CN116195629A - 婴儿双歧杆菌ylgb-1496在抗衰老、提高先天免疫方面的新应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了婴儿双歧杆菌YLGB‑1496在抗衰老、提高先天免疫方面的新应用。具体而言，本发明提供了一种长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)菌株在制备用于个体抗衰老、提高个体先天免疫、缓解个体由于金黄色葡萄球菌感染导致的症状和/或抑制金黄色葡萄球菌感染个体的组合物中的应用，其中所述婴儿双歧为保藏编号CGMCC No.21109的婴儿双歧杆菌。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，尤其是涉及一种长双歧杆菌婴儿亚种(即婴儿双歧杆菌)(Bifidobacterium longum subsp.infantis)菌株YLGB-1496(保藏编号CGMCCNo.21109)在缓解由于金黄色葡萄球菌感染导致的死亡，延长寿命，提高先天免疫，延缓衰老的新用途。
背景技术
在体内各种各样的生理过程中，免疫系统是最容易受到攻击的。免疫系统与体内大多数器官和细胞保持持续接触，它的改变势必影响这些器官的组织细胞。随着年龄的增长，免疫系统的功能逐步减退，先天性免疫应答和获得性免疫应答都会随之下降，由此诱发出一些严重影响组织器官的疾病，加剧了机体各系统的衰老。免疫衰老(immunosenescence)就是指由于免疫功能调节失常而导致的易患慢性和急性疾病的现象。免疫功能的衰退是造成机体衰老的重要因素之一，因此机体免疫功能的加强能减少病理性衰老的发生。
益生菌是一类通过改变宿主某一部位菌群的组成，从而产生有利于宿主健康作用的单一或组成明确的混合微生物。益生作用则是指某种微生物制剂或发酵制品通过调节宿主黏膜与系统免疫功能以及改善肠道营养与菌群平衡对宿主所产生的有益的生理作用。随着衰老人群的增加，能提供益生作用，控制老化和延长寿命的功能性食品越来越受到青睐。HIROMI KIMOTO-NIRA等采用快速老化小鼠模型(SAM)中的SAMP6，实验发现SAMP6小鼠服用热灭活的Lactococcus lactis subsp.cremoris H61后小鼠脾细胞产生更多的IL-12和IFN–γ，该研究认为Lactococcus lactis subsp.cremoris H61之所以能够抑制某些老化现象可能与其免疫调节作用相关。
秀丽隐杆线虫(C.elegans)是一种常见的、自由生活的小型土壤线虫，属于小杆亚纲(Rhabditia)、小杆目(Rhabditidia)、小杆总科(Rhabditoidea)。以细菌为食，其生命周期大约为3d，平均寿命为3周。其呈蠕虫状、成体长约1.0～1.5mm，身体直径约70.0μm。秀丽隐杆线虫为两侧对称，体表有一层角质层覆盖物，无分节，有4条主要的表皮索状组织及1个充满体液的假体腔。秀丽隐杆线虫的结构简单、身体透明、易于观察、繁殖周期短等生物学特征赋予了其成为模式生物的前提。通过研究线虫的衰老和寿命控制机制，并将其成果应用于其他生物体，对延长人的寿命及提高人的生活质量有很大意义。本实验借助模式动物秀丽线虫，通过对其寿命进行观察，探究益生菌在其体内的抗衰老作用，为抗衰老、提高先天免疫的益生菌产品开发利用提供理论参考。
发明内容
本发明的一个目的在于提供长双歧杆菌婴儿亚种YLGB-1496的新用途。
长双歧杆菌婴儿亚种YLGB-1496的保藏编号为CGMCC No.21109。保藏编号为CGMCCNo.21109的长双歧杆菌婴儿亚种菌株已于2020年12月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期：2020年12月05日；保藏编号：CGMCC No.21109；分类命名：长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)。本发明中将该菌株也称为YLGB-1496或GB-1496。
本发明发现长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)YLGB-1496菌株具有缓解由于金黄色葡萄球菌感染导致的死亡、延长寿命、提高先天免疫的功效。
从而，本发明提供了长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longumsubsp.infantis)在制备用于个体抗衰老、提高个体先天免疫、缓解个体由于金黄色葡萄球菌感染导致的症状和/或抑制金黄色葡萄球菌感染个体的组合物中的应用，其中所述菌株为保藏编号CGMCC No.21109的长双歧杆菌婴儿亚种。
根据本发明的具体实施方案，本发明金黄色葡萄球菌感染导致的症状包括衰老甚至死亡。
根据本发明的具体实施方案，所述婴儿双歧杆菌以固态或液态菌制剂的形式用于制备所述组合物。
根据本发明的具体实施方案，所述组合物可以包括食品组合物、饲料组合物或药品组合物。
根据本发明的具体实施方案，所述组合物可使用于动物或是人类。所述组合物还可包括所属领域中的常规用料组分。例如，对于药物组合物，可包括适量的辅料，所述辅料可以为赋型剂、稀释剂、填充剂和/或吸收促进剂等。对于食品组合物，本发明的婴儿双歧杆菌可以按照现有技术中含婴儿双歧杆菌的食品进行生产。所述组合物可根据受施予者的需要，而采用不同形态。例如粉剂、锭剂、造粒、微胶囊和/或液体制剂等。
根据本发明的具体实施方案，所述组合物是用于缓解由于金黄色葡萄球菌感染导致的死亡；具体应用时，所述婴儿双歧杆菌的应用量为1.0×103CFU～1.0×1012CFU/天，优选为1.0×107CFU～1.0×1010CFU/天。
根据本发明的具体实施方案，所述组合物是用于延长寿命；具体应用时，所述婴儿歧杆菌的应用量为1.0×103CFU～1.0×1012CFU/天，优选为1.0×107CFU～1.0×1010CFU/天。
根据本发明的具体实施方案，所述组合物是用于提高先天免疫；具体应用时，所述婴儿双歧杆菌的应用量为1.0×103CFU～1.0×1012CFU/天，优选为1.0×107CFU～1.0×1010CFU/天。
在本发明的一具体实施方案中，所述组合物为食品组合物，所述食品为发酵乳制品(例如发酵乳、风味发酵乳、发酵乳饮料等)、乳酪、含乳饮料、固体饮料或乳粉(例如婴幼儿配方粉或非婴幼儿配方粉)。
综上所述，本发明提供了婴儿双歧杆菌YLGB-1496的新用途，该菌具有显著缓解由于金黄色葡萄球菌感染导致的死亡，延长寿命，提高先天免疫，可以用于制备具有抗衰老、提高先天免疫功效的食品、药物及饲料等，具有广泛的应用前景。
附图说明
图1显示S.aureus对秀丽隐杆线虫的致病性和添加益生菌菌株的影响。
图2显示S.aureus和益生菌干预5天后秀丽隐杆线虫的存活率。
用于专利程序的微生物保藏：
婴儿双歧杆菌YLGB-1496(或GB-1496)菌株：
保藏日期：2020年12月05日；
保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)；
保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所；
保藏编号：CGMCC No.21109；
分类命名：长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)。
具体实施方式
为了对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现结合具体实施例及对本发明的技术方案进行以下详细说明，应理解这些实例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中，各原始试剂材料均可商购获得，未注明具体条件的实验方法为所属领域熟知的常规方法和常规条件，或按照仪器制造商所建议的条件。
实施例1：益生菌对秀丽隐线虫抗衰老作用测试
1.1材料与仪器
婴儿双歧杆菌(Bifidobacterium longum subsp.infantis)YLGB-1496来自内蒙古伊利实业集团股份有限公司(来源为中国健康妈妈母乳，已于2020年12月05日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期：2020年12月05日；保藏编号：CGMCCNo.21109；分类命名：长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis))。
乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)商业菌株X。
野生型秀丽线虫(Caenorhabditis elegans，C.elegans)商购获得。
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus ATCC25923)商购获得。
实验所用其他试剂均购于国药集团化学试剂有限公司。SPX-150B-Z型生化培养箱：上海博讯实业有限公司医疗设备厂；奥林巴斯显微镜(OlympusBX41)：南京艾朗仪器有限公司；LDZX-50KBS立式压力蒸汽灭菌锅：上海申安医疗器械厂；T6紫外/可见分光光度计：北京普析通用仪器有限公司；Multiskan FC型酶标仪：赛默飞世尔(上海)仪器有限公司。
1.2实验方法
1.2.1秀丽线虫培养方法
使用NGM培养基。配制方法：每1000mL培养基含有琼脂17g，多聚蛋白胨2.5g，NaCl3g，121℃高压蒸汽灭菌20min，加入灭菌后的1mL 1mol/L CaCl2，1mL1mol/L MgSO4，25mL1mol/L K3PO4缓冲液，待冷却至50℃左右时，加入1mL 5mg/mL胆固醇，摇匀后倒入无菌培养皿内，取OP50置于培养皿内于37℃培养过夜，备用。
12.2益生菌活化
取乳酸杆菌于MRS培养基中，双歧杆菌于MRS+Cys(1％)培养基中，37℃培养活化，细胞收集并使用生理盐水洗脱，调整至1×107、1×108CFU(每个培养皿平板中益生菌的量)于NGM培养基中备用。
1.2.3秀丽线虫寿命测定
随机挑取暴露后的秀丽线虫至分别涂乳双歧杆菌(商业菌株X)、副干酪乳杆菌K56、婴儿双歧杆菌YLGB-1496的NGM培养基中。以大肠杆菌OP50的NGM培养基、未添加其他成分(只有S.aureus)的培养基作为对照组别。每组设3个平行，20℃培养。从转移当天(存活实验第0天)起计算秀丽线虫存活天数，以铂金丝碰触秀丽线虫仍然不动即判定为死亡，每天记录秀丽线虫存活和死亡条数，实验持续至第五天为止，记录死亡情况。
1.2.4实验结果
寿命是秀丽线虫暴露前后变化最直接的反映，实验结果如图1所示，秀丽线虫经S.aureus感染后，在第3天开始，存活率显著下降，第5天秀丽线虫存活率剩下1.75％。于之相比，107CFU婴儿双歧杆菌YLGB-1496处理过的秀丽线虫组，在第5天，存活率为20％；108CFU婴儿双歧杆菌YLGB-1496处理过的秀丽线虫组，在第5天，存活率上升至29％，与2’-FL处理过的秀丽线虫组存活率相同，且与未处理的对照组具有显著性差异(存活率为1.75％，p<0.001)。另外，108CFU婴儿双歧杆菌YLGB-1496与母乳低聚糖2’-FL(15mg/mL)处理过的秀丽线虫组，存活率大幅提升至51.5％；副干酪乳杆菌K56处理的秀丽线虫组，在第5天，存活率为30％，均与对照组的1.75％有显著性差异(p<0.001)。由图2可知，婴儿双歧杆菌、婴儿双歧杆菌复配母乳低聚糖2’-FL、副干酪乳杆菌K56、乳双歧杆菌商业菌株X，能够显著延长秀丽线虫寿命(p<0.001)，其中副干酪乳杆菌K56与婴儿双歧杆菌YLGB-1496处理能够提升线虫存活率至30％左右，婴儿双歧杆菌YLGB-1496复配母乳低聚糖2’-FL提升至51.5％，最能够显著延长秀丽线虫寿命(p<0.001)。
以上结果表明长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)菌株YLGB-1496(保藏编号CGMCC No.21109)在抗衰老、提高先天免疫方面具有良好潜力，可以用于食品，如发酵乳、乳酪、含乳饮料、乳粉或其它含有该菌株及其衍生物的任何一种食品。
实施例2：添加的母乳低聚糖组合与长双歧杆菌婴儿亚种YLGB-1496组合物的配方粉
本实施例提供一种婴儿配方奶粉，该配方奶粉中总蛋白质含量为11.1g/100g粉，脂肪含量为28.3g/100g粉，碳水化合物含量为52.9g/100g粉，长双歧杆菌婴儿亚种YLGB-1496为1×108CFU/100g粉。
Claims (10)
1.一种长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis)菌株在制备用于个体抗衰老、提高个体先天免疫、缓解个体由于金黄色葡萄球菌感染导致的症状和/或抑制金黄色葡萄球菌感染个体的组合物中的应用，其中所述婴儿双歧为保藏编号CGMCCNo.21109的婴儿双歧杆菌。
2.根据权利要求1所述的应用，其中，所述长双歧杆菌婴儿亚种菌株以固态或液态菌制剂的形式用于制备所述组合物。
3.根据权利要求1所述的应用，其中，所述组合物包括食品组合物、饲料组合物或药品组合物。
4.根据权利要求3所述的应用，其中，所述药品组合物还包括可用于药品的辅料，所述辅料为赋型剂、稀释剂、填充剂和/或吸收促进剂。
5.根据权利要求3所述的应用，其中，所述药品组合物为粉剂、锭剂、造粒、微胶囊、液体制剂和/或其他剂型。
6.根据权利要求1所述的应用，其中，所述组合物是用于缓解由于金黄色葡萄球菌感染导致的死亡；
优选地，其中，所述长双歧杆菌婴儿亚种菌株的应用量为1.0×103CFU～1.0×1012CFU/天，更优选为1.0×107CFU～1.0×1010CFU/天。
7.根据权利要求1所述的应用，其中，所述组合物是用于延长寿命：
优选地，其中，所述长双歧杆菌婴儿亚种菌株的应用量为1.0×103CFU～1.0×1012CFU/天，更优选为1.0×107CFU～1.0×1010CFU/天。
8.根据权利要求1所述的应用，其中，所述组合物是用于提高先天免疫；
优选地，其中，所述长双歧杆菌婴儿亚种菌株的应用量为1.0×103CFU～1.0×1012CFU/天，更优选为1.0×107CFU～1.0×1010CFU/天。
9.根据权利要求6-8中任一项所述的应用，其中，所述组合物为食品组合物。
10.根据权利要求9所述的应用，其中，所述食品为发酵乳制品、乳酪、含乳饮料、固体饮料或乳粉。
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