CN116034922A - 一种岛礁型咬齿牡蛎Saccostrea mordax的人工繁育方法 - Google Patents

一种岛礁型咬齿牡蛎Saccostrea mordax的人工繁育方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种岛礁型咬齿牡蛎Saccostrea mordax的人工繁育方法。包括亲本采集、亲本驯化、配子获取、受精孵化、幼虫培养、适时采苗、子代培育。本发明结合形态学与分子生物学手段筛查咬齿牡蛎亲本，开展野生状态下的咬齿人工驯化，采用一步式盐度下调模式开展人工育苗技术研发，首次实现了咬齿牡蛎人工繁育。本发明根据咬齿牡蛎生物学特点，通过亲本采集、亲本驯化、配子获取、幼虫培养、适时采苗、子代培育等技术环节，成功培育出大量咬齿牡蛎苗种，为其资源增加、礁体构建及其岛礁基底稳固提供了技术保障。本发明具有开创性强，易于操作，便于推广等优点。

Description

一种岛礁型咬齿牡蛎Saccostrea mordax的人工繁育方法
技术领域
本发明属于海洋生态工程中贝类资源修复技术领域，具体涉及一种岛礁型咬齿牡蛎Saccostrea mordax的人工繁育方法。
背景技术
咬齿牡蛎Saccostrea mordax(Gould,1850)，是一种小蛎属牡蛎，可以区划为S.mordax-A和S.mordax-B，S.mordax-C三种类型。其中，A、B型主要分布于我国的广东、广西、海南岛近岸海域，而C型主要分布于西南沙海域(夏建军，2008)。它主要分布在我国南海、热带太平洋岛国的岩礁的潮间带及其潮上带部分，具有很强环境耐受能力(耐热、耐干露等)，适应于寡营养盐环境。
它的贝壳外形呈三角形到延伸的D型。左壳平坦完全附着在附着基上面，左壳的边缘在前后边缘矗立，壳边缘厚，壳边缘具有扎堆的鳞片，与平坦的放射肋垂直；右壳有一定程度的突出，呈白色在腹部有紫色的斑点。平行的凹沟，明显或不明显，从背腹轴延伸到贝壳腹部边缘。贝壳四周遍布等距的折叠形似M型，在前后面尤为明显。铰合线平直，长度较短；韧带部也较短。栉齿白色，短棒状，在壳内缘呈线状排列。闭壳肌痕相对较大，呈圆形型至延伸的卵圆形，位于腹部后面。一个有意思的现象是，在所有的咬齿牡蛎中，闭壳肌痕在左壳无颜色，而右壳却呈深紫色，可以被用来区此种和分僧帽牡蛎。
此前，由于该牡蛎个体小、生长缓慢，不具备良好的渔业商用价值而被忽略，尚未得到有效开发利用。但是，由于其是岛礁贝类主要优势种，具有很强的岛礁环境适应能力，且是岛礁岸基保护的主要造礁贝类。为此，开发其生态价值，进行人工繁育技术研发，对于降低海浪对岛礁基地冲击损伤，实现南海岛礁基地稳固，具有重要的现实意义和战略应用前景。
发明内容：
本发明的目的是开发咬齿牡蛎人工繁育技术，旨在培育出一个具有较高潜在生态价值的牡蛎新品种；同时，为我国南海岛礁岸基生态修复及其礁体构建提供技术保障。
本发明的岛礁型咬齿牡蛎Saccostrea mordax的人工繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、亲本采集：选择壳高在3cm以上咬齿牡蛎个体作为亲本，所有样品，首先经过形态学确认，之后进行分子生物学检测，确保使用亲本准确度达100％；
b、亲本驯化：鉴定好的亲本，采用生态土池或者室内水泥池开展人工驯化，包括温度、盐度适应性调整；再就是对饵料量投入由少到多，防止饵料过多导致亲本死亡；
c、配子获取：在亲本驯化过程中，定期观察亲本性腺发育情况，当其卵子深黄色，大小40-45μm，精子在显微镜下活跃跳动；即可以采用解剖法获得配子，卵子放置于温度26-30℃、盐度27-28ppt海水中激活30-60min，卵子变圆，其比率在70％以上，精子在相应环境下激活10-15min，精子跳动比率达90％以上，方可使用；
d、受精孵化：受精过程中，将精子倒入卵液中，精子：卵子＝8-10:1，受精卵密度控制在5000-6000个/ml；采用搅拌方法促使精卵集合，搅拌10-20min，当其受精卵受精膜举起，释放出第一极体后，将受精卵液倒入孵化池中，采用微冲气模式开展孵化，孵化密度控制在30-50个/ml；
e、幼虫培养：经过18-24h孵化，受精卵发育至D型幼虫，选育出的D型幼虫放置于水泥池中采用微冲气模式进行培育；培育期间，不换水、只投单胞藻，单胞藻投喂量根据幼虫发育及其摄食能力而定；培育密度控制在3-5个/ml；
f、适时采苗：当幼虫经过15-20d培育，经过壳顶前期、壳顶中期、壳顶后期幼虫发育至眼点幼虫，当眼点幼虫比率达到50％以上时，投放附着基，进行人工采苗，附着基投放量根据眼点幼虫数量而定；投放后，经过5-7天，浮游幼虫附着变态，完成人工采苗过程；
g、子代培育：随着稚贝不断长大，不断增加饵料投喂量，满足稚贝摄食需求；期间，微冲气、不换水，只投饵料；再经过15-20d培育，稚贝生长至3-5mm，将其转移至室外进行子代中间育成。
优选，所述亲本采集地点为南海岛礁潮间带或者潮上带，由于3cm个体形态完整，根据其外观比较容易起区分出来，但是为了保障亲本纯度，进一步采用分子手段进行验证，确保亲本纯度达到100％。
优选，所述的亲本驯化，温度、盐度适应性调整是温度控制在27-30℃，盐度控制在27-28ppt，由于亲本野外环境大多为海水盐度高、水域寡营养，所以在饵料投喂中，应逐步增加饵料量，根据亲本摄食量而定，否则容易出现撑死亲本的情况，饵料量根据摄食量而定，原则是每次投喂前培育池水变清澈。
优选，所述的配子获取，由于条件下，咬齿牡蛎很难有大量配子，且软体部肉质结实，为此在解剖取卵时卵子数量少；而在驯化后，由于饵料充足，温度、盐度等水环境更加适宜，所以卵子数量可以提升至野生状态下的5-10倍，为人工繁育提供了充足的卵源。
优选，所述的幼虫培养，全程微冲气、不换水、只投饵，保障了水环境稳定性，提高了幼虫存活率，且大大降低了幼虫培育成本。所述的选育出的D型幼虫是用350目筛绢网进行选育，D型幼虫大于350目，所以可以选育出。
优选，所述的适时采苗，人工附着基是牡蛎壳、水泥制品，其中，水泥制品效果比牡蛎壳更好，这可能与该牡蛎是岛礁型牡蛎的环境适应有关。
优选，所述的子代培育，期间时刻观察饵料量，因为稚贝以后摄食量大增，防止出现由于饵料不足引发的饥饿死亡状况发生。
本发明结合形态学与分子生物学手段筛查咬齿牡蛎亲本，开展野生状态下的咬齿人工驯化，采用一步式盐度下调模式(即使用的海水中一次性加入淡水将盐度下调至使用水平)开展人工育苗技术研发，首次实现了咬齿牡蛎人工繁育。本发明根据咬齿牡蛎生物学特点，通过亲本采集、亲本驯化、配子获取、幼虫培养、适时采苗、子代培育等技术环节，成功培育出大量咬齿牡蛎苗种，为其资源增加、礁体构建及其岛礁基底稳固提供了技术保障。本发明具有开创性强，易于操作，便于推广等优点。
附图说明：
图1：咬齿牡蛎亲本及其发育过程，A、B，咬齿牡蛎亲本；C、受精卵卵裂，D、壳顶前期幼虫；E，附着在贝壳上的稚贝苗种；F，附着在水泥板上的苗种。
具体实施方式：
以下实施例是对本发明的进一步说明，而不是对本发明的限制。
实施例1
如图1所示：
a、亲本采集：于2022年4月12日在西沙永兴岛采集壳高3-8cm的咬齿牡蛎样品960个，根据其外部形态特征，初步确定是咬齿牡蛎。同时，利用COI序列(夏建军，2008)进行了分析，发现这个948个个体为咬齿牡蛎，12个个体为缘齿牡蛎，以确定好身份的咬齿牡蛎作为亲本基础群；
b、亲本驯化：鉴定好的948个亲本，利用飞机转运至三亚，之后转运至广东海建生物科技有限公司的室内水泥池中，温度控制在26-28℃，盐度控制在27ppt；饵料量根据摄食量而定，原则是每次投喂前培育池水变清澈；每天对所有亲本进行检查，个别死亡个体即使清除掉；
c、配子获取：在亲本驯化过程中，定期观察亲本性腺发育情况，经过25天的培育，发现其卵子深黄色，大小在40-45μm，精子在显微镜下活跃跳动；采用解剖法获得配子，杀取130个亲本，雌性102个，雄性28个；采用挤卵法获得卵子，平均每个个体卵量在32万个/亲本，卵子放置于温度27-28℃、盐度27ppt海水中激活30min，卵子变圆，其比率在75％；采用挤精法活得精子，精子在相应环境下激活10min，精子跳动比率达95％，备用；
d、受精孵化：配子激活好以后，将精子倒入卵液中，精子：卵子＝8-10:1，受精卵密度控制在5000个/ml；采用搅拌方法促使精卵集合，搅拌15min，发现其受精卵受精膜举起，大约70-80％受精卵释放出第一极体，将受精卵液倒入孵化池中，采用微冲气模式开展孵化，孵化密度控制在30个/ml；
e、幼虫培养：经过22h孵化，受精卵发育至D型幼虫，孵化率近乎100％；用350目筛绢网进行选育，选育出的D型幼虫放置于10m3水泥池中采用微冲气模式进行培育；培育期间，不换水、只投单胞藻，单胞藻投喂量根据幼虫发育及其摄食能力而定(以幼虫下次投喂前吃清为标准。)；幼虫培育密度控制在3个/ml；
f、适时采苗：经过18d培育，幼虫经过壳顶前期、壳顶中期、壳顶后期阶段幼虫发育至眼点幼虫，当眼点幼虫比率达到60％时，投放10亩牡蛎壳附着基(4万片，水泥板)，进行人工采苗；投放后，大约经过5d，浮游幼虫附着变态，完成人工采苗过程，平均每个牡蛎壳采苗30个，共采集咬齿牡蛎稚贝1200万个；
g、子代培育：随着稚贝不断长大，不断增加饵料投喂量，满足稚贝摄食需求；期间，微冲气、不换水，只投饵料；大约再经过18d培育，稚贝生长至3-5mm，将其转移至室外进行子代中间育成。
实施例2
a、亲本采集：于2022年4月20日在三亚鹿回头采集壳高3-6cm的咬齿牡蛎样品640个，根据其外部形态特征，初步确定是咬齿牡蛎。同时，利用COI序列(夏建军，2008)进行了分析，发现这个609个个体为咬齿牡蛎，15个个体为缘齿牡蛎、16个个体为僧帽牡蛎，以确定好身份的咬齿牡蛎作为亲本基础群；
b、亲本驯化：鉴定好的609个亲本，利用空运模式至广东海建生物科技有限公司的室内水泥池中，温度控制在27-29℃，盐度控制在28ppt；饵料量根据摄食量而定，原则是每次投喂前培育池水变清澈；每天对所有亲本进行检查，个别死亡个体即使清除掉；
c、配子获取：在亲本驯化过程中，定期观察亲本性腺发育情况，经过20天的培育，发现其卵子深黄色，大小在40-45μm，精子在显微镜下活跃跳动；采用解剖法获得配子，杀取200个亲本，雌性161个，雄性39个；采用挤卵法获得卵子，平均每个个体卵量在25万个/亲本，卵子放置于温度27-28℃、盐度28ppt海水中激活50min，卵子变圆，其比率在80％；采用挤精法活得精子，精子在相应环境下激活10min，精子跳动比率达90％，备用；
d、受精孵化：配子激活好以后，将精子倒入卵液中，精子：卵子＝8-10:1，受精卵密度控制在6000个/ml；采用搅拌方法促使精卵集合，搅拌10min，发现其受精卵受精膜举起，大约70％受精卵释放出第一极体，将受精卵液倒入孵化池中，采用微冲气模式开展孵化，孵化密度控制在50个/ml；
e、幼虫培养：经过20h孵化，受精卵发育至D型幼虫，孵化率近乎100％；用350目筛绢网进行选育，选育出的D型幼虫放置于10m3水泥池中采用微冲气模式进行培育；培育期间，不换水、只投单胞藻，单胞藻投喂量根据幼虫发育及其摄食能力而定；幼虫培育密度控制在4个/ml；
f、适时采苗：经过15d培育，幼虫经过壳顶前期、壳顶中期、壳顶后期阶段幼虫发育至眼点幼虫，当眼点幼虫比率达到50％时，投放15亩牡蛎壳附着基(6.0万片)，进行人工采苗；投放后，大约经过7d，浮游幼虫附着变态，完成人工采苗过程，平均每个牡蛎壳采苗30个，共采集咬齿牡蛎稚贝1800万个；
g、子代培育：随着稚贝不断长大，不断增加饵料投喂量，满足稚贝摄食需求；期间，微冲气、不换水，只投饵料；大约再经过20d培育，稚贝生长至3-5mm，将其转移至室外进行子代中间育成。
实施例3
a、亲本采集：于2022年5月9日在深圳东涌头采集壳高3-7cm的咬齿牡蛎样品830个，根据其外部形态特征，初步确定是咬齿牡蛎。同时，利用COI序列(夏建军，2008)进行了分析，发现这个794个个体为咬齿牡蛎，19个个体为缘齿牡蛎、11个个体为僧帽牡蛎、6个葡萄牙牡蛎，以确定好身份的咬齿牡蛎作为亲本基础群；
b、亲本驯化：鉴定好的794个亲本，利用空运模式至漳州市瑞和水产养殖有限公司的生态土池中，温度控制在27-30℃，盐度控制在27-28ppt；饵料量根据摄食量而定，原则是每次投喂前培育池水变清澈；每天对所有亲本进行检查，个别死亡个体即使清除掉；
c、配子获取：在亲本驯化过程中，定期观察亲本性腺发育情况，经过20天的培育，发现其卵子深黄色，大小在40-45μm，精子在显微镜下活跃跳动；采用解剖法获得配子，杀取200个亲本，雌性152个，雄性48个；采用挤卵法获得卵子，平均每个个体卵量在36万个/亲本，卵子放置于温度27-28℃、盐度28ppt海水中激活50min，卵子变圆，其比率在85％；采用挤精法活得精子，精子在相应环境下激活15min，精子跳动比率达99％，备用；
d、受精孵化：配子激活好以后，将精子倒入卵液中，精子：卵子＝8-10:1，受精卵密度控制在6000个/ml；采用搅拌方法促使精卵集合，搅拌12min，发现其受精卵受精膜举起，大约68％受精卵释放出第一极体，将受精卵液倒入孵化池中，采用微冲气模式开展孵化，孵化密度控制在50个/ml；
e、幼虫培养：经过20h孵化，受精卵发育至D型幼虫，孵化率近乎100％；用350目筛绢网进行选育，选育出的D型幼虫放置于20m3水泥池中采用微冲气模式进行培育；培育期间，不换水、只投单胞藻，单胞藻投喂量根据幼虫发育及其摄食能力而定；幼虫培育密度控制在3个/ml；
f、适时采苗：经过18d培育，幼虫经过壳顶前期、壳顶中期、壳顶后期阶段幼虫发育至眼点幼虫，当眼点幼虫比率达到50％时，投放12万条水泥结附着基，进行人工采苗；投放后，大约经过7d，浮游幼虫附着变态，完成人工采苗过程，平均每条水泥结300个，共采集咬齿牡蛎稚贝3600万个；
g、子代培育：随着稚贝不断长大，不断增加饵料投喂量，满足稚贝摄食需求；期间，微冲气、不换水，只投饵料；大约再经过15d培育，稚贝生长至3-5mm，将其转移至室外进行子代中间育成。

Claims (5)

1.一种岛礁型咬齿牡蛎Saccostrea mordax的人工繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：
a、亲本采集：选择壳高在3cm以上咬齿牡蛎个体作为亲本，所有样品，首先经过形态学确认，之后进行分子生物学检测，确保使用亲本准确度达100％；
b、亲本驯化：鉴定好的亲本，采用生态土池或者室内水泥池开展人工驯化，包括温度、盐度适应性调整；再就是对饵料量投入由少到多，防止饵料过多导致亲本死亡；
c、配子获取：在亲本驯化过程中，定期观察亲本性腺发育情况，当其卵子深黄色，大小40-45μm，精子在显微镜下活跃跳动；即可以采用解剖法获得配子，卵子放置于温度26-30℃、盐度27-28ppt海水中激活30-60min，卵子变圆，其比率在70％以上，精子在相应环境下激活10-15min，精子跳动比率达90％以上，方可使用；
d、受精孵化：受精过程中，将精子倒入卵液中，精子：卵子＝8-10:1，受精卵密度控制在5000-6000个/ml；采用搅拌方法促使精卵集合，搅拌10-20min，当其受精卵受精膜举起，释放出第一极体后，将受精卵液倒入孵化池中，采用微冲气模式开展孵化，孵化密度控制在30-50个/ml；
e、幼虫培养：经过18-24h孵化，受精卵发育至D型幼虫，选育出的D型幼虫放置于水泥池中采用微冲气模式进行培育；培育期间，不换水、只投单胞藻，单胞藻投喂量根据幼虫发育及其摄食能力而定；培育密度控制在3-5个/ml；
f、适时采苗：当幼虫经过15-20d培育，经过壳顶前期、壳顶中期、壳顶后期幼虫发育至眼点幼虫，当眼点幼虫比率达到50％以上时，投放附着基，进行人工采苗，附着基投放量根据眼点幼虫数量而定；投放后，经过5-7天，浮游幼虫附着变态，完成人工采苗过程；
g、子代培育：随着稚贝不断长大，不断增加饵料投喂量，满足稚贝摄食需求；期间，微冲气、不换水，只投饵料；再经过15-20d培育，稚贝生长至3-5mm，将其转移至室外进行子代中间育成。
2.根据权利要求1所述的人工繁育方法，其特征在于，所述亲本采集地点为南海岛礁潮间带或者潮上带。
3.根据权利要求1所述的人工繁育方法，其特征在于，所述的亲本驯化，温度、盐度适应性调整是温度控制在27-30℃，盐度控制在27-28ppt，饵料量根据摄食量而定，原则是每次投喂前培育池水变清澈。
4.根据权利要求1所述的人工繁育方法，其特征在于，所述的选育出的D型幼虫是用350目筛绢网进行选育。
5.根据权利要求1所述的人工繁育方法，其特征在于，所述的附着基是牡蛎壳、水泥制品。
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