2和如在SEQ ID NO:6中所示的CDR H3。在实施例中，轻链可变结构域包含：如在SEQ ID NO:1中所示的CDR L1、如在SEQ ID NO:2中所示的CDR L2和如在SEQID NO:3中所示的CDR L3并且重链可变结构域包含：如在SEQ ID NO:4中所示的CDR H1、如在SEQ ID NO:5中所示的CDR H2、如在SEQ ID NO:6中所示的CDR H3、如在SEQ ID NO:11中所示的FR H1、如在SEQ IDNO:12中所示的FR H2、如在SEQ ID NO:13中所示的FR H3和如在SEQ ID NO:14中所示的FR H4。
在一个实施例中，轻链可变结构域包含：如在SEQ ID NO:1中所示的CDR L1、如在SEQ ID NO:2中所示的CDR L2、如在SEQ ID NO:3中所示的CDR L3、如在SEQ IDNO:7中所示的FR L1、如在SEQ ID NO:8中所示的FR L2、如在SEQ ID NO:9中所示的FR L3和如在SEQ IDNO:10中所示的FR L4，并且重链可变结构域包含：如在SEQ IDNO:4中所示的CDR H1、如在SEQ ID NO:5中所示的CDR H2、如在SEQ ID NO:6中所示的CDR H3、如在SEQ ID NO:11中所示的FR H1、如在SEQ ID NO:12中所示的FRH2、如在SEQ ID NO:13中所示的FRH3和如在SEQID NO:14中所示的FR H4。在一个另外的实施例中，抗体是抗体9F2A11。
在实施例中，轻链可变结构域包含SEQ ID NO:15的序列。在实施例中，轻链可变结构域是SEQ ID NO:15的序列。在实施例中，重链可变结构域包含SEQ ID NO:16的序列。在实施例中，重链可变结构域是SEQ ID NO:16的序列。在实施例中，轻链可变结构域包含SEQ IDNO:15的序列，并且重链可变结构域包含SEQ ID NO:16的序列。在实施例中，轻链可变结构域是SEQ ID NO:15的序列，并且重链可变结构域是SEQ ID NO:16的序列。
在实施例中，抗体是人源化抗体。在实施例中，抗体是嵌合抗体。在实施例中，抗体是Fab'片段。在实施例中，抗体是单链抗体(scFv)。在实施例中，轻链可变结构域和重链可变结构域形成scFv的一部分。在实施例中，scFv包含SEQ ID NO:15的序列。在实施例中，scFv包含SEQ ID NO:15的序列和SEQ ID NO:16的序列。
在实施例中，抗体是IgG。在实施例中，抗体是IgG1。在实施例中，抗体是人IgG。
在实施例中，抗体能够结合CD5。在实施例中，抗体与CD5结合。在实施例中，CD5形成细胞的一部分。在实施例中，细胞为淋巴样细胞。在实施例中，细胞是B细胞或T细胞。在实施例中，细胞为B细胞。在实施例中，细胞为T细胞。在实施例中，抗体附着于可检测的标记物。
重组蛋白组合物
如上所述，本文提供的轻链可变(VL)结构域和重链可变(VH)结构域，包含其实施例，可以各自独立地形成抗体的一部分、抗体变体、抗体片段、抗体变体片段或重组蛋白(例如，嵌合抗原受体、双特异性抗体)。本文尤其提供了重组蛋白(例如，嵌合抗原受体、双特异性抗体)，其包含如本文提供的轻链可变(VL)结构域和/或重链可变(VH)结构域，因此能够结合CD5并将效应细胞募集到CD5表达细胞(例如，T细胞)上，从而有效地抑制CD5活性并介导由CD5活性引起的免疫抑制的逆转。在实施例中，重组蛋白是嵌合抗原受体(CAR)。在实施例中，重组蛋白是双特异性抗体。
嵌合抗原受体蛋白
本文尤其提供了重组蛋白，其中重组蛋白是嵌合抗原受体。重组蛋白的抗体区可以包含本文提供的轻链和重链可变结构域中的任一者，包含其实施例。本文提供的轻链可变(VL)结构域和/或重链可变(VH)结构域可以形成嵌合抗原受体的一部分。因此，在一个方面，提供了一种重组蛋白，其包含：(i)抗体区，该抗体区包含：(a)重链可变结构域，该重链可变结构域包含如在SEQ ID NO:1中所示的CDR H1、如在SEQ IDNO:2中所示的CDR H2和如在SEQ ID NO:3中所示的CDR H3；和(b)轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含如在SEQID NO:4中所示的CDR L1、如在SEQ ID NO:5中所示的CDR L2和如在SEQ ID NO:6中所示的CDR L3；以及(ii)跨膜结构域。
如本文提供的“抗体区”是指单价或多价蛋白部分，其形成本文提供的重组蛋白(例如，CAR)的一部分，包含其实施例。因此，本领域普通技术人员会立即认识到抗体区是能够结合抗原(表位)的蛋白质部分。因此，本文提供的抗体区可以包含抗体的结构域(例如，轻链可变(VL)结构域、重链可变(VH)结构域)或抗体片段(例如，Fab)。在实施例中，抗体区是蛋白质缀合物。如本文提供的“蛋白质缀合物”是指由多于一种的多肽组成的构建体，其中多肽共价或非共价结合在一起。在实施例中，蛋白质缀合物包含共价附接到scFv部分(单价scFv)的Fab部分(单价Fab)。在实施例中，蛋白质缀合物包含多个(至少两个)Fab部分。在实施例中，蛋白质缀合物的多肽由一种核酸分子编码。在实施例中，蛋白质缀合物的多肽由不同的核酸分子编码。在实施例中，多肽通过接头连接。在实施例中，多肽通过化学接头连接。在实施例中，抗体区是scFv。抗体区可以包含轻链可变(VL)结构域和/或重链可变(VH)结构域。
如本文提供的“跨膜结构域”是指形成生物膜的一部分的多肽。本文提供的跨膜结构域能够从膜的一侧跨越生物膜(例如，细胞膜)到膜的另一侧。在实施例中，跨膜结构域从细胞膜的细胞内侧跨越到细胞外侧。跨膜结构域可以包含非极性疏水残基，其将本文提供的蛋白质(包含其实施例)锚定在生物膜(例如，T细胞的细胞膜)中。设想了能够锚定本文提供的蛋白质的任何跨膜结构域，包含其实施例。跨膜结构域的非限制性实例包含CD28、CD8、CD4或CD3-zeta的跨膜结构域。在优选的实施例中，跨膜结构域是CD4跨膜结构域。
在实施例中，跨膜结构域是CD28跨膜结构域。如本文提供的术语“CD28跨膜结构域”包重组或天然存在形式的CD28的跨膜结构域中的任一者，或其保持CD28跨膜结构域活性(例如，与CD28跨膜结构域相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的变体或同源物。在一些方面，与天然存在的CD28跨膜结构域多肽相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，CD28是如由NCBI序列参考GI:340545506识别的蛋白质、其同源物或功能性片段。
在实施例中，跨膜结构域是CD8跨膜结构域。如本文提供的术语“CD8跨膜结构域”包含重组或天然存在形式的CD8跨膜结构域中的任一者，或其保持CD8跨膜结构域活性(例如，与CD8跨膜结构域相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的变体或同源物。在一些方面，与天然存在的CD8跨膜结构域多肽相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，CD8是如由NCBI序列参考GI:225007534识别的蛋白质、其同源物或功能性片段。
在实施例中，跨膜结构域是CD4跨膜结构域。如本文提供的术语“CD4跨膜结构域”包含重组或天然存在形式的CD4跨膜结构域中的任一者，或其保持CD4跨膜结构域活性(例如，与CD4跨膜结构域相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的变体或同源物。在一些方面，与天然存在的CD4跨膜结构域多肽相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，CD4是如由NCBI序列参考GI:303522473识别的蛋白质、其同源物或功能性片段。
在实施例中，跨膜结构域是CD3-ζ(也被称为CD247)跨膜结构域。如本文提供的术语“CD3-ζ跨膜结构域”包含重组或天然存在形式的CD3-ζ的跨膜结构域中的任一者，或其保持CD3-ζ跨膜结构域活性(例如，与CD3-ζ跨膜结构域相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的变体或同源物。在一些方面，与天然存在的CD3-ζ跨膜结构域多肽相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，CD3-ζ是如由NCBI序列参考GI:166362721识别的蛋白质、其同源物或功能性片段。
本文提供的重组蛋白(例如嵌合抗原受体)可以包含本文所述的CD5抗体或其片段中的任一者。因此，重组蛋白(例如，嵌合抗原受体)可以包含本文提供的CDR、FR、重链可变结构域或轻链可变结构域中的任一者。例如，重链可变结构域可以包含SEQ IDNO:16的序列。在实施例中，重链可变结构域是SEQ ID NO:16的序列。例如，轻链可变结构域可以包含SEQ ID NO:15的序列。在实施例中，轻链可变结构域是SEQ ID NO:15的序列。
在实施例中，重组蛋白与CD5蛋白结合。在实施例中，CD5蛋白是人CD5蛋白。在实施例中，CD5蛋白形成细胞的一部分。在实施例中，CD5蛋白在细胞的表面上表达。
在实施例中，抗体区包含Fc结构域。在实施例中，抗体区包含间隔区。在实施例中，间隔区位于跨膜结构域和抗体区之间。本文提供的“间隔区”是连接抗体区与跨膜结构域的多肽。在实施例中，间隔区将重链恒定区与跨膜结构域连接起来。在实施例中，间隔区包含Fc区。在实施例中，间隔区是Fc区。设想用于本文提供的重组蛋白组合物的间隔区的实例包含但不限于免疫球蛋白分子或其片段(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)和免疫球蛋白分子或其片段(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)，包含影响Fc受体结合的突变。在实施例中，间隔区是铰链区。
在实施例中，如本文提供的重组蛋白(包含其实施例)进一步包含细胞内共刺激信号传导结构域。本文提供的“细胞内共刺激信号转导结构域”包含能够响应抗原与本文提供的抗体区(包含其实施例)的结合而提供共刺激信号转导的氨基酸序列。在实施例中，共刺激信号转导结构域的信号转导导致细胞因子的产生和表达该细胞因子的T细胞的增殖。在实施例中，细胞内共刺激信号传导结构域是CD28细胞内共刺激信号传导结构域、4-1BB细胞内共刺激信号传导结构域、ICOS细胞内共刺激信号传导结构域或OX-40细胞内共刺激信号传导结构域。在实施例中，细胞内共刺激信号传导结构域是CD28细胞内共刺激信号传导结构域。在实施例中，细胞内共刺激信号传导结构域是4-1BB细胞内共刺激信号传导结构域。在实施例中，细胞内共刺激信号转导结构域是ICOS细胞内共刺激信号转导结构域。在实施例中，细胞内共刺激信号转导结构域是OX-40细胞内共刺激信号转导结构域。
在实施例中，如本文提供的重组蛋白(包含其实施例)进一步包含细胞内T细胞信号传导结构域。本文提供的“细胞内T细胞信号转导结构域”包含能够响应抗原与本文提供的抗体区(包含其实施例)的结合而提供初级信号转导的氨基酸序列。在实施例中，细胞内T细胞信号转导结构域的信号转导导致表达其的T细胞的激活。在实施例中，细胞内T细胞信号转导结构域的信号转导导致表达其的T细胞的增殖(细胞分裂)。在实施例中，细胞内T细胞信号转导结构域的信号转导导致该T细胞表达本领域已知的具有活化T细胞特征的蛋白质(例如，CTLA-4、PD-1、CD28、CD69)。在实施例中，细胞内T细胞信号传导结构域包含人CD3复合物的ζ链的信号传导结构域。在实施例中，细胞内T细胞信号转导结构域是CD3ζ细胞内T细胞信号转导结构域。
如本文所提及的术语“CTLA-4”包含重组或天然存在形式的细胞毒性T淋巴细胞相关蛋白4蛋白中的任一者，也被称为CD152(分化簇152)，或其保持CTLA-4活性(例如，与CTLA-4相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的变体或同源物。在一些方面，与天然存在的CTLA-4蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，CTLA-4蛋白与由UniProt参考编号P16410识别的蛋白质或与其具有基本同一性的变体或同源物基本上相同。
如本文所提及的术语“CD28”包含重组或天然存在形式的分化簇28蛋白中的任一者，或其保持CD28活性(例如，与CD28相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的变体或同源物。在一些方面，与天然存在的CD28蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，CD28蛋白与由UniProt参考编号P10747识别的蛋白质或与其具有基本同一性的变体或同源物基本上相同。
如本文所提及的术语“CD69”包含重组或天然存在形式的分化簇69蛋白中的任一者，或其保持CD69活性(例如，与CD69相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的变体或同源物。在一些方面，与天然存在的CD69蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，CD69蛋白与由UniProt参考编号Q07108识别的蛋白质或与其具有基本同一性的变体或同源物基本上相同。
如本文所提及的术语“4-1BB”包含重组或天然存在形式的4-1BB蛋白中的任一者，也被称为肿瘤坏死因子受体超家族成员9(TNFRSF9)、分化簇137(CD137)并由淋巴细胞活化(ILA)诱导，或其保持4-1BB活性(例如，与4-1BB相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的变体或同源物。在一些方面，与天然存在的EGFR蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，4-1BB蛋白与由UniProt参考编号Q07011识别的蛋白质或与其具有基本同一性的变体或同源物基本上相同。
在实施例中，如本文提供的重组蛋白(包含其实施例)进一步包含自切割肽基序列。在实施例中，自切割肽基接头序列是T2A序列或2A序列。在实施例中，自切割肽基接头序列是T2A序列。在实施例中，自切割肽基接头序列是2A序列。
双特异性抗体
如本文提供的轻链可变(VL)结构域和重链可变(VH)结构域可以形成双特异性抗体的一部分。因此，第二抗体区可以包含本文提供的轻链和/或重链中的任一者可变结构域，包含其实施例。在另一方面，提供了一种重组蛋白，其包含：(i)能够结合效应细胞配体的第一抗体区；和(ii)第二抗体区，该第二抗体区包含：(a)轻链可变结构域，该轻链可变结构域包含如在SEQ ID NO:1中所示的CDR L1、如在SEQ ID NO:2中所示的CDR L2和如在SEQID NO:3中所示的CDR L3；和(b)重链可变结构域，该重链可变结构域如在SEQ ID NO:4中所示的CDR H1、如在SEQ ID NO:5中所示的CDR H2和如在SEQ ID NO:6中所示的CDR H3。
本文提供的术语“效应细胞配体”是指在免疫系统的效应细胞(例如，细胞毒性T细胞、辅助T细胞、B细胞、自然杀伤细胞)上表达的细胞表面分子。当第一抗体区与在效应细胞上表达的效应细胞配体结合时，效应细胞被激活并且能够发挥其功能(例如，选择性地杀死或根除恶性的、受感染的或不健康的细胞)。在实施例中，效应细胞配体是CD3蛋白。在实施例中，效应细胞配体是CD16蛋白。在实施例中，效应细胞配体是CD32蛋白。在实施例中，效应细胞配体是NKp46蛋白。如本文提供的第一抗体区可以是抗体、抗体变体、抗体片段或抗体变体片段。
如本文所提及的“CD3蛋白”包含重组或天然存在形式的分化簇3(CD3)蛋白或其变体或同源物中的任一者，其包括介导信号转导并维持CD3复合物活性(例如，与CD3复合物相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的CD3复合物。在一些方面，与CD3复合物中天然存在的CD3蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。
如本文所提及的“CD16蛋白”包含重组或天然存在形式的分化簇16(CD16)蛋白中的任一者，也被称为低亲和力免疫球蛋白γFc区受体III-A，或其保持CD16活性(例如，与CD16相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的变体或同源物。在一些方面，与天然存在的CD16蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，CD16蛋白与由UniProt参考编号P08637识别的蛋白质或与其具有基本同一性的变体或同源物基本上相同。
如本文所提及的“CD32蛋白”包含重组或天然存在形式的分化簇32(CD32)蛋白中的任一者，也被称为低亲和力免疫球蛋白γFc区受体II-A，或其保持CD32活性(例如，与CD32相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的变体或同源物。在一些方面，与天然存在的CD32蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，CD32蛋白与由UniProt参考编号P12318识别的蛋白质或与其具有基本同一性的变体或同源物基本上相同。
如本文所提及的“NKp46蛋白”包含重组或天然存在形式的NKp46蛋白中的任一者，也被称为天然细胞毒性触发受体1，或其保持NKp46活性(例如，与NKp46相比，在至少50％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的活性内)的变体或同源物。在一些方面，与天然存在的NKp46蛋白相比，变体或同源物在整个序列或序列的一部分(例如50、100、150或200个连续氨基酸部分)上具有至少90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的氨基酸序列同一性。在实施例中，NKp46蛋白与由UniProt参考编号O76036识别的蛋白质或与其具有基本同一性的变体或同源物基本上相同。
本文提供的重组蛋白(例如，双特异性抗体)可以包含本文所述的CD5抗体或其片段中的任一者。因此，重组蛋白(例如，双特异性抗体)可以包含本文提供的CDR、FR、重链可变结构域或轻链可变结构域中的任一者。例如，重链可变结构域可以包含SEQ ID NO:16的序列。在实施例中，重链可变结构域是SEQ ID NO:16的序列。例如，轻链可变结构域可以包含SEQ ID NO:15的序列。在实施例中，轻链可变结构域是SEQ ID NO:15的序列。
本文提供的重组蛋白(例如，双特异性抗体)的重链可变结构域可以包含本文提供的CDR或FR中的任一者。因此，重链可变结构域可以包含，例如，如在SEQ ID NO:11中所示的FR H1、如在SEQ ID NO:12中所示的FR H2、如在SEQ ID NO:13中所示的FR H3和如在SEQ IDNO:14中所示的FR H4。
本文提供的重组蛋白(例如，双特异性抗体)的轻链可变结构域可以包含本文提供的CDR或FR中的任一者。例如，轻链可变结构域可以包含，例如，如在SEQ ID NO:7中所示的FR L1、如在SEQ ID NO:8中所示的FR L2、如在SEQ ID NO:9中所示的FR L3和如在SEQ IDNO:10中所示的FR L4。
在实施例中，第一抗体区是第一Fab'片段，或者第二抗体区是第二Fab'片段。在实施例中，第一抗体区是单链可变片段(scFv)，或者第二抗体区是第二单链可变片段(scFv)。
在实施例中，第二抗体区结合至CD5。在实施例中，CD5是人CD5。在实施例中，CD5形成细胞的一部分。在实施例中，CD5在细胞的表面上表达。
核酸组合物
本文提供的组合物包含编码本文提供的抗CD5抗体和重组蛋白的核酸分子，包含其实施例。因此，在一个方面，提供了编码本文提供的抗体的分离的核酸，包含其实施例。
在另一方面，提供了编码如本文提供的重组蛋白的分离的核酸，包含其实施例。
药物组合物
本文提供的组合物包含药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的本文提供的抗CD5抗体和重组蛋白，包含其实施例。因此，在一个方面，提供了一种药物组合物，其包含治疗有效量的本文提供的抗体(包含其实施例)和药学上可接受的赋形剂。
在另一方面，提供了一种药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的本文所提供的重组蛋白(包含其实施例)和药学上可接受的赋形剂。
在实施例中，该药物组合物进一步包含治疗有效量的程序性死亡1(PD-1)抑制剂。在实施例中，PD-1抑制剂是纳武单抗、帕博利珠单抗或西米普利单抗。在实施例中，PD-1抑制剂是纳武单抗。在实施例中，PD-1抑制剂是帕博利珠单抗。在实施例中，PD-1抑制剂是西米普利单抗。在实施例中，抗体的治疗有效量和PD-1抑制剂的治疗有效量是组合协同量。
治疗方法
本文提供的组合物(例如，抗CD5抗体和重组蛋白)，包含其实施例，被认为提供了对疾病如癌症的有效治疗。因此，在一个方面，提供了一种治疗有此需要的受试者所患癌症的方法，该方法包含向受试者施用治疗有效量的本文提供的抗体(包含其实施例)，从而治疗受试者所患癌症。
在另一方面，提供了一种治疗有此需要的受试者所患癌症的方法，该方法包含向受试者施用治疗有效量的本文描述的重组蛋白(包含其实施例)，从而治疗受试者所患癌症。
在实施例中，癌症是肺癌、卵巢癌、骨肉瘤、膀胱癌、宫颈癌、肝癌、肾癌、皮肤癌(例如，默克尔细胞癌)、睾丸癌、白血病、淋巴瘤、头颈癌、结肠直肠癌、前列腺癌、胰腺癌、黑色素瘤、乳腺癌或成神经细胞瘤。在实施例中，该癌症是黑色素瘤。在实施例中，该癌症是乳腺癌。在实施例中，该癌症是胰腺癌。
在实施例中，该方法进一步包含向受试者施用第二治疗剂。在实施例中，该方法进一步包含施用治疗有效量的PD-1抑制剂。在实施例中，抗体的有效量和PD-1抑制剂的有效量是组合协同量。
在实施例中，抗体和PD-1抑制剂依序或同时被施用。在实施例中，抗体和PD-1抑制剂依序被施用。在实施例中，抗体和PD-1抑制剂同时被施用。在实施例中，抗体和PD-1抑制剂在施用前混合在一起。在实施例中，抗体和PD-1抑制剂以单一剂型施用。在实施例中，抗体和PD-1抑制剂以两种独立的剂型施用。
在一个方面，提供了一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，该方法包含向受试者施用组合有效量的如本文提供的抗体(包含其实施例)和PD-1抑制剂，从而在受试者中治疗癌症。在实施例中，组合有效量是组合协同量。
在实施例中，本文提供的抗体的有效量(包含其实施例)和PD-1抑制剂的有效量是组合协同量。如本文所用的“组合协同量”是指第一量(例如，本文提供的抗体的量，包含其实施例)和第二量(例如，PD-1抑制剂的量)的总和，其导致协同效应(即，大于相加效应的效应)。因此，在本文中可互换使用的术语“协同作用(synergy)”、“协同性(synergism)”、“协同(synergistic)”、“组合协同量”和“协同治疗作用”是指组合施用的化合物的测量效果，其中测量效果大于每种化合物作为单一药剂单独施用的单独效果的总和。在实施例中，所施用的化合物(例如，本文提供的抗体和PD-1抑制剂)的测量效果是每种化合物作为单一药剂单独施用的单独效果的总和的1倍、1.5倍、2倍、3倍、4倍、5倍、10倍或更大。
在实施例中，当与PD-1抑制剂分开使用时，协同量可以是本文提供的抗体量的约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％。在实施例中，当与本文提供的抗体分开使用时，协同量可以是PD-1抑制剂的量的约0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4、1.5、1.6、1.7、1.8、1.9、2.0、2.1、2.2、2.3、2.4、2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8、3.9、4.0、4.1、4.2、4.3、4.4、4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、9.5、9.6、9.7、9.8、9.9、10.0、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99％。
在实施例中，抗体以约0.01nM至约10nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.05nM至约10nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.1nM至约10nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.5nM至约10nM的量施用。在实施例中，抗体以约1nM至约10nM的量施用。在实施例中，抗体以约2nM至约10nM的量施用。在实施例中，抗体以约4nM至约10nM的量施用。在实施例中，抗体以约6nM至约10nM的量施用。在实施例中，抗体以约4nM至约10nM的量施用。在实施例中，抗体以约8nM至约10nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.01nM、0.05nM、0.1nM、0.5nM、1nM、2nM、2nM、4nM、5nM、6nM、7nM、8nM、9nM或10nM的量施用。
在实施例中，抗体以0.01nM至10nM的量施用。在实施例中，抗体以0.05nM至10nM的量施用。在实施例中，抗体以0.1nM至10nM的量施用。在实施例中，抗体以0.5nM至10nM的量施用。在实施例中，抗体以1nM至10nM的量施用。在实施例中，抗体以2nM至10nM的量施用。在实施例中，抗体以4nM至10nM的量施用。在实施例中，抗体以6nM至10nM的量施用。在实施例中，抗体以4nM至10nM的量施用。在实施例中，抗体以8nM至10nM的量施用。在实施例中，抗体以0.01nM、0.05nM、0.1nM、0.5nM、1nM、2nM、2nM、4nM、5nM、6nM、7nM、8nM、9nM或10nM的量施用。
在实施例中，抗体以约0.01nM至约8nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.05nM至约8nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.1nM至约8nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.5nM至约8nM的量施用。在实施例中，抗体以约1nM至约8nM的量施用。在实施例中，抗体以约2nM至约8nM的量施用。在实施例中，抗体以约4nM至约8nM的量施用。在实施例中，抗体以约6nM至约8nM的量施用。在实施例中，抗体以约4nM至约8nM的量施用。
在实施例中，抗体以0.01nM至8nM的量施用。在实施例中，抗体以0.05nM至8nM的量施用。在实施例中，抗体以0.1nM至8nM的量施用。在实施例中，抗体以0.5nM至8nM的量施用。在实施例中，抗体以1nM至8nM的量施用。在实施例中，抗体以2nM至8nM的量施用。在实施例中，抗体以4nM至8nM的量施用。在实施例中，抗体以6nM至8nM的量施用。在实施例中，抗体以4nM至8nM的量施用。
在实施例中，抗体以约0.01nM至约6nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.05nM至约6nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.1nM至约6nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.5nM至约8nM的量施用。在实施例中，抗体以约1nM至约6nM的量施用。在实施例中，抗体以约2nM至约6nM的量施用。在实施例中，抗体以约4nM至约6nM的量施用。
在实施例中，抗体以0.01nM至6nM的量施用。在实施例中，抗体以0.05nM至6nM的量施用。在实施例中，抗体以0.1nM至6nM的量施用。在实施例中，抗体以0.5nM至6nM的量施用。在实施例中，抗体以1nM至6nM的量施用。在实施例中，抗体以2nM至6nM的量施用。在实施例中，抗体以4nM至6nM的量施用。
在实施例中，抗体以约0.01nM至约4nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.05nM至约4nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.1nM至约4nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.5nM至约4nM的量施用。在实施例中，抗体以约1nM至约4nM的量施用。在实施例中，抗体以约2nM至约4nM的量施用。
在实施例中，抗体以0.01nM至4nM的量施用。在实施例中，抗体以0.05nM至4nM的量施用。在实施例中，抗体以0.1nM至4nM的量施用。在实施例中，抗体以0.5nM至4nM的量施用。在实施例中，抗体以1nM至4nM的量施用。在实施例中，抗体以2nM至4nM的量施用。
在实施例中，抗体以约0.01nM至约2nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.05nM至约2nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.1nM至约2nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.5nM至约2nM的量施用。在实施例中，抗体以约1nM至约2nM的量施用。
在实施例中，抗体以0.01nM至2nM的量施用。在实施例中，抗体以0.05nM至2nM的量施用。在实施例中，抗体以0.1nM至2nM的量施用。在实施例中，抗体以0.5nM至2nM的量施用。在实施例中，抗体以1nM至2nM的量施用。
在实施例中，抗体以约0.01nM至约1nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.05nM至约1nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.1nM至约1nM的量施用。在实施例中，抗体以约0.5nM至约1nM的量施用。
在实施例中，抗体以0.01nM至1nM的量施用。在实施例中，抗体以0.05nM至1nM的量施用。在实施例中，抗体以0.1nM至1nM的量施用。在实施例中，抗体以0.5nM至1nM的量施用。
在实施例中，抗体以约3.15nM的量施用。在实施例中，抗体以3.15nM的量施用。在实施例中，抗体以约1.05nM的量施用。在实施例中，抗体以1.05nM的量施用。
应当理解，本文提供的重组蛋白(即，双特异性抗体或嵌合抗原受体)(包含其实施例)可以以本文所述用于施用抗体的任何浓度(例如，0.01nM-10nM)施用。
在实施例中，抗体以约10μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约20μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约30μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约40μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约50μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约60μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约70μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约80μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约90μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约100μg至约500μg的量施用。
在实施例中，抗体以约110μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约120μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约130μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约140μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约150μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约160μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约170μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约180μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约190μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约200μg至约500μg的量施用。
在实施例中，抗体以约210μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约220μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约230μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约240μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约250μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约260μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约270μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约280μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约290μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约300μg至约500μg的量施用。
在实施例中，抗体以约310μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约320μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约330μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约340μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约350μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约360μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约370μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约380μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约390μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约400μg至约500μg的量施用。
在实施例中，抗体以约410μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约420μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约430μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约440μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约450μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约460μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约470μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约480μg至约500μg的量施用。在实施例中，抗体以约490μg至约500μg的量施用。
在实施例中，抗体以约10μg至约400μg的量施用。在实施例中，抗体以约20μg至约400μg的量施用。在实施例中，抗体以约30μg至约400μg的量施用。在实施例中，抗体以约40μg至约400μg的量施用。在实施例中，抗体以约50μg至约400μg的量施用。在实施例中，抗体以约60μg至约400μg的量施用。在实施例中，抗体以约70μg至约400μg的量施用。在实施例中，抗体以约80μg至约400μg的量施用。在实施例中，抗体以约90μg至约400μg的量施用。在实施例中，抗体以约100μg至约400μg的量施用。
在实施例中，抗体以约10μg至约300μg的量施用。在实施例中，抗体以约20μg至约300μg的量施用。在实施例中，抗体以约30μg至约300μg的量施用。在实施例中，抗体以约40μg至约300μg的量施用。在实施例中，抗体以约50μg至约300μg的量施用。在实施例中，抗体以约60μg至约300μg的量施用。在实施例中，抗体以约70μg至约300μg的量施用。在实施例中，抗体以约80μg至约300μg的量施用。在实施例中，抗体以约90μg至约300μg的量施用。在实施例中，抗体以约100μg至约300μg的量施用。
在实施例中，抗体以约10μg至约200μg的量施用。在实施例中，抗体以约20μg至约200μg的量施用。在实施例中，抗体以约30μg至约200μg的量施用。在实施例中，抗体以约40μg至约200μg的量施用。在实施例中，抗体以约50μg至约200μg的量施用。在实施例中，抗体以约60μg至约200μg的量施用。在实施例中，抗体以约70μg至约200μg的量施用。在实施例中，抗体以约80μg至约200μg的量施用。在实施例中，抗体以约90μg至约200μg的量施用。在实施例中，抗体以约100μg至约200μg的量施用。
在实施例中，抗体以约10μg至约100μg的量施用。在实施例中，抗体以约20μg至约100μg的量施用。在实施例中，抗体以约30μg至约100μg的量施用。在实施例中，抗体以约40μg至约100μg的量施用。在实施例中，抗体以约50μg至约100μg的量施用。在实施例中，抗体以约60μg至约100μg的量施用。在实施例中，抗体以约70μg至约100μg的量施用。在实施例中，抗体以约80μg至约100μg的量施用。在实施例中，抗体以约90μg至约100μg的量施用。
在实施例中，抗体以约10μg、20μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg、100μg、110μg、120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg、210μg、220μg、230μg、240μg、250μg、260μg、270μg、280μg、290μg、300μg、310μg、320μg、330μg、340μg、350μg、360μg、370μg、380μg、390μg、400μg、410μg、420μg、430μg、440μg、450μg、460μg、470μg、480μg、490μg或500μg的量施用。
在实施例中，抗体以10μg、20μg、30μg、40μg、50μg、60μg、70μg、80μg、90μg、100μg、110μg、120μg、130μg、140μg、150μg、160μg、170μg、180μg、190μg、200μg、210μg、220μg、230μg、240μg、250μg、260μg、270μg、280μg、290μg、300μg、310μg、320μg、330μg、340μg、350μg、360μg、370μg、380μg、390μg、400μg、410μg、420μg、430μg、440μg、450μg、460μg、470μg、480μg、490μg或500μg的量施用。
应当理解，本文提供的重组蛋白(即，双特异性抗体或嵌合抗原受体)(包含其实施例)可以以本文所述用于施用抗体的任何浓度(例如，10μg-500μg)施用。
在实施例中，重组蛋白或抗体以约200μg的量施用。在实施例中，重组蛋白或抗体以200μg的量施用。
应理解，本文所描述的实例和实施例仅为了说明性目的，并且根据其的各种修改或变化应由所属领域的技术人员想到并且包含在本申请的精神和范围以及所附权利要求书的范围内。本文引用的所有出版物、专利和专利申请均出于所有目的据此通过引用以其整体并入。
实例
实例1
我们已发表和未发表的数据表明，CD5激活肿瘤相关B细胞和T细胞中的STAT3，导致免疫抑制。阻断肿瘤相关T细胞或CD5阴性B细胞中的CD5大大增强抗肿瘤免疫应答(图1A-1C和图2C)。当直接比较时，CD5和PD1表达介导了肿瘤CD8+T细胞的抑制，并且通过多种途径阻断CD5在小鼠免疫系统中具有比PD-1抗体更强的免疫刺激作用(图2A-2E)。
我们现在已经开发了一种新的抗人CD5单克隆抗体(9F2A11)(图3A-3B)。我们已经对单克隆抗体进行了测序，并且它是独特的，因此是新的(图4A-4B)。
这种新的抗人CD5抗体能够引发有效的人T细胞活性(图5)。在实验条件下，单克隆CD5抗体诱导人T细胞活化的能力优于市售CD5抗体(图4)。此外，当单克隆CD5抗体与临床PD-1抗体联合使用时，检测到人T细胞活化中的协同作用(图6A-6B)。此外，单克隆CD5(9F2A11)诱导人T细胞活化的能力优于PD1抗体(图6A-6B)。
P实施例
P实施例1.一种抗CD5抗体，其包括轻链可变结构域和重链可变结构域，
其中所述轻链可变结构域包括：
如在SEQ ID NO:1中所示的CDR L1、如在SEQ ID NO:2中所示的CDR L2和如在SEQID NO:3中所示的CDR L3；并且
其中所述重链可变结构域包括：
如在SEQ ID NO:4中所示的CDR H1、如在SEQ ID NO:5中所示的CDR H2和如在SEQID NO:6中所示的CDR H3。
P实施例2.根据P实施例1所述的抗体，其中所述轻链可变结构域包括如在SEQ IDNO:7中所示的FR L1、如在SEQ ID NO:8中所示的FR L2、如在SEQ ID NO:9中所示的FR L3和如在SEQ ID NO:10中所示的FR L4。
P实施例3.根据P实施例1或2所述的抗体，其中所述重链可变结构域包括如在SEQID NO:11中所示的FR H1、如在SEQ ID NO:12中所示的FR H2、如在SEQ IDNO:13中所示的FRH3和如在SEQ ID NO:14中所示的FR H4。
P实施例4.根据P实施例1至3中任一者所述的抗体，其中所述轻链可变结构域包括SEQ ID NO:15的序列。
P实施例5.根据P实施例1至4中任一者所述的抗体，其中所述重链可变结构域包括SEQ ID NO:16的序列。
P实施例6.根据P实施例1至7中任一者所述的抗体，其中所述抗体是人源化抗体。
P实施例7.根据P实施例1至5中任一者所述的抗体，其中所述抗体是嵌合抗体。
P实施例8.根据P实施例1至5中任一者所述的抗体，其中所述抗体是Fab'片段。
P实施例9.根据P实施例1至6中任一者所述的抗体，其中所述抗体是单链抗体(scFv)。
P实施例10.根据P实施例1至5或9中任一者所述的抗体，其中所述轻链可变结构域和所述重链可变结构域形成scFv的一部分。
P实施例11.根据P实施例1至7中任一者所述的抗体，其中所述抗体是IgG。
P实施例12.根据P实施例1至7中任一者所述的抗体，其中所述抗体是IgG1。
P实施例13.根据P实施例1至12中任一者所述的抗体，其中所述抗体能够结合CD5。
P实施例14.根据P实施例1至13中任一者所述的抗体，其中所述抗体结合至CD5。
P实施例15.根据P实施例14所述的抗体，其中所述CD5形成细胞的一部分。
P实施例16.根据P实施例15所述的抗体，其中所述细胞是淋巴样细胞。
P实施例17.根据P实施例15或16所述的抗体，其中所述细胞是B细胞或T细胞。
P实施例18.一种分离的核酸，其编码根据P实施例1所述的抗体。
P实施例19.一种药物组合物，其包括治疗有效量的根据P实施例1至17中任一者所述的抗体和药学上可接受的赋形剂。
P实施例20.根据P实施例19所述的药物组合物，其进一步包括治疗有效量的程序性死亡1(PD-1)抑制剂。
P实施例21.根据P实施例19或20所述的药物组合物，其中所述PD-1抑制剂是纳武单抗、帕博利珠单抗或西米普利单抗。
P实施例22.根据P实施例19至21中任一者所述的药物组合物，其中所述抗体的所述治疗有效量和所述PD-1抑制剂的所述治疗有效量是组合协同量。
P实施例23.一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的P实施例1至17中任一者所述的抗体，从而在所述受试者中治疗癌症。
P实施例24.根据P实施例23所述的方法，其进一步包括施用治疗有效量的PD-1抑制剂。
P实施例25.根据P实施例24所述的方法，其中抗体的有效量和PD-1抑制剂的有效量是组合协同量。
P实施例26.根据P实施例24或25所述的方法，其中所述抗体和所述PD-1抑制剂依序或同时被施用。
P实施例27.根据P实施例24至26中任一者所述的方法，其中所述抗体和所述PD-1抑制剂在施用前混合在一起。
P实施例28.根据P实施例24至27中任一者所述的方法，其中所述抗体和所述PD-1抑制剂以单一剂型施用。
P实施例29.根据P实施例24至26中任一者所述的方法，其中所述抗体和所述PD-1抑制剂以两种分开的剂型施用。
P实施例30.一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用组合有效量的根据P实施例1至17中任一者所述的抗体和PD-1抑制剂，从而在所述受试者中治疗癌症。
P实施例31.根据P实施例30所述的方法，其中所述组合有效量是组合协同量。
P实施例32.一种重组蛋白，其包括：
(i)抗体区，所述抗体区包括：
(a)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括如在SEQ ID NO:1中所示的CDRL1、如在SEQ ID NO:2中所示的CDR L2和如在SEQ ID NO:3中所示的CDR L3；和
(b)重链可变结构域，所述重链可变结构域如在SEQ ID NO:4中所示的CDR H1、如在SEQ ID NO:5中所示的CDR H2和如在SEQ ID NO:6中所示的CDR H3；和
(ii)跨膜结构域。
P实施例33.一种分离的核酸，其编码根据P实施例32所述的重组蛋白。
P实施例34.一种药物组合物，其包括治疗有效量的根据P实施例32所述的重组蛋白和药学上可接受的赋形剂。
P实施例35.一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的根据P实施例32所述的重组蛋白，从而在所述受试者中治疗癌症。
P实施例36.根据P实施例35所述的方法，其进一步包括施用治疗有效量的PD-1抑制剂。
P实施例37.一种重组蛋白，其包括：
(i)能够结合效应细胞配体的第一抗体区；和
(ii)第二抗体区，所述第二抗体区包括：
(a)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括如在SEQ ID NO:1中所示的CDRL1、如在SEQ ID NO:2中所示的CDR L2和如在SEQ ID NO:3中所示的CDR L3；和
(b)重链可变结构域，所述重链可变结构域如在SEQ ID NO:4中所示的CDR H1、如在SEQ ID NO:5中所示的CDR H2和如在SEQ ID NO:6中所示的CDR H3。
P实施例38.一种药物组合物，其包括治疗有效量的根据P实施例37所述的重组蛋白和药学上可接受的赋形剂。
P实施例39.一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的根据P实施例37所述的重组蛋白，从而在所述受试者中治疗癌症。
非正式序列表：
轻链CDR L1氨基酸序列(SEQ ID NO：1)：ESVDSYGNSF
轻链CDR L2氨基酸序列(SEQ ID NO：2)：LAS
轻链CDR L3氨基酸序列(SEQ ID NO：3)：QQNNEDPYT
重链CDR H1氨基酸序列(SEQ ID NO：4)：GFNIKDSY
重链CDR H2氨基酸序列(SEQ ID NO：5)： IDPANGDT
重链CDR H3氨基酸序列(SEQ ID NO：6)：AREYRYAMDY
轻链FR L1氨基酸序列(SEQ ID NO：7)：
NIVLTQSPASLPVSLGQRATISCRAS
轻链FR L2氨基酸序列(SEQ ID NO：8)：
MHWYQQKPGQPPKLLIY
轻链FR L3氨基酸序列(SEQ ID NO：9)：
NLESGVPARFSGSGSRTDFILTIDPVEADDAATYYC
轻链FR L4氨基酸序列(SEQ ID NO：10)：FGGGTKLEIK
重链FR H1氨基酸序列(SEQ ID NO：11)：
EVQLQESGAELVKPGASVKLSCTAS
重链FR H2氨基酸序列(SEQ ID NO：12)：
MHWVKQRPEQGLEWIGR
重链FR H3氨基酸序列(SEQ ID NO：13)：
QYDPKFQGKATITADTSSNTAYLQLSGLTSEDTAVYYC
重链FR H4氨基酸序列(SEQ ID NO：14)：WGQGTSVTVSS
轻链全氨基酸序列(SEQ ID NO：15)：
NIVLTQSPASLPVSLGQRATISCRASESVDSYGNSFMHWYQQKPGQPPKLLIYLASNLESGVPARFSGSGSRTDFILTIDPVEADDAATYYCQQNNEDPYTFGGGTKLEIK
重链全氨基酸序列(SEQ ID NO：16)：
EVQLQESGAELVKPGASVKLSCTASGFNIKDSYMHWVKQRPEQGLEWIGRIDPANGDTQYDPKFQGKATITADTSSNTAYLQLSGLTSEDTAVYYCAREYRYAMDYWGQGTSVTVSS
轻链CDR L1 DNA序列(SEQ ID NO：17)：gaaagtgttgatagttatggcaatagtttt
轻链CDR L2 DNA序列(SEQ ID NO：18)：cttgcatcc
轻链CDR L3 DNA序列(SEQ ID NO：1 9)：cagcaaaataatgaggatccttacacg
重链CDR H1 DNA序列(SEQ ID NO：20)：ggcttcaacattaaagactcctat
重链CDR H2 DNA序列(SEQ ID NO：21)：attgatcctgcgaatg㈣gatact
重链CDR H3 DNA序列(SEQ ID NO：22)：gctagagagtataggtacgctatggactac
轻链FR L1 DNA序列(SEQ ID NO：23)：
aacattgtgctgacccaatctccagcttctttgcctgtgtctctagggcagagggccaccatatcctgcagagccagt
轻链FR L2 DNA序列(SEQ ID NO：24)：
atgcactggtaccagcagaaaccaggacagccacccaaactcctcatctat
轻链FR L3 DNA序列(SEQ ID NO：25)：
aacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctaggacagacttcatcctcaccattgatcctgtggaggctgatgat
gctgcaacctattactgt
轻链FR L4 DNA序列(SEQ ID NO：26)：
ttcggaggggggaccaagctggaaataaaac
重链FR H1 DNA序列(SEQ ID NO：27)：
gaggtgcagctgcaggagtctggggcagagcttgtgaaaccaggggcctcagtcaagttgtcctgcacagcttct
重链FR H2 DNA序列(SEQ ID NO：28)：
atgcactgggtgaagcagaggcctgaacagggcctggagtggattggaagg
重链FR H3 DNA序列(SEQ ID NO：29)：
caatatgacccgaagttccagggcaaggccactataacagcagacacatcctccaacacagcctacctgcagctcagcggcctgacatctgaggacactgccgtctattactgt
重链FR H4 DNA序列(SEQ ID NO：30)：
tggggtcaaggaacctcagtcaecgtctcctcag
轻链全DNA序列(SEQ ID NO：31)：
aacattgtgctgacccaatctccagcttctttgcctgtgtctctagggcagagggccaccatatcctgcagagccagtgaaagtgttgatagttatggcaatagttttatgcactggtaccagcagaaaccaggacagccacccaaactcctcatctatcttgcatccaacctagaatctggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctaggacagacttcatcctcaccattgatcctgtggaggctgatgatgctgcaacctattactgtcagcaaaataatgaggatccttacacgttcggaggggggaccaagctggaaataaaac
重链全DNA序列(SEQ ID NO：32)：
gaggtgcagctgcaggagtctggggcagagcttgtgaaaccaggggcctcagtcaagttgtcctgcacagcttctggcttcaacattaaagactcctatatgcactgggtgaagcagaggcctgaacagggcctggagtggattggaaggattgatcctgcgaatggtgatactcaatatgacccgaagttccagggcaaggccactataacagcagacacatcctccaacacagcctacctgcagctcagcggcctgacatctgaggacactgccgtctattactgtgctagagagtataggtacgctatggactactggggtcaaggaacctcagtcaccgtctcctcag
Figure IDA0004228384050000011
Figure IDA0004228384050000021
Figure IDA0004228384050000031
Figure IDA0004228384050000041
Figure IDA0004228384050000051
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Figure IDA0004228384050000071
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Figure IDA0004228384050000091
Figure IDA0004228384050000101
Figure IDA0004228384050000111
Figure IDA0004228384050000121
Figure IDA0004228384050000131

Claims (39)

1.一种抗CD5抗体，其包括轻链可变结构域和重链可变结构域，
其中所述轻链可变结构域包括：
如在SEQ ID NO:1中所示的CDR L1、如在SEQ ID NO:2中所示的CDR L2和如在SEQ IDNO:3中所示的CDR L3；并且
其中所述重链可变结构域包括：
如在SEQ ID NO:4中所示的CDR H1、如在SEQ ID NO:5中所示的CDR H2和如在SEQ IDNO:6中所示的CDR H3。
2.根据权利要求1所述的抗体，其中所述轻链可变结构域包括如在SEQ ID NO:7中所示的FR L1、如在SEQ ID NO:8中所示的FR L2、如在SEQ ID NO:9中所示的FR L3和如在SEQ IDNO:10中所示的FR L4。
3.根据权利要求1所述的抗体，其中所述重链可变结构域包括如在SEQ ID NO:11中所示的FR H1、如在SEQ ID NO:12中所示的FR H2、如在SEQ ID NO:13中所示的FR H3和如在SEQ ID NO:14中所示的FR H4。
4.根据权利要求1所述的抗体，其中所述轻链可变结构域包括SEQ ID NO:15的序列。
5.根据权利要求1所述的抗体，其中所述重链可变结构域包括SEQ ID NO:16的序列。
6.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是人源化抗体。
7.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是嵌合抗体。
8.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体，其中所述抗体是Fab'片段。
9.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是单链抗体(scFv)。
10.根据权利要求1所述的抗体，其中所述轻链可变结构域和所述重链可变结构域形成scFv的一部分。
11.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是IgG。
12.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体是IgG1。
13.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体能够结合CD5。
14.根据权利要求1所述的抗体，其中所述抗体结合至CD5。
15.根据权利要求14所述的抗体，其中所述CD5形成细胞的一部分。
16.根据权利要求15所述的抗体，其中所述细胞是淋巴样细胞。
17.根据权利要求15所述的抗体，其中所述细胞是B细胞或T细胞。
18.一种分离的核酸，其编码根据权利要求1所述的抗体。
19.一种药物组合物，其包括治疗有效量的根据权利要求1所述的抗体和药学上可接受的赋形剂。
20.根据权利要求19所述的药物组合物，其进一步包括治疗有效量的程序性死亡1(PD-1)抑制剂。
21.根据权利要求19所述的药物组合物，其中所述PD-1抑制剂是纳武单抗、帕博利珠单抗或西米普利单抗。
22.根据权利要求19所述的药物组合物，其中所述抗体的所述治疗有效量和所述PD-1抑制剂的所述治疗有效量是组合协同量。
23.一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的根据权利要求1所述的抗体，从而在所述受试者中治疗癌症。
24.根据权利要求23所述的方法，其进一步包括施用治疗有效量的PD-1抑制剂。
25.根据权利要求24所述的方法，其中抗体的有效量和PD-1抑制剂的有效量是组合协同量。
26.根据权利要求24所述的方法，其中所述抗体和所述PD-1抑制剂依序或同时被施用。
27.根据权利要求24所述的方法，其中所述抗体和所述PD-1抑制剂在施用前混合在一起。
28.根据权利要求24所述的方法，其中所述抗体和所述PD-1抑制剂以单一剂型施用。
29.根据权利要求24所述的方法，其中所述抗体和所述PD-1抑制剂以两种分开的剂型施用。
30.一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用组合有效量的根据权利要求1所述的抗体和PD-1抑制剂，从而在所述受试者中治疗癌症。
31.根据权利要求30所述的方法，其中所述组合有效量是组合协同量。
32.一种重组蛋白，其包括：
(i)抗体区，所述抗体区包括：
(a)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括如在SEQ ID NO:1中所示的CDRL1、如在SEQ ID NO:2中所示的CDR L2和如在SEQ ID NO:3中所示的CDR L3；和
(b)重链可变结构域，所述重链可变结构域如在SEQ ID NO:4中所示的CDR H1、如在SEQID NO:5中所示的CDR H2和如在SEQ ID NO:6中所示的CDR H3；和
(ii)跨膜结构域。
33.一种分离的核酸，其编码根据权利要求32所述的重组蛋白。
34.一种药物组合物，其包括治疗有效量的根据权利要求32所述的重组蛋白和药学上可接受的赋形剂。
35.一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的根据权利要求32所述的重组蛋白，从而在所述受试者中治疗癌症。
36.根据权利要求35所述的方法，其进一步包括施用治疗有效量的PD-1抑制剂。
37.一种重组蛋白，其包括：
(i)能够结合效应细胞配体的第一抗体区；和
(ii)第二抗体区，所述第二抗体区包括：
(a)轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包括如在SEQ ID NO:1中所示的CDRL1、如在SEQ ID NO:2中所示的CDR L2和如在SEQ ID NO:3中所示的CDR L3；和
(b)重链可变结构域，所述重链可变结构域如在SEQ ID NO:4中所示的CDR H1、如在SEQID NO:5中所示的CDR H2和如在SEQ ID NO:6中所示的CDR H3。
38.一种药物组合物，其包括治疗有效量的根据权利要求37所述的重组蛋白和药学上可接受的赋形剂。
39.一种在有此需要的受试者中治疗癌症的方法，所述方法包括向受试者施用治疗有效量的根据权利要求37所述的重组蛋白，从而在所述受试者中治疗癌症。
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