CN115968909A - 一种生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于有害生物防治技术领域，具体涉及一种生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂及其制备方法和应用。该制剂由双炔酰菌胺和链霉菌(Streptomyces sp.)菌剂复配得到，所述链霉菌菌剂为链霉菌BJGJ‑4菌株固体发酵培养物，该BJGJ‑4菌株于2022年10月26日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M20221665。本发明提供的生物炭基烟草黑胫病高效复配杀菌制剂，对烟草黑胫病具有优异的防治效果，使用后药效持效期长，效果优异，本发明符合现代农业的发展方向，对维系健康的土壤生态环境具有一定的促进作用。

Description

一种生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于有害生物防治技术领域，具体涉及一种生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂及其制备方法和应用。

背景技术

烟草黑胫病是由烟草疫霉(Phytophthora parasitica var.nicotianae)引起的一种典型的土传病害，病原菌可在土壤中存活多年并具有累积效应，其为烟草生产上最难防治的病害之一。烟草黑胫病发生严重时可造成烟叶绝收，给烟农带来巨大的经济损失。近年来由于农业结构的调整，作物的复种指数不断提高，加之土壤保育措施不力及不合理地使用化学农药，致使烟草黑胫病等土传病危害日趋严重。此外，随着国内城镇化进程的发展，逐年提高的劳动力成本已成为制约种烟效益的重要因素之一，开发省工省药的植保新技术新产品对烟草种植业的可持续发展因此具有重要的经济意义。

烟草黑胫病病原为兼性腐生菌，主要以菌丝体和厚垣孢子在病株残体上或土壤中越冬，重病区土壤中有大量的菌源存在，并可侵染烟株的各生长阶段。目前，化学杀菌剂灌根处理是防治烟草黑胫病的重要手段，常用的杀菌剂有甲霜灵、代森锰锌、烯酰吗啉等，但化学杀菌剂在土壤中易降解、持效期短，且长期大量使用易使病原菌产生抗药性。生防菌对烟草黑胫病的速效性虽不如化学杀菌剂，但在适宜的土壤条件下可以定殖扩繁进而提高防效的持效性。由于许多化学杀菌剂杀(抑)菌谱广，因此筛选对生防菌安全性较好的化学杀菌剂并将两者进行科学复配将有助于解决植物病害防治中的速效性和持效性问题，进而提高对病害的综合防治效果。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的之一在于提供一种生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂。

本发明采用了以下技术方案：

一种生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂，该制剂由双炔酰菌胺和链霉菌(Streptomyces sp.)菌剂复配得到，所述链霉菌菌剂为链霉菌BJGJ-4菌株固体发酵培养物，该BJGJ-4菌株于2022年10月26日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M20221665。

优选的，所述制剂的配方按重量比例包括：

双炔酰菌胺(按有效物质含量)：0.042％～0.1％；

100亿cfu/g链霉菌BJGJ-4菌株固体发酵培养物：0.33％～1.32％；

植物源生物炭：6％～10％；

菌菇渣有机肥：64％～68％；

硫酸：0.06％～0.12％；

其余为水。

优选的，所述植物源生物炭的质量含水量为8～12％，pH≤10，粒径20～60目；菌菇渣有机肥的质量含水量为24～28％，粒径10～40目。

优选的，所述制剂配方按重量比例包括：

双炔酰菌胺(按有效物质含量)：0.042％；

100亿cfu/g链霉菌BJGJ-4菌株固体发酵培养物：1.32％；

植物源生物炭：7.2％；

菌菇渣有机肥：64.7％；

硫酸：0.09％；

其余为水。

本发明的目的之二在于提供一种上述生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂的制备方法，该制备方法步骤如下：

S1.将质量分数为23.4％的双炔酰菌胺悬浮剂用清水稀释溶解，得到溶解液备用；

S2.称取所需质量的植物源生物炭，用2～6％的稀硫酸水溶液喷雾进行调酸处理，控制pH≤9.0，备用；

S3.将步骤S1中溶解液均匀喷雾至S2中经过调酸处理后的植物源生物炭中，喷雾的同时进行搅拌，搅拌10～20min得到混合物，将所述混合物置于15～30℃避光及通风环境中静置2d以上，使植物源生物炭的质量含水量为24～28％，将混合物粉碎至20～60目，备用；

S4.将菌菇渣有机肥在30～50℃温度下或在避光通风环境下干燥至含水量24～28％，备用；

S5.将100亿cfu/g链霉菌BJGJ-4菌株固体发酵培养物与步骤S4中菌菇渣有机肥充分混合均匀，再加入步骤S3中粉碎的混合物，充分搅拌均匀，即得到所需的生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂。

优选的，步骤S3中，混合物在避光及通风环境中静置时，每天翻堆2～3次。

本发明还提供上述生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂的使用方法，所述生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂在烟田起垄前条施，或起垄后、烟草移栽前穴施，施用量均为60～120kg/667m²。

本发明的有益效果在于：

烟草黑胫病的发生与根际土壤微生物间的关系非常密切，土壤中有益菌群数量的减少及有害菌群数量的增加都会提高病害的发生率，研制具有较好相容性的化学农药和微生物复配杀菌制剂是有效控制烟草黑胫病及维持植烟土壤环境健康的一项重要举措。

双炔酰菌胺属酰胺类杀菌剂，对大多数由卵菌引起的叶部和果实病害均有很好的防效。双炔酰菌胺对处于萌发阶段的孢子具有较高的活性，并可抑制菌丝生长和孢子形成，可通过叶片被迅速吸收，并停留在叶表蜡质层中，对叶片起保护作用。本发明所用链霉菌(Streptomyces sp.)BJGJ-4菌株为申请人从烟草黑胫病重病田块健康烟株的根际土壤中筛选到的一种生防拮抗菌，其对烟草黑胫病菌具有较高的抑制活性，并且BJGJ-4菌株可以在烟株根际土壤中定殖扩繁。经实验验证，双炔酰菌胺与本发明使用的链霉菌BJGJ-4菌株具有良好的相容性，且双炔酰菌胺与链霉菌BJGJ-4菌株复配对环境较为友好，为研制防治烟草黑胫病的复配杀菌制剂提供了基础。

为了提高对烟草黑胫病的持续防治效果，本发明还添加生物炭、菌菇渣等原料。采用环境友好型植物源生物炭作为缓释吸附载体，其源于自然，利用生物炭的多孔隙、强吸附、性质稳定等特性，能够有效控制防病活性成分在土壤中的平稳释放，较长时间维持植物根际土壤中适宜的农药剂量，达到化学农药缓释减量的效果。另外，菌菇渣有机肥和植物源生物炭在作物移栽前兼作基肥施用，可有效提高土壤有机质含量，降低后期单独施药防治的人工成本，同时可以改善土壤理化性状，吸附钝化重金属，对作物产量和品质起到一定的提升作用。富含菌菇渣有机肥土壤还能提高链霉菌BJGJ-4菌株的定殖扩繁效果，达到持续防病的目的。

本发明提供的生物炭基烟草黑胫病复配杀菌制剂，对烟草黑胫病具有优异的防治效果，使用后药效持效期长，缓释效果优异，对于多数一年生作物一个生长季节一般只需使用一次。本发明符合现代农业的发展方向，对维系健康的土壤生态环境具有一定的促进作用。

附图说明

图1为链霉菌BJGJ-4菌株的菌落形态；

图2为链霉菌BJGJ-4菌株16S rDNA的PCR产物凝胶电泳；

图3为不同杀菌制剂处理后烟草黑胫病的病情指数；

图4为不同杀菌制剂处理对烟草黑胫病的防治效果。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明做进一步描述。

实施例1

烟草黑胫病菌拮抗菌BJGJ-4的分离、筛选及鉴定

1.烟草黑胫病菌拮抗菌的分离

从贵州省毕节地区烟草黑胫病重病田块中大量采集健康烟株的根际土壤样品，采用稀释涂布平板法对根际土壤微生物进行分离。细菌用NA固体培养基分离。真菌用PDA固体培养基分离。放线菌用改良高氏一号培养基分离。将所分离出的菌株进行编号命名和菌种保存。不纯的菌株再用平板划线法分离纯化，然后保存。

上述NA固体培养基的配方是：牛肉膏3g，蛋白胨10g，氯化钠5g，琼脂粉15～20g，蒸馏水定容至1000mL，pH＝7.2±0.2。

PDA固体培养基的配方是：马铃薯200g，琼脂15g，葡萄糖20g，蒸馏水定容至1000mL。

改良高氏一号培养基的配方是：硝酸钾1.0g，磷酸二氢钾0.5g，硫酸镁0.5g，硫酸亚铁0.01g，氯化钠0.5g，可溶性淀粉20.0g，琼脂15.0g，蒸馏水定容至1000mL，pH＝7.3±0.1。

烟草根际微生物的分离：称取烟草根际土壤样品5g，加入带玻璃珠的45mL无菌水中，静置20min，在旋转式摇床上以200r/min摇速充分振荡30min，即得土壤母液。将土壤母液按10ⁿ进行系列稀释，依次得到10^-2、10^-3、10^-4、10^-5、10^-6稀释度的土壤菌悬液。每个样品取3个连续适宜的稀释度，分别吸取不同稀释度菌悬液100μL均匀涂布于PDA培养基、NA培养基及高氏一号培养基平板上，25℃恒温条件下培养。待培养基上长出菌落时，挑取形态不同的单菌落进一步纯化。纯化后的菌株保存备用。

2.烟草黑胫病菌拮抗菌的筛选

将烟草黑胫病菌(Phytophthora parasitica var.nicotiana)在OA培养基上活化3天后，用打孔器(内径5mm)沿供试黑胫病菌菌落边缘制备菌碟备用。

OA固体培养基的配方为：燕麦30g，琼脂15g，水1000mL。

将分离得到的烟草根际土壤拮抗菌菌株在相应培养基平板上活化后，用十字交叉法在OA平板背面划线，将供试烟草黑胫病菌菌碟接种在OA平板中央，烟草根际土壤拮抗菌接在距平板中心2.5cm处，每皿接4点。同时以只接种烟草黑胫病菌的平板为对照，每处理重复3次，置于28℃培养箱中恒温培养。培养至第3天时，逐日观察记载烟草黑胫病菌菌落半径，根据菌丝生长抑制率比较各分离菌株对供试烟草黑胫病菌的抑制效果。

菌落半径＝测量菌落平均半径–2.5mm

菌丝生长抑制率(％)＝(对照菌落半径–处理菌落半径)/对照菌落半径×100

结果如下表1所示：

表1根际拮抗菌对烟草黑胫病菌的抑制效果

根据表1中抑菌活性测试结果表明，菌株BJGJ-4的抑菌活性优异，其菌饼处理3天后，对烟草黑胫病菌菌丝的抑制率为81.15％。菌株BJGJ-6和BJGJ-5也具有一定的抑菌活性，其菌饼处理3天后，对烟草黑胫病菌菌丝的抑制率分别为70.75％和58.25％。

将各菌株在相应培养基平板上活化后，制备菌悬液，在载玻片中央滴加25μL菌悬液，并与等体积烟草凝集素混匀，室温下静置0.5h，晾干，染色后在显微镜下观察反应现象。挑取出现凝集反应的菌株，获得烟草亲和性菌株。

最终选取具有烟草亲和性的BJGJ-4菌株为烟草黑胫病菌拮抗菌，将菌株BJGJ-4进行保存。保存方法为：采用固态斜面培养基在4℃保存，每半年重新转接至新的斜面培养基上，生长后继续保藏，如此连续不断。

3.BJGJ-4菌株的鉴定

(1)形态学观察：通过插片法观察菌株的形态特征。将高氏一号培养基熔化后倒板，待培养基快要凝固时，把灭菌盖玻片呈45°角插入到培养基上，再将拮抗菌BJGJ-4接到两者交接处，置于28℃培养5天后，小心抽取出盖玻片，将盖玻片无菌丝生长的一面用擦镜纸擦干净，然后小心的将其放置于载玻片上于显微镜下观察菌丝生长形态特征。

通过插片法将BJGJ-4菌株放在光学显微镜下观察可发现，其气生菌丝发达，相互交织，基内菌丝细长，分支较少，符合放线菌的形态特征；BJGJ-4菌株在高氏一号培养基上生长状况较好，如图1所示，其单菌落呈现灰白色，表面干燥、紧致，顶端圆心隆起。

(2)培养特征观察：将BJGJ-4菌株分别接入马铃薯葡萄糖(PDA)培养基、改良高氏一号、淀粉铵琼脂培养基、察氏培养基和营养琼脂培养基5种培养基上，28℃培养7天后观察发现：BJGJ-4的基内菌丝在PDA培养基上呈现深褐色，在其他4种培养基上为浅黄色或者黄色；BJGJ-4的气生菌丝在营养琼脂上呈现浅黄色，其他培养基上均为偏灰色；BJGJ-4菌株在营养琼脂上生长情况一般，而其余的培养基上其生长状况较好，见表2。

表2BJGJ-4菌株在不同培养基上的形态特征

(3)BJGJ-4菌株16S rDNA鉴定：PCR扩增选用引物序列为：

上游引物：5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'

下游引物：5'-GGYTACCTTGTTACGACTT-3'

使用PCR仪扩增后，将PCR产物进行1％的琼脂糖凝胶电泳，观察产物条带对应着DL2000 Maker条带的大概长度，并在紫外凝胶成像仪下观察拍照。结果表明，16S rDNA片段扩增后在紫外凝胶成像仪中能看到的电泳条带约在1500bp左右，参见图2。将电泳条带切下，用基因凝胶回收试剂盒回收扩增产物，产物测序结果为1459bp。

将PCR扩增产物进行16S rDNA基因测序，然后将获得的16S rDNA的部分序列复制到NCBI中，利用BLAST软件进行同源性比较，并利用DNAMAN软件的Neighbor-Joining法来构建该菌株的系统发育树。通过已经构建的放线菌BJGJ-4的16S rDNA序列系统发育树，发现BJGJ-4与Streptomyces bottropensis单独聚成一个分支，说明两者亲缘关系最近，而与诺卡氏菌属、红球菌属两个属的亲缘关系相对较远。因此，结合形态学、培养特征等可确定BJGJ-4菌株为放线菌链霉菌属(Streptomyces sp.)，BJGJ-4菌株16S rRNA基因序列见序列表。

实施例2

双炔酰菌胺和BJGJ-4菌株的相容性

1.测试方法

采用涂布平板法测定化学杀菌剂双炔酰菌胺和拮抗链霉菌BJGJ-4菌株的相容性。先将高氏一号培养基分别配制成含双炔酰菌胺浓度为0.1mg/L、1mg/L、10mg/L、50mg/L、100mg/L、500mg/L、1000mg/L的含药平板。然后，将BJGJ-4菌株接种至高氏一号液体培养基中，28℃条件下，200r/min振荡培养5天，得到BJGJ-4菌株母液。将BJGJ-4菌株母液分别稀释成10^-2、10^-3、10^-4稀释度的菌悬液，然后分别吸取不同稀释度的BJGJ-4菌悬液100μL均匀涂布于上述含药平板上，28℃恒温条件下培养，以等浓度不加杀菌剂的平板为对照。每个处理设置3次重复。72h后观察BJGJ-4菌株在含药培养基上的生长状况，并统计培养基上的菌落数，结果如表3所示。

表3双炔酰菌胺和BJGJ-4菌株的相容性

可以看出，BJGJ-4菌株在含双炔酰菌胺终浓度分别为0.1mg/L、1mg/L、10mg/L、50mg/L、100mg/L、500mg/L、1000mg/L的含药平板上基本能正常生长。将BJGJ-4菌株母液分别稀释成10^-2、10^-3稀释度后涂平板，平板上的菌落极其密集，无法计数。将BJGJ-4菌株母液稀释成10^-4时涂平板，BJGJ-4在含双炔酰菌胺终浓度为0.1mg/L、1mg/L、10mg/L、50mg/L、100mg/L、500mg/L、1000mg/L平板上的菌落数分别为239、234、240、231、238、228、231个/皿，与对照245个/皿差异不显著。由此表明，双炔酰菌胺和BJGJ-4菌株母液的相容性较好，可以在杀菌制剂中适量同时添加。

实施例3

一种生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂，该制剂由双炔酰菌胺和链霉菌BJGJ-4菌株固体发酵培养物复配得到，该制剂中还添加有植物源生物炭和菌菇渣有机肥。具体的，生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂的配方按重量比例包括：双炔酰菌胺(按有效物质含量)：0.042％～0.1％；100亿cfu/g链霉菌BJGJ-4菌株固体发酵培养物：0.33％～1.32％；植物源生物炭：6％～10％；菌菇渣有机肥：64％～68％；硫酸：0.06％～0.12％；其余为水。

在一个具体实施例中，生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂的配比为，按每生产1000kg制剂成品计算，原料包括质量分数为23.4％的双炔酰菌胺悬浮剂1.8kg，清水13.2kg，100亿cfu/g链霉菌BJGJ-4固体发酵培养物6.6kg，4％稀硫酸水溶液24kg，烟草秸秆生物炭80kg(含水量8～12％，40～60目，pH≤10.0)，菌菇渣有机肥893.4kg(含水量24％～28％，10～20目)。

上述生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂的制备方法，步骤如下：

S1.将1.8kg质量分数为23.4％的双炔酰菌胺悬浮剂用13.2kg清水稀释后，得到溶解液备用；

S2.称取80kg烟草秸秆生物炭，用24kg 4％稀硫酸水溶液喷雾进行调酸处理，控制pH≤9.0，备用；

S3.将步骤S1中溶解液均匀喷雾至S2中经过调酸处理后的烟草秸秆生物炭中，喷雾的同时进行搅拌，搅拌15min得到混合物，将混合物置于15～20℃室温、避光及通风环境中摊场干燥2天以上，摊场高度≤25cm，期间每天翻场2次，使烟草秸秆生物炭的含水量为24～28％，将混合物粉碎至20～60目，备用；

S4.将100亿cfu/g链霉菌BJGJ-4菌株固体发酵培养物6.6kg与含水量24～28％的菌菇渣有机肥893.4kg充分混合均匀15min，再加入步骤S3中粉碎的混合物，利用双卧轴强制式搅拌机以2×30r/min转速搅拌15min，得到所需的生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂，并根据需求，可直接包装为制剂成品。

实施例4

按照实施例3配方(重量)含量为基准制备三组杀菌制剂，分别作为烟草黑胫病的田间防治处理组，另设不含任何杀菌成分的炭基肥作为对照，其配方如下：

处理1(化学杀菌制剂)：生物炭基化学杀菌制剂，配方为：双炔酰菌胺占0.042％，植物源生物炭占7.2％，菌菇渣有机肥占65.7％，硫酸占0.09％，其余为水。

处理2(微生物杀菌制剂)：生物炭基微生物杀菌制剂，配方为：100亿cfu/g链霉菌BJGJ-4固体发酵培养物占0.66％，植物源生物炭占7.2％，菌菇渣有机肥占65.2％，硫酸占0.09％，其余为水。

处理3(复配杀菌制剂)：生物炭基烟草黑胫病高效杀菌制剂，配方为：双炔酰菌胺占0.042％，100亿cfu/g链霉菌BJGJ-4固体发酵培养物占0.66％，植物源生物炭占7.2％，菌菇渣有机肥占65.2％，硫酸占0.09％，其余为水。

对照(生物炭基肥)：生物炭基肥，配方为：植物源生物炭占7.2％，菌菇渣有机肥占65.7％，硫酸占0.09％，其余为水。

1.试验方法

试验在贵州省大方县烟草黑胫病常发地块进行；各处理组与对照组制剂在烟苗移栽前起垄穴施，按60g/株撒于穴内，并与穴内少许土壤搅拌均匀，防止后期烧苗，后期按正常农事操作管理。

采用随机区组设计。小区行距1.1m，株距0.55m，每个小区植烟60株。每处理重复3次。在烟草采烤前1～2周调查防治效果，详细记录每处理发病株数，并对每株进行病情分级；按GB/T 23222-2008标准进行为害分级调查，具体标准为：

0级，全株无病；1级，茎部病斑不超过茎围的1/3，或1/3以下叶片凋萎；3级，茎部病斑环绕茎围的1/3～1/2，或1/3～1/2叶片轻度凋萎，或下部少数叶片出现病斑；5级，茎部病斑超过茎围的1/2，但未全部环绕茎围，或1/3～1/2叶片凋萎；7级，茎部病斑全部环绕茎围，或2/3以上叶片凋萎；9级，植株基本枯死。

最后，计算病情指数和防治效果，计算公式分别为：

病情指数＝∑(各病级植株数×该级数值)/(调查总株数×最高病级数值)×100

防治效果(％)＝(对照病情指数－处理病情指数)/对照病情指数×100

2.试验结果

不同杀菌制剂处理后烟草黑胫病的病情指数如图3所示，可以看到，处理1、处理2、处理3和对照处理后的烟草黑胫病病情指数分别为2.96、4.38、2.28和7.78，化学杀菌制剂、微生物杀菌制剂和复配杀菌制剂处理后的病情指数均显著低于对照处理。

不同杀菌制剂处理对烟草黑胫病的防治效果如图4所示，处理1(化学杀菌制剂)、处理2(微生物杀菌制剂)、处理3(复配杀菌制剂)对烟草黑胫病的防治效果分别为61.92％、43.67％和70.64％，单一用微生物杀菌制剂处理的防治效果最低。用本发明提供的复配杀菌制剂处理后，对烟草黑胫病的防治效果显著高于单一用微生物杀菌制剂处理，效果优异。

表明本发明制备的生物炭基烟草黑胫病高效复配杀菌制剂对烟草黑胫病具有较好的防治效果，是理想的烟草黑胫病防治药剂。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂，其特征在于，该制剂由双炔酰菌胺和链霉菌(Streptomyces sp.)菌剂复配得到，所述链霉菌菌剂为链霉菌BJGJ-4菌株固体发酵培养物，该BJGJ-4菌株于2022年10月26日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M20221665。

2.如权利要求1所述的一种生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂，其特征在于，所述制剂中还添加有植物源生物炭和菌菇渣有机肥。

3.如权利要求2所述的一种生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂，其特征在于，所述制剂的配方按重量比例包括：

双炔酰菌胺：0.042％～0.1％；

100亿cfu/g链霉菌BJGJ-4菌株固体发酵培养物：0.33％～1.32％；

植物源生物炭：6％～10％；

菌菇渣有机肥：64％～68％；

硫酸：0.06％～0.12％；

其余为水。

4.如权利要求3所述的一种生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂，其特征在于，所述植物源生物炭的质量含水量在8～12％，pH≤10，粒径20～60目；菌菇渣有机肥的质量含水量在24～28％，粒径10～40目。

5.如权利要求4所述的一种生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂，其特征在于，所述制剂配方按重量比例包括：

双炔酰菌胺：0.042％；

100亿cfu/g链霉菌BJGJ-4菌株固体发酵培养物：0.66％；

植物源生物炭：7.2％；

菌菇渣有机肥：65.2％；

硫酸：0.09％；

其余为水。

6.一种如权利要求2-4任一项所述的生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂的制备方法，其特征在于，步骤如下：

S1.将质量分数为23.4％的双炔酰菌胺悬浮剂用清水稀释5～10倍，得到溶解液备用；

S2.称取所需质量的植物源生物炭，用2～6％的稀硫酸水溶液喷雾进行调酸处理，控制pH≤9.0，备用；

S3.将步骤S1中溶解液均匀喷雾至S2中经过调酸处理后的植物源生物炭中，喷雾的同时进行搅拌，搅拌10～20min得到混合物，将所述混合物置于15～30℃避光及通风环境中静置2d以上，使植物源生物炭的质量含水量为24～28％，将混合物粉碎至20～60目，备用；

S4.将菌菇渣有机肥在30～50℃温度下或在避光通风环境下干燥至含水量24～28％，备用；

S5.将100亿cfu/g链霉菌BJGJ-4菌株固体发酵培养物与步骤S4中菌菇渣有机肥充分混合均匀，再加入步骤S3中粉碎的混合物，充分搅拌均匀，即得到所需的生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤S3中，混合物在避光及通风环境中静置时，每天翻堆2～3次。

8.一种如权利要求3-4任一项所述的生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂的使用方法，其特征在于，所述生物炭基烟草黑胫病杀菌制剂在烟田起垄前条施，或起垄后、烟草移栽前穴施，施用量均为60～120kg/667m²。

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