CN115916829A

CN115916829A - 包含ige抗体的组合物

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Publication number: CN115916829A
Application number: CN202180044702.8A
Authority: CN
Inventors: J·斯派瑟; S·卡拉吉安尼斯; M·费吉尼; H·古尔德
Original assignee: Kings College London
Current assignee: Kings College London
Priority date: 2020-04-24
Filing date: 2021-04-23
Publication date: 2023-04-04
Also published as: AU2021260852A1; MX2022013400A; BR112022021499A2; CA3176300A1; KR20230006824A; US20230151090A1; JP2023523264A; EP4139356A1

Abstract

在一个方面，本发明涉及包含同种型免疫球蛋白E(IgE)抗体的药物单位剂量组合物，其中所述组合物包含小于50mg的IgE抗体。

Description

包含IGE抗体的组合物

技术领域

本发明涉及治疗性抗体领域，特别涉及免疫球蛋白E(IgE)抗体的剂量方案和药物单位剂型(unit dosage form)。本发明还涉及使用这种IgE抗体和剂量方案治疗疾病如癌症的方法。

背景技术

治疗性抗体现在是对许多恶性疾病的常规治疗的补充，但目前开发的几乎所有药物仅依赖于九类人抗体中的一类，即IgG1，它是血液中最丰富的一类抗体(Weiner LM，Surana R，Wang S(2010)Monoclonal antibodies：versatile platforms for cancerimmunotherapy.Nat Rev Immunol 1O：317-327)。人免疫系统天然地部署九个抗体类别和亚类(IgM、IgD、IgG1-4、IgAl、IgA2和IgE)，用以执行免疫监视，并介导不同解剖学区室中病原体的破坏。然而，只有IgG(最常见的是IgG1)被应用于癌症的免疫疗法。

一个原因可能是IgG抗体(特别是IgG1)在人体血液中的循环抗体中占比最大。所述抗体类别的选择还基于20世纪80年代后期的一项开创性工作，该工作比较了一组具有相同特异性的嵌合抗体，每个嵌合抗体均具有属于9个抗体类别和亚类别之一的Fc区(Bruggemann M，Williams GT，Bindon CI，Clark MR，Walker MR，Jefferis R，Waldmann H，Neuberger MS(1987)Comparison of the effector functions of humanimmunoglobulins using a matched set ofchimeric antibodies.J Exp Med 166：1351-1361)。评估了抗体结合补体的能力及其在补体存在下介导抗原表达性靶细胞的溶血和细胞毒性的效力。与人外周血单核细胞(PBMC)组合的IgG1是体外补体依赖性细胞杀伤中最有效的IgG亚类，而IgA和IgE抗体则完全无效。

随后利用识别B细胞标志物CD20的抗体进行的临床试验支持了一个推断，即IgG1将是最适合B细胞恶性肿瘤(如非霍奇金淋巴瘤)患者免疫疗法的亚类(Alduaij W，IllidgeTM(2011)The future of anti-CD20 monoclonal antibodies：are we making progress？Blood 117：2993-3001)。自这些研究以来，不同抗体类别的抗肿瘤效果的比较仅限于小鼠模型和淋巴恶性肿瘤患者两者中的IgG和IgM，同时IgA已被证明在体外和小鼠淋巴瘤模型体内介导ADCC(Dechant M，Valerius T(2001)IgA antibodies for cancer therapy.CritRev Oncol Hematol 39：69-77)。

IgE类抗体在过敏反应中起核心作用，并且具有许多可能有利于癌症疗法的特性。基于IgE的主动和被动免疫治疗方法已被证明在体外和癌症模型体内均有效，这表明这些方法在人中具有潜在用途(Leoh等人，Curr Top Microbiol Immunol.2015；388：109-149)。因此，IgE治疗性抗体可提供增强的免疫监视和优良的效应细胞对抗癌细胞的效力。小鼠/人嵌合IgE抗体(MOv18 IgE)对癌症相关抗原叶酸受体具有特异性，已被证明与同基因的免疫活性动物中其他方面相同的IgG相比，IgE具有优良的抗肿瘤功效(Gould等人，Eur JImmunol 1999；29：3527-37；Josephs et al.，Cancer Res.2017 Mar 1；77(5)：1127-1141；Karagiannis等人，Cancer Res.2017 Jun 1；77(11)：2779-2783)。TNFα/MCP-1信号传导被认为是IgE介导的单核细胞和巨噬细胞激活和募集到肿瘤的机制。这些发现与IgE对抗寄生虫所采用的强大的巨噬细胞激活功能而非过敏性IgE机制相对应。如果MOv18IgE在这些临床前实验中的抗肿瘤活性能够在患者身上复制，那么IgE衍生的药物在临床肿瘤学中的潜在临床应用是确定的。特别地，不同IgE抗体对许多已被证实为IgG的靶点的其他抗原具有特异性，这表明开发一类新型抗体疗法具有广泛的潜力。

然而，缺乏与IgE抗体在人中的治疗用途相关的临床试验数据意味着，仍然缺乏涉及IgE的适当治疗方法和药物组合物。特别地，尚不清楚为施用其他治疗性抗体同种型(例如IgG)而开发的方法和组合物是否可用于IgE抗体。因此，需要适合于IgE抗体且对人体安全有效的方法和组合物，尤其是单位剂型和剂量方案。

发明内容

因此，在一个方面，本发明提供了包含同种型免疫球蛋白E(IgE)抗体的药物单位剂量组合物(unit dosage composition)，其中所述组合物包含小于50mg的IgE抗体。

在特定的实施方案中，所述组合物包含小于30mg、小于25mg、小于10mg、小于5mg、小于3mg或小于1mg的IgE抗体。例如，所述组合物可包含10μg至50mg、70μg至30mg、70μg至3mg、500μg至1mg或约700μg的IgE抗体。

在一个实施方案中，所述组合物为液体形式。例如，所述组合物可包含浓度为0.1mg/ml至10mg/ml、0.5mg/ml至2mg/ml或约1mg/ml的IgE抗体的水溶液。

在一个实施方案中，所述组合物还包含一种或多种药学上可接受的赋形剂，例如柠檬酸钠、L-精氨酸、蔗糖、聚山梨醇酯20和/或氯化钠。优选地，所述组合物适合于静脉注射，例如，以至多50mg/周、25mg/周，10mg/周、3mg/周或1mg/周的最大总剂量。

在另一个实施方案中，所述抗体是抗叶酸受体(FRα)抗体。优选地，所述抗体是MOv18 IgE抗体。例如，所述抗体可包含SEQ ID NO：3中定义的轻链可变结构域氨基酸序列和/或SEQ ID NO：4中定义的重链可变结构域氨基酸序列。最优选地，所述抗体包含SEQ IDNO：1中定义的轻链氨基酸序列和/或SEQ ID NO：2中定义的重链氨基酸序列。

在进一步的实施方案中，所述组合物用于治疗癌症。因此，在另一方面，本发明提供了一种治疗和/或延迟有此需要的受试者中癌症进展的方法，所述方法包括向受试者施用如上定义的药物单位剂量组合物的步骤。

所述组合物可施用给患有癌症的(哺乳动物)受试者，例如人受试者。优选地，癌症是卵巢癌。

在一些实施方案中，施用给受试者的IgE抗体的最大周剂量为50mg、25mg、10mg、3mg或1mg。例如，IgE抗体的周剂量可为10μg至50mg、70μg至30mg、70μg至3mg、500μg至1mg或约700μg。

在一些实施方案中，将IgE抗体施用给受试者，每周一次或每两周一次，例如持续至多12周。在一些实施方案中，将IgE抗体施用给受试者(i)每周一次，持续6周；然后(ii)每两周一次，持续6周。

在进一步的实施方案中，将IgE抗体施用给受试者，每次施用的剂量小于0.7mg/kg、小于O.1mg/kg或小于0.03mg/kg，例如，剂量为小于0.7mg/kg/周、小于0.1mg/kg/周或小于0.03mg/kg/周。

附图简要说明

图1显示了MOv18IgE轻(L)链的氨基酸序列(SEQ ID NO：1)；以粗体显示小鼠VL，以标准字体显示人CL。

图2显示了MOv18IgE重(H)链的氨基酸序列(SEQ ID NO：2)；以粗体显示小鼠VH，以标准字体显示人CH。

图3显示了MOv18 IgE轻链可变结构域(VL)的氨基酸序列(SEQ ID NO：3)。

图4显示了MOv18 IgE重链可变结构域(VH)的氨基酸序列(SEQ ID NO：4)。

图5显示了静脉内施用后MOv18 IgE的药代动力学(血清浓度)。

图6显示了CT扫描图像和从CT扫描图像中获得的肿瘤测量结果，表明用700μg剂量水平的MOv18 IgE抗体治疗的卵巢癌受试者的肿瘤尺寸减小。描绘出在基线(左图)和治疗6周后(右图)的肿瘤(显示在每张图像的椭圆形区域内)。在用抗体多轮治疗前和后以及维持期后，确定受试者的靶病变尺寸和非靶病变尺寸和受试者的状态。

图7显示了在用6个每周700μg剂量的MOv18 IgE抗体随后是以2周间隔进一步3个700μg剂量的抗体的患者治疗期间，卵巢癌抗原CA125的血清浓度显著降低。

图8显示了用MOv18 IgE抗体治疗的个体卵巢癌受试者的RECIST(实体瘤疗效评价标准)评分的变化图。每条线表示从治疗开始个体患者的RECIST评分的百分比变化(即，治疗6周后和治疗12周后)。RECIST评分增加或减少小于20％表示病情稳定。

图9显示了用MOv18 IgE抗体治疗6周后的个体卵巢癌受试者的RECIST(实体瘤疗效评价标准)评分变化的瀑布图。每个垂直条表示6周时个体受试者RECIST评分的变化。共治疗了20名受试者。如果没有显示垂直条，则这表示6周后受试者的RECIST评分没有变化(这发生在4名受试者中，由沿x轴的垂直条之间的空隔表示)。

图10显示了用MOv18 IgE抗体治疗6或12周后的个体卵巢癌受试者的RECIST(实体瘤疗效评价标准)评分变化的瀑布图。如图9所示的相同受试者以相同的顺序表示。只有一些(5个)受试者继续接受治疗超过6周。每个标有星号(*)的垂直条表示治疗至12周个体受试者的RECIST评分的变化。其余不带星号的垂直条表示治疗至6周个体受试者的RECIST评分变化，如图9所示。如果未显示垂直条，则这表示受试者的RECIST评分变化为0％(这发生在两名受试者中，由沿x轴的垂直条分隔表示)。

发明详述

本文令人惊讶地发现，通常用于IgG抗体的方法、组合物、剂型和方案不一定适用于IgE抗体。特别地，本文已证明，功效(例如抗肿瘤效应)所需的IgE抗体的最小剂量可远低于IgG抗体的一般有效剂量。例如，如以下实施例所示，在I期试验中发现抗叶酸受体α(FRα)IgE抗体在单位剂量低至700μg(约0.01mg/kg)时具有抗肿瘤作用，这比一般的IgG治疗性抗体剂量(例如，每剂量约150-2000mg或2-20mg/kg)低几个数量级。这项研究是首次在人受试者中进行的IgE抗体试验，因此主要旨在证明这类新型治疗剂的安全性。显示的功效尤其令人惊讶，因为极低剂量测试IgE被认为不太可能引起显著的生物反应。

批准用于治疗癌症的某些单克隆(IgG)抗体的批准剂量和治疗窗口如下表1所示(参见例如，Hendrikx等人，Fixed Dosing of Monoclonal Antibodies in Oncology，TheOncologist 2017；22：1212-1221)：

表1

^a治疗窗口基于以批准剂量的间隔的最小有效剂量和单次施用后的最大耐受(或测试)剂量。

因此，本发明的实施方案产生了惊人的优点，即与IgG抗体相比，IgE抗体可以以非常低的单位剂量施用，例如小于50mg或小于1mg/kg(例如，500μg至10mg或0.005至0.1mg/kg)。这种低剂量组合物具有良好的耐受性，降低了与抗体治疗性施用相关的副作用的风险，并且需要较少的药物产品(因此生产相对便宜)。如此低剂量的IgE抗体的潜在功效是完全不可预期的结果，特别是基于现有IgG治疗性抗体的剂量方案。

该结果表明，由于IgG和IgE的药理学和药代动力学的差异，为IgG抗体开发的方法和组合物(如剂量方案和单位剂型)不一定可转用到IgE。本发明人因此开发了特别适用于治疗性IgE施用(例如治疗癌症中)的新剂量方案和单位剂型。

治疗性抗体

抗体是至少包含轻链或重链免疫球蛋白可变区的多肽配体，该可变区特异性识别并特异性结合抗原(如FRα)或其片段的表位。抗体通常由重链和轻链组成，每个链都有一个可变区，称为重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区。VH区和VL区共同负责结合抗体识别的抗原。

本领域公知，抗体包括完整的免疫球蛋白以及抗体的变体和部分，前提是此类片段保留了IgE的至少一种功能，例如能够结合Fcε受体。抗体还包括基因工程形式，例如嵌合、人源化(例如，可变区中含有鼠序列的人源化抗体)或人抗体、异源缀合抗体(例如，双特异性抗体)，如Kuby，J.，Immunology，第3版，W.H.Freeman&Co.，New York，1997.)中所述。

通常，天然免疫球蛋白具有由二硫键相互连接的重(H)链和轻(L)链。有两种类型的轻链，λ和κ。有九种主要同种型或类别可确定抗体分子的功能活性：IgA1-2、IgD、IgE、IgG1-4和IgM，对应于重链类型α、δ、ε、γ、和μ。因此，存在的重链类型定义了抗体的类别。不同的重链在大小和组成上不同；α和γ含有约450个氨基酸，而μ和ε含有约550个氨基酸。每种重链类型恒定区的差异导致了每种抗体同种型的不同效应功能，这是因为它们选择性结合特定类型的受体(例如Fc受体)。因此，在本发明的实施方案中，抗体优选包含ε重链，即抗体是与Fcε受体结合的同种型IgE。

每个重链和轻链都包含恒定区和可变区(这些区域也称为“结构域”)。重链和轻链可变区组合起来特异性结合抗原。轻链和重链可变区包含“框架”区，其被三个高变区打断，后者也称为“互补决定区”或“CDR”。框架区和CDR的范围已经确定(参见，Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，U.S.Department of Health andHuman Services，1991)。Kabat数据库现已在线维护。不同轻链或重链的框架区序列在物种(如人)内部相对保守。抗体的框架区，即组成型轻链和重链的组合框架区，用于在三维空间中定位和排列CDR。

CDR主要负责与抗原的表位结合。每条链的CDR通常被称为CDR1、CDR2和CDR3，从N末端开始顺序编号，并且通常也由特定CDR所在的链鉴别。因此，VH CDR3位于其所在的抗体重链的可变结构域中，而VL CDR1是其所在的抗体轻链可变结构域的CDR1。

抗体可以具有特定的VH区和VL区序列，从而具有特定的CDR序列。具有不同特异性的抗体(即，针对不同抗原的不同结合位点)具有不同的CDR。尽管CDR随抗体而异，但CDR中只有有限数量的氨基酸位置直接参与抗原结合。CDR中的这些位置称为特异性决定残基(SDR)。提到“VH”时是指免疫球蛋白重链的可变区。提到“VL”时是指免疫球蛋白轻链的可变区。

“单克隆抗体”是由单个B淋巴细胞克隆产生或转染有单个抗体的轻链和重链基因的细胞产生的抗体。单克隆抗体通过本领域技术人员已知的方法产生，例如通过将骨髓瘤细胞与免疫脾细胞融合而制备杂交抗体形成细胞。单克隆抗体包括人源化单克隆抗体。

“嵌合抗体”包括衍生自两种不同抗体的序列，这两种抗体通常衍生自不同物种。例如，嵌合抗体可包括人和小鼠抗体结构域，例如人恒定区和小鼠可变区(例如，来自特异性结合靶抗原的鼠抗体)。

嵌合抗体通常通过融合来自不同物种的轻链和重链免疫球蛋白基因的可变区和恒定区(例如通过基因工程)来构建。例如，来自小鼠单克隆抗体的基因的可变片段可以连接到人恒定片段，例如κ和ε。在一个实施方案中，治疗性嵌合抗体因此是由来自小鼠抗体的可变或抗原结合结构域和来自人抗体的恒定或效应结构域(例如来自人IgE抗体的Fc(效应)结构域)组成的杂交蛋白，尽管可以使用其他哺乳动物物种，或者可以通过分子技术产生可变区。制备嵌合抗体的方法是本领域熟知的，例如，参见美国专利号5,807,715。

“人源化”抗体是一种包括人框架区和来自非人(例如小鼠、大鼠或合成)抗体的一个或多个CDR的抗体。提供CDR的非人免疫球蛋白称为“供体”，而提供框架的人免疫球蛋白质称为“受体”。在一个实施方案中，所有CDR均来自人源化免疫球蛋白中的供体免疫球蛋白。恒定区通常与人免疫球蛋白恒定区基本相同，即至少约85-90％，例如约95％或更多同一性。因此，人源化免疫球蛋白除CDR外的所有部分都与天然人免疫球蛋白序列的相应部分基本相同。

人源化抗体通常包括人源化免疫球蛋白轻链和人源化的免疫球蛋白重链。人源化抗体通常结合与提供CDR的供体抗体相同的抗原。人源化免疫球蛋白或抗体的受体框架可具有被供体框架的氨基酸替换的有限数量的取代。人源化或其他单克隆抗体可以具有额外的保守氨基酸取代，其对抗原结合或其他免疫球蛋白功能基本上没有影响。

可以通过基因工程构建人源化免疫球蛋白(参见例如，美国专利号5,585,089)。通常，人源化单克隆抗体是通过将小鼠免疫球蛋白的重和轻可变链的供体抗体互补决定区转移到人可变结构域中，然后取代供体对应物的框架区中的人残基来制备的。使用衍生自人源化单克隆抗体的抗体组分避免了与供体抗体恒定区的免疫原性相关的潜在问题。生产人源化单克隆抗体的技术例如由以下所述Jones等人，Nature 321：522，1986；Riechmann等人，Nature 332：323，1988；Verhoeyen等人，Science 239：1534，1988；Carter等人，Proc.Nat’l Acad.Sci.U.S.A.89：4285，1992；Sandhu，Crit.Rev.Biotech.12：437，1992；和Singer等人，J.Immunol.150：2844，1993。

“人”抗体(也称为“全人”抗体)是一种抗体，包括来自人框架区和人免疫球蛋白的所有CDR。在一个实例中，框架和CDR来自同一来源性人重链和/或轻链氨基酸序列。然而，来自一种人抗体的框架可以被工程化为包含来自不同人抗体的CDR。

在本发明的实施方案中，抗体可以是单克隆或多克隆抗体，包括嵌合、人源化或全人抗体。

在一些实施方案中，抗体特异性结合叶酸受体(FRα)以形成免疫复合物。通常，所述抗体可包含衍生自已知结合FRα(优选人FRα)的抗体例如MOv18 IgE的抗原结合区(例如，一个或多个可变区或1至6个CDR)。

FRα在几种实体癌类型(包括卵巢癌、子宫内膜癌和间皮瘤)中过量表达。所述抗原已被表征为具有有效肿瘤特异性，使用IgG和IgE抗体靶向FRα的临床试验证明了有利的耐受性特性。结合FRα的MOv18 IgG和IgE抗体及其性质描述于例如Coney，L.R.，A.Tomassetti等人，(1991).Cancer Res 51(22)：6125-6132；Gould，H.J.，G.A.Mackay等人，(1999).EurJ Immunol 29(11)：3527-3537；Karagiannis，S.N.，Q.Wang等人，(2003).Eur J Immunol33(4)：1030-1040。

在一个具体的实施方案中，所述抗体包含来自MOv18 IgG或IgE的可变区(例如，重链可变结构域(VH)和/或轻链可变结构(VL))或至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR(例如，3个重链CDR或3个轻链CDR)，例如SEQ ID NO：4和/或SEQ ID NO：3中存在的CDR，其中CDR序列可根据Kabat、Chothia或IMGT的方法定义(参见例如，Dondelinger，FrontImmunol.2018；9：2278和其中引用的参考文献，其通过引用并入本文)。例如，CDR可根据Kabat定义：参见Kabat EA等人，(U.S.)NI of H.Sequences of Immunoglobulin Chains：Tabulation Analysis of Amino Acid Sequences of Precursors，V-regions，C-regions，J-Chain BP-Microglobulins，1979；或根据Chothia定义：参见Chothia C等人，Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins，J MolBiol.1987Aug 20；196(4)：901-1；或根据IMGT定义：参见Giudicelli V等人，IMGT，theinternational ImMunoGeneTics database，Nucleic Acids Res.1997 Jan 1；25(1)：206-11或Lefranc MP，Unique database numbering system for immunogenetic analysis，Immunol Today.1997 Nov；18(11)：509。MOv18 IgE的VH和VL结构域的氨基酸序列分别显示在SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：3中。在另一个实施方案中，抗体是特异性结合MOv18 IgE所结合的表位的嵌合、人源化或全人抗体。最优选地，治疗性抗体是MOv18IgE，例如所述抗体包含SEQ ID NO：1中定义的轻链氨基酸序列和/或SEQ ID NO：2中定义的重链氨基酸序列。

在另一实施方案中，抗体包含衍生自识别在例如FRα(优选人FRα)上发现的表位的人B细胞克隆的可变区(例如，重链可变结构域和/或轻链可变结构域)或至少一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR(例如，3个重链CDR或3个轻链CDR)。

在一个实施方案中，抗体包含一个或多个人恒定区，例如一个或多个人重链恒定结构域(例如，ε恒定结构域)和/或人轻链(例如，κ或λ)恒定结构域。人轻链(κ)恒定结构域的氨基酸序列如SEQ ID NO：1(非粗体字)所示。人重链恒定结构域的氨基酸序列如SEQ IDNO：2(非粗体字)所示。在一个实施方案中，抗体包含VH和/或VL结构域内的一个或多个人框架区。

在一个实施方案中，人源化免疫球蛋白重链可变区框架的序列可与供体免疫球蛋白重链可变区骨架的序列具有至少约65％同一性。因此，人源化免疫球蛋白重链可变区框架的序列可与供体免疫球蛋白重链可变区框架的序列具有至少约75％、至少约85％、至少约99％或至少约95％同一性。本领域已知人框架区和可在人源化抗体框架区中产生的突变(参见例如，美国专利号5,585,089)。

针对特定抗原(例如FRα)的进一步抗体也可通过成熟的方法产生，并且可在本发明的抗体中至少使用来自此类抗体的可变区或CDR(例如，所产生的抗体可将CDR或可变区序列贡献到IgE受体序列中)。合成多肽和免疫宿主动物的方法是本领域熟知的。通常，宿主动物(例如，小鼠)用一定量的免疫原(例如，FRα或包含其免疫原性片段的多肽)和(在单克隆抗体产生的情况下)使用Kohler，B.和Milstein，C.(1975)Nature 25 6：495-497的一般体细胞杂交技术由其淋巴细胞和永生化骨髓瘤细胞制备的杂交瘤进行腹膜内接种。

可使用已知方法在体外或体内培养产生合适抗体的杂交瘤。如果需要，单克隆抗体可通过常规免疫球蛋白纯化程序(如硫酸铵沉淀、凝胶电泳、透析、层析和超滤)从培养基或体液中分离。不期望的活性(如果存在)可以被去除，例如，通过使制备物通过由附着于固相的免疫原制成的吸附剂，并从免疫原上洗脱或释放期望的抗体进行制备。如果需要，可对感兴趣的抗体(单克隆或多克隆)进行测序，然后可将多核苷酸序列克隆到载体中用于表达或繁殖。编码抗体的序列可保持在宿主细胞中的载体中，然后宿主细胞可被扩增和冷冻以供将来使用。

噬菌体展示技术，例如US 5,565,332和其他公开文献中所述，可用于从未免疫供体的免疫球蛋白可变(V)结构域基因库(例如，来自人受试者，包括患有相关疾病的患者)中体外选择并制备人抗体和抗体片段。例如，现有的抗体噬菌体展示文库可以针对大量合成多肽进行平行筛选。根据这项技术，抗体V结构域基因根据读框克隆到丝状噬菌体的主要或次要外壳蛋白基因如M13或fd中，并在噬菌体颗粒表面作为功能性抗体片段展示。由于丝状颗粒含有噬菌体基因组的单链DNA拷贝，由此基于抗体功能特性的选择也会导致选择具有这些特性的抗体的编码基因。因此，使用噬菌体展示法从人文库中所选择的抗体序列可包括赋予与特定抗原(例如FRα)特异性结合的人CDR或可变区序列，其可用于提供用于本发明的全人抗体。

从人B细胞和浆细胞克隆衍生重链和轻链序列的方法是本领域熟知的，通常使用聚合酶链反应(PCR)技术进行，所述方法的实例描述于：Kuppers R，Methods MolBiol.2004；271：225-38；Yoshioka M等人，BMC BiotechnOl.2011 Jul 21；11：75；ScheerenFA等人，PLoS ONE 2011，6(4)：e17189.doi：10.1371/journal.pone.0017189；Wrammert J等人，Nature 2008 453，667-671；Kurosawa N等人，BMC Biotechnol.2011 Apr 13；11：39；Tiller等人，J Immunol Methods.2008 January 1；329(1-2)：112-124。因此，使用B细胞克隆所选择的抗体序列可包括赋予与例如FRα特异性结合的人CDR或可变区序列，其可用于提供用于本发明的全人抗体。

IgE抗体

待施用给受试者的治疗性抗体是IgE抗体，即同种型IgE的抗体。IgE和IgG之间存在一些基本结构差异，这些差异具有功能性影响。虽然IgE与其他类别的抗体具有相同的基本分子结构，但IgE的重链比IgG的重链多包含一个结构域。IgE的Cε3和Cε4结构域与IgG的Cγ2和Cγ3结构域在序列上同源并且在结构上相似，由此Cε2结构域是IgE最明显的区别特征。已发现Cε2结构域相对于IgE重链向后折叠，并与Cε3结构域进行广泛接触。IgE重链的这种弯曲结构允许其采用开放或封闭构象。未结合的IgE二聚体具有一条处于开放构象的链和一条处于封闭构象的链。FcεRI与IgE的结合是两相的，并且被认为包括与开放Cε链的初始结合，然后是广泛的结构重排以允许与封闭的Cε链结合。尽管存在两个相同的Cε链，但IgE二聚体和FcεRI之间的结合以1：1的化学计量比进行。这种重布置导致IgE和FcεRI之间非常紧密的相互作用，并且IgE对其Fc受体的亲和力比IgG对FcγR大得多(McDonnell，J.M.，R.Calvert等人，(2001)Nat Struct Biol 8(5)：437-441)。

本发明中使用的抗体通常能够结合Fcε受体，例如结合FcεRI和/或FcεRII受体。优选地，所述抗体至少能够结合FcεRI(即，高亲和力Fcε受体)或至少能够结合FcεRII(CD23，低亲和力Fcε受体)。通常，所述抗体还能够激活Fcε受体，例如在免疫系统的细胞上表达的Fcε受体，以启动由IgE介导的效应功能。

ε重链对于IgE抗体是决定性的，并且包括N末端可变结构域VH和四个恒定结构域Cε1-Cε4。与其他抗体同种型一样，可变结构域赋予抗原特异性，恒定结构域赋予同种型特异性效应功能。

IgE不同于更丰富的IgG同种型，因为它不能固定补体，并且不能与单核细胞、NK细胞和嗜中性粒细胞表面上表达的Fc受体FcγRI、RII和RIII结合。然而，IgE能够与多种免疫细胞(如肥大细胞、嗜碱性粒细胞、单核细胞/巨噬细胞、嗜酸性粒细胞)上的“高亲和力”IgE受体(FcεRI，Ka.10¹¹M^-1)并与在炎性和抗原呈递细胞(例如，单核细胞/巨噬细胞、血小板、树突状细胞、T和B淋巴细胞)上表达的“低亲和力”受体FcεRII(也称为CD23，Ka.10⁷M^-1)，进行非常特异的相互作用。

IgE上负责这些受体相互作用的位点已被映射到Cε链上的肽序列，并且是不同的。FcεRI位点位于由Gln 301和Arg 376之间的残基形成的裂缝中，并且包括Cε2和Cε3结构域之间的连接(Helm，B.等人，(1988)Nature 331，180183)。FcεRII结合位点位于Cε3内的残基Val 370周围(Vercelli，D.等人，(1989)Nature 338，649-651)。区分这两种受体的一个主要区别是FcεRI结合单体Cε，而FcεRII仅结合二聚化的Cε，即两个Cε链必须结合。虽然IgE在体内被糖基化，但这对于其与FcεRI和FcεRRII的结合并不是必须的。事实上，在不存在糖基化的情况下，结合力略强(Vercelli，D.等人，(1989)et.同上)。

因此，与Fcε受体的结合和相关效应功能通常是由抗体的重链恒定结构域介导，特别是由共同形成抗体Fc区的结构域介导。本文描述的抗体通常包括IgE抗体的至少一部分，例如衍生自IgE(优选人IgE)的一个或多个恒定结构域。在具体的实施方案中，所述抗体包含一个或多个选自Cε1、Cε2、Cε3和Cε4的结构域(衍生自IgE)。在一个实施方案中，所述抗体包含至少Cε2和Cε3，更优选包含至少Cε2、Cε和Cε4，优选地，其中所述结构域衍生自人IgE。在一个实施方案中，抗体包含(ε)重链，优选人ε重链。

衍生自人IgE的恒定结构域的氨基酸序列显示在例如图1和2(SEQ ID NO：1和2，非粗体字)。编码衍生自人IgE的恒定结构域，特别是Cε1、Cε2、Cε3和Cε4结构域的核苷酸序列还公开于例如WO 2013/050725中。其他人和哺乳动物IgE的氨基酸序列及其结构域，包括人Cε1、Cε2、Cε3和Cε4结构域和人ε重链序列，是本领域已知的，并且可从公共可访问数据库获得。例如，人免疫球蛋白序列的数据库可从国际ImMunoGeneTics信息系统

网站访问，网址为http://www.imgt.org。作为示例，各种人IgE重(ε)链等位基因及其各自的恒定结构域(Cε1-4)的序列可在http://www.imgt.org/IMGT_GENE-DB/GENElect？query＝2+IGHE&species＝Homo+sapiens访问。

优选的抗-FRαIgE抗体

在一个实施方案中，抗FRα抗体包含VH结构域，其包含SEQ ID NO：4中定义的氨基酸序列的至少一部分，例如包含SEQ ID NO：4的至少20、30、50或100个氨基酸，或SEQ IDNO：4的全长，或SEQ ID NO：4中存在的一个、两个或三个CDR(例如，根据Kabat、Chothia或IMGT定义)。

在一个实施方案中，抗FRα抗体包含VL结构域，其包含SEQ ID NO：3中定义的氨基酸序列的至少一部分，例如包含SEQ ID NO：3的至少20、30、50或100个氨基酸，或SEQ IDNO：3的全长，或SEQ ID NO：3中存在的一个、两个或三个CDR(例如根据Kabat、Chothia或IMGT定义)。

通常，上述定义的序列的功能性片段可用于本发明。功能性片段可以具有如上所述的任何长度(例如，至少50、100、300或500个核苷酸，或至少50、100、200或300个氨基酸)，前提是该片段保留了在抗体中存在时期望的活性(例如，与FRα和/或Fcε受体的特异性结合)。

上述氨基酸和核苷酸序列的变体也可用于本发明，前提是所得抗体结合Fcε受体。通常，这类变体与上述序列之一具有高度的序列同一性。

氨基酸或核苷酸序列之间的相似性表示为序列之间的类似性，亦称为序列同一性。序列同一性通常以同一性(或相似性或同源性)百分数来衡量；百分数越高，两个序列就越相似。当使用标准方法进行比对时，氨基酸或核苷酸序列的同源物或变体将具有相对高的序列同一性程度。

用于比较的序列比对方法是本领域熟知的。各种程序和比对算法描述于Smith和Waterman，Adv.Appl.Math.2：482，1981；Needleman和Wunsch，J.Mol.Biol.48：443，1970；Pearson和Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85：2444，1988；Higgins和Sharp，Gene 73：237，1988；Higgins和Sharp，CABIOS 5：151，1989；Corpet等人，Nucleic Acids Research16：10881，1988；和Pearson and Lipman，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85：2444，1988。Altschul等人，Nature Genet.6：119，1994给出了序列比对方法和同源性计算的详细信息。

NCBI基本局部比对搜索工具(BLAST)(Altschul等人，J.Mol.Biol.215：4031990)可从多个来源获得，包括国家生物技术信息中心(NCBI，Bethesda，Md.)和互联网，连同序列分析程序blastp、blastn、blastx、tblastn和tblastx一起使用。有关如何使用该程序确定序列同一性的说明，可在互联网上的NCBI网站获得。

抗体的同源物和变体(例如，抗FRα抗体或其结构域，例如VL、VH、CL或CH结构域)通常与原始序列(例如，上文定义的序列)具有至少约75％、例如至少约80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性，例如是使用NCBI Blast 2.0(设置为默认参数的缺口blastp)在与抗体或其结构域的氨基酸序列的全长比对上计数。对于大于约30个氨基酸的氨基酸序列的比较，使用Blast 2序列功能，使用设置为默认参数的默认BLOSUM62矩阵(存在缺口罚分为11，每残基缺口罚分为1)。当比对短肽(少于约30个氨基酸)时，应使用Blast2序列功能进行比对，使用设置为默认参数的PAM30矩阵(开放缺口罚分9，延伸缺口罚分1)。当通过该方法评估时，与参考序列具有甚至更大相似性的蛋白质将显示出增加的同一性百分数，例如至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％、或至少99％的序列同一性。当比较小于整个序列的序列同一性时，同源物和变体通常在10-20个氨基酸的短窗口内具有至少80％序列同一性，并且根据其与参考序列的相似性，可具有至少85％或至少90％或95％的序列同一性。在互联网上的NCBI网站上可获得用于确定在这种短窗口上的序列同一性的方法。本领域技术人员将理解，提供这些序列同一性范围仅用于指导；完全有可能获得落在所提供范围之外的非常显著的同源物。

通常，与原始氨基酸或核酸序列相比，变体可包含一个或多个保守氨基酸取代。保守取代是指基本不影响或降低抗体对靶抗原(例如FRα)和/或Fcε受体的亲和力的那些取代。例如，与原始序列(如上文所定义)相比，特异性结合FRα的人抗体可包括至多1个、至多2个、至多5个、至多10个或至多15个保守取代，并保留与FRα多肽的特异性结合。术语保守性变化还包括使用取代的氨基酸代替未取代的母体氨基酸，前提是抗体特异性结合靶抗原(例如FRα)。非保守取代是指那些降低活性或与靶抗原(例如，FRα)和/或Fcε受体的结合的取代。

可以通过保守取代的方式来交换的功能相似的氨基酸是本领域普通技术人员熟知的。以下六组被认为是彼此互为保守取代的氨基酸的实例：1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；3)天冬酰胺(N)、谷氨酰胺(Q)；4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；5)异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、蛋氨酸(M)、缬氨酸(V)；和6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。

其他IgE抗体

如上所述，在优选的实施方案中，IgE抗体结合FRα。在进一步的实施方案中，本文使用的IgE抗体可特异性(即，通过其可变结构域或其互补决定区(CDR))结合可用于治疗癌症的一种或多种其他靶抗原，即FRα以外的靶抗原。例如，IgE抗体可特异性结合一种或多种其他癌症抗原(即，在癌细胞上选择性表达或过量表达的抗原)。优选地，IgE抗体能够诱导细胞毒性(例如，ADCC)和/或吞噬作用(ADCP)，特别是针对表达这种抗原的癌细胞。例如，IgE抗体可特异性结合例如EGF-R(表皮生长因子受体)、VEGF(血管内皮生长因子)或erbB2受体(Her2/neu)。包含选择性结合Her2/neu的可变结构域的抗体的一个实例是曲妥珠单抗(赫赛汀)。

在一些实施方案中，一个或多个可变结构域和/或一个或多个CDR，优选至少三个CDR，或更优选全部六个CDR可衍生自以下抗体中的一种或多种：阿仑单抗(alemtuzumab，SEQ ID Nos：27-32)、阿特珠单抗(atezolizumab，SEQ ID Nos：33-38)、阿维单抗(avelumab，SEQ ID Nos：39-45)、贝伐单抗(bevacizumab，SEQ ID Nos：46-51)、博纳吐单抗(blinatumomab)、本妥昔单抗(brentuximab)、西米普利单抗(cemplimab)、培塞利珠单抗(certolizumab，SEQ ID Nos：52-57)、西妥昔单抗(cetuximab，SEQ ID Nos：58-63)、地舒单抗(denosumab)、德瓦鲁单抗(durvalumab，SEQ ID Nos：64-69)、依法利珠单抗(efalizumab，SEQ ID Nos：70-75)、伊匹单抗(iplimumab)、纳武单抗(nivolumab)、奥比妥珠单抗(obinutuzumab)、奥法木单抗(ofatumumab)、奥马珠单抗(omalizumab，SEQ ID Nos：76-81)、帕尼单抗(panitumumab，SEQ ID Nos：82-87)、派姆单抗(pembrolizumab)、帕妥株单抗(pertuzumab，SEQ ID Nos：88-93)、利妥昔单抗(rituximab，SEQ ID Nos：94-99)或曲妥珠单抗(trastuzumab，SEQ ID NOs：100-105)。

在此类实施方案中，抗体的可变结构域可包含来自表2中列出的抗体之一的一个或多个CDR，优选至少三个CDR或更优选所有六个CDR序列。

在表2中，括号中的数字是相应的SEQ ID NO。点表示根据IMGT和Kabat编号系统的序列比对缺口。字母表示用于预测CDR序列的方法。A-IMGT，B-Kabat。1-Magdelaine-Beuzelin等人，(2007)Structure-function relationships of the variable domainsof monoclonal antibodies approved for cancer treatment.Critical Reviews inOncology/Hematology，64：210-225。2-Lee等人，(2017).Molecular mechanism of PD-1/PD-L1 blockade via anti-PD-L1 antibodies atezolizumab anddurvalumab.Scientific Reports，7：5532。3-Ling等人，(2018)Effect of VH-VLFamilies in Pertuzumab and Trastuzumab Recombinant Production，Her2 and FcγIIA Binding.Frontiers in Immunology，9：469。

在替代实施方案中，一个或多个可变结构域和/或一个或多个CDR，优选至少三个CDR，或更优选全部六个CDR可衍生自以下抗体中的一种或多种：阿昔单抗(abciximab)、阿达木单抗(adalimumab，SEQ ID NOs：106-111)、阿杜那单抗(aducanumab)、阿杜卡奴单抗(aducanumab)、阿法赛特(alefacept)、阿莫罗布单抗(alirocumab)、阿尼鲁单抗(anifrolumab)、巴替利单抗(balstilimab)、巴利昔单抗(basiliximab，SEQ ID NOs：112-117)、贝利尤单抗(belimumab，SEQ ID NOs：118-123)、贝那利珠单抗(benralizumab)、贝洛托舒单抗(bezlotoxumab)、柏达鲁单抗(brodalumab)、brolucizumab、布洛舒单抗(burosumab)、卡那单抗(cankinumab)、卡普赛珠单抗(caplacizumab)、crizanlizumab、达克珠单抗(daclizumab，SEQ ID NOs：124-129)、达雷妥尤单抗(daratumumab)、地努妥昔单抗(dinutuximab)、多塔利单抗(dostarlimab)、度匹鲁单抗(duplilumab)、eclizumab、埃罗妥珠单抗(elotuzumab)、依帕伐单抗(emapalumab)、艾米珠单抗(emicizumab)、依普奈珠单抗(epitinezumab)、厄瑞奴单抗(erenumab)、依曲利组单抗(etrolizumab)、依维苏单抗(evinacumab)、依洛尤单抗(evolocumab)、瑞玛奈珠单抗(fremanezumab)、伽奈珠单抗(galcanezumab)、戈利木单抗(golimumab)、古塞奇尤单抗(guselkumab)、伊巴珠单抗(ibalizumab)、依达赛珠单抗(idarucizumab)、伊奈利珠单抗(inebilizumab)、英夫利昔单抗(infliximab，SEQ ID NOs：130-135)、伊沙妥昔单抗(isatuximab)、依奇珠单抗(ixekizumab)、拉那鲁单抗(lanadelumab)、leronlimab、马吉妥昔单抗(margetuximab)、美泊珠单抗(mepolizumab)、莫格利珠单抗(mogamulizumab)、莫罗单抗(muromonab)、纳索利单抗(narsoplimab)、那他珠单抗(natalizumab，SEQ ID NOs：136-141)、那昔妥单抗(naxitamab)、耐昔妥珠单抗(necitumumab)、obiltoxaximab、奥瑞组单抗(ocrelizumab)、omburtamab、帕利珠单抗(palivizumab，SEQ ID NOs：5-10)、雷莫芦单抗(ramucirumab)、雷尼珠单抗(ranibizumab，SEQ ID NOs：11-16)、瑞利珠单抗(reslizumab)、瑞莎珠单抗(risankizumab)、罗莫单抗(romosozumab)、沙利鲁单抗(sarilumab)、萨特利珠单抗(satralizumab)、苏金单抗(secukinumab)、斯巴达珠单抗(spartalizumab)、苏替莫单抗(sutimlimab)、tafasitamab、他尼组单抗(tanezumab)、替利组单抗(teplizumab)、替妥木单抗(teprotumumab)、替拉珠单抗(tildrakizumab)、托珠单抗(toclizumab)、toropalimab、乌司奴单抗(ustekinumab)、维得利珠单抗(vedolizumab)或泽弗利单抗(zalifrelimab)。

在此类实施方案中，抗体的可变结构域可包含来自表3中列出的抗体之一的一个或多个CDR，优选至少三个CDR或更优选所有六个CDR序列。

在表3中，括号中的数字是相应的SEQ ID NO。点表示根据IMGT和Kabat编号系统的序列比对缺口。字母表示用于预测CDR序列的方法。A-IMGT，B-Kabat。1-

等人，(2014)A generic approach to engineer antibody pH-switches using combinatorialhistidine scanning libraries and yeast display.MAbs，7(1)：138-151。2-Wang等人，(2009).Potential aggregation prone regions in biotherapeutics.A survey ofcommercial monoclonal antibodies.MAbs，1(3)：254-267。3-W0 2015/173782 A1。4-Lim等人，(2018).Structural Biology of the TNFαAntagonists Used in the Treatmentof Rheumatoid Arthritis.International Journal of Molecular Sciences，19(3)：piiE768。

在其他实施方案中，一个或多个可变结构域和/或一个或多个CDR序列，优选至少三个CDR，或更优选全部六个CDR可衍生自抗-HMW-MAA抗体。在一个实施方案中，一个或多个可变结构域和/或一个或多个CDR序列，优选至少三个CDR，或更优选所有六个CDR可衍生自WO 2013/050725中描述的抗-HMW-MAA抗体(SEQ ID NO：23和25是可变结构域，SEQ ID NOs：17-22是CDR)。HMW-MAA是指高分子量黑素瘤相关抗原，也称为硫酸软骨素蛋白聚糖4(CSPG4)或黑素瘤硫酸软骨素蛋白聚糖(MCSP)-参见例如，Uniprot Q6UVK1。

在此类实施方案中，抗体的可变结构域可包含表4中定义的一个或多个CDR序列，优选至少三个CDR或更优选所有六个CDR序列。在其他实施方案中，抗体的一个或多个可变结构域包含表4中列出的一个或多个可变结构域序列。

表4.抗-HMW-MAA抗体的估计可变结构域和CDR序列

抗体和核酸的生产

编码本文提供的多肽(包括但不限于抗体及其功能片段)的核酸分子(也称为多核苷酸)可由本领域技术人员使用本文提供的氨基酸序列、本领域可用的序列和遗传密码容易地生产。此外，本领域技术人员可以容易地构建包含功能等同核酸(例如序列不同但编码相同效应分子或抗体序列的核酸)的各种克隆。因此，本文提供了编码抗体的核酸。

编码特异性结合靶抗原的抗体的核酸序列(例如，FRα)或其功能片段可通过任何合适的方法制备，包括例如，合适序列的克隆或通过直接化学合成，通过方法例如Narang等人，Meth.Enzymol.68：90-99，1979的磷酸三酯法；Brown等人，Meth.Enzymol.68：109-151，1979的磷酸二酯法；Beaucage等人，Tetra.Lett.22：1859-1862，1981的二乙基亚磷酰胺法；Beaucage&Caruthers，Tetra.Letts.22(20)：1859-1862，1981描述的固相亚磷酰胺三酯法，例如，使用在例如Needham-VanDevanter等人，Nucl.Acids Res.12：6159-6168，1984中描述的自动合成仪；和美国专利号4,458,066的固体支持物方法。化学合成产生单链寡核苷酸。这可以通过与互补序列杂交或通过使用单链作为模板用DNA聚合酶聚合，而转化为双链DNA。本领域技术人员将认识到，虽然DNA的化学合成通常限于约100个碱基的序列，但通过连接较短序列可以获得较长序列。

可通过克隆技术制备编码抗体或其功能片段的示例性核酸。适当的克隆和测序技术的实例以及足以指导技术人员通过许多克隆练习的说明参见，例如，MolecularCloning：A Laboratory Manual，第2版，第1-3卷，编辑Sambrook等人，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，1989)；和Current Protocols inMolecular Biology(Ausubel等人，编辑1995增刊)。生物试剂和实验设备制造商的产品信息也提供了有用的信息。此类制造商包括SIGMA Chemical Company(Saint Louis，Mo.)、R&DSystems(Minneapolis，Minn.)、Pharmacia Amersham(Piscataway，N.J.)、CLONTECHLaboratories，Inc.(Palo Alto，Calif.)、Chem Genes Corp.、Aldrich Chemical Company(Milwaukee，Wis.)、Glen Research，Inc.、GIBCO BRL Life Technologies，Inc.(Gaithersburg，Md.)、Fluka Chemica-Biochemika Analytika(Fluka Chemie AG，Buchs，Switzerland)、Invitrogen(Carlsbad，Calif.)和Applied Biosystems(Foster City，Calif.)，以及本领域技术人员已知的许多其他商业来源。

编码天然抗体的核酸可以经修饰以形成本文所述的抗体。通过定点诱变进行修饰是本领域中熟知的。核酸也可以通过扩增方法制备。扩增方法包括聚合酶链式反应(PCR)、连接酶链式反应(LCR)、基于转录的扩增系统(TAS)和自主序列复制系统(3SR)。技术人员熟知多种克隆方法、宿主细胞和体外扩增方法。

在一个实施方案中，通过将编码一个或多个抗体结构域(例如，结合人FRα的小鼠IgG1重链可变区)的cDNA插入到包含编码一个或者多个其他抗体结构域(例如，人重链ε恒定区)的cDNA的载体中，来制备抗体。进行插入，使得抗体结构域在框内读取码(即在包含功能性抗体区的一个连续多肽中)。

在一个实施方案中，编码重链恒定区的cDNA连接到重链可变区，使得恒定区位于抗体的羧基末端。随后可以使用二硫键将重链可变区和/或恒定区连接到抗体的轻链可变区和/或恒定区。

一旦分离和克隆了编码抗体或其功能片段的核酸，就可以在重组工程化细胞如细菌、植物、酵母、昆虫和哺乳动物细胞中表达期望的蛋白。预期本领域技术人员熟悉可用于表达蛋白质的多种表达系统，包括大肠杆菌(E.coli)、其他细菌宿主、酵母和各种高级真核细胞，如COS、CHO、HeLa和骨髓瘤细胞系。

编码抗体或其片段的一个或多个DNA序列可以通过DNA转移到合适的宿主细胞中而在体外表达。该细胞可以是原核的或真核的。该术语还包括受试宿主细胞的任何后代。可以理解，所有后代都可能与亲本细胞不同，因为在复制过程中可能发生突变。本领域已知稳定转移(即外源DNA持续保持在宿主中)的方法。表达感兴趣抗体的杂交瘤也包含在本公开中。

编码本文所述的分离抗体和抗体片段的核酸的表达可通过将DNA或cDNA可操作地连接至启动子(其为组成型或诱导型)，然后并入表达盒中来实现。这些表达盒可适用于原核生物或真核生物的复制和整合。典型的表达盒包含用于调节编码蛋白质的DNA表达的特定序列。例如，表达盒可包含适当的启动子、增强子、转录和翻译终止子、起始序列、蛋白质编码基因前的起始密码子(即ATG)、内含子的剪接信号、维持该基因的正确阅读框以允许mRNA的正确翻译的维持物以及终止密码子。

为了获得所克隆基因的高水平表达，需要构建表达盒，该表达盒以最低程度包含指导转录的强启动子、用于翻译起始的核糖体结合位点和转录/翻译终止子。对于大肠杆菌(E.coli)，这包括启动子，如T7、trp、lac或λ启动子，核糖体结合位点，和优选地转录终止信号。对于真核细胞，控制序列可包括启动子和/或增强子，其衍生自例如免疫球蛋白基因、SV40或巨细胞病毒，以及聚腺苷酸化序列，并且可进一步包括剪接供体和受体序列。所述表达盒可以通过熟知的方法转移到选定的宿主细胞中，例如针对大肠杆菌(E.coli)的转化或电穿孔以及哺乳动物细胞的磷酸钙处理、电穿孔或脂质转染。由所述表达盒转化的细胞可以通过该盒中所含基因(如amp、gpt、neo和hyg基因)赋予的抗生素抗性来选择。

当宿主是真核生物时，可以使用诸如磷酸钙共沉淀的DNA转染方法、常规机械方法如显微注射、电穿孔、加入包裹在脂质体中的质粒或病毒载体。真核细胞也可以用编码抗体、标记抗体或其功能片段的多核苷酸序列以及编码可选择表型的第二外源DNA分子(例如单纯疱疹胸苷激酶基因)共转化。另一种方法是使用真核病毒载体，例如猴病毒40(SV40)或牛乳头瘤病毒，瞬时感染或转化真核细胞并表达蛋白(参见例如，Eukaryotic ViralVectors，Cold Spring Harbor Laboratory，Gluzman编辑，1982)。本领域技术人员可以容易地使用表达系统例如质粒和载体，用于在细胞(包括高级真核细胞，例如COS、CHO、HeLa和骨髓瘤细胞系)中产生蛋白质。

可对编码本文所述的多肽(例如，人FRα特异性IgE抗体)的核酸进行修饰而不降低其生物活性。可以进行一些修饰以促进靶向分子的克隆、表达或并入融合蛋白。此类修饰为本领域技术人员所熟知，并且包括例如，终止密码子、添加在氨基末端以提供起始位点的蛋氨酸、放置在任一末端上以创建方便定位的限制性位点的附加氨基酸，或辅助纯化步骤的附加氨基酸(例如聚His)。除了重组方法外，本发明的抗体还可以使用本领域熟知的标准肽合成法全部或部分地构建。

一旦表达，重组抗体可根据本领域的标准程序进行纯化，包括硫酸铵沉淀、亲和柱、柱层析等(通常参见R.Scopes，PROTEIN PURIFICATION，Springer-Verlag，N.Y.，1982)。抗体、免疫缀合物和效应分子不需要100％纯。在纯化(部分纯化或达到期望的均质性)后，如果在治疗上使用，则多肽应基本上不含内毒素。

已经描述了从细菌如大肠杆菌(E.coli)表达单链抗体和/或重折叠成适当活性形式(包括单链抗体)的方法，这些方法是公知的，并且适用于本文公开的抗体。参见Buchner等人，Anal.Biochem.205：263-270，1992；Pluckthun，Biotechnology 9：545，1991；Huse等人，Science 246：1275，1989和Ward等人，Nature 341：544，1989。

通常，来自大肠杆菌(E.coli)或其他细菌的功能性异源蛋白是从包涵体中分离出来的，并且需要使用强变性剂溶解，然后重折叠。在溶解步骤期间，如本领域熟知的，必须存在还原剂以分离二硫键。具有还原剂的示例性缓冲液是：0.1M Tris(pH 8)、6M胍、2mMEDTA、0.3M DTE(二硫赤藓糖醇)。二硫键的再氧化可在还原和氧化形式的低分子量硫醇试剂的存在下发生，如Saxena等人，Biochemistry 9：5015-5021，1970所述，且尤其是如Buchner等人(同上)所述。

复性通常通过将变性的被还原蛋白质稀释(例如100倍)到重折叠缓冲液中来完成。示例性缓冲液为0.1M Tris(pH 8.0)、0.5M L-精氨酸、8mM的氧化谷胱甘肽(GSSG)和2mM的EDTA。

作为对双链抗体纯化方案的修改，重链和轻链区域分别溶解和还原，然后在重折叠溶液中合并。当这两种蛋白质以一种蛋白质相对于另一种蛋白质的摩尔过量不超过5倍的摩尔比混合时，获得示例性产率。在氧化还原转换完成后，可以将过量的氧化谷胱甘肽或其他氧化性低分子量化合物添加到重折叠溶液中。

除重组方法外，本文公开的抗体、标记抗体及其功能片段也可全部或部分地使用标准肽合成来构建。长度小于约50个氨基酸的多肽的固相合成可以通过将序列的C末端氨基酸附接到不溶性载体上，然后依次加入序列中的剩余氨基酸来完成。固相合成技术由Barany&Merrifield，The Peptides：Analysis，Synthesis，Biology.第2卷，SpecialMethods in Peptide Synthesis，Part A.第3-284页；Merrifield等人，J.Am.Chem.Soc.85：2149-2156，1963，和Stewart等人，Solid Phase Peptide Synthesis，2nd ed.，Pierce Chem.Co.，Rockford，Ill.，1984描述。较大长度的蛋白质可以通过较短片段的氨基和羧基末端的缩合来合成。

通过活化羧基末端形成肽键的方法(例如通过使用偶联试剂N，N’-二环己基碳二酰胺)是本领域熟知的。

在一个实施方案中，分离抗体、核酸、表达载体、宿主细胞或其他生物产物。“分离”是指产品已基本上与组分天然存在的环境(如细胞)中的其他生物组分(即其他染色体和染色体外DNA和RNA、蛋白质和细胞器)分离或从其中纯化。已“分离”的核酸和抗体包括通过标准纯化方法纯化的核酸和抗体。该术语还包括通过在宿主细胞中重组表达制备的核酸和抗体以及化学合成的核酸。

组合物和治疗方法

本文提供了包含载体和一种或多种治疗性IgE抗体或其功能片段的组合物。所述组合物可以制备为单位剂型，用于施用给受试者。抗体可配制为用于全身或局部(例如肿瘤内)施用。在一个实例中，治疗性IgE抗体经配制用于肠胃外施用，例如静脉内施用。

用于施用的组合物可以包括溶解在药学上可接受的载体(例如水性载体)中的抗体(或其功能片段)的溶液。可以使用多种水性载体，例如缓冲盐水等。这些溶液是无菌的，并且通常不含不期望的物质。这些组合物可通过常规和熟知的灭菌技术进行灭菌。组合物可包含接近生理条件所需的药学上可接受的辅助物质，例如pH调节剂和缓冲剂、毒性调节剂等，例如，乙酸钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、乳酸钠等。这些制剂中抗体和赋形剂的浓度可以变化，并将主要根据所选的特定施用模式和受试者的需要，基于液体体积、粘度、体重等进行选择。制备可施用组合物的实际方法对于本领域技术人员来说是已知的或明显的，并且在诸如Remington’s Pharmaceutical Science，第19版，Mack Publishing Company，Easton，Pa.(1995)的此类公开中更详细地描述。

在优选的实施方案中，组合物以单位剂型形式提供，例如包含限定量的适于以单剂施用给受试者的IgE抗体。单位剂型可单独包装，例如在单一容器、小瓶、预填充注射器等中。单位剂型可适于立即施用给受试者(例如，可包括生理学上可接受浓度的盐)，或单位剂型可以以浓缩或冻干形式提供(例如，用于在使用前用无菌盐水溶液稀释)。

在本文所述的实施方案中，药物组合物的通常单位剂量(例如，用于静脉施用)包含小于50mg的IgE抗体。例如，组合物(即，以单位剂型)可包括小于40mg、30mg、25mg、20mg、15mg、10mg、5mg、3mg或1mg的IgE抗体。组合物可包括至少10μg、100μg、200μg、300μg、500μg、700μg、1mg、3mg、5mg或10mg的IgE抗体。在优选的实施方案中，组合物包含10μg至50mg、70μg至30mg、300μg至50mg、300μg至30mg、300μg至3mg、500μg至50mg、500μg至30mg、500μg至10mg、500μg至3mg、700μg至50mg、700μg至30mg、700μg至10mg、700μg至3mg、500μg至5mg、500μg至1mg或约700μg的IgE抗体。在一些实施方案中，组合物可包含在一个或多个上述范围内的量的IgE抗体，但不包括以下一个或多个量：1μg、5μg、10μg、50μg、100μg、500μg、1mg、2mg、4mg、5mg、10mg或15mg。例如，组合物可包含2μg至9μg、11μg至99μg、101μg至499μg、501至999μg或2mg至9mg。

施用给受试者的IgE抗体的剂量可基于受试者体重。因此，施用给受试者的IgE抗体的剂量可以例如小于1mg/kg。优选地，IgE抗体可以以例如(每次施用)小于0.7mg/kg、0.5mg/kg、0.3mg/kg、0.1mg/kg、0.07mg/kg、0.05mg/kg、0.03mg/kg或0.01mg/kg的剂量施用给受试者。施用给受试者的IgE抗体的剂量可为至少0.001mg/kg、0.003mg/kg、0.005mg/kg、0.007mg/kg、0.01mg/kg、0.05mg/kg或0.1mg/kg。在优选的实施方案中，施用给受试者的IgE抗体的剂量可为0.001-1mg/kg、0.003-0.7mg/kg、0.005-0.5mg/kg、0.005-0.1mg/kg、0.005-0.05mg/kg、0.007-0.03mg/kg或0.007-0.15mg/kg。在一些实施方案中，施用给受试者的IgE抗体的剂量可在上述定义的一个或多个范围内，但不包括以下一个或多个剂量：1μg/kg、10μg/kg、100μg/kg或0.5mg/kg。例如，IgE抗体的剂量可为2至9μg/kg、11至99μg/kg、101至499μg/kg或0.51至0.7mg/kg。

在本发明的实施方案中，上述IgE抗体的单位剂量每周施用至多一次，例如IgE抗体的最大每周剂量为50mg、40mg、30mg、25mg、20mg、15mg、10mg、5mg、3mg或1mg。例如，IgE抗体的每周剂量可为10μg至50mg、70μg至30mg、300μg至50mg、300μg至30mg、300μg至3mg、500μg至50mg、500μg至30mg、500μg至10mg、500μg至3mg、700μg至50mg、700μg至30mg、700μg至10mg、700μg至3mg、500μg至5mg、500μg至1mg或约700μg。IgE抗体的每周剂量也可以根据受试者的体重来确定，例如，IgE抗体可以以例如，小于0.7mg/kg/周、0.5mg/kg/周、0.3mg/kg/周、0.1mg/kg/周、0.07mg/kg/周、0.05mg/kg/周、0.03mg/kg/周或0.01mg/kg/周的剂量施用给受试者。在优选的实施方案中，施用给受试者的IgE抗体的剂量可以是0.001-1mg/kg/周、0.003-0.7mg/kg/周、0.005-0.5mg/kg/周、0.005-0.1mg/kg/周、0.005-0.05mg/kg/周、0.007-0.03mg/kg/周或0.007-0.15mg/kg/周。在一些实施方案中，施用给受试者的IgE抗体的剂量可在上述定义的一个或多个范围内，但不包括以下一个或多个剂量：1μg/kg/天(7μg/kg/周)、10μg/kg/天(70μg/kg/周)或100μg/kg/天(0.7mg/kg/周)。例如，IgE抗体的剂量可以是2至6μg/kg/周、8至69μg/kg/周或71至699μg/kg/周。

在一个实施方案中，药物组合物是包含一种或多种赋形剂的液体，所述赋形剂选自柠檬酸钠、L-精氨酸、蔗糖、聚山梨醇酯20和/或氯化钠。优选地，组合物的pH为6.0至8.0，例如约6.5。赋形剂的优选浓度包括：0.05至0.5M(例如，约0.1M)的柠檬酸钠；10至50g/L(例如，约30g/L)的L-精氨酸；10至100g/L(例如，约50g/L)的蔗糖；0.01至0.05％w/w(例如，0.02％w/w)的聚山梨醇酯20。在一个实施方案中，IgE抗体以约0.1mg/ml至10mg/ml或0.5mg/ml至2mg/ml，例如约1mg/ml的浓度存在于此类制剂中。在一些实施方案中，可将此类组合物配制为单位剂型，例如体积为约1ml包含约1mgIgE抗体的溶液，例如在2ml I型玻璃瓶中。在施用给受试者前，可使用无菌盐水(0.9％w/v)稀释组合物，例如，以1ml的组合物量稀释在250ml的盐水中。

抗体可以冻干形式提供，并在施用前用无菌水再水合，尽管它们也以已知浓度的无菌溶液形式提供。然后将抗体溶液添加到含有O.9％氯化钠(USP)的输注袋中，并施用给受试者。自1997年利妥昔单抗(RITUXAN，注册商标)获得批准以来，已在美国上市的抗体药物的施用领域有相当丰富的经验。抗体可以通过缓慢输注，而不是静脉推注或浓注(bolus)施用。在一个实例中，施用较高的负荷剂量，随后施用较低水平的维持剂量。例如，可在约90分钟内输注初始负荷剂量，然后在30分钟时间内每周输注维持剂量，持续4-8周，如果先前剂量耐受良好的话。

可施用抗体(或其功能片段)以减缓或抑制细胞(例如癌细胞)的生长。在这些应用中，将治疗有效量的抗体以足以抑制癌细胞的生长、复制或转移，或抑制癌症的体征或症状的量施用给受试者。在一些实施方案中，向受试者施用抗体以抑制或预防转移的发展，或减少转移的大小或数量，例如微转移，例如局部淋巴结的微转移(Goto等人，Clin.CancerRes.14(11)：3401-3407，2008)。

因此，在一些实施方案中，IgE抗体用于治疗癌症和/或延迟或预防癌症进展。“延迟或预防癌症进展”是指，例如，在施用抗体后，癌症至少稳定一段时间，例如至少6周、至少12周、至少6个月或至少12个月。例如，“稳定”疾病可定义为RECIST评分变化小于20％。

RECIST(实体瘤疗效评价标准)评价是用于确定患者的疾病在癌症疗法治疗后是否有所改善、保持不变或恶化的一个简单方法，通常用于抗癌药物的临床试验。RECIST标准例如在Eisenhauer等人，New response evaluation criteria in solid tumours：Revised RECIST guideline(版本1.1)，European Journal Of Cancer 45(2009)228-247中规定。RECIST将进展性疾病(PD)定义为靶病变直径总和增加至少20％(以研究中最小的总和为参考)。疾病稳定被定义为既没有足够的收缩来符合部分缓解(靶病变直径总和减少至少30％)，也没有足够的增加来符合PD，即增加小于20％被定义为疾病稳定。

在该上下文中，应当理解“至少稳定”包括RECIST评分增加或减少小于20％。因此，抗体可延迟或预防疾病的进展(例如，延迟或预防一种或多种癌症体征或症状的出现，和/或抑制癌细胞的生长，和/或预防或减少转移)，或改善或促进疾病的缓解(例如，减少或抑制一种或几种癌症体征或症状，和/或杀死癌细胞)。

合适的受试者可包括被诊断患有癌症的那些受试者，例如表达FRα的癌症，例如但不限于，皮肤癌(例如，黑素瘤)、肺癌、前列腺癌、鳞状细胞癌(例如，头颈部鳞状细胞癌)、乳腺癌(包括但不限于基底乳腺癌、导管癌和小叶乳腺癌)、白血病(例如，急性髓性白血病和11g23-阳性急性白血病)、淋巴瘤、神经嵴肿瘤(例如，星形细胞瘤、神经胶质瘤或神经母细胞瘤)、卵巢癌、结肠癌、胃癌、胰腺癌、骨癌(例如，脊索瘤)、神经胶质瘤或者肉瘤(例如，软骨肉瘤)。优选地，抗体用于治疗实体瘤。

抗体的治疗有效量取决于疾病的严重程度和患者的一般健康状况。抗体的治疗有效量是产生症状(一种或多种)的主观缓解或如临床医生或其他合格观察者所述的客观可识别的改善。这些组合物可以与另一种化疗剂同时或顺序施用。

现在将参考以下非限制性实施方案仅以举例说明的方式进一步描述本发明。

实施例

嵌合MOv18 IgE(MOv18 IgE)

嵌合MOv18 IgE(MOv18 IgE)是抗叶酸受体α(FRα)的IgE类单克隆抗体(mAb)。该抗体已被证明在体外介导对表达FRα的肿瘤细胞系和在体内介导对表达FRα的肿瘤异种移植物的有效抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和抗体依赖性细胞介导的吞噬作用(ADCP)。靶抗原FRα在数种实体癌类型(包括卵巢癌、子宫内膜癌和间皮瘤)中过量表达。该抗原已被表征为具有有效的肿瘤特异性，且使用IgG抗体靶向FRα的临床试验(包括嵌合MOv18 IgG1(MOv18 IgG1)的试验)已证明了良好的耐受性特性。MOv18 IgE被认为具有参与结合血液效应细胞(包括单核细胞、嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞)的作用机制。这些携带IgE的细胞进入组织，在遇到表达FRα的细胞时，产生IgE介导的针对肿瘤的免疫应答。MOv18IgG和IgE抗体及其性质描述于例如Coney，L.R.，A.Tomassetti等人，(1991).“Cloning ofa tumor-associated antigen：MOv18 andMOv19 antibodies recognize a folate-binding protein.”Cancer Res 51(22)：6125-6132；Gould，H.J.，G.A.Mackay等人，(1999).“Comparison of IgE and IgG antibody-dependent cytotoxicity in vitroand in a SCID mouse xenograft model of ovarian carcinoma.”Eur J Immunol 29(11)：3527-3537；Karagiannis，S.N.，Q.Wang等人，(2003).“Activity of humanmonocytes in IgE antibody dependent surveillance and killing of ovarian tumorcells.”Eur J Immunol 33(4)：1030-1040中。

药物制剂和施用

MOv18 IgE是168kDa蛋白质，具有如图1(SEQ ID NO：1)和2(SEQ ID NO：2)所示的轻链和重链氨基酸序列。MOv18 IgE药物产品以在2mL小瓶中装填体积为1.0mL的含有1mg/mL MOv18 IgE的pH 6.5的无菌、无热原且无颗粒的溶液形式提供，用于在输注前进行稀释。每个MOv18 IgE小瓶还含有赋形剂0.1M柠檬酸钠、30g/L L-精氨酸、50g/L蔗糖、0.02％聚山梨醇酯20的注射用水溶液。

MOv18 IgE在用0.9％(w/v)盐水稀释后通过静脉(IV)输注施用。此外，受试者在每次IV施用之前接受MOv18 IgE(加组胺和盐水对照)的皮内[ID]施用，以评估过敏反应的风险。或者，使用皮肤点刺试验评估过敏反应风险。患者仅在对抗体无皮肤反应的情况下进行MOv18 IgE的IV施用。

在施用治疗性抗体之前，从受试者处获得血样，并在MOv18 IgE(Flow

Bühlmann Laboratories AG，

Switzerland)存在下进行嗜碱性粒细胞激活试验。

研究设计

在FRα阳性实体瘤的开放标记I期多递增剂量7递增试验中，测试MOv18 IgE。24例表达FRα的晚期实体肿瘤患者被纳入研究。符合条件的受试者有足够的器官功能，没有严重过敏史，没有可能增加过敏反应事件风险的合并药物或并存疾病。

患者以IV输注每周接受一次MOv18 IgE，共六个剂量，从70μg的固定剂量开始。剂量递增通过定义的剂量水平(包括70μg、250μg、500μg、700μg、1.5mg和3mg)直至50mg最大剂量来进行。在此阶段，三周的治疗被视为一轮。在任何队列中表现受益于MOv18 IgE的患者，以每两周的时间间隔持续以相同的剂量水平(除非遇到剂量限制性毒性或患者发展为进行性疾病)给予至多三个进一步剂量的MOv18IgE。这一额外时间被视为维持期。

最初，患者被纳入单患者队列(队列1至4；70至700μg剂量的MOv18 IgE)，因为计划剂量非常低，并且被认为不太可能引起显著的生物学反应。对于队列5至10(1.5至50mg剂量的MOv18 IgE)，每个队列有三名患者被纳入，如果毒性需要，另外三名患者加入队列。为了进一步探讨MOv18 IgE的安全性和功效，将队列扩大至6名患者。在队列10之后没有进一步的剂量递增(即，50mg是评估的最高剂量)。

结果

在研究的初始阶段，10名患者接受了MOv18 IgE，其中两名患者以500μg剂量水平进行治疗。在6周和/或研究后随访(大于8周)时，在3/21名可评估患者中检测到抗药物抗体(2名患者检测到ADA，另有1名疑似ADA的患者)。其中一名接受500μg剂量水平治疗的患者在接受MOv18 IgE后不久发生3级过敏反应发作。该患者按照方案接受了标准过敏反应治疗，并完全康复。

特定剂量受试者队列接受静脉施用后MOv18 IgE(血清浓度)的药代动力学如图5所示。队列1：70μg；队列2：250μg；队列3：500μg；队列4：700μg；队列5：1.5mg。

图6和7显示，以700μg的单位剂量施用MOv18 IgE抗体产生了抗肿瘤效果。图6显示了从CT扫描图像中获得的肿瘤测量结果，表明用700μg剂量水平的MOv18 IgE抗体治疗的卵巢癌受试者的肿瘤尺寸减小。图7显示了在用6个每周700μg剂量的MOv18 IgE抗体，随后是以2周间隔进一步3个700μg剂量的抗体的患者治疗期间，卵巢癌抗原CA125的血清浓度显著降低。卵巢癌治疗期间CA125的降低已被证明与积极的治疗结果相关(参见例如，Yang，Z.，Zhao，B.&Li，L.The significance ofthe change pattern of serum CA125 level forjudging prognosis and diagnosing recurrences of epithelial ovarian cancer.JOvarian Res 9，57(2016))。根据妇科肿瘤学组(GOG)标准，图7所示的CA125水平的降低高于定义卵巢癌化疗反应的阈值(参见例如，Rustin等人，Defining response of ovariancarcinoma to initial chemotherapy according to serum CA 125，Journal ofClinical Oncology 1996 14：5，1545-1551)。

图8至10显示，使用低剂量MOv18 IgE抗体治疗的大多数患者都经历了疾病稳定。图8显示了从治疗开始到结束(0-12周)用MOv18 IgE抗体治疗的个体卵巢癌受试者的RECIST(实体瘤疗效评价标准)评分的变化图。图9和10分别显示了治疗6周和12周时个体受试者RECIST评分的变化。RECIST评分变化小于20％表示疾病稳定。治疗6周后，70％(14/20)的受治疗患者疾病稳定。治疗至12周的患者中，60％(3/5)仍有稳定的疾病。更不要说在6-12周期间，剂量频率从每周一次下降到每两周一次。

疾病稳定(即，RECIST评分变化小于20％)是无进展生存期(PFS)的关键驱动因素，PFS是疗效的主要终点。目前的研究表明，6周时的疾病控制率为70％，12周时为60％。因此，这些结果证明，IgE抗体可以以非常低的剂量用于治疗和/或延迟人受试者的癌症进展。

结果表明，MOv18 IgE非常适合于抗癌疗法，并且在大多数患者中施用是可耐受的。最引人注目的是，即使在非常低的剂量(例如700μg)下，抗体也显示出抗肿瘤活性。这些结果首次支持了IgE作为治疗癌症的安全性和有效性，包括小于50mg的单位剂量(小于1mg/kg/周)。

以上说明书中提及的所有出版物均通过引用并入本文。在不脱离本发明的范围和精神的情况下，本发明描述的方法和系统的各种修改和变化对本领域技术人员将是显而易见的。尽管已经结合特定的优选实施方案描述了本发明，但是应当理解，要求保护的本发明不应过度地局限于这样的特定实施方案。实际上，对于本领域的技术人员来说显而易见的是，所描述的用于实施本发明的方式的各种修改都在以下权利要求的范围内。

序列表

<110> 伦敦王室学院（King's College London）

<120> 包含IGE抗体的组合物

<130> P6131WO

<150> GB 2006093.5

<151> 2020-04-24

<160> 141

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 209

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> MOv18 IgE轻 (L)链

<400> 1

Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly Asp Arg Val Thr Ile

1 5 10 15

Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe Leu Asn Trp Tyr Gln

20 25 30

Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile Tyr Tyr Thr Ser Arg

35 40 45

Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr

50 55 60

Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ile Asn Leu Glu Gln Glu Asp Ile Ala Ile

65 70 75 80

Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Ser Thr Ile Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly

85 90 95

Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile

100 105 110

Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val

115 120 125

Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys

130 135 140

Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu

145 150 155 160

Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu

165 170 175

Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr

180 185 190

His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu

195 200 205

Cys

<210> 2

<211> 549

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> MOv18 IgE重(H)链

<400> 2

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Asp Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp Pro Arg Ser Gly Lys Ser Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ser Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Thr Met Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Pro Pro Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Gln Ser Pro Ser

115 120 125

Val Phe Pro Leu Thr Arg Cys Cys Lys Asn Ile Pro Ser Asn Ala Thr

130 135 140

Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Ala Thr Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val

145 150 155 160

Met Val Thr Trp Asp Thr Gly Ser Leu Asn Gly Thr Thr Met Thr Leu

165 170 175

Pro Ala Thr Thr Leu Thr Leu Ser Gly His Tyr Ala Thr Ile Ser Leu

180 185 190

Leu Thr Val Ser Gly Ala Trp Ala Lys Gln Met Phe Thr Cys Arg Val

195 200 205

Ala His Thr Pro Ser Ser Thr Asp Trp Val Asp Asn Lys Thr Phe Ser

210 215 220

Val Cys Ser Arg Asp Phe Thr Pro Pro Thr Val Lys Ile Leu Gln Ser

225 230 235 240

Ser Cys Asp Gly Gly Gly His Phe Pro Pro Thr Ile Gln Leu Leu Cys

245 250 255

Leu Val Ser Gly Tyr Thr Pro Gly Thr Ile Asn Ile Thr Trp Leu Glu

260 265 270

Asp Gly Gln Val Met Asp Val Asp Leu Ser Thr Ala Ser Thr Thr Gln

275 280 285

Glu Gly Glu Leu Ala Ser Thr Gln Ser Glu Leu Thr Leu Ser Gln Lys

290 295 300

His Trp Leu Ser Asp Arg Thr Tyr Thr Cys Gln Val Thr Tyr Gln Gly

305 310 315 320

His Thr Phe Glu Asp Ser Thr Lys Lys Cys Ala Asp Ser Asn Pro Arg

325 330 335

Gly Val Ser Ala Tyr Leu Ser Arg Pro Ser Pro Phe Asp Leu Phe Ile

340 345 350

Arg Lys Ser Pro Thr Ile Thr Cys Leu Val Val Asp Leu Ala Pro Ser

355 360 365

Lys Gly Thr Val Asn Leu Thr Trp Ser Arg Ala Ser Gly Lys Pro Val

370 375 380

Asn His Ser Thr Arg Lys Glu Glu Lys Gln Arg Asn Gly Thr Leu Thr

385 390 395 400

Val Thr Ser Thr Leu Pro Val Gly Thr Arg Asp Trp Ile Glu Gly Glu

405 410 415

Thr Tyr Gln Cys Arg Val Thr His Pro His Leu Pro Arg Ala Leu Met

420 425 430

Arg Ser Thr Thr Lys Thr Ser Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu Val Tyr

435 440 445

Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg Thr Leu

450 455 460

Ala Cys Leu Ile Gln Asn Phe Met Pro Glu Asp Ile Ser Val Gln Trp

465 470 475 480

Leu His Asn Glu Val Gln Leu Pro Asp Ala Arg His Ser Thr Thr Gln

485 490 495

Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe Phe Val Phe Ser Arg Leu Glu

500 505 510

Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys Arg Ala

515 520 525

Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala Val Ser

530 535 540

Val Asn Pro Gly Lys

545

<210> 3

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> MOv18 IgE轻链可变结构域

<400> 3

Asp Ile Gln Met Thr Gln Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Asn Asn Phe

20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr Ile Ile Asn Leu Glu Gln

65 70 75 80

Glu Asp Ile Ala Ile Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Ser Thr Ile Pro Arg

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 4

<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> MOv18 IgE重链可变结构域

<400> 4

Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Ala Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Asp Tyr Ile Phe Thr Asn Tyr

20 25 30

Asp Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Glu Ile Asp Pro Arg Ser Gly Lys Ser Tyr Tyr Asn Glu Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ser Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Thr Met Tyr Tyr Tyr Gly Ser Ser Pro Pro Met Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 5

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕利珠单抗CDR H1

<400> 5

Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Met Ser Val Gly

1 5 10

<210> 6

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕利珠单抗CDR H2

<400> 6

Asp Ile Trp Trp Asp Asp Lys Lys Asp Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser

1 5 10 15

<210> 7

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕利珠单抗CDR H3

<400> 7

Ser Met Ile Thr Asn Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10

<210> 8

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕利珠单抗CDR L1

<400> 8

Lys Cys Gln Leu Ser Val Gly Tyr Met His

1 5 10

<210> 9

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕利珠单抗CDR L2

<400> 9

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 10

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕利珠单抗CDR L3

<400> 10

Phe Gln Gly Ser Gly Tyr Pro Phe Thr

1 5

<210> 11

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 雷尼珠单抗CDR H1

<400> 11

Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr Gly Met Asn

1 5 10

<210> 12

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 雷尼珠单抗CDR H2

<400> 12

Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys

1 5 10 15

Arg

<210> 13

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 雷尼珠单抗CDR H3

<400> 13

Tyr Pro Tyr Tyr Tyr Gly Thr Ser His Trp Phe Asp Val

1 5 10

<210> 14

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> L1

<400> 14

Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn

1 5 10

<210> 15

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 雷尼珠单抗CDR L2

<400> 15

Phe Thr Ser Ser Leu His Ser

1 5

<210> 16

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 雷尼珠单抗CDR L3

<400> 16

Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 17

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HMW-MAA CDR H1

<400> 17

Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Trp

1 5

<210> 18

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HMW-MAA CDR H2

<400> 18

Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Phe Gly Arg

1 5 10

<210> 19

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HMW-MAA CDR H3

<400> 19

Thr Ser Tyr Gly Asn Tyr Val Gly His Tyr Phe Asp His

1 5 10

<210> 20

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HMW-MAA CDR L1

<400> 20

Gln Asn Val Asp Thr Asn

1 5

<210> 21

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HMW-MAA CDR L2

<400> 21

Ser Ala Ser

1

<210> 22

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HMW-MAA CDR L3

<400> 22

Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 23

<211> 123

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HMW-MAA可变结构域（重链）

<400> 23

Glu Gln Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly

1 5 10 15

Gly Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn

20 25 30

Tyr Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp

35 40 45

Ile Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Phe Gly Arg Tyr Tyr Ala

50 55 60

Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Ser

65 70 75 80

Ser Ala Tyr Leu Gln Met Ile Asn Leu Arg Ala Glu Asp Thr Gly Ile

85 90 95

Tyr Tyr Cys Thr Ser Tyr Gly Asn Tyr Val Gly His Tyr Phe Asp His

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 24

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HMW-MAA可选的可变结构域（重链）

<400> 24

Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr

20 25 30

Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Gly Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Phe Gly Arg Tyr Tyr Ala Glu

50 55 60

Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr

65 70 75 80

Ala Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr

85 90 95

Tyr Cys Thr Ser Tyr Gly Asn Tyr Val Gly His Tyr Phe Asp His Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 25

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HMW-MAA可变结构域（轻链）

<400> 25

Asp Ile Glu Leu Thr Gln Ser Pro Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Cys

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Val Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Glu Pro Leu Leu

35 40 45

Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 26

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> HMW-MAA可选的可变结构域（轻链）

<400> 26

Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Asp Thr Asn

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro Leu Leu

35 40 45

Phe Ser Ala Ser Tyr Arg Tyr Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys

100 105

<210> 27

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿仑单抗CDR H1

<400> 27

Gly Phe Thr Phe Thr Asp Phe Tyr

1 5

<210> 28

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿仑单抗CDR H2

<400> 28

Ile Arg Asp Lys Ala Lys Gly Tyr Thr Thr

1 5 10

<210> 29

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿仑单抗CDR H3

<400> 29

Ala Arg Glu Gly His Thr Ala Ala Pro Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 30

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿仑单抗CDR L1

<400> 30

Gln Asn Ile Asp Lys Tyr

1 5

<210> 31

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿仑单抗CDR L2

<400> 31

Asn Thr Asn

1

<210> 32

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿仑单抗CDR L3

<400> 32

Leu Gln His Ile Ser Arg Pro Arg Thr

1 5

<210> 33

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿特珠单抗CDR H1

<400> 33

Asp Ser Trp Ile His

1 5

<210> 34

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿特珠单抗CDR H2

<400> 34

Trp Ile Ser Pro Tyr Gly Gly Ser Thr Tyr

1 5 10

<210> 35

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿特珠单抗CDR H3

<400> 35

Arg His Trp Pro Gly Gly Phe

1 5

<210> 36

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿特珠单抗CDR L1

<400> 36

Asp Val Ser Thr Ala Val Ala

1 5

<210> 37

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿特珠单抗CDR L2

<400> 37

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr

1 5

<210> 38

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿特珠单抗CDR L3

<400> 38

Gln Gln Tyr Leu Tyr His Pro Ala Thr

1 5

<210> 39

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿维单抗CDR H1

<400> 39

Ser Tyr Ile Met Met

1 5

<210> 40

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿维单抗CDR H2

<400> 40

Ser Ile Tyr Pro Ser Gly Gly Ile Thr Phe

1 5 10

<210> 41

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿维单抗CDR H3

<400> 41

Ile Lys Leu Phe Thr Val Thr Thr Val

1 5

<210> 42

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿维单抗CDR L1

<400> 42

Val Gly Gly Tyr Asn Tyr Val Ser

1 5

<210> 43

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿维单抗CDR L2

<400> 43

Asp Val Ser Asn Arg Pro

1 5

<210> 44

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿维单抗CDR L2

<400> 44

Asp Val Ser Asn Arg Pro

1 5

<210> 45

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿维单抗CDR L3

<400> 45

Ser Ser Tyr Thr Ser Ser Ser Thr Arg Val

1 5 10

<210> 46

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 贝伐单抗CDR H1

<400> 46

Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly

1 5

<210> 47

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 贝伐单抗CDR H2

<400> 47

Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro

1 5

<210> 48

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 贝伐单抗CDR H3

<400> 48

Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val

1 5 10 15

<210> 49

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 贝伐单抗CDR L1

<400> 49

Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

1 5

<210> 50

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 贝伐单抗CDR L2

<400> 50

Phe Thr Ser

1

<210> 51

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 贝伐单抗CDR L3

<400> 51

Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr

1 5

<210> 52

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 培塞利珠单抗CDR H1

<400> 52

Gly Tyr Val Phe Thr Asp Tyr Gly Met Asn

1 5 10

<210> 53

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 培塞利珠单抗CDR H2

<400> 53

Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Ile Gly Glu Pro Ile Tyr Ala Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 54

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 培塞利珠单抗CDR H3

<400> 54

Ala Arg Gly Tyr Arg Ser Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 55

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 培塞利珠单抗CDR L1

<400> 55

Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Thr Asn Val Ala

1 5 10

<210> 56

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 培塞利珠单抗CDR L2

<400> 56

Ser Ala Ser Phe Leu Tyr

1 5

<210> 57

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 培塞利珠单抗CDR L3

<400> 57

Gln Gln Tyr Asn Ile Tyr Pro Leu

1 5

<210> 58

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 西妥昔单抗CDR H1

<400> 58

Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr Gly

1 5

<210> 59

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 西妥昔单抗CDR H2

<400> 59

Ile Trp Ser Gly Gly Asn Thr

1 5

<210> 60

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 西妥昔单抗CDR H3

<400> 60

Ala Arg Ala Leu Thr Tyr Tyr Asp Tyr Glu Phe Ala Tyr

1 5 10

<210> 61

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 西妥昔单抗CDR L1

<400> 61

Gln Ser Ile Gly Thr Asn

1 5

<210> 62

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 西妥昔单抗CDR L2

<400> 62

Tyr Ala Ser

1

<210> 63

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 西妥昔单抗CDR L3

<400> 63

Gln Gln Asn Asn Asn Trp Pro Thr Thr

1 5

<210> 64

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 德瓦鲁单抗CDR H1

<400> 64

Arg Tyr Trp Met Ser

1 5

<210> 65

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 德瓦鲁单抗CDR H2

<400> 65

Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr

1 5 10

<210> 66

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 德瓦鲁单抗CDR H3

<400> 66

Glu Gly Gly Trp Phe Gly Glu Leu Ala Phe

1 5 10

<210> 67

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 德瓦鲁单抗CDR L1

<400> 67

Arg Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala

1 5

<210> 68

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 德瓦鲁单抗CDR L2

<400> 68

Asp Ala Ser Ser Arg Ala

1 5

<210> 69

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 德瓦鲁单抗CDR L3

<400> 69

Gln Gln Tyr Gly Ser Leu Pro Trp Thr

1 5

<210> 70

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 依法利珠单抗CDR H1

<400> 70

Gly Tyr Ser Phe Thr Gly His Trp Met Asn

1 5 10

<210> 71

<211> 20

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 依法利珠单抗CDR H2

<400> 71

Gly Ile Met Ile His Pro Ser Asp Ser Glu Thr Arg Tyr Asn Gln Lys

1 5 10 15

Phe Lys Asp Ile

20

<210> 72

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 依法利珠单抗CDR H3

<400> 72

Ala Arg Ile Gly Ile Tyr Phe Tyr Gly Thr Thr Tyr Phe Asp Tyr Ile

1 5 10 15

<210> 73

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 依法利珠单抗CDR L1

<400> 73

Arg Ala Ser Lys Thr Ile Ser Lys Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 74

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 依法利珠单抗CDR L2

<400> 74

Ser Gly Ser Thr Leu Gln

1 5

<210> 75

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 依法利珠单抗CDR L3

<400> 75

Gln Gln His Asn Glu Tyr Pro Leu

1 5

<210> 76

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 奥马珠单抗CDR H1

<400> 76

Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly Tyr Ser Trp Asn

1 5 10

<210> 77

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 奥马珠单抗CDR H2

<400> 77

Ala Ser Ile Thr Tyr Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys

1 5 10 15

Gly

<210> 78

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 奥马珠单抗CDR H3

<400> 78

Ala Arg Gly Ser His Tyr Phe Gly His Trp His Phe Ala Val

1 5 10

<210> 79

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 奥马珠单抗CDR L1

<400> 79

Arg Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp Gly Asp Ser Tyr Met Asn

1 5 10 15

<210> 80

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 奥马珠单抗CDR L2

<400> 80

Ala Ala Ser Tyr Leu Glu

1 5

<210> 81

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 奥马珠单抗CDR L3

<400> 81

Gln Gln Ser His Glu Asp Pro Tyr

1 5

<210> 82

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕尼单抗CDR H1

<400> 82

Gly Gly Ser Val Ser Ser Gly Asp Tyr Tyr

1 5 10

<210> 83

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕尼单抗CDR H2

<400> 83

Ile Tyr Tyr Ser Gly Asn Thr

1 5

<210> 84

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕尼单抗CDR H3

<400> 84

Val Arg Asp Arg Val Thr Gly Ala Phe Asp Ile

1 5 10

<210> 85

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕尼单抗CDR L1

<400> 85

Gln Asp Ile Ser Asn Tyr

1 5

<210> 86

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕尼单抗CDR L2

<400> 86

Asp Ala Ser

1

<210> 87

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕尼单抗CDR L3

<400> 87

Gln His Phe Asp His Leu Pro Leu Ala

1 5

<210> 88

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕妥株单抗CDR L1

<400> 88

Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Thr

1 5

<210> 89

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕妥株单抗CDR H2

<400> 89

Val Asn Pro Asn Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 90

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕妥株单抗CDR H3

<400> 90

Ala Arg Asn Leu Gly Pro Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 91

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕妥株单抗CDR L1

<400> 91

Gln Asp Val Ser Ile Gly

1 5

<210> 92

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕妥株单抗CDR L2

<400> 92

Ser Ala Ser

1

<210> 93

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 帕妥株单抗CDR L3

<400> 93

Gln Gln Tyr Tyr Ile Tyr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 94

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 利妥昔单抗CDR H1

<400> 94

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asn

1 5

<210> 95

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 利妥昔单抗CDR H2

<400> 95

Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr

1 5

<210> 96

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 利妥昔单抗CDR H3

<400> 96

Ala Arg Ser Thr Tyr Tyr Gly Gly Asp Trp Phe Asn Val

1 5 10

<210> 97

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 利妥昔单抗CDR L1

<400> 97

Ser Ser Val Ser Tyr

1 5

<210> 98

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 利妥昔单抗CDR L2

<400> 98

Ala Thr Ser

1

<210> 99

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 利妥昔单抗CDR L3

<400> 99

Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr

1 5

<210> 100

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 曲妥珠单抗CDR H1

<400> 100

Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr

1 5

<210> 101

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 曲妥珠单抗CDR H2

<400> 101

Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr

1 5

<210> 102

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 曲妥珠单抗CDR H3

<400> 102

Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 103

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 曲妥珠单抗CDR L1

<400> 103

Gln Asp Val Asn Thr Ala

1 5

<210> 104

<211> 3

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 曲妥珠单抗CDR L2

<400> 104

Ser Ala Ser

1

<210> 105

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> L3

<400> 105

Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr

1 5

<210> 106

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿达木单抗CDR H1

<400> 106

Asp Tyr Ala Met His

1 5

<210> 107

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿达木单抗CDR H2

<400> 107

Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val Glu

1 5 10 15

Gly

<210> 108

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿达木单抗CDR H3

<400> 108

Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 109

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿达木单抗CDR L1

<400> 109

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr Leu Ala

1 5 10

<210> 110

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿达木单抗CDR L2

<400> 110

Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser

1 5

<210> 111

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 阿达木单抗CDR L3

<400> 111

Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr

1 5

<210> 112

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 巴利昔单抗CDR H1

<400> 112

Gly Tyr Ser Phe Thr Arg Tyr Trp Met His

1 5 10

<210> 113

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 巴利昔单抗CDR H2

<400> 113

Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Glu

1 5 10 15

Gly

<210> 114

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 巴利昔单抗CDR H3

<400> 114

Asp Tyr Gly Tyr Tyr Phe Asp Phe

1 5

<210> 115

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 巴利昔单抗CDR L1

<400> 115

Ser Ala Ser Ser Ser Arg Ser Tyr Met Gln

1 5 10

<210> 116

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 巴利昔单抗CDR L2

<400> 116

Asp Thr Ser Lys Leu Ala Ser

1 5

<210> 117

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 巴利昔单抗CDR L3

<400> 117

His Gln Arg Ser Ser Tyr Thr

1 5

<210> 118

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 贝利尤单抗CDR H1

<400> 118

Gly Gly Thr Phe Asn Asn Asn Ala Ile Asn

1 5 10

<210> 119

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 贝利尤单抗CDR H2

<400> 119

Gly Ile Ile Pro Met Phe Gly Thr Ala Lys Tyr Ser Gln Asn Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 120

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 贝利尤单抗CDR H3

<400> 120

Ser Arg Asp Leu Leu Leu Phe Pro His His Ala Leu Ser Pro

1 5 10

<210> 121

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 贝利尤单抗CDR L1

<400> 121

Gln Gly Asp Ser Leu Arg Ser Tyr Tyr Ala Ser

1 5 10

<210> 122

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 贝利尤单抗CDR L2

<400> 122

Gly Lys Asn Asn Arg Pro Ser

1 5

<210> 123

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 贝利尤单抗CDR L3

<400> 123

Ser Ser Arg Asp Ser Ser Gly Asn His Trp Val

1 5 10

<210> 124

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 达克珠单抗CDR H1

<400> 124

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Arg Met His

1 5 10

<210> 125

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 达克珠单抗CDR H2

<400> 125

Tyr Ile Asn Pro Ser Thr Gly Tyr Thr Glu Tyr Asn Gln Lys Phe Lys

1 5 10 15

Asp

<210> 126

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 达克珠单抗CDR H3

<400> 126

Gly Gly Gly Val Phe Asp Tyr

1 5

<210> 127

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 达克珠单抗CDR L1

<400> 127

Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met His

1 5 10

<210> 128

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 达克珠单抗CDR L2

<400> 128

Thr Thr Ser Asn Leu Ala Ser

1 5

<210> 129

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 达克珠单抗CDR L3

<400> 129

His Gln Arg Ser Thr Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 130

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 英夫利昔单抗CDR H1

<400> 130

Ile Phe Ser Asn His Trp

1 5

<210> 131

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 英夫利昔单抗CDR H2

<400> 131

Arg Ser Lys Ser Ile Asn Ser Ala Thr His

1 5 10

<210> 132

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 英夫利昔单抗CDR H3

<400> 132

Asn Tyr Tyr Gly Ser Thr Tyr

1 5

<210> 133

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 英夫利昔单抗CDR L1

<400> 133

Phe Val Gly Ser Ser Ile His

1 5

<210> 134

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 英夫利昔单抗CDR L2

<400> 134

Lys Tyr Ala Ser Glu Ser Met

1 5

<210> 135

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 英夫利昔单抗CDR L3

<400> 135

Gln Ser His Ser Trp

1 5

<210> 136

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 那他珠单抗CDR H1

<400> 136

Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr Tyr Ile His

1 5 10

<210> 137

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 那他珠单抗CDR H2

<400> 137

Arg Ile Asp Pro Ala Asn Gly Tyr Thr Lys Tyr Asp Pro Lys Phe Gln

1 5 10 15

Gly

<210> 138

<211> 14

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 那他珠单抗CDR H3

<400> 138

Glu Gly Tyr Tyr Gly Asn Tyr Gly Val Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 139

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 那他珠单抗CDR L1

<400> 139

Lys Thr Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Met Ala

1 5 10

<210> 140

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 那他珠单抗CDR L2

<400> 140

Tyr Thr Ser Ala Leu Gln Pro

1 5

<210> 141

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 那他珠单抗CDR L3

<400> 141

Leu Gln Tyr Asp Asn Leu Trp Thr

1 5

Claims

1.一种包含同种型免疫球蛋白E(IgE)抗体的药物单位剂量组合物，其中所述组合物包含小于50mg的所述IgE抗体。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含小于30mg、小于25mg、小于10mg、小于5mg、小于3mg或小于1mg的所述IgE抗体。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的组合物，其中所述组合物包含10μg至50mg、70μg至30mg、70μg至3mg、500μg至1mg或约700μg的所述IgE抗体。

4.根据任一前述权利要求所述的组合物，其中所述组合物为液体形式。

5.根据任一前述权利要求所述的组合物，其中所述组合物包含浓度为0.1mg/ml至10mg/ml、0.5mg/ml至2mg/ml或约1mg/ml的所述IgE抗体的水溶液。

6.根据任一前述权利要求所述的组合物，其中所述组合物还包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。

7.根据权利要求6所述的组合物，其中所述药学上可接受的赋形剂选自柠檬酸钠、L-精氨酸、蔗糖、聚山梨醇酯20和/或氯化钠。

8.根据任一前述权利要求所述的组合物，其中所述组合物适于静脉注射。

9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述组合物适于静脉注射，以至多50mg/周、25mg/周，10mg/周、3mg/周或1mg/周的最大总剂量。

10.根据任一前述权利要求所述的组合物，其中所述抗体是抗叶酸受体α(FRα)抗体。

11.根据权利要求10所述的组合物，其中所述抗体是MOv18 IgE抗体。

12.根据任一前述权利要求所述的组合物，用于治疗和/或延迟受试者中的癌症进展。

13.根据权利要求12所述用途的组合物，其中所述癌症是卵巢癌。

14.根据权利要求12或权利要求13所述用途的组合物，用于治疗癌症的方法，其中施用给所述受试者的所述IgE抗体的最大每周剂量为50mg、25mg、10mg、3mg或1mg。

15.根据权利要求14所述用途的组合物，其中所述IgE抗体的每周剂量为10μg至50mg、70μg至30mg、70μg至3mg、500μg至1mg或约700μg。

16.根据权利要求12至15中任一项所述用途的组合物，其中所述IgE抗体每周一次或每两周一次施用给所述受试者。

17.根据权利要求16所述用途的组合物，其中将所述IgE抗体施用给所述受试者至多12周。

18.根据权利要求17所述的组合物，其中将所述IgE抗体施用给所述受试者(i)每周一次，持续6周；然后(ii)每两周一次，持续6周。

19.根据权利要求12至18中任一项所述用途的组合物，其中所述IgE抗体以小于1mg/kg、小于0.1mg/kg或小于0.03mg/kg的每次施用剂量施用给所述受试者。

20.根据权利要求12至19中任一项所述用途的组合物，其中所述IgE抗体以小于1mg/kg/周、小于0.1mg/kg/周、或小于0.03mg/kg/周的剂量施用给所述受试者。

21.一种治疗和/或延迟有此需要的受试者中癌症进展的方法，所述方法包括向所述受试者施用任一前述权利要求所定义的药物单位剂量组合物的步骤。

22.根据权利要求1至11中任一项所述的组合物，其中所述组合物包含70μg至3mg的MOv18 IgE抗体。

23.根据权利要求12至20中任一项所述用途的组合物，其中向所述受试者施用0.001-0.05mg/kg/周的剂量的MOv18 IgE抗体。

24.根据权利要求22或23所述的组合物，用于延迟受试者中的卵巢癌进展。