CN115998779B - 一种海蒿子多酚提取物及其制备方法和应用 - Google Patents
一种海蒿子多酚提取物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115998779B CN115998779B CN202310078169.8A CN202310078169A CN115998779B CN 115998779 B CN115998779 B CN 115998779B CN 202310078169 A CN202310078169 A CN 202310078169A CN 115998779 B CN115998779 B CN 115998779B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sargassum pallidum
- polyphenol
- polyphenol extract
- sargassum
- pallidum
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 title claims abstract description 114
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 title claims abstract description 113
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title description 5
- 235000017519 Artemisia princeps Nutrition 0.000 title description 4
- 244000065027 Artemisia princeps Species 0.000 title description 4
- 241000220690 Sargassum pallidum Species 0.000 claims abstract description 94
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 claims abstract description 19
- 241000199919 Phaeophyceae Species 0.000 claims abstract description 16
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 10
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 21
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 21
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 16
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 claims description 15
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 15
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 13
- 102000004317 Lyases Human genes 0.000 claims description 12
- 108090000856 Lyases Proteins 0.000 claims description 12
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 10
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 9
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 8
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 5
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 5
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 4
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 4
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 claims description 4
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 abstract description 15
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 abstract description 12
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 abstract description 10
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 abstract description 10
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 abstract description 9
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 abstract description 9
- 208000012671 Gastrointestinal haemorrhages Diseases 0.000 abstract description 9
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 abstract description 9
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 abstract description 9
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 abstract description 9
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 abstract description 9
- 208000035861 hematochezia Diseases 0.000 abstract description 9
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 abstract description 7
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 abstract description 7
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 abstract description 6
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 abstract description 5
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 abstract description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 28
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 21
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 13
- 235000001405 Artemisia annua Nutrition 0.000 description 12
- 240000000011 Artemisia annua Species 0.000 description 12
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 9
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 8
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 8
- 229920003045 dextran sodium sulfate Polymers 0.000 description 8
- QCDYQQDYXPDABM-UHFFFAOYSA-N phloroglucinol Chemical compound OC1=CC(O)=CC(O)=C1 QCDYQQDYXPDABM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 6
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 5
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 5
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 4
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 4
- JPYHHZQJCSQRJY-UHFFFAOYSA-N Phloroglucinol Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCCC(=O)C1=C(O)C=C(O)C=C1O JPYHHZQJCSQRJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 4
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 229960001553 phloroglucinol Drugs 0.000 description 4
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 4
- 238000002390 rotary evaporation Methods 0.000 description 4
- 239000004576 sand Substances 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical group CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 3
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 3
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 235000013325 dietary fiber Nutrition 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 description 3
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 description 3
- 210000002175 goblet cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 3
- 229920001339 phlorotannin Polymers 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- LWRSYTXEQUUTKW-UHFFFAOYSA-N 2,4-dimethoxybenzaldehyde Chemical compound COC1=CC=C(C=O)C(OC)=C1 LWRSYTXEQUUTKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N N-Vinyl-2-pyrrolidone Chemical compound C=CN1CCCC1=O WHNWPMSKXPGLAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L calcium sulfate Chemical compound [Ca+2].[O-]S([O-])(=O)=O OSGAYBCDTDRGGQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- -1 caraway polyphenol Chemical class 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 229940121657 clinical drug Drugs 0.000 description 2
- 230000000112 colonic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 230000009266 disease activity Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 2
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 2
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 2
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000006072 paste Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 2
- 238000004885 tandem mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 2
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 2
- NUIURNJTPRWVAP-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dimethylbenzidine Chemical compound C1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=CC=2)=C1 NUIURNJTPRWVAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 4-aminosalicylic acid Chemical compound NC1=CC=C(C(O)=O)C(O)=C1 WUBBRNOQWQTFEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 6,7-dimethyl-3-[[methyl-[2-[methyl-[[1-[3-(trifluoromethyl)phenyl]indol-3-yl]methyl]amino]ethyl]amino]methyl]chromen-4-one;dihydrochloride Chemical compound Cl.Cl.C=1OC2=CC(C)=C(C)C=C2C(=O)C=1CN(C)CCN(C)CC(C1=CC=CC=C11)=CN1C1=CC=CC(C(F)(F)F)=C1 GOZMBJCYMQQACI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 235000005747 Carum carvi Nutrition 0.000 description 1
- 240000000467 Carum carvi Species 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 229920002138 Eckol Polymers 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 229930189724 Fucophlorethol Natural products 0.000 description 1
- 229920000966 Fucophlorethol A Polymers 0.000 description 1
- 206010018498 Goitre Diseases 0.000 description 1
- 229920002488 Hemicellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010062717 Increased upper airway secretion Diseases 0.000 description 1
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 1
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N Magnesium oxide Chemical compound [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- UGJBHEZMOKVTIM-UHFFFAOYSA-N N-formylglycine Chemical compound OC(=O)CNC=O UGJBHEZMOKVTIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 208000004880 Polyuria Diseases 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 206010038063 Rectal haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 241000195474 Sargassum Species 0.000 description 1
- 241000264279 Sargassum fusiforme Species 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 229960004909 aminosalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000767 anti-ulcer Effects 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- FUFJGUQYACFECW-UHFFFAOYSA-L calcium hydrogenphosphate Chemical compound [Ca+2].OP([O-])([O-])=O FUFJGUQYACFECW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 229960000913 crospovidone Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 235000019700 dicalcium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000035619 diuresis Effects 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 238000000132 electrospray ionisation Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000000834 fixative Substances 0.000 description 1
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 1
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 1
- HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N formic acid;hydrate Chemical compound O.OC=O HQVFCQRVQFYGRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000762 glandular Effects 0.000 description 1
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 201000003872 goiter Diseases 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229960003943 hypromellose Drugs 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229960003444 immunosuppressant agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001861 immunosuppressant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 1
- 239000008274 jelly Substances 0.000 description 1
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 1
- 229920005610 lignin Polymers 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008297 liquid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 201000007227 lymph node tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- KBOPZPXVLCULAV-UHFFFAOYSA-N mesalamine Chemical compound NC1=CC=C(O)C(C(O)=O)=C1 KBOPZPXVLCULAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004963 mesalazine Drugs 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 238000000465 moulding Methods 0.000 description 1
- 239000002417 nutraceutical Substances 0.000 description 1
- 235000021436 nutraceutical agent Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000008807 pathological lesion Effects 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 150000007965 phenolic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000009048 phenolic acids Nutrition 0.000 description 1
- 208000026435 phlegm Diseases 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000004810 polytetrafluoroethylene Substances 0.000 description 1
- 229920001343 polytetrafluoroethylene Polymers 0.000 description 1
- 235000013809 polyvinylpolypyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000523 polyvinylpolypyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 229940069328 povidone Drugs 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 208000037922 refractory disease Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 208000026775 severe diarrhea Diseases 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007909 solid dosage form Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 210000004876 tela submucosa Anatomy 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 208000037816 tissue injury Diseases 0.000 description 1
- 239000003440 toxic substance Substances 0.000 description 1
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明属于天然药物制备技术领域，具体涉及一种海蒿子多酚提取物及其制备方法和应用。该海蒿子多酚提取物的总酚含量为70gGAE/100g‑80gGAE/100g，其中褐藻多酚含量10gPE/100g‑20gPE/100g。该海蒿子多酚提取物能够有效改善溃疡性结肠炎的症状，包括体重降低、腹泻和便血等情况；能够通过调节炎症因子TNF‑α，IL‑1β，INF‑γ以及IL‑10，缓解炎症症状和减轻肠道症状。
Description
技术领域
本发明属于天然药物制备技术领域，具体涉及一种海蒿子多酚提取物及其制备方法和应用。
背景技术
溃疡性结肠炎(ulcerative colitis，UC)是一种以侵犯大肠黏膜和黏膜下层为主的炎症性肠病，主要表现为反复强烈的腹痛、腹泻、直肠出血和便血。UC患者中80%会慢性复发，中度至重度UC患者约占50%以上，患病30年后癌变风险可能高达10%以上，是一种高风险、难治愈的“顽固”疾病。近年来其患病率在世界范围内呈逐年增长并偏向年轻化的趋势。以我国为例，2019年患病人数约40.0万人，预计将在2024年上升至约58.67万人，到2030年达到91.8万人。
目前UC尚无治愈方法，如没有出现危重症的病情恶化，大多数患者需终身服药。目前临床上的治疗方法主要有糖皮质激素、免疫抑制剂和氨基水杨酸等，虽然能在一定程度上缓解病情，然而副作用较大，而且长期服用具有一定的依赖性，严重影响患者的生活质量。
因此，亟需研发一种新型的用于改善溃疡性结肠炎的制剂。
发明内容
针对以上问题，本发明提供一种海蒿子多酚提取物，其可以有效改善溃疡性结肠炎的症状，包括体重降低、腹泻和便血等情况；能够通过调节炎症因子TNF-α，IL-1β，INF-γ以及IL-10，缓解炎症症状和减轻肠道症状。
为了达到上述目的，本发明可以采用以下技术方案：
本发明一方面提供一种海蒿子多酚提取物，其总酚含量为70 gGAE/100g-80gGAE/100g，其中褐藻多酚含量10 gPE/100g-20 gPE /100g。
本发明另一方面提供一种上述的海蒿子多酚提取物的制备方法，其包括：将海蒿子、乙醇水溶液和复合酶混合水解，离心分离得上清液，上清液浓缩得到海蒿子多酚提取物；复合酶由纤维素酶和褐藻胶裂解酶组成。
本发明再一方面提供一种药物组合物，包括上述的海蒿子多酚提取物。
本发明再一方面提供一种制剂，其包括上述的海蒿子多酚提取物或上述的药物组合物；和可药用或可食用载体。
本发明再一方面提供一种上述的海蒿子多酚提取物或上述的药物组合物在制备用于改善溃疡性结肠炎的制剂中的应用。
本发明有益效果包括：
（1）本发明提供的海蒿子多酚提取物能够有效改善溃疡性结肠炎的症状，包括体重降低、腹泻和便血等情况；能够通过调节炎症因子TNF-α，IL-1β，INF-γ以及IL-10，缓解炎症症状和减轻肠道症状；
（2）本发明提供的海蒿子多酚提取物的制备方法摒弃了常用的酸法和碱法水解制备结合态多酚，采用纤维素酶和褐藻胶裂解酶复合酶作用，使与纤维素、褐藻胶等膳食纤维结合的糖苷结合多酚充分释放，同时由于纤维素酶对细胞壁的破坏作用，可以促进游离态多酚更容易释放出来，有效提升海蒿子多酚的提取率，且对环境友好。
附图说明
图1为不同处理组小鼠体重的变化曲线；
图2为不同处理组小鼠的DAI评分；
图3为不同处理组小鼠的结肠长度；
图4为不同处理组小鼠结肠切片组织的HE染色和AB染色代表性图；
图5为不同处理组小鼠结肠切片组织的评分；
图6为不同处理组小鼠结肠的粘膜层相对面积；
图7为不同处理组小鼠TNF-α含量的变化；
图8为不同处理组小鼠IL-1β含量的变化；
图9为不同处理组小鼠INF-γ含量的变化；
图10为不同处理组小鼠IL-10含量的变化；
其中，图1-图3中，NC为对照组，MC为模型组，MES为阳性组，L-PT为低剂量组，H-PT为高剂量组。
具体实施方式
所举实施例是为了更好地对本发明进行说明，但并不是本发明的内容仅局限于所举实施例。所以熟悉本领域的技术人员根据上述发明内容对实施方案进行非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
本文中使用的术语仅用于描述特定实施例，并且无意于限制本公开。除非在上下文中具有明显不同的含义，否则单数形式的表达包括复数形式的表达。如本文所使用的，应当理解，诸如“包括”、“具有”、“包含”之类的术语旨在指示特征、数字、操作、组件、零件、元件、材料或组合的存在。在说明书中公开了本发明的术语，并且不旨在排除可能存在或可以添加一个或多个其他特征、数字、操作、组件、部件、元件、材料或其组合的可能性。如在此使用的，根据情况，“/”可以被解释为“和”或“或”。
本发明中的术语“制剂”不仅仅指药物，还包括食品和保健品等。
本发明实施例提供一种海蒿子多酚提取物，其总酚含量为70 gGAE/100g-80gGAE/100g，其中褐藻多酚含量10 gPE/100g-20 gPE /100g。在一些具体实施例中，本发明实施例提供的海蒿子多酚提取物的总酚含量可以为70 gGAE/100g-80 gGAE/100g，比如72gGAE/100g、75gGAE/100g或78gGAE/100g等；褐藻多酚含量可以为10 gPE/100g-20 gPE /100g，比如13 gPE/100g、15 gPE/100g或18 gPE/100g等。
需要说明的是，gGAE/100g是指每100g提取物的没食子酸当量（g），更具体的，每100g提取物的多酚含量相当于的没食子酸质量（g）；gPE/100g是指每100g提取物的间苯三酚当量（g），更具体的，每100g提取物的褐藻多酚含量相当于的间苯三酚质量（g）。
需要说明的是，海蒿子（Sargassum pallidum）是多年生褐藻，藻体直立，呈褐色。广泛分布于日本、我国山东和辽宁等沿海地区，是一种即可食用又可药用的植物。传统药理表明其味苦，性寒。有软坚散结，消痰利水的功能，可用于治疗瘰疬，瘿瘤，积聚，水肿等症。现代药理研究表明有抗溃疡，抗肿瘤，降血糖，降血脂，镇咳平喘，提高免疫功能，降压，解热，镇痛等作用。海蒿子中含有多糖、膳食纤维、多酚等功能成分，其中多酚已证实具有抗氧化、抗炎、抗辐射和抗癌等功效。多酚作为植物体中重要次级代谢产物，以游离态和结合态形式存在，其中约35%-65%的酚类物质与细胞壁结构成分（如纤维素、半纤维素）、木质素、果胶和结构蛋白等物质共价结合，难以通过普通物理方法或化学溶剂萃取。海蒿子中含有大量褐藻胶、纤维素，且已有研究发现存在大量糖苷结合酚，其含量高于游离态多酚。目前还没有海蒿子多酚在治疗结肠炎方面的应用，也尚未对其多酚成分进行具体报道。
本发明另一实施例提供一种上述的海蒿子多酚提取物的制备方法，其包括：将海蒿子、乙醇水溶液和复合酶混合水解，离心分离得上清液，上清液浓缩得到海蒿子多酚提取物；复合酶由纤维素酶和褐藻胶裂解酶组成。
需要说明的是，本发明实施例的海蒿子多酚提取物的制备方法中，摒弃了常用的酸法和碱法水解制备结合态多酚，采用纤维素酶和褐藻胶裂解酶复合酶作用，使与纤维素、褐藻胶等膳食纤维结合的糖苷结合多酚充分释放，同时由于纤维素酶对细胞壁的破坏作用，可以促进游离态多酚更容易释放出来，有效提升海蒿子多酚的提取率，且对环境友好。
在一些具体实施例中，上述海蒿子多酚提取物的制备方法中，纤维素酶和褐藻胶裂解酶的质量比为1:（1-3）。需要说明的是，上述复合酶中的两种酶的比例会对水解效果产生一定影响，本发明实施例中，优选纤维素酶和褐藻胶裂解酶的质量比为1:（1-3），比如1:1.5、1:2或1:2.5等；再优选地，纤维素酶和褐藻胶裂解酶的质量比为1:3。
在一些具体实施例中，上述海蒿子多酚提取物的制备方法中，水解过程中使用超声进行辅助。需要说明的是，酶解时采用超声波辅助，减小海蒿子颗粒粒径，增加固相和液相之间的表面接触面积，减少海蒿子多酚的提取时间。
在一些具体实施例中，上述海蒿子多酚提取物的制备方法中，超声的功率可以为200 W -400W，比如250 W、300W或350W等；超声的温度可以为30℃-50 ℃，比如35℃、40℃或45℃等；超声酶解的时间可以为0.5 h -2 h，比如1h、1.5h或1.8h等。
在一些具体实施例中，上述海蒿子多酚提取物的制备方法中，乙醇水溶液的质量浓度可以为40%-60%，比如45%、50%或55%等。另外，乙醇水溶液与海蒿子的液料比为30:1(mL/g)-50:1(mL/g)，比如35:1、40:1或45:1等；另外，体系的pH可以为5.0-6.0。还需要说明的是，在一些具体实施例中，可以先将海蒿子与乙醇水溶液混合，pH为5.0-6.0；然后加入复合酶进行搅拌均匀。
在一些具体实施例中，上述海蒿子多酚提取物的制备方法中，海蒿子优选海蒿子粉末，可以更好更均匀的分散在溶液中。在一些具体实施例中，可以将采集后的海篙子清洗去除沙粒等杂质后，冷冻干燥、粉碎后得到海篙子粉末。
在一些具体实施例中，上述海蒿子多酚提取物的制备方法中，复合酶的添加量为2U/g-8 U/g，即为按2U/g-8 U/g的比例向海蒿子加入复合酶，比如4 U/g、6 U/g或7 U/g等。
在一些具体实施例中，上述海蒿子多酚提取物的制备方法中，离心分离得上清液可以包括：在转速为4000 r/min -8000 r/min的条件下离心10min-30 min；分离上清液，收集沉淀；优选地，可以将沉淀再加入乙醇水溶液和复合酶再次微波酶解并离心分离得上清液，可以重复1-3次，然后将所有的上清液在40 ℃-45 ℃旋转蒸发减压浓缩，即得到海蒿子多酚提取液。
在一些具体实施例中，上述海蒿子多酚提取物的制备方法中，可以将制得的海蒿子多酚提取物进行纯化，包括：使用LX-158型大孔树脂洗脱纯化，分别使用蒸馏水和乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得纯化物。
需要说明的是，采用大孔树脂进一步纯化，操作简单、环保绿色、易于回收利用。同时，LX-158型具有快速高效的吸附能力和解析附能力，提高海蒿子多酚的纯度。
本发明再一方面提供一种药物组合物，包括上述的海蒿子多酚提取物。需要说明的是，可以将本发明中的海蒿子多酚提取物，不论是纯化之前的液体状的海蒿子多酚提取物还是纯化后的固体状的海蒿子多酚提取物均可以与其他活性成分联合使用组成药物组合物，进行协同增效或者叠加增效。当然，应当理解的是，选择的其他活性成分不会与海蒿子多酚提取物产生毒性物质。
本发明再一实施例提供一种制剂，其包括上述的海蒿子多酚提取物或上述的药物组合物；和可药用或可食用载体。需要说明的是，本发明实施例中，可以将上述的海蒿子多酚提取物或上述的药物组合物添加一些可药用或可食用载体（辅料）制备成各种剂型。
在一些具体实施例中，上述制剂中，可药用或可食用载体适用于固体剂型、液体剂型或膏状剂型。需要说明的是，可药用载体或可食用载体均为本领域所已知的，可以需要根据剂型进行选择，比如制备固体剂主要会使用到稀释剂（如淀粉、糊精、蔗糖或甘糖等）、吸收剂（硫酸钙、磷酸氢钙或轻质氧化镁等）、粘合剂（聚维酮、糖浆或羟丙甲纤维素等）、润湿剂（水等）或崩解剂（干淀粉、羟甲基淀粉钠或交联聚维酮等）等；比如制备液体剂主要会使用到增溶剂、助悬剂、乳化剂或着色剂等。另外，本发明实施例中的固体剂型包括但不限于片剂、颗粒剂、胶囊剂或粉剂等，比如用在药物中的药片，或者用在食品中的糖片等；液体剂型包括但不限于饮料、口服液或注射液等；膏状剂型包括但不限于软膏或果冻型等食品类型，具体剂型可以根据需要进行选择。
本发明再一实施例提供一种上述的海蒿子多酚提取物或上述的药物组合物在制备用于改善溃疡性结肠炎的制剂中的应用。需要说明的是，本发明的海蒿子多酚提取物制剂能够有效改善溃疡性结肠炎的症状，包括体重降低、腹泻和便血等情况。
在一些具体实施例中，上述应用包括：海蒿子多酚提取物或药物组合物在用于制备调节炎症因子的制剂中的应用。需要说明的是，本发明中的海蒿子多酚提取物或药物组合物能够通过调节炎症因子TNF-α、IL-1β、INF-γ以及IL-10，缓解炎症症状和减轻肠道症状，从而有效改善溃疡性结肠炎。
在一些具体实施例中，上述应用中，制剂包括药物、食品或保健品。需要说明的是，本发明中的海蒿子多酚提取物可作为溃疡性结肠炎的有效治疗药物，或作为功能性食品或保健品对其患者日常饮食结构给予适当干预，降低对临床药物的依赖性。
为了更好地理解本发明，下面结合具体示例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的示例。
一、海篙子多酚的制备
实施例1海篙子多酚的制备
S1：将采集后的海篙子清洗去除沙粒等杂质后，冷冻干燥、粉碎后得到海篙子粉末；
S2：按液料比30:1（mL/g）加入50%含有乙醇的水溶液，pH为5.0，按2U/g海蒿子粉末的比例加入纤维素酶和褐藻胶裂解酶复合酶（酶配比为1:2），搅拌均匀；
S3：在超声功率200 W，温度40 ℃条件下，超声处理0.5 h；
S4：在转速为6000 r/min的条件下离心20 min，分离上清液，收集沉淀重复S2和S3步骤1次，合并所有上清液40 ℃旋转蒸发减压浓缩，得到海蒿子多酚提取液。
采用GB/T8313-2008《福林酚试剂比色法》测定海蒿子多酚含量为80.37 mg GAE/gE，GAE/g E指的是每g海蒿子粉末中的没食子酸当量（mg）。
实施例2海篙子多酚的制备
S1：采集后的海篙子清洗去除沙粒等杂质后，冷冻干燥、粉碎后得到海篙子粉末；
S2：按液料比50:1（mL/g）加入60%含有乙醇的水溶液，pH为5.5，按3 U/g海蒿子粉末的比例加入纤维素酶和褐藻胶裂解酶复合酶（酶配比为1:3），搅拌均匀；
S3：在超声功率200W，温度30 ℃条件下，超声处理0.5 h；
S4：在转速为4000 r/min的条件下离心10 min，分离上清液，收集沉淀重复S2和S3步骤2次，合并所有上清液40 ℃旋转蒸发减压浓缩，得到海蒿子多酚提取液。
采用GB/T8313-2008《福林酚试剂比色法》测定海蒿子多酚含量为92.59 mg GAE/gE。
实施例3海篙子多酚的制备
S1：采集后的海篙子清洗去除沙粒等杂质后，冷冻干燥、粉碎后得到海篙子粉末；
S2：按液料比40:1（mL/g）加入50%含有乙醇的水溶液，pH为6.0，按8U/g海蒿子粉末的比例加入纤维素酶和褐藻胶裂解酶复合酶（酶配比为1:3），搅拌均匀；
S3：在超声功率400W，温度50 ℃条件下，超声处理2 h；
S4：在转速为8000 r/min的条件下离心30 min，分离上清液，收集沉淀重复S2和S3步骤3次，合并所有上清液40 ℃旋转蒸发减压浓缩，得到海蒿子多酚提取液；
S5：浓缩后的提取液经LX-158型大孔树脂洗脱纯化，50 mL海蒿子多酚提取液以2.5 mL/min速度上样，吸附2 h；以40%乙醇浓度3 mL/min流速进行洗脱，将洗脱液浓缩后冷冻干燥，得到海蒿子多酚提取物。
与陆地植物不同，海蒿子作为褐藻中的一种，独特地拥有以间苯三酚为结构单元的褐藻多酚，且其活性较简单多酚类更强。因此，对提取物中褐藻多酚含量也进行了定量分析。采用2,4-二甲氧基苯甲醛（DMBA）法测定其中褐藻多酚含量，具体方法如下：以间苯三酚为标准品，取500 µL不同浓度的标准液加入2.5 mL工作试剂（2%DMBA冰醋酸溶液与6%盐酸冰醋酸溶液等体积混合），30 ℃下黑暗中反应1 h后在510 nm出测定吸光值。横坐标用标准品的浓度mg PE表示，吸光度值做纵坐标，得到标准曲线：y = 17.5553x + 0.0376。待测的海蒿子多酚提取物溶解后，按上述方法测定，代入标准曲线计算海蒿子多酚提取物中褐藻多酚含量为15.06 gPE/100g。同时，采用GB/T8313-2008《福林酚试剂比色法》测定海蒿子多酚提取物中多酚含量为79.10 gGAE/100g。
实施例4海蒿子多酚提取物中多酚成分分析
取0.1g实施例3制备的海蒿子多酚粉末溶解在1 mL甲醇中，过0.22 μm PTFE膜过滤器后，进行UPLC-ESI-QTOF-MS分析。该系统由U3000 超高效液相色谱（ThermoScientific）与TripleTOF5600+质谱仪（AB SCIEX™）组成。UPLC上的色谱柱为BEH C18Column（150×2.1 mm, 1.7 µm, Waters）。流动相A为0.1%甲酸水，流动相B为乙腈，流速为0.3 mL/min，梯度洗脱。采用电喷雾电离正离子和负离子模式进行检测并通过在MS/MS模式下扫描50至1200的质量范围获得质谱。MS2数据和离子分子质量通过Massbank、Respect，GNPS进行全库检索，并与已发布的褐藻多酚质谱数据进行比对。鉴定结果如表1和表2所示，海蒿子多酚中含有2种多羟基苯酚单体、22种类黄酮、13种酚酸及其衍生物，以及5大类型的褐藻多酚（Eckols、Fuhalol、Phlorethols、Fucophlorethols、Fucols)。结果比对时发现海蒿子多酚提取物中的褐藻多酚种类与其他马尾藻属的海黍子（Sargassum muticum）、羊栖菜（Sargassum fusiforme）较为相近。
表1海蒿子多酚中鉴定的简单多酚
表2海蒿子多酚中鉴定的褐藻多酚
三、动物试验
实施例5 海蒿子多酚提取物对小鼠溃疡性结肠炎的作用
本发明实施例将实施例3制备的海蒿子多酚提取物进行对小鼠溃疡性结肠炎的作用进行验证。
（1）动物分组及给药
采购自青岛大任富城畜牧有限公司的SPF级C57BL/6雄鼠，7~8周龄，体重约22 ±2 g。小鼠适应性饲养7天后，将小鼠随机分为5组，每组8只，全程自由饮用无菌水。具体喂养情况如下：（a）正常组（NC），第1天开始连续灌胃生理盐水14天；（b）模型组（MC），第1开始连续灌胃生理盐水14天，同时第8到14天灌胃3%葡聚糖硫酸钠（DSS）；（c）阳性药物组（MES），第1天开始连续灌胃美沙拉嗪14天（520 mg/kg），同时第8到14天灌胃3% DSS；（d）低剂量组（L-PT），第1天开始连续灌海蒿子多酚14天（2 mg GAE/kg），同时第8到14天灌胃3% DSS；（e）高剂量组（H-PT），第1天开始连续灌海蒿子多酚14天（8 mg GAE/kg），同时第8到14天灌胃3%DSS。
（2）动物检测及测试
（a）疾病活动指数（DAI）评分
每天观察并记录小鼠体重、饮食饮水、粪便黏稠和便血情况。按照DAI 评分标准（如表3所示）进行评分，其中大便隐血采用邻联甲苯胺法测定。DAI＝(体质量减轻率分数+粪便性状分数+隐血程度分数)/3。
表3疾病活动指数评分标准
| 评分 | 体重下降（%） | 大便出血 | 大便性状 |
| 0 | 0 | 隐血阴性 | 正常 |
| 1 | 1-5% | 隐血阳性 | 松散成型 |
| 2 | 5-10% | 隐血强阳性 | 松散 |
| 3 | 10-15% | 肉眼可见轻微出血 | 中度腹泻 |
| 4 | >15% | 肉眼可见大量出血 | 重度腹泻 |
对实验小鼠的体重及DAI评分进行分析（图1和图2），如图1所示，建模前3天，各组体重都呈现出增长的状态，这一阶段，DSS在体内蓄积量较少不足以引发明显的症状反应；从第5天开始，饮用DSS的所有组均出现了体重下降的趋势，但从第6天起，海蒿子多酚的L-PT和H-PT组比MC组下降程度减弱，与MES组效果相当。如图2所示，NC组的DAI评分为零，是无病症状态；MC组则观察到严重的便血和腹泻的情况，DAI评分达到最大值。各受试物组小鼠在造模后期也出现了一定程度的腹泻、便血现象，但相较于MC组都有不同程度的改善。
（b）动物组织的收集与处理
于实验第14天晚上对小鼠进行断食处理，第15天进行处死、解剖，收集结肠组织，进行拍照和长度测量后，根据后续检测要求进行初步处理，如部分组织用甲醛固定液固定。
对实验小鼠的结肠进行观察及测量时，发现NC组小鼠结肠细长，无充血和水肿现象，肠腔内可见多颗成形粒状粪便；MC组小鼠结肠内含血便，长度较NC组明显缩短。将结肠长度进行统计学分析，如图3所示各受试物组小鼠结肠长度均显著大于MC组（p＜0.05），而不同受试物之间对结肠长度的改善没有显著性差异（p＞0.05），表明海蒿子多酚可改善肠炎引起的结肠缩短，且效果与MES相当。
（c）组织学评价
取固定后的各组小鼠结肠组织进行常规石蜡包埋，切片，HE和AB-PAS染色，并观察结肠绒毛、腺体结构、隐窝深度和黏液层面积等指标进行组织学评分。
对实验小鼠结肠组织分别进行HE染色和AB染色，如图4所示，NC组的染色显示大量黏液分泌，隐窝结构清晰，表面规则，杯状细胞排列整齐，腺体排列整齐，无明显的炎性区域或病理改变。相反，MC组黏液基本消失，结肠黏膜层紊乱，隐窝结构破坏严重，杯状细胞减少，有大量炎症浸润，基底淋巴细胞聚集。然而，与MC组相比，口服海蒿子多酚和MES均有效地改善了这些结肠病理损伤，表现为粘膜层的完整性增加，杯状细胞数量增加，炎症浸润减少。结合组织学评分图5和图6表明各受试物对UC导致的结肠组织损伤均有明显改善作用（p<0.05），且H-PT组改善效果最好。
（d）炎症因子检测
按照试剂盒说明书，采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）对结肠组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-10、IFN-γ进行测定。
在正常机体中，促炎因子和抑炎因子处于平衡状态，但在UC患病机体中，促炎因子的过量产生使该平衡遭到破坏，就此引发的炎症反应会推动组织损伤和病情发展。因此本实验中检测了各组小鼠结肠组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-10、IFN-γ的表达水平。如图7、图8和图9所示，MC组的促炎因子TNF-α、IL-1β和IFN-γ的表达量与NC组相比显著提高（p<0.05），受试物组表达水平与MC组相比均显著降低（p<0.05）。抑炎因子IL-10与上述三种促炎因子趋势相反（图10），MC组显著低于NC组（p<0.05），受试物组显著高于MC组（p<0.05）。结果表明海蒿子多酚可以抑制UC小鼠局部结肠组织促炎因子TNF-α、IL-1β和IFN-γ的表达，促进抑炎因子IL-10的表达。
综上所述，本发明通过建立常用于研究溃疡性结肠炎的DSS诱导急性小鼠结肠炎模型来评估本发明中海蒿子多酚的效果。主要根据一般体质量特征、DAI评分、结肠长度、结肠组织病理学评分以及炎症因子的表达水平进行评价。以上实验表明海蒿子多酚，能够有效改善溃疡性结肠炎的症状，包括体重降低、腹泻和便血等情况；能够通过调节炎症因子TNF-α，IL-1β，INF-γ以及IL-10，缓解炎症症状和减轻肠道症状。因此，海蒿子多酚提取物可以作为溃疡性结肠炎的有效治疗药物，或作为功能性食物对其患者日常饮食结构给予适当干预，降低对临床药物的依赖性。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的宗旨和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围。
Claims (6)
1.海蒿子多酚提取物，其特征在于，其总酚含量为70gGAE/100g-80gGAE/100g，其中褐藻多酚含量10gPE/100g-20gPE/100g；
其制备方法包括：将海蒿子、乙醇水溶液和复合酶混合水解，离心分离得上清液，使用LX-158型大孔树脂洗脱纯化，分别使用蒸馏水和乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到海蒿子多酚提取物；
复合酶由纤维素酶和褐藻胶裂解酶组成；纤维素酶和褐藻胶裂解酶的质量比为1:(1-3)；
所述乙醇水溶液的质量浓度为40％-60％；乙醇水溶液与海蒿子的液料比为30:1(mL/g)-50:1(mL/g)。
2.根据权利要求1所述的海蒿子多酚提取物，其特征在于，水解过程中使用超声进行辅助，超声的功率为200W-400W，超声的温度为30℃-50℃。
3.根据权利要求1所述的海蒿子多酚提取物，其特征在于，复合酶的添加量为2U/g-8U/g。
4.一种改善溃疡性结肠炎的药物组合物，包括权利要求1所述的海蒿子多酚提取物。
5.一种改善溃疡性结肠炎的制剂，其特征在于，包括权利要求1所述的海蒿子多酚提取物或权利要求4所述的药物组合物；和可药用或可食用载体。
6.权利要求1所述的海蒿子多酚提取物或权利要求4所述的药物组合物在制备用于改善溃疡性结肠炎的药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310078169.8A CN115998779B (zh) | 2023-01-16 | 2023-01-16 | 一种海蒿子多酚提取物及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310078169.8A CN115998779B (zh) | 2023-01-16 | 2023-01-16 | 一种海蒿子多酚提取物及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115998779A CN115998779A (zh) | 2023-04-25 |
| CN115998779B true CN115998779B (zh) | 2024-04-12 |
Family
ID=86037286
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310078169.8A Active CN115998779B (zh) | 2023-01-16 | 2023-01-16 | 一种海蒿子多酚提取物及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115998779B (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110295209A (zh) * | 2019-07-08 | 2019-10-01 | 山东德图农业科技有限公司 | 一种酶解马尾藻提取褐藻胶寡糖的工艺方法 |
| CN111154701A (zh) * | 2020-02-24 | 2020-05-15 | 荣成市泓派海洋生物科技有限公司 | 一种产褐藻胶裂解酶和纤维素酶的菌株及其在发酵海带中的应用 |
| KR20210005526A (ko) * | 2019-07-03 | 2021-01-14 | 주식회사 만나스 | 플로로탄닌을 유효성분으로 포함하는 장기능 개선용 조성물 및 제품 |
| CN114366760A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-19 | 江苏海洋大学 | 海蒿子多酚在制备治疗糖尿病药物中的应用及其制备方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109561711B (zh) * | 2017-04-30 | 2023-08-22 | 特里同阿盖亚创新公司 | 治疗消化道病症的方法 |
-
2023
- 2023-01-16 CN CN202310078169.8A patent/CN115998779B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20210005526A (ko) * | 2019-07-03 | 2021-01-14 | 주식회사 만나스 | 플로로탄닌을 유효성분으로 포함하는 장기능 개선용 조성물 및 제품 |
| CN110295209A (zh) * | 2019-07-08 | 2019-10-01 | 山东德图农业科技有限公司 | 一种酶解马尾藻提取褐藻胶寡糖的工艺方法 |
| CN111154701A (zh) * | 2020-02-24 | 2020-05-15 | 荣成市泓派海洋生物科技有限公司 | 一种产褐藻胶裂解酶和纤维素酶的菌株及其在发酵海带中的应用 |
| CN114366760A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-19 | 江苏海洋大学 | 海蒿子多酚在制备治疗糖尿病药物中的应用及其制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 海藻多酚功能性作用机制及其应用研究;彭雍博;罗宣;汪秋宽;宋悦凡;任丹丹;丛海花;;大连海洋大学学报;第32卷(第04期);485-490 * |
| 褐藻胶裂解酶的研究进展;罗丹丹;薛永常;;生物学杂志;第33卷(第06期);95-98 * |
| 超声辅助乙醇提取海带多酚工艺优化及抗氧化活性;苏艳玲;张谨华;;中国调味品;第45卷(第06期);174-180 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115998779A (zh) | 2023-04-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110559403A (zh) | 具有防治高尿酸血症的中药组合物及其制备方法与应用 | |
| CN115998779B (zh) | 一种海蒿子多酚提取物及其制备方法和应用 | |
| CN114989258B (zh) | 植物提取组合物在制备治疗便秘、减肥产品上的应用 | |
| CN114748518B (zh) | 含有咖啡酸酯和灯盏花素的抗肠癌的口服制剂及其制备方法 | |
| CN111714519A (zh) | 海蟑螂有机溶剂提取物的应用及组合物 | |
| AU2019100737A4 (en) | Anti-Helicobacter Pylori Traditional Chinese Medicine composition and applications | |
| JP7157253B2 (ja) | 潤腸便通の漢方薬組成物、その調製方法及びその用途 | |
| CN102145076B (zh) | 地黄及其提取物的制药用途 | |
| CN105497167A (zh) | 猫爪草在制备治疗和/或预防溃疡性结肠炎药物方面的新用途 | |
| CN107158084B (zh) | 治疗桥本氏甲状腺炎的药物组合物及其制备方法和用途 | |
| KR101647506B1 (ko) | 황련 추출물의 독성 저감화 방법, 이로부터 제조된 독성이 저감화된 생약추출물, 및 그 생약추출물을 함유하는 호흡기 질환 예방 또는 치료용 조성물 | |
| CN101804128B (zh) | 一种治疗炎症性肠病的药物组合物及该组合物在制备治疗炎症性肠病药物中的用途 | |
| CN115463164B (zh) | 麻黄根乙酸乙酯部位的制备方法及其药物和用途 | |
| CN104857070A (zh) | 一种抗肠道炎性损伤的药物组合物及其制备方法和用途 | |
| CN117683150B (zh) | 一种沙棘果皮多糖及其制备方法和用途 | |
| Min et al. | Effectiveness of Fuling (Poria) and its extracts against spleen deficiency in rats via tonifying spleen | |
| CN114601891B (zh) | 一种具有抗溃疡性结肠炎功效的组合物及其制备方法 | |
| CN114588193B (zh) | 一种含山竹活性物的组合物及其制备方法和用途 | |
| CN113713016B (zh) | 代代花在制备改善脂肪肝药物中的应用 | |
| CN116139258B (zh) | 刺梨sod在制备用于预防或治疗肠道疾病药物中的用途 | |
| CN114558026B (zh) | 半枝莲多糖在制备治疗炎症性肠病的药物中的应用 | |
| CN113057326B (zh) | 一种含猴头菇的组合物的制备方法及其应用 | |
| JP2006117566A (ja) | 糖代謝改善剤 | |
| EP3964222A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising mixture extract of coptis deltoidea and schizonepeta tenuifolia as active ingredient for prevention or treatment of inflammatory bowel disease | |
| CN108403746B (zh) | 岩藻多糖组合制剂及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20240410 Address after: Room 2003, Unit 2, Building 11, No. 29 Haier Road, Laoshan District, Qingdao City, Shandong Province, 266101 Applicant after: Qingdao Keda Future Biotechnology Co.,Ltd. Country or region after: China Applicant after: QINGDAO University OF SCIENCE AND TECHNOLOGY Address before: 266061 Songling Road, Laoshan District, Qingdao, Shandong Province, No. 99 Applicant before: QINGDAO University OF SCIENCE AND TECHNOLOGY Country or region before: China |
|
| TA01 | Transfer of patent application right |