CN116159046A - 三丁酸甘油酯及其组合物在防治痛风方面的新应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供三丁酸甘油酯及其组合物在防治痛风方面的新应用。本发明首次提出三丁酸甘油酯可以溶解关节内沉积的尿酸盐晶体、缓解痛风发作和/或降低血尿酸，进一步探究开发采用三丁酸甘油酯复配包含EGCG、维生素C和牛磺酸中的至少一种的组合物，通过口服组合物的效果测试，表明：三丁酸甘油酯及其组合物具有显著的降低血尿酸、预防痛风发作和缓解急性痛风的关节炎症的效果。

Description

三丁酸甘油酯及其组合物在防治痛风方面的新应用

技术领域

本发明涉及痛风治疗技术领域，具体涉及三丁酸甘油酯及其组合物在防治痛风方面的新应用。

背景技术

临床上，高尿酸血症的判定指标为：在正常的嘌呤饮食状态下，非同日两次空腹血尿酸水平男性高于420μmol/L，女性高于360μmol/L。痛风的判定指标为：关节滑囊液中的尿酸结晶析出，形成尿酸盐晶体，诱发的一种关节炎症。因此，持续性的高血尿酸是痛风的生化基础。

嘌呤是生命体的遗传物质DNA和RNA基本单位腺嘌呤核苷酸和鸟嘌呤核苷酸的一个基团，还是生命体中的一些功能分子的基团，如环腺苷酸(cAMP)、环鸟甘酸(cGMP)等第二信使物质；烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)、黄素单核苷酸(FMN)和黄素腺嘌呤二核苷酸(FAD)等辅酶；腺嘌呤脱氧核糖核酸(ATP)、鸟嘌呤脱氧核糖核酸(GTP)等保证人体正常生命活动的必需供能分子。

尿酸是嘌呤在人体内的终末代谢产物，黄嘌呤氧还酶是嘌呤代谢为尿酸的限速酶，包括黄嘌呤脱氢酶(Xanthine Dehydrogenase，XDH)和黄嘌呤氧化酶(XanthineOxidase，XOD)2种亚型。人体内合成尿酸的嘌呤有2个来源：食物中摄取的外源性嘌呤和体内自身合成/代谢产生的内源性嘌呤。外源性的嘌呤在胃、小肠被吸收后，在肠道上皮细胞内、肝脏、血液中被代谢为尿酸。内源性嘌呤主要在肝脏、血液中被代谢为尿酸。体内代谢产生的尿酸广泛分布于血浆、细胞外液、关节滑膜液中。其中，约5％与血浆蛋白结合，其余部分以游离形式存在。80～90％的尿酸由内源性小分子化合物的合成和嘌呤核苷酸分解代谢生成，10～20％来源于含嘌呤的食物。

尿酸在人体内是不能被继续降解的，大约在1500万年前，人类的尿酸氧化酶基因和启动子序列发生遗传突变，导致人体内没有尿酸氧化酶或尿酸氧化酶无活性，不能将尿酸降解为尿囊素，使人类比其他哺乳动物(大猩猩除外)的尿酸水平更高。在人体内，尿酸无法像葡萄糖一样被降解掉，只能被排出去。正常状态下，人体尿酸的产生和排泄基本保持着动态平衡，体内尿酸池为1200mg，每天产生尿酸约750～800mg，排出约500～1000mg，保持着动态平衡：1/3的尿酸主要通过尿酸转运子ABCG2将血尿酸排泄至肠腔内，随后被肠道微生物降解或随粪便排出体外；2/3的尿酸通过肾小球滤过、近曲肾小管中段尿酸转运子(如URAT1、OAT4、Glut9a等)重吸收尿酸进入血液、近曲肾小管中段的尿酸转运子(如ABCG2、OAT1、OAT3等)分泌尿酸至肾小管腔内、近曲肾小管直段的尿酸转运子(如URAT1、OAT4、Glut9a等)重吸收尿酸进入血液等4个过程，最终只有8～12％尿酸滞留在肾小管中，随尿液排出。

任何原因引起的尿酸合成增多和(或)排泄减少，都会引起血尿酸水平升高，造成高尿酸血症。不管诱使血尿酸升高的因素是什么，只要抑制黄嘌呤氧还酶活性、抑制尿酸重吸收转运子URAT1、激活尿酸分泌转运子ABCG2等，都可以降低血尿酸。

临床上，高尿酸血症未必进展为痛风，而且1/3痛风患者发作时血尿酸处于正常范围。是否诱发痛风及痛风发作时的疼痛程度，不仅取决于血尿酸水平，还取决于关节处沉积的尿酸盐晶体的数量和速度：尿酸盐沉积量越多、沉积速度越快，痛风越容易发作、发作时的疼痛就越严重；尿酸盐晶体沉积量越少、沉积速度越慢，痛风越不容易发作、发作时的痛感就越不强烈。

痛风发作的起始是关节内析出尿酸盐晶体，影响因素有可能是血尿酸升高、关节内尿酸浓度局部升高、关节处尿酸盐晶体溶解度降低等。关节处沉积的尿酸盐晶体诱使关节炎症，关节内的炎性小体NLRP3的活性和炎性因子IL-1β表达、成熟、分泌量急剧升高，使关节炎症级联放大。同时，尿酸盐晶体也会在NADPH、髓过氧化物酶(Myeloperoxidase，MPO)的介导下，诱发氧化应激，导致严重水肿和刺激痛感神经，使人关节出现剧烈疼痛、水肿症状。基本上，在12～24h内关节的疼痛、水肿达到最高值。痛风的痛感、水肿达到最高值后，在未进行药物治疗的情况下，痛风也会自行缓解。主要机制是痛风性关节炎达到峰值后，关节内的中性粒细胞出现细胞焦亡、裂解，细胞残余组分(主要是细胞膜组分、细胞器组分、蛋白质、DNA等)会包裹析出的尿酸盐晶体，形成NETs结构，NETs结构相互聚集沉淀形成aggNETs——痛风石的基本单位。aggNETs会促进抑炎因子TGF-β的分泌，逐渐消除炎症。自行缓解的时间短则持续1～2天，长则持续1～3周，甚至更长时间。

因此，痛风发作后及时进行消炎止痛可以减少关节内的尿酸盐晶体的沉积量和对关节的损伤，而抑制NLRP3、IL-1β、NADPH、MPO的表达、活性等都可以缓解痛风性关节炎。

但是，要想从根本上消除痛风发作的风险，需要实现两个治疗目标：第一是长期控制血尿酸在正常范围，防止形成新的尿酸盐晶体；第二是将关节内已经沉积的尿酸盐晶体完全溶解。

在人体内，尿酸盐晶体主要分布于关节滑囊液和关节肌腱内、血管内、泌尿系统内、其他组织器官内。尿酸盐晶体的溶解和结晶析出受多种因素影响，Chhana A通过已发表的涉及到尿酸钠晶体析出和溶解的2175篇文献进行综述分析发现：尿酸在生理水平下最高溶解度为6.8mg/dL，溶解度随温度升高而增加；pH≤6(尿酸)或≥10(重尿酸盐)溶解度高，pH在7～8(单质子尿酸盐)时溶解度最低；不同的尿酸盐溶解度存在显著差异，尿酸钾的溶解度最高，尿酸钠的溶解度最低，K+浓度升高时可以竞争性替换尿酸钠中的Na+，促进尿酸钠晶体溶解，尿酸钾晶体的促炎能力远弱于尿酸钠。牛鼻软骨蛋白多糖、猪软骨蛋白聚糖提高尿酸盐溶解度；在37℃，硫酸软骨素(0.1～0.4mg/mL；63–188mg/mL)可以提高尿酸盐溶解度，但在4℃，其(80mg/mL)却降低尿酸盐溶解度；在26℃和37℃，人血清白蛋白提高尿酸盐溶解度；在生理条件下，低浓度透明质酸盐提高尿酸盐溶解度。

与健康人和其他关节疾病相比，痛风关节滑囊液促进尿酸钠结晶析出；球蛋白(尤其是γ-球蛋白)、胶原蛋白I促进尿酸钠结晶沉淀；滑囊膜上的尿酸转运子ABCG2可以将尿酸从滑囊液运输至血液。基于上述发现，若实现尿酸钠晶体的溶解及快速溶解，需对上述因素进行调控，才能提高尿酸盐的溶解度，让尿酸随血液通过肾脏、肠道排出体外。

由于不同组织、器官的结构差异和与血液进行物质交换的难度的不同，溶解不同部位的尿酸盐晶体的方式和难度是不一样的，临床上最佳治疗手段也各不相同：

1)泌尿系统内的尿酸盐晶体主要是通过碱化尿液的方式溶解：可以碱化尿液的功能成分柠檬酸钾、碳酸氢钠均是通过肾脏排泄，泌尿系统中柠檬酸盐、碳酸氢钠浓度提高后可以提高尿酸盐的溶解度，促进已经结晶的尿酸盐溶解。

2)血管中的尿酸盐晶体主要是通过降低血尿酸和注射尿酸氧化酶溶解。

3)关节滑囊液中尿酸盐晶体主要是通过降低滑囊液钠离子/提高滑囊液钾离子浓度、提高ABCG2活性和表达(促进尿酸从滑囊液转运到血液)、降低血尿酸、热敷等方法溶解。目前，依然缺乏安全、高效的办法促进关节滑囊液中尿酸盐晶体的溶解。常规方法依然是主要选择降低血尿酸，但是溶晶速度极其缓慢：通过对降尿酸治疗的痛风患者的血尿酸变化和关节处沉积的尿酸钠晶体(双能CT定量测定关节处沉积的尿酸钠晶体体积和密度)进行随访，Chui CSK等研究人员制定了痛风患者的溶解模型，发现：当血尿酸>430μmoL/L时，关节处沉积的尿酸钠晶体溶解时间接近无穷长；血尿酸＝240μmoL/L时，关节处沉积的尿酸钠晶体开始显著溶解的时间为10～19个月，当血尿酸接近0时，关节处沉积的尿酸钠晶体开始溶解仍然需要4-8个月。

如何调控Na+-K+泵的活性和滑囊膜上尿酸转运子ABCG2的活性，增加关节腔内K+浓度、降低关节腔内Na+浓度、促进关节腔内可溶性尿酸分泌至血液，是实现促进关节内沉积的尿酸钠晶体快速溶解的关键。

4)关节肌腱内、其他组织器官内的尿酸盐晶体主要是通过降低血尿酸的方法溶解。

若高尿酸血症和痛风患者不进行治疗或进行不正确的治疗，5年后12％的患者出现痛风石，20年后痛风石的比例约为70％据统计，若高血尿酸、痛风不及时治疗，50％患者会有严重的关节变形而导致残性瘫痪，95％引发肾炎，肾结石、慢性肾脏疾病及30％的患者引起尿毒症，50～70％导致肥胖，12.2～26.9％患者出现糖尿病，47.2～77.7％的患者会诱发高血压，67％的患者会伴发高血脂。同时，长期的高尿酸血症还会诱发冠心病、心衰、周围动脉硬化病、呼吸系统疾病、神经系统疾病、女性妊娠并发症、勃起功能障碍等。

目前，临床上用于治疗高尿酸血症和痛风的药物主要有2类：降尿酸药物和缓解急性痛风的消炎止痛药物。降尿酸药物主要包括抑制黄嘌呤氧化酶的别嘌醇和非布司他、促进尿酸排泄的丙磺舒和苯溴马隆、促进尿酸降解的拉布立酶和培戈洛酶，缓解急性痛风的药物包括秋水仙碱、非甾体类抗炎药、糖皮质激素抗炎药、卡纳单抗和阿那白滞素等药物。基于药物安全性、有效性，在国内应用最多的药物是非布司他、苯溴马隆、别嘌醇、秋水仙碱。以上药物均是缓解血尿酸的治标不治本的治疗策略，一旦停药，血尿酸会迅速上升至治疗前水平，进而导致痛风发作。原因为痛风的根本病因是：富集于肝脏的黄嘌呤氧化酶异常表达和活性升高；肾脏与肠道的尿酸转运子的异常表达；肠道微生物的紊乱，造成肠道微生物中黄嘌呤氧化酶富集、尿囊素酶缺失，代谢产物诱发机体慢性系统性炎症，造成内源性尿酸增多。上述药物并不能解决这些痛风的根本病因，要么只能降低血尿酸，要么只能缓解急性痛风的疼痛、肿胀。而且，这些药物溶解沉积的尿酸晶体与痛风石条件苛刻，需要持续维持血尿酸低于360μmol/L且溶解尿酸盐晶体的效率极低。此外，这些药物均对肝肾具有较大损害，不能多用，也不能长期使用，许多患者因无法忍受其副作用而放弃使用此类药物进行治疗。

针对高尿酸血症和痛风患者，亟待开发加有效、更加安全的干预治疗方案。

发明内容

基于此，有必要提供三丁酸甘油酯及其组合物在防治痛风方面的新应用，具体提供可溶解关节内沉积的尿酸盐晶体、缓解痛风发作和/或降低血尿酸的组合物。

本发明采用如下技术方案：

本发明提供三丁酸甘油酯在溶解关节内沉积的尿酸盐晶体、缓解痛风发作和/或降低血尿酸方面的应用。

本发明具体提供一种溶解关节内沉积的尿酸盐晶体、缓解痛风发作和/或降低血尿酸的组合物，所述组合物至少包含三丁酸甘油酯。

在其中一些实施例中，所述组合物还包含EGCG、维生素C和牛磺酸中的至少一种。优选地，所述三丁酸甘油酯、EGCG和维生素C的重量比为(2～8):(2～4):(2～4)。

在其中一些实施例中，所述组合物包含三丁酸甘油酯和EGCG；优选地，所述三丁酸甘油酯和EGCG的重量比为(1～10)：(1～10)，更优选(2～8)：(1.5～6)。

在其中一些实施例中，所述组合物包含三丁酸甘油酯和维生素C；优选地，所述三丁酸甘油酯和维生素C的重量比为(1～10)：(1～10)，更优选(2～8)：(1.5～6)。

在其中一些实施例中，所述组合物包含三丁酸甘油酯和牛磺酸。

在其中一些实施例中，所述组合物包含三丁酸甘油酯、EGCG和牛磺酸。

在其中一些实施例中，所述组合物还包含可联合使用的降尿酸药和/或辅料。其中，所述降尿酸药选自别嘌呤醇、非布司他、苯溴马隆、丙磺舒中的至少一种。所述辅料可以选自微晶纤维素。

优选地，本发明提供可以降低血尿酸、预防痛风发作、缓解痛风发作的关节疼痛和肿胀、溶解关节内沉积的尿酸盐晶体的组合物，包括以下成分，按重量为：三丁酸甘油酯0.1～15份，EGCG 0.1～8份，维生素C 0.25～12份，牛磺酸0.5～12份；其中，三丁酸甘油酯为化学合成或生物合成，纯度为95％以上；EGCG为天然生物提取、化学合成或者生物合成，其中天然生物提取的纯度为50％以上，化学合成或生物合成的纯度为95％以上；维生素C为天然生物提取、化学合成或者生物合成，其中天然生物提取的纯度为10％以上，化学合成或生物合成的纯度为95％以上；牛磺酸为为天然生物提取、化学合成或者生物合成，其中天然生物提取的纯度为10％以上，化学合成或生物合成的纯度为95％以上。

本发明还可以提供溶解关节内沉积的尿酸盐晶体、缓解痛风发作和/或降低血尿酸的制剂，采用上述组合物制备而成特定剂型，例如溶液、悬浮液、乳剂、粉末、锭剂、丸剂、糖浆、口含锭、片剂、口嚼胶、浓浆以及胶囊等。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明首次探究发现三丁酸甘油酯能够溶解关节内沉积的尿酸盐晶体、缓解痛风发作、降低血尿酸，进一步探究开发了采用三丁酸甘油酯复配包含EGCG、维生素C和牛磺酸中至少一种的组合物，通过口服组合物的效果测试，表明：三丁酸甘油酯及其组合物具有显著的降低血尿酸、预防痛风发作和缓解急性痛风的关节炎症的效果，经双能CT检测，组合物口服4个月后，关节处的尿酸盐晶体和痛风石明显减少。同时，本发明组合物与只能降低血尿酸和消炎止痛的化药相比，具有逆转痛风症状的巨大优势，且无毒副作用，具有显著的社会意义和经济价值。

附图说明

图1为实施例5中高尿酸血症小鼠模型试验的血尿酸变化结果统计图。

图2为实施例5中高尿酸血症小鼠模型试验的肠道ABCG2的相对表达量结果统计图。

图3为实施例5中高尿酸血症小鼠模型试验的滑囊膜ABCG2的相对表达量结果统计图。

图4为实施例5中高尿酸血症小鼠模型试验的滑囊膜Na-K泵的相对活性结果统计图。

图5为实施例5中高尿酸血症小鼠模型试验的肠道与肝脏XOD活性结果统计图。

图6为实施例5中高尿酸血症小鼠模型试验的肾脏URAT1的相对表达量结果统计图。

图7为实施例6中急性痛风大鼠模型的足垫厚度及炎性因子IL-1β的变化结果统计图。

图8为受试者干预前后关节内晶体的双能CT的三维重建图片。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本发明。在本发明实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本发明实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。

EGCG：表没食子儿茶素没食子酸酯，纯度95％，购自西安佰斯特生物科技有限公司。

三丁酸甘油酯：纯度99％，购自山东国化化学有限公司。

维生素C：纯度99％，购自上海源叶生物科技有限公司。

牛磺酸：纯度99％，购自上海源叶生物科技有限公司。

微晶纤维素：纯度97％，购自上海源叶生物科技有限公司。

实施例1

本实施例提供多种组合物，具体用量配比见下表：

组合物	三丁酸甘油酯	微晶纤维素	重量份合计
				组合物1	20	80	100
组合物2	40	60	100
				组合物3	60	40	100
组合物4	80	20	100
				组合物5	100	0	100

实施例2

本实施例提供多种组合物，具体用量配比见下表：

实施例3

本实施例提供多种组合物，具体用量配比见下表：

组合物	三丁酸甘油酯	维生素C	微晶纤维素	重量份合计
					组合物11	40	15	45	100
组合物12	40	30	30	100
					组合物13	40	45	15	100
组合物14	40	60	0	100
					组合物15	0	60	40	100

实施例4

本实施例提供多种组合物，具体用量配比见下表：

组合物	三丁酸甘油酯	EGCG	维生素C	牛磺酸	微晶纤维素	用量合计
							组合物16	40	30	30	0	0	100
组合物17	40	30	30	50	0	150

实施例5高尿酸血症缓解效果评测

选体重在20～25g的雄性Balb/c小鼠100只，每5只为一组，随机分成20组：1个健康对照组、1个高尿酸血症模型组、1个服用药物的对照组(别嘌醇)和17个组合物实验组(用于对实施例1至4中的17个组合物进行效果测试)。

小鼠模型的方法步骤为：先经过7天的适应性喂养后，开始造模。空白组的5只Balb/c小鼠正常饮食饮水，灌胃100μL生理盐水；其余各组正常饮食和饮水，每天灌胃氧嗪酸钾300mg/(kg/d)和腺嘌呤200mg/(kg/d)，造模1h后，健康对照组和高尿酸血症模型组灌胃生理盐水、药物对照组灌胃别嘌醇20mg/kg/d、17个实验组分别灌胃组合物1至组合物17(药品的配制方法：用生理盐水溶解组合物，用量为40mg/kg/d)，连续给药7天。

第7天用药1h后处死小鼠，取血、肝脏、肾脏、肠道和关节。检测血清尿酸、XOD活性、ABCG2表达量、URAT1表达量、Na+-K+泵活性。

其中，1)检测血清尿酸的方法步骤为：

采用尿酸(UA)比色法测试盒(购自武汉伊莱瑞特生物科技股份有限公司，货号E-BC-K016-M)测定血尿酸，取25μL不同浓度标准品，加入到对应的标准管中；取25μL待测样本，加入到对应的测定管中。各孔加250μL试剂二，涡旋混匀3s，静置5min，2000g离心5min，取上清。各取160μL上述上清液到对应的酶标板孔中，各孔依次加入50μL试剂三、50μL试剂四。酶标仪震板10s，室温静置15min，酶标仪690nm处，测定各孔OD值。

2)检测XOD活性的方法步骤为：

采用黄嘌呤氧化酶(XOD)活性检测试剂盒(购自北京索莱宝科技有限公司，货号BC1095)检测血液和肝脏的XOD黄嘌呤氧化酶活性，肝脏样本处理方式：称取约0.1g肝脏，加入1ml试剂一，进行冰浴匀浆，在4℃，8000g离心10min，取上清，置冰上待测；血浆样本处理方式：直接检测。分光光度计或酶标仪预热30min以上，调节波长至530nm，分光光度计蒸馏水调零。标准液的稀释：将标准液用蒸馏水稀释至0.25μmol/mL的标准液(可以吸取25μl、10μmol/ml亚硝酸钠和975μl蒸馏水混合)。按照检测试剂盒的操作说明处理，测定530nm处吸光值。

3)检测ABCG2、URAT1表达量的方法步骤为：

提取组织样本的总RNA，采用超微量紫外/可见分光光度仪测定总RNA的浓度和纯度，采用OD260/OD280可以作为RNA纯度的评定方法，样本RNA纯度保持在1.8～2.0之间。逆转录成cDNA，cDNA加入60μL dH₂O稀释备用。反应体系如下：2μL 5X PrimeScript RTmaster mix，RNA质量确保在5～10ng，加ddH₂O补足10μL。反应条件：37℃，30min；85℃，5min；4℃，30min。实时荧光定量聚合酶链反应(RT PCR)检测ABCG2、URAT1表达水平及看家基因GAPDH表达水平。每个样本重复进行RT PCR检测3次，取平均值作为该样本基因的表达量。ABCG2/GAPDH、URAT1/GAPDH的比值作为样本基因的相对表达量。

4)检测Na+-K+泵活性的方法步骤为：

用预冷的PBS(10mM,pH＝7.4)冲洗滑囊膜，去除残留血液。将滑囊膜与PBS加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆进行超声破碎，或反复冻融，最后将匀浆液于5000g离心5～10min，取上清检测。将室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，样本孔中加入待测样本50μL，空白孔不加。除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL，用封板摸封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μL)，静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次。每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

相关指标的检测统计结果见图1至6，可以看出：

a)组合物1～5的测试结果显示：三丁酸甘油酯具有显著的降尿酸效果，呈现剂量依赖性。其降尿酸的机制是提高ABCG2的表达、抑制XOD的活性、降低URAT1的表达，从而促进尿酸的肠排泄和肾排泄、减少尿酸的合成。

b)组合物6～10、组合物11～15的测试结果显示：EGCG和维生素C均可以显著增强三丁酸甘油酯的降尿酸能力，EGCG主要是通过提高三丁酸甘油酯诱导的提高ABCG2表达、抑制XOD活性和抑制URAT1的表达的能力来降低血尿酸，维生素C通过提高ABCG2的表达和抑制URAT1的表达来降低血尿酸，均呈现出一定的剂量依赖性。

c)组合物2、组合物10的降尿酸能力、提高ABCG2表达的能力、抑制XOD活性的能力、抑制URAT1表达的能力的叠加效果均显著弱于组合物9，说明三丁酸甘油酯与EGCG具有相互促进的协同功功效，而不单纯是叠加效果。

组合物2、组合物15的降尿酸能力、提高ABCG2表达的能力和抑制URAT1表达的能力的叠加效果均显著弱于组合物14，说明三丁酸甘油酯与维生素C具有相互促进的能力，而不单纯是叠加效果。

组合物9、组合物14的效果显著弱于组合物16的降尿酸、提高ABCG2表达、抑制XOD活性、降低URAT1表达的效果说明，EGCG与维生素C也具有相互促进的协同效果。

d)组合物16略微弱于组合物17，说明牛磺酸也具有微弱的促进三丁酸甘油酯、EGCG和维生素C的降尿酸能力，其机制主要是提高ABCG2的表达、抑制URAT1的表达。

实施例6急性痛风缓解、治疗效果评测

选体重在90～110g左右的5周龄雄性SD大鼠100只，每5只为一组，随机分成20组：1个健康对照组、1个痛风模型组、1个服用药物的对照组(双氯芬酸钠)、17个组合物实验组(用于对实施例1至4中的17个组合物进行效果测试)。

大鼠模型的方法步骤为：经过7天的适应性喂养后，开始造模。健康对照组和痛风模型组灌胃100μL、药物对照组灌胃100μl 120mg/ml的双氯芬酸钠、组合物实验组分别灌胃组合物1～17(药品的配制方法：用生理盐水溶解组合物，用量为40mg/kg/d)，连续预处理3天。第3天处理1h后，健康对照组的足垫关节内注射100μL生理盐水，痛风模型组、药物对照组、组合物实验组1～17的足垫内注射100μL 40mg/mL的单钠尿酸盐晶体(MSU)。2天后，测量足垫厚度，处死大鼠并测定炎性因子IL-1β的表达量。

足垫厚度和炎性因子IL-1β表达量的测试结果统计见图7，可以看出：

a)组合物1～5的测试结果显示：三丁酸甘油酯具有显著的缓解痛风性关节炎效果，呈现剂量依赖性，减少炎性因子IL-1β的表达、分泌是主要机制。

b)组合物6～10的测试结果显示：EGCG可以增强三丁酸甘油酯抑制IL-1β的表达分泌，从而增强其缓解急性痛风的能力。而维生素C对三丁酸甘油酯缓解急性痛风的效果无影响。

c)组合物11～15的测试结果显示：维生素C对三丁酸甘油酯缓解急性痛风的效果无影响。

d)组合物16的效果显著弱于组合物17，说明牛磺酸具有显著促进三丁酸甘油酯、EGCG和维生素C的缓解急性痛风的能力，其机制主要抑制炎性因子IL-1β的表达分泌。

实施例7降血尿酸的临床效果

征集了60例慢性痛风性关节炎病人(痛风病史3～15年，发作频次≥8次/年)做受试者(委托潍坊市人民医院)，随机分为6组，每组10人，干预方式分别为：无干预对照组、组合物5干预组(10g)、组合物9干预组(10g)、组合物14干预组(10g)、组合物16干预组(10g)、组合物17干预组(15g)，干预周期为45天，在干预前以及干预后第15、30、45天测定血尿酸水平，统计结果见下表：

干预期的受试者血尿酸变化(平均值±标准差)

结果显示：组合物9(特定配比的三丁酸甘油酯+EGCG)、组合物14(特定配比的三丁酸甘油酯+维生素C)的降尿酸效果均显著强于组合物5(三丁酸甘油酯)，但是弱于组合物16(特定配比的三丁酸甘油酯+EGCG+维生素C)的降尿酸效果，说明EGCG、维生素C均能显著增强三丁酸甘油酯的降尿酸效果，且EGCG与维生素C之间存在着相互增效的作用。组合物17的降尿酸能力强于组合物16，说明牛磺酸对于三丁酸甘油酯、EGCG和维生素C的降尿酸能力具有增效作用。组合物16和组合物17干预45天后，血尿酸低于420μmol/L的患者人数分别为6人(60％)和7人(70％)。即：临床试验结果显示组合物17的降尿酸效果最佳，其次依次为组合物16、组合物9、组合物14、组合物5。

同时，本实施例还进一步对受试者干预期内的痛风发作次数、发作后关节痛感消除时间、关节肿胀消除时间进行采集，进行统计结果见下表：

干预期间受试者痛风的发作频次及痛感、肿胀消除时间(平均值±标准差)

组别	痛风发作次数	痛感消除时间/h	肿胀消除时间/h
				对照组	2.3±0.7	63±13	117±15
组合物5	1.3±0.8	29±9.2	56±14
				组合物9	0.5±0.3	6±5.1	12±5.3
组合物14	1.2±0.9	26±7.4	64±9.6
				组合物16	0.9±0.3	11±2.2	22±2.7
组合物17	0.1±0.1	2±1.3	9±2.8

结果显示：

a)采用组合物5、9、14、16、17干预后，痛风发作次数、关节疼痛消除时间、关节肿胀消除时间均显著改善。

b)组合物5与组合物4、组合物9与组合物16的临床效果无显著差异，说明维生素C对三丁酸甘油酯、EGCG缓解急性痛风症状方面无促进作用。

c)组合物5、组合物16的临床效果均显著弱于组合物9的临床效果，说明EGCG可以显著增强三丁酸甘油酯缓解急性痛风的临床效果。

d)组合物17的临床效果显著优于组合物5、组合物9、组合物16，说明牛磺酸可以显著增强三丁酸甘油酯、EGCG缓解急性痛风的临床效果。

另外，本实施例还进一步对受试者(无干预对照组受试者、组合物16干预组受试者、组合物17干预组受试者)延长临床干预时间至120天，在干预前、干预120天后采用双能CT测定关节尿酸盐晶体体积，评价干预前后尿酸钠盐晶体的溶解效果。图8显示部分受试者的干预前后关节内晶体的双能CT的三维重建图片。

干预前后沉积的尿酸盐晶体体积的变化结果统计如下表：

干预前后沉积的尿酸盐晶体体积的变化

患者	干预前(cm3)	干预后(cm3)	变化值(cm3)
				对照组	3.78±0.62	3.97±0.74	0.19±0.23
组合物16	3.89±0.47	3.07±0.51	-0.82±0.48
				组合物17	3.84±0.58	3.14±0.81	-0.70±0.21

结果表明：无干预组受试者中0人(0％)关节内沉积的尿酸盐晶体出现溶解，组合物16干预组受试者中7人(70％)关节内尿酸盐晶体出现溶解，组合物17干预组受试者中6人(60％)关节内尿酸盐晶体出现溶解。

实施例8组合物17减少降尿酸药物的临床使用剂量，降低出现副作用风险

国内已上市的降尿酸药物有4个：别嘌醇、非布司他、苯溴马隆、丙磺舒，其中丙磺舒具有严重肾毒性，目前基本上已经退市。临床应用率从高到低的排序为：非布司他(约69～70％)＞苯溴马隆(约21～22％)＞别嘌醇(约8～10％)。高尿酸血症和痛风是一类慢性代谢性疾病，需要长期、甚至终生用药，若仅靠降尿酸药物进行治疗，患者均会出现不同程度的副作用，如胃肠道损失、肝肾损伤、死亡风险增加等。

本实施例采用小剂量降尿酸药物非布司他、苯溴马隆单独使用，或者分别与组合物17联合使用的方式，验证组合物17是否可以减少降尿酸药物用量。

招募40例慢性痛风性关节炎病人(痛风病史3～15年，发作频次≥8次/年)做受试者(委托潍坊市人民医院)，随机分为4组，每组10人，分别为：40mg非布司他干预组、50mg苯溴马隆干预组、20mg非布司他+10g组合物17干预组和25mg苯溴马隆+10g组合物17干预组。干预周期为30天，观察干预期间血尿酸的变化。

结果如下表所示：

小剂量药物单用或与组合物17联用的临床效果

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测试结果表明：干预15天、30天后，20mg非布司他+10g组合物17干预组和25mg苯溴马隆+10g组合物17干预组的临床降尿酸效果分别于40mg非布司他、50mg苯溴马隆的降尿酸效果相当，即组合物17可以减少降尿酸药物的临床使用剂量。而且，组合物17可以降低药物降尿酸期间的痛风发作风险。

在此有必要指出的是，以上实施例仅限于对本发明的技术方案做进一步的阐述和说明，并不是对本发明的技术方案的进一步的限制，本发明的方法仅为较佳的实施方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.三丁酸甘油酯在溶解关节内沉积的尿酸盐晶体、缓解痛风发作和/或降低血尿酸方面的应用。

2.一种溶解关节内沉积的尿酸盐晶体、缓解痛风发作和/或降低血尿酸的组合物，其特征在于，所述组合物至少包含三丁酸甘油酯。

3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含EGCG、维生素C和牛磺酸中的至少一种。

4.根据权利要求2或3所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含三丁酸甘油酯和EGCG；

优选地，所述三丁酸甘油酯和EGCG的重量比为(1～10)：(1～10)。

5.根据权利要求2或3所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含三丁酸甘油酯和维生素C；

优选地，所述三丁酸甘油酯和维生素C的重量比为(1～10)：(1～10)。

6.根据权利要求2或3所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含三丁酸甘油酯和牛磺酸。

7.根据权利要求2或3所述的组合物，其特征在于，所述组合物包含三丁酸甘油酯、EGCG和牛磺酸。

8.根据权利要求2或3所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包含可联合使用的降尿酸药和/或辅料。

9.根据权利要求8所述的组合物，其特征在于，所述降尿酸药选自别嘌呤醇、非布司他、苯溴马隆、丙磺舒中的至少一种。

10.一种溶解关节内沉积的尿酸盐晶体、缓解痛风发作和/或降低血尿酸的制剂，其特征在于，采用权利要求2至9任一项所述的组合物制备而成。

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