CN116124945A - 一种基于uplc-q-tof-ms技术分析及鉴定中药制剂中化学成分的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种基于UPLC‑Q‑TOF‑MS技术分析及鉴定中药制剂中化学成分的方法，并提供了基于该技术建立的中药制剂中化学成分的筛查谱库，以及一种中药制剂质量稳定性的检测方法。根据本发明所述方法分析中药制剂中的化学成分时，前处理简单，成分损失少，检测更加准确和灵敏，且耗费时间短，35min内即可有效分离中药制剂中的几十种化学成分，实现对中药制剂中化学成分的高通量检测及分析鉴定，可以快速、全面地解析中药制剂中的化学成分，克服了中药制剂成分复杂、分离及鉴别困难的问题，有利于中药制剂的质量鉴定、质量检测和质量控制。
Description
技术领域
本发明属于中成药中化学成分的分析方法技术领域。具体地，涉及一种基于UPLC-Q-TOF-MS技术分析及鉴定中药制剂中化学成分的方法。
背景技术
中药及复方制剂是一个复杂的多成分体系，明确中药及复方制剂中所含有的化学成分信息，是阐明中药及复方制剂的药效物质基础、评价其质量和安全性的前提。随着中药及复方制剂控制技术的提升，少数指标成分的含量测定已经不能完全体现中药及复方制剂的质量优劣。因此，对中药制剂中的化学成分进行高通量筛查技术的研究十分有必要，可对阐明中药制剂药效物质打下基础，对挖掘中药制剂的微量成分及建立质量控制方案有着重要意义。
清开灵制剂具有清热解毒、镇静安神、化痰通络以及醒脑开窍的功效，在临床上使用广泛。作为典型的中药复方制剂，亟需对清开灵制剂中的化学成分进行高通量筛查研究，建立质量控制。清开灵制剂包括清开灵口服液、清开灵片、清开灵软胶囊、清开灵泡腾片、清开灵注射液、清开灵颗粒等剂型。目前对清开灵制剂中化学成分的研究仍多采用液相色谱(HPLC)、液相色谱串联质谱(LC-MS)等方法，仅能对其中的一种或几种化学成分进行定性定量分析。例如，2010年版《中华人民共和国药典》收载的清开灵注射液标准中，就以测定猪去氧胆酸、栀子、黄芩苷的含量以及总氮量来进行质量控制。但清开灵制剂中所含有的化学成分众多，利用上述三种活性成分不足以完全代表其质量优劣，也无法用于评价清开灵制剂的质量稳定性。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有上述技术的缺陷和不足，提供一种基于UPLC-Q-TOF-MS(超高效液相色谱与飞行时间质谱联用)技术分析及鉴定中药制剂中化学成分的方法。
本发明的第一个目的是提供一种基于UPLC-Q-TOF-MS技术分析及鉴定中药制剂中化学成分的方法。
本发明的第二个目的是提供一种利用所述方法建立的中药制剂中化学成分的筛查谱库。
本发明的第三个目的是提供所述筛查谱库在中药制剂质量检测方面的应用。
本发明的第四个目的是提供所述的筛查谱库在构建中药制剂质量检测方法方面的应用。
本发明的第五个目的是提供所述的筛查谱库在构建中药制剂质量检测产品方面的应用。
本发明的第六个目的是提供一种中药制剂的质量检测方法。
本发明的第七个目的是提供一种中药制剂质量稳定性的检测方法。
本发明上述目的通过以下技术方案实现：
本发明提供了一种基于UPLC-Q-TOF-MS技术分析及鉴定中药制剂中化学成分的方法，包括以下步骤：
S1.供试品溶液的制备：若待测样品为中药液体制剂，则将样品用有机滤膜过滤即得供试品溶液；若待测样品为中药固体制剂，则将样品用乙醇溶解后用有机滤膜过滤即得供试品溶液；
S2.用超高效液相色谱(UPLC)对步骤S1所得供试品溶液中的化学成分进行分离，用四极杆-飞行时间质谱(Q-TOF-MS)对分离到的化学成分进行检测，获得所分离化学成分的保留时间、准分子离子的分子量和二级质谱碎片离子数据，利用所得数据建立筛查谱库；
S3.对上述筛查谱库的化学成分进行鉴定；
其中，步骤S2中所用色谱条件如下：色谱柱为Phenomenex C18；柱温为28～32℃；流动相A相为乙腈，B相为0.1％甲酸水溶液；梯度洗脱程序为：0～19min，0％～12％ A；19～24min，12％～19％ A；24～24.1min，19％～20％ A；24.1～35min，20％ A，35～35.1min，20％～100％ A，35.1～36min，100％～0％ A；36～40min，0％ A；流速为0.3mL·min-1；进样体积为0.3μL；检测波长为254nm；
所用质谱条件如下：用电喷离雾子源，用正离子和负离子模式进行扫描分析；离子源电压分别为5500V和-4500V；离子源温度为500℃；裂解电压(DP)为100V；碰撞能(CE)为±30eV；碰撞能量扩展(CES)为15eV；雾化气体为氮气，辅助气1(Gas 1)为55psi，辅助气2(Gas2)为55psi，气帘气(Cur Gas)为35psi；一级质谱母离子扫描(m/z)范围为100～1600Da，二级质谱扫描子离子扫描(m/z)范围为0～1600Da；
所述中药制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母和黄芩苷制成。
具体地，所述辅助气和气帘气也为氮气；
具体地，所用色谱柱为Phenomenex C18色谱柱(2.1mm×100mm，1.6μm)。
优选地，所述柱温为30℃，见实施例1。
本发明所述中药固体制剂供试品溶液的制备方法为：将中药固体制剂粉碎、过筛，每0.45～0.5g粉末加45～50mL乙醇混匀，超声提取10～15min后离心取上清，上清液用有机滤膜过滤即得供试品溶液。
具体地，每0.5g粉末加50mL乙醇混匀。
优选地，所述过筛为过60目不锈钢筛网。
优选地，所述超声提取时间为10min，所述离心条件为8000r/min离心5min。
优选地，所述有机滤膜为0.22μm滤膜。
优选地，所述有机滤膜为PTFE滤膜。
具体地，所述乙醇为70％～80％乙醇。
优选地，所述乙醇为75％乙醇。
本发明利用上述方法，还建立了一种中药制剂中化学成分的筛查谱库，所述筛查谱库中含有48种化学成分的保留时间、准分子离子的分子量和二级质谱碎片离子数据，所述48种化学成分为3,6,7,12-四羟基胆烷酸、3,12-二羟基-7-酮胆烷酸及其异构体、3-羟基-7,12-二酮胆烷酸、猪胆酸及其异构体、胆酸、猪去氧胆酸、3-羟基-12-酮胆烷酸及其异构体、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、黄芩苷、汉黄芩苷、5,7-二羟黄酮、木犀草素、芦丁及其异构体、山栀子苷、栀子新苷、栀子酸、玉叶金花苷酸、马钱苷酸、水晶兰苷、断马钱子酸、京尼平1-β-D-龙胆双糖苷、京尼平甙、栀子苷、茉莉醇、奎宁酸、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、肉桂酸、咖啡酸、阿魏酸、4-羟基苯甲酸、阿魏酰奎宁酸及其异构体、L-苏氨酸、精氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、L-酪氨酸、L-谷氨酸、L-色氨酸、苯丙氨酸、蔗糖、尿苷、腺苷、腺嘌呤和鸟苷；
所述中药制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母和黄芩苷制成。
所述48种化学成分的保留时间、准分子离子的分子量和二级质谱碎片离子数据如下：
L-苏氨酸的准分子离子m/z为119.05824，二级质谱碎片离子m/z有86.0337、74.0282和72.0104，保留时间为0.95min；
精氨酸的准分子离子m/z为174.11168，二级质谱碎片离子m/z有158.0921、130.0970和116.0703，保留时间为0.98min；
奎宁酸的准分子离子m/z为192.06339，二级质谱碎片离子m/z有173.0447、155.0345、137.0239、127.0400和111.0459，保留时间为1.07min；
脯氨酸的准分子离子m/z为115.06333，二级质谱碎片离子m/z有116.0702、70.0663，保留时间为1.09min；
蔗糖的准分子离子m/z为342.11621，二级质谱碎片离子m/z有179.0559和161.0453，保留时间为1.17min；
天冬氨酸的准分子离子m/z为133.03751，二级质谱碎片离子m/z有88.1032和74.0247，保留时间为1.22min；
缬氨酸的准分子离子m/z为117.07898，二级质谱碎片离子m/z有72.0819、57.0597和55.0569，保留时间为1.27min；
尿苷的准分子离子m/z为244.06954，二级质谱碎片离子m/z有225.0787、200.0558和111.0192，保留时间为1.61min；
L-酪氨酸的准分子离子m/z为244.06954，二级质谱碎片离子m/z有165.0535、147.0433、136.0746、119.0484和91.0543，保留时间为1.65min；
腺苷的准分子离子m/z为267.09675，二级质谱碎片离子m/z有136.0613和119.0353，保留时间为5.53min；
腺嘌呤的准分子离子m/z为135.0545，二级质谱碎片离子m/z有103.0373和92.0270，保留时间为5.54min；
肉桂酸的准分子离子m/z为148.05243，二级质谱碎片离子m/z有119.057和103.0540，保留时间为5.60min；
鸟苷的准分子离子m/z为283.0916，二级碎片m/z有150.0409和133.0152，保留时间为5.61min；
山栀子苷的准分子离子m/z为392.13186，二级质谱碎片离子m/z有229.07、185.0805、167.0701和149.0598，保留时间为6.61min；
栀子新苷的准分子离子m/z为392.13186，二级质谱碎片离子m/z有229.07、185.0805、167.0701和149.0598，保留时间为6.94min；
L-谷氨酸的准分子离子m/z为147.05316，二级质谱碎片离子m/z有130.0315、102.0547和84.0452，保留时间为7.29min；
绿原酸的准分子离子m/z为354.09508，二级质谱碎片离子m/z有191.0554、179.0354和135.0445，保留时间为7.41min；
咖啡酸的准分子离子m/z为180.04226，二级质谱碎片离子m/z有163.0384、135.0444、117.0335和89.0402，保留时间为7.47min；
4-羟基苯甲酸的准分子离子m/z为138.03169，二级质谱碎片离子m/z有119.0144和93.0282，保留时间为7.88min；
栀子酸的准分子离子m/z为374.1213，二级质谱碎片离子m/z有193.0502、167.0701、149.0603和123.0454，保留时间为7.93min；
L-色氨酸的准分子离子m/z为204.08988，二级质谱碎片离子m/z有188.0691、170.0589、132.0796和118.0640，保留时间为8.03min；
玉叶金花苷酸的准分子离子m/z为376.13695，二级质谱碎片离子m/z有213.0760、169.0865、151.0762和113.0252，保留时间为8.11min；
马钱苷酸的准分子离子m/z为376.13695，二级质谱碎片离子m/z有195.0655、151.0760和113.0236，保留时间为8.45min；
水晶兰苷的准分子离子m/z为390.11621，二级质谱碎片离子m/z有345.1183、209.0443、183.0653、165.0550和121.0653，保留时间为8.75min；
断马钱子酸的准分子离子m/z为374.1213，二级质谱碎片离子m/z有193.0464、167.0718、149.0548和97.0296，保留时间为9.09min；
新绿原酸的准分子离子m/z为354.09508，二级质谱碎片离子m/z有191.0551、179.0346和173.0450，保留时间为9.11min；
阿魏酸的准分子离子m/z为194.05791，二级质谱碎片离子m/z有178.0242、149.0626和134.0389，保留时间为9.35min；
京尼平1-β-D-龙胆双糖苷的准分子离子m/z为550.18977，二级质谱碎片离子m/z有353.1218、227.0902和209.0796，保留时间为9.57min；
京尼平甙的准分子离子m/z为388.13695，二级质谱碎片离子m/z有225.0763、207.0664、123.0453和101.0258，保留时间为10.12min；
栀子苷的准分子离子m/z为404.13186，二级质谱碎片离子m/z有371.0983、223.0767、165.0550和121.0295，保留时间为11.24min；
阿魏酰奎宁酸的准分子离子m/z为368.11073，二级质谱碎片离子m/z有193.0498、173.0446和134.0369，保留时间为11.28min；
茉莉醇的准分子离子m/z为184.10994，二级质谱碎片离子m/z有139.1123和137.0977，保留时间为11.66min；
芦丁的准分子离子m/z为610.15339，二级质谱碎片离子m/z有301.0347、271.0241和255.0280，保留时间为13.24min；
木犀草素的准分子离子m/z为286.04774，二级质谱碎片离子m/z有243.1719、214.0323和144.0461，保留时间为13.75min；
隐绿原酸的准分子离子m/z为354.09508，二级质谱碎片离子m/z有191.0572、179.0336、173.0446和135.0442，保留时间为14.21min；
苯丙氨酸的准分子离子m/z为165.07898，二级质谱碎片离子m/z有120.0819和103.0549，保留时间为14.32min；
苯丙氨酸的准分子离子m/z为165.07898，二级质谱碎片离子m/z有120.0819和103.0549，保留时间为14.32min；
黄芩苷的准分子离子m/z为446.08491，二级质谱碎片离子m/z有269.0442、175.0239和113.0243，保留时间为16.67min；
5,7-二羟黄酮的准分子离子m/z为254.05791，二级质谱碎片离子m/z有253.0502、209.0643，保留时间为18.48min；
汉黄芩苷的准分子离子m/z为460.10056，二级质谱碎片离子m/z有283.0586、268.0854、175.0234和113.0245，保留时间为18.61min；
3,6,7,12-四羟基胆烷酸的准分子离子m/z为424.28249，二级质谱碎片离子m/z有405.2641和369.2451，保留时间为23.02min；
3,12-二羟基-7-酮胆烷酸的准分子离子m/z为406.27192，二级质谱碎片离子m/z有361.2757和343.2656，保留时间为24.29min；
3-羟基-7,12-二酮胆烷酸的准分子离子m/z为404.25627，3m/z有333.0286和289.2172，保留时间为24.34min；
猪胆酸的准分子离子m/z为408.28757，二级质谱碎片离子m/z有391.2832、373.2717、355.2612、337.2509和319.2414，保留时间为25.68min；
胆酸的准分子离子m/z为408.28757，二级质谱碎片离子m/z有389.2712、371.2589、363.2895、353.2482、345.2796和343.2643，保留时间为26.64min；
猪去氧胆酸的准分子离子m/z为392.29266，二级质谱碎片离子m/z有357.2764、339.2676和321.2560，保留时间为27.66min；
3-羟基-12-酮胆烷酸准分子离子m/z为390.27701，二级质谱碎片离子m/z有343.1055、327.2669和321.9021，保留时间为28.55min；
鹅去氧胆酸的准分子离子m/z为392.29266，二级质谱碎片离子m/z有357.2771、339.2664和321.2573，保留时间为31.16min；
去氧胆酸的准分子离子m/z为392.29266，二级质谱碎片离子m/z有355.2643、345.2788和327.2687，保留时间为31.16min。
利用本发明所建立的中药制剂化学成分的筛查谱库，可以对所述中药制剂进行质量检测，构建相应的质量检测方法。因此，本发明申请保护所述筛查谱库在中药制剂质量检测方面的应用。
本发明还申请保护所述筛查谱库在中药制剂质量检测方法方面的应用。
本发明还申请保护所述筛查谱库在中构建中药制剂质量检测产品方面的应用。
具体地，所述中药制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母和黄芩苷制成。
本发明还提供了一种中药制剂的质量检测方法，通过检测中药制剂的化学成分进行所述中药制剂的质量检测或鉴别，所述化学成分包括玉叶金花苷酸、马钱苷酸、水晶兰苷、断马钱子酸、茉莉醇中的任一或任几个；所述中药制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母和黄芩苷制成。
本发明还提供了一种中药制剂质量稳定性的检测方法，所述方法为：利用所述基于UPLC-Q-TOF-MS技术分析及鉴定中药制剂中化学成分的方法对不同批次中药制剂或同批次不同时间点的中药制剂中的化学成分进行分离和检测，获得所分离化学成分的保留时间、准分子离子的分子量和二级质谱碎片离子数据；将所得数据与所述筛查谱库进行比对；根据比对结果判断不同批次中药制剂或同批次不同时间点的中药制剂的质量稳定性；
具体地，所述结果判断的标准如下：
若所比对化学成分的保留时间偏差为±0.2min，精确质量偏差为±5mDa且可匹配2个及以上的碎片离子，则表明所比对化学成分为同种物质；
不同批次中药制剂或同批次不同时间点的中药制剂所含有的化学成分差异越小，则表明所测中药制剂的质量稳定性越好；
所述中药制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母和黄芩苷制成。
本发明上述方法或应用中，所述中药制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母和黄芩苷制成。
本发明上述方法或应用中，所述中药制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母和黄芩苷制成。具体由以下重量份的各组分制成：金银花50～4000重量份、栀子50～500重量份、板蓝根500～2000重量份、胆酸10～20重量份、猪去氧胆酸10～25重量份、水牛角50～500重量份、珍珠母50～500重量份、黄芩苷5～50重量份。
更具体地，所述液体制剂由以下重量份的各组分制成：胆酸13重量份，猪去氧胆酸15重量份，水牛角100重量份，黄芩苷20重量份，珍珠母200重量份，栀子100重量份，板蓝根800重量份，金银花240重量份。
具体地，所述中药制剂剂型包括口服液、注射液等液体制剂，以及胶囊、颗粒、片剂等固体制剂。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供了一种基于UPLC-Q-TOF-MS技术分析及鉴定中药制剂中化学成分的方法，并提供了基于该技术建立的中药制剂中化学成分的筛查谱库，以及一种中药制剂质量稳定性的检测方法。根据本发明所述方法分析中药制剂中的化学成分时，前处理简单，成分损失少，检测更加准确和灵敏，且耗费时间短，35min内即可有效分离中药制剂中的几十种化学成分，实现对中药制剂中化学成分的高通量检测及分析鉴定，可以快速、全面地解析中药制剂中的化学成分，克服了中药制剂成分复杂、分离及鉴别困难的问题，有利于中药制剂的质量鉴定、质量检测、质量控制。
附图说明
图1为清开灵口服液在正负离子模式下的总离子流图；图中的A为负离子模式下的离子流图，图中的B为正离子模式下的离子流图。
图2为清开灵口服液中胆酸类化合物胆酸的裂解规律图；图中的A为胆酸的裂解途径，图中的B为胆酸的质谱图。
图3为清开灵口服液中黄酮类化合物汉黄芩苷的裂解规律图；图中的A为汉黄芩苷的裂解途径，图中的B为汉黄芩苷的质谱图。
图4为清开灵口服液中环烯醚萜类化合物京尼平甙的裂解规律图；图中的A为京尼平甙的裂解途径，图中的B为京尼平甙的质谱图。
图5为清开灵口服液中有机酸类化合物阿魏酸的裂解规律图；图中的A为阿魏酸的裂解途径，图中的B为阿魏酸的质谱图。
图6为清开灵口服液中氨基酸类化合物L-色氨酸的裂解规律图；图中的A为L-色氨酸的裂解途径，图中的B为L-色氨酸的质谱图。
图7为清开灵口服液用对比例中所述的色谱条件1所得色谱图。
图8为清开灵口服液用对比例中所述的色谱条件2所得色谱图。
图9为清开灵口服液用对比例中所述的色谱条件3所得色谱图。
图10为清开灵口服液用对比例中所述的色谱条件4所得色谱图。
图11为清开灵口服液用对比例中所述的色谱条件5所得色谱图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体实施例来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
本发明实施例中所用仪器和试剂为：Triple-TOFTM5600+型三重四级杆飞行时间质谱，配置电喷雾离子源；数据采集软件为Analyst TF 1.7sofware；数据处理软件为Peakview 2.0。
LC-MS级乙腈购自默克集团(德国达姆施塔特)；色谱级甲酸购自天津科密欧化学试剂有限公司(中国天津)；纯化水购自屈臣氏集团有限公司(中国广州)；清开灵口服液(批号：1221201)；清开灵注射液(批号：1220302)；清开灵颗粒(批号：5221201)；清开灵胶囊(批号：1221201)。
实施例1基于UPLC-Q-TOF-MS技术分析及鉴定中药制剂中化学成分的方法
本发明提供了一种基于UPLC-Q-TOF-MS技术分析及鉴定中药制剂中化学成分的方法，包括供试品溶液的制备、UPLC-Q-TOF-MS分离及检测、质谱数据的收集及分析等步骤。本发明利用所述方法分别对清开灵颗粒、清开灵胶囊、清开灵口服液和清开灵注射液中的化学成分进行了分析及鉴定。具体过程如下：
1、供试品溶液的制备
标准品溶液的制备：将胆酸、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸、L-色氨酸、京尼平甙、汉黄芩苷、阿魏酸标准品溶解在LC-MS级甲醇中，浓度为1mg/mL，获得混合对照品储备液。
清开灵口服液供试品溶液的制备：用0.22μm PTFE滤膜对清开灵口服液进行过滤即得。
清开灵注射液供试品溶液的制备：用0.22μm PTFE滤膜对清开灵注射液进行过滤即得。
清开灵颗粒供试品溶液的制备：将清开灵颗粒粉碎，过60目不锈钢筛网，称取0.5g于离心管中，加入50mL 75％乙醇溶解，涡旋混匀；超声提取10min，然后再8000r/min离心5min，取上清液过0.22μm PTFE滤膜，收集滤液即得。
清开灵胶囊供试品溶液的制备：将清开灵胶囊内容物粉碎，过60目不锈钢筛网，称取0.5g于离心管中，加入50mL 75％乙醇溶解，涡旋混匀；超声提取10min，然后再8000r/min离心5min，取上清液过0.22μm PTFE滤膜，收集滤液即得。
2、色谱和质谱条件的确定
本发明利用制备的清开灵口服液供试品溶液、清开灵注射液供试品溶液、清开灵颗粒供试品溶液和清开灵胶囊供试品溶液，通过反复调整、优化色谱和质谱条件，确立了用于分离、鉴定清开灵制剂中化学成分的最佳色谱和质谱条件。具体地，使用超高效液相色谱进行化学成分分离，使用四极杆-飞行时间质谱进行化学成分的检测，获得所分离化学成分的保留时间、准分子离子的分子量和二级质谱碎片离子数据，利用所得数据建立筛查谱库，对所得筛查谱库的化学成分进行鉴定。
色谱柱是影响化学成分分离的重要因素之一，本发明通过结合其它色谱条件对色谱柱进行反复考察，最终选用Phenomenex C18色谱柱(phenomenex
Omega 1.6μmPolar C18
(2.1×100mm，1.6μm))进行色谱分离。为使各成分分离完全，出峰时间缩短，本发明采用梯度洗脱，同时也对洗脱溶剂及梯度进行了反复优化，最终确定流动相为：水相(A)为乙腈，有机相(B)为0.1％甲酸水溶液；梯度洗脱程序如下表1所示：
表1最佳洗脱梯度程序
本发明试验发现，流动相的流速对化学成分的分离度及出峰时间也会产生明显的影响，流速较快或者较慢都不能使各成分很好的分离，经过一系列优化，本发明最终确定流动相的流速为0.3mL/min。另本发明对进样量进行了试验，发现进样量过少会影响微量化合物的检测，进样量过大则可能造成柱超载，经优化后确定进样量为0.3μL。
本发明确定的最佳色谱条件如下：色谱柱：Phenomenex C18色谱柱(2.1mm×100mm，1.6μm)；柱温：30℃；流动相：有机相(A)为乙腈，水相(B)为0.1％甲酸水溶液；采用梯度洗脱方式进行色谱分离，梯度洗脱程序为：0～19min，0％～12％ A；19～24min，12％～19％ A；24～24.1min，19％～20％ A；24.1～35min，20％ A，35～35.1min，20％～100％ A，35.1～36min，100％～0％A；36～40min，0％ A；流速为0.3mL·min-1；进样体积为0.3μL；检测波长为254nm；
本发明确定的最佳质谱条件如下：用电喷离雾子源，用正、负离子模式进行扫描分析；离子源电压分别为5500V和-4500V；离子源温度为500℃；裂解电压(DP)为100V；碰撞能(CE)为±30eV；碰撞能量扩展(CES)为15eV；雾化气体为氮气，辅助气(Gas 1)为55psi，辅助气(Gas 2)为55psi，气帘气(Cur Gas)为35psi；一级质谱母离子扫描范围(m/z)100～1600Da，IDA设置响应值超过100cps的8个最高的峰进行二级质谱扫描，子离子扫描范围(m/z)50～1 600Da。
本发明试验发现，若碰撞能过低则母离子无法裂解成碎片离子，导致碎片离子响应过低，碰撞能过高则碎片离子断裂为其他离子，合适的碰撞能量对碎片离子的获得尤为重要。因此，本发明根据母离子和碎片离子的强度优化了碰撞能的参数，对碰撞能进行分级，设置碰撞电压为±30eV。
清开灵口服液在正、负离子模式下的总离子流图如图1所示；图中的A为负离子模式下的总离子流图，图中的B为正离子模式下的总离子流图。由图1可知，本发明可从清开灵口服液的总离子流图中观察到主要色谱峰48个，表明所述色谱条件的分离效果好。其它清开灵制剂(清开灵注射液、清开灵颗粒和清开灵胶囊)供试品溶液的总离子流图与图1相似，在此不再赘述，仅以清开灵口服液在正、负离子模式下的总离子流图作为代表。
3、数据处理
本发明采用Peakview 2.0软件对数据进行处理。首先将清开灵制剂的化学成分分为胆酸类、黄酮类、环烯醚萜类、氨基酸类、有机酸类化合物，对每类结构的代表性化合物(所用对照品)进行质谱分析，总结裂解规律及中性丢失规律；其次，通过每类化合物的结构特点和结构相关性对目标化合物进行定向，构建目标前体离子列表；第三，通过二级质谱验证目标前体离子的结构的正确性，并综合分析质谱信息、保留时间等数据对化学成分信息进行全面、快速的解析。
数据处理结果见实验结果部分，详见不同化合物的解析。
4、实验结果
本发明从清开灵口服液中分离鉴定得到48个化学成分，包括9种胆酸类成分，5种黄酮类成分，11种环烯醚萜类成分，9种有机酸类成分，9种氨基酸以及5种其他类成分。
清开灵制剂中化学成分的基本结构和裂解规律：
清开灵制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、珍珠母、水牛角和黄芩苷，共8味中药制成，这些单味中药中的主要成分为胆酸、黄酮、环烯醚萜、氨基酸和有机酸类化合物。由于成药中的化学成分源自其组成单味中药，因此，清开灵制剂中的主要成分为胆酸、黄酮、环烯醚萜、氨基酸、有机酸类化合物。本发明将这几类化合物分为几类基本结构骨架，对每类化合物的代表性化合物进行对照品质谱分析，验证裂解规律。具体如下所示：
(1)胆酸类成分
本实验从清开灵口服液中共鉴定出9种胆酸类化学成分，主要来源于胆酸和猪去氧胆酸，包括3,6,7,12-四羟基胆烷酸、3,12-二羟基-7-酮胆烷酸及其异构体、3-羟基-7,12-二酮胆烷酸、猪胆酸及其异构体、胆酸、猪去氧胆酸、3-羟基-12-酮胆烷酸及其异构体、鹅去氧胆酸、去氧胆酸。
本发明以胆酸为代表性化合物，研究了该类化合物的ESI-MS/MS裂解规律：其一级质谱谱图中给出了准分子离子m/z 407[M-H]-，可确定其相对分子质量为408。在二级质谱谱图中，在高能ESI质谱离子源碰撞离子作用下获得主要二级碎片离子有m/z 389[M-H-H2O]-，m/z 371[M-H-2H2O]-，m/z 353[M-H-3H2O]-，m/z363[M-H-CO2]-，m/z 345[M-H-H2O-CO2]-等主要碎片离子，通过与对照品胆酸的一级、二级质谱裂解碎片和提取离子峰位置、相对保留时间进行比对，最终确定化合物44为胆酸，其质谱裂解途径如图2所示，与文献报道裂解途径一致(张加余,张倩,张红霞,董鲁艳,卢建秋,乔延江.清开灵注射液中14种胆汁酸的HPLC-ESI-MS/MS快速鉴定[J].中国中药杂志,2013,38(07):990-994.)。
另通过与对照品的质谱数据进行比对，可将化合物45准确鉴定为猪去氧胆酸，将化合物47准确鉴定为鹅去氧胆酸。
经查阅文献，胆汁酸类化合物母核上常见的取代位置有3-，6-，7-，12-位。化合物40的ESI-MS谱给出的准分子离子为m/z 423[M-H]-，其裂解途径与胆酸也基本类似。从相对分子质量上推断，该化合物的母核上比胆酸多1个羟基取代，结合胆汁酸类成分母核上的常见取代位置，将其鉴定为3，6，7，12-四羟基胆烷酸。
化合物41的ESI-MS谱给出的准分子离子为m/z 405[M-H]-，其相对分子质量则比胆酸少2D，说明其可能比胆酸要少1个羟基取代，而多了1个羰基；结合分布于动物胆汁内的该类成分报道，鉴定其为3，12-二羟基-7-酮胆烷酸及其异构体。
化合物42的相对分子质量较胆酸少4D，可推断其母核结构较胆酸要少2个羟基取代，多了2个羰基，因此将其鉴定为3-羟基-7，12-二酮胆烷酸。
化合物43的ESI-MS谱给出的准分子离子为m/z 407[M-H]-，在动物的胆汁中，比较常见胆酸异构体还有猪胆酸，参考文献(Zhang HY,Hu P,Luo GA,et al.Screening andidentification of multi-component in Qingkailing injection using combinationof liquid chromatography/time-of-flight mass spectrometry and liquidchromatography/ion trap mass spectrometry.Anal Chim Acta.2006；577(2):190-200.doi:10.1016/j.aca.2006.06.053)，其极性与胆酸比较接近且含量相对较高，因此将化合物43鉴定为猪胆酸及其异构体。
化合物46的准分子离子为m/z 389[M-H]-，相对分子质量比猪去氧胆酸少2D。与胆酸类成分相比，其ESI-MS/MS裂解途径最明显的特征是[M-H]-离子易中性丢失CO分子，表明它们的母核中含有酮基或羰基，由此将其鉴定为3-羟基-12-酮胆烷酸及其异构体。
化合物48的ESI-MS谱给出的准分子离子为m/z 391[M-H]-，在二级质谱谱图中，在高能ESI质谱离子源碰撞离子作用下获得主要二级碎片离子有m/z373[M-H-H2O]-，m/z 345[M-H-H2O-CO]-，m/z 355[M-H-2H2O]-，m/z347[M-H-CO2]-，m/z 327[M-H-2H2O-CO]-等主要碎片离子，由此将其鉴定为去氧胆酸。
以上胆酸类化合物在正负离子模式下均具有较好的响应，符合胆酸类化合物的裂解规律，与文献报道裂解途径一致(张加余,张倩,张红霞,董鲁艳,卢建秋,乔延江.清开灵注射液中14种胆汁酸的HPLC-ESI-MS/MS快速鉴定[J].中国中药杂志,2013,38(07):990-994.)
(2)黄酮类化合物
黄酮类化合物是植物中普遍存在的一类化合物，多与糖苷结合而成。此类化合物在裂解时，多先断裂糖苷或易掉羧基。本发明从清开灵口服液中共鉴定出5种黄酮类成分，主要为黄芩苷，包括黄芩苷、汉黄芩苷、5,7-二羟黄酮、木犀草素和芦丁。
以汉黄芩苷二级质谱[M-H]-离子模式下裂解碎片推导过程为例，说明此类化学物质的鉴定过程。汉黄芩苷在负离子模式下有较好的响应，一级质谱获得汉黄芩苷[M-H]-准分子离子，经Peakview元素组成拟合化学式为C22H19O11，在高能ESI质谱离子源碰撞离子作用下获得主要二级碎片离子有m/z 283[M-H-C6H8O6]-、m/z 268[M-H-C6H8O6-H2O]-离子碎片。本发明所得化合物39的质谱裂解途径如图3所示，裂解途径符合黄酮类化合物的裂解规律，与文献报道裂解途径一致(管怡晴,郑鑫楠,颜梦秋,吴焕贤,张国华,吕琳.超高效液质联用技术分析黄芩-槐花药对活性成分及其治疗慢性肾脏病的网络药理学研究[J].中草药,2022,53(20):6388-6400.)，最终确定化合物39为汉黄芩苷(C22H20O11)。
化合物33芦丁的准分子离子为m/z 609[M-H]-，主要二级碎片离子有301[M-H-Glu-Rha]-、271[M-H-Glu-Rha-CH2O]-、255[M-H-Glu-Rha-H2O-CO]-；化合物34木犀草素的准分子离子为m/z 285[M-H]-，主要二级碎片离子有243[M-H-C2H2O]-、214[M-H-Glu-Rha-CHO]-、144[M-H-Glu-CHO-2C-H2O-CO]-；化合物37黄芩苷的准分子离子为m/z 445[M-H]-，主要二级碎片离子有m/z269[M-H-C6H8O6]-；化合物38 5,7-二羟黄酮的准分子离子为m/z 253[M-H]-，主要二级碎片离子有m/z 209[M-H-CO2]-；以上黄酮类化合物在负离子模式下具有较好的响应，符合黄酮类化合物的裂解规律，与文献报道裂解途径一致(Zhang HY,Hu P,Luo GA,et al.Screening and identification of multi-component in Qingkailinginjection using combination of liquid chromatography/time-of-flight massspectrometry and liquid chromatography/ion trap mass spectrometry.Anal ChimActa.2006；577(2):190-200.doi:10.1016/j.aca.2006.06.053；王永丽,黄广建,刘从进,戚胜兰,李荣胜,刘伟.UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS分析黄连解毒汤的化学成分及大鼠组织分布[J].中草药,2022,53(22):6985-7000)。
(3)环烯醚萜类化合物
本发明从清开灵口服液中鉴定出环烯醚萜类成分共11种，主要来源于栀子药材，包括山栀子苷、栀子新苷、栀子酸、玉叶金花苷酸、马钱苷酸、水晶兰苷、断马钱子酸、京尼平1-β-D-龙胆双糖苷、京尼平甙、栀子苷和茉莉醇。
以京尼平甙的二级质谱[M-H]-离子模式下裂解碎片推导过程为例，说明此类化学物质的鉴定过程。京尼平甙在一级质谱中获得准分子离子为m/z 387[M-H]-，经Peakview元素组成拟合化学式为C17H23O10，在高能ESI质谱离子源碰撞离子作用下，首先获得二级碎片离子m/z 225[M-C6H10O5]-，该离子碎片进一步裂解为m/z 207[M-H-C6H10O5-H2O]-和m/z 123[M-H-C6H10O5-C4H6O3]-；同时m/z 207继续裂解获得m/z 123[M-H-C6H10O5-H2O-C4H4O2]-和m/z101[M-H-C6H10O5-H2O-C7H6O]-离子碎片；从裂解碎片m/z值推导可知，京尼平甙化合物裂解途径符合环烯醚萜类的裂解规律，与文献报道裂解途径相似(王永丽,黄广建,刘从进,戚胜兰,李荣胜,刘伟.UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS分析黄连解毒汤的化学成分及大鼠组织分布[J].中草药,2022,53(22):6985-7000)；最终确定化合物29为京尼平甙(C17H24O10)，相应质谱裂解途径如图4所示。
化合物14山栀子苷的准分子离子为m/z 391[M-H]-，主要二级碎片离子有229[M-H-C6H10O5]-、185[M-H-C6H10O5-CO2]-、167[M-H-C6H10O5-CO2-H2O]-、149[M-H-C6H10O5-CO2-2H2O]-；化合物15栀子新苷的准分子离子为m/z 373[M-H]-，主要二级碎片离子有211[M-H-C6H10O5]-、167[M-H-C6H10O5-CO2]-、149[M-H-C6H10O5-CO2-H2O]-；化合物20栀子酸的准分子离子为m/z 373[M-H]-，主要二级碎片离子有193[M-H-C6H12O6]-、167[M-H-C6H12O6-C2H2]-、149[M-H-C6H10O5-CO2-C2H2-H2O]-；化合物22玉叶金花苷酸的准分子离子为m/z375[M-H]-，主要二级碎片离子有213[M-H-C6H10O5]-、169[M-H-C6H10O5-CO2]-、151[M-H-C6H10O5-CO2-H2O]-；化合物23马钱苷酸的准分子离子为m/z 375[M-H]-，主要二级碎片离子有195[M-H-C6H12O6]-、151[M-H-C6H12O6-CO2]-、113[M-H-C6H10O5-CO2-C2H2-H2O]-；化合物24水晶兰苷的准分子离子为m/z389[M-H]-，主要二级碎片离子有345[M-H-CO2]-、209[M-H-C6H12O6]-、183[M-H-C6H10O5-C2H2]-、165[M-H-C6H12O6-C2H2-H2O]；化合物25断马钱子酸的准分子离子为m/z 373[M-H]-，主要二级碎片离子有193[M-H-C6H12O6]-、167[M-H-C6H12O6-C2H2]-、149[M-H-C6H10O5-C2H2-H2O]-；化合物28京尼平1-β-D-龙胆双糖苷的准分子离子为m/z 551[M+H]+，主要二级碎片离子有227[M-H-C12H20O10]+、209[M-H-C12H20O10-H2O]+；化合物30栀子苷的准分子离子为m/z 403[M-H]-，主要二级碎片离子有371[M-H-CH3OH]-、223[M-H-CH3OH-C6H12O4]-、165[M-H-CH3OH-C6H12O4-COOCH2]-、121[M-H-CH3OH-C6H12O4-COOCH2-CO2]-；化合物32茉莉醇的准分子离子为m/z183[M-H]-，主要二级碎片离子有139[M-H-CO2]-、137[M-H-CHO-OH]-；以上环烯醚萜类化合物在负离子模式下具有较好的响应，符合环烯醚萜类化合物的裂解规律，与文献报道裂解途径一致(王永丽,黄广建,刘从进,戚胜兰,李荣胜,刘伟.UHPLC-Q-Exactive OrbitrapHRMS分析黄连解毒汤的化学成分及大鼠组织分布[J].中草药,2022,53(22):6985-7000；Guo M,Zhang L,Liu H,et al.A metabolomic strategy to screen the prototypecomponents and metabolites of Qingkailing injection in rat urine by high-performance liquid chromatography with tandem mass spectrometry.J SepSci.2014；37(20):2844-2850.doi:10.1002/jssc.201400339)。
(4)有机酸类化合物
本发明从清开灵口服液中鉴定的有机酸类化学成分共9种，主要来源于金银花，包括奎宁酸、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、肉桂酸、咖啡酸、阿魏酸、4-羟基苯甲酸和阿魏酰奎宁酸及其异构体。
以阿魏酸二级质谱[M-H]-离子模式下裂解碎片推导过程为例，说明此类化学物质的鉴定过程。阿魏酸在负离子模式下有较好的响应，准分子离子m/z193[M-H]-，脱去一分子CH3形成m/z 178[M-H-CH3]-，脱去一分子CO2形成m/z149[M-H-CO2]-，同时脱去一分子CH3和一分子CO2形成m/z 134[M-H-CH3-CO2]-，或者脱去一分子CO2和两分子CH2形成m/z 121[M-H-CO2-2CH2]-，通过与文献(杨欢,曾利,郑振兴,黄霞,吴文林,邓放.基于UHPLC-Q/OrbitrapHRMS技术的民族药青刺尖化学成分分析[J].中药材,2022,(09):2130-2136.)对比，确定化合物27为阿魏酸，其裂解途径如图5所示。
化合物3奎宁酸的准分子离子为m/z 191[M-H]-，主要二级碎片离子有173[M-H-H2O]-、155[M-H-2H2O]-、137[M-H-3H2O]-、127[M-H-2H2O-CO]-、111[M-H-2H2O-CO2]-；化合物12肉桂酸的准分子离子为m/z 147[M-H]-，主要二级碎片离子有129[M-H-H2O]-、103[M-H-COO]-；化合物17绿原酸的准分子离子为m/z 353[M-H]-，主要二级碎片离子有191[M-H-C9H6O3]-、179[M-H-C7H10O5]-、135[M-H-C7H10O5-CO2]-；化合物18咖啡酸的准分子离子为m/z179[M-H]-，主要二级碎片离子有161[M-H-H2O]-、135[M-H-CO2]-；化合物19 4-羟基苯甲酸的准分子离子为m/z 137[M-H]-，主要二级碎片离子有119[M-H-H2O]-、93[M-H-CO2]-；化合物26新绿原酸的准分子离子为m/z 353[M-H]-，主要二级碎片离子有191[M-H-C9H6O3]-、179[M-H-C10H6O3]-；化合物31阿魏酰奎宁酸及其异构体的准分子离子为m/z 367[M-H]-，主要二级碎片离子有193[M-H-C7H10O5]-、173[M-H-C7H14O6]-、155[M-H-C7H14O6-H2O]-；化合物35隐绿原酸的准分子离子为m/z 353[M-H]-，主要二级碎片离子有191[M-H-C9H6O3]-、179[M-H-C7H10O5]-、173[M-H-C9H6O3-H2O]-、135[M-H-C7H10O5-CO2]-；以上有机酸类化合物在负离子模式下具有较好的响应，易丢失COOH、CO2、H2O等分子产生一系列特征碎片，与文献报道裂解途径一致(王永丽,黄广建,刘从进,戚胜兰,李荣胜,刘伟.UHPLC-Q-Exactive Orbitrap HRMS分析黄连解毒汤的化学成分及大鼠组织分布[J].中草药,2022,53(22):6985-7000；龚兴成,刘文静,曹丽波,于娟,司丹丹,李军,屠鹏飞,李军,宋月林.DI-MS/MS～(ALL)法快速定性分析金银花的化学成分[J].中国中药杂志,2021,46(09):2220-2228)。
(5)氨基酸类化合物
氨基酸类化合物因含有氨基和羧基而易丢失NH3、HCOOH、CO2、H2O等中性分子产生一系列特征碎片。本发明从清开灵口服液中鉴定的氨基酸成分共9种，主要来源于珍珠母、水牛角，包括L-苏氨酸、精氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、L-酪氨酸、L-谷氨酸、L-色氨酸和苯丙氨酸。
以L-色氨酸为例，说明此类化学物质的鉴定过程。L-色氨酸在正离子模式下，准分子离子为m/z 205[M+H]+，其裂解过程为丢失一分子NH3，形成m/z188[M+H-NH3]+，再丢失一分子H2O形成m/z 170[M+H-NH3-H2O]+；或者丢失两分子CO形成m/z 132[M+H-NH3-2CO]+，再丢失一分子CH2形成m/z118[M+H-NH3-2CO-CH2]+，根据文献(杨欢,曾利,郑振兴,黄霞,吴文林,邓放.基于UHPLC-Q/Orbitrap HRMS技术的民族药青刺尖化学成分分析[J].中药材,2022,(09):2130-2136.)，确认化合物21为L-色氨酸，其裂解途径如图6所示。
化合物1L-苏氨酸的准分子离子为m/z 118[M-H]-，主要二级碎片离子有86[M-H-CH3OH]-、74[M-H-CO2]-、72[M-H-HCOOH]-；化合物2精氨酸的准分子离子为m/z 175[M+H]+，主要二级碎片离子有158[M+H-NH3]+、130[M+H-NH3-CO]+、116[M+H-NH3-CO-CH2]+；化合物4脯氨酸的准分子离子为m/z 116[M+H]+，主要二级碎片离子有70[M+H-HCOOH]+；化合物6天冬氨酸的准分子离子为m/z 134[M+H]+，主要二级碎片离子有88[M+H-HCOOH]+、74[M+H-HCOOH-CH2]+；化合物7缬氨酸的准分子离子为m/z 118[M+H]+，主要二级碎片离子有72[M+H-HCOOH]+、57[M+H-HCOOH-CH3]+、55[M+H-HCOOH-NH3]+；化合物9L-酪氨酸的准分子离子为m/z 182[M+H]+，主要二级碎片离子有165[M+H-NH3]+、147[M+H-NH3-H2O]+、136[M+H-HCOOH]+、119[M+H-HCOOH-NH3]+、91[M+H-HCOOH-NH3-CO]+；化合物16L-谷氨酸的准分子离子为m/z 148[M+H]+，主要二级碎片离子有130[M+H-H2O]+、102[M+H-HCOOH]+、84[M+H-HCOOH-H2O]+；化合物36苯丙氨酸的准分子离子为m/z 166[M+H]+，主要二级碎片离子有149[M+H-NH3]+、131[M+H-NH3-H2O]+、120[M+H-HCOOH]+、103[M+H-HCOOH-NH3]+。以上氨基酸类化合物在正离子模式下具有较好的响应，易丢失NH3、HCOOH、CO2、H2O等分子产生一系列特征碎片，与文献报道裂解途径一致[1,6,8,](Zhang HY,Hu P,Luo GA,et al.Screening and identification of multi-component in Qingkailing injection using combination of liquidchromatography/time-of-flight mass spectrometry and liquid chromatography/iontrap mass spectrometry.Anal Chim Acta.2006；577(2):190-200.doi:10.1016/j.aca.2006.06.053；杨欢,曾利,郑振兴,黄霞,吴文林,邓放.基于UHPLC-Q/Orbitrap HRMS技术的民族药青刺尖化学成分分析[J].中药材,2022,(09):2130-2136；王星琪,常金,张倩,林丽娜,邵平,李清.基于HPLC-Q-TOF-MS和网络药理学分析板蓝根防治流感及COVID-19的作用机制[J].药学学报,2022,57(10):3173-3185.doi:10.16438/j.0513-4870.2022-0455.)。
(6)其他类化合物
本发明从清开灵口服液中鉴定的其他类成分共5种，主要来源于板蓝根，包括蔗糖、尿苷、腺苷、腺嘌呤和鸟苷。
化合物5蔗糖的准分子离子为m/z 341[M-H]-，主要二级碎片离子有179[M-H-C6H10O5]-、161[M-H-C6H10O5-H2O]-；化合物8尿苷的准分子离子为m/z243[M-H]-，主要二级碎片离子有225[M-H-H2O]-、200[M-H-HNCO]-、111[M-H-C5H8O4]-；化合物10腺苷的准分子离子为m/z 268[M+H]+，主要二级碎片离子有136[M+H-C5H8O4]+、119[M+H-C5H8O4-NH3]+；化合物11腺嘌呤的准分子离子为m/z 136[M+H]+，主要二级碎片离子有119[M+H-NH3]+、92[M+H-NH3-HNC]+、65[M+H-NH3-2HNC]+；化合物13鸟苷的准分子离子为m/z282[M-H]-，主要二级碎片离子有150[M-H-C5H8O4]-、133[M-H-C5H8O4-NH3]-；以上化合物通过与文献(杨欢,曾利,郑振兴,黄霞,吴文林,邓放.基于UHPLC-Q/Orbitrap HRMS技术的民族药青刺尖化学成分分析[J].中药材,2022,(09):2130-2136；王星琪,常金,张倩,林丽娜,邵平,李清.基于HPLC-Q-TOF-MS和网络药理学分析板蓝根防治流感及COVID-19的作用机制[J].药学学报,2022,57(10):3173-3185)进行对比，分别确定。
清开灵口服液中的化学成分的UPLC-Q-TOF-MS分析结果汇总如表2所示，以清开灵口服液中化学成分的分析结果作为代表。其余清开灵制剂(清开灵注射液、清开灵颗粒、清开灵胶囊)中的化学成分的UPLC-Q-TOF-MS分析结果与此相同，均含有胆酸、黄芩苷、栀子苷、色氨酸等48种化学成分，二级质谱不少于2个碎片匹配成功且质量误差在±5mDa以内。
表2清开灵口服液的UPLC-Q-TOF-MS分析结果
对比例
本发明通过不断地调整、实验、再调整、再实验等过程，对基于UPLC-Q-TOF-MS建立的分析及鉴定中药制剂中化学成分的方法中的色谱条件进行了探索优化，利用得到的色谱条件，可从清开灵制剂中分离、、鉴定出48种化学成分。
本发明经过大量的探索发现，对于所述中药制剂的UPLC-Q-TOF-MS分析，影响最大的因素是梯度洗脱条件。因此，在初步确定了色谱柱、进样量等优化条件后，重点对梯度洗脱条件进行了再研究。
作为对比，本发明列举了优化过程中所使用过的色谱条件及对梯度洗脱程序的优化过程，如下所示。除色谱条件不同外，其余处理均与实施例1相同。
1、色谱条件1
本发明利用phenomenex
Omega 1.6μm Polar C18 
(2.1×100mm，1.6μm)色谱柱；以乙腈为流动相A，0.1％甲酸水溶液为流动相B，对清开灵口服液中的化学成分进行了分离，梯度洗脱程序如表3所示；流速为0.3mL/min；柱温为30℃；检测波长为254nm；进样量为1μL。
表3
清开灵口服液在色谱条件1下的色谱图如图7所示，由图7可知，其谱峰数量、基线平稳情况和色谱峰分离度仍未达到最佳状态。
2、色谱条件2
为分离更多色谱峰，本发明在色谱条件1的基础上，对其梯度洗脱程序进行了调整，记为色谱条件2。调整后的梯度洗脱程序如表4所示：
表4
清开灵口服液在色谱条件2下的色谱图如图8所示，由图8可知，其谱峰数量、基线平稳情况和色谱峰分离度虽较图7有所提升，但仍存在重叠峰，在色谱条件2的基础上，继续对其梯度洗脱程序进行调整。
3、色谱条件3
为分离更多色谱峰，本发明在色谱条件2的基础上，对其梯度洗脱程序进行了调整，记为色谱条件3。调整后的梯度洗脱程序如表5所示：
表5
清开灵口服液在色谱条件3下的色谱图如图9所示，由图9可知，其谱峰数量、基线平稳情况和色谱峰分离度仍未达到最佳状态，在色谱条件3的基础上继续对梯度洗脱程序进行调整。
4、色谱条件4
本发明在色谱条件3的基础上，对其梯度洗脱程序进行了调整，记为色谱条件4。调整后的梯度洗脱程序如表6所示：
表6
清开灵口服液在色谱条件4下的色谱图如图10所示，由图10可知，其谱峰数量、基线平稳情况和色谱峰分离度仍未达到最佳状态，在色谱条件4的基础上继续对梯度洗脱程序进行调整。
5、色谱条件5
本发明在色谱条件4的基础上，对其梯度洗脱程序进行了调整，记为色谱条件5。调整后的梯度洗脱程序如表7所示：
表7
清开灵口服液在色谱条件5下的色谱图如图11所示，由图11可知，此色谱条件下所得谱峰数量多、基线平稳、色谱峰分离度较色谱条件1～4更好，拟采用表7所示梯度洗脱程序作为最佳洗脱梯度。
实施例2基于UPLC-Q-TOF-MS技术建立的中药制剂中化学成分的筛查谱库
本发明基于实施例1所述方法，还提供了一种基于UPLC-Q-TOF-MS技术建立的中药制剂中化学成分的筛查谱库，所述筛查谱库中含有48种化学成分的保留时间、准分子离子的分子量和二级质谱碎片离子数据，所述中药制剂为清开灵制剂。
所述48种化学成分为3,6,7,12-四羟基胆烷酸、3,12-二羟基-7-酮胆烷酸及其异构体、3-羟基-7,12-二酮胆烷酸、猪胆酸及其异构体、胆酸、猪去氧胆酸、3-羟基-12-酮胆烷酸及其异构体、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、黄芩苷、汉黄芩苷、5,7-二羟黄酮、木犀草素、芦丁及其异构体、山栀子苷、栀子新苷、栀子酸、玉叶金花苷酸、马钱苷酸、水晶兰苷、断马钱子酸、京尼平1-β-D-龙胆双糖苷、京尼平甙、栀子苷、茉莉醇、奎宁酸、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、肉桂酸、咖啡酸、阿魏酸、4-羟基苯甲酸、阿魏酰奎宁酸及其异构体、L-苏氨酸、精氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、L-酪氨酸、L-谷氨酸、L-色氨酸、苯丙氨酸、蔗糖、尿苷、腺苷、腺嘌呤和鸟苷。
所述48种化学成分的保留时间、准分子离子的分子量和二级质谱碎片离子数据如下：
L-苏氨酸的准分子离子m/z为119.05824，二级质谱碎片离子m/z有86.0337、74.0282和72.0104，保留时间为0.95min；
精氨酸的准分子离子m/z为174.11168，二级质谱碎片离子m/z有158.0921、130.0970和116.0703，保留时间为0.98min；
奎宁酸的准分子离子m/z为192.06339，二级质谱碎片离子m/z有173.0447、155.0345、137.0239、127.0400和111.0459，保留时间为1.07min；
脯氨酸的准分子离子m/z为115.06333，二级质谱碎片离子m/z有116.0702、70.0663，保留时间为1.09min；
蔗糖的准分子离子m/z为342.11621，二级质谱碎片离子m/z有179.0559和161.0453，保留时间为1.17min；
天冬氨酸的准分子离子m/z为133.03751，二级质谱碎片离子m/z有88.1032和74.0247，保留时间为1.22min；
缬氨酸的准分子离子m/z为117.07898，二级质谱碎片离子m/z有72.0819、57.0597和55.0569，保留时间为1.27min；
尿苷的准分子离子m/z为244.06954，二级质谱碎片离子m/z有225.0787、200.0558和111.0192，保留时间为1.61min；
L-酪氨酸的准分子离子m/z为244.06954，二级质谱碎片离子m/z有165.0535、147.0433、136.0746、119.0484和91.0543，保留时间为1.65min；
腺苷的准分子离子m/z为267.09675，二级质谱碎片离子m/z有136.0613和119.0353，保留时间为5.53min；
腺嘌呤的准分子离子m/z为135.0545，二级质谱碎片离子m/z有103.0373和92.0270，保留时间为5.54min；
肉桂酸的准分子离子m/z为148.05243，二级质谱碎片离子m/z有119.057和103.0540，保留时间为5.60min；
鸟苷的准分子离子m/z为283.0916，二级碎片m/z有150.0409和133.0152，保留时间为5.61min；
山栀子苷的准分子离子m/z为392.13186，二级质谱碎片离子m/z有229.07、185.0805、167.0701和149.0598，保留时间为6.61min；
栀子新苷的准分子离子m/z为392.13186，二级质谱碎片离子m/z有229.07、185.0805、167.0701和149.0598，保留时间为6.94min；
L-谷氨酸的准分子离子m/z为147.05316，二级质谱碎片离子m/z有130.0315、102.0547和84.0452，保留时间为7.29min；
绿原酸的准分子离子m/z为354.09508，二级质谱碎片离子m/z有191.0554、179.0354和135.0445，保留时间为7.41min；
咖啡酸的准分子离子m/z为180.04226，二级质谱碎片离子m/z有163.0384、135.0444、117.0335和89.0402，保留时间为7.47min；
4-羟基苯甲酸的准分子离子m/z为138.03169，二级质谱碎片离子m/z有119.0144和93.0282，保留时间为7.88min；
栀子酸的准分子离子m/z为374.1213，二级质谱碎片离子m/z有193.0502、167.0701、149.0603和123.0454，保留时间为7.93min；
L-色氨酸的准分子离子m/z为204.08988，二级质谱碎片离子m/z有188.0691、170.0589、132.0796和118.0640，保留时间为8.03min；
玉叶金花苷酸的准分子离子m/z为376.13695，二级质谱碎片离子m/z有213.0760、169.0865、151.0762和113.0252，保留时间为8.11min；
马钱苷酸的准分子离子m/z为376.13695，二级质谱碎片离子m/z有195.0655、151.0760和113.0236，保留时间为8.45min；
水晶兰苷的准分子离子m/z为390.11621，二级质谱碎片离子m/z有345.1183、209.0443、183.0653、165.0550和121.0653，保留时间为8.75min；
断马钱子酸的准分子离子m/z为374.1213，二级质谱碎片离子m/z有193.0464、167.0718、149.0548和97.0296，保留时间为9.09min；
新绿原酸的准分子离子m/z为354.09508，二级质谱碎片离子m/z有191.0551、179.0346和173.0450，保留时间为9.11min；
阿魏酸的准分子离子m/z为194.05791，二级质谱碎片离子m/z有178.0242、149.0626和134.0389，保留时间为9.35min；
京尼平1-β-D-龙胆双糖苷的准分子离子m/z为550.18977，二级质谱碎片离子m/z有353.1218、227.0902和209.0796，保留时间为9.57min；
京尼平甙的准分子离子m/z为388.13695，二级质谱碎片离子m/z有225.0763、207.0664、123.0453和101.0258，保留时间为10.12min；
栀子苷的准分子离子m/z为404.13186，二级质谱碎片离子m/z有371.0983、223.0767、165.0550和121.0295，保留时间为11.24min；
阿魏酰奎宁酸的准分子离子m/z为368.11073，二级质谱碎片离子m/z有193.0498、173.0446和134.0369，保留时间为11.28min；
茉莉醇的准分子离子m/z为184.10994，二级质谱碎片离子m/z有139.1123和137.0977，保留时间为11.66min；
芦丁的准分子离子m/z为610.15339，二级质谱碎片离子m/z有301.0347、271.0241和255.0280，保留时间为13.24min；
木犀草素的准分子离子m/z为286.04774，二级质谱碎片离子m/z有243.1719、214.0323和144.0461，保留时间为13.75min；
隐绿原酸的准分子离子m/z为354.09508，二级质谱碎片离子m/z有191.0572、179.0336、173.0446和135.0442，保留时间为14.21min；
苯丙氨酸的准分子离子m/z为165.07898，二级质谱碎片离子m/z有120.0819和103.0549，保留时间为14.32min；
苯丙氨酸的准分子离子m/z为165.07898，二级质谱碎片离子m/z有120.0819和103.0549，保留时间为14.32min；
黄芩苷的准分子离子m/z为446.08491，二级质谱碎片离子m/z有269.0442、175.0239和113.0243，保留时间为16.67min；
5,7-二羟黄酮的准分子离子m/z为254.05791，二级质谱碎片离子m/z有253.0502、209.0643，保留时间为18.48min；
汉黄芩苷的准分子离子m/z为460.10056，二级质谱碎片离子m/z有283.0586、268.0854、175.0234和113.0245，保留时间为18.61min；
3,6,7,12-四羟基胆烷酸的准分子离子m/z为424.28249，二级质谱碎片离子m/z有405.2641和369.2451，保留时间为23.02min；
3,12-二羟基-7-酮胆烷酸的准分子离子m/z为406.27192，二级质谱碎片离子m/z有361.2757和343.2656，保留时间为24.29min；
3-羟基-7,12-二酮胆烷酸的准分子离子m/z为404.25627，3m/z有333.0286和289.2172，保留时间为24.34min；
猪胆酸的准分子离子m/z为408.28757，二级质谱碎片离子m/z有391.2832、373.2717、355.2612、337.2509和319.2414，保留时间为25.68min；
胆酸的准分子离子m/z为408.28757，二级质谱碎片离子m/z有389.2712、371.2589、363.2895、353.2482、345.2796和343.2643，保留时间为26.64min；
猪去氧胆酸的准分子离子m/z为392.29266，二级质谱碎片离子m/z有357.2764、339.2676和321.2560，保留时间为27.66min；
3-羟基-12-酮胆烷酸准分子离子m/z为390.27701，二级质谱碎片离子m/z有343.1055、327.2669和321.9021，保留时间为28.55min；
鹅去氧胆酸的准分子离子m/z为392.29266，二级质谱碎片离子m/z有357.2771、339.2664和321.2573，保留时间为31.16min；
去氧胆酸的准分子离子m/z为392.29266，二级质谱碎片离子m/z有355.2643、345.2788和327.2687，保留时间为31.16min。
实施例3中药制剂的质量稳定性检测方法
1、本发明还提供了一种中药制剂质量稳定性的检测方法，利用实施例1所述方法对不同批次中药制剂或同批次不同时间点的中药制剂中的化学成分进行分离和检测，获得所分离化学成分的保留时间、准分子离子的分子量和二级质谱碎片离子数据；将所得数据与实施例2中所述的筛查谱库进行比对；根据比对结果判断不同批次中药制剂或同批次不同时间点的中药制剂的质量稳定性；
具体地，所述结果判断的标准如下：
若所比对化学成分的保留时间偏差为±0.2min，精确质量偏差为±5mDa且可匹配2个及以上的碎片离子，则表明所比对化学成分为同种物质；
不同批次中药制剂或同批次不同时间点的中药制剂所含有的化学成分差异越小，则表明所测中药制剂的质量稳定性越好。
2、所述检测方法在清开灵制剂上的应用
本发明利用上述检测方法对不同批次清开灵口服液(批号：1201201、1201202、1201203)中的化学成分进行检测，并用所述筛查谱库进行筛查，结果发现所检测的不同批次的清开灵口服液样品中均含有胆酸、黄芩苷、栀子苷等48种化学成分成分，不少于2个碎片匹配成功且质量误差在±5mDa以内。上述结果表明，不同批次清开灵中均含有这48种化学成分，且所述化学成分在有效期内均能被检测到，也表明该检测方法可用于清开灵制剂的质量控制，确保质量的稳定性。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种基于UPLC-Q-TOF-MS技术分析及鉴定中药制剂中化学成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1.供试品溶液的制备：若待测样品为中药液体制剂，则将样品用有机滤膜过滤即得供试品溶液；若待测样品为中药固体制剂，则将样品用乙醇溶解后用有机滤膜过滤即得供试品溶液；
S2.用超高效液相色谱对步骤S1所得供试品溶液中的化学成分进行分离，用四极杆-飞行时间质谱对分离到的化学成分进行检测，获得所分离化学成分的保留时间、准分子离子的分子量和二级质谱碎片离子数据，利用所得数据建立筛查谱库；
S3.对上述筛查谱库的化学成分进行鉴定；
其中，步骤S2中所用色谱条件如下：色谱柱为Phenomenex C18；柱温为28～32℃；流动相A相为乙腈，B相为0.1％甲酸水溶液；梯度洗脱程序为：0～19min，0％～12％A；19～24min，12％～19％A；24～24.1min，19％～20％A；24.1～35min，20％A，35～35.1min，20％～100％A，35.1～36min，100％～0％A；36～40min，0％A；流速为0.3mL·min-1；进样体积为0.3μL；检测波长为254nm；
步骤S2中所用质谱条件如下：用电喷离雾子源，用正离子和负离子模式进行扫描分析；离子源电压分别为5500V和-4500V；离子源温度为500℃；裂解电压为100V；碰撞能为±30eV；碰撞能量扩展为15eV；雾化气体为氮气，辅助气1为55psi，辅助气2为55psi，气帘气为35psi；一级质谱母离子扫描范围为100～1600Da，二级质谱扫描子离子扫描范围为0～1600Da；
所述中药制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母和黄芩苷制成。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，中药固体制剂供试品溶液的制备方法为：将中药固体制剂粉碎、过筛，每0.45～0.5g粉末加45～50mL乙醇混匀，超声提取10～15min后离心取上清，上清液用有机滤膜过滤即得供试品溶液。
3.根据权利要求2所述方法，其特征在于，所述乙醇为70％～80％乙醇。
4.一种利用权利要求1～3任一所述方法建立的中药制剂中化学成分的筛查谱库，其特征在于，所述筛查谱库中含有48种化学成分的保留时间、准分子离子的分子量和二级质谱碎片离子数据，所述的48种化学成分为3,6,7,12-四羟基胆烷酸、3,12-二羟基-7-酮胆烷酸及其异构体、3-羟基-7,12-二酮胆烷酸、猪胆酸及其异构体、胆酸、猪去氧胆酸、3-羟基-12-酮胆烷酸及其异构体、鹅去氧胆酸、去氧胆酸、黄芩苷、汉黄芩苷、5,7-二羟黄酮、木犀草素、芦丁及其异构体、山栀子苷、栀子新苷、栀子酸、玉叶金花苷酸、马钱苷酸、水晶兰苷、断马钱子酸、京尼平1-β-D-龙胆双糖苷、京尼平甙、栀子苷、茉莉醇、奎宁酸、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、肉桂酸、咖啡酸、阿魏酸、4-羟基苯甲酸、阿魏酰奎宁酸及其异构体、L-苏氨酸、精氨酸、脯氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、L-酪氨酸、L-谷氨酸、L-色氨酸、苯丙氨酸、蔗糖、尿苷、腺苷、腺嘌呤和鸟苷；
所述中药制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母和黄芩苷制成。
5.根据权利要求4所述筛查谱库，其特征在于，所述48种化学成分的保留时间、准分子离子的分子量和二级质谱碎片离子数据如下：
L-苏氨酸的准分子离子m/z为119.05824，二级质谱碎片离子m/z有86.0337、74.0282和72.0104，保留时间为0.95min；
精氨酸的准分子离子m/z为174.11168，二级质谱碎片离子m/z有158.0921、130.0970和116.0703，保留时间为0.98min；
奎宁酸的准分子离子m/z为192.06339，二级质谱碎片离子m/z有173.0447、155.0345、137.0239、127.0400和111.0459，保留时间为1.07min；
脯氨酸的准分子离子m/z为115.06333，二级质谱碎片离子m/z有116.0702、70.0663，保留时间为1.09min；
蔗糖的准分子离子m/z为342.11621，二级质谱碎片离子m/z有179.0559和161.0453，保留时间为1.17min；
天冬氨酸的准分子离子m/z为133.03751，二级质谱碎片离子m/z有88.1032和74.0247，保留时间为1.22min；
缬氨酸的准分子离子m/z为117.07898，二级质谱碎片离子m/z有72.0819、57.0597和55.0569，保留时间为1.27min；
尿苷的准分子离子m/z为244.06954，二级质谱碎片离子m/z有225.0787、200.0558和111.0192，保留时间为1.61min；
L-酪氨酸的准分子离子m/z为244.06954，二级质谱碎片离子m/z有165.0535、147.0433、136.0746、119.0484和91.0543，保留时间为1.65min；
腺苷的准分子离子m/z为267.09675，二级质谱碎片离子m/z有136.0613和119.0353，保留时间为5.53min；
腺嘌呤的准分子离子m/z为135.0545，二级质谱碎片离子m/z有103.0373和92.0270，保留时间为5.54min；
肉桂酸的准分子离子m/z为148.05243，二级质谱碎片离子m/z有119.057和103.0540，保留时间为5.60min；
鸟苷的准分子离子m/z为283.0916，二级碎片m/z有150.0409和133.0152，保留时间为5.61min；
山栀子苷的准分子离子m/z为392.13186，二级质谱碎片离子m/z有229.07、185.0805、167.0701和149.0598，保留时间为6.61min；
栀子新苷的准分子离子m/z为392.13186，二级质谱碎片离子m/z有229.07、185.0805、167.0701和149.0598，保留时间为6.94min；
L-谷氨酸的准分子离子m/z为147.05316，二级质谱碎片离子m/z有130.0315、102.0547和84.0452，保留时间为7.29min；
绿原酸的准分子离子m/z为354.09508，二级质谱碎片离子m/z有191.0554、179.0354和135.0445，保留时间为7.41min；
咖啡酸的准分子离子m/z为180.04226，二级质谱碎片离子m/z有163.0384、135.0444、117.0335和89.0402，保留时间为7.47min；
4-羟基苯甲酸的准分子离子m/z为138.03169，二级质谱碎片离子m/z有119.0144和93.0282，保留时间为7.88min；
栀子酸的准分子离子m/z为374.1213，二级质谱碎片离子m/z有193.0502、167.0701、149.0603和123.0454，保留时间为7.93min；
L-色氨酸的准分子离子m/z为204.08988，二级质谱碎片离子m/z有188.0691、170.0589、132.0796和118.0640，保留时间为8.03min；
玉叶金花苷酸的准分子离子m/z为376.13695，二级质谱碎片离子m/z有213.0760、169.0865、151.0762和113.0252，保留时间为8.11min；
马钱苷酸的准分子离子m/z为376.13695，二级质谱碎片离子m/z有195.0655、151.0760和113.0236，保留时间为8.45min；
水晶兰苷的准分子离子m/z为390.11621，二级质谱碎片离子m/z有345.1183、209.0443、183.0653、165.0550和121.0653，保留时间为8.75min；
断马钱子酸的准分子离子m/z为374.1213，二级质谱碎片离子m/z有193.0464、167.0718、149.0548和97.0296，保留时间为9.09min；
新绿原酸的准分子离子m/z为354.09508，二级质谱碎片离子m/z有191.0551、179.0346和173.0450，保留时间为9.11min；
阿魏酸的准分子离子m/z为194.05791，二级质谱碎片离子m/z有178.0242、149.0626和134.0389，保留时间为9.35min；
京尼平1-β-D-龙胆双糖苷的准分子离子m/z为550.18977，二级质谱碎片离子m/z有353.1218、227.0902和209.0796，保留时间为9.57min；
京尼平甙的准分子离子m/z为388.13695，二级质谱碎片离子m/z有225.0763、207.0664、123.0453和101.0258，保留时间为10.12min；
栀子苷的准分子离子m/z为404.13186，二级质谱碎片离子m/z有371.0983、223.0767、165.0550和121.0295，保留时间为11.24min；
阿魏酰奎宁酸的准分子离子m/z为368.11073，二级质谱碎片离子m/z有193.0498、173.0446和134.0369，保留时间为11.28min；
茉莉醇的准分子离子m/z为184.10994，二级质谱碎片离子m/z有139.1123和137.0977，保留时间为11.66min；
芦丁的准分子离子m/z为610.15339，二级质谱碎片离子m/z有301.0347、271.0241和255.0280，保留时间为13.24min；
木犀草素的准分子离子m/z为286.04774，二级质谱碎片离子m/z有243.1719、214.0323和144.0461，保留时间为13.75min；
隐绿原酸的准分子离子m/z为354.09508，二级质谱碎片离子m/z有191.0572、179.0336、173.0446和135.0442，保留时间为14.21min；
苯丙氨酸的准分子离子m/z为165.07898，二级质谱碎片离子m/z有120.0819和103.0549，保留时间为14.32min；
苯丙氨酸的准分子离子m/z为165.07898，二级质谱碎片离子m/z有120.0819和103.0549，保留时间为14.32min；
黄芩苷的准分子离子m/z为446.08491，二级质谱碎片离子m/z有269.0442、175.0239和113.0243，保留时间为16.67min；
5,7-二羟黄酮的准分子离子m/z为254.05791，二级质谱碎片离子m/z有253.0502、209.0643，保留时间为18.48min；
汉黄芩苷的准分子离子m/z为460.10056，二级质谱碎片离子m/z有283.0586、268.0854、175.0234和113.0245，保留时间为18.61min；
3,6,7,12-四羟基胆烷酸的准分子离子m/z为424.28249，二级质谱碎片离子m/z有405.2641和369.2451，保留时间为23.02min；
3,12-二羟基-7-酮胆烷酸的准分子离子m/z为406.27192，二级质谱碎片离子m/z有361.2757和343.2656，保留时间为24.29min；
3-羟基-7,12-二酮胆烷酸的准分子离子m/z为404.25627，3m/z有333.0286和289.2172，保留时间为24.34min；
猪胆酸的准分子离子m/z为408.28757，二级质谱碎片离子m/z有391.2832、373.2717、355.2612、337.2509和319.2414，保留时间为25.68min；
胆酸的准分子离子m/z为408.28757，二级质谱碎片离子m/z有389.2712、371.2589、363.2895、353.2482、345.2796和343.2643，保留时间为26.64min；
猪去氧胆酸的准分子离子m/z为392.29266，二级质谱碎片离子m/z有357.2764、339.2676和321.2560，保留时间为27.66min；
3-羟基-12-酮胆烷酸准分子离子m/z为390.27701，二级质谱碎片离子m/z有343.1055、327.2669和321.9021，保留时间为28.55min；
鹅去氧胆酸的准分子离子m/z为392.29266，二级质谱碎片离子m/z有357.2771、339.2664和321.2573，保留时间为31.16min；
去氧胆酸的准分子离子m/z为392.29266，二级质谱碎片离子m/z有355.2643、345.2788和327.2687，保留时间为31.16min。
6.权利要求4或5所述筛查谱库在中药制剂质量检测方面的应用，其特征在于，所述中药制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母和黄芩苷制成。
7.权利要求4或5所述筛查谱库在构建中药制剂质量检测方法方面的应用，其特征在于，所述中药制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母和黄芩苷制成。
8.权利要求4或5所述筛查谱库在构建中药制剂质量检测产品方面的应用，其特征在于，所述中药制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母和黄芩苷制成。
9.一种中药制剂的质量检测方法，其特征在于，通过检测中药制剂的化学成分进行所述中药制剂的质量检测或鉴别，所述化学成分包括玉叶金花苷酸、马钱苷酸、水晶兰苷、断马钱子酸、茉莉醇中的任一或任几个；所述中药制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母和黄芩苷制成。
10.一种中药制剂质量稳定性的检测方法，其特征在于，利用权利要求1～3任一所述方法对不同批次中药制剂或同批次不同时间点的中药制剂中的化学成分进行分离和检测，获得所分离化学成分的保留时间、准分子离子的分子量和二级质谱碎片离子数据；将所得数据与权利要求4或5所述筛查谱库进行比对；根据比对结果判断不同批次中药制剂或同批次不同时间点的中药制剂的质量稳定性；
具体地，所述结果判断的标准如下：
若所比对化学成分的保留时间偏差为±0.2min，精确质量偏差为±5mDa且可匹配2个及以上的碎片离子，则表明所比对化学成分为同种物质；
不同批次中药制剂或同批次不同时间点的中药制剂所含有的化学成分差异越小，则表明所测中药制剂的质量稳定性越好；
所述中药制剂由金银花、栀子、板蓝根、胆酸、猪去氧胆酸、水牛角、珍珠母和黄芩苷制成。
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