CN115916249A - Tlr4调节剂在治疗球虫病中的用途 - Google Patents

Abstract

公开一种通过调节通常与疾病相关的炎症反应来控制各种疾病的有效的治疗机制。本公开的发明构思基于通过使用贪噬菌属组或红细菌属组的成员来调节TLR4。具体地，根据本公开的发明构思，革兰氏阴性菌争论贪噬菌或革兰氏阴性菌类球红细菌通过减少或抑制炎症反应用于疾病治疗。

Description

TLR4调节剂在治疗球虫病中的用途

相关申请的交叉引用

本申请是2020年5月14日提交的题为“TLR4抑制剂在治疗球虫病中的用途”的美国临时专利申请No.63/024,886的非临时专利申请，该临时专利申请通过援引整体纳入本文用于所有目的。

技术领域

本发明涉及Toll样受体4(TLR4)及其在疾病治疗中的调节。更具体地，本发明涉及源自革兰氏阴性菌的脂多糖(LPS)在选择性调节TLR4中的用途。

背景技术

脂多糖(LPS)是在许多革兰氏阴性菌的外膜中发现的成分。Toll样受体4(TLR4)是Toll样受体家族的成员的一种蛋白质。TLR4识别LPS且可能受到刺激以介导促炎性细胞因子的产生和释放，导致先天免疫系统的活化。

在某些情况下，可能需要通过直接激活或抑制TLR4分子本身或相关通路下游的任何其他点来选择性地调节TLR4级联。不管是抑制哪一个点，其结果是减缓或停止促炎性细胞因子的产生，从而在某些情况下改善免疫健康。抑制是通过阻断介导细胞因子的产生和释放所需的信号来实现的。在其他情况下，选择性地激活TLR4和相关的下游通路可能导致增强或加速对入侵病原体的免疫应答，从而增强动物预防或对抗疾病的能力。

促炎性细胞因子的调节是治疗和预防人类和许多动物物种的某些疾病的重要因素。这种疾病的一个非限制性实例是球虫病，这是家禽业中一种常见的、极具破坏性的疾病。该疾病导致宿主的肠道系统受损，这往往使动物容易感染其他有害的疾病，如坏死性肠炎，最终可能导致动物死亡。宿主对该疾病的炎症反应导致肠道损伤和对其他病原体的易感性，如坏死性肠炎的病原体产气荚膜梭状芽孢杆菌的感染。

对于例如球虫病等疾病，目前治疗方案包括使用抗生素、离子载体或其他化学制剂。然而，这些治疗虽然取得了一定程度的成功，但却给家禽业增加了大量的成本。此外，在家禽业中过度使用抗生素引起了对一种或多种抗生素的抗药性增加的担忧。因此，期望开发一种病原体感染(如家禽球虫病)的基于非抗生素的治疗。

发明内容

本公开的发明构思通过调节通常与疾病相关的炎症反应，为各种疾病提供有效的治疗。本公开的发明构思作为疾病治疗的一个非限制性示例性用途是其作为治疗寄生虫感染(例如球虫病)抗球虫剂的替代品的用途。已经发现调节的炎症反应带来改善的肠道形态，包括促进肠道屏障的完整性。不使用抗生素的情况下实现家禽健康的改善。通过口服混合在饲料或饮用水中的活性物质来实现组合物的递送。

本公开的发明构思是基于通过革兰氏阴性菌菌株(例如贪噬菌属(Variovorax)组的成员或红细菌属(Rhodobacter)组的成员)产生的化合物来调节TLR通路。具体地，根据本公开的发明构思，革兰氏阴性菌争论贪噬菌(Variovorax paradoxus)或革兰氏阴性菌类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)可以通过调节炎症反应用于疾病治疗。

因此，本公开的发明构思阐述为一种能够选择性地调节TLR4信号通路的化合物。所述化合物包含衍生自贪噬菌属组或红细菌属组的成员的脂多糖。

在一个优选的实施方案中，所述脂多糖衍生自革兰氏阴性菌争论贪噬菌或革兰氏阴性菌类球红细菌。

在另一个优选的实施方案中，衍生自争论贪噬菌或类球红细菌之一或这二者的脂多糖化合物纳入基于谷物的饲料中以改善家禽的肠道健康。

附图说明

为了更全面地了解本发明，现在应参考附图。如图所示，名称"未治疗，未挑战(NoTx,No Challenge)"指其中不对未故意感染球虫病的动物个体进行治疗的试验。名称"未治疗，球菌(No Tx,Cocci)"指其中不对故意感染球虫病的动物个体进行治疗的试验。名称"抗球菌剂，球菌(Anti-cocci,Cocci)"指其中动物个体感染球虫病且该对动物给药抗球虫剂的试验。

名称"ZIVO A，球菌(ZIVO A,Cocci)"指其中动物个体感染球虫病且对该动物给药根据本公开的发明构思的第一治疗组合物的试验。名称"ZIVO S，球菌(ZIVO S,Cocci)"指其中动物个体感染球虫病且对该动物给药根据本公开的发明构思的第二治疗组合物的试验。名称"ZIVO T-hi，球菌(ZIVO T-hi,Cocci)"指其中动物个体感染球虫病且对该动物给药根据本公开的发明构思的第三治疗组合物的试验。名称"ZIVO T-low，球菌(ZIVO T-low,Cocci)"指其中动物个体感染球虫病且对该动物给药根据本公开的发明构思的第四治疗组合物的试验。

附图如下所述：

图1的图表示第0-7天，试验个体的饲料转化数据；

图2的图表示第0-14天，试验个体的饲料转化数据。

图3的图表示第0-21天，试验个体的饲料转化数据；

图4的图表示第0-28天，试验个体的饲料转化数据；

图5的图表示第0-42天，试验个体的饲料转化数据；

图6的图表示第0-7天，试验个体的死亡率；

图7的图表示第0-14天，试验个体的死亡率；

图8的图表示第0-21天，试验个体的死亡率；

图9的图表示第0-28天，试验个体的死亡率；

图10的图表示第0-42天，试验个体的死亡率；

图11的图表示在第21天测定的试验个体病变评分；

图12的图表示在第42天测定的试验个体病变评分；

图13的图表示在第21天，试验个体的十二指肠袢卵囊计数(克/禽/区域)；

图14的图表示在第42天，试验个体的十二指肠袢卵囊计数(克/禽/区域)；

图15的图表示在第21天，试验个体的中肠卵囊计数(克/禽/区域)；

图16的图表示在第42天，试验个体的中肠卵囊计数(克/禽/区域)；

图17的图表示在第21天，试验个体的全盲肠卵囊计数(克/禽/区域)；

图18的图表示在第42天，试验个体的全盲肠卵囊计数(克/禽/区域)；

图19的图表示在第21天，试验个体的粪便弯曲杆菌(Campylobacter)计数；

图20的图表示在第42天，试验个体的粪便弯曲杆菌计数；

图21的图表示在第21天，试验个体的盲肠弯曲杆菌计数；

图22的图表示在第42天，试验个体的盲肠弯曲杆菌计数；

图23的图表示在第21天，试验个体的粪便沙门氏菌(Salmonella)计数；

图24的图表示在第42天，试验个体的粪便沙门氏菌计数。

图25的图表示在第21天，试验个体的盲肠沙门氏菌计数；

图26的图表示在第42天，试验个体的盲肠沙门氏菌计数；

图27的图表示在第21天，试验个体的粪便产气荚膜梭菌(Clostridiumperfringens)计数；

图28的图表示在第42天，试验个体的粪便产气荚膜梭菌计数；

图29的图表示在第21天，试验个体的粪便大肠杆菌(E.coli)计数；

图30的图表示在第42天，试验个体的粪便大肠杆菌计数；

图31的图表示在第0-42天，试验个体的饲料消耗；

图32的图表示在第0-42天，试验个体的平均体重(按克计)；和

图33的图表示在第0-42天，试验个体平均重量增加(按克/天计)。

具体实施方式

在以下描述中，对不同构造的实施方案的各个运行参数和成分进行描述。这些具体的参数和成分作为示例涵盖，但并不意味是限制性的。除非另有说明，本文使用的所有技术和科学术语都具有本领域普通技术人员所能理解的通常含义。

用于治疗的化合物

通常，通过口服给药混合在饲料或饮用水中的活性物质来实现组合物的递送。本公开的治疗方法优选(但非绝对)利用通常衍生自革兰氏阴性菌的脂多糖(LPS)的化合物。通过在肉鸡生命早期给药化合物，通过免疫调节实现疾病预防和治疗。如本文所用，术语"抑制剂"是指减少或减弱由另一分子、受体、细胞结构或器官所诱导的活性的分子。例如，可阻断宿主免疫细胞表面上存在的TLR(例如但不限于TLR4)的LPS依赖性激活的化合物，可视为该特定通路的抑制剂。相反地，术语“激活剂”或“激动剂”是指增加或增强由另一分子、受体、细胞结构或器官所诱导的活性的分子。

如本文所用，术语“藻类培养物”定义为在液体培养基中共同生长的(一种或多种类型的)藻类有机体和细菌。除非另有明确说明，术语“藻类生物质”是指(除去液体培养基)藻类细胞和细菌细胞。“藻类生物质”可以是湿物质或干物质。

除非另有明确规定，术语“藻类上清液”定义为藻类生物质生长的培养基，其中含有藻类生物质排泄的化合物。藻类上清液通过在培养基中培养藻类生物质一段合适的时间，然后通过过滤和/或离心除去藻类和细菌细胞获得。

已知贪噬菌属和红细菌属的细菌在代谢上是多用途的。贪噬菌属是一种革兰氏阴性好氧细菌，可在多种条件下生长。它是变形菌门(Proteobacteria)亚纲的一部分，能够代谢利用植物或藻类产生的多种天然化合物。红细菌属(Rhodobacter)同时利用光合作用和化学合成可以在多种条件下生长。在无氧和有氧条件下也可以实现生长。类球红细菌是一种革兰氏阴性兼性细菌，是变形菌门α-3亚门的成员。

如本文所述，在疾病治疗中使用的化合物的实施方案包括由革兰氏阴性菌菌株产生的一种或多种LPS/脂质A化合物，其用作TLR信号通路(例如TLR4通路)的选择性调节剂。本公开的发明构思涉及三个基本步骤的任意组合：(1)革兰氏阴性菌产生LPS/脂质A化合物；(2)LPS/脂质化合物通过抑制或活化调节TLR4活性；和(3)通过调节TLR4信号，下游效应引起调节炎症和肠道免疫细胞的募集，从而有助于治疗球虫病、坏死性肠炎和其他与肠道炎症相关的病症。

在一实施方案中，用作TLR4信号通路的选择性调节剂的LPS/脂质A化合物由争论贪噬菌菌株产生。争论贪噬菌菌株可以是天然产生的菌株。

在另一实施方案中，用作TLR4信号通路的选择性调节剂的LPS/脂质A化合物由类球红细菌菌株产生。已经对类球红细菌的结构和功能进行了广泛的研究。更集中的研究已经检验了类球红细菌的光合作用的特性。已知源自类球红细菌的脂多糖是人细胞中有效的TLR4拮抗剂，其通过阻断LPS/TLR4信号来预防TLR4介导的炎症。在其他物种的细胞中，源自类球红细菌的LPS充当TLR4通路的激动剂。发明人采用试验方法来解决家禽中的多重免疫应答机制，从而得出以下结论：衍生自类球红细菌的LPS化合物据证明是家禽中有效的抗球虫剂。初始数据表明是通过LPS样分子的调节，直到涉及类球红细菌的特定试验(例如在家禽球虫病的治疗中)显示这种细菌在疾病治疗中的有效性。研究进一步表明，将TLR4抑制剂与TLR2激活剂(例如来自革兰氏阴性菌的脂蛋白)组合提供抗球虫病的效果。

因此，根据本公开的在疾病治疗中使用的化合物的实施方案涉及由贪噬菌属组或红细菌属组的革兰氏阴性菌菌株产生的一种或多种LPS/脂质A化合物，用作TLR4信号通路的选择性调节剂。本公开的发明构思的一个具体实施方案涉及由争论贪噬菌菌株和类球红细菌菌株产生的LPS/脂质A化合物用作TLR4信号通路的选择性调节剂的用途。

本文使用的LPS/脂质A化合物可通过任何合适的方法从争论贪噬菌菌株和/或类球红细菌菌株获得，但在具体实施方案中，它们使用标准的多步骤LPS提取方案来提取，例如：(1)用苯酚/硫氰酸胍溶液提取冻干细菌并收集水层用于冻干；(2)将冻干部分在水中再溶解；(3)超滤溶解的部分以除去低分子量物质和盐；(4)使用多粘菌素B树脂柱(例如Affi-prep多粘菌素基质材料(Bio-Rad))亲和纯化高分子量部分，其中用1％脱氧胆酸洗脱活性部分；以及，任选地(5)使用尺寸排阻色谱进行额外纯化。

在一些实施例中，使用多种类型的LPS提取方案来从细菌中获得LPS化合物，并且提取流程可以进行一次以上。一旦从细菌中提取并纯化LPS化合物，可通过酸水解或其他合适的技术制备脂质A部分。

衍生自革兰氏阴性菌菌株(例如争论贪噬菌或类球红细菌)的一种或多种LPS/脂质A化合物，可选择性地调节TLR4信号通路以调节炎症反应并在各种用途和应用中改善免疫健康。在一个实施方案中，衍生自争论贪噬菌或类球红细菌的LPS/脂质A化合物可纳入基于谷物的饲料中，以改善家禽的肠道健康。

本公开的衍生自争论贪噬菌或类球红细菌的LPS/脂质A化合物可通过各种机制用于改善家禽的健康。例如，若充当抑制剂，LPS/脂质A化合物可通过下调TLR4表达和下游抑制NF-kappa B活化来负性调节炎症介质，从而保护家禽免受内部炎症。在另一实施例中，LPS/脂质A化合物可通过干扰半胱氨酸残基介导的受体二聚化来抑制家禽中TLR4的激活。在又一实施例中，LPS/脂质A化合物可抑制非感染性和感染性刺激物与TLR4相互作用并引发促炎症反应的能力，从而改善家禽的肠道完整性。或者，若充当TLR4通路的激动剂，LPS/脂质A化合物可以通过在疾病挑战之前募集特定的抗病免疫细胞到肠道组织，使免疫系统对入侵的病原体做出更好的应答，从而加速和增强对任意后续病原体暴露的免疫应答。

具体治疗化合物

本公开的治疗化合物基于一种或多种包括如上文讨论的细菌菌株的淡水藻类生物质。更具体地，藻类生物质可包括例如革兰氏阴性争论贪噬菌菌株或革兰氏阴性类球红细菌菌株。

如上所述，提出并考虑四种治疗化合物。化合物具有上文所述藻类生物质的共同特征，并用于动物治疗。藻类生物质基产品以配制的饮食(例如玉米或玉米豆粕(SBM)饮食)饲喂给动物，或以饮用水递送。如上所述，具体治疗组合物包括“ZIVO A”、“ZIVO S”、“ZIVOT-hi”和“ZIVO T-low”。

ZIVO A治疗化合物

ZIVO A治疗化合物是包含革兰氏阴性菌的淡水藻类生物质，与饲料添加剂(例如豆油)组合作为动物饲料提供，优选但不限于以两份豆油与一份藻类生物质的比例。一旦生物质和饲料添加剂组合至优选的预混水平，将组合的批次均匀地倒入或加入包含成品饲料的带式混合器中。组合的批次优选以约0.5磅每吨至约11.0磅每吨成品饲料的量提供，并且更优选但不限于以约3.5磅每吨饲料的量来提供，具有良好的效果而不浪费。通常，使用ZIVO A治疗化合物的治疗约700mg每禽每42天周期。

ZIVO S治疗化合物

ZIVO S治疗化合物为液体藻类上清液(代表淡水藻类在其中生长后收集的培养基)。优选但非绝对，ZIVO S治疗化合物是在用于动物消耗的饮用水中稀释500x的液体藻类上清液，优选但非绝对，在每升饮用水中加入400mcl的500x原液并充分混合。通常，使用ZIVO S治疗化合物的治疗约9g每禽每42天周期。

ZIVO T-hi和T-low LPS治疗化合物

ZIVO T-hi和T-low LPS治疗化合物包括LPS-RS(其代表类球红细菌衍生的纯化的脂多糖)和LPS-VP(其代表争论贪噬菌衍生的纯化的脂多糖)。通常，使用ZIVO T-hi或T-low治疗化合物的治疗约20mg每禽每42天周期。ZIVO T-hi LPS治疗化合物以包含5mg冻干产品的小瓶提供。一旦溶解，产品可以稳定储存在冰箱(4℃)中1个月。当需要时，每个小瓶添加1mL无内毒素水溶解，然后涡旋30秒或直到实现基于视觉测定的完全溶解。为了获得最好结果，将T-hi治疗组合物储存在冰箱(-20℃)直至需要。

对于ZIVO T-hi LPS-RS治疗化合物，以每升水4mcL(即0.004mL/L)的比例将溶解的产品加入水中并充分混合。对于ZIVO T-low LPS-RS治疗组合物(“低剂量”治疗组)以每升水0.4mcL(即0.0004mL/L)的比例将溶解的产品加入水中并充分混合。

“中间”原液可制备为允许更方面的转移体积，前提是ZIVO T-hi和ZIVO T-low组饮用水中纯化的脂多糖的最终产物浓度分别为20mcg/L和2mcg/L。

研究

进行研究以确定各种治疗化合物的反应和功效。使用玉米豆粕饮食型商业日粮配方，将颗粒饲料用于ZIVO A治疗化合物。还将两种试验物质(包括ZIVO S治疗化合物和ZIVOT-hi和T-low LPS-RS治疗化合物)给药至饮用水中。

研究-治疗方法

在第0天(孵化和安置日)，从一个商业孵化场的粪便污染的鸡群中获得了总共2184只混合性别的孵化12小时内的肉鸡雏鸡。在第0天，按个体重量，将一些混合性别的肉鸡雏鸡(50:50的性别比例)随机分配到几个试验组栏中，各栏设重复。只采购无抗生素的禽，在孵化场或研究期间的任意时间都不给药球虫病疫苗。雏鸡在收到可能影响研究结果的疾病体征或其他并发症标志后进行评估。将虚弱的禽人道地处死。在研究过程中，没有更换禽。

检查后，使用随机区组设计，将雏鸡称重并分配到各个治疗组的栏中。喂食前，通过比较各个试验组与对照组的平均值标准偏差，评估各治疗组的体重分布。当对照组和试验组之间的差异在一个标准偏差内时，组间的体重分布对于这个研究认为是可接受的。

治疗组–治疗组、试验物质水平、重复数、禽重复数和给药途径按以下确立。

¹正常营养配方的玉米和SBM日粮。

²整个研究期间未给药抗球虫剂或ABF(无抗生素产品)。饲喂禽一种对照抗生素和四种试验物质。

³在孵化场和在这个研究期间没有给药球虫病疫苗。

所有禽均给予营养充足的食物或饮用化合物。从孵化日至42日龄(美国肉鸡典型的平均市场日龄)，自由饲喂禽各自的治疗饮食。禽在堆积的垃圾中饲养，以进一步模拟家禽生产中典型的压力条件。

对于ZIVO A治疗化合物，在每个配方期开始时对饮食称重，并分3个阶段饲喂：起始饮食(0-21日龄)、生长饮食(22-35日龄)和完成饮食(36-42日龄)。在整个研究期间，饮食以颗粒形式饲喂(在第0-21日，颗粒用作碎粒饲料)。除第7日球菌挑战前接种球菌的禽禁食8小时外，所有治疗化合物饮食均自由提供，不限制为全饲食用。

在第7天和7日龄(试验第0天＝孵化和安置日)，精确称重足够的饲料，提供给所有禽平均饱食率100％的消耗。这是通过测量各栏前一天24小时内消耗的饲料量来确定的。在第7天，受挑战组的所有禽都得到接种卵囊的食物，其包含堆型艾美耳球虫(Eimeriaacervulina)、巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)和柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)的混合物。特别地，禽得到的食物包含每只禽100,000卵囊的堆型艾美耳球虫、每只禽50,000卵囊的巨型艾美耳球虫和每只禽75,000卵囊的柔嫩艾美耳球虫的混合物。

球菌-挑战模型-。使用50#混合器将所有挑战有机物体混合在起始饲料中，彻底混合运行时间约为10分钟。在挑战之前，所有接种球菌的禽都饥饿8小时。给禽提供接种的饲料。两小时后，取出所有剩余的接种的饲料并称重，以确定每个栏和每只禽的消耗量相等。在每个栏的饲料记录上记录饲料量(放置和取出)。

在整个研究中，每天至少观察三次禽的整体健康、行为和毒性证据。监测栏的环境条件，包括温度、照明、水、饲料、垃圾状况和意外的家养(house)状况/事件。每天检查栏的死亡率。对所有发现的死亡或濒死的肉鸡进行检查。记录死亡率(日期和重量)并检查(内部和外部体重)。在整个研究中，为了模拟与商业生产相关的压力诱发的健康风险，从当地养鸡场获得的至少三个禽群中，在堆积的垃圾上饲养禽。

样本收集时间表-研究遵循以下收集时间表：

研究评估

图1至33所示的图表示未治疗和未患病的禽、未治疗的患病禽、在0至42天之间的各时间段内用常规抗生素治疗的患病禽和用不同的发明化合物治疗的患病禽之间的差异。这些图表涉及饲料转化率(FCR)、死亡率、病变评分、十二指肠袢卵囊计数、中肠卵囊计数、全盲肠卵囊计数、各种粪便计数(弯曲杆菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌和大肠杆菌)、平均体重、饲料消耗率(rats)和平均体重增加。

饲料转化–如图1至5所示，测量并报告第0-7、0-14、0-21、0-28和0-42天的死亡率校正的饲料转化率。相比于未治疗的球虫病患病组，本公开的发明化合物始终提供改善的结果。最值得注意的是，相比与抗生素治疗的感染禽，应用ZIVO T-hi治疗化合物所取得的积极结果，在所有样本中都显示出改善。

死亡率–如图6至10所示，计算第0-7、0-14、0-21、0-28和0-42天的死亡率。在所有日龄段中，未治疗的患病组的死亡率％始终高于用ZIVO A、ZIVO S、ZIVO T-hi、和ZIVO T-low治疗的组。在第0-7天(图6所示)，死亡率的差异相对显著，ZIVO T-hi组示出明显的改善。在第0-42天(图10所示)，随着时间推移并明显的是，相比于未治疗的患病禽的组，所有用ZIVO A、ZIVO S、ZIVO T-hi和ZIVO T-low治疗的组的死亡率明显降低。

病变评分–在第21和42天进行肉眼尸检和病变评分。选择、处死、称重并检查禽的球虫病变的存在和程度以及肠道内壁脱落量。如图11和12所示，评估并记录盲肠(CECA)损害评分。到第42天，用ZIVO A、ZIVO S、ZIVO T-hi和ZIVO T-low治疗的所有组的病变评分都明显减少。

在第21天和第42天，在动物的不同位置进行肉眼尸检和卵囊评分。选择之前接种过卵囊的禽，处死、称重，并检查其十二指肠袢、中肠和全盲肠中卵囊的存在和程度。研究结果在图13至18中示出。关于图13和14的分别第21天和第42天的十二指肠袢卵囊计数，在第42天，ZIVO A、ZIVO S、ZIVO T-hi和ZIVO T-low组的十二指肠袢卵囊计数保持相对不变。与图17和18示出的全盲肠计数的结果相似，在图15和16所示的中肠卵囊几乎没有变化。

细菌–如上文所述，球虫病会损害动物的肠道，因此通常充当细菌感染和继发性疾病(如坏死性肠炎)快速发作的诱因。家禽容易感染各种细菌，包括弯曲杆菌、沙门氏菌、C.产气荚膜梭菌和大肠杆菌。如图19至30所示，在第21天和第42天评估盲肠以及粪便样本中细菌的存在。分析肠道和粪便样本以确定总的菌落总数(APC)。

关于与弯曲杆菌有关的数据，图19和20示出第21天和42天之间的差异，其中可以看出，用ZIVO A、ZIVO S、ZIVO T-hi和ZIVO T-low治疗的所有动物的粪便计数普遍下降。图21和22所示的关于盲肠弯曲杆菌计数结果也基本相同。

关于与沙门氏菌有关的数据，图23和24示出第21天和42天之间的差异，其中可以看出，用ZIVO A、ZIVO S、ZIVO T-hi和ZIVO T-low治疗的所有动物的粪便计数普遍下降。图25和26所示的关于盲肠沙门氏菌计数的结果也基本相同。

关于与C.产气荚膜梭菌有关的数据，图27和28示出第21天和42天之间的差异，其中可以看出，用ZIVO A、ZIVO T-hi和ZIVO T-low治疗的所有动物的粪便计数普遍下降。

关于与大肠杆菌有关的数据，图29和30示出第21天和42天之间的差异，其中可以看出，用ZIVO A、ZIVO S和ZIVO T-hi治疗的所有动物的粪便计数普遍下降，但用ZIVO T-low治疗的动物显示出较小效果。

实地性能评估-整个研究期间每周记录实地性能参数。如图31-33所示，有效利用疾病挑战环境(球菌挑战+堆积的垃圾)，结果表明，在所有日龄范围内，用ZIVO A、ZIVO S、ZIVO T-hi和ZIVO T-low治疗的组在体重增加、饲料效率和死亡率方面均优于未治疗的球虫病患病组。

饲料消耗–如图31所示，用ZIVO A、ZIVO S、ZIVO T-hi和ZIVO T-low治疗的组的饲料消耗始终高于未治疗的球虫病患病组。

体重评估–如图32和33所示，在研究的第0-42天分别以克和克/天记录个体体重。在所有日龄阶段，用ZIVO A、ZIVO S、ZIVO T-hi和ZIVO T-low治疗的组的平均体重和平均体重增加明显高于未治疗的球虫病患病组。

结果

通常，结果分析＝支持结论，相比于未治疗的家禽，使用创新化合物治疗球虫病挑战的家禽可带来患病家禽的健康的显著改善。本公开的发明构思的组合物的不同细菌变种中鉴定出下述阳性结果。

结果总结如下：

相比于未治疗的疾病挑战的禽，用本公开的组合物治疗的样本家禽的FCR示出改善。

相比于未治疗疾病挑战的禽，用本公开的组合物治疗的样本家禽在第0-7天后的死亡率显著降低。在整个研究期间，死亡率普遍地保持在较低水平。

在检查处死的样本禽时，发现用本公开的组合物治疗的样本家禽的十二指肠和盲肠的平均病变评分低于处死的未治疗的疾病挑战的禽的评分。

在检查处死的样本禽时，发现用所本公开的组合物治疗的样本家禽的十二指肠、中肠和盲肠的平均卵囊计数低于处死的未治疗的疾病挑战的禽的评分。

相比于未治疗的禽，发现经治疗的禽中各种细菌(包括弯曲杆菌、沙门氏菌、C.产气荚膜梭菌和大肠杆菌)的存在普遍减少。

用本公开的组合物治疗的样本家禽的平均体重大于未治疗的疾病挑战的禽的平均体重。

在不使用抗生素的情况下，用本公开的发明组合物治疗的结果是疾病挑战的家禽的整体健康得到了改善。

总的来说，本发明组合物证实一种治疗动物疾病状态的成本效益好且实用的方法。

Claims (20)

1.一种用于治疗动物的球虫病的组合物，所述组合物包含有效量的饲料成分，所述饲料成分包括衍生自革兰氏阴性菌的脂多糖。

2.权利要求1所述的组合物，其中所述革兰氏阴性菌是红细菌属(Rhodobacter)组的成员。

3.权利要求2所述的组合物，其中所述红细菌属组的成员是类球红细菌(Rhodobactersphaeroides)。

4.权利要求1所述的组合物，其中所述革兰氏阴性菌是贪噬菌属(Variovorax)组的成员。

5.权利要求4所述的组合物，其中所述贪噬菌属组的成员是争论贪噬菌(Variovoraxparadoxus)。

6.权利要求1所述的组合物，其中所述组合物用于治疗家禽球虫病。

7.一种用于调节动物中TLR通路的组合物，所述组合物包含衍生自革兰氏阴性菌的脂多糖。

8.权利要求7所述的组合物，其中所述革兰氏阴性菌衍生的脂多糖是所述TLR通路的激动剂。

9.权利要求7所述的组合物，其中所述革兰氏阴性菌是红细菌属(Rhodobacter)组的成员。

10.权利要求10所述的组合物，其中所述红细菌属组的成员是类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)。

11.权利要求7所述的组合物，其中所述革兰氏阴性菌是贪噬菌属(Variovorax)组的成员。

12.权利要求11所述的组合物，其中所述贪噬菌属组的成员是争论贪噬菌(Variovoraxparadoxus)。

13.一种通过调节TLR通路来治疗动物的亚临床或临床球虫病的方法，所述方法包括给药治疗亚临床或临床球虫病的有效量的包括衍生自革兰氏阴性菌的化合物的生物质基组合物。

14.权利要求13所述的用于治疗动物的方法，其中按约0.5磅每吨至约11.0磅每吨成品饲料的浓度范围给药所述生物质基组合物。

15.权利要求13所述的用于治疗动物的方法，其中按约3.5磅每吨成品饲料的浓度范围给药所述生物质基组合物。

16.一种通过调节TLR通路来治疗动物的亚临床或临床球虫病的方法，所述方法包括给药治疗亚临床或临床球虫病的有效量的包括纯化的衍生自革兰氏阴性菌的脂多糖的组合物。

17.权利要求16所述的用于治疗动物的方法，其中按约2.0微克至约20.0微克每升饮用水的浓度范围给药所述组合物。

18.一种TLR通路的选择性调节剂，其包含衍生自革兰氏阴性菌成员的脂多糖化合物，所述革兰氏阴性菌衍生的脂多糖是所述TLR通路的激动剂。

19.权利要求18所述的选择性调节剂，其中所述革兰氏阴性菌是红细菌属(Rhodobacter)组的成员。

20.权利要求18所述的选择性调节剂，其中所述革兰氏阴性菌是贪噬菌属(Variovorax)组的成员。

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