CN116083281A - 基于菌藻共生的复合菌剂及其在印染废水脱色中的应用 - Google Patents

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Abstract

基于菌藻共生的复合菌剂及其在印染废水脱色中的应用，其复合菌剂由丝状真菌、芽孢杆菌、微藻的单菌母液按比例混合后扩大培养而成。本发明的复合菌剂在印染废水脱色中的应用，具体通过将复合菌剂按接种量为5～10％接种于染料废水中进行厌氧处理而实现脱色净化。本发明的复合菌剂在营养交换、信号传导等多方面相互作用，相互促进生长，形成菌‑藻共生体系，丝状真菌、芽孢杆菌和微藻三者对印染废水的作用机理交叉又有所不同，相对单一菌剂，三者进行共生培养形成的复合菌剂，其在印染废水中脱色率相对提高约27％，具有显著协同增效作用。

Description

基于菌藻共生的复合菌剂及其在印染废水脱色中的应用
技术领域
本发明涉及一种菌藻共生的复合菌剂，尤其是涉及一种基于菌藻共生的复合菌剂及其在印染废水脱色中的应用。
背景技术
印染行业是我国的工业用水大户和废水排放大户，据不完全统计，我国印染废水的排放量约为300-400万m3/d，约占整个工业废水排放量的35％。印染废水具有水质水量变化大，COD含量高，色度深，碱度大(一般pH为8-10)，生物毒性大、氨氮浓度高，废水水温偏高，盐度高等特征。在纺织印染过程中，约有10-20％的染料成为废染料随废水洗出，排入水体后，会导致水体透明度下降，严重影响水体外观，还会消耗水中的溶解氧，破坏水体生态平衡，威胁水生生物及人类安全。
目前，用于印染废水的脱色降解菌剂大部分是多种细菌或细菌与真菌组合的复合菌剂，如CN113528393A公开的一种含甲基芽孢杆菌的复合菌剂及其制法和在染料废水脱色中的应用，其复合菌剂包括将甲基芽孢杆菌(Bacillusmet hylotrophicus)BP 1.1、丁酸梭菌(Clostridium butyricum)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、嗜酸寡养单胞菌(Stenotrophomonas acidaminiphila)、谷氨酸杆菌(Glutamicibacter sp.)；CN113186117A公开的一种克雷伯氏菌、采用该克雷伯氏菌制得的复合菌剂及该复合菌剂的应用，复合菌剂由保藏编号为CCTCC M2020604的解硫胺素芽孢杆菌(Aneurinibacillussp.)YR-2的扩培菌液和保藏编号为CCTCC M 2020605的克雷伯氏菌(Klebsiellasp.)HR-3的扩培菌液按体积比1:1混合而成；CN103898003A公开了印染废水微生物同步脱色脱氮复合菌剂的制备方法，其分离到染料脱色降解功能微生物包括细菌沙门菌属Salmonella sp.SG2和真菌青霉菌Penicillium sp.HS-DY08等菌株6株。
微藻是一类广泛存在于各类水环境中的单细胞微生物，微藻胞内具有蛋白质，还包括一种特异性转运蛋白，这种蛋白将胞外有机碳以协助扩散或协同运输方式搬入微藻细胞内，进而分解去除废水中的有机物；微藻能够同化铵盐和尿素等不同形态的氮源，亚硝酸盐和硝酸盐耗能跨膜转运至胞内催化形成铵盐，尿素分解为碳酸氢盐和铵盐。这些铵盐还可直接由一组转运蛋白跨膜运输至胞内。藻细胞光合作用促使水体的pH上升，水体pH的上调则会促进正磷酸盐沉淀，从而间接达到去除磷目的。微藻还可通过络合反应或离子交换作用吸附重金属，具体作用机理为废水中的金属阳离子可与细胞里的蛋白质、脂类和多糖中所带负电荷的官能团发生络合。
现有技术暂未公开将细菌、真菌和微藻进行菌藻共生获得复合菌剂，并用于印染废水的脱色处理的技术方案，而现有的印染废水处理效率偏低，申请人基于微藻不仅可以进化水中的氮、磷和有机物，还可以为细菌、真菌生长提供氧和营养成分，提出将细菌、真菌和微藻进行共生培养形成菌藻共生体系，将菌藻共生得到的复合菌剂用于印染废水的脱色处理，进而提高印染废水的处理效率。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：克服现有技术的不足，提供一种由细菌、真菌和微藻共生、制备简单、脱色效果好的复合菌剂，以及基于菌藻共生的复合菌剂在印染废水脱色中的应用。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：
基于菌藻共生的复合菌剂，所述复合菌剂由丝状真菌、芽孢杆菌、微藻的单菌母液按比例混合后扩大培养而成。
本发明的复合菌剂，利用集胞藻等微藻的放氧型光合作用，供应和平衡丝状真菌、芽孢杆菌的生长所需的氧气和养分，进而促进丝状真菌和芽孢杆菌的生长，实现菌藻共生，且微藻能有效吸附印染废水中的染料，丝状真菌代谢产生的木质素过氧化物酶(LIP)、锰过氧化物酶(MnP)和漆酶(Lac)等活性成分，能有效降解印染废水中的木质素和染料，提高脱色处理效率，并通过生物吸附和积累而去除印染废水中的重金属，还能与芽孢杆菌形成固定化菌丝球(菌丝球表面的网状空隙及多孔结构，便于作为芽孢杆菌的固定化载体)，进而降低复合菌剂在印染废水处理过程中的流失，且便于后续分离再利用；芽孢杆菌能够强烈的分解碳、氮系、磷系、硫系污染物，分解复杂多糖、蛋白质和水溶性有机物，高效去除印染废水中的COD。
本发明的复合菌剂相互促进，对印染废水的处理功效上相互促进，具有高效脱色能力，不仅破坏有色基团实现脱色，还能将断裂、打开的有机链矿化成无机物，从而实现废水中COD的大幅降低，且具有良好的环境适应性，能够耐受高达8％的盐度，此外，染料复合菌剂的各菌株可进行混合培养，易于工业生产，其制备成本低。
优选，所述丝状真菌为烟曲霉，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或甲基芽孢杆菌，所述微藻为集胞藻PCC6803。
其中，烟曲霉的筛选样本源自广东省阳江市阳东区东平镇柳溪重金属废水水样，丝状真菌烟曲霉经过含有印染废水平板筛选获得。分离筛选的具体操作为：先将采集的废水样(200uL)分别涂布至含有印染废水的固体平板上，将平板放入30℃恒温培养箱中培养5-7天，待长出单菌落后，再划线至新鲜的含有印染废水的PDA平板上，至少重复5次，最终获得单一的丝状真菌；提取该丝状真菌的DNA送至测序，通过BLAST基因库将测序结果与NCBI数据库进行比较，使用MEGA6.06将菌株的测序结果用于构建系统发育树，经菌种鉴定分别为：Aspergillus fumigatus，其核苷酸序列如SEQ NO.1所示。
在某一示范实施例中，所述复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将丝状真菌、芽孢杆菌、微藻分别接种于种子培养基中，于25℃-35℃下培养至各菌液OD600(吸光度)为1.0-1.2，得到各菌的单菌母液；
2)将步骤1)制备的单菌母液按体积比5：2：1～4:3:1混合，混合均匀后得到复合菌母液；
3)将步骤1)制备的复合菌母液按体积分数5-10％接种至扩大培养基中，于25-35℃下好氧培养至菌液OD600为1.2-1.5，得到复合菌剂。
丝状真菌、芽孢杆菌、微藻分别按2～5％(V/V)的接种量接种于种子培养基中。
丝状真菌的种子培养基为葡萄糖马铃薯培养基(PDA培养基)，芽孢杆菌的种子培养基为LB培养基，微藻的种子培养基为BG-11培养基；扩大培养基为LB培养基、牛肉膏蛋白胨培养基或YPD培养基、BG-11培养基中的任一一种。
本发明解决其技术问题所采用的另一技术方案是：
基于菌藻共生的复合菌剂在印染废水脱色中的应用。
在某一示范实施例中，所述印染料废水中染料质量浓度320-350mg/L，盐度≤8％，COD浓度1000-1200mg/L。
优选，所述复合菌剂按接种量5-10％(V/V)接种于印染废水中进行厌氧处理，进而达到对印染废水的脱色净化的目的。
优选，所述厌氧处理时间为3～6天，处理温度为25-35℃，pH值为5.0-7.0。
所述印染废水为刚果红染料废水，即，基于菌藻共生的复合菌剂在刚果红染料废水脱色中的应用。
本发明基于菌藻共生的复合菌剂的有益效果：
1)本发明的复合菌剂利用集胞藻等微藻光能自养过程，供应和平衡丝状真菌、芽孢杆菌的生长需求(氧气和碳源、氮源等养分)，同时，丝状真菌和芽孢杆菌代谢过程产生的二氧化碳为微藻的生长提供碳源，在营养交换、信号传导等多方面相互作用，相互促进生长，形成菌-藻共生体系；且丝状真菌的菌丝球还有利于芽孢杆菌的固定，便于形成固定化菌丝球结构，使复合菌剂的结构更稳定，避免菌体悬浮在水中减少复合菌剂在印染废水处理过程中的流失，便于废水处理过程中复合菌剂的反复利用，提高其利用率。
2)集胞藻能对印染废水中达到染料进行吸附去除，富集金属离子并去除废水中的氮磷，提供生物吸附、累积吸收去除重金属；丝状真菌代谢产生的木质素过氧化物酶(LIP)、锰过氧化物酶(MnP)和漆酶(Lac)等活性成分，能有效降解印染废水中的木质素和染料，提高脱色处理效率，并通过生物吸附和积累而去除印染废水中的重金属；芽孢杆菌是土壤中的优势种群，具有丰富的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤维素酶等，它能够强烈的分解碳、氮系、磷系、硫系污染物，分解复杂多糖、蛋白质和水溶性有机物；丝状真菌、芽孢杆菌和微藻三者对印染废水的作用机理交叉又有所不同，相对单一菌剂，三者进行共生培养形成的复合菌剂，其在印染废水中脱色率相对提高约27％，具有显著协同增效作用。
3)相对现有的细菌-真菌共生体系(如烟曲霉L-3和地衣芽孢杆菌)、微藻-细菌共生体系(集胞藻和地衣芽孢杆菌)，本发明的复合菌剂开创了细菌-真菌-微藻3大菌株的共生培养，并优化了共生培养条件，获得了质量稳定的复合菌剂，高效发挥了细菌-真菌-微藻3大不同菌株对印染废水中不同成分的降解和吸附处理，进而提高了印染废水的处理效率。
4)本发明的复合菌剂均采用性能稳定的微生物菌株，且各菌株可混合共生培养，其制备工艺简单，周期短，成本低，易于工业规模化生产，产品质量稳定。
基于菌藻共生的复合菌剂在印染废水脱色的应用的有益效果：
该应用解决了现有印染废水脱色处理效率低下的难题，并拓展了复合菌剂用于印染废水处理的新应用。
本发明还对该应用的具体条件进行了优化，进而改善复合菌剂用于印染废水脱色处理的效果。
附图说明
图1—本发明基于菌藻共生的复合菌剂中烟曲霉的系统发育树；
图2—本发明基于菌藻共生的复合菌剂在不同盐度下对刚果红废水的脱色效率；
图3—本发明基于菌藻共生的复合菌剂在不同pH下对刚果红废水的脱色效率；
图4—本发明基于菌藻共生的复合菌剂在不同温度下对刚果红废水的脱色效率；
图5—为采用单一微藻、丝状真菌、芽孢杆菌及实施例1中基于菌藻共生的复合菌剂对刚果红废水脱色处理时废水中的刚果红浓度和COD浓度随时间的变化曲线图，其中：(a)刚果红浓度变化曲线图，(b)COD浓度变化曲线图；
图6—为采用单一微藻、丝状真菌、芽孢杆菌及实施例1中的基于菌藻共生的复合菌剂对刚果红的脱色率和COD去除率的对比分析图。
具体实施方式
以下结合附图及实施例对本发明作进一步说明。
本发明采用的微生物来源分别如下：
丝状真菌为实验室分离筛选得到的烟曲霉，筛选样本源自广东省阳江市阳东区东平镇柳溪重金属废水水样，丝状真菌烟曲霉经过含有印染废水平板筛选获得。先将采集的废水样(200uL)分别涂布至含有印染废水的固体平板上，将平板放入30℃恒温培养箱中培养5-7天，待长出单菌落后，再划线至新鲜的含有印染废水的PDA平板上，至少重复5次，最终获得单一的丝状真菌。提取丝状真菌的DNA送至测序，通过BLAST基因库将测序结果与NCBI数据库进行比较，使用MEGA6.06将菌株的测序结果用于构建系统发育树(如图1所示)，经菌种鉴定分别为：Aspergillus fumigatus，其核苷酸序列如SEQ NO.1所示。
枯草芽孢杆菌(Bacillus licheniformis CGMC13358)为购自于中国普通微生物菌种保藏管理中心的枯草芽孢杆菌CGMC13358；甲基芽孢杆菌(Bacillusmethylotrophicus)BP1.1，购自于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M20191078；地衣芽孢杆菌购自中国工业微生物菌株保藏管理中心的地衣芽孢杆菌CICC10092。
微藻为集胞藻PCC6803，采购于中国科学院淡水藻种库。
实施例1
本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂，所述复合菌剂由丝状真菌、芽孢杆菌、微藻的单菌母液按比例混合后扩大培养而成，其中，所述丝状真菌为本实验室从源自广东省阳江市阳东区东平镇柳溪重金属废水水样中分离筛选并保存的烟曲霉，所述芽孢杆菌为购自于中国普通微生物菌种保藏管理中心的枯草芽孢杆菌CGMC13358，所述微藻为集胞藻PCC6803。
所述复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将丝状真菌、芽孢杆菌、微藻分别按5％(V/V)的接种量接种于种子培养基中，于30℃下培养至各菌液OD600(吸光度)为1.0-1.2，得到各菌的单菌母液；
2)将步骤1)制备的单菌母液按体积比丝状真菌：芽孢杆菌：微藻＝5：2：1混合，混合均匀后得到复合菌母液；
3)将步骤1)制备的复合菌母液按体积分数10％接种至扩大培养基中，于30℃下好氧培养至菌液OD600为1.4，得到复合菌剂。
其中，丝状真菌的种子培养基为葡萄糖马铃薯培养基(PDA培养基)，芽孢杆菌的种子培养基为LB培养基，微藻的种子培养基为BG-11培养基；扩大培养基为LB培养基。
本实施例基于菌藻共生的复合菌剂，其用于刚果红染料废水的脱色处理，具体操作如下：
1)刚果红模拟染料废水中刚果红的初始质量浓度为350mg/L，COD浓度1200mg/L。
2)以NaCl调节模拟染料废水盐度，制备盐度为0％、2％、4％、8％、12％、14％、16％、20％共8种盐度的刚果红模拟染料废水，将复合菌剂按接种量5％(V/V)接种于液体的刚果红模拟染料废水培养基中，在温度为30℃的恒温摇床内培养至脱色效率稳定，考察基于菌藻共生的复合菌剂对不同盐度模拟染料废水的脱色效果。
3)采用20％ HCl和20％ NaOH调节模拟染料废水的酸碱度，得到pH值为3.0，5.0，7.0，9.0的4种刚果红模拟染料废水，将复合菌剂按接种量5％(V/V)接种于液体的刚果红模拟染料废水培养基中，在温度为30℃的恒温摇床内培养至脱色效率稳定，考察基于菌藻共生的复合菌剂对不同pH模拟染料废水的脱色效果。
4)采用NaCl、20％ HCl和20％ NaOH分别调节刚果红模拟染料废水的盐度和酸碱度，配制盐度为4％、pH为7.0的的刚果红模拟染料废水，将复合菌剂按接种量5％(V/V)接种于液体的刚果红模拟染料废水培养基中，分别在20，25，30，35，4 0℃恒温摇床内培养至脱色效率稳定，考察基于菌藻共生的复合菌剂在不同温度下处理刚果红模拟染料废水的脱色效果。
5)采用NaCl、20％ HCl和20％ NaOH分别调节刚果红模拟染料废水的盐度和酸碱度，配制盐度为4％、pH为7.0的的刚果红模拟染料废水，分别将集胞藻PCC6803、丝状真菌烟曲霉、枯草芽孢杆菌及本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂按接种量5％(V/V)接种于液体的刚果红模拟染料废水培养基中，在温度为30℃的恒温摇床内培养至脱色效率稳定，考察不同微生物菌剂对刚果红模拟染料废水的脱色率和COD去除率。
不同盐度、pH和温度下本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂对刚果红模拟染料废水的脱色效率分别如图2，3，4所示。由图2可知，基于菌藻共生的复合菌剂对染料废水脱色的盐度适应性为0-8％，超过8％盐度，脱色效率随着盐度的增高而显著降低。在盐度8％以内，基于菌藻共生的复合菌剂对刚果红模拟染料废水的脱色率达98％以上。
由图3可知，刚果红模拟染料废水的酸碱度pH为5.0-7.0，温度30℃时，基于菌藻共生的复合菌剂对刚果红的脱色率高达95％，但当pH≤3.0时，基于菌藻共生的复合菌剂对刚果红染料废水的脱色率显著下降，低至85.9％，当pH≥9.0时，基于菌藻共生的复合菌剂对刚果红染料废水的脱色率显著下降，低至87.3％，说明刚果红染料废水的pH过度偏酸或偏碱，显著影响了菌藻共生的复合菌株的生长和代谢的正常运行，导致不能高效吸附或降解刚果红模拟染料废水中的有色成分而使脱色率显著偏低。
由图4可知，采用本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂处理刚果红模拟染料废水时，处理的环境温度在30℃，其脱色率高达95％，而随着温度的继续下降或继续上升，其对刚果红染料废水的脱色率均呈递减趋势，该处理温度与本实施例基于菌藻共生的复合菌剂中丝状真菌烟曲霉和枯草芽孢杆菌的最适生长温度相对应，即，选择在基于菌藻共生的复合菌剂共生培养的适宜生长温度下处理印染废水，可显著提高其脱色率。
单一微藻、丝状真菌、芽孢杆菌及本实施例1的基于菌藻共生的复合菌剂对刚果红模拟染料废水(pH值为7.0，盐度4％)在温度为30℃进行脱色处理3d的脱色率和COD去除率、以及刚果红浓度、废水COD浓度分布如下表1和图5、6所示。
表1不同菌剂对刚果红模拟染料废水的处理3d后效果对比分析
Figure BDA0003914970110000101
由表1可知，本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂对刚果红模拟染料废水的脱色率高达95.8％，其COD去除率高达97.2％，相对单一菌剂对刚果红模拟染料废水的脱色率和COD去除率分别提高约27％、24％，且，刚果红浓度、COD浓度随脱色处理时间的变化曲线斜率越大，单位时间内脱色效率和去除COD效率越高，由图5可知，本实施例1基于菌藻共生的的复合菌剂其曲线斜率最大，微藻、真菌和芽孢杆菌的刚果红浓度变化曲线的斜率依次递减，且基于菌藻共生的复合菌剂对COD的去除率显著大于微藻、真菌和芽孢杆菌的，基本在第2天就去除了刚果红模拟废水中的大部分COD，由此说明，本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂，相对单一的菌剂，三种菌剂之间存在显著的协同增效作用。
此外，相对现有技术(D1:CN113528393A-一种含甲基芽孢杆菌的复合菌剂及其制法和在染料废水脱色中的应用-公开，D2:林胜红、潘晓梅等，土壤霉菌菌丝球的筛选、鉴定及固定化菌丝球的应用，生物技术通报，2019,35(1)：76-81)中多种细菌、真菌-细菌组合的复合菌剂，具体对比分析如表2所示，本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂其对刚果红染料废水的脱色率最高，具有显著差异，说明该复合菌剂的微藻-真菌-细菌之间不仅仅在生长过程中营养成分供给互补，相互促进生长，其对刚果红模拟染料废水的作用存在吸附、降解等多种去除方式的协同增效作用，且相对现有的单一菌种多菌株或真菌-细菌的复合菌剂之间的协同效应还有显著提高。
Figure BDA0003914970110000111
Figure BDA0003914970110000121
基于本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂对刚果红染料废水有较好的脱色净化作用，且印染废水中主要含染料等废弃物，可以推断，本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂在印染废水脱色中的应用，也能达到较好的脱色效果。
实施例2
本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂，所述复合菌剂由丝状真菌、芽孢杆菌杆菌、微藻的单菌母液按比例混合后扩大培养而成。
所述丝状真菌为烟曲霉，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌，所述微藻为集胞藻PCC6803，上述菌株来源同实施例1。
所述复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将丝状真菌、芽孢杆菌、微藻分别接种于种子培养基中，于30℃下培养至各菌液OD600(吸光度)为1.2，得到各菌的单菌母液；
2)将步骤1)制备的单菌母液按体积比丝状真菌：芽孢杆菌：微藻＝5：3：1混合，混合均匀后得到复合菌母液；
3)将步骤1)制备的复合菌母液按体积分数8％接种至扩大培养基中，于30℃下好氧培养至菌液OD600为1.5，得到复合菌剂。
丝状真菌、芽孢杆菌、微藻分别接种于种子培养基中的接种量按4％(V/V)。
本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂，用于刚果红染料废水(刚果红初始浓度为350mg/L，COD初始浓度为1200mg/L，盐度为4％，初始pH为7.0)在30℃下脱色处理，其染料脱色率为96.01％，COD去除率为97.92％。
实施例3
本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂，所述复合菌剂由丝状真菌、芽孢杆菌杆菌、微藻的单菌母液按比例混合后扩大培养而成，所述丝状真菌为烟曲霉，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌，所述微藻为集胞藻PCC6803，上述菌株来源同实施例1。
所述复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将丝状真菌、芽孢杆菌、微藻分别接种于种子培养基中，于30℃下培养至各菌液OD600(吸光度)为1.0，得到各菌的单菌母液；
2)将步骤1)制备的单菌母液按体积比丝状真菌：芽孢杆菌：微藻＝4：3：1混合，混合均匀后得到复合菌母液；
3)将步骤1)制备的复合菌母液按体积分数10％接种至扩大培养基中，于30℃下好氧培养至菌液OD600为1.2，得到复合菌剂。
丝状真菌、芽孢杆菌、微藻分别接种于种子培养基中的接种量按5％(V/V)。
本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂，用于刚果红染料废水(刚果红初始浓度为350mg/L，COD初始浓度为1200mg/L，盐度为4％，初始pH为7.0)在30℃下脱色处理，其染料脱色率为92.99％，COD去除率为93.87％。
实施例4～7
实施例4～7中，基于菌藻共生的复合菌剂中制备时单菌母液的混合体积比及用于刚果红模拟染料废水的脱色处理效果如表3所示。
Figure BDA0003914970110000131
Figure BDA0003914970110000141
注：刚果红模拟染料废水：刚果红初始浓度为350mg/L，COD初始浓度为1200mg/L，盐度为4％，初始pH为7.0。
实施例8
本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂，所述复合菌剂由丝状真菌、芽孢杆菌杆菌、微藻的单菌母液按比例混合后扩大培养而成，所述丝状真菌为本实验室从源自广东省阳江市阳东区东平镇柳溪重金属废水水样中分离筛选并保存的烟曲霉，其核苷酸序列如SEQNO.1所示；所述地衣芽孢杆菌购自中国工业微生物菌株保藏管理中心的烟曲霉CICC10092；微藻为集胞藻PCC6803。
所述复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将丝状真菌、芽孢杆菌、微藻分别接种于种子培养基中，于30℃下培养至各菌液OD600(吸光度)为1.2，得到各菌的单菌母液；
2)将步骤1)制备的单菌母液按体积比丝状真菌：芽孢杆菌：微藻＝5：2：1混合，混合均匀后得到复合菌母液；
3)将步骤1)制备的复合菌母液按体积分数10％接种至扩大培养基中，于30℃下好氧培养至菌液OD600为1.5，得到复合菌剂。
丝状真菌、芽孢杆菌、微藻分别接种于种子培养基中的接种量按7％(V/V)。
本实施例的基于菌藻共生的复合菌剂，用于刚果红染料废水(刚果红初始浓度为350mg/L，COD初始浓度为1200mg/L，盐度为4％，初始pH为7.0)在30℃下脱色处理，其染料脱色率为94.38％，COD去除率为95.12％。
本发明基于菌藻共生的复合菌剂，所述微藻还可以为小球藻或栅藻，以上技术特征的改变，本领域的技术人员通过文字描述可以理解并实施，故不再另作附图加以说明。

Claims (10)

1.基于菌藻共生的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂由丝状真菌、芽孢杆菌、微藻的单菌母液按比例混合后扩大培养而成。
2.如权利要求1所述基于菌藻共生的复合菌剂，其特征在于，所述丝状真菌为烟曲霉，所述芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌或甲基芽孢杆菌，所述微藻为集胞藻PCC6803。
3.如权利要求2所述基于菌藻共生的复合菌剂，其特征在于，所述烟曲霉为本实验室从源自广东省阳江市阳东区东平镇柳溪重金属废水水样中分离筛选并保存的烟曲霉，其核苷酸序列如SEQ NO.1所示。
4.如权利要求1～3任一项所述基于菌藻共生的复合菌剂，其特征在于，所述复合菌剂的制备方法，包括以下步骤：
1)将丝状真菌、芽孢杆菌、微藻分别接种于种子培养基中，于25℃-35℃下培养至各菌液OD600(吸光度)为1.0-1.2，得到各菌的单菌母液；
2)将步骤1)制备的单菌母液按体积比5：2：1～4:3：1混合，混合均匀后得到复合菌母液；
3)将步骤1)制备的复合菌母液按体积分数5-10％接种至扩大培养基中，于25-35℃下好氧培养至菌液OD600为1.2-1.5，得到复合菌剂。
5.如权利要求4所述基于菌藻共生的复合菌剂，其特征在于，步骤1)中，所述丝状真菌、芽孢杆菌、微藻分别按2～5％(V/V)的接种量接种于种子培养基中。
6.基于菌藻共生的复合菌剂印染废水脱色中的应用，其特征在于，所述复合菌剂如权利要求1～5任一项所述。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述印染料废水中染料质量浓度320-350mg/L，盐度≤8％，COD浓度1000-1200mg/L。
8.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述复合菌剂按接种量5-10％(V/V)接种于印染废水中进行厌氧处理。
9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述厌氧处理时间为3～6天，处理温度为25-35℃，pH值为5.0-7.0。
10.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述印染废水为刚果红染料废水。
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