CN115927620A - 用于进行白血病诊疗的系统 - Google Patents

用于进行白血病诊疗的系统 Download PDF

Info

Publication number
CN115927620A
CN115927620A CN202211082237.XA CN202211082237A CN115927620A CN 115927620 A CN115927620 A CN 115927620A CN 202211082237 A CN202211082237 A CN 202211082237A CN 115927620 A CN115927620 A CN 115927620A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
primer
leukemia
group
administration
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211082237.XA
Other languages
English (en)
Inventor
张超
井多辉
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hangzhou Hema Biotechnology Co ltd
Original Assignee
Hangzhou Hema Biotechnology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Hema Biotechnology Co ltd filed Critical Hangzhou Hema Biotechnology Co ltd
Priority to CN202211082237.XA priority Critical patent/CN115927620A/zh
Publication of CN115927620A publication Critical patent/CN115927620A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
    • A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
    • A01K67/0271—Chimeric vertebrates, e.g. comprising exogenous cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
    • A61K49/0008—Screening agents using (non-human) animal models or transgenic animal models or chimeric hosts, e.g. Alzheimer disease animal model, transgenic model for heart failure
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0693—Tumour cells; Cancer cells
    • C12N5/0694—Cells of blood, e.g. leukemia cells, myeloma cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2207/00—Modified animals
    • A01K2207/12—Animals modified by administration of exogenous cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2207/00—Modified animals
    • A01K2207/35—Animals modified by environmental factors, e.g. temperature, O2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2227/00—Animals characterised by species
    • A01K2227/10—Mammal
    • A01K2227/105—Murine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
    • A01K2267/00—Animals characterised by purpose
    • A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
    • A01K2267/0331—Animal model for proliferative diseases
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2509/00—Methods for the dissociation of cells, e.g. specific use of enzymes
    • C12N2509/10—Mechanical dissociation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本申请涉及用于进行白血病诊疗的系统，该系统包括：用于构建白血病患者特异性人源化疾病模型的建模模块和至少一个用于检测白血病细胞的存在和/或比例的检测模块。本申请的系统具有特异性高等的特点，可用于对患者进行个性化诊疗。

Description

用于进行白血病诊疗的系统
技术领域
本申请涉及一种疾病诊疗系统。特别是用于进行白血病诊疗的系统。该系统能够根据药物在个体特异性疾病模型中的表现而预测药物对患者的治疗效果，并通过个性化检测来追踪治疗的效果。
背景技术
白血病是一种造血系统恶性增殖性疾病，通常指因白血病细胞大量增殖、累积所引起的一类疾病。由于白血病分型和预后过程的复杂性，为了获得更好的治疗效果，对白血病的精准诊断和相应的治疗势在必行。
已有许多证据表明，标准化的化疗对大量患者无效。几乎100％的患者在被确诊患有白血病后都将首先接受标准化的化疗。以儿童白血病为例，标准化疗方案仅第一阶段就包括了使用8种化疗药物，且每种药物的给药时间都有严格规定，总疗程长达1年。化疗的成功是进行其他后续治疗的前提，例如骨髓移植。然而该标准化的化疗方案对至少约25％的白血病患儿无效，其结果便是这一人群高达85％的死亡率。造成这种情况最主要的原因，便是患者的个体差异。而标准化治疗方案无视了这种个体差异，对不同的患者个体提供相同的治疗方案。其结果必然是：无法区分联合化疗中的有效药物和无效药物；因无效化疗药物对患者身体造成巨大伤害；不能了解引起耐药性的机理；对于耐药的患者，临床上采取加大给药剂量、更高强度化疗的方法，潜在增加对患者的伤害；无法提供体现患者个体差异的治疗方案。
另一方面，检测癌细胞残留(MRD，Minimal Residual Disease)对评估治疗的效果和预测癌症复发有非常重要的作用。国际上，通常以万分之一为界，超过万分之一的癌细胞残留意味着很大的癌症复发几率。提前检测到癌细胞，意味着准确地把握病情，进行更及时的治疗，从而提高患者存活的机率。
目前，检测癌细胞残留的主要手段是采取流式细胞技术，也就是进行细胞水平的检测。细胞水平检测的精度上限仅为万分之一，并且该方法容易受到细胞分化和克隆选择的影响，稳定性不佳。此外，这种方法无法在实际临床检测上快速、稳定、高效地应用，具有很大的局限性。
发明内容
本申请提供了一种用于进行白血病诊疗的系统。本申请所提供的系统能够快速、可靠、和/或稳定地反映出白血病患者中白血病细胞的存在和/或比例。此外，本申请所提供的系统能够为后续的白血病治疗方案提供可靠的参考。本申请所提供的系统能够用于候选药物筛选。此外，本申请的系统可被用于对受试者进行个性化诊断和治疗。例如，本申请的系统和方法能够通过构建受试者特异性人源化疾病模型及伴随性检测，而为受试者推荐特异性的候选药物和治疗方案。
一方面，本申请提供了用于进行白血病诊疗的系统，所述的系统包括：a)建模模块，其用于构建受试者特异性人源化疾病模型，所述受试者为白血病患者；b)至少一个检测模块，其用于检测所述受试者中白血病细胞的存在和/或比例。所述建模模块可包括：a1)样品单元，其包含源自所述受试者的白血病细胞悬浮液，所述悬浮液中白血病细胞的密度为2x107/ml至5x107/ml；a2)辐射单元，其包含放射性处理装置，用于对适当的免疫缺陷型小鼠进行放射性处理；a3)接种单元，其用于将所述白血病细胞悬浮液接种到经所述辐射单元处理的免疫缺陷型小鼠中。所述至少一个检测模块可包括：b1)扩增单元，其包含能够特异性扩增靶标基因的试剂，以获得靶标特异性扩增产物。
在某些实施方式中，所述的系统还包括c)候选药物筛选模块。所述候选药物筛选模块可包括第一候选药物组和第二候选药物组；其中所述第一候选药物组包括选自下组的一种或多种药物：长春新碱、地塞米松、左旋天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、嘌呤核苷类衍生物、蛋白酶体抑制剂、mTOR抑制剂、达沙替尼、抗体类药物、全反式维甲酸、DNA损伤诱导剂、叶酸还原酶抑制剂、去乙酰基抑制剂、多受体酪氨酸激酶抑制剂、细胞毒性药物和维甲酰酚胺。所述第二候选药物组可包括选自下组的一种或多种药物：蛋白激酶抑制剂、细胞凋亡调节剂、DNA分解剂、细胞分裂抑制剂、MDM2类致癌基因抑制剂、抗体类药物和其他化疗药物附加剂。
在某些实施方式中，所述系统中的所述建模模块还包括a4)分离单元，所述分离单元包含单核细胞分离液，用于离心分离所述受试者的白血病细胞。
在某些实施方式中，所述系统中的所述建模模块还包括a5)T细胞去除单元，其用于去除源自非T细胞型白血病受试者的样品中的T细胞，从而得到所述白血病细胞悬浮液。
在某些实施方式中，所述单核细胞分离液为Ficoll，且所述离心分离为密度梯度离心分离。
在某些实施方式中，所述白血病细胞悬浮液中包含RPMI细胞培养基。
在某些实施方式中，被去除的所述T细胞为CD3阳性T细胞。在某些实施方式中，所述T细胞去除单元含有包含CD3抗体的磁珠。在某些实施方式中，所述T细胞去除单元还包含高磁场。
在某些实施方式中，所述白血病为急性淋巴细胞性白血病，且所述免疫缺陷型小鼠为NSG小鼠。在某些实施方式中，所述白血病为急性髓性白血病，且所述免疫缺陷型小鼠为MISTRG小鼠。
在某些实施方式中，所述放射性处理装置为X射线辐射装置，且其产生的辐射剂量为200cGy至300cGy。在某些实施方式中，所述放射性处理装置为X射线辐射装置，且其产生的辐射剂量为550cGy至650cGy。
在某些实施方式中，所述系统中的所述辐射单元被设置为在预定的接种时间之前的12-24小时内对所述免疫缺陷型小鼠进行所述放射性处理。
在某些实施方式中，所述免疫缺陷型小鼠的年龄为5-7周。
在某些实施方式中，所述系统中的所述所述建模模块还包括a6)红外照射及加热单元，用于对所述免疫缺陷型小鼠进行红外灯照射及加热。
在某些实施方式中，所述系统中的所述建模模块还包括a7)监测单元，用于监测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况。在某些实施方式中，所述监测单元包括检测所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例的试剂和装置。
在某些实施方式中，所述系统中的所述建模模块还包括a8)脾脏处理单元，该脾脏处理单元包括分离元件、破碎元件及悬浮元件，当经接种的所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例至少为50％时，可通过所述分离元件分离所述小鼠的脾脏，通过所述破碎元件破碎经分离的所述小鼠的脾脏以获得脾脏细胞，并通过所述悬浮元件将所述脾脏细胞制备为所述白血病细胞悬浮液。
在某些实施方式中，所述系统中的所述建模模块还包括a9)液氮，用于冷冻储存所述白血病细胞悬浮液。
在某些实施方式中，所述候选药物筛选模块还包括监测单元，用于监测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况。在某些实施方式中，所述监测单元包括检测所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例的试剂和装置，所述监测单元可被设置为，当该比例达到1％-5％时，提示可向所述小鼠施用候选药物。
在某些实施方式中，所述监测单元包括检测所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例的试剂和装置，所述监测单元可被设置为，在药物施用后，持续监测所述huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞在所述小鼠外周血细胞中所占比例的变化，并依据该变化提示所述候选药物的效力。
在某些实施方式中，所述监测单元被设置为：当施用所述候选药物后，监测到所述huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞在所述小鼠外周血细胞中所占比例保持低于1％、并维持该比例至少2周时，则提示所述候选药物为有效。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组包括选自下组的一种或多种药物：长春新碱、地塞米松、左旋天冬酰胺酶、拓扑替康、氯法拉滨、卡非佐米、替西罗莫司、达沙替尼、硼替佐米、CD19抗体、全反式维甲酸、阿霉素、氨甲叶酸、SAHA、舒尼替尼、环磷酰胺和维甲酰酚胺。
在某些实施方式中，所述第二候选药物组中的所述蛋白激酶抑制剂包括选自下组的一种或多种药物：AZD8055、MLN0128、GSK690693、MK-2206、SAR245408、rapamycin、MLN0128、selumetinib、AZD6244、PCI-32765、ibrutinib、SGI-1776、dinaciclib、VS-4718、sorafenib、sunitinib和AZD1480。
在某些实施方式中，所述第二候选药物组中的所述细胞凋亡调节剂包括选自下组的一种或多种药物：ABT-263(navitoclax)、ABT-199(venetoclax)、LCL161和birinapant。
在某些实施方式中，所述第二候选药物组中的所述DNA分解剂包括选自下组的一种或多种药物：PR-104、cytarabine(CPX-351)、daunorubicin(Vyxeos)和temozolomide。
在某些实施方式中，所述第二候选药物组中的所述细胞分裂抑制剂包括选自下组的一种或多种药物：eribulin、ispinesib和alisertib。
在某些实施方式中，所述第二候选药物组中的所述MDM2类致癌基因抑制剂包括选自下组的一种或多种药物：MK-8242(SCH 900242)和RG7112。
在某些实施方式中，所述第二候选药物组中的所述抗体类药物包括选自下组的一种或多种药物：SAR3419。
在某些实施方式中，所述第二候选药物组中的所述其他化疗药物附加剂包括选自下组的一种或多种药物：alvespimycin，AT13387，PF-03084014，RO-4929097，MLN4924，PG11047，CX-5461,BMN-673，selinexor，bortezomib，curaxin和CBL0137。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括长春新碱，且所述长春新碱适于根据如下要求施用于所述受试者特异性人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.5mg/kg，每周施用一次且持续施用3-6周。
在某些实施方式中，其中所述第一候选药物组中包括氨甲叶酸，且所述氨甲叶酸适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为3-6mg/kg，每两周施用一次，且持续施用6-10周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括地塞米松，且所述地塞米松适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为10-20mg/kg，每日施用一次且持续施用3-6周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括阿霉素，且所述阿霉素适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过静脉注射施用，每次施用量为0.5-3mg/kg，每周施用一次且持续施用3-6周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括左旋天冬酰胺酶，且所述左旋天冬酰胺酶适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为500-2000KU/kg，每日施用一次且持续施用3-6周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括拓扑替康，且所述拓扑替康适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.1-5mg/kg，每日施用一次且持续施用2-8周，给药两周后停药一周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括氯法拉滨，且所述氯法拉滨适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为10-100mg/kg，每日施用一次且持续施用3-6周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括卡非佐米，且所述卡非佐米适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过静脉注射施用，每次施用量为0.1-10mg/kg，每周施用二次且持续施用3-6周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括替西罗莫司，且所述替西罗莫司适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为5-50mg/kg，每日施用一次且持续施用1-3周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括达沙替尼，且所述达沙替尼适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过口服施用，每次施用量为5-50mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括硼替佐米，且所述硼替佐米适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.1-20mg/kg，每周施用二次且持续施用4-8周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括SAR3419，且所述SAR3419适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.5-50mg/kg，每周施用一次且持续施用4-8周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括全反式维甲酸，且所述全反式维甲酸适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.5-10mg/kg，每周施用一次且持续施用2-6周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括SAHA，且所述SAHA适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为100-500mg/kg，每日施用一次且持续施用3-6周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括舒尼替尼，且所述舒尼替尼适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过口服施用，每次施用量为10-100mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括环磷酰胺，且所述环磷酰胺适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为30-300mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周。
在某些实施方式中，所述第一候选药物组中包括维甲酰酚胺，且所述维甲酰酚胺适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为20-200mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周。
在某些实施方式中，所述白血病包括B细胞急性淋巴细胞白血病和/或T细胞急性淋巴细胞白血病。
在某些实施方式中，所述靶标基因包括选自下组的一种或多种基因、其片段或其变体：IgH、IgK、T细胞受体A、T细胞受体D、T细胞受体B、T细胞受体G和Tal 1。
在某些实施方式中，所述靶标基因包括IgH基因重排，且所述能够特异性扩增靶标基因的试剂包括选自下述的一组或多组引物组合：1)正向引物：VH1/7，反向引物：JH cons；2)正向引物：VH2，反向引物：JH cons；3)正向引物：VH3，反向引物：JH cons；4)正向引物：VH4，反向引物：JH cons；5)正向引物：VH5，反向引物：JH cons；6)正向引物：VH6，反向引物：JH cons；7)正向引物：DH1、DH4、DH5及DH7，反向引物：JH cons；8)正向引物：DH2，反向引物：JH cons；9)正向引物：DH3，反向引物：JH cons；和10)正向引物：DH6，反向引物：JH cons。
在某些实施方式中，所述引物JH cons包含选自下组的序列：SEQ ID NO.19所示的序列；和SEQ ID NO.20所示的序列。在某些实施方式中，所述引物VH1/7包含选自下组的序列：SEQ ID NO.1所示、SEQ ID NO.2所示和SEQ ID NO.3所示的序列。在某些实施方式中，所述引物VH2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.4所示、SEQ ID NO.5所示和SEQ ID NO.6所示的序列。在某些实施方式中，所述引物VH3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.7所示、SEQ IDNO.8所示和SEQ ID NO.9所示的序列。在某些实施方式中，所述引物VH4包含选自下组的序列：SEQ ID NO.10所示、SEQ ID NO.11所示和SEQ ID NO.12所示的序列。在某些实施方式中，所述引物VH5包含选自下组的序列：SEQ ID NO.13所示、SEQ ID NO.14所示和SEQ IDNO.15所示的序列。在某些实施方式中，所述引物VH6包含选自下组的序列：SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17所示和SEQ ID NO.18所示的序列。在某些实施方式中，所述引物DH1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.21所示和SEQ ID NO.22所示的序列。在某些实施方式中，所述引物DH2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.23所示和SEQ ID NO.24所示的序列。在某些实施方式中，所述引物DH3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.25所示和SEQ ID NO.26所示的序列。在某些实施方式中，所述引物DH4包含选自下组的序列：SEQ ID NO.27所示和SEQ ID NO.28所示的序列。在某些实施方式中，所述引物DH5包含选自下组的序列：SEQ ID NO.29所示和SEQID NO.30所示的序列。在某些实施方式中，所述引物DH6包含选自下组的序列：SEQ IDNO.31所示和SEQ ID NO.32所示的序列。在某些实施方式中，所述引物DH7包含选自下组的序列：SEQ ID NO.33所示和SEQ ID NO.34所示的序列。
在某些实施方式中，所述靶标基因包括IgK基因重排，且所述能够特异性扩增靶标基因的试剂包括选自下述的一组或多组引物组合：1)正向引物：Vk1，反向引物：Kdel；2)正向引物：Vk2，反向引物：Kdel；3)正向引物：Vk3，反向引物：Kdel；和4)正向引物：IntronRSS，反向引物：Kdel。
在某些实施方式中，所述引物Vk1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.35所示和SEQID NO.36所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Vk2包含选自下组的序列：SEQ IDNO.37所示和SEQ ID NO.38所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Vk3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.39所示和SEQ ID NO.40所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Vk4包含选自下组的序列：SEQ ID NO.41所示和SEQ ID NO.42所示的序列。在某些实施方式中，述引物Intron RSS包含选自下组的序列：SEQ ID NO.43所示和SEQ ID NO.44所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Kdel包含选自下组的序列：SEQ ID NO.45所示和SEQ ID NO.46所示的序列。
在某些实施方式中，所述白血病包括B细胞急性淋巴细胞白血病，所述靶标基因包括T细胞受体区域的基因重排；所述T细胞受体区域的基因包括选自下组的一个或多个：T细胞受体A、T细胞受体D、T细胞受体B和T细胞受体G；且所述能够特异性扩增靶标基因的试剂包括选自下述的一组或多组引物组合：1)正向引物：Vd2，反向引物：Dd3；2)正向引物：Dd2，反向引物：Dd3；3)正向引物：Vd2，反向引物：Ja29；4)正向引物：Vd2，反向引物：Ja9、Ja29、Ja30、Ja48、Ja49、Ja52、Ja54、Ja55、Ja56、Ja57、Ja58、Ja59和Ja61；5)正向引物：Vg1，反向引物：Jg1和Jg2；6)正向引物：Vg2，反向引物：Jg1和Jg2；7)正向引物：Vg4，反向引物：Jg1和Jg2；8)TCRB多引物组合A；9)TCRB多引物组合B；和10)TCRB多引物组合C。
在某些实施方式中，所述引物Vg1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.47所示和SEQID NO.48所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Vg2包含选自下组的序列：SEQ IDNO.49所示和SEQ ID NO.50所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Vg4包含选自下组的序列：SEQ ID NO.53所示和SEQ ID NO.54所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Jg1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.55所示和SEQ ID NO.56所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Jg2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.57所示和SEQ ID NO.58所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Vd2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.61所示和SEQ ID NO.62所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Dd2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.65所示和SEQ IDNO.66所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Dd3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.67所示和SEQ ID NO.68所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja9包含选自下组的序列：SEQID NO.71所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja29包含选自下组的序列：SEQ IDNO.72所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja30包含选自下组的序列：SEQ ID NO.73所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja48包含选自下组的序列：SEQ ID NO.74所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja49包含选自下组的序列：SEQ ID NO.75所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja52包含选自下组的序列：SEQ ID NO.76所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja54包含选自下组的序列：SEQ ID NO.77所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja55包含选自下组的序列：SEQ ID NO.78所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja56包含选自下组的序列：SEQ ID NO.79所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja57包含选自下组的序列：SEQ ID NO.80所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja58包含选自下组的序列：SEQ ID NO.81所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja59包含选自下组的序列：SEQ ID NO.82所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja61包含选自下组的序列：SEQ ID NO.83所示的序列。
在某些实施方式中，所述多引物组合A包含选自下组的一个或多个序列：SEQ IDNO.86所示、SEQ ID NO.87所示、SEQ ID NO.88所示的序列、SEQ ID NO.89所示、SEQ IDNO.90所示、SEQ ID NO.91所示、SEQ ID NO.92所示、SEQ ID NO.93所示、SEQ ID NO.94所示、SEQ ID NO.95所示、SEQ ID NO.96所示、SEQ ID NO.97所示、SEQ ID NO.98所示、SEQ IDNO.99所示、SEQ ID NO.100所示、SEQ ID NO.101所示、SEQ ID NO.102所示、SEQ ID NO.103所示、SEQ ID NO.104所示、SEQ ID NO.105所示、SEQ ID NO.106所示、SEQ ID NO.107所示、SEQ ID NO.108所示、SEQ ID NO.111所示、SEQ ID NO.112所示、SEQ ID NO.113所示、SEQID NO.114所示、SEQ ID NO.115所示、SEQ ID NO.116所示、SEQ ID NO.118、SEQ ID NO.122所示和SEQ ID NO.123所示的序列。
在某些实施方式中，所述多引物组合B包含选自下组的一个或多个序列：SEQ IDNO.86所示、SEQ ID NO.87所示、SEQ ID NO.88所示、SEQ ID NO.89所示、SEQ ID NO.90所示、SEQ ID NO.91所示、SEQ ID NO.92所示、SEQ ID NO.93所示、SEQ ID NO.94所示、SEQ IDNO.95所示、SEQ ID NO.96所示、SEQ ID NO.97所示、SEQ ID NO.98所示、SEQ ID NO.99所示、SEQ ID NO.100所示、SEQ ID NO.101所示、SEQ ID NO.102所示、SEQ ID NO.103所示、SEQ ID NO.104所示、SEQ ID NO.105所示、SEQ ID NO.106所示、SEQ ID NO.107所示、SEQID NO.108所示、SEQ ID NO.117所示、SEQ ID NO.119所示、SEQ ID NO.120所示和SEQ IDNO.121所示的序列。
在某些实施方式中，所述多引物组合C包含选自下组的一个或多个序列：SEQ IDNO.109所示、SEQ ID NO.110所示、SEQ ID NO.111所示、SEQ ID NO.112所示、SEQ IDNO.113所示、SEQ ID NO.114所示、SEQ ID NO.115所示、SEQ ID NO.116所示、SEQ IDNO.117所示、SEQ ID NO.118所示、SEQ ID NO.119所示、SEQ ID NO.120所示、SEQ IDNO.121所示、SEQ ID NO.122所示和SEQ ID NO.123所示的序列。
在某些实施方式中，所述白血病包括T细胞急性淋巴细胞白血病，所述靶标基因包括T细胞受体区域的基因重排；所述T细胞受体区域的基因包括选自下组的一个或多个：T细胞受体A、T细胞受体D、T细胞受体B和T细胞受体G；且所述能够特异性扩增靶标基因的试剂包括选自下述的一组或多组引物组合：1)正向引物：Vd1，反向引物：Jd1；2)正向引物：Vd2，反向引物：Jd1；3)正向引物：Vd3，反向引物：Jd1；4)正向引物：Vd2，反向引物：Dd3；5)正向引物：Dd2，反向引物：Dd3；6)正向引物：Dd2，反向引物：Jd1；7)正向引物：Vd2，反向引物：Ja29；8)正向引物：Vd2，反向引物：Ja9、Ja29、Ja30、Ja48、Ja49、Ja52、Ja54、Ja55、Ja56、Ja57、Ja58、Ja59和Ja61；9)正向引物：Vg1，反向引物：Jg1和Jg2；10)正向引物：Vg2，反向引物：Jg1和Jg2；11)正向引物：Vg3，反向引物：Jg1和Jg2；12)正向引物：Vg4，反向引物：Jg1和Jg2；13)正向引物：Sildb，反向引物：Taldb1；14)TCRB多引物组合A；15)TCRB多引物组合B；和16)TCRB多引物组合C。
在某些实施方式中，所述引物Vg3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.51所示和SEQID NO.52所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Vd3包含选自下组的序列：SEQ IDNO.63所示和SEQ ID NO.64所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Vg1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.47所示和SEQ ID NO.48所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Vg2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.49所示和SEQ ID NO.50所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Vg4包含选自下组的序列：SEQ ID NO.53所示和SEQ ID NO.54所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Jg1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.55所示和SEQ ID NO.56所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Jg2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.57所示和SEQ IDNO.58所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Vd2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.61所示和SEQ ID NO.62所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Dd2包含选自下组的序列：SEQID NO.65所示和SEQ ID NO.66所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Dd3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.67所示和SEQ ID NO.68所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja9包含选自下组的序列：SEQ ID NO.71所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja29包含选自下组的序列：SEQ ID NO.72所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja30包含选自下组的序列：SEQ ID NO.73所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja48包含选自下组的序列：SEQ ID NO.74所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja49包含选自下组的序列：SEQID NO.75所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja52包含选自下组的序列：SEQ IDNO.76所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja54包含选自下组的序列：SEQ ID NO.77所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja55包含选自下组的序列：SEQ ID NO.78所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja56包含选自下组的序列：SEQ ID NO.79所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja57包含选自下组的序列：SEQ ID NO.80所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja58包含选自下组的序列：SEQ ID NO.81所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja59包含选自下组的序列：SEQ ID NO.82所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Ja61包含选自下组的序列：SEQ ID NO.83所示的序列。
在某些实施方式中，所述多引物组合A包含选自下组的一个或多个序列：SEQ IDNO.86所示、SEQ ID NO.87所示、SEQ ID NO.88所示、SEQ ID NO.89所示、SEQ ID NO.90所示、SEQ ID NO.91所示、SEQ ID NO.92所示、SEQ ID NO.93所示、SEQ ID NO.94所示、SEQ IDNO.95所示、SEQ ID NO.96所示、SEQ ID NO.97所示、SEQ ID NO.98所示、SEQ ID NO.99所示、SEQ ID NO.100所示、SEQ ID NO.101所示、SEQ ID NO.102所示、SEQ ID NO.103所示、SEQ ID NO.104所示、SEQ ID NO.105所示、SEQ ID NO.106所示、SEQ ID NO.107所示、SEQID NO.108所示、SEQ ID NO.111所示、SEQ ID NO.112所示、SEQ ID NO.113所示、SEQ IDNO.114所示、SEQ ID NO.115所示、SEQ ID NO.116所示、SEQ ID NO.118所示、SEQ IDNO.122所示和SEQ ID NO.123所示的序列。
在某些实施方式中，所述多引物组合B包含选自下组的一个或多个序列：SEQ IDNO.86所示、SEQ ID NO.87所示、SEQ ID NO.88所示、SEQ ID NO.89所示、SEQ ID NO.90所示、SEQ ID NO.91所示、SEQ ID NO.92所示、SEQ ID NO.93所示、SEQ ID NO.94所示、SEQ IDNO.95所示、SEQ ID NO.96所示、SEQ ID NO.97所示、SEQ ID NO.98所示、SEQ ID NO.99所示、SEQ ID NO.100所示、SEQ ID NO.101所示、SEQ ID NO.102所示、SEQ ID NO.103所示、SEQ ID NO.104所示、SEQ ID NO.105所示、SEQ ID NO.106所示、SEQ ID NO.107所示、SEQID NO.108所示、SEQ ID NO.117所示、SEQ ID NO.119所示、SEQ ID NO.120所示和SEQ IDNO.121所示的序列。
在某些实施方式中，所述多引物组合C包含选自下组的一个或多个序列：SEQ IDNO.109所示、SEQ ID NO.110所示、SEQ ID NO.111所示、SEQ ID NO.112所示、SEQ IDNO.113所示、SEQ ID NO.114所示、SEQ ID NO.115所示、SEQ ID NO.116所示、SEQ IDNO.117所示、SEQ ID NO.118所示、SEQ ID NO.119所示、SEQ ID NO.120所示、SEQ IDNO.121所示、SEQ ID NO.122所示和SEQ ID NO.123所示的序列。
在某些实施方式中，所述引物Vd1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.59所示和SEQID NO.60所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Jd1包含选自下组的序列：SEQ IDNO.69所示和SEQ ID NO.70所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Sildb包含选自下组的序列：SEQ ID NO.84所示的序列。在某些实施方式中，所述引物Taldb1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.85所示的序列。
在某些实施方式中，所述白血病为B细胞急性淋巴细胞白血病。在某些实施方式中，所述白血病为T细胞急性淋巴细胞白血病。
在某些实施方式中，所述系统中的所述检测模块还包括鉴定单元，该鉴定单元包含用于鉴别所述靶标特异性扩增产物的试剂和装置，从而鉴别出所述靶标特异性扩增产物中源自所述受试者的白血病细胞的特征性扩增产物。
在某些实施方式中，所述鉴定单元包含对所述靶标特异性扩增产物进行凝胶电泳分离所需的试剂和装置。
在某些实施方式中，所述系统中的所述检测模块还包括分析单元，该分析单元包含用于分析所述特征性扩增产物的试剂和装置，从而获得特异于所述受试者的白血病细胞的特征性基因序列。
在某些实施方式中，所述分析单元包含对所述特征性扩增产物进行核酸测序及序列分析所需的试剂和装置。
在某些实施方式中，所述分析单元包括鉴定所述特征性扩增产物的核酸序列中保守性核酸序列及受试者特异性核酸序列所需的试剂和装置，从而获得特异于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列。
在某些实施方式中，所述系统中的所述检测模块还包括识别单元，该识别单元包含能够特异性识别和/或扩增所述受试者的所述特征性基因序列的试剂和装置，从而判断所述受试者中残留白血病细胞的存在和/或比例。
在某些实施方式中，所述识别单元包含特异性扩增特异于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列的试剂或装置。
在某些实施方式中，所述识别单元还包含与非特征性基因序列结合的探针以及能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置。
在某些实施方式中，所述非特征性基因序列包括源自下组中的一种或多种基因的核酸序列：IgH、IgK、T细胞受体A、T细胞受体D、T细胞受体B、T细胞受体G和Tal 1。
在某些实施方式中，所述非特征性基因序列包括源自IgH的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.124所示、SEQ IDNO.125所示、SEQ ID NO.126所示、SEQ ID NO.127所示、SEQ ID NO.128所示、SEQ IDNO.129所示、SEQ ID NO.130所示和SEQ ID NO.131所示的序列。在某些实施方式中，所述非特征性基因序列包括源自IgH的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.173所示、SEQ ID NO.174所示、SEQ ID NO.175所示、SEQ IDNO.176所示、SEQ ID NO.177所示、SEQ ID NO.178所示、SEQ ID NO.179所示和SEQ IDNO.180所示的序列。在某些实施方式中，所述非特征性基因序列包括源自IgK的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.132所示、SEQ ID NO.133所示、SEQ ID NO.134所示、SEQ ID NO.135所示、SEQ ID NO.136所示、SEQ ID NO.137所示、SEQ ID NO.138所示、SEQ ID NO.139所示、SEQ ID NO.140所示和SEQID NO.141所示的序列。在某些实施方式中，所述非特征性基因序列包括源自IgK的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.181所示、SEQID NO.182所示、SEQ ID NO.183所示、SEQ ID NO.184所示、SEQ ID NO.185所示、SEQ IDNO.186所示、SEQ ID NO.187所示、SEQ ID NO.188所示、SEQ ID NO.189所示和SEQ IDNO.190所示的序列。在某些实施方式中，所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体G的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ IDNO.142所示、SEQ ID NO.143所示、SEQ ID NO.144所示、SEQ ID NO.145所示、SEQ IDNO.146所示、SEQ ID NO.147所示、SEQ ID NO.148所示、SEQ ID NO.149所示、SEQ IDNO.150所示和SEQ ID NO.151所示的序列。在某些实施方式中，所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体G的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.191所示、SEQ ID NO.192所示、SEQ ID NO.193所示、SEQ ID NO.194所示、SEQ ID NO.195所示、SEQ ID NO.196所示、SEQ ID NO.197所示、SEQ ID NO.198所示、SEQID NO.199所示和SEQ ID NO.200所示的序列。在某些实施方式中，所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体D和/或T细胞受体A的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.152所示、SEQ ID NO.153所示、SEQ IDNO.154所示、SEQ ID NO.155所示、SEQ ID NO.156所示和SEQ ID NO.157所示的序列。在某些实施方式中，所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体D和/或T细胞受体A的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.201所示、SEQ IDNO.202所示、SEQ ID NO.203所示、SEQ ID NO.204所示、SEQ ID NO.205所示和SEQ IDNO.206所示的序列。在某些实施方式中，所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体B的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ IDNO.158所示、SEQ ID NO.159所示、SEQ ID NO.160所示、SEQ ID NO.161所示、SEQ IDNO.162所示、SEQ ID NO.163所示、SEQ ID NO.164所示、SEQ ID NO.165所示、SEQ IDNO.166所示、SEQ ID NO.167所示、SEQ ID NO.168所示、SEQ ID NO.169所示和SEQ IDNO.170所示的序列。在某些实施方式中，所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体B的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.207所示、SEQ ID NO.208所示、SEQ ID NO.209所示、SEQ ID NO.210所示、SEQ ID NO.211所示、SEQ ID NO.212所示、SEQ ID NO.213所示、SEQ ID NO.214所示、SEQ ID NO.215所示、SEQID NO.216所示、SEQ ID NO.217所示、SEQ ID NO.218所示和SEQ ID NO.219所示的序列。在某些实施方式中，所述非特征性基因序列包括源自Tal 1的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.171所示和SEQ ID NO.172所示的序列。在某些实施方式中，所述非特征性基因序列包括源自Tal 1的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.220所示和SEQ IDNO.221所示的序列。
在某些实施方式中，所述检测系统包括2个或2个以上的检测模块，其中至少一个检测模块用于在所述受试者接受治疗之前检测其中白血病细胞的存在和/或比例，且其中至少一个检测模块用于在所述受试者接受该治疗之后检测其中白血病细胞的存在和/或比例。
在某些实施方式中，所述检测模块包括治疗提示单元，其根据所检测的受试者中白血病细胞的存在和/或比例提示对相应受试者采用的后续治疗方案。
在某些实施方式中，当所检测的受试者中白血病细胞的比例为1/104以下时，所述治疗提示单元提示所述治疗成功且无需进行额外治疗。在某些实施方式中，当所检测的受试者中白血病细胞的比例为1/104以上时，所述治疗提示单元提示所述治疗不完善且需要进行其它治疗或提高治疗强度。在某些实施方式中，当所检测的受试者中白血病细胞的比例为1/104以上且1/103以下时，所述治疗提示单元提示可对所示受试者进行骨髓移植手术。在某些实施方式中，当所检测的受试者中白血病细胞的比例为1/103以上时，所述治疗提示单元提示不适于对所述受试者进行骨髓移植手术，且应继续对所述受试者进行其它治疗或提高治疗强度。
在某些实施方式中，所述其它治疗选自所述候选药物筛选模块的所述监测单元提示为有效的所述候选药物，或者与其功能和/或效力相仿的疗法和/或药物。
本领域技术人员能够从下文的详细描述中容易地洞察到本公开的其它方面和优势。下文的详细描述中仅显示和描述了本公开的示例性实施方式。如本领域技术人员将认识到的，本公开的内容使得本领域技术人员能够对所公开的具体实施方式进行改动而不脱离本申请所涉及发明的精神和范围。相应地，本申请的附图和说明书中的描述仅仅是示例性的，而非为限制性的。
附图说明
本申请所涉及的发明的具体特征如所附权利要求书所显示。通过参考下文中详细描述的示例性实施方式和附图能够更好地理解本申请所涉及发明的特点和优势。对附图简要说明书如下：
图1显示的是对白血病患者的血液样本进行分析的流式细胞仪分析示意图。
图2显示的是对去除了T细胞的白血病细胞进行流式细胞仪分析的示意图。
图3显示的是对滞留在筛选管中的T细胞进行流式细胞仪分析的示意图。
图4显示的是对药物效力进行评估的分级标准示意图。
图5显示的是对本申请的疾病模型进行基因表达分析的结果。
图6是检测受试者白血病细胞残留的示意图。
图7是显示受试者的白血病细胞中特异性基因表达的结果示意图。
图8是显示检测受试者白血病细胞中患者特异性DNA序列的结果示意图。
图9是通过qPCR反应检测受试者白血病细胞的结果示意图。
图10是本申请的白血病诊疗系统的操作流程示意图。
图11是本申请的白血病诊疗系统中各功能单元关系的示意图。
具体实施方式
以下由特定的具体实施例说明本申请发明的实施方式，熟悉此技术的人士可由本说明书所公开的内容容易地了解本申请发明的其他优点及效果。
在本申请中，术语“白血病”(Leukemia)通常指因白血病细胞大量增殖、累积所引起的疾病，通常起始于骨髓中。所述白血病可包括B细胞急性淋巴细胞白血病和/或T细胞急性淋巴细胞白血病。
在本申请中，术语“约”通常是指在指定数值以上或以下0.5％-10％的范围内变动，例如在指定数值以上或以下0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％、3％、3.5％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、8.5％、9％、9.5％、或10％的范围内变动。
建模模块
在本申请中，术语“建模模块”通常是指用于构建患有白血病的受试者的特异性人源化疾病模型的功能单元。例如，所述建模模块可包括包含源自所述受试者的白血病细胞悬浮液的样品单元、包含放射性处理装置的辐射单元和用于将所述白血病细胞悬浮液接种到经所述辐射单元处理的免疫缺陷型小鼠的接种单元。
例如，所述建模模块可包括获得受试者样品的样品承载装置(例如，采血针等获取样品的装置、试管等承载样品的装置)、处理受试者样品获得受试者的白血病细胞悬浮液的样品处理装置(例如，悬浮白血病细胞用的溶液和试管)；对适当的免疫缺陷型小鼠进行放射性处理的放射性处理装置(例如，放射治疗用X射线加速器)和免疫缺陷型小鼠(例如，NSG小鼠，MISTRG小鼠)；能够将白血病细胞悬液接种到经所述辐射单元处理的免疫缺陷型小鼠中的接种装置(例如，注射器等)。
所述建模模块还可以包括能够分离受试者样品的分离单元。例如，所述建模模块可包括分离细胞的试剂(例如，单核细胞分离液)、分离细胞的装置(例如，离心机)。所述建模模块还可以包括去除源自非T细胞型白血病受试者的样品中的T细胞从而得到所述白血病细胞悬浮液的T细胞去除单元。例如，所述建模模块可包括高磁场(例如，磁场强度不低于约0.05特斯拉)、CD3阳性T细胞筛选试剂(例如，被CD3单克隆抗体包被的磁珠)。所述建模模块还可以包括采用红外光源对个体进行照射的红外照射及加热单元，例如，所述建模模块可包括红外光源(例如，175瓦红外灯)。所述建模模块还可以包括监测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况的监测单元。例如，所述建模模块可包括监测经注射接种的所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例的监测装置(例如，流式细胞仪)和监测试剂(例如，抗CD45抗体、抗CD19抗体、抗CD3抗体和/或抗CD33抗体)。所述建模模块还可以包括对所述疾病模型的脾脏进行处理的脾脏处理单元。例如，所述建模模块可包括用于分离所述小鼠的脾脏的分离元件(例如，手术剪刀)、用于破碎经分离的所述小鼠的脾脏以获得脾脏细胞的破碎元件(例如，金属滤网、塑料滤网)和用于将所述脾脏细胞制备为所述白血病细胞悬浮液的悬浮元件(例如，RPMI培养基)。所述建模模块还可以包括液氮。
在本申请中，术语“受试者”通常指具有某种疾病表征的个体，所述疾病表征可以指疾病的症状，也可以指在预防性情况中不能被改变的有害的生理状态。所述个体可包括雄性和/或雌性，通常包含人或非人动物，例如非人哺乳动物。在某些实施方式中，所述个体包括但不限于人、狗、猫、马、绵羊、山羊、猪、牛、兔、大鼠、小鼠、猴等。例如，所述受试者可以为人类患者。
在本申请中，术语“受试者特异性人源化疾病模型”通常指能够体现受试者特异性的、经过人源化改造的疾病模型。例如，显示表征受试者疾病特征、通过包含和/或表达源自人体的组织、细胞和/或基因而被人源化的疾病模型。在某些实施方式中，所述受试者特异性人源化疾病模型包括受试者特异性白血病人源化小鼠模型。例如，该受试者特异性白血病人源化小鼠模型包含源自所述受试者的白血病细胞，且所述小鼠模型的外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例按细胞总数计，可以为至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、或至少约90％。
例如，所述受试者特异性人源化疾病模型(例如，白血病人源化疾病模型)可以通过如下方法制备获得：a)将来自所述受试者(例如，白血病患者)的骨髓样本制备为细胞悬液，并使用单核细胞分离液来对所述细胞悬液进行离心分离；b)获取包含白血病细胞的细胞层并制备白血病细胞悬液；c)判断所述白血病是否为T细胞型白血病；对于非T细胞型白血病，去除由b)获得的所述白血病细胞悬液中的T细胞，得到待接种的白血病细胞悬液，并使所述待接种的白血病细胞悬液中白血病细胞的终密度为2x107/ml至5x107/ml；对于T细胞型白血病，从由b)获得的所述白血病细胞悬液制备待接种的白血病细胞悬液，其中白血病细胞的终密度为2x107/ml至5x107/ml；d)根据所述患者的白血病类型选择适当的免疫缺陷型小鼠，并对所述免疫缺陷型小鼠进行放射性处理；e)将由c)获得的所述待接种的白血病细胞悬液注射接种到d)所述的经放射性处理的免疫缺陷型小鼠中。
在本申请中，术语“样品单元”通常是指包含源自受试者的样品，例如受试者白血病细胞悬浮液的功能单元。所述样品单元可以包括获得受试者样品的样品承载装置和处理受试者样品获得受试者的白血病细胞悬浮液的样品处理装置。例如，所述样品承载装置可包括获取样品的装置(例如，采血针、真空采血管、尿液收集装置、唾液收集装置、粪便收集装置等)和承载样品的装置(例如，试管、离心管等)。例如，所述样品处理装置可包括悬浮白血病细胞用的溶液(例如，含有约10％DMSO的胎牛血清溶液、CaCl2溶液)和试管。
所述样品单元可以包含源自所述受试者的白血病细胞悬浮液，所述悬浮液中白血病细胞的密度可以为1x107/ml至5x107/ml，1.5x107/ml至5x107/ml，2x107/ml至5x107/ml，2.5x107/ml至5x107/ml，3x107/ml至5x107/ml，3.5x107/ml至5x107/ml，4x107/ml至5x107/ml，4.5x107/ml至5x107/ml，4.8x107/ml至5x107/ml，4.9x107/ml至5x107/ml，2x107/ml至2.5x107/ml，2x107/ml至3x107/ml，2x107/ml至3.5x107/ml等。
在本申请中，术语“样品”通常是指可以直接或间接取自受试者的、能够从中获得白血病细胞悬浮液的用于所述样品单元的样本。在某些实施方式中，直接取自受试者的所述样品未经过进一步处理，例如，可从受试者的外周循环系统中获取血液(例如，通过采血针)。所述样品可包括例如，血液、尿液、粪便、唾液、脑脊液和汗液等。所述样品的非限制性实例包括从受试者的任何解剖学位置(例如，组织、循环系统、骨髓)获得的血液(或血液的成分—例如，白细胞、红细胞、血小板)、从受试者的任何解剖学位置获得的细胞、皮肤、心脏、肺、肾脏、呼出气、骨髓、粪便、精液、阴道液、来源于肿瘤组织的组织液、乳房、胰腺、脑脊液、组织、咽喉拭子、活检物、胎盘液、羊水、肝脏、肌肉、平滑肌、膀胱、胆囊、结肠、肠、脑、腔液、痰、脓、微生物群(micropiota)、胎粪、乳汁、前列腺、食道、甲状腺、血清、唾液、尿液、胃液和消化液、泪液、眼部液体、汗液、粘液、耳垢、油、腺体分泌物、脊髓液、毛发、指甲、皮肤细胞、血浆、鼻拭子或鼻咽洗液、脊髓液、脐带血、淋巴液和/或其他排泄物或身体组织。在某些实施方式中，所述样品为源自受试者的骨髓样本，例如，其包含受试者的骨髓细胞和/或血细胞。又例如，所述样本为白血病患者的骨髓样本，其中白血病细胞占90％以上。
在本申请中，术语“悬液”通常是指通常指一个或多个细胞被分散于液体中所形成的细胞悬浮液，其中细胞可以分开作为个体或处于由不多于约50个、不多于约40个、不多于约30个、不多于约20个、不多于约10个或更少细胞组成的团块中。
在本申请中，术语“白血病细胞”通常是指造血干细胞病态分化产生的不成熟的白细胞。例如，白血病细胞通常没有正常细胞的功能，还可以有很强的增殖能力。
在本申请中，术语“细胞密度”或“密度”通常是指细胞悬浮液中单位体积内含有的细胞的数目。例如，所述悬浮液中白血病细胞的密度可以为2x107/ml至5x107/ml，为2.5x107/ml至5x107/ml，为3x107/ml至5x107/ml，为3.5x107/ml至5x107/ml，为4x107/ml至5x107/ml，为4.5x107/ml至5x107/ml，为4.8x107/ml至5x107/ml或为4.9x107/ml至5x107/ml。
本申请中可通过使用培养基来获得细胞悬浮液，只要所述的培养基能够使该细胞正常生长即可。在某些实施方式中，所述培养基还使细胞处于悬浮的状态。例如，可使用RPMI细胞培养基制备白血病细胞悬液。又例如，可以使用DMEM培养基、IMDM培养基、HAMF12培养基、MEM培养基、199细胞培养基、MDSS2细胞培养基等。
在本申请中，术语“辐射单元”通常是指包含放射性处理装置的结构单元。例如，所述辐射单元可以为用于对适当的免疫缺陷型小鼠进行放射性处理的功能单元。
在本申请中，术语“放射性处理装置”通常是指通过能够发出射线(如α射线、β射线、γ射线、X射线等)的放射源进行照射的装置。例如，放射治疗用X射线加速器、放射治疗用电子束加速器、医用加速器、X射线深部治疗机、医用X射线CT机、重离子治疗加速器、质子治疗装置、辐照装置用加速器、中子发生器等。
在本申请中，术语“免疫缺陷性小鼠”通常是指一种或多种免疫系统组成成分存在缺陷的小鼠，这种缺陷可以是由先天性遗传突变和/或用人工方法造成的。在本申请中，所述免疫缺陷性小鼠可以为T-淋巴细胞功能缺陷小鼠、B-淋巴细胞功能缺陷小鼠、N细胞功能缺陷小鼠、联合免疫缺陷小鼠等。例如，所述的免疫缺陷小鼠可为NSG小鼠、MISTRG小鼠、裸小鼠、CBA/N小鼠、Beige小鼠、Scid小鼠等。所述免疫缺陷型小鼠的年龄可以为5-7周(例如，年龄为5-6周，年龄为5-6.5周，年龄为5.5-6.5周)，所述免疫缺陷型小鼠的年龄还可以为5-8周，5-9周，5-10周，4-10周，4-12周，3-10周，3-12周。
在本申请中，术语“NSG小鼠”通常指NOD-scid白介素2受体γ敲除的小鼠，其缺少成熟的T细胞、B细胞和自然杀伤细胞。
在本申请中，术语“MISTRG小鼠”通常指表达人巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、人白介素3(IL-3)/粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、人信号调节蛋白α(SIRPa)、人血小板生成素(TPO)及人红细胞生成素(EPO)基因，但不表达重组激活基因2(RAG2)或白介素2受体γ(IL2Rg)的小鼠。
在本申请中，当所述白血病为急性淋巴细胞性白血病时，所述免疫缺陷型小鼠可为NSG小鼠。当所述白血病为急性髓性白血病时，所述免疫缺陷型小鼠可为MISTRG小鼠。
在注射所述白血病细胞悬液之前的12-24小时(例如10-24小时，10-36小时，10-72小时，8-24小时，8-36小时，8-72小时)内对所述免疫缺陷型小鼠进行所述放射性处理。
所述放射性处理的方法可以是例如X射线辐射、γ射线辐射等。本领域技术人员可根据小鼠的种类、接种的条件等调整放射性处理的条件。例如，可采用X-射线(例如，至少1MV，至少2MV，至少3MV，至少4MV，至少5MV或更高能量的X-射线)对所述小鼠进行照射。所述X-射线的强度可以为，例如至少100cGy/分钟，至少150cGy/分钟，至少200cGy/分钟，至少250cGy/分钟，至少300cGy/分钟，至少310cGy/分钟，至少320cGy/分钟，至少325cGy/分钟，至少340cGy/分钟，至少360cGy/分钟，至少380cGy/分钟，至少400cGy/分钟或更高。进行所述放射性处理时所采用的辐射剂量可以为约50cGy至100cGy、约100cGy至150cGy、约150cGy至200cGy、约200cGy至250cGy、约250cGy至300cGy、约300cGy至350cGy、约350cGy至400cGy、约400cGy至450cGy、约450cGy至500cGy、约500cGy至550cGy、约550cGy至600cGy、约600cGy至650cGy、约650cGy至700cGy、约700cGy至750cGy、约750cGy至800cGy、约800cGy至850cGy或更高。例如，可以在注射所述白血病细胞悬液之前的约6-8小时，约8-12小时、约12-16小时、约16-20小时、约20-24小时、约24-28小时、约28-32小时或更长时间段内对所述免疫缺陷型小鼠进行所述放射性处理。
在某些实施方式中，当所述免疫缺陷型小鼠为NSG小鼠时，可使用X-射线对其进行放射性处理。辐射剂量可以为约200cGy至约300cGy，例如约250cGy。例如，可采用4MV的X-射线，且其强度为约325cGy/分钟。
在某些实施方式中，当所述免疫缺陷型小鼠为MISTRG小鼠时，可使用X-射线对其进行放射性处理。辐射剂量可以为约550cGy至约650cGy，例如约600cGy。例如，可采用4MV的X-射线，且其强度为约325cGy/分钟。
在本申请中，术语“接种单元”通常是指用于将白血病细胞悬液接种到经所述辐射单元处理的免疫缺陷型小鼠中的功能单元。例如，所述接种单元可包括接种装置，如注射设备(例如，注射器、无针注射器等)、全自动接种机等。
在本申请中，术语“接种”通常是指将待接种的细胞、溶液或试剂等通过注射装置输入到注射对象体内的过程。例如，所述待接种的细胞、溶液或试剂等可以是源自受试者的白血病细胞悬液。
所述白血病人源化疾病模型的制备方法还可包括以下的步骤：g)当经注射接种的所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例至少为50％时，使用分离单元，分离所述小鼠的脾脏，使其破碎，并使经破碎的所述脾脏的细胞悬浮于细胞培养基中，以获得来自所述脾脏的细胞悬液；h)使用单核细胞分离液来对所述来自脾脏的细胞悬液进行离心分离；i)获取包含白血病细胞的细胞层，使该细胞层中的细胞悬浮于含有10％DMSO的胎牛血清中，以制备细胞终密度为2x107/ml至5x107/ml的储备液；以及j)将由i)获得的所述储备液冷冻储存在液氮中备用。
在本申请中，术语“分离单元”通常是指利用混合物中各组分在物理性质或化学性质上的差异，通过适当的方法，使各组分分配至不同的空间区域或在不同的时间依次分配至同一空间区域的功能单元。例如，所述分离单元能够分离所述受试者的样品。所述分离单元可包括分离细胞的试剂和/或分离细胞的装置。例如，所述分离细胞的试剂可以为单核细胞分离液，例如，Ficoll。又例如，所述分离细胞的装置可以为离心机，如高速冷冻离心机、常温高速离心机、台式通用离心机等。
在本申请中，术语“单核细胞分离液”通常是指用于分离血液中单核细胞的试剂。在某些实施方式中，所述单核细胞分离液利用细胞的体积和/或形态和/或密度等差异，对单核细胞进行分离和/或纯化。例如，所述单核细胞分离液为Ficoll。又例如，所述单核细胞分离液可以为葡聚糖与泛影酸葡甲胺的水溶液、Percoll溶液等。例如，所述的分离为离心分离。所述的离心分离可以为密度梯度离心分离。
在本申请中，术语“T细胞去除单元”通常是指用于去除源自非T细胞型白血病受试者的样品中的T细胞，从而得到所述白血病细胞悬浮液的功能单元。例如，所述T细胞去除单元可包括高磁场和/或T细胞分离试剂。在某些实施方式中，被去除的所述T细胞为CD3阳性T细胞(T淋巴细胞(CD3+))。为了去除所述CD3阳性T细胞，所述T细胞去除单元还可包括CD3阳性T细胞筛选试剂。例如，所述T细胞分离试剂可包括肝素、淋巴细胞分离液、细胞培养液等。所述CD3阳性T细胞筛选试剂可包括包含CD3抗体的磁珠。例如，所述磁珠为被CD3单克隆抗体包被的磁珠。例如，所述磁珠可以为抗人CD3 mAb包被的磁珠，或者为抗CD3/抗CD28单克隆抗体包被的磁珠。在某些实施方式中，所述CD3阳性T细胞筛选试剂可为Miltenyi公司的磁珠
Figure BDA0003833762920000171
在本申请中，术语“高磁场”通常是指通常指磁场强度不低于约0.05特斯拉、不低于约0.1特斯拉、不低于约0.3特斯拉、不低于约0.5特斯拉、不低于约0.55特斯拉、不低于约0.6特斯拉、不低于约0.7特斯拉、不低于约0.8特斯拉、不低于约0.9特斯拉、不低于约1.0特斯拉、不低于约2.0特斯拉、不低于约3.0特斯拉或更高的磁场。
在本申请中，术语“去除T细胞”通常是指通过去除操作后，单核细胞群落中T细胞的比例不大于约0.5％、不大于约0.4％、不大于约0.3％、不大于约0.2％、或不大于约0.1％。
在本申请中，术语“非T细胞型白血病”通常是指如急性B细胞型白血病、急性髓细胞白血病、慢性B细胞型白血病、慢性髓细胞白血病等除T细胞型白血病以外的白血病类型。
在本申请中，术语“红外照射及加热单元”通常是指采用红外光源对个体进行照射的功能单元。例如，所述红外照射及加热单元可包括红外光源。其中，所述红外光源指波长大于红色光波长的一定范围的电磁辐射，如0.78～1000μm。所述红外光源可包括近红外、中红外或远红外光源。所述近红外光源的波长可以为0.78～1.4μm、0.78～1.3μm、0.78～1.2μm、0.78～1.1μm、0.78～1.0μm、0.78～0.9μm、0.78～0.85μm、0.78～0.8μm。所述中红外光源的波长可以是1.4～3μm、1.5～3μm、1.6～3μm、1.7～3μm、1.8～3μm、1.9～3μm、2.0～3μm、2.2～3μm、2.4～3μm、2.6～3μm、2.8～3μm、2.9～3μm。所述远红外光源的波长可以是3～1000μm、5～1000μm、7～1000μm、10～1000μm、50～1000μm、100～1000μm、200～1000μm、300～1000μm、400～1000μm、500～1000μm、600～1000μm、700～1000μm、800～1000μm、900～1000μm、950～1000μm、980～1000μm、990～1000μm。例如，所述红外光源为175瓦红外灯。
在本申请中，术语“监测单元”通常是指用于监测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况的功能单元。例如，所述监测单元可包括监测经注射接种的所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例的监测装置。例如，所述检测装置可以为流式细胞仪。又例如，所述监测单元还可包括监测经注射接种的所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例的监测试剂。例如，所述监测试剂可以为抗CD45抗体、抗CD19抗体、抗CD3抗体和/或抗CD33抗体。
在所述受试者特异性人源化疾病模型中，可监测来自所述患者的白血病细胞在所述小鼠体内的生长情况。在某些实施方式中，通过监测经注射接种的所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例来监测来自所述患者的白血病细胞在所述小鼠体内的生长情况，以使得制备获得的小鼠模型的外周血中的huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例达到所述范围(例如，细胞总数的至少约5％、至少约10％、至少约15％、至少约20％、至少约25％、至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、或至少约90％)。例如，当所述患者的白血病为B细胞型白血病时，可通过监测经注射接种的所述小鼠外周血中huCD19+细胞的比例来监测来自所述患者的白血病细胞在所述小鼠体内的生长情况。例如，当所述患者的白血病为T细胞型白血病时，可通过监测经注射接种的所述小鼠外周血中huCD3+细胞的比例来监测来自所述患者的白血病细胞在所述小鼠体内的生长情况。例如，当所述患者的白血病为髓性白血病时，可通过监测经注射接种的所述小鼠外周血中huCD33+细胞的比例来监测来自所述患者的白血病细胞在所述小鼠体内的生长情况。
在本申请中，术语“脾脏处理单元”通常是指对所述疾病模型(例如小鼠)的脾脏进行处理的功能单元。例如，当经接种的所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例至少为50％(至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、或至少约90％)时，可获得脾脏细胞，进而通过所述脾脏处理单元将脾脏细胞制备为所述白血病细胞悬浮液。所述脾脏处理单元可包括分离元件(例如，手术剪刀，结扎线，无菌漏斗等)、破碎元件(例如，超声波振荡器、高压均浆机、金属滤网、塑料滤网等)及悬浮元件(例如，RPMI培养基、含有约10％DMSO的胎牛血清溶液、CaCl2溶液)，其中所述分离元件用于分离所述小鼠的脾脏；所述破碎元件可破碎经分离的所述小鼠的脾脏以获得脾脏细胞；所述悬浮元件可将所述脾脏细胞制备为所述白血病细胞悬浮液。
在本申请中，术语“液氮”通常是指液态的氮气。
候选药物筛选模块
在本申请中，术语“候选药物筛选模块”通常是指针对所述受试者特异性人源化疾病模型，为受试者提供特异性的候选药物，从而进行精准诊断治疗的功能单元。例如，所述候选药物筛选模块可包括含有一种或多种药物的第一候选药物组、含有一种或多种药物的第二候选药物组。例如，所述候选药物筛选模块可包括长春新碱、地塞米松、左旋天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、嘌呤核苷类衍生物、蛋白酶体抑制剂、mTOR抑制剂、达沙替尼、抗体类药物、全反式维甲酸、DNA损伤诱导剂、叶酸还原酶抑制剂、去乙酰基抑制剂、多受体酪氨酸激酶抑制剂、细胞毒性药物和维甲酰酚胺。如，所述候选药物筛选模块可包括选自下组的一种或多种药物：长春新碱、地塞米松、左旋天冬酰胺酶、拓扑替康、氯法拉滨、卡非佐米、替西罗莫司、达沙替尼、硼替佐米、CD19抗体、全反式维甲酸、阿霉素、氨甲叶酸、SAHA、舒尼替尼、环磷酰胺和维甲酰酚胺中的一种或多种。又例如，所述候选药物筛选模块可包括蛋白激酶抑制剂、细胞凋亡调节剂、DNA分解剂、细胞分裂抑制剂、MDM2类致癌基因抑制剂、抗体类药物和其他化疗药物附加剂中的一种或多种。
所述候选药物筛选模块还可以包括监测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况的监测单元。因此，所述候选药物筛选模块可包括检测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况的检测元件(例如，流式细胞仪)，对所述检测元件检测到的生长情况进行判断确定所述候选药物所在等级的决策元件(例如，CPU处理器)和显示所述决策元件的等级结果的反馈元件(例如，显示器)。
在本申请中，所述候选药物筛选模块中可包括一种或多种候选药物，用于根据需要向所述受试者特异性人源化疾病模型施用。所述候选药物筛选模块中包括的各候选药物的剂量、剂型和施用方式等，根据所述候选药物本身的特点确定。
在本申请中，术语“候选药物”通常指一些可能作为药物使用的物质，这些物质可以通过适当的方法进行评估，从而获得其生物学活性、药理作用及效力等方面的信息。
在本申请中，术语“第一候选药物组”通常是指由一种或多种候选药物构成的集合，其可用于在第一阶段接受筛选。所述第一阶段可为常规化的白血病化疗阶段。所述第一候选药物组可包括常规的用于白血病化疗的药物。例如，所述第一候选药物组可包括选自下组的一种或多种药物：长春新碱、地塞米松、左旋天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、嘌呤核苷类衍生物、蛋白酶体抑制剂、mTOR抑制剂、达沙替尼、抗体类药物、全反式维甲酸、DNA损伤诱导剂、叶酸还原酶抑制剂、去乙酰基抑制剂、多受体酪氨酸激酶抑制剂、细胞毒性药物和维甲酰酚胺。在某些实施方式中，所述第一候选药物组包括选自下组的一种或多种药物：长春新碱、地塞米松、左旋天冬酰胺酶、拓扑替康、氯法拉滨、卡非佐米、替西罗莫司、达沙替尼、硼替佐米、CD19抗体、全反式维甲酸、阿霉素、氨甲叶酸、SAHA、舒尼替尼、环磷酰胺和维甲酰酚胺。
在本申请中，术语“第二候选药物组”通常是指由一种或多种候选药物构成的集合，其可用于在第二阶段接受筛选。所述第二阶段可在所述常规化的白血病化疗的第一阶段之后。所述第二候选药物组可包括选自下组的一种或多种药物：蛋白激酶抑制剂、细胞凋亡调节剂、DNA分解剂、细胞分裂抑制剂、MDM2类致癌基因抑制剂、抗体类药物和其他化疗药物附加剂。
在本申请中，术语“蛋白酶抑制剂”通常是指能够与蛋白酶分子活性中心上的一些基团结合，使蛋白酶活力下降，甚至消失，但不使蛋白酶本身变性的物质。所述蛋白酶抑制剂可以包括亮肽素、抗痛素、糜蛋白酶抑素、抑弹性蛋白酶醛、抑胃蛋白酶素、磷酰胺素。例如，所述蛋白酶抑制剂可以为包括选自下组的一种或多种药物：AZD8055、MLN0128、GSK690693、MK-2206、SAR245408、rapamycin、MLN0128、selumetinib、AZD6244、PCI-32765、ibrutinib、SGI-1776、dinaciclib、VS-4718、sorafenib、sunitinib和AZD1480。
在本申请中，术语“细胞凋亡调节剂”通常是指能够调节细胞凋亡发生和程度的物质。细胞凋亡一般指由基因控制的细胞自主的有序死亡。所述细胞凋亡调节剂可通过调节细胞核DNA的断裂情况等途径调节细胞凋亡过程。例如，所述细胞凋亡调节剂可包括选自下组的一种或多种药物：ABT-263(navitoclax)、ABT-199(venetoclax)、LCL161和birinapant。
在本申请中，术语“DNA分解剂”通常是指能够分解DNA的试剂。例如，所述试剂可通过DNA交联、修饰DNA环上的氮原子和/或环外氧基团等方式来分解DNA。例如，所述DNA分解剂可以包括选自下组的一种或多种药物：PR-104、cytarabine(CPX-351)、daunorubicin(Vyxeos)和temozolomide。
在本申请中，术语“细胞分裂抑制剂”通常是指能够抑制细胞分裂的物质。细胞分裂一般指细胞增殖过程中，经分裂而使其数量由一个细胞增加为两个或更多个细胞的过程。例如，所述细胞分裂剂可抑制FtsZ和ZipA间的相互作用。例如，所述细胞分裂抑制剂可包括选自下组的一种或多种药物：eribulin、ispinesib和alisertib。
在本申请中，术语“MDM2类致癌基因抑制剂”通常是指抑制MDM2类致癌基因表达的物质。所述MDM2类致癌基因的表达产物MDM2蛋白可与p53蛋白结合，抑制p53正常的生物学功能，导致肿瘤的发生。而p53是一种非常重要的人类肿瘤抑制基因，它具有控制DNA修复、细胞周期阻滞、细胞凋亡等功能。例如，所述MDM2类致癌基因抑制剂可包括选自下组的一种或多种药物：MK-8242(SCH 900242)和RG7112。
在本申请中，术语“抗体类药物”通常是指适于治疗白血病的抗体类药物。例如，所述抗体类药物可包括选自下组的一种或多种药物：SAR3419。
在本申请中，术语“其他化疗药物附加剂”通常是指用于在白血病化疗过程中辅助增强化疗疗效的物质。例如，所述其他化疗药物附加剂可包括选自下组的一种或多种药物：alvespimycin，AT13387，PF-03084014，RO-4929097，MLN4924，PG11047，CX-5461,BMN-673，selinexor，bortezomib，curaxin和CBL0137。
在本申请中，可按所述候选药物本身的特性调整其给药剂量和给药时间。例如，所述候选药物可包括长春新碱，且以如下方式向所述模型施用所述长春新碱：通过腹腔注射施用，每次施用量为0.5mg/kg，每周施用一次且持续施用3-6周。例如，所述候选药物包括氨甲叶酸，且以如下方式向所述模型施用所述氨甲叶酸：通过腹腔注射施用，每次施用量为3-6mg/kg，每日施用一次，隔周施用且持续施用6-10周。例如，所述候选药物包括地塞米松，且以如下方式向所述模型施用所述地塞米松：通过腹腔注射施用，每次施用量为10-20mg/kg，每日施用一次且持续施用3-6周。例如，所述候选药物包括阿霉素，且以如下方式向所述模型施用所述阿霉素：通过静脉注射施用，每次施用量为0.5-3mg/kg，每周施用一次且持续施用3-6周。例如，所述候选药物包括左旋门冬酰胺，且以如下方式向所述模型施用所述左旋门冬酰胺：通过腹腔注射施用，每次施用量为500-2000KU/kg，每日施用一次且持续施用3-6周。例如，所述候选药物包括拓扑替康，且以如下方式向所述模型施用所述拓扑替康：通过腹腔注射施用，每次施用量为0.1-5mg/kg，每日施用一次且持续施用2-8周，给药两周后停药一周。例如，所述候选药物包括氯法拉滨，且以如下方式向所述模型施用所述氯法拉滨：通过腹腔注射施用，每次施用量为10-100mg/kg，每日施用一次且持续施用3-6周。例如，所述候选药物包括卡非佐米，且以如下方式向所述模型施用所述卡非佐米：通过静脉注射施用，每次施用量为0.1-10mg/kg，每周施用二次且持续施用3-6周。例如，所述候选药物包括替西罗莫司，且以如下方式向所述模型施用所述替西罗莫司：通过腹腔注射施用，每次施用量为5-50mg/kg，每日施用一次且持续施用1-3周。例如，所述候选药物包括达沙替尼，且以如下方式向所述模型施用所述达沙替尼：通过口服施用，每次施用量为5-50mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周。例如，所述候选药物包括硼替佐米，且以如下方式向所述模型施用所述硼替佐米：通过腹腔注射施用，每次施用量为0.1-20mg/kg，每周施用二次且持续施用4-8周。例如，所述候选药物包括SAR3419，且以如下方式向所述模型施用所述SAR3419：通过腹腔注射施用，每次施用量为0.5-50mg/kg，每周施用一次且持续施用4-8周。例如，所述候选药物包括全反式维甲酸，且以如下方式向所述模型施用所述全反式维甲酸：通过腹腔注射施用，每次施用量为0.5-10mg/kg，每周施用一次且持续施用2-6周。例如，所述候选药物包括SAHA，且以如下方式向所述模型施用所述SAHA：通过腹腔注射施用，每次施用量为100-500mg/kg，每日施用一次且持续施用3-6周。例如，所述候选药物包括舒尼替尼，且以如下方式向所述模型施用所述舒尼替尼：通过口服施用，每次施用量为10-100mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周。例如，所述候选药物包括环磷酰胺，且以如下方式向所述模型施用所述环磷酰胺：通过腹腔注射施用，每次施用量为30-300mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周。例如，所述候选药物包括维甲酰酚胺，且以如下方式向所述模型施用所述维甲酰酚胺：通过腹腔注射施用，每次施用量为20-200mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周。
在本申请中，术语“监测单元”通常是指用于监测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况的功能单元。例如，所述监测单元可包括检测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况的检测元件(例如，流式细胞仪，例如，检测特异性细胞所需的抗体)和对所述检测元件检测到的生长情况进行判断确定所述候选药物所在等级的决策元件(例如，CPU处理器，运算程序)。所述监测单元还可包括显示所述决策元件的等级结果的反馈元件(例如，显示器，显示屏，语音输出装置等)。
所述检测元件检测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况，并将检测到的生长情况传输到所述决策元件。所述决策元件根据其设定的、确定所述候选药物所在等级的条件，对传输得到的所述生长情况进行判断，得到等级结果，并可将所述等级结果传输到所述反馈元件。所述反馈元件将传输得到的等级结果通过图像、声音等形式反馈出所述候选药物对所述受试者的适用情况，以便对后续的临床治疗提供可靠的参考。
所述监测单元可通过检测所述受试者特异性人源化疾病模型内的白血病细胞的比例(例如，通过监测小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例)和/或其变化来对所述候选药物的药效进行评估。所述监测单元可包括检测所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例的试剂和装置。例如，所述监测单元可包括流式细胞仪，检测CD45、CD19、CD3和/或CD33的ELISA试剂盒等。所述监测单元中用于检测所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例的试剂和装置可在施用候选药物后，持续监测所述huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞在所述小鼠外周血细胞中所占比例的变化，并依据该变化提示所述候选药物的效力。
当所述监测单元检测到所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例达到1％-5％(例如达到1.2％-5％，2％-5％，2.5％-5％，3％-5％，3.5％-5％，4％-5％，4.5％-5％)时，则认为可向所述小鼠施用候选药物。又例如，所述监测单元可被设置为，当该比例达到1％-5％时，提示可向所述小鼠施用候选药物。当所述监测单元检测到所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+和/或huCD33+细胞的比例保持低于1％(例如低于0.9％、0.8％、0.7％、0.6％、0.5％、0.4％、0.3％、0.2％、0.1％、0.05％)、并维持该比例至少2周(例如至少3周，至少4周，至少5周，至少6周，至少7周，至少8周，至少9周，至少10周)时，则认为该候选药物有效。又例如，所述监测单元可被设置为，当该比例保持低于1％、并维持该比例至少2周时，提示所述候选药物为有效。
根据临床设定，本申请所述的系统还能制定远高于普通统计学标准的严格的标准。在给药期间，使用所述监测单元监测所述受试者特异性人源化疾病模型中人白血病细胞在模型中外周血中的比例，并根据所述比例，将候选药物划分为6个等级。在某些实施方式中，所述监测单元可包括反馈元件，所述反馈元件与检测元件信息连通，所述反馈元件可显示所述候选药物所在等级。例如，所述6个等级可分别为：
等级1进展性疾病1(PD1)：对受试者特异性人源化疾病模型基本没有治疗效果。例如，所述监测单元检测到所述小鼠外周血中huCD45+细胞的比例在7天内(例如至多6天，5天，4天，3天内)达到至少8％(例如至少为8.5％，9％，9.5％，10％)且在12天内(例如，至多11天，10天，9天，8天内)达到至少25％(例如至少为26％，27％，28％，29％，30％)。
等级2进展性疾病2(PD2)：对受试者特异性人源化疾病模型的治疗效果非常有限。例如，所述监测单元检测到所述小鼠外周血中huCD45+细胞的比例在7天内(例如至多6天，5天，4天，3天内)达到至少6％(例如至少为6.5％，7％，7.5％，7.8％)且在21天内(例如，至多20天，19天，18天，17天内)达到至少20％(例如至少为21％，22％，23％，24％，25％)。
等级3稳定性疾病(SD)：对受试者特异性人源化疾病模型的治疗效果有限。例如，所述监测单元检测到所述小鼠外周血中huCD45+细胞的比例在7天内(例如至多6天，5天，4天，3天内)达到至少3％(例如至少为3.5％，4％，4.5％，5％)且在21天内(例如至多20天，19天，18天，17天内)达到至少10％(例如至少为10.5％，11％，11.5％，12％)。
等级4部分缓解(PR)：对受试者特异性人源化疾病模型有一定的治疗效果，能够使所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例下降至0％，并且在1周内(例如，6天，5天，4天，3天)保持0％的比例。例如，所述监测单元检测到所述小鼠外周血中huCD45+细胞的比例在7天内(例如至多6天，5天，4天，3天内)达到0％，且1周内(例如，6天，5天，4天，3天)保持0％的比例，同时在21天内(例如至多20天，19天，18天，17天内)至多为3％(例如至多为2.5％，2％，1.5％，1％)。
等级5完全缓解(CR)：对受试者特异性人源化疾病模型有良好的治疗效果，能够使所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例下降至0％，并且在2周左右(例如，20天，19天，18天，17天，16天，14天，13天，12天，11天，10天，9天，8天)保持0％的比例。例如，所述监测单元检测到所述小鼠外周血中huCD45+细胞的比例在7天内(例如6天，5天，4天，3天内)达到0％，且在2周左右(例如，20天，19天，18天，17天，16天，14天，13天，12天，11天，10天，9天，8天)保持0％的比例，同时在28天内(例如27天，26天，25天，24天内)至多为2％(例如至多为1.5％，1％，0.5％，0.1％)。
等级6持续完全缓解(MCR)：对受试者特异性人源化疾病模型有显著优异的治疗效果，能够使所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例下降至0％，并且在3周以上(例如，21天，22天，23天，24天，25天，26天，27天，28天，29天，30天，35天，40天，45天)保持0％的比例。例如，所述监测单元检测到所述小鼠外周血中huCD45+细胞的比例在7天内(例如6天，5天，4天，3天内)达到0％，且在3周以上(例如，21天，22天，23天，24天，25天，26天，27天，28天，29天，30天，35天，40天，45天)保持0％的比例，同时在42天内(例如41天，40天，38天，36天内)至多为1％(例如至多为0.5％，0.4％，0.3％，0.2％，0.1％)。
上述6个等级的划分，能够提供可靠的药物检测数据，并将这特异性的候选药物施用于受试者的临床治疗。本申请所述的系统将根据所述候选药物筛选模块筛选得到的候选药物，将其作为最适合受试者的临床药物，推荐受试者临床施用。
检测模块
在本申请中，术语“检测模块”通常是指检测所述受试者中白血病细胞的存在和/或比例的功能单元。所述的检测模块可包括特异性扩增靶标基因从而获得靶标特异性扩增产物的扩增单元(例如，可包括进行所述PCR扩增所需的材料和试剂，如PCR仪、核酸聚合酶、反转录酶、dNTP、Mg2+离子、扩增反应所需的缓冲液等)。
例如，所述的检测模块还可包括能够鉴别出所述靶标特异性扩增产物中源自所述受试者的白血病细胞的特征性扩增产物的鉴定单元(例如，可包括分离得到源自受试者白血病细胞的特征性扩增产物所述的材料和试剂，如电泳仪、电泳槽、凝胶、电泳缓冲液等)。例如，所述的检测模块还可包括能够获得特异于所述受试者的白血病细胞的特征性基因序列的分析单元(例如，可包含用于分析所述特征性扩增产物的试剂和装置，如测序引物、测序试剂盒、序列分析程序等)。例如，所述的检测模块还可包括能够判断所述受试者中残留白血病细胞的存在和/或比例的识别单元(例如，可包含特异性扩增特异于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列的试剂或装置，如qPCR反应所需的材料和试剂，如qPCR仪、
Figure BDA0003833762920000241
Green I、DNA聚合酶、dNTP、扩增缓冲液等；如与扩增产物杂交时具有光学活性的序列特异性寡核苷酸探针，如荧光探针)。例如，所述的检测模块还可包括能够根据所检测的受试者中白血病细胞的存在和/或比例提示对相应受试者采用的后续治疗方案的治疗提示单元。例如，可包含检测受试者中白血病细胞的存在和/或比例的检测元件(例如，流式细胞仪)，和对所述检测元件检测到的存在和/或比例的结果进行判断的决策元件(例如，CPU处理器，运算程序)。所述的治疗提示单元还可包括显示所述决策元件的判断的结果的提示元件(例如，显示器，显示屏，语音输出装置等)。
在本申请中，术语“扩增单元”通常是指特异性扩增靶标基因从而获得靶标特异性扩增产物的功能单元。在本申请中，所述扩增单元可包括进行所述PCR扩增所需的材料和试剂，和/或一种或多种检测扩增产物的报告剂(例如，可检测的核酸结合试剂)。例如，所述扩增单元可使用或包括核酸聚合酶、反转录酶、dNTP、Mg2+离子、扩增反应所需的缓冲液和/或检测扩增产物的报告剂等。
在本申请中，术语“扩增”通常是指扩增靶核酸并生成扩增产物。核酸的扩增可以是线性的、指数式的或其组合。扩增可以是基于乳剂的或不是基于乳剂的。核酸扩增方法的非限制性实例包括逆转录、引物延伸、聚合酶链反应、连接酶链反应、解旋酶依赖性扩增、非对称扩增、滚环扩增和多重置换扩增(MDA)。在某些实施方式中，扩增产物可以是DNA。在对靶RNA进行扩增的情况下，可通过RNA的逆转录来获得DNA并且可利用随后的DNA扩增来生成扩增的DNA产物。扩增的DNA产物可以指示在生物样品中存在靶RNA。在对DNA进行扩增的情况下，可以使用本领域中已知的任何DNA扩增方法。DNA扩增方法的非限制性实例包括聚合酶链反应(PCR)、PCR的变形方式(例如，实时PCR、等位基因特异性PCR、装配PCR、非对称PCR、数字PCR、乳液PCR等)、解旋酶依赖性PCR、巢式PCR、热启动PCR、反向PCR、甲基化特异性PCR、微引物PCR(miniprimer PCR)、多重PCR、巢式PCR、重叠-延伸PCR、热非对称交错PCR(thermal asymmetric interlaced PCR)、递降PCR)以及连接酶链式反应(LCR)。在一些情况下，DNA扩增是线性的。在一些情况下，DNA扩增是指数式的。在一些情况下，DNA扩增采用巢式PCR来实现，其可改善检测扩增的DNA产物的灵敏度
在一些情况下，所述扩增单元可使用或包括DNA聚合酶。可以使用任何合适的DNA聚合酶，包括可商购的DNA聚合酶。DNA聚合酶通常指能够以模板结合的方式将核苷酸掺入到DNA链中的酶。DNA聚合酶的非限制性实例包括Taq聚合酶、Tth聚合酶、Tli聚合酶、Pfu聚合酶、VENT聚合酶、DEEPVENT聚合酶、EX-Taq聚合酶、LA-Taq聚合酶、Expand聚合酶、Sso聚合酶、Poc聚合酶、Pab聚合酶、Mth聚合酶、Pho聚合酶、ES4聚合酶、Tru聚合酶、Tac聚合酶、Tne聚合酶、Tma聚合酶、Tih聚合酶、Tfi聚合酶、Platinum Taq聚合酶、Hi-Fi聚合酶、Tbr聚合酶、Tfl聚合酶、Pfutubo聚合酶、Pyrobest聚合酶、Pwo聚合酶、KOD聚合酶、Bst聚合酶、Sac聚合酶、Klenow片段，以及它们的变体、修饰的产物和衍生物。对于某种热启动聚合酶，可能需要在94℃-95℃下2分钟至10分钟的变性步骤，这根据不同的聚合酶可能会有所不同。在一些情况下，所述扩增单元可使用或包括逆转录酶。逆转录酶通常指在与RNA模板结合时能够将核苷酸掺入到DNA链中的酶。逆转录酶的非限制性实例包括HIV-1逆转录酶、M-MLV逆转录酶、AMV逆转录酶、端粒酶逆转录酶，以及它们的变体、修饰的产物和衍生物。例如，所述DNA聚合酶为Taq聚合酶。
在一些情况下，所述扩增单元可使用或包括扩增缓冲液。例如，所述扩增缓冲液可包含50-200mmol/L Tris-HCl缓冲液(例如，60-200mmol/L、70-200mmol/L、80-200mmol/L、90-200mmol/L、100-200mmol/L、110-200mmol/L、120-200mmol/L、130-200mmol/L、140-200mmol/L、150-200mmol/L、160-200mmol/L、170-200mmol/L、180-200mmol/L、或190-200mmol/L)。所述扩增缓冲液的pH值可以为6.0-9.0(例如，约6.5、7.0、7.5、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9或9.0等)，所述扩增缓冲液中可包含约5-30mmol/L Mg2+(例如，10-30mmol/L Mg2+、15-30mmol/L Mg2+、20-30mmol/L Mg2+、5-15mmol/L Mg2+、10-15mmol/L Mg2+等)。所述扩增缓冲液的还可包含，例如300-800mmol/L KCl(例如400-800mmol/L、450-800mmol/L、500-800mmol/L、550-800mmol/L、600-800mmol/L或700-800mmol/L等)。例如，所述的扩增缓冲液可以为10×LA Taq Buffer II(Mg2+free)，购自TaKaRa公司。
在本申请中，所述扩增单元可进行扩增反应(例如，PCR反应)，所述扩增反应的体系可以随着所述扩增步骤或扩增模块中涉及组分的不同而进行相应调整，只要能够有效地获得(例如，以在完全理想的条件下进行反应获得的扩增产物的量为100％计，获得至少75％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％或更多)所述靶标基因即可。例如，以100μL的总反应体积计，所述扩增反应体系可包含：约10μL扩增缓冲液、4种dNTP各200μmol/L、100pmol/L的引物组合物、2μg模板、2.5μg TaqDNA聚合酶、1.5mmol/L Mg2+和补足至100μL体积的水(例如，双蒸水)。
在一些情况下，所述扩增反应的条件可随着所述靶标基因的长度而进行相应地调整，只要能够有效地获得(例如，以在完全理想的条件下进行反应获得的扩增产物的量为100％计，获得至少75％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％或更多)所述靶标基因即可。例如，在一个实施方式中，以进行PCR反应为例，反应的条件可以为：94℃10分钟、94℃45秒和55℃45秒循环35次、72℃90秒、72℃15分钟后保持在4℃下。
所述扩增单元还可使用或包括进行PCR扩增所需的材料和试剂，和/或一种或多种检测扩增产物的报告剂(例如，可检测的核酸结合试剂)。例如，核酸聚合酶、反转录酶、dNTP、Mg2+离子、扩增反应所需的缓冲液和/或检测扩增产物的报告剂等。
所述扩增单元还可使用或包括获得所述扩增反应(例如，PCR反应)所需扩增模板的材料和试剂。例如，所述扩增单元可使用或包括从B细胞急性淋巴细胞白血病或T细胞急性淋巴细胞白血病患者的骨髓样本中获取DNA所需的材料和试剂。所述获取DNA所需的材料和试剂可包括DNA提取试剂盒。例如，所述DNA提取试剂盒可以为NucleoBond Kit CB 20、NucleoBond CB 100或NucleoBond CB 500等(购自NucleoBond公司)。
在需要裂解剂的情况下，可使用本领域中已知的任何合适的裂解剂，包括可商购的裂解剂。裂解剂的非限制性实例包括Tris-HCl，EDTA，去污剂(例如，Triton X-100、SDS)，溶菌酶，葡萄糖酶(glucolase)，蛋白酶E，病毒内溶素，外溶素(exolysin)，消解酶(zymolose)，溶细胞酶(Iyticase)，蛋白酶K，来自噬菌体的内溶素和外溶素，来自噬菌体PM2的内溶素，来自枯草芽孢杆菌(B.subtilis)噬菌体PBSX的内溶素，来自乳杆菌原噬菌体Lj928、Lj965、噬菌体15Phiadh的内溶素，来自肺炎链球菌噬菌体Cp-I的内溶素，无乳链球菌噬菌体B30的双功能肽聚糖溶素，来自原噬菌体细菌的内溶素和外溶素，来自李斯特菌(Listeria)噬菌体的内溶素，穴蛋白(holin)-内溶素，细胞20裂解基因，holWMY沃氏葡萄球菌(Staphylococcus wameri)M噬菌体varphiWMY，沃氏葡萄球菌M噬菌体varphiWMY的Iy5WMY，及其组合。在一些情况下，缓冲液可包含裂解剂(例如，裂解缓冲液)。裂解缓冲液的一个实例是氢氧化钠(NaOH)。
在本申请中，术语“特异性扩增”通常是指采用所述引物组合、通过PCR反应来获得靶标特异性扩增产物。这些特定的引物组合能够有效地(例如，以在完全理想的条件下进行反应获得的扩增产物的量为100％计，获得至少75％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％或更多)扩增所述靶标基因。
在本申请中，术语“引物”通常指一小段单链DNA或RNA，其在核酸聚合反应中(例如，PCR反应中)，可作为多核苷酸链进行延伸的出发点。其中，“反向引物”通常指与编码链(coding strand)结合(例如，与编码链的核苷酸序列互补)的引物。“正向引物”通常指与模板链结合的引物。
在本申请中，术语“靶标基因”通常是指可体现受试者中白血病细胞的存在和/或比例的基因。例如，所述靶标基因可包括选自下组的一种或多种基因、其片段或其变体：IgH、IgK、T细胞受体A、T细胞受体D、T细胞受体B、T细胞受体G和Tal 1。所述的靶标基因可以包括IgH基因重排、IgK基因重排、T细胞受体区域的基因重排等。
在本申请中，术语“基因重排”通常是指通过基因编码序列的重新排列而改变基因表达产物和/或基因转录方式。基因重排可通过DNA分子的断裂及重新连接而实现。例如，组成T细胞受体的多肽链可包括α、β、γ和/或δ肽链，编码这些多肽链的T细胞受体基因可通过基因重排(V-D-J)而使T细胞受体产生多样性和/或特异性。
在本申请中，术语“IgH基因重排”通常是指在编码免疫球蛋白重链的基因(IgH)中发生的基因重排(例如，VH-JH和DH-JH基因重排)。
在本申请中，术语“IgK基因重排”通常是指在编码免疫球蛋白κ轻链的基因(IgK)中发生的基因重排(例如，Vκ–Jκ基因重排，或Kde缺失)。
在本申请中，术语“急性淋巴细胞性白血病”(也称为acute lymphoblasticleukemia,或简称为ALL)通常指由体内淋巴细胞异常增殖引起的急性血液恶性肿瘤。
在本申请中，术语“B细胞急性淋巴细胞白血病”(B-ALL)通常指血液和/或骨髓中含有过多的B细胞淋巴母细胞(未成熟的白血球)而引起的一种急性淋巴细胞白血病。
在本申请中，术语“T细胞急性淋巴细胞白血病”(T-ALL)通常指血液和/或骨髓和/或组织(例如，纵膈淋巴结)中含有过多的T细胞淋巴母细胞(未成熟的白血球)而引起的一种急性淋巴细胞白血病。
在本申请中，术语“T细胞受体”(T cell receptor,TCR)通常指在T细胞表面表达的特异性受体。T细胞受体可负责识别由主要组织相容性复合体(MHC)所呈递的抗原。同一抗原可能被不同的T细胞受体所识别，某一T细胞受体也可识别许多种抗原。T细胞受体可与CD3分子呈复合物形式存在于T细胞表面。T细胞受体可以为异二聚体，例如由α和β肽链组成，或者由γ和δ肽链组成。
在本申请中，术语“T细胞受体区域的基因重排”通常是指在编码T细胞受体β亚基的基因(TCRB)中发生的基因重排(例如，Vβ–Jβ和Dβ-Jβ基因重排)。例如，所述T细胞受体区域的基因包括选自下组的一个或多个：T细胞受体A、T细胞受体D、T细胞受体B和T细胞受体G。
在本申请中，术语“编码链”通常指双链DNA中，不用于进行转录的那一条DNA链，该链的核苷酸序列与转录生成的RNA的序列一致(在RNA中是以U取代了DNA中的T)，又称有义链(sense strand)。
在本申请中，术语“模板链”通常指双链DNA中，用于进行转录的那一条DNA链，又称反义链(anti-sense strand)。
在本申请中，术语“保守性核酸序列”通常指具有高度相似性或同一性的核酸序列(如RNA或DNA序列)，其可以基于各物种间(种间同源序列)或由相同生物产生的不同分子(种内同源序列)间的序列比对结果。
在本申请中，术语“受试者特异性核酸序列”通常指具有独特的碱基排列顺序的、来源于特定受试者的核酸序列。例如，其可用于唯一地识别该受试者，或可用于将源自该受试者(或其组织、部分、细胞(如白血病细胞)等)的序列与其它来源(例如，源自其它受试者)的序列区别开。
在本申请中，术语“非特征性基因序列”通常指广泛地存在于众多受试者中，不与特定受试者来源有明显关联的基因序列。
在本申请中，术语“PCR”通常指聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)，其可用于扩增特定的DNA片段。例如，在PCR反应中，可将拟扩增的DNA目的片段作为模板，以一对分别与该模板5'末端和3'末端互补的寡核苷酸片段为引物，在耐热DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制的机制沿着模板链延伸直至完成新的目的片段合成。可通过重复这一过程而使目的片段得以大量扩增。
在本申请中，术语“qPCR”通常指定量聚合酶链式反应，其通过定量核酸扩增检测对目的核酸分子的数量进行精确分析。
在本申请中，术语“测序”通常指用于测定目标分子(例如，核酸分子)的序列组成的技术，可用于确定目的核酸分子的具体核苷酸序列。目前用于测序的技术主要有Sanger等(1977)发明的双脱氧链末端终止法、Maxam等(1977)发明的化学降解法和Taq cycle测序法等。
在本申请中，引物“VH1/7”通常指特异性结合和/或扩增IgH基因V区的1/7号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为VH1/7外显子。
在本申请中，引物“JH cons”通常指特异性结合和/或扩增IgH基因J区共有(concensus)序列部分的引物。例如，该引物靶向的基因区域为JH concensus。
在本申请中，引物“VH2”通常指特异性结合和/或扩增IgH基因V区的2号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为VH2外显子。
在本申请中，引物“VH3”通常指特异性结合和/或扩增IgH基因V区的3号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为VH3外显子。
在本申请中，引物“VH4”通常指特异性结合和/或扩增IgH基因V区的4号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为VH4外显子。
在本申请中，引物“VH5”通常指特异性结合和/或扩增IgH基因V区的5号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为VH5外显子。
在本申请中，引物“VH6”通常指特异性结合和/或扩增IgH基因V区的6号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为VH6外显子。
在本申请中，引物“DH1”通常指特异性结合和/或扩增IgH基因D区的1号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为DH1外显子。
在本申请中，引物“DH2”通常指特异性结合和/或扩增IgH基因D区的2号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为DH2外显子。
在本申请中，引物“DH3”通常指特异性结合和/或扩增IgH基因D区的3号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为DH3外显子。
在本申请中，引物“DH4”通常指特异性结合和/或扩增IgH基因D区的4号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为DH4外显子。
在本申请中，引物“DH5”通常指特异性结合和/或扩增IgH基因D区的5号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为DH5外显子。
在本申请中，引物“DH6”通常指特异性结合和/或扩增IgH基因D区的6号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为DH6外显子。
在本申请中，引物“DH7”通常指特异性结合和/或扩增IgH基因D区的7号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为DH7外显子。
在本申请中，引物“Vk1”通常指特异性结合和/或扩增IgK基因V区的1号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vk1外显子。
在本申请中，引物“Vk2”通常指特异性结合和/或扩增IgK基因V区的2号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vk2外显子。
在本申请中，引物“Vk3”通常指特异性结合和/或扩增IgK基因V区的3号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vk3外显子。
在本申请中，引物“Kdel”通常指特异性结合和/或扩增IgK基因的kappa缺失元件(kappa deleting element)的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Kdel区域。
在本申请中，引物“Intron RSS”通常指特异性结合和/或扩增IgK基因的内含子重组信号序列(intron recombination signal sequence)的引物。例如，该引物靶向的基因区域为IgK的Intron RSS区域。
在本申请中，引物“Vd2”通常指特异性结合和/或扩增TCR Delta(TCRδ)基因V区的2号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vδ2(Vd2)外显子。
在本申请中，引物“Dd3”通常指特异性结合和/或扩增TCRδ基因D区的3号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Dδ3(Dd3)外显子。
在本申请中，引物“Dd2”通常指特异性结合和/或扩增TCRδ基因D区的2号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Dδ2(Dd2)外显子。
在本申请中，引物“Ja29”通常指特异性结合和/或扩增TCR Alpha(TCRα)基因J区的29号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jα29(Ja29)外显子。
在本申请中，引物“Ja9”通常指特异性结合和/或扩增TCRα基因J区的9号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jα9(Ja9)外显子。
在本申请中，引物“Ja30”通常指特异性结合和/或扩增TCRα基因J区的30号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jα30(Ja30)外显子。
在本申请中，引物“Ja48”通常指特异性结合和/或扩增TCRα基因J区的48号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jα48(Ja48)外显子。
在本申请中，引物“Ja49”通常指特异性结合和/或扩增TCRα基因J区的49号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jα49(Ja49)外显子。
在本申请中，引物“Ja52”通常指特异性结合和/或扩增TCRα基因J区的52号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jα52(Ja52)外显子。
在本申请中，引物“Ja54”通常指特异性结合和/或扩增TCRα基因J区的54号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jα54(Ja54)外显子。
在本申请中，引物“Ja55”通常指特异性结合和/或扩增TCRα基因J区的55号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jα55(Ja55)外显子。
在本申请中，引物“Ja56”通常指特异性结合和/或扩增TCRα基因J区的56号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jα56(Ja56)外显子。
在本申请中，引物“Ja57”通常指特异性结合和/或扩增TCRα基因J区的57号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jα57(Ja57)外显子。
在本申请中，引物“Ja58”通常指特异性结合和/或扩增TCRα基因J区的58号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jα58(Ja58)外显子。
在本申请中，引物“Ja59”通常指特异性结合和/或扩增TCRα基因J区的59号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jα59(Ja59)外显子。
在本申请中，引物“Ja61”通常指特异性结合和/或扩增TCRα基因J区的61号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jα61(Ja61)外显子。
在本申请中，引物“Vg1”通常指特异性结合和/或扩增TCR Gamma(TCRG)基因V区的1号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vg1外显子。
在本申请中，引物“Vg2”通常指特异性结合和/或扩增TCR Gamma(TCRG)基因V区的2号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vg2外显子。
在本申请中，引物“Vg4”通常指特异性结合和/或扩增TCR Gamma(TCRG)基因V区的4号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vg4外显子。
在本申请中，引物“Jg1”通常指特异性结合和/或扩增TCR Gamma(TCRG)基因J区的1号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jg1外显子。
在本申请中，引物“Jg2”通常指特异性结合和/或扩增TCR Gamma(TCRG)基因J区的2号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jg2外显子。
在本申请中，引物“Vd1”通常指特异性结合和/或扩增TCR Delta(TCRδ)基因V区的1号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vδ1(Vd1)外显子。
在本申请中，引物“Jd1”通常指特异性结合和/或扩增TCR Delta(TCRδ)基因J区的1号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jδ1(Jd1)外显子。
在本申请中，引物“Vd3”通常指特异性结合和/或扩增TCR Delta(TCRδ)基因V区的3号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vδ3(Vd3)外显子。
在本申请中，引物“Vg3”通常指特异性结合和/或扩增TCR Gamma(TCRG)基因V区的3号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vg3外显子。
在本申请中，引物“Sildb”通常指特异性结合和/或扩增sil基因中断裂位点(breakpoint)的引物。例如，该引物靶向的基因区域为sil断裂位点。
在本申请中，引物“Taldb1”通常指特异性结合和/或扩增tal-1基因中断裂位点1(breakpoint1)的引物。例如，该引物靶向的基因区域为tal-1断裂位点1。
在本申请中，引物“Vb2”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的2号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ2(Vb2)外显子。
在本申请中，引物“Vb4”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的4号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ4(Vb4)外显子。
在本申请中，引物“Vb5/1”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的5/1号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ5/1(Vb5/1)外显子。
在本申请中，引物“Vb6a/11”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的6a/11号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ6a/11(Vb6a/11)外显子。
在本申请中，引物“Vb6b/25”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的6b/25号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ6b/25(Vb6b/25)外显子。
在本申请中，引物“Vb6c”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的6c号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ6c(Vb6c)外显子。
在本申请中，引物“Vb7”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的7号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ7(Vb7)外显子。
在本申请中，引物“Vb8a”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的8a号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ8a(Vb8a)外显子。
在本申请中，引物“Vb9”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的9号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ9(Vb9)外显子。
在本申请中，引物“Vb10”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的10号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ10(Vb10)外显子。
在本申请中，引物“Vb11”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的11号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ11(Vb11)外显子。
在本申请中，引物“Vb12a/3/13a/15”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的12a/3/13a/15号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ12a/3/13a/15(Vb12a/3/13a/15)外显子。
在本申请中，引物“Vb13b”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的13b号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ13b(Vb13b)外显子。
在本申请中，引物“Vb13c/12b/14”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的13c/12b/14号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ13c/12b/14(Vb13c/12b/14)外显子。
在本申请中，引物“Vb16”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的16号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ16(Vb16)外显子。
在本申请中，引物“Vb17”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的17号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ17(Vb17)外显子。
在本申请中，引物“Vb18”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的18号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ18(Vb18)外显子。
在本申请中，引物“Vb19”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的19号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ19(Vb19)外显子。
在本申请中，引物“Vb20”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的20号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ20(Vb20)外显子。
在本申请中，引物“Vb21”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的21号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ21(Vb21)外显子。
在本申请中，引物“Vb22”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的22号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ22(Vb22)外显子。
在本申请中，引物“Vb23/8b”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的23/8b号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ23/8b(Vb23/8b)外显子。
在本申请中，引物“Vb24”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因V区的24号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Vβ24(Vb24)外显子。
在本申请中，引物“Db1”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因D区的1号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Dβ1(Db1)外显子。
在本申请中，引物“Db2”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因D区的2号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Dβ2(Db2)外显子。
在本申请中，引物“Jb1”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因J区的1号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jβ1(Jb1)外显子。
在本申请中，引物“Jb2”通常指特异性结合和/或扩增TCR Beta(TCRβ)基因J区的2号外显子的引物。例如，该引物靶向的基因区域为Jβ2(Jb2)外显子。
例如，所述能够特异性扩增靶标基因(IgH基因重排)的试剂包括选自下述的一组或多组引物组合：1)正向引物：VH1/7，反向引物：JH cons；2)正向引物：VH2，反向引物：JHcons；3)正向引物：VH3，反向引物：JH cons；4)正向引物：VH4，反向引物：JH cons；5)正向引物：VH5，反向引物：JH cons；6)正向引物：VH6，反向引物：JH cons；7)
正向引物：DH1、DH4、DH5及DH7，反向引物：JH cons；8)正向引物：DH2，反向引物：JHcons；9)正向引物：DH3，反向引物：JH cons；和10)正向引物：DH6，反向引物：JH cons。其中所述引物JH cons包含选自下组的序列：SEQ ID NO.19所示的序列；和SEQ ID NO.20所示的序列。所述引物VH1/7包含选自下组的序列：SEQ ID NO.1所示、SEQ ID NO.2所示和SEQ IDNO.3所示的序列。所述引物VH2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.4所示、SEQ ID NO.5所示和SEQ ID NO.6所示的序列。所述引物VH3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.7所示、SEQ IDNO.8所示和SEQ ID NO.9所示的序列。所述引物VH4包含选自下组的序列：SEQ ID NO.10所示、SEQ ID NO.11所示和SEQ ID NO.12所示的序列。所述引物VH5包含选自下组的序列：SEQID NO.13所示、SEQ ID NO.14所示和SEQ ID NO.15所示的序列。所述引物VH6包含选自下组的序列：SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17所示和SEQ ID NO.18所示的序列。所述引物DH1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.21所示和SEQ ID NO.22所示的序列。所述引物DH2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.23所示和SEQ ID NO.24所示的序列。所述引物DH3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.25所示和SEQ ID NO.26所示的序列。所述引物DH4包含选自下组的序列：SEQID NO.27所示和SEQ ID NO.28所示的序列。所述引物DH5包含选自下组的序列：SEQ IDNO.29所示和SEQ ID NO.30所示的序列。所述引物DH6包含选自下组的序列：SEQ ID NO.31所示和SEQ ID NO.32所示的序列。所述引物DH7包含选自下组的序列：SEQ ID NO.33所示和SEQ ID NO.34所示的序列。
例如，所述能够特异性扩增靶标基因(IgK基因重排)的试剂包括选自下述的一组或多组引物组合：1)正向引物：Vk1，反向引物：Kdel；2)正向引物：Vk2，反向引物：Kdel；3)正向引物：Vk3，反向引物：Kdel；和4)正向引物：Intron RSS，反向引物：Kdel。其中所述引物Vk1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.35所示和SEQ ID NO.36所示的序列。所述引物Vk2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.37所示和SEQ ID NO.38所示的序列。所述引物Vk3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.39所示和SEQ ID NO.40所示的序列。所述引物Vk4包含选自下组的序列：SEQ ID NO.41所示和SEQ ID NO.42所示的序列。所述引物Intron RSS包含选自下组的序列：SEQ ID NO.43所示和SEQ ID NO.44所示的序列。所述引物Kdel包含选自下组的序列：SEQ ID NO.45所示和SEQ ID NO.46所示的序列。
例如，针对B细胞急性淋巴细胞白血病，所述能够特异性扩增靶标基因(T细胞受体区域基因重排)的试剂包括选自下述的一组或多组引物组合：1)正向引物：Vd2，反向引物：Dd3；2)正向引物：Dd2，反向引物：Dd3；3)正向引物：Vd2，反向引物：Ja29；4)
正向引物：Vd2，反向引物：Ja9、Ja29、Ja30、Ja48、Ja49、Ja52、Ja54、Ja55、Ja56、Ja57、Ja58、Ja59和Ja61；5)正向引物：Vg1，反向引物：Jg1和Jg2；6)正向引物：Vg2，反向引物：Jg1和Jg2；7)正向引物：Vg4，反向引物：Jg1和Jg2；8)TCRB多引物组合A；9)TCRB多引物组合B；和10)TCRB多引物组合C。其中所述引物Vg1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.47所示和SEQ ID NO.48所示的序列。所述引物Vg2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.49所示和SEQ IDNO.50所示的序列。所述引物Vg4包含选自下组的序列：SEQ ID NO.53所示和SEQ ID NO.54所示的序列。所述引物Jg1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.55所示和SEQ ID NO.56所示的序列。所述引物Jg2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.57所示和SEQ ID NO.58所示的序列。所述引物Vd2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.61所示和SEQ ID NO.62所示的序列。所述引物Dd2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.65所示和SEQ ID NO.66所示的序列。所述引物Dd3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.67所示和SEQ ID NO.68所示的序列。所述引物Ja9包含选自下组的序列：SEQ ID NO.71所示的序列。所述引物Ja29包含选自下组的序列：SEQ IDNO.72所示的序列。所述引物Ja30包含选自下组的序列：SEQ ID NO.73所示的序列。所述引物Ja48包含选自下组的序列：SEQ ID NO.74所示的序列。所述引物Ja49包含选自下组的序列：SEQ ID NO.75所示的序列。所述引物Ja52包含选自下组的序列：SEQ ID NO.76所示的序列。所述引物Ja54包含选自下组的序列：SEQ ID NO.77所示的序列。所述引物Ja55包含选自下组的序列：SEQ ID NO.78所示的序列。所述引物Ja56包含选自下组的序列：SEQ ID NO.79所示的序列。所述引物Ja57包含选自下组的序列：SEQ ID NO.80所示的序列。所述引物Ja58包含选自下组的序列：SEQ ID NO.81所示的序列。所述引物Ja59包含选自下组的序列：SEQID NO.82所示的序列。所述引物Ja61包含选自下组的序列：SEQ ID NO.83所示的序列。所述多引物组合A包含选自下组的一个或多个序列：SEQ ID NO.86所示、SEQ ID NO.87所示、SEQID NO.88所示的序列、SEQ ID NO.89所示、SEQ ID NO.90所示、SEQ ID NO.91所示、SEQ IDNO.92所示、SEQ ID NO.93所示、SEQ ID NO.94所示、SEQ ID NO.95所示、SEQ ID NO.96所示、SEQ ID NO.97所示、SEQ ID NO.98所示、SEQ ID NO.99所示、SEQ ID NO.100所示、SEQID NO.101所示、SEQ ID NO.102所示、SEQ ID NO.103所示、SEQ ID NO.104所示、SEQ IDNO.105所示、SEQ ID NO.106所示、SEQ ID NO.107所示、SEQ ID NO.108所示、SEQ IDNO.111所示、SEQ ID NO.112所示、SEQ ID NO.113所示、SEQ ID NO.114所示、SEQ IDNO.115所示、SEQ ID NO.116所示、SEQ ID NO.118、SEQ ID NO.122所示和SEQ ID NO.123所示的序列。所述多引物组合B包含选自下组的一个或多个序列：SEQ ID NO.86所示、SEQ IDNO.87所示、SEQ ID NO.88所示、SEQ ID NO.89所示、SEQ ID NO.90所示、SEQ ID NO.91所示、SEQ ID NO.92所示、SEQ ID NO.93所示、SEQ ID NO.94所示、SEQ ID NO.95所示、SEQ IDNO.96所示、SEQ ID NO.97所示、SEQ ID NO.98所示、SEQ ID NO.99所示、SEQ ID NO.100所示、SEQ ID NO.101所示、SEQ ID NO.102所示、SEQ ID NO.103所示、SEQ ID NO.104所示、SEQ ID NO.105所示、SEQ ID NO.106所示、SEQ ID NO.107所示、SEQ ID NO.108所示、SEQID NO.117所示、SEQ ID NO.119所示、SEQ ID NO.120所示和SEQ ID NO.121所示的序列。所述多引物组合C包含选自下组的一个或多个序列：SEQ ID NO.109所示、SEQ ID NO.110所示、SEQ ID NO.111所示、SEQ ID NO.112所示、SEQ ID NO.113所示、SEQ ID NO.114所示、SEQ ID NO.115所示、SEQ ID NO.116所示、SEQ ID NO.117所示、SEQ ID NO.118所示、SEQID NO.119所示、SEQ ID NO.120所示、SEQ ID NO.121所示、SEQ ID NO.122所示和SEQ IDNO.123所示的序列。
例如，针对T细胞急性淋巴细胞白血病，所述能够特异性扩增靶标基因(T细胞受体区域基因重排)的试剂包括选自下述的一组或多组引物组合：1)正向引物：Vd1，反向引物：Jd1；2)正向引物：Vd2，反向引物：Jd1；3)正向引物：Vd3，反向引物：Jd1；4)正向引物：Vd2，反向引物：Dd3；5)正向引物：Dd2，反向引物：Dd3；6)正向引物：Dd2，反向引物：Jd1；7)正向引物：Vd2，反向引物：Ja29；8)正向引物：Vd2，反向引物：Ja9、Ja29、Ja30、Ja48、Ja49、Ja52、Ja54、Ja55、Ja56、Ja57、Ja58、Ja59和Ja61；9)正向引物：Vg1，反向引物：Jg1和Jg2；10)正向引物：Vg2，反向引物：Jg1和Jg2；11)
正向引物：Vg3，反向引物：Jg1和Jg2；12)正向引物：Vg4，反向引物：Jg1和Jg2；13)
正向引物：Sildb，反向引物：Taldb1；14)TCRB多引物组合A；15)TCRB多引物组合B；和16)TCRB多引物组合C。其中所述引物Vg3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.51所示和SEQID NO.52所示的序列。所述引物Vd3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.63所示和SEQ IDNO.64所示的序列。所述引物Vg1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.47所示和SEQ ID NO.48所示的序列。所述引物Vg2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.49所示和SEQ ID NO.50所示的序列。所述引物Vg4包含选自下组的序列：SEQ ID NO.53所示和SEQ ID NO.54所示的序列。所述引物Jg1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.55所示和SEQ ID NO.56所示的序列。所述引物Jg2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.57所示和SEQ ID NO.58所示的序列。所述引物Vd2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.61所示和SEQ ID NO.62所示的序列。所述引物Dd2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.65所示和SEQ ID NO.66所示的序列。所述引物Dd3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.67所示和SEQ ID NO.68所示的序列。所述引物Ja9包含选自下组的序列：SEQ ID NO.71所示的序列。所述引物Ja29包含选自下组的序列：SEQ ID NO.72所示的序列。所述引物Ja30包含选自下组的序列：SEQ ID NO.73所示的序列。所述引物Ja48包含选自下组的序列：SEQ ID NO.74所示的序列。所述引物Ja49包含选自下组的序列：SEQ ID NO.75所示的序列。所述引物Ja52包含选自下组的序列：SEQ ID NO.76所示的序列。所述引物Ja54包含选自下组的序列：SEQ ID NO.77所示的序列。所述引物Ja55包含选自下组的序列：SEQID NO.78所示的序列。所述引物Ja56包含选自下组的序列：SEQ ID NO.79所示的序列。所述引物Ja57包含选自下组的序列：SEQ ID NO.80所示的序列。所述引物Ja58包含选自下组的序列：SEQ ID NO.81所示的序列。所述引物Ja59包含选自下组的序列：SEQ ID NO.82所示的序列。所述引物Ja61包含选自下组的序列：SEQ ID NO.83所示的序列。所述多引物组合A包含选自下组的一个或多个序列：SEQ ID NO.86所示、SEQ ID NO.87所示、SEQ ID NO.88所示、SEQ ID NO.89所示、SEQ ID NO.90所示、SEQ ID NO.91所示、SEQ ID NO.92所示、SEQ IDNO.93所示、SEQ ID NO.94所示、SEQ ID NO.95所示、SEQ ID NO.96所示、SEQ ID NO.97所示、SEQ ID NO.98所示、SEQ ID NO.99所示、SEQ ID NO.100所示、SEQ ID NO.101所示、SEQID NO.102所示、SEQ ID NO.103所示、SEQ ID NO.104所示、SEQ ID NO.105所示、SEQ IDNO.106所示、SEQ ID NO.107所示、SEQ ID NO.108所示、SEQ ID NO.111所示、SEQ IDNO.112所示、SEQ ID NO.113所示、SEQ ID NO.114所示、SEQ ID NO.115所示、SEQ IDNO.116所示、SEQ ID NO.118所示、SEQ ID NO.122所示和SEQ ID NO.123所示的序列。所述多引物组合B包含选自下组的一个或多个序列：SEQ ID NO.86所示、SEQ ID NO.87所示、SEQID NO.88所示、SEQ ID NO.89所示、SEQ ID NO.90所示、SEQ ID NO.91所示、SEQ ID NO.92所示、SEQ ID NO.93所示、SEQ ID NO.94所示、SEQ ID NO.95所示、SEQ ID NO.96所示、SEQID NO.97所示、SEQ ID NO.98所示、SEQ ID NO.99所示、SEQ ID NO.100所示、SEQ IDNO.101所示、SEQ ID NO.102所示、SEQ ID NO.103所示、SEQ ID NO.104所示、SEQ IDNO.105所示、SEQ ID NO.106所示、SEQ ID NO.107所示、SEQ ID NO.108所示、SEQ IDNO.117所示、SEQ ID NO.119所示、SEQ ID NO.120所示和SEQ ID NO.121所示的序列。所述多引物组合C包含选自下组的一个或多个序列：SEQ ID NO.109所示、SEQ ID NO.110所示、SEQ ID NO.111所示、SEQ ID NO.112所示、SEQ ID NO.113所示、SEQ ID NO.114所示、SEQID NO.115所示、SEQ ID NO.116所示、SEQ ID NO.117所示、SEQ ID NO.118所示、SEQ IDNO.119所示、SEQ ID NO.120所示、SEQ ID NO.121所示、SEQ ID NO.122所示和SEQ IDNO.123所示的序列。所述引物Vd1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.59所示和SEQ ID NO.60所示的序列。所述引物Jd1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.69所示和SEQ ID NO.70所示的序列。所述引物Sildb包含选自下组的序列：SEQ ID NO.84所示的序列。所述引物Taldb1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.85所示的序列。
在本申请中，术语“鉴定单元”通常指能够鉴别出所述靶标特异性扩增产物中源自所述受试者的白血病细胞的特征性扩增产物的功能单元，所述鉴定单元可包含用于鉴别所述靶标特异性扩增产物的试剂和装置。所述鉴定单元能够有效地(例如，至少50％，至少55％，至少60％，至少65％，至少70％，至少75％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或更多)将源自所述受试者的白血病细胞的特征性扩增产物从所述靶标特异性扩增产物中分离出来。例如，可通过凝胶电泳来分离源自受试者白血病细胞的特征性扩增产物。在鉴定过程中，分离得到的产物(例如，目标是分离得到源自受试者白血病细胞的特征性扩增产物)在凝胶电泳中可显示在凝胶的特定位置处，通过将其与阳性对照组中相应的核酸片段进行比较(例如，两者的均为长度约400pb的核酸片段)，可以初步判断经所述鉴定模块分离获得的产物(例如，DNA片段)即为源自所述受试者白血病细胞的特征性扩增产物。
所述凝胶电泳分离能够将所述受试者的白血病细胞的特征性扩增产物有效地(例如，至少60％，至少65％，至少70％，至少75％，至少80％，至少85％，至少90％，至少95％或更多)从所述扩增步骤或扩增模块中获得的所述靶标特异性扩增产物中分离出来。所述鉴定单元可含有用于进行凝胶电泳分离所需的试剂和装置，例如，用于进行琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺凝胶电泳的试剂和装置。比如说，所述鉴定单元可包括配制凝胶所需的试剂和/或电泳缓冲液。例如，所述配制凝胶所需的试剂可包括琼脂糖、丙烯酰胺(Acr)、N,N-亚甲双丙烯酰胺(Bis)、四甲基乙二胺(TEMED)和三羟甲基氨基甲烷(Tris)中的一种或多种。例如，使用2％(w/w)琼脂糖凝胶。
所述电泳缓冲液可含有Tris-HCl、二硫苏糖醇(DTT)、SDS、溴酚蓝、β-巯基乙醇和甘油中的一种或多种。例如，所述电泳缓冲液包含100mmol/L Tris-HCl(6.8)、200mmol/L二硫苏糖醇(DTT)、4％SDS、0.2％溴酚蓝和20％甘油。例如，在一个实施方式中，所述电泳缓冲液含有60mmol/L Tris-HCl(pH6.8)、2％SDS、、0.1％溴酚蓝、25％甘油和14.4mmol/Lβ-巯基乙醇。再比如，所述鉴定单元还可包括电泳槽和/或电泳仪。例如，所述电泳槽可以为圆盘电泳槽、垂直版电泳槽或水平电泳槽。所述电泳仪可以为稳压稳流电泳仪、全自动荧光/可见光双系统电泳仪或全自动琼脂糖电泳仪。所述鉴定单元还可包括制胶板、电源等便于进行凝胶电泳分离的附加装置。所述凝胶电泳分离的条件可以根据所分离的核酸(例如，DNA)片段的长度而相应调整，只需使分离的产物片段(例如，DNA片段)条带清晰，满足上述有效地分离的要求即可。所述凝胶电泳分离的条件可以为，在电压100V下持续通电2-3小时；或者为在电压40-50V下持续通电过夜。
在本申请中，术语“分析单元”通常是指获得特异于所述受试者的白血病细胞的特征性基因序列的功能单元，所述分析单元可包含用于分析所述特征性扩增产物的试剂和装置。
所述分析单元可准确地(例如，通过将所述分析单元获得的基因序列与真实的基因序列进行比较，序列相似性达到至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％，至少96％，至少97％，至少98％，至少99％或更多)获得所述受试者的白血病细胞的特征性基因序列。
在本申请中，术语“特征性基因序列”通常是指具有独特的碱基排列顺序的、来源于特定受试者的核酸序列。例如，其可用于唯一地识别该受试者，或可用于将源自该受试者(或其组织、部分、细胞(如白血病细胞)等)的序列与其它来源(例如，源自其它受试者)的序列区别开。
在本申请中，术语“特征性扩增产物”通常是指反映受试者特异性的扩增产物。例如，反映特异于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列的扩增产物。
在本申请中，术语“核酸测序”通常是指用于测定目标核酸分子的序列组成的技术，可用于确定目的核酸分子的具体核苷酸序列。目前用于测序的技术主要有Sanger等(1977)发明的双脱氧链末端终止法、Maxam等(1977)发明的化学降解法和Taq cycle测序法等。
所述分析单元可包含对所述特征性扩增产物进行核酸测序及序列分析所需的试剂和装置。例如，所述分析单元可包含实施测序法、Taq cycle测序法或SILVER SEQUENCETMDNA测序系统法所需的试剂和装置。采用Taq cycle测序法时，所述分析单元可包含通用的正向测序引物和Ready Reaction Dye Deoxy Terminator Cycle测序试剂盒(ABI公司)。或者，可采用所述分析单元对所述受试者的白血病细胞的特征性扩增产物进行分析，其具体步骤可参见Kneba M,Bolz I,Linke B,Hiddemann W.Analysis of rearranged T-cellreceptor beta-chain genes by polymerase chain reaction(PCR)DNA sequencing andautomated high resolution PCR fragment analysis.Blood 1995；86:3930–3937中“Cloning and DNA sequencing”部分的记载或者参见文献Linke B,Bolz I,Fayyazi A,von Hofen M,Pott C,Bertram J et al.Automated high resolution PCR fragmentanalysis for identification of clonally rearranged immunoglobulin heavy chaingenes.Leukemia 1997；11:1055–1062.中“Cloning and DNA sequencing”部分的记载，这些文献的全文被本申请所引用。
在本申请中，术语“序列分析”通常是指通过对所述核酸测序的结果进行分析，可明确所得的核酸测序结果是否属于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列。
所述分析单元可包含对所述核酸测序的结果进行分析的试剂和装置，例如可包括进行BLAST(Basic Local Alignment Search Tool)、BioEdit软件或MEGA软件分析所需的设备和装置。比如说，向所述分析模块分别输入所述核酸测序的结果和普遍存在于任意受试者的非特征性的基因序列，通过分析，获得表征所述受试者白血病细胞的特征性基因序列。
在本申请中，术语“识别单元”通常是指判断所述受试者中残留白血病细胞的存在和/或比例的功能单元。所述识别单元可包含能够特异性识别和/或扩增所述受试者的所述特征性基因序列的试剂和装置，从而判断所述受试者中残留白血病细胞的存在和/或比例。例如，所述识别单元可有效地获得(例如，以在完全理想的条件下进行反应获得的产物的量为100％计，获得至少75％，至少80％，至少81％，至少82％，至少83％，至少84％，至少85％，至少86％，至少87％，至少88％，至少89％，至少90％，至少91％，至少92％，至少93％，至少94％，至少95％或更多)特异于所述受试者白血病细胞的所述特征性基因序列。
所述识别单元可包含特异性扩增特异于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列的试剂或装置。
所述识别单元可包含与非特征性基因序列结合的探针以及能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置。在本申请中，术语“非特征性基因序列”通常是指广泛地存在于众多受试者中，不与特定受试者来源有明显关联的基因序列。
例如，所述非特征性基因序列可包括源自下组中的一种或多种基因的核酸序列：IgH、IgK、T细胞受体A、T细胞受体D、T细胞受体B、T细胞受体G和Tal 1。其中所述非特征性基因序列包括源自IgH的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.124所示、SEQ ID NO.125所示、SEQ ID NO.126所示、SEQ IDNO.127所示、SEQ ID NO.128所示、SEQ ID NO.129所示、SEQ ID NO.130所示和SEQ IDNO.131所示的序列。所述非特征性基因序列包括源自IgH的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.173所示、SEQ ID NO.174所示、SEQ IDNO.175所示、SEQ ID NO.176所示、SEQ ID NO.177所示、SEQ ID NO.178所示、SEQ IDNO.179所示和SEQ ID NO.180所示的序列。所述非特征性基因序列包括源自IgK的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.132所示、SEQ ID NO.133所示、SEQ ID NO.134所示、SEQ ID NO.135所示、SEQ ID NO.136所示、SEQ ID NO.137所示、SEQ ID NO.138所示、SEQ ID NO.139所示、SEQ ID NO.140所示和SEQID NO.141所示的序列。所述非特征性基因序列包括源自IgK的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.181所示、SEQ ID NO.182所示、SEQ ID NO.183所示、SEQ ID NO.184所示、SEQ ID NO.185所示、SEQ ID NO.186所示、SEQID NO.187所示、SEQ ID NO.188所示、SEQ ID NO.189所示和SEQ ID NO.190所示的序列。所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体G的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.142所示、SEQ ID NO.143所示、SEQ IDNO.144所示、SEQ ID NO.145所示、SEQ ID NO.146所示、SEQ ID NO.147所示、SEQ IDNO.148所示、SEQ ID NO.149所示、SEQ ID NO.150所示和SEQ ID NO.151所示的序列。所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体G的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.191所示、SEQ ID NO.192所示、SEQ ID NO.193所示、SEQ ID NO.194所示、SEQ ID NO.195所示、SEQ ID NO.196所示、SEQ ID NO.197所示、SEQID NO.198所示、SEQ ID NO.199所示和SEQ ID NO.200所示的序列。所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体D和/或T细胞受体A的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.152所示、SEQ ID NO.153所示、SEQ IDNO.154所示、SEQ ID NO.155所示、SEQ ID NO.156所示和SEQ ID NO.157所示的序列。所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体D和/或T细胞受体A的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.201所示、SEQ ID NO.202所示、SEQID NO.203所示、SEQ ID NO.204所示、SEQ ID NO.205所示和SEQ ID NO.206所示的序列。所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体B的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.158所示、SEQ ID NO.159所示、SEQ IDNO.160所示、SEQ ID NO.161所示、SEQ ID NO.162所示、SEQ ID NO.163所示、SEQ IDNO.164所示、SEQ ID NO.165所示、SEQ ID NO.166所示、SEQ ID NO.167所示、SEQ IDNO.168所示、SEQ ID NO.169所示和SEQ ID NO.170所示的序列。所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体B的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.207所示、SEQ ID NO.208所示、SEQ ID NO.209所示、SEQ ID NO.210所示、SEQ ID NO.211所示、SEQ ID NO.212所示、SEQ ID NO.213所示、SEQ ID NO.214所示、SEQID NO.215所示、SEQ ID NO.216所示、SEQ ID NO.217所示、SEQ ID NO.218所示和SEQ IDNO.219所示的序列。所述非特征性基因序列包括源自Tal 1的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.171所示和SEQ ID NO.172所示的序列。所述非特征性基因序列包括源自Tal 1的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.220所示和SEQ ID NO.221所示的序列。
在所述识别单元中，用于特异性扩增所述特征性基因序列的试剂(例如，其包括一组或多组能够针对所述特征性基因序列进行特异性核酸扩增的引物)可通过核酸扩增反应(例如，qPCR反应)进行扩增，从而获得所述特异于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列。
所述识别单元可通过进行qPCR反应来扩增所述特异于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列。所述识别单元可包括进行qPCR反应所需的材料和试剂。例如，所述识别单元包括
Figure BDA0003833762920000391
Green I、DNA聚合酶、dNTP、扩增缓冲液以及一组或多组能够有效地获得(例如，扩增)所述特异于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列的引物组合。所述DNA聚合酶可为TaqDNA聚合酶。所述扩增缓冲液可为MasterMIX。
当在所述识别单元中进行qPCR反应时，所述qPCR反应的体系可以随着所述识别单元含有组分的不同而进行相应调整，只要能够有效地特异性地扩增所述特异于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列即可。例如，以25μL的体系计，所述qPCR反应的体系可以为：2μL DNA模板、0.5μL正向引物、0.5μL反向引物、12.5μL 
Figure BDA0003833762920000392
PremixEx Taq TM和9.5μLdH2O。在某些实施方式中，以20μL的体系计，所述qPCR反应的体系可以为：2μL DNA模板、0.3μL正向引物、0.3μL反向引物、0.4μL荧光探针、10μL Taqman Universal PCR Master Mix和7μL dH2O。
当在所述识别单元中进行qPCR反应时，所述qPCR反应的条件可随着所述特异于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列的长度不同而进行相应调整，只要能够有效地特异性地扩增所述特异于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列即可。所述qPCR反应的条件可以为：95℃30秒、94℃5秒和60℃34秒循环40次、95℃15秒、60℃1分钟后保持4℃。或者，可以为：94℃10分钟后，94℃45秒、55℃45秒和72℃45秒循环35次、72℃15分钟后保持4℃。所述识别单元可包括进行所述qPCR反应的仪器和设备。例如，ABI 
Figure BDA0003833762920000393
7000/7700/7900HT、LightCycler Real Time PCR或Smart Cycler II System Real Time PCR扩增仪。
在本申请中，术语“探针”通常是指在与扩增产物杂交时具有光学活性的序列特异性寡核苷酸探针。所述探针可连接至任何的光学活性报告剂(例如，染料)，并且还可包括能够阻断相关联的染料的光学活性的猝灭剂。可用作报告剂的探针的非限制性实例包括TaqMan探针、TaqMan Tamara探针、TaqMan MGB探针或Lion探针。所述光学活性报告剂的非限制性实例包括SYBR绿，SYBR蓝，DAPI，碘化丙啶(propidium iodine)，Hoeste，SYBR金，溴化乙锭，吖啶，原黄素、吖啶橙，吖啶黄，荧光香豆素(fluorcoumanin)，玫瑰树碱，道诺霉素，氯喹，偏端霉素D，色霉素，胡米溴铵(homidium)，光辉霉素，多吡啶钌(rutheniumpolypyridyl)，安曲霉素(anthramycin)，菲啶和吖啶，溴化乙锭，碘化丙啶，碘化己啶(hexidium iodide)，二氢乙锭，乙锭同型二聚体-1和乙锭同型二聚体-2，单叠氮化乙锭(ethidium monoazide)和ACMA，Hoechst 33258，Hoechst 33342，Hoechst 34580，DAPI，吖啶橙，7-AAD，放线菌素D，LDS751，羟茋巴脒(hydroxystilbamidine)，SYTOX蓝，SYTOX绿，SYTOX橙，POPO-1，POPO-3，YOYO-1，YOYO-3，TOTO-1，TOTO-3，JOJO-1，LOLO-1，BOBO-1，BOBO-3，PO-PRO-1，PO-PRO-3，BO-PRO-1，BO-PRO-3，TO-PRO-1，TO-PRO-3，TO-PRO-5，JO-PRO-1，LO-PRO-1，YO-PRO-1，YO-PRO-3，PicoGreen，OliGreen，RiboGreen，SYBR金，SYBR绿I，SYBR绿II，SYBR DX，SYTO-40、-41、-42、-43、-44、-45(蓝)，SYTO-13、-16、-24、-21、-23、-12、-11、-20、-22、-15、-14、-25(绿)，SYTO-81、-80、-82、-83、-84、-85(橙)，SYTO-64、-17、-59、-61、-62、-60、-63(红)，荧光素，异硫氰酸荧光素(FITC)，四甲基罗丹明异硫氰酸酯(TRITC)，罗丹明，四甲基罗丹明，R-藻红蛋白，Cy-2、Cy-3、Cy-3.5、Cy-5、Cy5.5、Cy-7，德克萨斯红(TexasRed)，Phar-Red，别藻蓝蛋白(APC)，Sybr绿I，Sybr绿II，Sybr金，CellTracker绿，7-AAD，乙锭同型二聚体I，乙锭同型二聚体II，乙锭同型二聚体III，溴化乙锭，伞形酮，曙红，绿色荧光蛋白，赤藓红，香豆素，甲基香豆素，芘，孔雀绿，茋，荧光黄，级联蓝(cascade blue)，二氯三嗪胺荧光素，丹磺酰氯，荧光镧系络合物(如那些包括铕和铽的络合物)，羧基四氯荧光素，5和/或6-羧基荧光素(FAM)，5-(或6-)碘乙酰胺基荧光素，5-{[2(和3)-5-(乙酰基巯基)-琥珀酰基]氨基}荧光素(SAMSA-荧光素)，丽丝胺罗丹明B磺酰氯，5和/或6羧基罗丹明(ROX)，7-氨基-甲基-香豆素，7-氨基-4-甲基香豆素-3-乙酸(AMCA)，BODIPY荧光团，8-甲氧基芘-1,3,6-三磺酸三钠盐，3,6-二磺酸-4-氨基-萘二甲酰亚胺，藻胆蛋白，AlexaFluor350、405、430、488、532、546、555、568、594、610、633、635、647、660、680、700、750和790染料，DyLight350、405、488、550、594、633、650、680、755和800染料，或其他荧光团。
本申请所述的系统，可包括2个或2个以上的检测模块，其中至少一个检测模块用于在所述受试者接受治疗之前检测其中白血病细胞的存在和/或比例，且其中至少一个检测模块用于在所述受试者接受该治疗之后检测其中白血病细胞的存在和/或比例。
在本申请中，术语“治疗”通常是指药物治疗和/或放射治疗。所述药物可选自蛋白激酶抑制剂，细胞凋亡调节剂，促基因分解药物，细胞分裂抑制剂，MDM2类致癌基因抑制剂，抗体类药物和/或其他化疗药物附加剂。所述药物还可包括下组中的一种或多种：长春新碱，地塞米松，环磷酰胺，长春新碱、地塞米松和左旋天冬酰胺酶组合，NSC750854,拓扑替康,Volasertib,Serdemetan,JNJ-26481585和KTP-330。所述蛋白激酶抑制剂可包括AZD8055，MLN0128，GSK690693，MK-2206，SAR245408，rapamycin，MLN0128，selumetinib，AZD6244，PCI-32765，ibrutinib，SGI-1776，dinaciclib，VS-4718，temsirolimus，sorafenib，sunitinib，ruxolitinib，AZD1480和/或dasatinib。所述细胞凋亡调节剂可包括ABT-263(navitoclax)，ABT-199(venetoclax)，LCL161和/或birinapant。所述MDM2类致癌基因抑制剂可包括MK-8242(SCH 900242)和/或RG7112。所述促基因分解药物可包括PR-104，cytarabine(CPX-351)，daunorubicin(Vyxeos)，topotecan，clofarabine和/或temozolomide。所述细胞分裂抑制剂可包括eribulin，ispinesib，bortezomib，carfilzomib和/或alisertib。所述抗体类药物可包括SAR3419，blinatumomab，和/或inotuzumab。所述其他化疗药物附加剂可包括alvespimycin，AT13387，PF-03084014，RO-4929097，MLN4924，PG11047，CX-5461,BMN-673，selinexor，curaxin，和/或CBL0137。所述放射治疗可包括x射线、α射线、β射线、γ射线、质子束或其它粒子束的照射。
在某些实施方式中，在向受试者施用所述治疗之前，获得源自所述受试者的样品(例如，血细胞样品，或从所述细胞中提取的DNA样品)，并对该样品进行系列稀释(例如，稀释10倍，100倍，1000倍，1万倍，10万倍或更多倍)。随后，使用所述识别模块分别对所述经稀释的样品中受试者的所述特征性基因序列进行扩增(例如，qPCR扩增)，从而建立一系列对应于不同浓度(例如，不同DNA浓度)样品的标准扩增曲线。在施用所述治疗之后，再次获得经过治疗的所述受试者的样品(例如，相应的血细胞样品，或从所述细胞中提取的相应的DNA样品)，并使用所述识别模块对该样品中受试者的所述特征性基因序列进行扩增(例如，用与制作所述标准扩增曲线时相同的扩增方法，如同样的qPCR扩增方法)。
施用所述治疗之前的所述扩增与施用所述治疗之后的所述扩增之间可以间隔一段时间。例如，间隔至少1天、至少2天、至少3天、至少4天、至少5天、至少6天、至少7天、至少8天、至少9天、至少10天、至少11天、至少12天。然后，可通过将施用所述治疗后获得的针对所述受试者的所述特征性基因序列的识别和/或扩增(例如，qPCR扩增)结果与所述标准扩增曲线进行比较，从而判断经过所述治疗后的受试者中白血病细胞的特征性基因序列的比例。
在本申请中，术语“治疗提示单元”通常是指根据所检测的受试者中白血病细胞的存在和/或比例提示对相应受试者采用的后续治疗方案的功能单元。例如，所述治疗提示单元可包含检测受试者中白血病细胞的存在和/或比例的检测元件(例如，流式细胞仪)，和对所述检测元件检测到的存在和/或比例的结果进行判断的决策元件(例如，CPU处理器，运算程序)。所述的治疗提示单元还可包括显示所述决策元件的判断的结果的提示元件(例如，显示器，显示屏，语音输出装置等)。
所述检测元件检测所检测的受试者中白血病细胞的存在和/或比例，并将检测到的存在和/或比例的结果传输到所述决策元件。所述决策元件根据其设定的、根据受试者中白血病细胞的比例采用不同的后续治疗方案的条件，对传输得到的存在和/或比例的结果进行判断，得到选择后续治疗方案的结果，并可将该结果传输到所述提示元件。所述提示元件将传输得到的等级结果通过图像、声音等形式反馈出所述候选药物对所述受试者的适用情况，以便对后续的临床治疗方案的选择提供可靠的参考。
例如，可根据所检测的受试者中白血病细胞的比例的大小，提示对相应的受试者采用不同的后续治疗方案。例如，当所检测的受试者中白血病细胞的比例<1/104时，可表明所述治疗是成功的，不再需要进行额外的治疗；当所检测的受试者中白血病细胞的比例>1/104时，可表明所述治疗是不完善的，还需要进行新一轮的治疗或者提高治疗的强度。
在所检测的受试者中白血病细胞的比例>1/104的情况下，可进一步分析所检测的受试者中白血病细胞的比例的大小，从而判断是否适于对所述受试者进行骨髓移植。例如，若1/104<所检测的受试者中白血病细胞的比例<1/103，可表明可以对所述受试者进行骨髓移植手术；若所检测的受试者中白血病细胞的比例>1/103，可表明所述受试者体内存在大量的白血病细胞，由于较高的白血病细胞残留度会使得白血病复发的可能性大大增加，因此这种情况下应认为所述受试者不适于进行骨髓移植手术，而应接受其他治疗或提高治疗的强度。
在本申请中，术语“复发”通常指患者的疾病表征被消除或减轻后，疾病表征再度出现或加重的现象。
在本申请中，术语“其他治疗”通常是指除了所检测的受试者已经接受的治疗方式以外的治疗方法。
图6中显示了本申请的所述方法和系统的一个具体实施方式。其中在步骤或模块“1”(即扩增单元)中对靶标基因(例如，靶标基因可包括IgH、IgK、T细胞受体A、T细胞受体D、T细胞受体B、T细胞受体G和Tal 1等，且其中可发生基因重组)进行扩增；在步骤或模块“2”(即鉴定单元和分析单元)中对由所述“1”获得的扩增产物进行分离、并对所得到的目标扩增片段进行核酸测序，从而确定特异于受试者的白血病细胞的特征性扩增产物的基因序列；在步骤或模块“3”(即识别单元)中对由“2”获得的基因序列进行定量分析，其中通过设计具有特定核苷酸序列的个性化引物对、与非特征性基因序列特异性结合的通用探针、以及特异性扩增所述非特征性基因序列的通用引物对，来定量地检测样品中源自受试者白血病细胞的特征性扩增产物的含量，进而在分子水平上检测受试者中白血病细胞的残留水平。
本申请中，所述白血病诊疗系统的操作流程可包括以下的内容：受试者去医院就诊后被确诊为患有白血病，此时通过本申请所述的白血病诊疗系统的建模模块，构建受试者特异性人源化疾病模型；此后受试者可接受本领域常规的、标准化的治疗(例如，标准化疗)，当该治疗结束后，再通过所述白血病诊疗系统的检测模块，在分子水平上检测受试者白血病细胞的存在和/或比例；如果检测的结果说明该受试者有较大的几率会复发白血病，或者白血病细胞的比例过高，则说明受试者已经对上述常规的、标准化的治疗产生了耐药性；可见在这样的情况下，需要特异性于受试者的有效药物，因此利用本申请所述的白血病诊疗系统的候选药物筛选模块，利用所述受试者特异性人源化疾病模型筛选候选药物(化疗药、靶向药)，根据前文所述的候选药物的等级结果，选取等级5或等级6的候选药物指导临床治疗，使该受试者接受特异性于自身的经筛选药物的治疗；治疗一段时间后，若借助所述白血病诊疗系统的检测模块显示分子水平上检测受试者白血病细胞的比例很低或没有，则认为所述白血病诊疗系统所获得的筛选药物对该受试者的疗效十分显著。
本申请还涉及以下具体实施方案：
1.一种用于进行白血病诊疗的系统，其包括：
a)建模模块，其用于构建受试者特异性人源化疾病模型，所述受试者为白血病患者；
b)至少一个检测模块，其用于检测所述受试者中白血病细胞的存在和/或比例；
其中所述建模模块包括：
a1)样品单元，其包含源自所述受试者的白血病细胞悬浮液，所述悬浮液中白血病细胞的密度为2x107/ml至5x107/ml；
a2)辐射单元，其包含放射性处理装置，用于对适当的免疫缺陷型小鼠进行放射性处理；
a3)接种单元，其用于将所述白血病细胞悬浮液接种到经所述辐射单元处理的免疫缺陷型小鼠中；
其中所述至少一个检测模块包括：
b1)扩增单元，其包含能够特异性扩增靶标基因的试剂，以获得靶标特异性扩增产物。
2.根据实施方式1所述的系统，其还包括c)候选药物筛选模块，所述候选药物筛选模块包括第一候选药物组和第二候选药物组；
其中所述第一候选药物组包括选自下组的一种或多种药物：长春新碱、地塞米松、左旋天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、嘌呤核苷类衍生物、蛋白酶体抑制剂、mTOR抑制剂、达沙替尼、抗体类药物、全反式维甲酸、DNA损伤诱导剂、叶酸还原酶抑制剂、去乙酰基抑制剂、多受体酪氨酸激酶抑制剂、细胞毒性药物和维甲酰酚胺；且
其中所述第二候选药物组包括选自下组的一种或多种药物：蛋白激酶抑制剂、细胞凋亡调节剂、DNA分解剂、细胞分裂抑制剂、MDM2类致癌基因抑制剂、抗体类药物和其他化疗药物附加剂。
3.根据实施方式1-2中任一项所述的系统，其中所述建模模块还包括a4)分离单元，所述分离单元包含单核细胞分离液，用于离心分离所述受试者的白血病细胞。
4.根据实施方式1-3中任一项所述的系统，其中所述建模模块还包括a5)T细胞去除单元，其用于去除源自非T细胞型白血病受试者的样品中的T细胞，从而得到所述白血病细胞悬浮液。
5.根据实施方式3-4中任一项所述的系统，其中所述单核细胞分离液为Ficoll，且所述离心分离为密度梯度离心分离。
6.根据实施方式1-5中任一项所述的系统，其中所述白血病细胞悬浮液中包含RPMI细胞培养基。
7.根据实施方式4-6中任一项所述的系统，其中被去除的所述T细胞为CD3阳性T细胞。
8.根据实施方式7所述的系统，其中所述T细胞去除单元含有包含CD3抗体的磁珠。
9.根据实施方式7-8中任一项所述的系统，其中所述T细胞去除单元还包含高磁场。
10.根据实施方式1-9中任一项所述的系统，其中所述白血病为急性淋巴细胞性白血病，且所述免疫缺陷型小鼠为NSG小鼠。
11.根据实施方式1-9中任一项所述的系统，其中所述白血病为急性髓性白血病，且所述免疫缺陷型小鼠为MISTRG小鼠。
12.根据实施方式10所述的系统，其中所述放射性处理装置为X射线辐射装置，且其产生的辐射剂量为200cGy至300cGy。
13.根据实施方式11所述的系统，其中所述放射性处理装置为X射线辐射装置，且其产生的辐射剂量为550cGy至650cGy。
14.根据实施方式1-13中任一项所述的系统，其中所述辐射单元被设置为在预定的接种时间之前的12-24小时内对所述免疫缺陷型小鼠进行所述放射性处理。
15.根据实施方式1-14中任一项所述的系统，其中所述免疫缺陷型小鼠的年龄为5-7周。
16.根据实施方式1-15中任一项所述的系统，其中所述建模模块还包括a6)红外照射及加热单元，用于对所述免疫缺陷型小鼠进行红外灯照射及加热。
17.根据实施方式1-16中任一项所述的系统，其中所述建模模块还包括a7)监测单元，用于监测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况。
18.根据实施方式17所述的系统，其中所述监测单元包括检测所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例的试剂和装置。
19.根据实施方式18所述的系统，其中所述建模模块还包括a8)脾脏处理单元，该脾脏处理单元包括分离元件、破碎元件及悬浮元件，当经接种的所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例至少为50％时，可通过所述分离元件分离所述小鼠的脾脏，通过所述破碎元件破碎经分离的所述小鼠的脾脏以获得脾脏细胞，并通过所述悬浮元件将所述脾脏细胞制备为所述白血病细胞悬浮液。
20.根据实施方式1-19中任一项所述的系统，其中所述建模模块还包括a9)液氮，用于冷冻储存所述白血病细胞悬浮液。
21.根据实施方式2-20中任一项所述的系统，其中所述候选药物筛选模块还包括监测单元，用于监测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况。
22.根据实施方式21所述的系统，其中所述监测单元包括检测所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例的试剂和装置，且所述监测单元被设置为，当该比例达到1％-5％时，提示可向所述小鼠施用候选药物。
23.根据实施方式21或22所述的系统，其中所述监测单元包括检测所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例的试剂和装置，且所述监测单元被设置为，在药物施用后，持续监测所述huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞在所述小鼠外周血细胞中所占比例的变化，并依据该变化提示所述候选药物的效力。
24.根据实施方式23所述的系统，其中所述监测单元被设置为：当施用所述候选药物后，监测到所述huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞在所述小鼠外周血细胞中所占比例保持低于1％、并维持该比例至少2周时，则提示所述候选药物为有效。
25.根据实施方式2-24中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组包括选自下组的一种或多种药物：长春新碱、地塞米松、左旋天冬酰胺酶、拓扑替康、氯法拉滨、卡非佐米、替西罗莫司、达沙替尼、硼替佐米、CD19抗体、全反式维甲酸、阿霉素、氨甲叶酸、SAHA、舒尼替尼、环磷酰胺和维甲酰酚胺。
26.根据实施方式2-25中任一项所述的系统，其中所述第二候选药物组中的所述蛋白激酶抑制剂包括选自下组的一种或多种药物：AZD8055、MLN0128、GSK690693、MK-2206、SAR245408、rapamycin、MLN0128、selumetinib、AZD6244、PCI-32765、ibrutinib、SGI-1776、dinaciclib、VS-4718、sorafenib、sunitinib和AZD1480。
27.根据实施方式2-26中任一项所述的系统，其中所述第二候选药物组中的所述细胞凋亡调节剂包括选自下组的一种或多种药物：ABT-263(navitoclax)、ABT-199(venetoclax)、LCL161和birinapant。
28.根据实施方式2-27中任一项所述的系统，其中所述第二候选药物组中的所述DNA分解剂包括选自下组的一种或多种药物：PR-104、cytarabine(CPX-351)、daunorubicin(Vyxeos)和temozolomide。
29.根据实施方式2-28中任一项所述的系统，其中所述第二候选药物组中的所述细胞分裂抑制剂包括选自下组的一种或多种药物：eribulin、ispinesib和alisertib。
30.根据实施方式2-29中任一项所述的系统，其中所述第二候选药物组中的所述MDM2类致癌基因抑制剂包括选自下组的一种或多种药物：MK-8242(SCH 900242)和RG7112。
31.根据实施方式2-30中任一项所述的系统，其中所述第二候选药物组中的所述抗体类药物包括选自下组的一种或多种药物：SAR3419。
32.根据实施方式2-31中任一项所述的系统，其中所述第二候选药物组中的所述其他化疗药物附加剂包括选自下组的一种或多种药物：alvespimycin，AT13387，PF-03084014，RO-4929097，MLN4924，PG11047，CX-5461,BMN-673，selinexor，bortezomib，curaxin和CBL0137。
33.根据实施方式2-32中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括长春新碱，且所述长春新碱适于根据如下要求施用于所述受试者特异性人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.5mg/kg，每周施用一次且持续施用3-6周。
34.根据实施方式2-33中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括氨甲叶酸，且所述氨甲叶酸适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为3-6mg/kg，每两周施用一次，且持续施用6-10周。
35.根据实施方式2-34中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括地塞米松，且所述地塞米松适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为10-20mg/kg，每日施用一次且持续施用3-6周。
36.根据实施方式2-35中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括阿霉素，且所述阿霉素适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过静脉注射施用，每次施用量为0.5-3mg/kg，每周施用一次且持续施用3-6周。
37.根据实施方式2-36中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括左旋天冬酰胺酶，且所述左旋天冬酰胺酶适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为500-2000KU/kg，每日施用一次且持续施用3-6周。
38.根据实施方式2-37中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括拓扑替康，且所述拓扑替康适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.1-5mg/kg，每日施用一次且持续施用2-8周，给药两周后停药一周。
39.根据实施方式2-38中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括氯法拉滨，且所述氯法拉滨适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为10-100mg/kg，每日施用一次且持续施用3-6周。
40.根据实施方式2-39中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括卡非佐米，且所述卡非佐米适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过静脉注射施用，每次施用量为0.1-10mg/kg，每周施用二次且持续施用3-6周。
41.根据实施方式2-40中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括替西罗莫司，且所述替西罗莫司适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为5-50mg/kg，每日施用一次且持续施用1-3周。
42.根据实施方式2-41中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括达沙替尼，且所述达沙替尼适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过口服施用，每次施用量为5-50mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周。
43.根据实施方式2-42中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括硼替佐米，且所述硼替佐米适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.1-20mg/kg，每周施用二次且持续施用4-8周。
44.根据实施方式2-43中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括SAR3419，且所述SAR3419适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.5-50mg/kg，每周施用一次且持续施用4-8周。
45.根据实施方式2-44中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括全反式维甲酸，且所述全反式维甲酸适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.5-10mg/kg，每周施用一次且持续施用2-6周。
46.根据实施方式2-45中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括SAHA，且所述SAHA适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为100-500mg/kg，每日施用一次且持续施用3-6周。
47.根据实施方式2-46中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括舒尼替尼，且所述舒尼替尼适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过口服施用，每次施用量为10-100mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周。
48.根据实施方式2-47中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括环磷酰胺，且所述环磷酰胺适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为30-300mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周。
49.根据实施方式2-48中任一项所述的系统，其中所述第一候选药物组中包括维甲酰酚胺，且所述维甲酰酚胺适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为20-200mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周。
50.根据实施方式1-49中任一项所述的系统，其中所述白血病包括B细胞急性淋巴细胞白血病和/或T细胞急性淋巴细胞白血病。
51.根据实施方式1-50中任一项所述的系统，其中所述靶标基因包括选自下组的一种或多种基因、其片段或其变体：IgH、IgK、T细胞受体A、T细胞受体D、T细胞受体B、T细胞受体G和Tal 1。
52.根据实施方式51所述的系统，其中所述靶标基因包括IgH基因重排，且所述能够特异性扩增靶标基因的试剂包括选自下述的一组或多组引物组合：
1)正向引物：VH1/7，反向引物：JH cons；
2)正向引物：VH2，反向引物：JH cons；
3)正向引物：VH3，反向引物：JH cons；
4)正向引物：VH4，反向引物：JH cons；
5)正向引物：VH5，反向引物：JH cons；
6)正向引物：VH6，反向引物：JH cons；
7)正向引物：DH1、DH4、DH5及DH7，反向引物：JH cons；
8)正向引物：DH2，反向引物：JH cons；
9)正向引物：DH3，反向引物：JH cons；和
10)正向引物：DH6，反向引物：JH cons。
53.根据实施方式52所述的系统，其中所述引物JH cons包含选自下组的序列：SEQID NO.19所示的序列；和SEQ ID NO.20所示的序列。
54.根据实施方式52-53中任一项所述的系统，其中所述引物VH1/7包含选自下组的序列：SEQ ID NO.1所示、SEQ ID NO.2所示和SEQ ID NO.3所示的序列。
55.根据实施方式52-54中任一项所述的系统，其中所述引物VH2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.4所示、SEQ ID NO.5所示和SEQ ID NO.6所示的序列。
56.根据实施方式52-55中任一项所述的系统，其中所述引物VH3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.7所示、SEQ ID NO.8所示和SEQ ID NO.9所示的序列。
57.根据实施方式52-56中任一项所述的系统，其中所述引物VH4包含选自下组的序列：SEQ ID NO.10所示、SEQ ID NO.11所示和SEQ ID NO.12所示的序列。
58.根据实施方式52-57中任一项所述的系统，其中所述引物VH5包含选自下组的序列：SEQ ID NO.13所示、SEQ ID NO.14所示和SEQ ID NO.15所示的序列。
59.根据实施方式52-58中任一项所述的系统，其中所述引物VH6包含选自下组的序列：SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.17所示和SEQ ID NO.18所示的序列。
60.根据实施方式52-59中任一项所述的系统，其中所述引物DH1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.21所示和SEQ ID NO.22所示的序列。
61.根据实施方式52-60中任一项所述的系统，其中所述引物DH2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.23所示和SEQ ID NO.24所示的序列。
62.根据实施方式52-61中任一项所述的系统，其中所述引物DH3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.25所示和SEQ ID NO.26所示的序列。
63.根据实施方式52-62中任一项所述的系统，其中所述引物DH4包含选自下组的序列：SEQ ID NO.27所示和SEQ ID NO.28所示的序列。
64.根据实施方式52-63中任一项所述的系统，其中所述引物DH5包含选自下组的序列：SEQ ID NO.29所示和SEQ ID NO.30所示的序列。
65.根据实施方式52-64中任一项所述的系统，其中所述引物DH6包含选自下组的序列：SEQ ID NO.31所示和SEQ ID NO.32所示的序列。
66.根据实施方式52-65中任一项所述的系统，其中所述引物DH7包含选自下组的序列：SEQ ID NO.33所示和SEQ ID NO.34所示的序列。
67.根据实施方式51-66中任一项所述的系统，其中所述靶标基因包括IgK基因重排，且所述能够特异性扩增靶标基因的试剂包括选自下述的一组或多组引物组合：
1)正向引物：Vk1，反向引物：Kdel；
2)正向引物：Vk2，反向引物：Kdel；
3)正向引物：Vk3，反向引物：Kdel；和
4)正向引物：Intron RSS，反向引物：Kdel。
68.根据实施方式67所述的系统，其中所述引物Vk1包含选自下组的序列：SEQ IDNO.35所示和SEQ ID NO.36所示的序列。
69.根据实施方式67-68中任一项所述的系统，其中所述引物Vk2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.37所示和SEQ ID NO.38所示的序列。
70.根据实施方式67-69中任一项所述的系统，其中所述引物Vk3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.39所示和SEQ ID NO.40所示的序列。
71.根据实施方式67-70中任一项所述的系统，其中所述引物Vk4包含选自下组的序列：SEQ ID NO.41所示和SEQ ID NO.42所示的序列。
72.根据实施方式67-71中任一项所述的系统，其中所述引物Intron RSS包含选自下组的序列：SEQ ID NO.43所示和SEQ ID NO.44所示的序列。
73.根据实施方式67-72中任一项所述的系统，其中所述引物Kdel包含选自下组的序列：SEQ ID NO.45所示和SEQ ID NO.46所示的序列。
74.根据实施方式51-73中任一项所述的系统，其中所述白血病包括B细胞急性淋巴细胞白血病，所述靶标基因包括T细胞受体区域的基因重排；所述T细胞受体区域的基因包括选自下组的一个或多个：T细胞受体A、T细胞受体D、T细胞受体B和T细胞受体G；且所述能够特异性扩增靶标基因的试剂包括选自下述的一组或多组引物组合：
1)正向引物：Vd2，反向引物：Dd3；
2)正向引物：Dd2，反向引物：Dd3；
3)正向引物：Vd2，反向引物：Ja29；
4)正向引物：Vd2，反向引物：Ja9、Ja29、Ja30、Ja48、Ja49、Ja52、Ja54、Ja55、Ja56、Ja57、Ja58、Ja59和Ja61；
5)正向引物：Vg1，反向引物：Jg1和Jg2；
6)正向引物：Vg2，反向引物：Jg1和Jg2；
7)正向引物：Vg4，反向引物：Jg1和Jg2；
8)TCRB多引物组合A；
9)TCRB多引物组合B；和
10)TCRB多引物组合C。
75.根据实施方式74所述的系统，其中所述引物Vg1包含选自下组的序列：SEQ IDNO.47所示和SEQ ID NO.48所示的序列。
76.根据实施方式74-75中任一项所述的系统，其中所述引物Vg2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.49所示和SEQ ID NO.50所示的序列。
77.根据实施方式74-76中任一项所述的系统，其中所述引物Vg4包含选自下组的序列：SEQ ID NO.53所示和SEQ ID NO.54所示的序列。
78.根据实施方式74-77中任一项所述的系统，其中所述引物Jg1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.55所示和SEQ ID NO.56所示的序列。
79.根据实施方式74-78中任一项所述的系统，其中所述引物Jg2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.57所示和SEQ ID NO.58所示的序列。
80.根据实施方式74-79中任一项所述的系统，其中所述引物Vd2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.61所示和SEQ ID NO.62所示的序列。
81.根据实施方式74-80中任一项所述的系统，其中所述引物Dd2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.65所示和SEQ ID NO.66所示的序列。
82.根据实施方式74-81中任一项所述的系统，其中所述引物Dd3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.67所示和SEQ ID NO.68所示的序列。
83.根据实施方式74-82中任一项所述的系统，其中所述引物Ja9包含选自下组的序列：SEQ ID NO.71所示的序列。
84.根据实施方式74-83中任一项所述的系统，其中所述引物Ja29包含选自下组的序列：SEQ ID NO.72所示的序列。
85.根据实施方式74-84中任一项所述的系统，其中所述引物Ja30包含选自下组的序列：SEQ ID NO.73所示的序列。
86.根据实施方式74-85中任一项所述的系统，其中所述引物Ja48包含选自下组的序列：SEQ ID NO.74所示的序列。
87.根据实施方式74-86中任一项所述的系统，其中所述引物Ja49包含选自下组的序列：SEQ ID NO.75所示的序列。
88.根据实施方式74-87中任一项所述的系统，其中所述引物Ja52包含选自下组的序列：SEQ ID NO.76所示的序列。
89.根据实施方式74-88中任一项所述的系统，其中所述引物Ja54包含选自下组的序列：SEQ ID NO.77所示的序列。
90.根据实施方式74-89中任一项所述的系统，其中所述引物Ja55包含选自下组的序列：SEQ ID NO.78所示的序列。
91.根据实施方式74-90中任一项所述的系统，其中所述引物Ja56包含选自下组的序列：SEQ ID NO.79所示的序列。
92.根据实施方式74-91中任一项所述的系统，其中所述引物Ja57包含选自下组的序列：SEQ ID NO.80所示的序列。
93.根据实施方式74-92中任一项所述的系统，其中所述引物Ja58包含选自下组的序列：SEQ ID NO.81所示的序列。
94.根据实施方式74-93中任一项所述的系统，其中所述引物Ja59包含选自下组的序列：SEQ ID NO.82所示的序列。
95.根据实施方式74-94中任一项所述的系统，其中所述引物Ja61包含选自下组的序列：SEQ ID NO.83所示的序列。
96.根据实施方式74-95中任一项所述的系统，其中所述多引物组合A包含选自下组的一个或多个序列：SEQ ID NO.86所示、SEQ ID NO.87所示、SEQ ID NO.88所示的序列、SEQ ID NO.89所示、SEQ ID NO.90所示、SEQ ID NO.91所示、SEQ ID NO.92所示、SEQ IDNO.93所示、SEQ ID NO.94所示、SEQ ID NO.95所示、SEQ ID NO.96所示、SEQ ID NO.97所示、SEQ ID NO.98所示、SEQ ID NO.99所示、SEQ ID NO.100所示、SEQ ID NO.101所示、SEQID NO.102所示、SEQ ID NO.103所示、SEQ ID NO.104所示、SEQ ID NO.105所示、SEQ IDNO.106所示、SEQ ID NO.107所示、SEQ ID NO.108所示、SEQ ID NO.111所示、SEQ IDNO.112所示、SEQ ID NO.113所示、SEQ ID NO.114所示、SEQ ID NO.115所示、SEQ IDNO.116所示、SEQ ID NO.118、SEQ ID NO.122所示和SEQ ID NO.123所示的序列。
97.根据实施方式74-96中任一项所述的系统，其中所述多引物组合B包含选自下组的一个或多个序列：SEQ ID NO.86所示、SEQ ID NO.87所示、SEQ ID NO.88所示、SEQ IDNO.89所示、SEQ ID NO.90所示、SEQ ID NO.91所示、SEQ ID NO.92所示、SEQ ID NO.93所示、SEQ ID NO.94所示、SEQ ID NO.95所示、SEQ ID NO.96所示、SEQ ID NO.97所示、SEQ IDNO.98所示、SEQ ID NO.99所示、SEQ ID NO.100所示、SEQ ID NO.101所示、SEQ ID NO.102所示、SEQ ID NO.103所示、SEQ ID NO.104所示、SEQ ID NO.105所示、SEQ ID NO.106所示、SEQ ID NO.107所示、SEQ ID NO.108所示、SEQ ID NO.117所示、SEQ ID NO.119所示、SEQID NO.120所示和SEQ ID NO.121所示的序列。
98.根据实施方式74-97中任一项所述的系统，其中所述多引物组合C包含选自下组的一个或多个序列：SEQ ID NO.109所示、SEQ ID NO.110所示、SEQ ID NO.111所示、SEQID NO.112所示、SEQ ID NO.113所示、SEQ ID NO.114所示、SEQ ID NO.115所示、SEQ IDNO.116所示、SEQ ID NO.117所示、SEQ ID NO.118所示、SEQ ID NO.119所示、SEQ IDNO.120所示、SEQ ID NO.121所示、SEQ ID NO.122所示和SEQ ID NO.123所示的序列。
99.根据实施方式51所述的系统，其中所述白血病包括T细胞急性淋巴细胞白血病，所述靶标基因包括T细胞受体区域的基因重排；所述T细胞受体区域的基因包括选自下组的一个或多个：T细胞受体A、T细胞受体D、T细胞受体B和T细胞受体G；且所述能够特异性扩增靶标基因的试剂包括选自下述的一组或多组引物组合：
1)正向引物：Vd1，反向引物：Jd1；
2)正向引物：Vd2，反向引物：Jd1；
3)正向引物：Vd3，反向引物：Jd1；
4)正向引物：Vd2，反向引物：Dd3；
5)正向引物：Dd2，反向引物：Dd3；
6)正向引物：Dd2，反向引物：Jd1；
7)正向引物：Vd2，反向引物：Ja29；
8)正向引物：Vd2，反向引物：Ja9、Ja29、Ja30、Ja48、Ja49、Ja52、Ja54、Ja55、Ja56、Ja57、Ja58、Ja59和Ja61；
9)正向引物：Vg1，反向引物：Jg1和Jg2；
10)正向引物：Vg2，反向引物：Jg1和Jg2；
11)正向引物：Vg3，反向引物：Jg1和Jg2；
12)正向引物：Vg4，反向引物：Jg1和Jg2；
13)正向引物：Sildb，反向引物：Taldb1；
14)TCRB多引物组合A；
15)TCRB多引物组合B；和
16)TCRB多引物组合C。
100.根据实施方式99所述的系统，其中所述引物Vg3包含选自下组的序列：SEQ IDNO.51所示和SEQ ID NO.52所示的序列。
101.根据实施方式99-100中任一项所述的系统，其中所述引物Vd3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.63所示和SEQ ID NO.64所示的序列。
102.根据实施方式99-101中任一项所述的系统，其中所述引物Vg1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.47所示和SEQ ID NO.48所示的序列。
103.根据实施方式99-102中任一项所述的系统，其中所述引物Vg2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.49所示和SEQ ID NO.50所示的序列。
104.根据实施方式99-103中任一项所述的系统，其中所述引物Vg4包含选自下组的序列：SEQ ID NO.53所示和SEQ ID NO.54所示的序列。
105.根据实施方式99-104中任一项所述的系统，其中所述引物Jg1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.55所示和SEQ ID NO.56所示的序列。
106.根据实施方式99-105中任一项所述的系统，其中所述引物Jg2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.57所示和SEQ ID NO.58所示的序列。
107.根据实施方式99-106中任一项所述的系统，其中所述引物Vd2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.61所示和SEQ ID NO.62所示的序列。
108.根据实施方式99-107中任一项所述的系统，其中所述引物Dd2包含选自下组的序列：SEQ ID NO.65所示和SEQ ID NO.66所示的序列。
109.根据实施方式99-108中任一项所述的系统，其中所述引物Dd3包含选自下组的序列：SEQ ID NO.67所示和SEQ ID NO.68所示的序列。
110.根据实施方式99-109中任一项所述的系统，其中所述引物Ja9包含选自下组的序列：SEQ ID NO.71所示的序列。
111.根据实施方式99-110中任一项所述的系统，其中所述引物Ja29包含选自下组的序列：SEQ ID NO.72所示的序列。
112.根据实施方式99-111中任一项所述的系统，其中所述引物Ja30包含选自下组的序列：SEQ ID NO.73所示的序列。
113.根据实施方式99-112中任一项所述的系统，其中所述引物Ja48包含选自下组的序列：SEQ ID NO.74所示的序列。
114.根据实施方式99-113中任一项所述的系统，其中所述引物Ja49包含选自下组的序列：SEQ ID NO.75所示的序列。
115.根据实施方式99-114中任一项所述的系统，其中所述引物Ja52包含选自下组的序列：SEQ ID NO.76所示的序列。
116.根据实施方式99-115中任一项所述的系统，其中所述引物Ja54包含选自下组的序列：SEQ ID NO.77所示的序列。
117.根据实施方式99-116中任一项所述的系统，其中所述引物Ja55包含选自下组的序列：SEQ ID NO.78所示的序列。
118.根据实施方式99-117中任一项所述的系统，其中所述引物Ja56包含选自下组的序列：SEQ ID NO.79所示的序列。
119.根据实施方式99-118中任一项所述的系统，其中所述引物Ja57包含选自下组的序列：SEQ ID NO.80所示的序列。
120.根据实施方式99-119中任一项所述的系统，其中所述引物Ja58包含选自下组的序列：SEQ ID NO.81所示的序列。
121.根据实施方式99-120中任一项所述的系统，其中所述引物Ja59包含选自下组的序列：SEQ ID NO.82所示的序列。
122.根据实施方式99-121中任一项所述的系统，其中所述引物Ja61包含选自下组的序列：SEQ ID NO.83所示的序列。
123.根据实施方式99-122中任一项所述的系统，其中所述多引物组合A包含选自下组的一个或多个序列：SEQ ID NO.86所示、SEQ ID NO.87所示、SEQ ID NO.88所示、SEQID NO.89所示、SEQ ID NO.90所示、SEQ ID NO.91所示、SEQ ID NO.92所示、SEQ ID NO.93所示、SEQ ID NO.94所示、SEQ ID NO.95所示、SEQ ID NO.96所示、SEQ ID NO.97所示、SEQID NO.98所示、SEQ ID NO.99所示、SEQ ID NO.100所示、SEQ ID NO.101所示、SEQ IDNO.102所示、SEQ ID NO.103所示、SEQ ID NO.104所示、SEQ ID NO.105所示、SEQ IDNO.106所示、SEQ ID NO.107所示、SEQ ID NO.108所示、SEQ ID NO.111所示、SEQ IDNO.112所示、SEQ ID NO.113所示、SEQ ID NO.114所示、SEQ ID NO.115所示、SEQ IDNO.116所示、SEQ ID NO.118所示、SEQ ID NO.122所示和SEQ ID NO.123所示的序列。
124.根据实施方式99-123中任一项所述的系统，其中所述多引物组合B包含选自下组的一个或多个序列：SEQ ID NO.86所示、SEQ ID NO.87所示、SEQ ID NO.88所示、SEQID NO.89所示、SEQ ID NO.90所示、SEQ ID NO.91所示、SEQ ID NO.92所示、SEQ ID NO.93所示、SEQ ID NO.94所示、SEQ ID NO.95所示、SEQ ID NO.96所示、SEQ ID NO.97所示、SEQID NO.98所示、SEQ ID NO.99所示、SEQ ID NO.100所示、SEQ ID NO.101所示、SEQ IDNO.102所示、SEQ ID NO.103所示、SEQ ID NO.104所示、SEQ ID NO.105所示、SEQ IDNO.106所示、SEQ ID NO.107所示、SEQ ID NO.108所示、SEQ ID NO.117所示、SEQ IDNO.119所示、SEQ ID NO.120所示和SEQ ID NO.121所示的序列。
125.根据实施方式99-124中任一项所述的系统，其中所述多引物组合C包含选自下组的一个或多个序列：SEQ ID NO.109所示、SEQ ID NO.110所示、SEQ ID NO.111所示、SEQ ID NO.112所示、SEQ ID NO.113所示、SEQ ID NO.114所示、SEQ ID NO.115所示、SEQID NO.116所示、SEQ ID NO.117所示、SEQ ID NO.118所示、SEQ ID NO.119所示、SEQ IDNO.120所示、SEQ ID NO.121所示、SEQ ID NO.122所示和SEQ ID NO.123所示的序列。
126.根据实施方式99-125中任一项所述的系统，其中所述引物Vd1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.59所示和SEQ ID NO.60所示的序列。
127.根据实施方式99-126中任一项所述的系统，其中所述引物Jd1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.69所示和SEQ ID NO.70所示的序列。
128.根据实施方式99-127中任一项所述的系统，其中所述引物Sildb包含选自下组的序列：SEQ ID NO.84所示的序列。
129.根据实施方式99-128中任一项所述的系统，其中所述引物Taldb1包含选自下组的序列：SEQ ID NO.85所示的序列。
130.根据实施方式52-98中任一项所述的系统，其中所述白血病为B细胞急性淋巴细胞白血病。
131.根据实施方式99-129中任一项所述的系统，其中所述白血病为T细胞急性淋巴细胞白血病。
132.根据实施方式1-131中任一项所述的系统，其中所述检测模块还包括鉴定单元，该鉴定单元包含用于鉴别所述靶标特异性扩增产物的试剂和装置，从而鉴别出所述靶标特异性扩增产物中源自所述受试者的白血病细胞的特征性扩增产物。
133.根据实施方式132所述的系统，其中所述鉴定单元包含对所述靶标特异性扩增产物进行凝胶电泳分离所需的试剂和装置。
134.根据实施方式132-133中任一项所述的系统，其中所述检测模块还包括分析单元，该分析单元包含用于分析所述特征性扩增产物的试剂和装置，从而获得特异于所述受试者的白血病细胞的特征性基因序列。
135.根据实施方式134所述的系统，其中所述分析单元包含对所述特征性扩增产物进行核酸测序及序列分析所需的试剂和装置。
136.根据实施方式135所述的系统，其中所述分析单元包括鉴定所述特征性扩增产物的核酸序列中保守性核酸序列及受试者特异性核酸序列所需的试剂和装置，从而获得特异于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列。
137.根据实施方式135-136中任一项所述的系统，其中所述检测模块还包括识别单元，该识别单元包含能够特异性识别和/或扩增所述受试者的所述特征性基因序列的试剂和装置，从而判断所述受试者中残留白血病细胞的存在和/或比例。
138.根据实施方式137所述的系统，其中所述识别单元包含特异性扩增特异于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列的试剂或装置。
139.根据实施方式138所述的系统，其中所述识别单元还包含与非特征性基因序列结合的探针以及能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置。
140.根据实施方式139所述的系统，其中所述非特征性基因序列包括源自下组中的一种或多种基因的核酸序列：IgH、IgK、T细胞受体A、T细胞受体D、T细胞受体B、T细胞受体G和Tal 1。
141.根据实施方式140所述的系统，其中所述非特征性基因序列包括源自IgH的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ IDNO.124所示、SEQ ID NO.125所示、SEQ ID NO.126所示、SEQ ID NO.127所示、SEQ IDNO.128所示、SEQ ID NO.129所示、SEQ ID NO.130所示和SEQ ID NO.131所示的序列。
142.根据实施方式140-141中任一项所述的系统，其中所述非特征性基因序列包括源自IgH的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQID NO.173所示、SEQ ID NO.174所示、SEQ ID NO.175所示、SEQ ID NO.176所示、SEQ IDNO.177所示、SEQ ID NO.178所示、SEQ ID NO.179所示和SEQ ID NO.180所示的序列。
143.根据实施方式140-142中任一项所述的系统，其中所述非特征性基因序列包括源自IgK的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.132所示、SEQ ID NO.133所示、SEQ ID NO.134所示、SEQ ID NO.135所示、SEQ ID NO.136所示、SEQ ID NO.137所示、SEQ ID NO.138所示、SEQ ID NO.139所示、SEQID NO.140所示和SEQ ID NO.141所示的序列。
144.根据实施方式140-143中任一项所述的系统，其中所述非特征性基因序列包括源自IgK的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQID NO.181所示、SEQ ID NO.182所示、SEQ ID NO.183所示、SEQ ID NO.184所示、SEQ IDNO.185所示、SEQ ID NO.186所示、SEQ ID NO.187所示、SEQ ID NO.188所示、SEQ IDNO.189所示和SEQ ID NO.190所示的序列。
145.根据实施方式140-144中任一项所述的系统，其中所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体G的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.142所示、SEQ ID NO.143所示、SEQ ID NO.144所示、SEQ IDNO.145所示、SEQ ID NO.146所示、SEQ ID NO.147所示、SEQ ID NO.148所示、SEQ IDNO.149所示、SEQ ID NO.150所示和SEQ ID NO.151所示的序列。
146.根据实施方式140-145中任一项所述的系统，其中所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体G的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.191所示、SEQ ID NO.192所示、SEQ ID NO.193所示、SEQ ID NO.194所示、SEQ ID NO.195所示、SEQ ID NO.196所示、SEQ ID NO.197所示、SEQ ID NO.198所示、SEQID NO.199所示和SEQ ID NO.200所示的序列。
147.根据实施方式140-146中任一项所述的系统，其中所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体D和/或T细胞受体A的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.152所示、SEQ ID NO.153所示、SEQ ID NO.154所示、SEQ ID NO.155所示、SEQ ID NO.156所示和SEQ ID NO.157所示的序列。
148.根据实施方式140-147中任一项所述的系统，其中所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体D和/或T细胞受体A的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.201所示、SEQ ID NO.202所示、SEQ ID NO.203所示、SEQID NO.204所示、SEQ ID NO.205所示和SEQ ID NO.206所示的序列。
149.根据实施方式140-148中任一项所述的系统，其中所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体B的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.158所示、SEQ ID NO.159所示、SEQ ID NO.160所示、SEQ IDNO.161所示、SEQ ID NO.162所示、SEQ ID NO.163所示、SEQ ID NO.164所示、SEQ IDNO.165所示、SEQ ID NO.166所示、SEQ ID NO.167所示、SEQ ID NO.168所示、SEQ IDNO.169所示和SEQ ID NO.170所示的序列。
150.根据实施方式140-149中任一项所述的系统，其中所述非特征性基因序列包括源自T细胞受体B的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.207所示、SEQ ID NO.208所示、SEQ ID NO.209所示、SEQ ID NO.210所示、SEQ ID NO.211所示、SEQ ID NO.212所示、SEQ ID NO.213所示、SEQ ID NO.214所示、SEQID NO.215所示、SEQ ID NO.216所示、SEQ ID NO.217所示、SEQ ID NO.218所示和SEQ IDNO.219所示的序列。
151.根据实施方式140-150中任一项所述的系统，其中所述非特征性基因序列包括源自Tal 1的核酸序列，且所述能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置包含选自下组的序列：SEQ ID NO.171所示和SEQ ID NO.172所示的序列。
152.根据实施方式140-151中任一项所述的系统，其中所述非特征性基因序列包括源自Tal 1的核酸序列，且所述与非特征性基因序列结合的探针包含选自下组的序列：SEQ ID NO.220所示和SEQ ID NO.221所示的序列。
153.根据实施方式1-152中任一项所述的系统，其包括2个或2个以上的检测模块，其中至少一个检测模块用于在所述受试者接受治疗之前检测其中白血病细胞的存在和/或比例，且其中至少一个检测模块用于在所述受试者接受该治疗之后检测其中白血病细胞的存在和/或比例。
154.根据实施方式1-153中任一项所述的系统，其中所述检测模块包括治疗提示单元，其根据所检测的受试者中白血病细胞的存在和/或比例提示对相应受试者采用的后续治疗方案。
155.根据实施方式154所述的系统，其中当所检测的受试者中白血病细胞的比例为1/104以下时，所述治疗提示单元提示所述治疗成功且无需进行额外治疗。
156.根据实施方式154-155中任一项所述的系统，其中当所检测的受试者中白血病细胞的比例为1/104以上时，所述治疗提示单元提示所述治疗不完善且需要进行其它治疗或提高治疗强度。
157.根据实施方式154-156中任一项所述的系统，其中当所检测的受试者中白血病细胞的比例为1/104以上且1/103以下时，所述治疗提示单元提示可对所示受试者进行骨髓移植手术。
158.根据实施方式154-157中任一项所述的系统，其中当所检测的受试者中白血病细胞的比例为1/103以上时，所述治疗提示单元提示不适于对所述受试者进行骨髓移植手术，且应继续对所述受试者进行其它治疗或提高治疗强度。
159.根据实施方式158所述的系统，其中所述其它治疗选自所述候选药物筛选模块的所述监测单元提示为有效的所述候选药物，或者与其功能和/或效力相仿的疗法和/或药物。
不欲被任何理论所限，下文中的实施例仅仅是为了阐释本申请的装置、方法和系统的工作方式，而不用于限制本申请发明的范围。
实施例
实施例A建模模块：建立白血病患者特异性人源化疾病模型
实施例A1冷冻储存白血病患者的白血病细胞：
收集了约并4毫升白血病患者的骨髓样本(其中白血病细胞占90％以上)，并在培养基中制备了5毫升细胞悬液，用Ficoll进行密度梯度离心分离。此过程中，在所述细胞悬液的下层注入5毫升Ficoll单核细胞分离液，并在室温下、以800g离心30分钟。离心后，小心收集中间层的细胞，并将其转移到RPMI细胞培养基中，获得白血病细胞悬液。之后，将该细胞悬液在室温下、300g离心8分钟。用RPMI细胞培养基清洗沉淀的细胞，并在室温下、300g离心8分钟，去除上清。将得到的细胞悬浮于含有约10％DMSO的胎牛血清中，并将其制备为细胞密度为约2x107/ml至约5x107/ml的细胞悬液。将不准备立即使用的细胞冷冻储存在液氮中。
实施例A2白血病细胞的准备
在37℃下快速溶解实施例A1中冷冻储存的白血病细胞，并通过RPMI慢速滴定法，将冷冻的细胞悬浮于RPMI培养基，从而从液氮中复苏实施例A1中制备获得的白血病细胞。在室温下、180g离心8分钟，去除上清，得到富集的细胞。用无菌的PBS缓冲液清洗所述细胞一次，并于室温下、80g离心8分钟。然后，用PBS缓冲液制备细胞浓度为4x107/ml的细胞悬液。
实施例A3去除细胞悬液中的T细胞
采用Miltenyi公司的磁珠
Figure BDA0003833762920000561
去除所述细胞悬液中的CD3阳性细胞(即T细胞)。通过流式细胞仪分析，对白血病患者的血液样本中的CD3阳性T细胞进行检测，如图1所示，右上角显示样本中含有22.6％的CD45/CD3共阳性细胞。将90微升实施例A2中制备的所述经分离的白血病细胞悬液与10微升包被有CD3抗体的
Figure BDA0003833762920000562
磁珠(Miltenyi公司生产，序列号：130-050-101)共孵育1小时。使所述共培养获得的培养液通过高磁场的筛选管，从而将CD3阳性的细胞被所述高磁场束缚在筛选管中。收集顺利通过所述筛选管的细胞，即为去除了CD3阳性T细胞的源自患者的白血病细胞样本。结果如图2和图3所示，其中图2显示了去除了CD3阳性T细胞的、从所述筛选管中通过的白血病细胞。图3显示了滞留在筛选管中的CD3阳性T细胞。
实施例A4对免疫缺陷型小鼠的处理
对于急性淋巴细胞白血病ALL选用的缺陷型小鼠为NSG小鼠，对于急性髓性白血病AML选用的缺陷型小鼠为MISTRG小鼠。对两种类型的小鼠分别进行X-射线照射，照射剂量为：NSG小鼠为250cGy，MISTRG小鼠为600cGy。照射采用4MV的X-射线，照射强度为325cGy/分钟。在进行细胞接种前的12-24小时对所述小鼠进行X-射线照射，照射结束后，将所述小鼠返还于饲养笼中。
实施例A5白血病细胞接种和小鼠生长状况监测
在无特定病原体(SFB)级小鼠房中，饲养繁殖实施例A4中所述的免疫系统缺陷的小鼠，挑选年龄在5-7周之间的小鼠进行接种。接种前，用175瓦红外灯照射并加热小鼠，并将实施例A3中制备的去除了CD3阳性T细胞的白血病细胞通过尾静脉注射接种到所述小鼠体内(接种量见表1)，接种后每天监控小鼠的行为情况。从接种后2-3周开始，用流式细胞仪每周监测huCD45+CD19+细胞在经接种的小鼠外周血中的比例，从而监测白血病细胞在小鼠体内的植入和生长状态。对于不同的患者来源的细胞，其监测起始日期不同，如表1所示。由表1可见，在各样本中，均成功构建了白血病人源化疾病模型。
表1
Figure BDA0003833762920000571
Figure BDA0003833762920000581
实施例A6从小鼠脾脏分离人源化的白血病细胞
当实施例A5中所述的疾病模型的外周血中的huCD45+细胞达到50％以上时(参见上表)，将该模型小鼠用二氧化碳处死。用无菌的手术剪刀分离该小鼠的脾脏，并置于RPMI培养基中。将小鼠脾脏置于无菌的金属滤网中碾碎，并收集组织碎片于RPMI培养基中。使用孔径为40微米的塑料滤网，进一步碾碎脾脏组织碎片，制备得到30毫升细胞悬液。在该细胞悬液的下层注入15毫升淋巴分离液(Ficoll溶液)，并在室温下、800g离心30分钟。小心收集中间层细胞(富集有白血病细胞的细胞层)，并将其转移到RPMI细胞培养基中。将所获得的白血病细胞悬液在室温下、300g离心8分钟。用RPMI细胞培养基清洗经沉淀的细胞，并在室温下、300g进行离心。将离心后获得的细胞沉淀悬浮于含有10％DMSO的胎牛血清中，并制备为细胞密度为2x107-5x107/mL的细胞储备液，将其冷冻储存在液氮中备用。
实施例B白血病患者特异性人源化疾病模型在候选药物筛选中的应用
实施例B1使用白血病人源化疾病模型对药物效力进行评估
当所构建的模型小鼠的外周血中huCD45+细胞达到1-5％时，将该小鼠随机分组到溶媒对照组和给药组中，每组6只小鼠，施用候选药物进行治疗。所选用的示例性候选药物以及药物所对应的给药时间、给药量和给药方式如下：
长春新碱：腹腔注射、0.5mg/kg、每周一次、持续4周；
氨甲叶酸：腹腔注射、5mg/kg、每日一次、隔周注射持续8周；
地塞米松：腹腔注射、15mg/kg、每日一次、持续4周；
阿霉素：静脉注射、1.5mg/kg、每周一次、持续4周；
左旋门冬酰胺：腹腔注射、1000KU/kg、每日一次、持续4周。
对模型小鼠施用候选药物后，用流式细胞仪每周监测huCD45+和/或CD19+细胞在所述小鼠外周血细胞中所占比例的变化，并将所述溶媒对照组和给药组的小鼠进行比较，从而了解候选药物对白血病治疗的效力。
本实施例中，对于药物效力的评估标准如图4所示，图4中左侧曲线部分为人白血病细胞在给药期间在小鼠外周血中的比例，右侧图例显示根据候选药物对人细胞(huCD45+和/或CD19+)比例的影响，将药物划分为六个等级。可见，只有当药物杀死小鼠体内白血病细胞，并使其比例保持低于1％，并维持2周以上时，认为该药物为使疾病完全缓解。
实施例B2对本申请疾病模型临床相关性的验证
本实施例中，以地塞米松为例，验证了本申请的疾病模型的临床相关性，结果如表2所示。病情被治愈或者缓解，即患者在治疗后血液中的白血病细胞完全或部分消失，是临床上评价药物效力的重要指标。如表2所示，对于临床上耐药组的病人，相对于候选药物敏感组，其完全缓解持续时间短。相应地，在与其对应的疾病模型中，施用候选药物后完全缓解的持续时间也较短。
表2
Figure BDA0003833762920000591
随后，还对本申请的疾病模型中的细胞进行了基因组分析。简要地，对药物敏感组和耐药组的所述源自患者的疾病模型中的白血病细胞进行了全基因组的基因表达的分析，结果如图5所示。首先对源自白血病-50(临床上显示耐药性)患者和白血病-54(临床上显示药物敏感性)患者的本申请的疾病模型进行了体内地塞米松药物实验(图5A和B)，其实验方法和施药量如实施例7所述。此外，对源自白血病-50和白血病-54这两位患者的白血病细胞进行了体内细胞毒性实验(图5C)，其方法为阿尔玛蓝荧光显色法。这些结果均表明，被检测的药物在本申请所述的疾病模型中的效果与在该模型所源自的患者中的效果是一致的。
此后，用全基因表达的微阵列基因芯片对本申请所述的疾病模型中的细胞进行了基因表达分析。简要地，对所述疾病模型施用地塞米松，施药8小时后，提取小鼠体内的白血病细胞，分离RNA，通过逆转录得到cDNA，并将cDNA置于微阵列基因芯片上进行全集因表达分析。将该结果与未施药的对照组结果进行比对，得到了地塞米松诱导的基因表达的信息。在图5D中，首先通过主成分分析(PCA)证实了数据的可靠性；而后对比了药物敏感的和耐药的疾病模型在有无地塞米松(Dex)给药的条件下的基因表达情况(仅展示了部分代表性基因，图5E)，可见，同样的基因在这两种模型中的表达情况以及给药前后表达的变化显著不同。进而，将该实验扩展至源自基因型匹配的5位敏感组患者和5位耐药组患者的本申请的疾病模型(图5F)，可见，药物敏感的疾病模型间基因表达情况的变化相似，耐药的疾病模型间基因表达的情况也相似，而这两类模型之间基因表达情况的变化完全不同。
另外，还用全基因表达的微阵列基因芯片对患者的细胞和由其构建的疾病模型中的细胞进行了比对(图5G)，并且根据全基因表达数据进行分层聚类(HierarchyClustering)的生物信息学研究，证明了源自患者的细胞的基因组与所构建的相应疾病模型中的白血病细胞的基因组完全匹配。图5G中，患者编号中P代表患者原代细胞，X1代表一次建模后获得的细胞，X2代表二次建模后获得的细胞。
实施例C检测所述受试者中白血病细胞的存在和/或比例
实施例C1急性淋巴细胞白血病(ALL)受试者靶标基因的扩增和鉴定
C1.1受试者DNA的获取
在每名被诊断患有急性淋巴细胞白血病的受试者接收治疗之前，获得源自该受试者的样品(例如，血细胞样品，或从所述细胞中提取的DNA样品)，并对该样品进行系列稀释(例如，稀释10倍，100倍，1000倍，1万倍，10万倍或更多倍)。在该受试者经受所述治疗之后，再次获得源自该受试者的样品(例如，血细胞样品，或从所述细胞中提取的DNA样品)。
对于每名受试者，每次收集约2毫升其骨髓样本(在该骨髓样本中，白血病细胞比例为至少90％)。培养基中制备了5毫升该样本的细胞悬液，并用Ficoll进行密度梯度离心分离。此过程中，在所述细胞悬液的下层注入5毫升Ficoll淋巴细胞分离液，并在室温下、以800g离心30分钟。离心后，小心收集中间层的细胞，并将其转移到RPMI细胞培养基中，获得源自受试者的白血病细胞悬液。
之后，将该白血病细胞悬液在室温下、300g离心8分钟。用RPMI细胞培养基清洗沉淀的细胞，并在室温下、300g离心8分钟，去除上清。将得到的细胞悬浮于含有约10％DMSO的胎牛血清中，并将其制备为细胞密度为约2x107/ml至约5x107/ml的细胞悬液。将不准备立即使用的细胞冷冻储存在液氮中。
用NucleoBond CB 20试剂盒(购自NucleoBond公司，按照试剂盒中的说明书进行操作)分离细胞悬液中的DNA，即得所述受试者的DNA。根据需要，对所获得的受试者DNA样品进行稀释。
C1.2受试者中靶标基因的扩增
(1)靶标基因包括：IgH、IgK、IgL、TCRA/D、TCRB和TCRG的编码区域。
(2)所使用的PCR反应体系为：10μL扩增缓冲液、4种dNTP各200μmol/L、100pmol/L引物、2μg模板(在实施例C1.1中获得的源自受试者的DNA)、2.5μg TaqDNA聚合酶、1.5mmol/L Mg2+和补足至100μL体积的双蒸水。其中，进行PCR反应所需的试剂购自Takara公司。
(3)PCR反应条件如下表所示：
Figure BDA0003833762920000611
(4)针对上述不同的靶标基因，分别采用不同的引物组合进行PCR：
a)、针对源自B细胞急性淋巴细胞白血病(B-ALL)受试者的样品，共使用24组引物组合，其中：
对靶标基因IgH，使用如表3所示的引物组合：
表3
正向引物名称 反向引物名称
第1组 VH1/7 JH cons
第2组 VH2 JH cons
第3组 VH3 JH cons
第4组 VH4 JH cons
第5组 VH5 JH cons
第6组 VH6 JH cons
第7组 DH1/4/5/7 JH cons
第8组 DH2 JH cons
第9组 DH3 JH cons
第10组 DH6 JH cons
对靶标基因IgK，使用如表4所示的引物组合：
表4
Figure BDA0003833762920000612
Figure BDA0003833762920000621
对靶标基因TCR，使用如表5所示的引物组合：
表5
Figure BDA0003833762920000622
b)、针对源自T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)受试者的样品，共使用16组引物组合，其中：
对靶标基因TCR，使用如表6所示的引物组合：
表6
Figure BDA0003833762920000623
Figure BDA0003833762920000631
c)、上述引物的具体核苷酸序列如表7所示：
表7
Figure BDA0003833762920000632
Figure BDA0003833762920000641
Figure BDA0003833762920000651
Figure BDA0003833762920000661
C1.3靶标基因的PCR扩增产物的分离：
对实施例C1.2所得的PCR扩增产物进行凝胶电泳分离，其中使用2％(w/w)琼脂糖凝胶在电压100V下电泳2小时。
图7反映了使用VH3和JH con引物组合扩增靶标基因IgH的凝胶电泳的结果。图7中，阳性对照组为采用已知IgH重排的细胞株(例如，B细胞性非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)细胞株)，按照实施例C1.1提取的DNA作为模板，进行PCR反应的扩增产物，其在400bp左右出现一个明显而清晰的DNA条带，而在显示的4位受试者中，第2位和第3位受试者均出现了类似的DNA条带。这说明对这两位受试者而言这个条带是具有特异性的。
类似地，通过比对针对30个靶标基因区域进行扩增获得的PCR扩增产物的凝胶电泳分析结果(包括本申请表1-4中所示的10个IgH区域，4个IgK区域和16个TCR区域)，获得了对于每位受试者而言，特异性的PCR扩增产物(即该受试者的白血病细胞的特征性扩增产物)。
由于白血病一般为单克隆性疾病，因此所有的白血病细胞基本上都源于一个基因变异的细胞克隆。基于细胞的多样性，正常人不会出现特异性的免疫球蛋白重排，而白血病细胞群却表现为对特定的基因重排的特异性，即该特定区域发生大量扩增，显示出特定受试者特异性的DNA扩增产物条带。
实施例C2分析受试者的白血病细胞的特征性扩增产物
C2.1基因测序
回收实施例C1.3中鉴别出的各受试者白血病细胞的特征性扩增产物，然后采用“GeneScanning”的方法对获得的受试者白血病细胞的特征性扩增产物进行基因测序，得到各受试者的血病细胞特征性扩增产物的具体核苷酸序列。
“GeneScanning”的具体操作步骤参见文献Linke B,Bolz I,Fayyazi A,vonHofen M,Pott C,Bertram J et al.Automated high resolution PCR fragmentanalysis for identification of clonally rearranged immunoglobulin heavy chaingenes.Leukemia 1997；11:1055–1062.中“Cloning and DNA sequencing”部分的记载。
C2.2基因测序的结果分析
利用BLAST工具(参见blast.ncbi.nlm.nih.gov)，将实施例C2.1中获得的各受试者白血病细胞特征性扩增产物的核苷酸序列与NCBI数据库中没有患白血病的正常人所具有的对应靶标基因的核苷酸序列进行比对，从而鉴别出各受试者白血病细胞特征性扩增产物的核苷酸序列中，哪些是保守性序列(即也存在于其它受试者中)，哪些是受试者白血病细胞的特征性基因序列(即，可用于表征和识别该受试者的白血病细胞，且基本不存在于其它受试者中或非白血病细胞中)。
以图7中从第2位受试者回收的片段长度为400bp的特征性扩增产物为例，其BLAST的结果如图8所示。图8中，框中的序列表示保守的序列(即也存在于其它受试者中)，而两个框之间的核苷酸序列即为受试者的白血病细胞的特征性基因序列。根据图8可知，受试者的白血病细胞的特征性基因序列为ACGGGGGCCGTAG。
实施例C3对白血病细胞的特征性基因序列的分析
C3.1对受试者白血病细胞特征性基因序列的qPCR检测
(1)基于实施例C2.2中分析获得的各受试者白血病细胞的特征性基因序列(例如，作为示例的基因序列ACGGGGGCCGTAG)，设计能够特异性对其进行扩增的个体化扩增引物组。
(2)进行荧光定量PCR扩增反应
将步骤(1)中所设计的引物，与特异性结合非特征性基因序列的探针、以及特异性扩增非特征性基因序列的引物组相组合，即采用针对于特定受试者白血病细胞的特征性基因序列设计的引物、适于所有受试者的非特征性基因扩增引物(如表8所示)和荧光探针(如表8所示)来进行qPCR反应。在qPCR中，每对引物中有一条引物是特异于特定的受试者的白血病细胞的特征性基因序列的，而另一条引物是针对所有受试者的非特征性基因的，并且所使用的荧光探针也是针对所有受试者的非特征性基因的。
表8
Figure BDA0003833762920000671
Figure BDA0003833762920000681
Figure BDA0003833762920000691
(3)qPCR反应体系为：2μL DNA模板(即实施例1.1中获得的受试者白血病细胞DNA)、0.3μL正向引物、0.3μL反向引物、0.4μL荧光探针、10μL Taqman Universal PCRMaster Mix和7μL dH2O。
(4)qPCR反应条件如下表所示：
Figure BDA0003833762920000701
(5)qPCR反应结果
以步骤(1)中获得的经系列稀释(例如，稀释10倍，100倍，1000倍，1万倍或10万倍)的治疗前受试者DNA样品作为模板，按照本实施例中所描述的，分别进行qPCR反应，从而建立一系列对应于各不同DNA样品浓度的标准扩增曲线。
此外，还以步骤(1)中获得的治疗后该受试者的DNA样品作为模板，按照本实施例中所描述的进行qPCR反应，获得治疗后测定结果。通过将所述治疗后测定结果与所述标准扩增曲线进行比较，来判断经过治疗后的该受试者中白血病细胞特征性基因序列的比例，并据此判断经过治疗后，所述受试者中白血病细胞的比例A。
以用表6中IgH引物(GCGCGRAACAGGTACTGG(SEQ ID NO:126)及其相应探针TCTCCTATACTACACGCTCT)(SEQ ID NO:175)和第2名受试者的患者特异性引物(CCGTGGTGTCACA(SEQ ID NO:222))对实施例C2中所述的示例性基因序列ACGGGGGCCGTAG进行qPCR扩增的结果为例，结果如图9所示。将接受治疗15天后该受试者的DNA样品作为模板，所获得的qPCR结果如图9中“第15天”的箭头所指，将该结果与系列标准曲线(图9中分别使用白血病细胞DNA比例为1/10、1/102、1/103、1/104、5/105的样品作为模板，进行本实施例描述的qPCR反应所获得的结果，分别标记为10-1、10-2、10-3、10-4以及5x10-5)进行比较，可以看到，经过15天的治疗后，所述受试者体内包含的白血病细胞的比例为约1/102。
类似地，可利用本申请中描述的方法和系统对所有受试者中的残留白血病细胞比例进行检测。
C3.2 qPCR检测的结果分析
实施例C3.1中测定的受试者中白血病细胞的比例A可用于指导后续的治疗方案(如表9所示)：在A>1/104的情况下，可进一步分析所述比例A的大小，从而判断是否适于对所述受试者进行骨髓移植。例如，若1/104<A<1/103，可表明可以对所述受试者进行骨髓移植手术；若A>1/103，可表明所述受试者体内存在大量的白血病细胞，由于较高的白血病细胞残留度会使得白血病复发的可能性大大增加，因此这种情况下应认为所述受试者不适于进行骨髓移植手术，而应继续接受新一轮的治疗或提高治疗的强度
表9
Figure BDA0003833762920000711
可见，根据图9的结果，该受试者还应继续接受治疗或提高治疗的强度。
图10和图11可以进一步说明上述的实施例A-C所反映的本申请所述的白血病诊疗系统。具体地，图10是本申请所述白血病诊疗系统的操作流程一个实例的示意图。例如，受试者去医院就诊后被确诊为患有白血病，此时通过所述白血病诊疗系统的建模模块，构建受试者特异性人源化疾病模型；此后受试者接受本领域常规的、标准化的治疗，当该治疗结束后，再借助所述白血病诊疗系统的检测模块，在分子水平上检测受试者白血病细胞的存在和/或比例；如果检测的结果说明该受试者有较大的几率会复发白血病，或者白血病细胞的比例过高，则说明受试者已经对上述常规的、标准化的治疗产生了耐药性；可见在这样的情况下，需要特异性于受试者的有效药物，因此利用所述白血病诊疗系统的候选药物筛选模块，利用受试者特异性人源化疾病模型筛选候选药物(化疗药、靶向药)，根据前文所述的候选药物的等级结果，选取等级5或等级6的候选药物指导临床治疗，使该受试者接受特异性于自身的筛选药物的治疗；治疗一段时间后，若借助所述白血病诊疗系统的检测模块分子水平上显示检测受试者白血病细胞的比例很低或根本没有，则认为所述白血病诊疗系统所获得的筛选药物对该受试者的疗效十分显著。
图11则是本申请所述白血病诊疗系统中各功能单元的关系的一个实例的示意图。所述白血病诊疗系统可含有建模模块、检测模块和候选药物筛选模块三大模块，其中检测模块可含有2个或以上。每个模块都含有若干个发挥不同功能的单元。
具体而言，所述建模模块可包括包含源自所述受试者的白血病细胞悬浮液的样品单元、包含放射性处理装置的辐射单元和用于将所述白血病细胞悬浮液接种到经所述辐射单元处理的免疫缺陷型小鼠的接种单元。
所述建模模块还可以包括能够分离受试者样品的分离单元。在经所述样品单元处理前，可经所述分离单元处理。所述建模模块还可以包括去除源自非T细胞型白血病受试者的样品中的T细胞从而得到所述白血病细胞悬浮液的T细胞去除单元。在经所述样品单元处理前，或者，在经所述分离单元处理后且在经所述样品单元处理前，可经所述T细胞去除单元处理。所述建模模块还可以包括采用红外光源对个体进行照射的红外照射及加热单元。在经所述辐射单元处理前，可经所述红外照射及加热单元处理。所述建模模块还可以包括监测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况的监测单元。在经所述接种单元处理后，可经所述监测单元处理。所述建模模块还可以包括对所述疾病模型的脾脏进行处理的脾脏处理单元。在经所述接种单元处理后，或者，在经所述接种单元处理后且在经所述监测单元处理前，可经所述监测单元处理。所述建模模块还可以包括液氮。在经所述接种监测单元处理后，可经液氮处理。
所述检测模块可包括特异性扩增靶标基因从而获得靶标特异性扩增产物的扩增单元。所述检测模块还可包括能够鉴别出所述靶标特异性扩增产物中源自所述受试者的白血病细胞的特征性扩增产物的鉴定单元。在经所述扩增单元处理后，可经所述鉴定单元处理。所述检测模块还可包括能够获得特异于所述受试者的白血病细胞的特征性基因序列的分析单元。在经所述扩增单元处理后，可经所述鉴定单元处理。所述检测模块还可包括能够判断所述受试者中残留白血病细胞的存在和/或比例的识别单元。在经所述分析单元处理后，可经所述识别单元处理。所述检测模块还可包括能够根据所检测的受试者中白血病细胞的存在和/或比例提示对相应受试者采用的后续治疗方案的治疗提示单元。在经所述识别单元处理后，可经所述治疗提示单元处理。
所述候选药物筛选模块可包括含有一种或多种药物的第一候选药物组、含有一种或多种药物的第二候选药物组。所述候选药物筛选模块还可以包括监测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况的监测单元。在经施用所述第一候选药物组和所述第二候选药物组后，可经所述监测单元处理。
前述详细说明是以解释和举例的方式提供的，并非要限制所附权利要求的范围。目前本文所列举的实施方式的多种变化对本领域普通技术人员来说是显而易见的，且保留在所附的权利要求和其等同方案的范围内。
Figure IDA0003833762980000011
Figure IDA0003833762980000021
Figure IDA0003833762980000031
Figure IDA0003833762980000041
Figure IDA0003833762980000051
Figure IDA0003833762980000061
Figure IDA0003833762980000071
Figure IDA0003833762980000081
Figure IDA0003833762980000091
Figure IDA0003833762980000101
Figure IDA0003833762980000111
Figure IDA0003833762980000121
Figure IDA0003833762980000131
Figure IDA0003833762980000141
Figure IDA0003833762980000151
Figure IDA0003833762980000161
Figure IDA0003833762980000171
Figure IDA0003833762980000181
Figure IDA0003833762980000191
Figure IDA0003833762980000201
Figure IDA0003833762980000211
Figure IDA0003833762980000221
Figure IDA0003833762980000231
Figure IDA0003833762980000241
Figure IDA0003833762980000251
Figure IDA0003833762980000261
Figure IDA0003833762980000271
Figure IDA0003833762980000281
Figure IDA0003833762980000291
Figure IDA0003833762980000301
Figure IDA0003833762980000311
Figure IDA0003833762980000321
Figure IDA0003833762980000331
Figure IDA0003833762980000341
Figure IDA0003833762980000351
Figure IDA0003833762980000361
Figure IDA0003833762980000371
Figure IDA0003833762980000381
Figure IDA0003833762980000391
Figure IDA0003833762980000401
Figure IDA0003833762980000411

Claims (10)

1.一种用于进行白血病诊疗的系统，其包括：
a)建模模块，其用于构建受试者特异性人源化疾病模型，所述受试者为白血病患者；
b)至少一个检测模块，其用于检测所述受试者中白血病细胞的存在和/或比例；
c)候选药物筛选模块；其中所述建模模块包括：
a1)样品单元，其包含源自所述受试者的白血病细胞悬浮液，所述悬浮液中白血病细胞的密度为2x107/ml至5x107/ml；
a2)辐射单元，其包含放射性处理装置，用于对适当的免疫缺陷型小鼠进行放射性处理；
a3)接种单元，其用于将所述白血病细胞悬浮液接种到经所述辐射单元处理的免疫缺陷型小鼠中；
a7)监测单元，用于监测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况；
其中所述至少一个检测模块包括：
b1)扩增单元，其包含能够特异性扩增靶标基因的试剂，以获得靶标特异性扩增产物；
其中所述靶标基因包括以下基因、其片段或其变体：IgH、IgK、T细胞受体A、T细胞受体D和T细胞受体B；
其中，所述靶标基因为IgH基因重排的试剂包括下述的引物组合：
1)正向引物：VH5，序列为SEQ ID NO.13所示的序列，反向引物：JH cons，序列为SEQ IDNO.19所示的序列；
2)正向引物：VH6，序列为SEQ ID NO.16所示的序列，反向引物：JH cons，序列为SEQ IDNO.19所示的序列；
其中，所述靶标基因为IgK基因重排的试剂包括下述的引物组合：
1)正向引物：Vk3，序列为SEQ ID NO.39所示的序列，反向引物：Kdel，序列为SEQ IDNO.45所示的序列；
其中，所述靶标基因为T细胞受体区域的基因包括：T细胞受体A、T细胞受体D和T细胞受体B；且所述能够特异性扩增靶标基因的试剂包括下述的引物组合：
1)正向引物：Vd2，序列为SEQ ID NO.61所示的序列，反向引物：Ja9、Ja29、Ja30、Ja48、Ja49、Ja52、Ja54、Ja55、Ja56、Ja57、Ja58、Ja59和Ja61，序列分别为SEQ ID NO.71、SEQ IDNO.72、SEQ ID NO.73、SEQ ID NO.74、SEQ ID NO.75、SEQ ID NO.76、SEQ ID NO.77、SEQ IDNO.78、SEQ ID NO.79、SEQ ID NO.80、SEQ ID NO.81、SEQ ID NO.82、SEQ ID NO.83 所示的序列；
2)TCRB多引物组合C，其中所述多引物组合C包含选自下组的一个或多个序列：SEQ IDNO.109所示、SEQ ID NO.110所示、SEQ ID NO.111所示、SEQ ID NO.112所示、SEQ IDNO.113所示、SEQ ID NO.114所示、SEQ ID NO.115所示、SEQ ID NO.116所示、SEQ IDNO.117所示、SEQ ID NO.118所示、SEQ ID NO.119所示、SEQ ID NO.120所示、SEQ IDNO.121所示、SEQ ID NO.122所示和SEQ ID NO.123所示的序列。
2.根据权利要求1所述的系统，所述候选药物筛选模块包括第一候选药物组和第二候选药物组；
其中所述第一候选药物组包括选自下组的一种或多种药物：长春新碱、地塞米松、左旋天冬酰胺酶、拓扑异构酶抑制剂、嘌呤核苷类衍生物、蛋白酶体抑制剂、mTOR抑制剂、达沙替尼、抗体类药物、全反式维甲酸、DNA损伤诱导剂、叶酸还原酶抑制剂、去乙酰基抑制剂、多受体酪氨酸激酶抑制剂、细胞毒性药物和维甲酰酚胺；且
其中所述第二候选药物组包括选自下组的一种或多种药物：蛋白激酶抑制剂、细胞凋亡调节剂、DNA分解剂、细胞分裂抑制剂、MDM2类致癌基因抑制剂、抗体类药物和其他化疗药物附加剂。
3.根据权利要求1所述的系统，所述候选药物筛选模块还包括监测单元，用于监测来自所述受试者的白血病细胞在经接种的所述免疫缺陷型小鼠体内的生长情况，所述监测单元包括检测所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例的试剂和装置，且所述监测单元被设置为，当该比例达到1％-5％时，提示可向所述小鼠施用候选药物，在药物施用后，持续监测所述huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞在所述小鼠外周血细胞中所占比例的变化，并依据该变化提示所述候选药物的效力，当施用所述候选药物后，监测到所述huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞在所述小鼠外周血细胞中所占比例保持低于1％、并维持该比例至少2周时，则提示所述候选药物为有效。
4.根据权利要求1所述的系统，其中所述建模模块还包括：
a4)分离单元，所述分离单元包含单核细胞分离液，所述单核细胞分离液为Ficoll，用于离心分离所述受试者的白血病细胞，所述离心分离为密度梯度离心分离，
a5)T细胞去除单元，所述T细胞去除单元含有包含CD3抗体的磁珠，其用于去除源自非T细胞型白血病受试者的样品中的T细胞，被去除的所述T细胞为CD3阳性T细胞，从而得到所述白血病细胞悬浮液，所述白血病细胞悬浮液中包含RPMI细胞培养基，
a6)红外照射及加热单元，用于对所述免疫缺陷型小鼠进行红外灯照射及加热，
a8)脾脏处理单元，该脾脏处理单元包括分离元件、破碎元件及悬浮元件，当经接种的所述小鼠外周血中huCD45+、huCD19+、huCD3+、和/或huCD33+细胞的比例至少为50％时，可通过所述分离元件分离所述小鼠的脾脏，通过所述破碎元件破碎经分离的所述小鼠的脾脏以获得脾脏细胞，并通过所述悬浮元件将所述脾脏细胞制备为所述白血病细胞悬浮液。
5.根据权利要求2所述的系统，其中所述第一候选药物组包括选自下组的一种或多种药物：长春新碱、地塞米松、左旋天冬酰胺酶、拓扑替康、氯法拉滨、卡非佐米、替西罗莫司、达沙替尼、硼替佐米、CD19抗体、全反式维甲酸、阿霉素、氨甲叶酸、SAHA、舒尼替尼、环磷酰胺和维甲酰酚胺，
其中，所述长春新碱适于根据如下要求施用于所述受试者特异性人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.5mg/kg，每周施用一次且持续施用3-6周，
其中，所述氨甲叶酸适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为3-6mg/kg，每两周施用一次，且持续施用6-10周，
其中，所述地塞米松适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为10-20mg/kg，每日施用一次且持续施用3-6周，
其中，所述阿霉素适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过静脉注射施用，每次施用量为0.5-3mg/kg，每周施用一次且持续施用3-6周，
其中，所述左旋天冬酰胺酶适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为500-2000KU/kg，每日施用一次且持续施用3-6周，
其中，所述拓扑替康适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.1-5mg/kg，每日施用一次且持续施用2-8周，给药两周后停药一周，
其中，所述氯法拉滨适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为10-100mg/kg，每日施用一次且持续施用3-6周，
其中，所述卡非佐米适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过静脉注射施用，每次施用量为0.1-10mg/kg，每周施用二次且持续施用3-6周，
其中，所述替西罗莫司适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为5-50mg/kg，每日施用一次且持续施用1-3周，
其中，所述达沙替尼适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过口服施用，每次施用量为5-50mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周，
其中，所述硼替佐米适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.1-20mg/kg，每周施用二次且持续施用4-8周，
其中，所述SAR3419适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.5-50mg/kg，每周施用一次且持续施用4-8周，
其中，所述全反式维甲酸适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为0.5-10mg/kg，每周施用一次且持续施用2-6周，
其中，所述SAHA适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为100-500mg/kg，每日施用一次且持续施用3-6周，
其中，所述舒尼替尼适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过口服施用，每次施用量为10-100mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周，
其中，所述环磷酰胺适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为30-300mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周，
其中，所述维甲酰酚胺适于根据如下要求施用于所述白血病人源化疾病模型：适于通过腹腔注射施用，每次施用量为20-200mg/kg，每日施用一次且持续施用2-6周。
6.根据权利要求2所述的系统，所述第二候选药物组中的所述蛋白激酶抑制剂包括选自下组的一种或多种药物：AZD8055、MLN0128、GSK690693、MK-2206、SAR245408、rapamycin、MLN0128、selumetinib、AZD6244、PCI-32765、ibrutinib、SGI-1776、dinaciclib、VS-4718、sorafenib、sunitinib和AZD1480，
所述第二候选药物组中的所述细胞凋亡调节剂包括选自下组的一种或多种药物：ABT-263(navitoclax)、ABT-199(venetoclax)、LCL161和birinapant，
所述第二候选药物组中的所述DNA分解剂包括选自下组的一种或多种药物：PR-104、cytarabine(CPX-351)、daunorubicin(Vyxeos)和temozolomide，
所述第二候选药物组中的所述细胞分裂抑制剂包括选自下组的一种或多种药物：eribulin、ispinesib和alisertib，
所述第二候选药物组中的所述MDM2类致癌基因抑制剂包括选自下组的一种或多种药物：MK-8242(SCH 900242)和RG7112，
第二候选药物组中的所述抗体类药物为SAR3419，
第二候选药物组中的所述其他化疗药物附加剂包括选自下组的一种或多种药物：alvespimycin，AT13387，PF-03084014，RO-4929097，MLN4924，PG11047，CX-5461,BMN-673，selinexor，bortezomib，curaxin和CBL0137。
7.根据权利要求1所述的系统，其中所述检测模块还包括鉴定单元，该鉴定单元包含用于鉴别所述靶标特异性扩增产物的试剂和装置，从而鉴别出所述靶标特异性扩增产物中源自所述受试者的白血病细胞的特征性扩增产物，所述鉴定单元包含对所述靶标特异性扩增产物进行凝胶电泳分离所需的试剂和装置，
所述检测模块还包括分析单元，该分析单元包含用于分析所述特征性扩增产物的试剂和装置，从而获得特异于所述受试者的白血病细胞的特征性基因序列，
所述检测模块还包括识别单元，该识别单元包含能够特异性识别和/或扩增所述受试者的所述特征性基因序列的试剂和装置，从而判断所述受试者中残留白血病细胞的存在和/或比例，所述识别单元包含特异性扩增特异于所述受试者白血病细胞的特征性基因序列的试剂或装置，元还包含与非特征性基因序列结合的探针以及能够扩增非特征性基因序列的试剂或装置，所述非特征性基因序列包括源自下组中的一种或多种基因的核酸序列：IgH、IgK、T细胞受体A、T细胞受体D、T细胞受体B、T细胞受体G和Tal 1，
其中，IgH的核酸序列选自下组的序列：SEQ ID NO.124所示、SEQ ID NO.125所示、SEQID NO.126所示、SEQ ID NO.127所示、SEQ ID NO.128所示、SEQ ID NO.129所示、SEQ IDNO.130所示和SEQ ID NO.131所示的序列，
其中，IgH的核酸序列选自下组的序列：SEQ ID NO.173所示、SEQ ID NO.174所示、SEQID NO.175所示、SEQ ID NO.176所示、SEQ ID NO.177所示、SEQ ID NO.178所示、SEQ IDNO.179所示和SEQ ID NO.180所示的序列，
其中，IgK的核酸序列选自下组的序列：SEQ ID NO.132所示、SEQ ID NO.133所示、SEQID NO.134所示、SEQ ID NO.135所示、SEQ ID NO.136所示、SEQ ID NO.137所示、SEQ IDNO.138所示、SEQ ID NO.139所示、SEQ ID NO.140所示和SEQ ID NO.141所示的序列，或者选自下组的序列：SEQ ID NO.181所示、SEQ ID NO.182所示、SEQ ID NO.183所示、SEQ IDNO.184所示、SEQ ID NO.185所示、SEQ ID NO.186所示、SEQ ID NO.187所示、SEQ IDNO.188所示、SEQ ID NO.189所示和SEQ ID NO.190所示的序列，
其中，源自T细胞受体G的核酸序列选自下组的序列：SEQ ID NO.142所示、SEQ IDNO.143所示、SEQ ID NO.144所示、SEQ ID NO.145所示、SEQ ID NO.146所示、SEQ IDNO.147所示、SEQ ID NO.148所示、SEQ ID NO.149所示、SEQ ID NO.150所示和SEQ IDNO.151所示的序列，或者选自下组的序列：SEQ ID NO.191所示、SEQ ID NO.192所示、SEQID NO.193所示、SEQ ID NO.194所示、SEQ ID NO.195所示、SEQ ID NO.196所示、SEQ IDNO.197所示、SEQ ID NO.198所示、SEQ ID NO.199所示和SEQ ID NO.200所示的序列，
其中，源自T细胞受体D和/或T细胞受体A的核酸序列选自下组的序列：SEQ ID NO.152所示、SEQ ID NO.153所示、SEQ ID NO.154所示、SEQ ID NO.155所示、SEQ ID NO.156所示和SEQ ID NO.157所示的序列，或者选自下组的序列：SEQ ID NO.201所示、SEQ ID NO.202所示、SEQ ID NO.203所示、SEQ ID NO.204所示、SEQ ID NO.205所示和SEQ ID NO.206所示的序列，
其中，源自T细胞受体B的核酸序列选自下组的序列：SEQ ID NO.158所示、SEQ IDNO.159所示、SEQ ID NO.160所示、SEQ ID NO.161所示、SEQ ID NO.162所示、SEQ IDNO.163所示、SEQ ID NO.164所示、SEQ ID NO.165所示、SEQ ID NO.166所示、SEQ IDNO.167所示、SEQ ID NO.168所示、SEQ ID NO.169所示和SEQ ID NO.170所示的序列，或者选自下组的序列：SEQ ID NO.207所示、SEQ ID NO.208所示、SEQ ID NO.209所示、SEQ IDNO.210所示、SEQ ID NO.211所示、SEQ ID NO.212所示、SEQ ID NO.213所示、SEQ IDNO.214所示、SEQ ID NO.215所示、SEQ ID NO.216所示、SEQ ID NO.217所示、SEQ IDNO.218所示和SEQ ID NO.219所示的序列，
其中，Tal 1的核酸序列选自下组的序列：SEQ ID NO.171所示和SEQ ID NO.172所示的序列，或者选自下组的序列：SEQ ID NO.220所示和SEQ ID NO.221所示的序列。
8.根据权利要求7所述的系统，其包括2个或2个以上的检测模块，其中至少一个检测模块用于在所述受试者接受治疗之前检测其中白血病细胞的存在和/或比例，且其中至少一个检测模块用于在所述受试者接受该治疗之后检测其中白血病细胞的存在和/或比例。
9.根据权利要求1所述的系统，其中所述检测模块包括治疗提示单元，其根据所检测的受试者中白血病细胞的存在和/或比例提示对相应受试者采用的后续治疗方案，其中当所检测的受试者中白血病细胞的比例为1/104以下时，所述治疗提示单元提示所述治疗成功且无需进行额外治疗，其中当所检测的受试者中白血病细胞的比例为1/104以上时，所述治疗提示单元提示所述治疗不完善且需要进行其它治疗或提高治疗强度，其中当所检测的受试者中白血病细胞的比例为1/104以上且1/103以下时，所述治疗提示单元提示可对所示受试者进行骨髓移植手术，其中当所检测的受试者中白血病细胞的比例为1/103以上时，所述治疗提示单元提示不适于对所述受试者进行骨髓移植手术，且应继续对所述受试者进行其它治疗或提高治疗强度，其中所述其它治疗选自所述候选药物筛选模块的所述监测单元提示为有效的所述候选药物，或者与其功能和/或效力相仿的疗法和/或药物。
10.根据权利要求1所述的系统，其中所述白血病包括B细胞急性淋巴细胞白血病和/或T细胞急性淋巴细胞白血病。
CN202211082237.XA 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统 Pending CN115927620A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211082237.XA CN115927620A (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211082237.XA CN115927620A (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统
CN201710366648.4A CN108937848B (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710366648.4A Division CN108937848B (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115927620A true CN115927620A (zh) 2023-04-07

Family

ID=64463059

Family Applications (6)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211082237.XA Pending CN115927620A (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统
CN202211082230.8A Pending CN115927619A (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统
CN202211082241.6A Pending CN115927622A (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统
CN202211095387.4A Pending CN116162704A (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统
CN201710366648.4A Active CN108937848B (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统
CN202211082238.4A Pending CN115927621A (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统

Family Applications After (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211082230.8A Pending CN115927619A (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统
CN202211082241.6A Pending CN115927622A (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统
CN202211095387.4A Pending CN116162704A (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统
CN201710366648.4A Active CN108937848B (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统
CN202211082238.4A Pending CN115927621A (zh) 2017-05-23 2017-05-23 用于进行白血病诊疗的系统

Country Status (1)

Country Link
CN (6) CN115927620A (zh)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AR020101A1 (es) * 1998-07-01 2002-04-10 Cancerforskingsfonden Af 1989 Un antagonista peptido del receptor de uroquinasa humana, composicion farmaceutica que lo contiene, su uso para la manufactura de un medicamento y metodopara seleccionar un antagonista peptido adecuado.
CN103463619B (zh) * 2012-06-08 2016-05-25 上海市肿瘤研究所 骨形成蛋白4在抑制癌症中的应用
US9212225B1 (en) * 2014-07-01 2015-12-15 Amphivena Therapeutics, Inc. Bispecific CD33 and CD3 binding proteins
CN105343897B (zh) * 2015-09-25 2018-10-26 四川大学华西医院 恒河猴肝癌模型、恒河猴肝癌细胞株及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN115927621A (zh) 2023-04-07
CN108937848A (zh) 2018-12-07
CN116162704A (zh) 2023-05-26
CN115927622A (zh) 2023-04-07
CN115927619A (zh) 2023-04-07
CN108937848B (zh) 2022-12-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Ennishi et al. CD5 expression is potentially predictive of poor outcome among biomarkers in patients with diffuse large B-cell lymphoma receiving rituximab plus CHOP therapy
US20210174908A1 (en) Classification of tumor microenvironments
CN116850285A (zh) 用于其肿瘤携带高过客基因突变负荷的患者的免疫治疗方法
US20230304098A1 (en) Methods and systems for cell-free dna fragment size densities to assess cancer
Dreyling et al. The role of targeted treatment in mantle cell lymphoma: is transplant dead or alive?
CN107663533A (zh) 一种肺癌EGFR L858R和19Del的ddPCR检测方法及应用
Hoelzer Personalized medicine in adult acute lymphoblastic leukemia
Eriksson et al. BRAFV600E protein expression in primary cutaneous malignant melanomas and paired metastases
CN109963572A (zh) 用于表征实体瘤对抗pd-l1抗体单一疗法的反应性的组合物和方法
Gu et al. Detection of neoplasms by metagenomic next-generation sequencing of cerebrospinal fluid
Kolostova et al. Next generation sequencing of glioblastoma circulating tumor cells: non-invasive solution for disease monitoring
Lee et al. Clonal relationships in recurrent B-cell lymphomas
Coombs et al. Chasing ctDNA in patients with sarcoma
CN108937848B (zh) 用于进行白血病诊疗的系统
US20230245479A1 (en) Machine learning techniques for cytometry
Wu et al. Utility of measurable residual disease (MRD) assessment in mantle cell lymphoma
AU2019362602A1 (en) Abituzumab for the treatment of colorectal cancer
Ibrahim et al. Enhancing the quality of life of Africans living with a haematological Cancer
Kim et al. Intrinsic tumor resistance to CAR T cells is a dynamic transcriptional state that is exploitable with low-dose radiation
CN116400075B (zh) 检测狼疮性肾炎标志物的试剂及方法
Biancon MONITORING MINIMAL RESIDUAL DISEASE IN MULTIPLE MYELOMA PATIENTS BY NGS APPROACHES
CN106978486A (zh) 无细胞dna作为癌症免疫药物疗效评价的分子靶标及其应用
WO2021202917A1 (en) A noninvasive multiparameter approach for early identification of therapeutic benefit from immune checkpoint inhibition for lung cancer
Bou Zerdan et al. Liquid biopsies and minimal residual disease in lymphoid malignancies
Li et al. Patient-derived xenograft mouse model for personalized treatment in patients with multiple myeloma

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination