CN116195602A - 一种防治烟草普通花叶病的复合药剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种防治烟草普通花叶病的复合药剂及其制备方法和应用，本发明属于烟草疾病防治技术领域。本发明公开的防治烟草普通花叶病的复合药剂，以银杏内生球黑孢菌发酵液作为溶剂，包括如下浓度份数的组分：银杏提取物150～250g/L、烷基酚聚氧乙烯(10)醚40～60g/L、苯乙基酚聚氧乙烯醚80～120g/L、矿物油150～200g/L、仲烷基磺酸钠15～25g/L。该复合药剂对育苗期烟草和大田烟草的普通花叶病均具有良好的防控效果，效果远好于市售药剂，表现出了良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及烟草疾病防治技术领域，尤其涉及一种防治烟草普通花叶病的复合药剂及其制备方法和应用。
背景技术
烟草花叶病毒(TMV)可侵染多种重要经济作物，危害严重且无有效防治措施。
银杏内生球黑孢菌是从银杏组织中筛选得到的一株生防菌，其对姜青枯病菌有较好的抑制作用。后期研究发现，该菌发酵液对烟草花叶病毒有较好的钝化作用，钝化之后的TMV诱抗剂能引起烟草多酚氧化酶(PPO)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)、过氧化氢酶(CAT)这5种防御酶活性的显著升高，提高烟株对TMV感染的抗性，证明钝化TMV在烟叶生产中可以作为TMV免疫诱抗剂使用，提高烟株的TMV免疫力和抵抗力。
银杏在其生长过程中，很少出现病毒或病虫害侵染的情况，主要原因之一就是银杏本身会合成一些抗病虫害抗病毒物质。许多研究也证明，银杏叶提取物有抗炎抗肿瘤抗病毒的功效。以此为基础，进一步开发该银杏内生球黑孢菌发酵液和银杏叶提取物作为烟草普通花叶病的复合药剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种防治烟草普通花叶病的复合药剂及其制备方法和应用，以银杏内生球黑孢菌发酵液作为溶剂复合银杏提取物等成分，制备得到复合药剂。该复合药剂对育苗期烟草和大田烟草的普通花叶病均具有良好的防控效果，效果远好于市售药剂，表现出了良好的应用前景。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种防治烟草普通花叶病的复合药剂，以银杏内生球黑孢菌发酵液作为溶剂，包括如下浓度份数的组分：银杏提取物150-250g/L、烷基酚聚氧乙烯(10)醚40-60g/L、苯乙基酚聚氧乙烯醚80-120g/L、矿物油150-200g/L、仲烷基磺酸钠15-25g/L。
本发明还提供了一种所述的复合药剂的制备方法，包括如下步骤：
(1)将银杏内生球黑孢菌发酵后的发酵产物，固液分离，得到发酵液；
(2)所述发酵液浓缩后作为溶剂溶解银杏叶提取物、烷基酚聚氧乙烯(10)醚、苯乙基酚聚氧乙烯醚、矿物油和仲烷基磺酸钠，得到复合药剂。
优选的，所述银杏内生球黑孢菌为球黑孢菌Gbg45菌株，保藏编号为CCTCC NO：M2018755。
优选的，在步骤(1)中，所述发酵采用的培养基为PDB培养液；所述发酵的温度为26-30℃，时间为7-11天，转速为150-200转/分钟。
优选的，在步骤(2)中，所述发酵液浓缩后的体积为发酵液体积的1/14-1/18。
本发明还提供了一种所述的复合药剂在预防和/或治疗烟草普通花叶病中的应用。
优选的，所述烟草普通花叶病包括由烟草花叶病毒引起的病症。
本发明提供的复合药剂对烟苗上发生的普通花叶病平均防治效果为38.21％，市售复合药剂的防效为19.26％-23.91％，远低于本发明的复合药剂；本发明提供的复合药剂对大田烟草普通花叶病的平均病情指数为41.67，低于所有的市售对照药剂；复合药剂的平均防效为32.66％，远高于所有的市售对照药剂。而且在复合药剂各重复中，有20-30％的烟株未出现普通花叶病症状，发病烟株的病情级数也多数低于5级。可见，本发明提供的复合药剂对育苗期烟草和大田烟草的普通花叶病均具有良好的防控效果，效果远好于市售药剂，表现出了良好的应用前景。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1银杏内生球黑孢菌发酵液和银杏叶提取物复合药剂(以下简称复合药剂)的制备
制备药剂所采用的菌种为银杏内生球黑孢菌，名称为球黑孢菌Gbg45，保藏编号为CCTCC NO：M 2018755。该菌株由湖南科技学院和湖南恒伟药业股份有限公司惠赠。
1将该真菌活化培养，挑取一个单菌落接种在灭菌后的200mLPDB培养液中，28℃摇床培养9天至液体变红至深红色。发酵产物采用8层纱布过滤，过滤后的菌丝体在80℃烘箱中烘干至恒重(2.3g)即达到发酵终点。滤液在60℃鼓风干燥箱中浓缩至原液体积的1/16，获得银杏内生球黑孢菌发酵液。
2以银杏内生球黑孢菌发酵液作为溶剂，按质量体积比(g/100ml)在其中加入20％银杏叶提取物(上海麦克林生化科技有限公司，CAS号:90045-36-6，MDL号:MFCD00240717，货号：G832683-100g，规格：10:1提纯，主要成分是：银杏总黄酮24％和银杏萜内酯6％)，5％的烷基酚聚氧乙烯(10)醚、10％苯乙基酚聚氧乙烯醚、17％矿物油、2％仲烷基磺酸钠，制备成复合药剂。
实施例2复合药剂对烟苗感染TMV的防治效果
1将湘烟5号播种于育苗盘中，播种时，间隔一行，一共播种27盘烟苗。
实验设置：分为空白对照组(CK)、复合药剂处理组、2％氨基寡糖素水剂处理组、2％香菇多糖水剂处理组、0.06％甾烯醇微乳剂处理组、8％辛菌胺醋酸盐水剂处理组、3％超敏蛋白微粒剂处理组、20％吗胍·乙酸铜可湿性粉剂处理组、6％寡糖·链蛋白可湿性粉剂处理组，共9个处理组，每个处理组3盘重复。
2播种后漂浮于温室育苗池中，按常规育苗方法进行管理。
3烟苗长至五叶一心时，采用摩擦接种法接种活性TMV病毒。
4接种病毒后第三天，均匀喷洒1中的药剂/清水，喷施量为10mL/株(叶面润湿为准)。
5烟苗出现典型花叶病症状后开始结果调查，烟草普通花叶病典型症状为：嫩叶先开始发病，沿叶脉部分的叶肉颜色变黄，出现明脉。然后深色或浅色部分逐渐扩大，形成黄绿相间的斑驳(花叶)；严重时叶片变厚薄不匀，形成泡斑，叶缘向背面卷曲，叶片皱缩扭曲，呈畸形，有呈缺刻或带状。
调查时，清点每盘发病和未发病的烟苗数，按公式1-2计算发病率和保护效率：
发病率(％)＝发病烟苗数/烟苗总数*100 公式1
保护效率(％)＝100％-发病率 公式2
调查及计算结果如表1所示。
表1不同处理对烟苗普通花叶病的防治效果
从表1的统计结果可以看出，复合药剂对烟苗上发生的普通花叶病有较好的防治作用，平均防治效果为38.21％。有两方面因素：(1)发酵液和银杏叶提取物中的某种或某些物质提升了烟苗的病毒防御能力；(2)发酵液和银杏叶提取物中的某种或某些物质能够直接杀死TMV或抑制TMV的侵染作用。市售防治药剂的防效为19.26％-23.91％，远低于本发明的复合药剂。
实验例
在湖南省永州市宁远县柏家坪镇左坝村选择前一年烟草普通花叶病发病严重的田块，于2月底3月初种植烟苗，栽培深度为6～8cm，行距为110～112cm，株距为50～60cm。
共设置3个小区，每个小区植烟180株。于揭膜期、旺长期和烟草普通花叶病发病初期，在烟草叶片上均匀喷洒复合药剂，喷施量为50mL/株(以叶面润湿为准)，作为处理组；市售TMV防控药剂作为阳性对照；清水作为阴性对照，每个处理3次重复。
田间管理按当地生产规范化要求进行。整个试验过程中农事操作注意先健株后病株(含空白对照处理)，避免农事操作传毒给试验造成误差。
TMV发生情况调查：各处理于打顶期和下部烟叶采摘期各调查1次TMV的发生情况，共调查2次，空白对照区同期调查。每处理每次定点调查20株，病害调查参考国家标准GB/T23222-2008，按公式1所示计算发病率，并按公式3-4所示计算病情指数和防治效果，调查结果见表2。
病情指数＝∑(各级病株数×该病级值)/(调查总株数×最高级值)×100公式3防治效果(％)＝(1-(处理区平均病情指数/清水对照平均病情指数))×100公式4
表2复合药剂对大田烟草的普通花叶病的防控效果
从表2的统计结果可以看出，复合药剂的平均病情指数为41.67，低于所有的市售药剂对照；复合药剂的平均防效为32.66％，远高于所有的市售药剂对照。而且在复合药剂各重复中，有20-30％的烟株未出现普通花叶病症状，发病烟株的病情级数也多数低于5级。以上结果均说明，本发明的复合药剂对大田的烟草普通花叶病防控效果较理想，表现出了良好的应用前景。
由以上实施例可知，本发明制备的银杏内生球黑孢菌发酵液16倍浓缩液，加入20％银杏叶提取物、5％的烷基酚聚氧乙烯(10)醚、10％苯乙基酚聚氧乙烯醚、17％矿物油、2％仲烷基磺酸钠复合药剂对育苗期烟草和大田烟草的普通花叶病均具有良好的防控效果。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (7)
1.一种防治烟草普通花叶病的复合药剂，其特征在于，以银杏内生球黑孢菌发酵液作为溶剂，包括如下浓度份数的组分：银杏提取物150-250g/L、烷基酚聚氧乙烯(10)醚40-60g/L、苯乙基酚聚氧乙烯醚80-120g/L、矿物油150-200g/L、仲烷基磺酸钠15-25g/L。
2.一种权利要求1所述的复合药剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将银杏内生球黑孢菌发酵后的发酵产物，固液分离，得到发酵液；
(2)所述发酵液浓缩后作为溶剂溶解银杏叶提取物、烷基酚聚氧乙烯(10)醚、苯乙基酚聚氧乙烯醚、矿物油和仲烷基磺酸钠，得到复合药剂。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述银杏内生球黑孢菌为球黑孢菌Gbg45菌株，保藏编号为CCTCCNO：M2018755。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述发酵采用的培养基为PDB培养液；所述发酵的温度为26-30℃，时间为7-11天，转速为150-200转/分钟。
5.如权利要求1～4任一项所述的制备方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述发酵液浓缩后的体积为发酵液体积的1/14-1/18。
6.一种权利要求1所述的复合药剂或权利要求2-5任一项制备的复合药剂在预防和/或治疗烟草普通花叶病中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述烟草普通花叶病包括由烟草花叶病毒引起的病症。
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