CN116076512B - 一种异荭草素化合物的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种异荭草素化合物的应用，所述的异荭草素化合物在制备防治烟草花叶病毒药物中的应用。异荭草素不但可以显著抑制TMV对寄主的初侵染，而且对TMV有一定的钝化作用，从而减少病毒进入寄主细胞并进一步复制和增值的机会，起到对寄主保护的作用。异荭草素对TMV侵染的预防保护效果优于市售抗病毒农药宁南霉素。本发明的异荭草素药物制剂来源于药用植物，对环境友好，符合农业生产绿色环保的需求，而且对防治烟草花叶病毒病有较好的效果，可用于制备防治烟草花叶病毒病的药物制剂。

Description

一种异荭草素化合物的应用
技术领域
本发明属于生物应用技术领域，进一步属于生物农药技术领域，具体涉及一种异荭草素化合物的应用。
背景技术
植物病毒病是仅次于真菌和细菌的一类植物病害,危害大且很难防治,有“植物癌症”之称。烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）是烟草花叶病等的病原体，能侵染30个科的300多种植物，在烟草、番茄等粮经作物上危害严重，给农业生产造成巨大的经济损失。在目前的农业生产中，化学农药防治TMV应用最为广泛，但化学防治效果有限，且易造成农残超标，无法满足农业可持续性发展的要求。因此迫切需要开发新型抗病毒制剂。
长梗喉毛花[Comastomapedunlulatum(Royle ex D.Don)Holub]为龙胆科喉毛花属植物，有研究发现其中含有大量口山酮及其苷类、黄酮类和环烯醚萜类成分。虽然有报道表明该属植物具有抗炎、抗肿瘤和抑制某些氧化酶等活性，但迄今未有长梗喉毛花中的异荭草素化合物作为防控烟草花叶病的制剂，在制备抗烟草花叶病毒药物中的应用的报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种异荭草素化合物的应用。
本发明的目的是这样实现的，所述的异荭草素化合物在制备防治烟草花叶病毒药物中的应用。
本发明所述的异荭草素化合物可以是合成的，也可以是从龙胆科喉毛花属植物长梗喉毛花[Comastomapedunlulatum(Royle ex D.Don)Holub]中分离得到的，分离步骤具体如下：
所述的异荭草素化合物是从龙胆科喉毛花属植物长梗喉毛花[Comastomapedunlulatum(Royle ex D.Don)Holub]中分离得到，其分子式为C21H22O11，结构式为：
Figure SMS_1
该化合物命名为：异荭草素。
本发明经实验证明异荭草素具有较高的抑制TMV侵染的活性，异荭草素对TMV侵染的预防保护效果优于市售抗病毒农药宁南霉素。本发明的异荭草素药物制剂来源于药用植物，对环境友好，符合农业生产绿色环保的需求，而且对防治烟草花叶病毒病有较好的效果，可用于制备防治烟草花叶病毒病的药物制剂。
本发明化合物用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有0.1～99%，优选为0.5～90%的本发明化合物，其余为药物学上可接受的，惰性的可药用载体和/或赋形剂。所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。采用制药和食品领域公认的方法制备成各种剂型，如液体制剂（水剂、乳剂等）、固体制剂（片剂、颗粒剂等）、喷剂、气雾剂等。
附图说明
图1为本发明应用效果对比图；
其中：左图为本发明化合物与对照效果对比；右图为宁南霉素与对照效果对比；
图2为异荭草素在100μg/mL浓度时对植株内防御酶活性的影响。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或替换，均属于本发明的保护范围。
本发明所述的异荭草素化合物的应用为所述的异荭草素化合物在制备防治烟草花叶病毒药物中的应用。
在制备防治烟草花叶病毒药物中的异荭草素化合物溶液的浓度为20~500μg/mL。
下面以具体实施案例对本发明做进一步说明：
实施例1
0.5mg/mL异荭草素水溶液的配制：
称取异荭草素化合物1mg溶于少量DMSO溶液，充分搅拌混合，待其充分溶解后，加入余量的蒸馏水至终体积2mL，制成水剂，即得0.5mg/mL的异荭草素水溶液。使用时按照所需浓度稀释即可。
实施例2
100μg/mL异荭草素水溶液的配制：
称取异荭草素化合物100μg溶于少量DMSO溶液，充分搅拌混合，待其充分溶解后，加入余量的蒸馏水至终体积1mL，制成水剂，即得100μg/mL的异荭草素水溶液。
实施例3
20μg/mL异荭草素水溶液的配制：
称取异荭草素化合物20μg溶于少量DMSO溶液，充分搅拌混合，待其充分溶解后，加入余量的蒸馏水至终体积1mL，制成水剂，即得20μg/mL的异荭草素水溶液。
实施例4
制备1g异荭草素乳剂：
称取异荭草素化合物0.99g，加入少许DMSO使之充分溶解；然后加入10%十二烷基苯磺酸钠作为乳化剂，充分混匀成为乳剂。使用时将乳剂稀释至所需浓度即可。
实施例5
制备1g异荭草素片剂：
称取异荭草素化合物0.4g，加入少许DMSO使之充分溶解；后再加入0.1g小麦蛋白（粉），加水充分搅拌混匀，然后加入40%淀粉作为赋形剂，充分混匀，干燥后压制成为片剂。使用时将片剂溶解于水并稀释至所需浓度即可。
实施例6
50μg/mL的TMV溶液制备：
吸取已经制备的500μg/mL的TMV母液1mL，加入余量的磷酸缓冲液至终体积10mL，即得50μg/mL的TMV溶液。
实施例7
异荭草素对TMV侵染的预防保护作用：
采用半叶枯斑法。选取健康且生长良好的心叶烟，在暗室放置一夜。每棵烟苗挑选水平位置相同的3个叶片。将每个叶片的右半部分均匀喷洒100μg/mL的异荭草素水溶液100μL，左半部分喷洒100μL含相同DMSO浓度的蒸馏水，喷洒量以叶面全部浸湿而不下滴为准。4h后将整个叶片均匀摩擦接种50μg/mL的TMV200μL。以8%宁南霉素水剂800倍液为对照。每个处理3株烟共10片烟叶。5天后分别统计左右叶片的枯斑数目并根据叶片上的枯斑数计算枯斑抑制率。化合物对TMV侵染的抑制率=[（阳性对照枯斑数－化合物处理枯斑数）/阳性对照枯斑数] ×100％。
试验结果：表1为异荭草素在100μg/mL浓度时与对照药物宁南霉素在心叶烟上对TMV初侵染的抑制比较。由表1可知，异荭草素对TMV的平均抑制率为61.73%，而宁南霉素对TMV的抑制率为47.75%。异荭草素对TMV初侵染的预防保护效果优于市售抗病毒农药宁南霉素。
实施例8
异荭草素对TMV侵染的钝化作用：
采用半叶枯斑法。选取健康且生长良好的心叶烟，在暗室放置一夜。每棵烟苗挑选水平位置相同的3个叶片。将每个叶片左半边部分摩擦接种一定浓度的TMV,右半部分摩擦接种含有100μg/mL异荭草素和TMV的混合液，20min后用无菌水冲洗干净。5天后统计左右叶片的枯斑数目并计算抑制率=[（阳性对照组枯斑数－化合物处理组枯斑数）/阳性对照组枯斑数] ×100％。
试验结果：表1为化合物异荭草素在100μg/mL浓度时与对照药物宁南霉素在心叶烟上对TMV的抑制率比较。由结果可知，异荭草素对TMV钝化的平均抑制率为12.85%，而宁南霉素对TMV钝化的抑制率为35.12%。虽然化合物异荭草素对TMV钝化的抑制效果低于市售药物宁南霉素，但其仍然可以通过体外对TMV的钝化而抑制其初侵染活性。
表1异荭草素对TMV的侵染抑制率（n=3）
Figure SMS_2
实施例9
异荭草素对TMV在烟苗上症状形成的影响：
选取健康且生长良好的枯斑寄主心叶烟，在暗室放置一夜。以100μg/mL的异荭草素水溶液均匀喷洒在叶面右半叶面上，左半叶面喷洒清水作对照，喷洒量以叶面全部浸湿而不下滴为准。4h后将整个叶片均匀摩擦接种50μg/mL的TMV200μL。以8%宁南霉素水剂800倍液为对照。接种TMV后第5天观察烟苗的症状。
试验结果如图1所示，异荭草素水溶液处理烟苗后接种TMV，5天后发现用化合物处理的叶片上枯斑数目显著少于阳性对照。异荭草素可以显著抑制TMV对寄主的初侵染，从而减少病毒进入寄主细胞并进一步复制和增值的机会，起到对寄主预防保护的作用。
实施例10
异荭草素对植株防御酶活性的影响：
选取健康且生长良好的5~6叶期K326烟苗，在暗室放置1夜，设置2组对照(空白对照CK、接种对照CK+TMV)、宁南霉素(8%宁南霉素800倍稀释液，阳性对照组PC)和异荭草素水溶液处理组。挑选烟叶第3、4片叶涂抹100μg/mL的异荭草素水溶液或者接种50μg/mL的TMV，分别于接种后0、12、24、48、72、96h用打孔器取相同部位叶片，每个处理随机选取3株，重复3次，液氮速冻后在-80℃保存。液氮冷冻研磨法提取叶片粗酶液。防御酶活性测定采用PAL、PPO、SOD和POD试剂盒进行测定。
实验结果如图2所示：
异荭草素水溶液处理后，烟草叶片内PPO、PAL和POD活性均呈现先升高后降低的趋势。异荭草素水溶液处理24h后PPO活性最高为1.00U/g，活性在最高处与空白对照相比提高49.25%。异荭草素水溶液处理72h后PAL活性最高为10.31U/g，活性在最高处与空白对照相比提高32.52%。异荭草素水溶液处理72h后POD活性最高为94.00U/mg，活性最高处与空白对照相比提高31.78%。异荭草素水溶液处理后，烟草叶片内PPO、PAL和POD活性在最高处均高于对照组，且有显著性差异，表明异荭草素水溶液可以通过提高植株内防御酶活性而抑制TMV的侵染。

Claims (2)

1.一种异荭草素化合物的应用，其特征在于，所述的异荭草素化合物在制备防治烟草花叶病毒药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的异荭草素化合物的应用，其特征在于，在制备防治烟草花叶病毒药物中的异荭草素化合物溶液的浓度为20~500μg/mL。
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