CN115916217A - 用于治疗戊型肝炎的炔基核苷类似物 - Google Patents

用于治疗戊型肝炎的炔基核苷类似物 Download PDF

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Abstract

本公开涉及炔基核苷类似物、包含这些化合物的组合物以及它们用于治疗戊型肝炎感染的用途。

Description

用于治疗戊型肝炎的炔基核苷类似物
背景技术
戊型肝炎病毒(HEV)被认为是每年约2000万人感染的原因，并且是全世界急性肝炎和黄疸的最常见原因。免疫受损的患者是面临慢性HEV感染风险的重要人群。急性HEV感染往往具有自限性，但HEV基因型3可持续存在于免疫受损的患者体内，尤其是器官移植接受者体内，从而导致慢性肝炎、肝硬化和/或肝衰竭。
HEV是一种正义、单链、无包膜的RNA二十面体病毒，被归入正戊肝病毒属(Orthohepevirus)和肝炎病毒科(Hepeviridae)。尽管HEV基因型1和2仅感染人类，但基因型3和4也感染猪和其他种类的动物。四种基因型中的每一种被分为多个亚型。
用利巴韦林(RBV)和聚乙二醇化干扰素-α治疗HEV感染取得了不同程度的成功。因此，仍然需要针对HEV感染的安全、可耐受且有效的治疗选择。
发明内容
本文提供了改善和/或治疗戊型肝炎(HEV)感染的方法，以及用于此类治疗的化合物。
在一个方面，本文提供了用于治疗有需要的受试者的戊型肝炎感染的化合物，其中该化合物是式(I)的化合物
Figure BDA0003886246660000011
或其药学上可接受的盐；
其中：
碱选自由(b-1)、(b-2)、(b-3)、(b-4)、(b-5)、(b-6)、(b-7)和(b-8)组成的组：
Figure BDA0003886246660000021
R1选自由H、C(＝O)C1-4烷基和
Figure BDA0003886246660000022
组成的组；
R2选自由H和C(＝O)C1-4烷基组成的组；并且
R3选自由H和F组成的组。
在一个实施方案中，碱是(b-4)或(b-8)。在另一个实施方案中，R1选自由H和C(＝O)C1-4烷基，更具体地C(＝O)C3烷基组成的组。在另一个实施方案中，R1是H。在一个实施方案中，R2是C(＝O)C1-4烷基。在一个实施方案中，R3是F。
在一个实施方案中，式(I)的化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003886246660000023
或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本文提供了用于治疗有需要的受试者的戊型肝炎感染的药物组合物，其包含本文所公开的化合物和药学上可接受的媒介物。
在一个实施方案中，戊型肝炎感染是慢性HEV感染。在另一个实施方案中，HEV感染属于基因型1、基因型2或基因型3。在另一个实施方案中，受试者是孕妇、免疫受损的受试者或免疫缺陷的受试者。
在另一个方面，本文提供了治疗有需要的受试者的戊型肝炎感染的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的式(I)的化合物
Figure BDA0003886246660000031
或其药学上可接受的盐；
其中：
碱选自由(b-1)、(b-2)、(b-3)、(b-4)、(b-5)、(b-6)、(b-7)和(b-8)组成的组：
Figure BDA0003886246660000032
R1选自由H、C(＝O)C1-4烷基和
Figure BDA0003886246660000033
组成的组；
R2选自由H和C(＝O)C1-4烷基组成的组；并且
R3选自由H和F组成的组。
在一个实施方案中，碱是(b-4)或(b-8)。在另一个实施方案中，R1选自由H和C(＝O)C1-4烷基组成的组。在一个实施方案中，R1是C(＝O)C1-4烷基。在另一个实施方案中，R1是H。在一个实施方案中，R2是C(＝O)C1-4烷基。在一个实施方案中，R3是F。
在一个实施方案中，式(I)的化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003886246660000041
或其药学上可接受的盐。
在一个实施方案中，戊型肝炎感染是慢性HEV感染。在另一个实施方案中，HEV感染属于基因型1、基因型2或基因型3。在另一个实施方案中，受试者是孕妇、免疫受损的受试者或免疫缺陷的受试者。
具体实施方式
本文提供了改善和/或治疗戊型肝炎(HEV)感染的方法，以及用于此类治疗的化合物。在一个方面，本文提供了式(I)的化合物，其可用于治疗戊型肝炎病毒感染。本文还提供了包含式(I)的化合物的药物组合物。
定义
以下列出了用于描述本公开的各种术语的定义。除非在特定情况下另作限定，当术语在整篇说明书和权利要求中单独地或作为较大基团的一部分使用时，这些定义均适用于该术语。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语通常具有与适用领域中普通技术人员通常所理解的相同的含义。一般来讲，本文所用的命名以及细胞培养、分子遗传、有机化学和肽化学中的实验规程在本领域中是众所周知且普遍应用的。
如本文所用，冠词“一个”和“一种”是指一个或多于一个(即至少一个)冠词的语法对象。以举例的方式，“元件”是指一个元件或多于一个元件。此外，使用的术语“包括”以及其它形式，如“包括”、“包含”和“含有”不是限制性的。
如说明书和权利要求中所用，术语“包含”可包括实施方案“由...组成”和“基本上由...组成”。如本文所用，术语“包含”、“包括”、“具有”、“可以”、“含有”以及它们的变体旨在是开放式过渡性短语、术语或词语，其需要存在所命名的成分/步骤并且允许存在其他成分/步骤。然而，此类描述应被解释为也将组合物或方法描述为“由所列举的化合物组成”和“基本上由所列举的化合物组成”，其允许仅存在指定的化合物以及任何药学上可接受的载体，并且排除其他化合物。
本文公开的所有范围包括所述的端点并且可独立地组合(例如，“50mg至300mg”的范围包括端点50mg和300mg，以及所有中间值)。本文公开的范围的端点和任何值不限于精确的范围或值；它们是足够不精确的，以包括接近这些范围和/或值的值。
如本文所用，可以应用近似语言来修改可以变化而不导致与其相关的基本函数改变的任何定量表示。在至少一些情况下，近似语言可以对应于用于测量该值的仪器的精度。
术语“烷基”指链中具有1至12个碳原子的直链或支链烷基基团。烷基基团的示例包括甲基(Me，其也可在结构上以符号“/”表示)、乙基(Et)、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基(tBu)、戊基、异戊基、叔戊基、己基、异己基以及根据本领域的普通技能和本文提供的教导会被认为与前述示例中的任何一者等同的基团。本文所用的术语C1-4烷基是指链中具有1至4个碳原子的直链或支链烷基。本文所用的术语C1-6烷基是指链中具有1至6个碳原子的直链或支链烷基。
术语“环烷基”是指每个碳环具有3至12个环原子的饱和或部分饱和的单环、稠合多环或螺多环的碳环。环烷基基团的示例性示例包括以适当键合部分的形式出现的下述实体：
Figure BDA0003886246660000061
以及
Figure BDA0003886246660000062
单环、双环或三环芳族碳环表示由1、2或3个环组成的芳族环系，所述环系仅由碳原子组成；术语芳族是本领域技术人员熟知的，并且表示4n+2个电子的环状共轭体系，即具有6、10、14个等π-电子(Hückel法则)。
单环、双环或三环芳族碳环的具体示例是苯基、萘基、蒽基。
术语“苯基”代表以下部分：
Figure BDA0003886246660000063
术语“杂芳基”是指具有5至10个环成员，并含有碳原子和1至4个杂原子的单环芳族环系或二环芳族环系，所述杂原子独立地选自N、O和S。具有5或6个成员的芳族环(其中所述环由碳原子组成并具有至少一个杂原子成员)包括在术语杂芳基内。合适的杂原子包括氮、氧和硫。在5元环的情况下，杂芳基环优选地含有氮、氧或硫中的一个成员，此外还含有至多3个附加的氮。在6元环的情况下，杂芳基环优选含有1至3个氮原子。对于其中6元环具有3个氮原子的情况，最多2个氮原子是相邻的。杂芳基的示例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、噁唑基、噻唑基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、二氢吲哚基、异二氢吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并异噁唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、喹啉基、异喹啉基和喹唑啉基。除非另外指明，否则杂芳基在导致稳定结构的任何杂原子或碳原子上与其侧基连接。
本领域技术人员将认识到，上文列出或举例说明的杂芳基基团并非穷举性的，并且还可选择在这些限定术语范围内的其他物质。
术语“取代的”是指指定的基团或部分带有一个或多个取代基。术语“未取代的”是指指定的基团不带有取代基。术语“任选地取代的”是指特定的基团是未取代的或者被一个或多个取代基取代。如果术语“取代的”用于描述结构体系，则指取代在该体系上任何化合价允许的位置处发生。在指定的部分或基团没有明确指出被任何指定取代基任选地取代或取代的情况下，应理解这种部分或基团旨在表示是未被取代的。
为了提供更简明的描述，本文给出的一些数量表述没有用术语“约”修饰。应当理解，无论是否明确使用术语“约”，本文所给出的每个量意在指实际的给定值，并且其还意在指根据本领域一般技术将可合理推理得到的这些给定值的近似值，包括这些给定值的由实验和/或测量条件所引起的等价值和近似值。当收率以百分数的形式给出时，这种收率是指被给出该收率的实体的质量与同一实体在特定化学计量条件下可获得的最大量之比。除非另外指明，否则以百分数形式给出的浓度是指质量比。
根据它们的标准含义，术语“缓冲的”溶液或“缓冲”液在本文中可互换使用。缓冲液被用于控制介质的pH，并且它们的选择、使用和功能是本领域的普通技术人员已知的。参见，例如，G.D.Considine编，Van Nostrand’s Encyclopedia of Chemistry，第261页，第5版(2005)的描述，尤其是，缓冲溶液以及缓冲成分的浓度如何与缓冲液的pH值相关联。例如，通过将MgSO4和NaHCO3以10:1的重量/重量比例添加到溶液中，以保持溶液的pH值为约7.5，从而获得缓冲溶液。
本文给出的任何式旨在表示具有该结构式所示的结构的化合物以及某些变型或形式。具体地，本文给出的任何式的化合物可具有不对称中心，因此以不同的对映体形式存在。通式所示的化合物的所有光学异构体和它们的混合物，均被认为是在该式的范围内。因此，本文给出任何式旨在表示外消旋体、一种或多种对映体形式、一种或多种非对映体形式、一种或多种阻转异构体、以及它们的混合物。此外，某些结构可以作为几何异构体(即顺式和反式异构体)、作为互变异构体或作为阻转异构体存在。
还应当理解，那些具有相同分子式，但是在它们的原子键合的性质或顺序或它们的原子的空间排列上有所不同的化合物，被称为“异构体”。
彼此不为镜像的立体异构体称为“非对映体”，而彼此为不重叠镜像的立体异构体称为“对映体”。当化合物具有非对称中心时，例如，其被键合到四个不同的基团，并且一对对映异构体是可能的。对映体可由其不对称中心的绝对构型来表征，并且通过Cahn和Prelog的R-和S-顺序规则，或通过分子旋转偏振光平面并且命名为右旋或左旋(即分别为(+)或(-)异构体)的方式来描述。手性化合物可以其单独的对映体或以其混合物的形式存在。包含相同比例的对映体的混合物被称为“外消旋混合物”。
“互变异构体”是指为特定化合物结构的可互换形式，并且氢原子和电子的位置发生变化的化合物。因此，两种结构可经由π电子与原子(通常为H)的移动而处于平衡。例如，烯醇与酮是互变异构体，因为它们迅速地通过用酸或碱处理而互相转化。互变异构的另一个示例是同样通过用酸或碱处理形成的苯基硝基甲烷的“酸-”和“硝基-”形式。例如，旨在包括磷酸酯和硫代磷酸酯基团的所有互变异构体。硫代磷酸酯的互变异构体的示例包括以下：
Figure BDA0003886246660000081
此外，包括本领域已知的杂环碱基的所有互变异构体，包括天然和非天然嘌呤碱基和嘧啶碱基的互变异构体。
互变异构形式可能与所关注的化合物的最佳化学活性和生物学活性的达到相关。
本公开的化合物可具有一个或多个非对称中心；因此，此类化合物可作为单独的(R)-或(S)-立体异构体或作为它们的混合物制备。
除非另外指明，否则在说明书和权利要求中对特定化合物的描述或命名旨在包括其单独的对映体和混合物，所述混合物为外消旋混合物或其他混合物。立体化学的测定方法和立体异构体的分离方法是本领域熟知的。
某些示例包含被描绘成绝对的对映异构体的化学结构，但旨在表示具有未知构型的对映体纯物质。在这些情况下，(R*)或(S*)或(*R)或(*S)在名称中用于表示对应的立构中心的绝对立体化学是未知的。因此，被命名为(R*)或(*R)的化合物是指具有(R)或(S)的绝对构型的对映体纯化合物。在绝对的立体化学已被确认的情况下，使用(R)和(S)命名结构。
符号
Figure BDA0003886246660000082
和
Figure BDA0003886246660000083
用于表示本文所示的化学结构中相同的空间排列。类似的，符号
Figure BDA0003886246660000084
和
Figure BDA0003886246660000085
用于表示本文所示的化学结构中相同的空间排列。
另外，本文给出的任何式旨在还指这类化合物的水合物、溶剂化物和多晶型物、以及它们的混合物，即使这些形式没有明确列出。某些式(I)的化合物或式(I)的化合物的药学上可接受的盐可以作为溶剂化物获得。溶剂化物包括由本公开的化合物与一种或多种溶剂相互作用或络合而形成的那些，其为溶液或为固体或晶体形式。在一些实施方案中，溶剂为水并且溶剂化物为水合物。此外，式(I)的化合物或式(I)的化合物的药学上可接受的盐的某些结晶形式可作为共晶体获得。在本公开的某些实施方案中，式(I)的化合物以结晶形式获得。在其他实施方案中，式(I)的化合物的结晶形式在性质上是立方体。在其他实施方案中，式(I)的化合物的药学上可接受的盐以结晶形式获得。在另外其他实施方案中，式(I)的化合物以几种多晶型物中的一种获得，作为结晶形式的混合物获得，作为多晶型物获得，或者作为无定形形式获得。在其他实施方案中，式(I)的化合物在溶液中在一种或多种结晶形式和/或多晶型物之间转变。
本文中对化合物的提及代表着对以下任何一者的提及：(a)这种化合物的实际述及的形式，和(b)这种化合物在提到化合物时所考虑的该化合物所处介质中的任何形式。例如，本文中对化合物诸如R-COOH的提及涵盖对例如R-COOH(s)、R-COOH(sol)和R-COO- (sol)中的任一者的提及。在此示例中，R-COOH(s)是指固体化合物，其例如可以为片剂或某些其他固体药物组合物或制剂的形式；R-COOH(sol)是指化合物在溶剂中的未离解形式；而R-COO- (sol)是指化合物在溶剂中的离解形式，诸如化合物在含水环境中的离解形式，无论此类离解形式是衍生自R-COOH、其盐还是衍生自在所考虑介质中经解离后产生R-COO-的任何其他实体。在另一个示例中，诸如“使实体暴露于式R-COOH的化合物”的表述是指使该实体暴露于化合物R-COOH在发生该暴露的介质中所存在的一种或多种形式。在又一个示例中，诸如“使实体与式R-COOH的化合物反应”之类的表述是指使(a)这种实体(为这种实体在发生该反应的介质中所存在的一种或多种化学相关形式)与(b)化合物R-COOH在发生该反应的介质中所存在的一种或多种化学相关形式反应。就这一点而言，如果该实体例如处于含水环境中，则应理解化合物R-COOH是在该相同介质中，因此该实体正被暴露于诸如R-COOH(aq)和/或R-COO- (aq)之类的物质，其中下标“(aq)”根据其在化学和生物化学中的常规含义代表“含水”。在这些命名示例中选择了羧酸官能团；然而，此选择并非意图进行限定，而仅为举例说明。应当理解，可用其他官能团提供类似的示例，这些官能团包括但不限于羟基、碱性氮成员(如在胺中的那些)和任何其他在含有该化合物的介质中按照已知方式进行相互作用或转化的基团。此类相互作用和转化包括但不限于解离、缔合、互变异构、溶剂分解包括水解、溶剂化包括水合、质子化和去质子化。就这一点本文不提供进一步的示例，因为在给定介质中的这些相互作用和转化为本领域任何普通技术人员所知。
在另一个示例中，本文通过提及已知会形成两性离子的化合物而涵盖两性离子化合物，即使它未被明确以其两性离子形式提到。诸如一种或多种两性离子及其同义词两性离子化合物之类的术语是IUPAC认可的标准名称，这些名称是众所周知的，并且是经定义的科学名称的标准集的一部分。在这点上，两性离子这个名称被生物学关联化学实体数据库(Chemical Entities of Biological Inerest，ChEBI)的分子实体词典分配CHEBI:27369这个名称标识。众所周知，两性离子或两性离子化合物是具有相反符号的形式单位电荷的中性化合物。有时，这些化合物用术语“内盐”来称谓。其他资料称这些化合物为“偶极离子”，不过这个术语被另外的其他资料认为是误称。作为具体示例，氨基乙酸(氨基酸甘氨酸)具有式H2NCH2COOH，并且它以两性离子+H3NCH2COO-形式存在于一些介质中(在这种情况下是在中性介质中)。两性离子、两性离子化合物、内盐和偶极离子这些术语按其已知和公认的含义落入本公开的范围内，如本领域普通技术人员在任何情况下均如此理解的。由于不必命名本领域普通技术人员会认识到的每一个实施方案，因此本文中没有明确给出与本公开化合物相关联的两性离子化合物的结构。但是，其为本公开实施方案的一部分。在这点上，本文中没有提供更多的示例，因为在给定介质中导致产生给定化合物的各种形式的相互作用和转化是本领域任何普通技术人员已知的。
本文给定的任何式还旨在表示化合物的未标记形式以及同位素标记形式。同位素标记的化合物具有本文给出式所描绘的结构，不同的是一个或多个原子被具有选定的原子量或质量数的原子所代替。可以掺入到本公开化合物中的同位素的示例包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，分别诸如2H、3H、11C、13C、14C、15N、18O、17O、31P、32P、35S、18F、36Cl、125I。此类同位素标记的化合物可用于代谢研究(优选地用14C)、反应动力学研究(用例如氘(即，D或2H)；或氚(即，T或3H))、检测或成像技术，诸如正电子发射断层显像(PET)或单光子发射计算机断层显像(SPECT)，包括药物或底物组织分布测定，或在患者的放射性治疗中。具体地，18F或11C标记的化合物对于PET或SPECT研究可能是尤其优选的。此外，用较重的同位素如氘(即2H)进行置换可以提供由更大的代谢稳定性所带来的某些治疗优势，例如体内半衰期延长或需要的剂量减少。同位素标记的本公开的化合物及其前药，通常可以通过用容易获得的同位素标记的试剂替代非同位素标记的试剂以执行下文描述的方案中或实施例和制备中所公开的程序来制备。
当提及本文给出的任何式时，对于指定的变量，从可能的种类的列表中选择具体的部分并非意图限定所述变量在其他地方出现时要选择相同的种类。换句话讲，除非另外指明，否则当变量不止一次出现时，从指定列表中选择该种类与对式别处的同一变量选择该种类无关。
根据上文关于指派和命名的解释，应当理解，当在化学上有意义时和除非另外说明，本文明确提及一集合时，意味着独立提及该集合的各实施方案，并且是提及被明确提及的该集合的各个亚集合的各个和每一个可能实施方案。
借助于取代基术语的第一个示例，如果取代基S1 实施例是S1和S2中的一者，并且取代基S2 实施例是S3和S4中的一者，则这些指派是指根据以下选择给出的本公开的实施方案：S1 实施例是S1且S2 实施例是S3；S1 实施例是S1且S2 实施例是S4；S1 实施例是S2且S2 实施例是S3；S1 实施例是S2且S2 实施例是S4；以及此类选择中的每一者的等同物。较短的术语“S1 实施例是S1和S2中的一者，并且S2 实施例是S3和S4中的一者”因此在本文中为了简洁起见使用，但不是以限制的方式使用。上述以通用术语陈述的关于取代基术语的第一个示例，是旨在举例说明本文描述的不同取代基指派。当适用时，本文对取代基给出的上述约定延伸至诸如R1、R2、R3、R4、R5、G1、G2、G3、G4、G5、G6、G7、G8、G9、G10、G11、n、L、R、T、Q、W、X、Y和Z的成员以及本文所用的任何其他通用取代基符号。
此外，当对任何成员或取代基给出多于一种指派时，本公开的实施方案包括可从所列举的指派独立选取而作出的多种分组，及其等同物。借助于取代基术语的第二个示例，如果本文描述取代基S实施例是S1、S2和S3中的一者，则该列表是指本公开的实施方案，其中S实施例是S1；S实施例是S2；S实施例是S3；S实施例是S1和S2中的一者；S实施例是S1和S3中的一者；S实施例是S2和S3中的一者；S实施例是S1、S2和S3中的一者；以及S实施例是这些选择中的每一者的任何等同物。较短的术语“S实施例是S1、S2和S3中的一者”因此在本文中为了简洁起见使用，但不是以限制的方式使用。上述以通用术语陈述的关于取代基术语的第二个示例，是旨在举例说明本文描述的不同取代基指派。当适用时，本文对取代基给出的上述约定延伸至诸如R1、R2、R3、R4、R5、G1、G2、G3、G4、G5、G6、G7、G8、G9、G10、G11、n、L、R、T、Q、W、X、Y和Z的成员以及本文所用的任何其他通用取代基符号。
其中j>i的命名“Ci-j”，当在本文中应用于一类取代基时，意在指这样的本公开实施方案：从i到j(包括i和j在内)的碳成员数目中的各个和每一个都是独立实现的。以举例的方式，术语C1-4独立地指具有一个碳成员的实施方案(C1)、具有两个碳成员的实施方案(C2)、具有三个碳成员的实施方案(C3)和具有四个碳成员的实施方案(C4)。
术语Cn-m烷基是指脂族链(无论是直链还是支链的)，其中链中碳成员的总数N满足n≤N≤m，并且m>n。本文提及的任何二取代基是指当允许多于一种此类可能性时包含各种连接可能性。例如，本文提及二取代基–A-B-(其中A≠B)时，是指A连接第一被取代成员而B连接第二被取代成员的二取代基，其也指A连接第二被取代成员而B连接第一被取代成员的二取代基。
本公开还包括式(I)的化合物的药学上可接受的盐，优选上文所述的那些和本文例示的具体化合物的药学上可接受的盐，以及用此类盐进行治疗的方法。
术语“药学上可接受的”是指经联邦或州政府的监管机构或美国以外的国家的相应机构批准或可被其批准或在美国药典或其他公认的药典中被列为用于动物，尤其是人类。
“药学上可接受的盐”旨在表示由式(I)表示的化合物的游离酸或碱的盐，该盐是无毒的、生物学上可耐受的或以其他方式在生物学上适于施用给受试者。它应当具有母体化合物的所需的药理活性。一般地，参见G.S.Paulekuhn等人，“Trends in ActivePharmaceutical Ingredient Salt Selection based on Analysis of the Orange BookDatabase”,J.Med.Chem.,2007,50:6665–72,S.M.Berge等人，“Pharmaceutical Salts”,JPharm Sci.,1977,66:1-19以及Handbook of Pharmaceutical Salts,Properties,Selection,and Use,Stahl和Wermuth编，Wiley-VCH and VHCA,Zurich,2002。药学上可接受的盐的示例是那些药理学有效且适于与患者组织接触而不会有不当毒性、刺激或过敏反应的盐。式(I)的化合物可具有足够酸性的基团、足够碱性的基团或这两种类型的官能团，并因此与多种无机碱或有机碱以及无机酸和有机酸反应以形成药学上可接受的盐。
本公开还涉及式(I)的化合物的药学上可接受的前药以及采用此类药学上可接受的前药的治疗方法。术语“前药”意指指定化合物的前体，其在施用于受试者之后，通过诸如溶剂分解或酶促裂解之类的化学或生理过程，或者在生理条件下，体内产生该化合物(例如前药接触到生理pH时被转化成式(I)的化合物)。“药学上可接受的前药”是无毒的、生物学上可耐受的和换句话讲在生物学上适于施用给受试者的前药。例如，在“Design ofProdrugs”，编者H.Bundgaard,Elsevier,1985中描述了用于选择和制备适宜的前药衍生物的例示性工序。
本公开还涉及式(I)的化合物的药学活性代谢物，其也可用于本公开的方法中。“药学活性代谢物”是指式(I)的化合物或其盐在体内代谢中的药学活性产物。化合物的前药和活性代谢物可用本领域已知或可利用的常规技术进行确定。参见例如Bertolini等人，J Med Chem.1997,40,2011-2016；Shan等人，J Pharm Sci.1997,86(7),765-767；Bagshawe,Drug Dev Res.1995,34,220-230；Bodor,Adv Drug Res.1984,13,224-331；Bundgaard,Design of Prodrugs(Elsevier Press,1985)；以及Larsen,Design andApplication of Prodrugs,Drug Design and Development(Krogsgaard-Larsen等人编，Harwood Academic Publishers,1991)。
如本文所用，术语“组合物”或“药物组合物”是指本文提供的至少一种化合物与药学上可接受的载体的混合物。药物组合物有助于将化合物施用于患者或受试者。本领域存在的多种施用化合物的技术包括但不限于静脉内、口服、气雾剂、肠胃外、眼部、肺部以及局部施用。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指参与在患者体内运载或转运本文提供的化合物或者将其运载或转运给患者的药学上可接受的材料、组合物或载体，例如液体或固体填料、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或包封材料。通常，此类构建体从身体的一个器官或部分运载或转运到身体的另一个器官或部分。各载体必须是“可接受的”，其意指与制剂(包括本文提供的化合物)中其他成分相容并且对患者无害。可用作药学上可接受的载体的材料的一些示例包括：糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉末化黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，诸如可可油和栓剂蜡；油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝蔴油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，诸如丙二醇；多元醇，诸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；表面活性剂；藻酸；不含热原的水；等渗盐水；林格氏液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及用于药物制剂中的其他非毒性相容物质。如本文所用，“药学上可接受的载体”还包括与本文提供的化合物的活性相容的任何和所有包衣、抗菌剂和抗真菌剂、以及吸收延迟剂等等，并且对于患者是生理可接受的。还可将辅助活性化合物掺入到组合物中。“药学上可接受的载体”还可以包括本文提供的化合物的药学上可接受的盐。可包括在本文提供的药物组合物中的其他附加成分是本领域中是已知的并且描述于例如Remington'sPharmaceutical Sciences(Genaro编，Mack Publishing Co.,1985,Easton,PA)中，其以引用方式并入本文。
如本文所用，术语“生理上可接受的”是指不消除化合物的生物活性和特性的载体、稀释剂或赋形剂。
如本文所用，“载体”是指促进化合物并入细胞或组织中的化合物。例如但不限于，二甲基亚砜(DMSO)是促进许多有机化合物摄入受试者的细胞或组织中的常用载体。
如本文所用，“稀释剂”是指药物组合物中缺乏药理活性但可能是药学上必需的或需要的成分。例如，稀释剂可用于增加对于制备和/或施用而言质量太小的强效药物的体积。稀释剂还可为用于溶解待通过注射、摄入或吸入而施用的药物的液体。本领域中稀释剂的常见形式是缓冲水溶液，诸如但不限于模拟人类血液组成的磷酸盐缓冲盐水。
如本文所用，“赋形剂”是指添加到药物组合物中以为组合物提供(但不限于)体积、稠度、稳定性、结合能力、润滑性、崩解能力等的惰性物质。“稀释剂”是一类赋形剂。
如本文所用，术语“稳定剂”是指能够化学抑制或防止式I的化合物降解的聚合物。将稳定剂添加到化合物制剂中以改善化合物的化学和物理稳定性。
如本文所用，术语“片剂”表示可口服给药的单剂量固体剂型，其可通过常规压片工艺压制药物物质或其药学上可接受的盐与合适的赋形剂(例如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂和/或表面活性剂)来制备。可以使用常规制粒方法制备片剂，例如湿法制粒或干法制粒，任选地将颗粒粉碎，随后进行压制并任选地包衣。也可以通过喷雾干燥制备片剂。
如本文所用，术语“胶囊”是指固体剂型，其中药物包封在硬或软的可溶性容器或“壳”内。容器或壳可由明胶、淀粉和/或其他合适的物质形成。
如本文所用，术语“有效量”、“药学有效量”和“治疗有效量”是指无毒但足以提供期望生物学结果的试剂用量。结果可以是疾病的体征、症状或病因减轻或缓和，或生物系统的任何其他所需的改变。在任何个体情况中，适当的治疗剂量可通过本领域的普通技术人员用常规实验测定出。
如本文所用，术语“组合”、“治疗组合”、“药物组合”或“组合产品”是指用于组合施用的非固定组合或成套药盒，其中两种或更多种治疗剂可独立施用、在时间间隔内同时或分开施用，尤其是在这些时间间隔允许组合伙伴显示出合作效应，例如协同效应的情况下。
术语“调节剂”包括抑制剂和活化剂，其中“抑制剂”是指降低、预防、灭活、脱敏或下调HEV集合和HEV复制或生成感染性颗粒所必需的其他HEV核心蛋白功能的化合物。
如本文所用，术语“处理”或“治疗”被定义为向具有HEV感染、HEV感染的症状或者有发展成HEV感染的可能性的患者施加或施用治疗剂，即本公开的化合物(单独或与另一种药剂组合)，或者将治疗剂施加或施用于与患者分离的组织或细胞系(例如，用于诊断或体外施用)，目的在于治愈、医治、减轻、缓解、改变、补救、改进、改善或影响HEV感染、HEV感染的症状或者发展成HEV感染的可能性。此类治疗可基于获自药物基因组学领域的知识进行修改或改进。
如本文所用，术语“预防”或“防止”意指如果还未发生，则疾病或障碍没有发展，或者如果该障碍或疾病已经发生，则障碍或疾病没有进一步发展。还考虑了预防与障碍或疾病相关联的一些或所有症状的能力。
如本文所用，术语“患者”、“个体”或“受试者”是指人类或非人类哺乳动物。非人类哺乳动物包括例如牲畜和宠物，诸如绵羊、牛、猪、犬科、猫科和鼠科哺乳动物。优选地，患者、受试者或个体是人类。
在根据本公开的治疗方法中，将有效量的根据本公开的药剂施用于患有或诊断有此类疾病、障碍或病症的受试者。“有效量”是指足以总体上在需要对指定疾病、障碍或病症进行这种治疗的患者中产生期望的治疗或预防有益效果的量或剂量。本公开的化合物的有效量或剂量可通过常规方法确定，如建模、剂量递增研究或临床试验，和通过考虑常规因素来确定，如施用或药物递送的方式或途径，化合物的药代动力学，疾病、障碍或病症的严重程度和病程，受试者之前进行和现在进行的疗法，患者的健康状况和对药物的响应，以及主治医师的判断。剂量的示例为以下范围：约0.001mg至约200mg化合物/kg受试者体重/天，优选约0.05mg/kg/天至100mg/kg/天，或约1mg/kg/天至35mg/kg/天，以单一剂量单位或分开剂量单位的形式(例如BID、TID、QID，在一个实施方案中为BID)。剂量的示例为以下范围：约10mg至约300mg化合物/kg受试者体重/天，在一个实施方案中约15mg至250mg/kg/天，或约20mg至200mg/kg/天，以单一计量单位或分开剂量单位的形式(例如，BID、TID、QID，在一个实施方案中为BID)。高剂量可以是约200mg/kg/天，而中剂量可以是约70mg/kg/天，低剂量可以是约20mg/kg/天。对于70kg的人，适宜剂量的示例性范围为约0.05g/天至约7g/天，或约0.2g/天至约2.5g/天。
化合物剂量的示例为约1mg至约2,500mg。在一些实施方案中，本文所述组合物中所用的本公开化合物的剂量小于约10,000mg、或小于约8,000mg、或小于约6,000mg、或小于约5,000mg、或小于约3,000mg、或小于约2,000mg、或小于约1,000mg、或小于约500mg、或小于约200mg、或小于约50mg。类似地，在一些实施方案中，如本文所述的第二化合物(即，用于HEV治疗的另一种药物)的剂量小于约1,000mg、或小于约800mg、或小于约600mg、或小于约500mg、或小于约400mg、或小于约300mg、或小于约200mg、或小于约100mg、或小于约50mg、或小于约40mg、或小于约30mg、或小于约25mg、或小于约20mg、或小于约15mg、或小于约10mg、或小于约5mg、或小于约2mg、或小于约1mg、或小于约0.5mg，以及它们的任何和所有全部或部分增量。
一旦患者的疾病、病症或病状发生改善，可以将剂量调整为预防性或维持性的治疗。例如，施用的剂量或频次或者这两方面可根据症状而降低到能维持期望的治疗或预防作用的水平。当然，如果症状已减轻到适当的水平，可停止治疗。然而，患者可能因病征的任何复发而需要长期的间歇性治疗。
化合物
在一个方面，本文提供了式(I)的化合物
Figure BDA0003886246660000171
或其药学上可接受的盐；
其中：
碱选自由(b-1)、(b-2)、(b-3)、(b-4)、(b-5)、(b-6)、(b-7)和(b-8)组成的组：
Figure BDA0003886246660000181
R1选自由H、C(＝O)C1-4烷基和
Figure BDA0003886246660000182
组成的组；
R2选自由H和C(＝O)C1-4烷基组成的组；并且
R3选自由H和F组成的组。
在一个实施方案中，R1选自由H和C(＝O)C1-4烷基组成的组。在另一个实施方案中，R1是C(＝O)C3烷基。在另一个实施方案中，R1是H。在另一个实施方案中，R2是C(＝O)C3烷基。在一个实施方案中，R3是F。在另一个实施方案中，碱是(b-4)或(b-8)。
在一个实施方案中，式(I)的化合物选自由以下组成的组：
Figure BDA0003886246660000183
或其药学上可接受的盐，更具体地化合物1或其药学上可接受的盐。
式(I)的化合物可以通过本领域技术人员已知的方法和/或通过使用由本文提供的教导内容指导的常规实验的此类方法的变型形式来制备。
药物组合物
本文还提供了包含至少一种式I的化合物和至少一种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
本文所述的一些实施方案涉及一种药物组合物的用途，该药物组合物可包括有效量的一种或多种本文所述的化合物(例如，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐)以及药学上可接受的载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合。
本文所述的药物组合物可按原样或以药物组合物施用于人类患者，在以药物组合物施用时，它们与其他活性成分(如在组合治疗中)或载体、稀释剂、赋形剂或它们的组合混合。合适的制剂取决于所选择的施用途径。本文所述的化合物的配制和施用技术是本领域技术人员已知的。
如本文所用，术语“组合物”或“药物组合物”是指本公开内可用的至少一种化合物与药学上可接受的载体的混合物。药物组合物有助于将化合物施用于患者或受试者。本领域存在的多种施用化合物的技术包括但不限于静脉内、口服、气雾剂、肠胃外、眼部、肺部以及局部施用。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指参与在患者体内运载或转运本公开内可用的化合物或者将其运载或转运给患者的药学上可接受的材料、组合物或载体，例如液体或固体填料、稳定剂、分散剂、悬浮剂、稀释剂、赋形剂、增稠剂、溶剂或包封材料。通常，此类构建体从身体的一个器官或部分运载或转运到身体的另一个器官或部分。各载体必须是“可接受的”，其意指与制剂的其他成分(包括本公开内可用的化合物)相容并且对患者无害。可用作药学上可接受的载体的材料的一些示例包括：糖，诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉；纤维素及其衍生物，诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；粉末化黄蓍胶；麦芽；明胶；滑石；赋形剂，诸如可可油和栓剂蜡；油，诸如花生油、棉籽油、红花油、芝蔴油、橄榄油、玉米油和大豆油；二醇，诸如丙二醇；多元醇，诸如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；酯，诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯；琼脂；缓冲剂，诸如氢氧化镁和氢氧化铝；表面活性剂；藻酸；不含热原的水；等渗盐水；林格氏液；乙醇；磷酸盐缓冲溶液；以及用于药物制剂中的其他非毒性相容物质。
如本文所用，“药学上可接受的载体”还包括与本公开内可用的化合物的活性相容的任何和所有包衣、抗菌剂和抗真菌剂、以及吸收延迟剂等等，并且对于患者是生理上可接受的。还可将辅助活性化合物掺入组合物中。“药学上可接受的载体”还可以包括本公开内可用的化合物的药学上可接受的盐。用于实施本公开的药物组合物中可包括的其他附加成分在本领域中是已知的并且描述于例如Remington's Pharmaceutical Sciences(Genaro编，Mack Publishing Co.,1985,Easton,PA)，其以引用方式并入本文。
“药学上可接受的赋形剂”是指无毒的、生物学上可耐受的或换句话讲在生物学上适于施用于受试者的物质，如惰性物质，其被加到药理组合物或换句话讲用作媒介物、载体或稀释剂以促进药剂的施用，并且其与该药剂相容。赋形剂的示例包括碳酸钙、磷酸钙、多种糖和多类淀粉、纤维素衍生物、明胶、植物油和聚乙二醇。
含有一个或多个剂量单位的活性剂的药物组合物的递送形式，可用本领域技术人员已知的或者可利用的合适药物赋形剂和配混技术进行制备。该组合物在本发明方法中可通过合适的递送途径施用，例如通过口服途径、肠胃外途径、直肠途径、局部途径或眼部途径施用，或者通过吸入施用。
制剂可为片剂、胶囊、囊剂、糖衣丸剂、散剂、颗粒剂、锭剂、重构用散剂、液体制剂或栓剂的形式。优选地，所述组合物配制成供静脉输注、局部施用或口服施用。
对于口服施用，本公开的化合物可以片剂或胶囊剂的形式提供，或者作为溶液、乳液或悬浮液提供。为制备口服组合物，可将化合物配制成能产生例如约0.05mg/kg/天至约100mg/kg/天或者约0.05mg/kg/天至约35mg/kg/天或者约0.1mg/kg/天至约10mg/kg/天的剂量。例如，每天约5mg至5g的每日总剂量可由每天服药一次、两次、三次或四次来完成。
口服片剂可包括与药学上可接受的赋形剂诸如惰性稀释剂、崩解剂、粘结剂、润滑剂、甜味剂、矫味剂、着色剂和防腐剂混合的根据本公开的化合物。合适的惰性填充剂包括碳酸钠和碳酸钙、磷酸钠和磷酸钙、乳糖、淀粉、糖、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露糖醇、山梨醇等。示例性液态口服赋形剂包括乙醇、甘油、水等。淀粉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟基乙酸淀粉钠、微晶纤维素和海藻酸是合适的崩解剂。粘结剂可包括淀粉和明胶。润滑剂(当存在时)可为硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。如果需要，片剂可用材料诸如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯进行包衣，以延迟在胃肠道中的吸收，或者可用肠溶衣进行包衣。
用于口服施用的胶囊剂包括硬明胶胶囊和软明胶胶囊。为制备硬明胶胶囊，可将本公开的化合物与固体、半固体或液体稀释剂混合。软明胶胶囊可通过将本公开的化合物与水、油(诸如花生油或橄榄油)、液体石蜡、短链脂肪酸的单甘油酯和二甘油酯的混合物、聚乙二醇400或丙二醇混合来制备。
口服施用的液体可为悬浮液、溶液、乳液或糖浆的形式，或者可冻干或作为干燥制品呈现，供临用前用水或其他合适的媒介物进行重构。此类液体组合物可任选地包含：药学上可接受的赋形剂，例如悬浮剂(例如，山梨醇、甲基纤维素、海藻酸钠、明胶、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、硬脂酸铝凝胶等)；非水性媒介物，例如油类(例如杏仁油或分级椰子油)、丙二醇、乙醇或水；防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)；润湿剂，例如卵磷脂；以及(如果需要)矫味剂或染色剂。
本公开的活性剂还可以通过非口服途径施用。例如，组合物可配制成栓剂供直肠施用。对于肠胃外使用，包括静脉内途径、肌肉内途径、腹膜内途径或皮下途径，本公开的化合物可以无菌水溶液剂或混悬剂的形式提供，这些形式被缓冲至适当的pH和等渗性或者在胃肠外可接受的油中。合适的含水媒介物包括林格氏溶液和等渗氯化钠。此类形式将以单位剂量形式呈现，诸如安瓿或一次性注射装置，以多剂量形式呈现，诸如可从其中抽取适当剂量的小瓶，或者以可用来制备可注射制剂的固体形式或预浓缩物形式呈现。示例性的输注剂量可为约1μg/kg/分钟至1000μg/kg/分钟的化合物的范围，与药物载体混合在数分钟至数天的时间里输注。
对于局部施用，化合物可以与药物载体混合在一起，药物与媒介物的浓度比为约0.1％至约10％。另一种施用本公开化合物的方式可采用贴剂来实现透皮递送。
另选地，本公开的化合物可以在本公开的方法中通过经鼻或经口途径吸入施用，例如以还含有合适载体的喷雾制剂的形式。
治疗方法
本文提供了改善和/或治疗HEV感染的方法，该方法可包括向有需要的受试者施用有效量的一种或多种如本文所述的化合物和/或其药学上可接受的盐，或包含一种或多种如本文所述的化合物和/或其药学上可接受的盐的药物组合物，其中本文所述的化合物及其药学上可接受的盐可具有式(I)，或其药学上可接受的盐。
本文所述的其他实施方案涉及如本文所述的用于改善或治疗HEV感染的化合物和/或其药学上可接受的盐，或如本文所述的用于改善或治疗HEV感染的药物组合物，其包含一种或多种如本文所述的化合物和/或其药学上可接受的盐，其中本文所述的化合物及其药学上可接受的盐可具有式(I)，或其药学上可接受的盐。
本文所述的其他实施方案涉及抑制HEV的病毒复制的方法，该方法可包括使感染HEV的细胞与有效量的本文所述的化合物(例如，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐)和/或包含一种或多种本文所述的化合物(例如，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐)的药物组合物接触。在一个实施方案中，抑制HEV病毒复制的方法是体外方法。
在一些实施方案中，有效量的一种或多种本文所述的化合物(例如，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐)和/或包含一种或多种本文所述的化合物(例如，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐)的药物组合物可用于治疗、改善和/或预防由HEV引起的感染的一种或多种症状(例如，通过向有需要的受试者施用)。例如，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗、改善和/或预防由HEV感染引起的一种或多种以下症状：发热、黄疸、食欲减退(厌食症)、恶心、呕吐、腹痛、瘙痒、皮疹和/或关节疼痛。
在一些实施方案中，有效量的一种或多种本文所述的化合物(例如，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐)和/或包含一种或多种本文所述的化合物(例如，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐)的药物组合物可用于治疗、改善和/或预防与由HEV引起的感染相关的一种或多种病症(例如，通过向有需要的受试者施用有效量)。例如，在一个实施方案中，有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可用于减缓或预防施用该化合物或盐的受试者的HEV感染进展为慢性HEV感染。在一个实施方案中，有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可用于改善或治疗施用该化合物或盐的受试者的HEV相关疾病或HEV诱导的疾病(例如，慢性HEV诱导的疾病)。在一个实施方案中，有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可用于减缓或预防施用该化合物或盐的受试者的HEV相关疾病或HEV诱导的疾病(例如慢性HEV诱导的疾病)的恶化。此类HEV相关疾病或HEV诱导的(慢性)疾病的示例包括急性胰腺炎、暴发性肝功能衰竭、格-巴二氏综合征、神经痛性肌萎缩、溶血性贫血(例如，在患有G6PD缺乏症的受试者中)、肾小球肾炎、肾小球肾炎伴肾病综合征、冷球蛋白血症、混合冷球蛋白血症和/或血小板减少症。
在一些实施方案中，有效量的一种或多种本文所述的化合物(例如，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐)和/或包含一种或多种本文所述的化合物(例如，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐)的药物组合物可用于治疗、改善和/或预防与HEV引起的感染相关的一种或多种纤维化或纤维化相关病症(例如，通过向有需要的受试者施用有效量)。在一个实施方案中，有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可用于改善(例如，减缓或预防)施用该化合物或盐的患有HEV感染的受试者的纤维化阶段。例如，有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可用于改善施用该化合物或盐的患有HEV感染的受试者的肝损伤程度，其中该肝损伤由HEV感染(包括慢性HEV感染)引起或加重。在另一个实施方案中，有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可用于改善施用该化合物或盐的患有HEV感染的受试者的纤维化(例如，减缓或预防纤维化的进展)。例如，在一个实施方案中，有效量的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可用于预防施用该化合物或盐的患有HEV感染(包括慢性HEV感染)的受试者的肝硬化(例如，减缓或预防早期肝纤维化阶段进展为肝硬化阶段)。
在一些实施方案中，当使用化合物(或其药学上可接受的盐)或实施如本文所述的方法时，考虑到受试者的特定特征。除了被识别为需要治疗本文所述病症(例如HEV感染)的受试者之外，还可以基于导致易受HEV感染或其影响的特定特征来识别受试者。例如，在一个实施方案中，受试者患有溶血性贫血并且还患有遗传风险因子葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏症(G6PD缺乏症)。在各种实施方案中，受试者可能需要治疗本文所述的病症(例如HEV感染)，也可能是孕妇、免疫受损的受试者、免疫缺陷的受试者和/或器官移植患者。因此，本文所述方法的任何化合物或盐施用步骤可与识别受试者的一种或多种临床相关特征的步骤结合进行。例如，一个实施方案提供了一种改善或治疗戊型肝炎(HEV)感染的方法，该方法包括识别有需要的孕妇受试者并且向该受试者施用一定量的具有化学式(I)的化合物或其药学上可接受的盐，该量有效治疗HEV感染并由此预防或减缓进展为暴发性肝功能衰竭。
在一些实施方案中，当使用化合物(或其药学上可接受的盐)或实施如本文所述的方法时，考虑到HEV的特定特征。例如，如上所述，HEV可以是具有各种已知亚型的基因型1、基因型2、基因型3或基因型4。除了被识别为需要治疗本文所述病症(例如HEV感染)的受试者之外，还可以基于HEV本身的特定特征，诸如基因型来识别受试者。
在一些实施方案中，当使用本文所述的化合物或实施本文所述的方法时，考虑到本文所述化合物(或盐)的特定特征。例如，式(I)的化合物及其药学上可接受的盐可具有各种效力。在一个实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐具有0.30μM或更小的EC50、0.25μM或更小的EC50、0.20μM或更小的EC50或者0.15μM或更小的EC50。以下实施例中提供了式(I)的化合物的示例性实施方案的效力数据。本申请更具体地涉及如本文所定义的那些化合物，其显示出，对于例如在Huh7细胞系中HEV DNA的抑制(例如，如以下实施例2中所述)，EC50小于0.30μM(更具体地0.25μM或更小，或0.20μM或更小，或0.15μM或更小)，更具体地，对于在将化合物置于Huh7细胞培养物中3天后测量的HEV DNA的抑制(例如，如以下实施例2中所述)，EC50小于0.30μM(更具体地0.25μM或更小，或0.20μM或更小，或0.15μM或更小)。如本文所用，半数最大有效浓度(EC50)旨在根据其在本领域中的一般含义。其可以更具体地指通常在指定的暴露时间之后，在基线与最大值之间诱导响应的化合物的浓度。EC50值通常用作化合物效力的量度，值越低通常表示效力越高。
用于确定治疗病毒感染诸如HEV感染的方法的有效性的各种指标是本领域技术人员已知的。合适的指标的示例包括但不限于病毒载量降低、病毒复制降低、血清转换(病毒在患者血清中不可检测)的时间减少、临床结果中的发病率或死亡率降低和/或疾病应答的其他指标。
在一些实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的有效量是有效地将病毒滴度降至不可检测的水平，例如降至约1000至约5000、约500至约1000或约100至约500基因组拷贝/mL血清的量。在一些实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的有效量是与施用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐之前的病毒载量相比，有效降低病毒载量的量。在一些实施方案中，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐的有效量是与施用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐之前的病毒载量相比，有效实现受试者血清中病毒滴度降低约1.5-log至约2.5-log、约3-log至约4-log或大于约5-log的量。例如，在一个实施方案中，在施用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐之前测量病毒载量，并在用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐完成治疗方案之后(例如，完成后1周)再次测量病毒载量。在一些实施方案中，相对于受试者的治疗前水平，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可导致HEV复制减少至少1、2、3、4、5、10、15、20、25、50、75、100倍或更多，如在治疗方案完成后(例如，完成后1周)所测定。在一些实施方案中，相对于治疗前水平，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可导致HEV复制减少约2至约5倍、约10至约20倍、约15至约40倍或约50至约100倍。
对于本领域技术人员显而易见的是，待施用的有用的体内剂量和具体的施用方式将根据年龄、体重、病痛的严重性和被治疗的哺乳动物种类、所使用的具体化合物或其药学上可接受的盐以及使用这些化合物或盐的特定用途而变化。有效剂量水平(即实现所需效果所需的剂量水平)的确定可由本领域技术人员使用常规方法，例如人类临床试验和体外研究来完成。
剂量的范围可比较广泛，具体取决于所需效果和治疗适应证。另选地，如本领域技术人员所理解，剂量可基于患者的表面积并且根据患者的表面积计算而得。尽管精确的剂量将基于各个药物来确定，但在大多数情况下，可对剂量进行一些概括。成人患者的每日剂量方案可为例如每种活性成分介于0.01mg和3000mg之间、优选地介于1mg和700mg之间(例如，5至200mg)的口服剂量。根据受试者的需要，剂量可以是在一天或多天的过程中给予的单一剂量或一系列的两个或更多个剂量。在一些实施方案中，化合物将被施用一个连续治疗周期，例如一周或多周，或者数月或数年。
在已经针对至少一些病症建立化合物的人类剂量的情况下，可使用那些相同的剂量，或者介于所建立的人类剂量的约0.1％和500％之间、更优选地介于约25％和250％之间的剂量。在未建立人类剂量的情况下，如对于新发现的药物组合物的情况，合适的人类剂量可根据ED50或ID50值或源自体外或体内研究的其他合适的值来推断，如通过在动物中进行毒性研究和功效研究获得。
在施用药学上可接受的盐的情况下，剂量可以游离碱计算。如本领域技术人员将理解，在某些情况下，可能需要以超过或甚至远远超过上述优选剂量范围的量施用本文公开的化合物，以便有效且积极地治疗尤其是具有侵袭性疾病或感染。
可单独调节剂量和间隔，以提供足以维持调节作用或最低有效浓度(MEC)的活性部分的血浆水平。每种化合物或其药学上可接受的盐的MEC会有差别，可以根据体外数据估计。实现MEC所需的剂量将取决于个体特征和施用途径。然而，HPLC测定或生物测定可用于确定血浆浓度。剂量间隔也可使用MEC值确定。应当使用保持血浆水平高于MEC持续10％至90％、优选地30％至90％、最优选地50％至90％的时间的方案施用组合物。在局部施用或选择性摄取的情况下，药物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。
应当注意，主治医师将知道如何以及何时因毒性或器官功能障碍而终止、中断或调节施用。相反，如果临床应答不充分(排除毒性)，主治医师也将知道将治疗调节至更高水平。在控制所关注的病症中施用的剂量大小将随待治疗的病症的严重性和施用途径而变化。病症的严重性可例如部分地通过标准预后评估方法进行评估。此外，剂量和可能的剂量频率也将根据个体患者的年龄、体重和应答而变化。与上面讨论的程序相当的程序可用于兽医学。
可以使用已知方法来评估本文公开的化合物和药学上可接受的盐的功效和毒性。例如，可通过测定对细胞系(诸如，哺乳动物细胞系，并且优选人类细胞系)的体外毒性来建立共享某些化学部分的具体化合物或化合物子集的毒理学。这类研究的结果通常会预测在动物(诸如，哺乳动物，或更具体地人类)中的毒性。另选地，可使用已知方法来测定具体化合物在动物模型(诸如，小鼠、大鼠、兔或猴)中的毒性。可使用多种公认的方法(诸如，体外方法、动物模型或人类临床试验)来建立具体化合物的功效。当选择模型来确定功效时，本领域技术人员可通过现有技术水平的指导来选择合适的模型、剂量、施用途径和/或方案。
实施例
实施例1：化合物的合成
化合物1
中间体1
三苯甲酸-(2R,3R,4R,5R)-5-((苯甲酰氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-2,3,4-三 酯
Figure BDA0003886246660000271
化合物B：在室温(R.T.)下向化合物A((2R,3R,4S,5R)-5-((苯甲酰氧基)甲基)-3-羟基-四氢呋喃-2,4-二基二苯甲酸酯，15g，32.4mmol)于ACN(ACN，150mL)中的溶液中添加IBX(2-碘酰基苯甲酸)(18.18g，64.9mmol)。在80℃下将溶液搅拌16小时，然后冷却至室温。过滤固体，并在减压下浓缩所得的溶液，以提供为黄色固体的化合物B((2R,4R,5R)-5-((苯甲酰氧基)甲基)-3-氧代四氢呋喃-2,4-二基二苯甲酸酯，14.1g，94％)。MS m/z(ESI)：461[M+H]+。
化合物C：在-78℃至-30℃下向化合物B(20g，43.4mmol)于THF(200mL)中的溶液中添加乙炔基溴化镁(0.5M于THF中，348mL)。在-30℃下将溶液搅拌2小时。通过添加饱和NH4Cl溶液(500mL)淬灭反应。将溶液用乙酸乙酯(EA，2x500mL)萃取。将萃取物经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩，以提供为棕色固体的化合物C((2R,3R,4R,5R)-5-((苯甲酰氧基)甲基)-3-乙炔基-3-羟基四氢呋喃-2,4-二基二苯甲酸酯，18.7g，粗产物)。MS m/z(ESI)509[M+Na]+。
中间体1：向化合物C(5g，10.3mmol)于DCM(50mL)中的溶液中添加DMAP(2.51g，20.6mmol)和三乙胺(3.12g，30.8mmol)。
然后在0℃下添加苯甲酰氯(4.35g，31mmol)。在室温下将溶液搅拌16小时，用DCM(500mL)稀释并用NaHCO3溶液(500mL)洗涤。将溶液经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物施加到具有EA:PE(石油醚)(1:10-1:5)的硅胶柱上，以提供为白色固体的中间体1((2R,3R,4R,5R)-5-((苯甲酰氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-2,3,4-三基三苯甲酸酯，4.1g，68％)。MS m/z(ESI)：613[M+Na]+。
Figure BDA0003886246660000281
在室温下向(2R,3R,4R,5R)-5-((苯甲酰氧基)甲基)-3-乙炔基四氢呋喃-2,3,4-三基三苯甲酸酯(中间体1，4.0g，6.8mmol)于ACN(40mL)中的溶液中添加6-氯-9H-嘌呤(2.09g，13.5mmol)。然后在0℃添加DBU(5.88g，38.6mmol)。在0℃持续搅拌该溶液15分钟，然后在0℃，伴随搅拌滴加三氟甲磺酸三甲基甲硅烷酯(12.05g，54.2mmol)。在0℃持续搅拌该溶液15分钟，然后70℃在16小时。用EA(500mL)稀释该溶液，并用饱和NaHCO3(200mL)。将溶液经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。该残余物被应用到具有EA:PE(1:5-1:3)硅胶柱上。获得为黄色固体的化合物1-1((2R,3R,4R,5R)-5-((苯甲酰氧基)甲基)-2-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基四氢呋喃-3,4-二基二苯甲酸酯，1.5g，36％)。MS m/z(ESI)：623[M+H]+。
向化合物1-1(1.5g，2.4mmol)于1,4-二噁烷(15mL)中的溶液中添加氨(30％，30mL)。将溶液在密封管中在110℃下搅拌12小时。将该溶液冷却至室温并在减压下浓缩。该残余物被应用到具有EA:MeOH(30:1-10:1)的硅胶柱上。获得为黄色固体的化合物1-2((2R,3R,4R,5R)-2-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-3-乙炔基-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇，520mg，74％)。MS m/z(ESI)：292[M+H]+。
向化合物1-2(5g，17.2mmol)于吡啶(50mL)中的溶液中添加三甲基氯硅烷(18.65g，171.7mmol)。在室温持续搅拌该溶液8小时。添加4-甲氧基-三苯基甲基氯(26.45g，85.9mmol)和4-二甲氨基吡啶(415mg，3.4mmol)。使溶液在40℃下反应24小时。将溶液用EA(500mL)稀释，用水(500mL)洗涤并经无水Na2SO4干燥。过滤掉该固体，并且在减压下浓缩所得的溶液。添加THF(50mL)和四丁基氟化铵(1M，于THF中，34.4mL)，并且使该反应在室温继续进行2小时。将溶液用EA(500mL)稀释并用水(500mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。该残余物在硅胶上用DCM:MeOH(40:1-20:1)纯化。获得为白色固体的化合物1-3((2R,3R,4R,5R)-3-乙炔基-5-(羟基甲基)-2-(6-(((4-甲氧基苯基)二苯基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二醇，5g，41％)。MS m/z(ESI):564。
在0℃下向化合物1-3(5g，8.9mmol)和PPh3(2.79g，10.5mmol)以及咪唑(713.5mg，10.5mmol)于THF(50mL)中的溶液中添加碘(2.47g，9.7mmol)溶液。在室温持续搅拌该溶液2小时，用EA(500mL)稀释，并用硫代硫酸钠(水溶液)(500mL)洗涤。将溶液经无水Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。该残余物在硅胶上用DCM:MeOH(40:1)纯化。获得为白色固体的化合物1-4((2R,3R,4R,5S)-3-乙炔基-5-(碘甲基)-2-(6-(((4-甲氧基苯基)二苯基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二醇，3.8g，51％)。MS m/z(ESI)：674[M+H]+。
在60℃下将化合物1-4(3g，4.5mmol)于5％NaOMe的MeOH(30mL)中的溶液搅拌4小时。用乙酸调节该溶液的pH值至7。在减压下浓缩该溶液。该残余物被应用到具有DCM:MeOH(40:1)的硅胶柱上。获得为白色固体的化合物1-5((2R,3R,4S)-3-乙炔基-2-(6-(((4-甲氧基-苯基)二苯基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)-5-亚甲基四氢呋喃-3,4-二醇，1.5g，56％)。MS m/z(ESI)：546[M+H]+。
在0℃下向化合物1-5(500mg，0.9mmol)于DCM(4mL)中的溶液中添加3-氯过氧苯甲酸(70％，450mg，1.8mmol)于DCM(2mL)中的溶液。在0℃下添加TEA 3HF(0.73g，4.5mmol)。在室温持续搅拌该溶液2小时，然后减压下浓缩。该残余物被应用到具有DCM:MeOH(40:1)的硅胶柱上。获得为白色固体的化合物1-6((2S,3S,4R,5R)-4-乙炔基-2-氟-2-(羟基甲基)-5-(6(((4-甲氧基苯基)二苯基甲基)氨基)-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二醇，87.5mg，15％)。MS m/z(ESI)：582[M+H]+。
向化合物1-6(300mg，0.52mmol)于二噁烷(3mL)中的溶液中添加5％TFA(6mL)。在室温下将溶液搅拌2小时。用氨(30％)调节该溶液的pH值至8。在减压下浓缩该溶液。该粗产物(300mg)通过制备型-HPLC纯化，具有下列条件：Atlantis制备型T3 OBD柱，19*250mm10u；流动相，水/ACN(3-15％ACN，12分钟内)；检测器，uv 254nm。获得为白色固体的化合物1((2S,3S,4R,5R)-5-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)-4-乙炔基-2-氟-2-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇，70.1mg，42％)。MS m/z(ESI)：310[M+H]+。
化合物2
在2009年8月4日以NOVARTIS的名义提交的WO2010/015643中提供了制备化合物2的方法。
Figure BDA0003886246660000301
4-氨基-7-((2R,3R,4R,5R)-3-乙炔基-3,4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)- 7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酰胺(化合物9)
根据通用工序5、6和7制备化合物9。
Figure BDA0003886246660000311
白色固体。1H NMR(300MHz,CD3OD):δ8.14(s,1H),8.12(s,1H),6.35(s,1H),4.43(d,J＝8.7Hz,1H),4.08-3.98(m,2H),3.93-3.84(m,1H),2.64(s,1H)。ESI-MS：Ci4H15N5O5的计算值为(333.31)；实测值：334.28[M+H+]。
异丁酸(2R,3R,4R,5R)-5-(4-氨基-5-氨基甲酰基-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-7-基)-4-乙炔基-4-羟基-2-异丁酰氧基甲基-四氢-呋喃-3-基酯(化合物2)
向4-氨基-7-((2R,3R,4R,5R)-3-乙炔基-3,4-二羟基-5-羟甲基-四氢呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酰胺(9)(52mg，0.16mmol)于DMF(2ml)中的搅拌溶液中添加三乙胺(89μl，0.64mmol，4.0当量)并将混合物冷却至0℃。在0℃下添加异丁酸酐(0.39ml，2.5mmol，2.5当量)和催化量的DMAP(约1mg)。在0℃下将反应物搅拌30分钟，然后添加甲酸(15μl)和水(1ml)以淬灭反应。通过制备型HPLC纯化粗产物，得到为白色固体的异丁酸(2R,3R,4R,5R)-5-(4-氨基-5-氨基甲酰基-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-乙炔基-4-羟基-2-异丁酰氧基甲基-四氢-呋喃-3-基酯。
1H NMR(300MHz,MeOD):δ8.17(1H,s),8.12(1H,s),6.39(1H,s),5.55(1H,d,J＝6.6Hz),4.50-4.30(3H,m),2.95(1H,s),2.79-2.60(2H,m),1.28-1.10(12H,m)。13C NMR(75MHz,MeOD):δ178.5,177.7,169.1,159.6,153.6,152.3,126.9,1 12.8,102.8,91.8,81.0,80.1,79.2,77.1,76.5,64.8,35.2,35.1,19.5,19.4。ESI-MS(正)：474.36；[α]D＝-55.85°(c＝1.0,MeOH,26℃)。
一般工序5
Figure BDA0003886246660000321
一般工序5步骤1：1,2-脱水-2-C-乙炔基-3,5-双(4-甲基苯甲酰基)-α-D-呋喃核 糖
向中间体(3R,4R,5R)-4-(4-甲基苯甲酰氧基)-5-(4-甲基苯甲酰氧基甲基)-3-乙炔基-四氢-呋喃-2,3-二醇(1.23g，3.0mmol)于CH2Cl2(20ml)中的溶液中添加三乙胺(1.25ml，9.0mmol)，然后在10分钟内滴加甲磺酸酐(679mg，3.9mmol)于CH2Cl2(5ml)中的溶液。之后，在40℃下将反应物搅拌2小时。将反应混合物用CH2Cl2(60ml)稀释并用H2O(2x15ml)、盐水(15ml)洗涤，干燥(Na2SO4)、过滤并浓缩至干，得到1,2-脱水-2-C-乙炔基-3,5-双(4-甲基苯甲酰基)-α-D-呋喃核糖。
一般工序5步骤2：4-氯-7-[(2R,3R,4R,5R)-3-乙炔基-3-羟基-4-(4-甲基-苯甲酰 氧基)-5-(4-甲基-苯甲酰氧基甲基)-四氢-呋喃-2-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酸甲 酯
向干燥烧瓶中装入4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酸甲酯(698mg，3.3mmol，1.1当量)、NaH(156mg，作为在油中的60％分散体，3.9mmol)和乙腈(10ml)，搅拌10分钟。然后添加粗化合物1,2-脱水-2-C-乙炔基-3,5-双(4-甲基苯甲酰基)-α-D-呋喃核糖(1.2g，3.0mmol)于乙腈(5ml)中的溶液，将反应物在80℃下加热3小时。通过添加1N HCl溶液将混合物中和至pH＝7.0并在真空下蒸发。添加乙酸乙酯(80ml)并将混合物用1N HCl溶液(20ml)、H2O(20ml)、盐水(20ml)洗涤，干燥(Na2SO4)、过滤、浓缩并通过快速柱纯化，得到4-氯-7-[(2R,3R,4R,5R)-3-乙炔基-3-羟基-4-(4-甲基-苯甲酰氧基)-5-(4-甲基-苯甲酰氧基甲基)-四氢-呋喃-2-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酸甲酯。ESI-MS(正)：604.3[M+H]。
一般工序5步骤3：4-氨基-7-((2R,3R,4R,5R)-3-乙炔基-3,4-二羟基-5-羟基-甲 基-四氢-呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酰胺
在90℃下将二噁烷(15ml)中的4-氯-7-[(2R,3R,4R,5R)-3-乙炔基-3-羟基-4-(4-甲基-苯甲酰氧基)-5-(4-甲基-苯甲酰氧基甲基)-四氢-呋喃-2-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酸甲酯(576mg，0.95mmol)与30％NH3.H2O(15mL)的混合物在玻璃压力管中加热1小时。将反应溶液浓缩，添加MeOH(3ml)和30％NH3.H2O(30mL)，将反应物在100℃下在压力管中加热过夜。将粗产物浓缩并通过快速色谱法纯化，得到为白色固体的4-氨基-7-((2R,3R,4R,5R)-3-乙炔基-3,4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酰胺。
1H NMR(300MHz,MeOD):δ＝8.14(1H,s),8.12(1H,s),6.35(1H,s),4.43(1H,d,J＝8.7Hz),4.08-3.98(2H,m),3.93-3.84(1H,m),2.64(1H,s)。ESI-MS(正)：334.28[M+H]。
一般工序6
Figure BDA0003886246660000331
Figure BDA0003886246660000341
一般工序6步骤1：(3R,4R,5R)-5-(2,4-二氯苄氧基甲基)-4-(2,4-二氯-苄氧基)- 3-乙炔基-四氢呋喃-2,3-二醇
向干燥烧瓶中装入中间体(3R,4R,5R)-5-(2,4-二氯苄氧基甲基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-3-乙炔基-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇(10.0g，19.75mmol)、TFA(30ml)和H2O(1.5ml)，并将混合物在55℃下搅拌过夜。蒸发溶剂，将残余物溶于CH2Cl2(70ml)，用饱和Na2CO3(50ml)洗涤有机层，然后用H2O(50ml)洗涤。将有机层经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到黑色油状物，为粗产物。将粗产物通过快速柱纯化，得到为褐色油状物的(3R,4R,5R)-5-(2,4-二氯苄氧基甲基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-3-乙炔基-四氢呋喃-2,3-二醇。
一般工序6步骤2：1,2-脱水-2-C-乙炔基-3,5-双(2,4-二氯苄基-氧基甲基)-α-D- 呋喃核糖
将(3R,4R,5R)-5-(2,4-二氯苄氧基甲基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-3-乙炔基-四氢呋喃-2,3-二醇(2.50g，5.08mmol)溶于CH2Cl2(20ml)中。在氩气下添加催化量的DMAP(50mg)和三乙胺(2.11ml，15.24mmol)。在室温下将对甲苯磺酰氯(1.45g，7.62mmol)添加到搅拌的混合物中。反应在1小时内完成。向混合物中添加TBME(20ml)，将有机层用H2O(2x30ml)、盐水(30ml)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤，浓缩，得到棕色油状物。将1,2-脱水-2-C-乙炔基-3,5-双(2,4-二氯苄基-氧基甲基)-α-D-呋喃核糖的粗产物直接用于下一步骤。
一般工序6步骤3：4-氨基-7-[(2R,3R,4R,5R)-4-(2,4-二氯-苄氧基)-5-(2,4-二 氯-苄氧基甲基)-3-乙炔基-3-羟基-四氢-呋喃-2-基]-7H-吡咯并[2,3-d]-嘧啶-5-甲酰胺
在氩气下向干燥烧瓶中装入4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酰胺(735mg，4.15mmol)、NaH(200mg，作为在油中的60％分散体，8.3mmol)、乙腈(10ml)和DMF(5ml)。将混合物在室温下搅拌15分钟。将1,2-脱水-2-C-乙炔基-3,5-双(2,4-二氯苄氧基甲基)-α-D-呋喃核糖(2.36g，4.98mmol)于乙腈(10ml)中的粗产物添加到搅拌的混合物中。将反应混合物在50℃下加热2小时。蒸发溶剂并将残余物溶于CH2Cl2(30ml)中。将有机层用H2O(2x30ml)、盐水(30ml)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并浓缩，得到深棕色油状物。将粗产物通过快速柱纯化，得到为褐色油状物的4-氨基-7-[(2R,3R,4R,5R)-4-(2,4-二氯-苄氧基)-5-(2,4-二氯-苄氧基甲基)-3-乙炔基-3-羟基-四氢-呋喃-2-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酰胺。
ESI-MS(正)：651.86[M+H]。
一般工序6步骤4：4-氨基-7-((2R,3R,4R,5R)-3-乙炔基-3,4-二羟基-5-羟基-甲 基-四氢-呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酰胺
在氩气下，在-30℃下，向4-氨基-7-[(2R,3R,4R,5R)-4-(2,4-二氯-苄氧基)-5-(2,4-二氯-苄氧基甲基)-3-乙炔基-3-羟基-四氢-呋喃-2-基]-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酰胺(1.57g，2.40mmol)于CH2Cl2(20ml)中的搅拌溶液中缓慢添加BCl3 1M于CH2Cl2中的溶液(24ml，24.04mmol)。搅拌后，将反应物在-30℃下混合2小时，并在-20℃下向反应混合物中添加冷CH3OH(10ml)以淬灭反应。在相同温度下继续搅拌混合物15分钟，然后蒸发溶剂。将残余物溶于CH3OH(3ml)中并用CH2Cl2(30ml)稀释。形成沉淀，过滤并干燥，得到为浅棕色固体的525mg 4-氨基-7-((2R,3R,4R,5R)-3-乙炔基-3,4-二羟基-5-羟甲基-四氢-呋喃-2-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酰胺。
1H NMR(300MHz,MeOD):δ8.14(1H,s),8.12(1H,s),6.35(1H,s),4.43(1H,d,J＝8.7Hz),4.08-3.98(2H,m),3.93-3.84(1H,m),2.64(1H,s)。13C NMR(75MHz,MeOD):δ167.7,157.8,151.4,150.5,125.9,11 1.4,101.5,91.4,82.6,80.8,76.3,75.6,74.7,60.3。ESI-MS(正)：334.06[M+H]。
一般工序7
具有X＝CR6(例如其中R6是甲酰胺)的碱部分可以根据一般工序7合成。这些碱部分可以与合适的糖部分偶联，例如如上所述，以提供可以制备本发明化合物的炔基核苷。
Figure BDA0003886246660000361
一般工序7步骤1：5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶
向可商购获得的4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(6.0g，39.215mmol)于二氯甲烷(30ml)中的悬浮液中添加N-溴代琥珀酰亚胺(8.376g，47.0588mmol)并将所得的反应混合物在室温下搅拌4小时。向混合物中添加100ml水，并将混合物搅拌30分钟。将固体过滤并在高真空下干燥，得到为浅棕色固体的5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶。ESI-MS(正)：232.0[M+H]。
一般工序7步骤2：4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酸甲酯
在-78℃下向5-溴-4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(15g，64.377mmol)于THF(378ml)中的溶液中逐滴添加n-BuLi(1.4M于己烷中，96.56ml，135.19mmol)。将反应溶液搅拌30分钟，然后在-78℃下添加THF中的氯甲酸甲酯(4.73mL，61.15mmol)，使反应混合物达到室温并搅拌3小时。将反应用NH4Cl水溶液淬灭。蒸馏出溶剂并用EtOAc(3x300ml)萃取残余溶液。将合并的有机层用水(300mL)、盐水(300mL)洗涤，经无水Na2SO4干燥并真空浓缩。通过柱色谱法纯化粗残余物，得到为浅黄色固体的4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酸甲酯。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ13.3(brs,1H),8.69(s,1H),8.42(s,1H),3.82(s,1H)。ESI-MS(正)：21 1.8(M+H)。
一般工序7步骤3：4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酰胺
将4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酸甲酯(790mg，3.73mmol)和28％至30％的NH3.H2O(50ml)在玻璃压力管中的混合物在搅拌下在100℃下加热过夜。沉淀物形成并过滤。将沉淀物用冷MeOH(30ml)和水(20ml)洗涤，并干燥，得到335mg的4-氨基-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-5-甲酰胺。1H NMR(300MHz,DMSO):δ8.03(1H,s),7.90(1H,s)ESI-MS(正)：179.26[M+H]。
氨基酸酯的合成
化合物可以由炔基核苷类似物合成，例如(2R,3R,4R,5R)-2-(4-氨基-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟甲基-四氢呋喃-3,4-二醇(化合物2)。
化合物3
在2009年8月4日以NOVARTIS的名义提交的WO2010/015643中提供了制备化合物3的方法。
黄色固体。1H NMR(300MHz,MeOD):δ8.07(1H,s),7.48(1H,d,J＝3.9Hz),6.58(1H,d,J＝3.6Hz),6.29(1H,s),4.49(1H,d,J＝8.4Hz),4.08-3.96(2H,m),3.90-3.75(1H,m),2.52(1H,s)。1H NMR(300MHz,DMSO-d6):δ8.05(1H,s),7.41(1H,d,J＝3.6Hz),6.97(2H,s),6.55(1H,d,J＝3.6Hz),6.23(1H,s),6.16(1H,s),5.61(1H,d,J＝7.5Hz),5.13(1H,t,J＝4.9Hz),4.33(1H,t,J＝7.8Hz),3.90-3.70(2H,m),3.78-3.68(1H,m),3.01(1H,s)。13C NMR(75MHz,DMSO-d6):δ157.4,151.6,150.1,121.6,102.4,99.6,89.6,82.1,81.8,76.5,75.8,74.0,59.7。ESI-MS：C13H14N4O4的计算值为(290.1)；实测值：291.2(M+1)。
[α]D：+9.49°(ADP440旋光计；c＝2.0，0.1N HCl溶液，25.4℃；波长589nm)。
该化合物由可商购获得的(3R,4R,5R)-5-(2,4-二氯苄基-氧基甲基)-4-(2,4-二氯苄基氧基)-2-甲氧基-四氢呋喃-3-乙酸酯I-1和4-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶根据一般工序1制备(参见WO 2010/015643一般工序1或以下)。
或者，根据如WO 2010/015643中所述的一般工序2a、2b、2c、3或4制备该化合物；一般工序2a、2b、2c、3和4以引用方式并入本文。
一般工序1
根据一般工序1，中间体化合物I-4可根据一般工序1制备，并偶联至任何合适的碱部分，以得到炔基核苷，例如化合物3。一般工序1使用双保护的(在4-羟基和5-羟基甲基取代基处)4-羟基-5-羟基甲基-2-甲氧基-四氢呋喃-3-乙酸酯如(3R,4R,5R)-4-(2,4-二氯苄氧基)-5-(2,4-二氯苄氧基甲基)-2-甲氧基-四氢呋喃-3-乙酸酯作为起始材料。在碱性条件下除去乙酸基团，例如使用NaOMe或另一种合适的碱，诸如例如醇钠或碳酸钾。可以使用任何合适的氧化剂/条件进行氧化步骤，诸如例如Swern氧化、TEMPO或Dess-Martin过碘烷，得到呋喃-3-酮。可以使用合适的格氏(Grignard)试剂诸如炔基卤化镁，例如炔基溴化镁诸如乙炔基溴化镁，或使用有机锂试剂诸如炔基锂试剂，例如乙炔基锂来进行向亚炔基部分的转化。化合物I-4可以偶联至任何合适的碱部分，诸如例如腺嘌呤或鸟嘌呤衍生物，其中X＝CH，R1'＝NH2，R2'和R3＝H。
Figure BDA0003886246660000381
一般工序1步骤1：(3R，4S，5R)-5-(2,4-二氯苄氧基甲基)-4-(2,4-二氯苄氧基)- 2-甲氧基四氢呋喃-3-醇(I-2)
向可商购获得的(3R,4R,5R)-5-(2,4-二氯-苄氧基甲基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-2-甲氧基-四氢呋喃-3-乙酸酯I-1(10g，19.1mmol)于MeOH(150ml)中的溶液中添加30％NaOMe于MeOH中的溶液(5.37ml，28.6mmol，1.5当量)，并将反应物在室温下搅拌30分钟。将反应混合物浓缩并溶于乙酸乙酯(180ml)中，用1N HCl溶液和饱和盐水洗涤，干燥(无水Na2SO4)并浓缩，得到为淡黄色油状物的(3R,4S,5R)-5-(2,4-二氯苄氧基甲基)-4-(2,4-二氯-苄氧基)-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇I-2。所得的粗化合物用于下一步骤，无需进一步纯化。
一般工序1步骤2：(4R,5R)-5-(2,4-二氯苄氧基甲基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-2-甲 氧基-二氢呋喃-3-酮(I-3)
在-78℃下向冷却的草酰氯(2.15ml，25.1mmol，1.3当量)于DCM(20ml)中的溶液中添加DMSO(2.85ml，36.5mmol，1.9当量)于DCM(30ml)中的溶液，并在-78℃下搅拌30分钟。然后缓慢添加(3R,4S,5R)-5-(2,4-二氯苄氧基-甲基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇I-2(9.6g，18.8mmol，1当量)于DCM(50ml)中的溶液，并在-78℃下搅拌约2小时。然后向反应混合物中添加三乙胺(15.8ml，114mmol，6.0当量)，缓慢升至室温，搅拌1小时。反应完成后，将混合物用水(100ml)和DCM(50ml)稀释。分离DCM层，用1N HCl溶液和饱和盐水洗涤，干燥(无水Na2SO4)，浓缩，通过快速色谱法(己烷:乙酸乙酯＝70:30)纯化，得到为浅黄色油状物的(4R,5R)-5-(2,4-二氯苄基-氧基-甲基)-4-(2,4-二氯苄基氧基)-2-甲氧基-二氢呋喃-3-酮I-3。
一般工序1步骤3：(3R,4R,5R)-5-(2,4-二氯苄氧基甲基)-4-(2,4-二氯苄氧基)- 3-乙炔基-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇(I-4)
向0.5M乙炔基溴化镁(R3＝H)于THF(137.5ml，68.5mmol，5当量)中的冷(0℃)溶液中添加(4R,5R)-5-(2,4-二氯苄氧基甲基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-2-甲氧基-二氢呋喃-3-酮I-3(6.6g，13.7mmol，1当量)于THF(15ml)中的溶液，并在相同温度下搅拌3小时。将反应混合物用冷的饱和NH4Cl(50ml)淬灭并用乙酸乙酯(2x60mL)萃取。将有机层用1N HCl溶液和饱和盐水洗涤，干燥(无水Na2SO4)，浓缩并通过快速色谱法(己烷:乙酸乙酯＝85:15)纯化，得到为淡黄色形式的(3R,4R,5R)-5-(2,4-二氯-苄氧基甲基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-3-乙炔基-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇I-4。
一般工序1步骤4：(2R,3R,4R,5R)-2-(4-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-(2,4- 二氯苄氧基)-5-(2,4-二氯苄氧基甲基)-3-乙炔基-四氢呋喃-3-醇(I-5)
向(3R,4R,5R)-5-(2,4-二氯苄氧基甲基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-3-乙炔基-2-甲氧基-四氢呋喃-3-醇I-4(500mg，1mmol，1当量)于无水DCM(5ml)中的溶液中添加33％HBr-AcOH溶液(0.88mL，5mmol，5当量)并在室温下搅拌1.5小时。在起始材料消耗之后，在真空(1毫巴，35℃)下蒸发反应混合物，得到稠油状的溴化物中间体。然后将其溶于无水乙腈(10ml)中。在另一个烧瓶中，向预先在室温下搅拌0.5小时的4-氯吡咯并[2,3-d]嘧啶(R-1'＝Cl，R2'＝H，X＝CH)(153.0mg，1mmol，1当量)和NaH(200mg，5mmol，5当量)于乙腈(15ml)中的混合物中添加以上获得的溴化物中间体的溶液，并将反应混合物在室温下搅拌18小时。除去溶剂，用乙酸乙酯(60ml)稀释，用水、盐水洗涤，干燥(无水Na2SO4)，浓缩，得到粘稠液体。通过快速色谱法纯化(己烷:乙酸乙酯＝80:20)粗产物，得到为浅黄色固体的(2R,3R,4R,5R)-2-(4-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-5-(2,4-二氯苄氧基甲基)-3-乙炔基-四氢呋喃-3-醇I-5。
一般工序1步骤5：(2R,3R,4R,5R)-2-(4-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-乙炔 基-5-羟甲基-四氢呋喃-3,4-二醇(I-6)
向(2R,3R,4R,5R)-2-(4-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-4-(2,4-二氯苄氧基)-5-(2,4-二氯苄氧基甲基)-3-乙炔基-四氢呋喃-3-醇I-5(150mg，0.24mmol，1当量)于无水DCM(20ml)中的冷(-78℃)溶液中逐滴添加1M BCl3于DCM中的溶液(2.4ml，2.4mmol，10当量)并在-78℃下搅拌约5小时。将反应混合物在0℃下用MeOH(15mL)淬灭并搅拌30分钟。将溶剂蒸发并与硅胶(4ml)一起干燥，将硅胶上的粗产物通过快速色谱法(DCM:甲醇＝90:10)纯化，得到为棕色泡沫的(2R,3R,4R,5R)-2-(4-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟甲基-四氢呋喃-3,4-二醇I-6。
一般工序1步骤6：(2R,3R,4R,5R)-2-(4-氨基-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-乙炔 基-5-羟甲基-四氢呋喃-3,4-二醇(I)(＝化合物3)
将(2R,3R,4R,5R)-2-(4-氯-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟基-甲基-四氢呋喃-3,4-二醇I-6(96mg，0.31mmol，1当量)和NH3.H2O(R1＝NH2)(10mL在水中的28％至30％氨)在玻璃压力管中的混合物在100℃下加热5小时。将反应混合物浓缩至干并通过制备型HPLC纯化，其中乙腈在水中的梯度为30分钟内从0％至35％。合并纯级分并冻干，得到为浅黄色泡沫的(2R,3R,4R,5R)-2-(4-氨基-吡咯并[2,3-d]嘧啶-7-基)-3-乙炔基-5-羟甲基-四氢呋喃-3,4-二醇(X＝CH，R1＝NH2，R2＝H，R3＝H)I。
实施例2：生物活性
针对大鼠HEV复制子LA-B350/luc测试化合物的抗病毒活性，如Debing等人(DisModel Mech 2016；9:1203-10)所述。为此，用由质粒pLA-B350/luc产生的加帽病毒RNA对Huh7细胞进行电穿孔，铺板在96孔板中，并用所选择的浓度的每种化合物处理。对于病毒对照(VC)，省略化合物。3天后，使用Promega Renilla荧光素酶试剂盒对由分泌的高斯荧光素酶产生的发光进行定量，并用细胞对照(CC，病毒RNA并省略化合物)校正背景。将50％有效浓度(EC50)定义为与平均校正VC相比导致Luc信号降低50％的化合物浓度。EC50基于两个或三个实验，并使用双参数逻辑模型通过在GraphPad中的非线性回归拟合而导出，同时保持斜率变量。
对于活力评估，除去培养基，随后将细胞与MTS/PMS溶液(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓/吩嗪甲基硫酸盐)一起温育，其代谢产生棕色水溶性产物，在37℃下1小时后通过在498nm下的吸光度读数对其进行定量。得到的值被表示为未处理的RNA转染的对照条件的抑制百分比。CC50表示细胞的代谢活性会降低至未处理细胞的代谢活性的50％时的浓度(并且基于两个实验，并使用双参数逻辑模型通过在GraphPad中的非线性回归拟合而导出，同时保持斜率变量)。
结果证明式(I)的化合物具有抗HEV(大鼠HEV复制子LA-B350/luc)的活性。
化合物编号 EC50(μM) CI95％(μM)
1 <0.00064 NA
2 0.038 0.0090至0.13
3 0.0083 0.0037至0.017
NA＝不适用
报告值可四舍五入成两位有效数字
化合物2在50μM的最高测试浓度下未达到CC50。化合物1的CC50为3.91μM(CI95％0.9725μM至23.7μM)。
实施例3：HEV基因型3复制子Kernow-C1 p6/luc
针对HEV基因型3复制子Kernow-C1 p6/luc(Kernow-C1 p6：GenBank登录号JQ679013)测试化合物的抗病毒活性，如前所述(Debing Y,Emerson SU,Wang Y,Pan Q,Balzarini J,Dallmeier K,Neyts J.2013.Ribavirin Inhibits In Vitro Hepatitis EVirus Replication through Depletion of Cellular GTP Pools and Is ModeratelySynergistic with Alpha Interferon.Antimicrob Agents Chemother,58:267-273)。为此，用由Mlul消化的质粒DNA(Shukla P,Nguyen HT,Faulk K,Mather K,Torian U,EngleRE,Emerson SU.2012.Adaptation of a genotype 3hepatitis E virus to efficientgrowth in cell culture depends on an inserted human gene segment acquired byrecombination.J.Virol.86:5697–5707)产生的加帽的体外转录的Kernow-C1 p6/luc-RNA对Huh7细胞进行电穿孔，接种于含有测试化合物的系列稀释液的96孔板中。对于病毒对照(VC)，省略化合物。4天后，使用Promega Renilla荧光素酶试剂盒对由分泌的高斯荧光素酶产生的发光进行定量，并用细胞对照(CC，病毒RNA并省略化合物)校正背景。相对50％有效浓度(EC50)被定义为相对于信号范围导致Luc信号降低50％的化合物浓度。相对EC50基于两个实验，并使用四参数逻辑(4PL)模型通过在GraphPad中的非线性回归拟合而导出。
对于活力评估，除去培养基，随后将细胞与MTS/PMS溶液(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑鎓/吩嗪甲基硫酸盐)一起温育，其代谢产生棕色水溶性产物，在37℃下1小时后通过在498nm下的吸光度读数对其进行定量。得到的值被表示为未处理的RNA转染的对照条件的百分比。相对CC50表示细胞的代谢活性会降低至未处理细胞的代谢活性的50％时的浓度，并且基于两个实验，并使用四参数逻辑(4PL)模型通过在GraphPad中的非线性回归拟合而导出。
结果证明式(I)的化合物具有抗HEV基因型3复制子Kernow-C1 p6/luc的活性。
化合物编号 相对EC50(μM) CI95％(μM)
1 0.0045 0.00011至0.0086
2 0.23 0.14至0.37
3 0.032 0.021至0.050
报告值可四舍五入成两位有效数字。
化合物2和3在50μM的最高测试浓度下未达到相对CC50。
本文所公开的化合物是有效的，并且不受任何理论的束缚，应当理解，这可以在体内环境中转化为用于治疗戊型肝炎感染的有效疗法。
实施例4：在HEV无胸腺裸大鼠(HEV品系LA-B350)中的体内功效
在体内功效研究之前，从10只被感染的无胸腺裸大鼠的肝脏制备一批新的大鼠HEV病毒。新制备的这批病毒用于所有体内研究。
将含有新制备的大鼠HEV的10％肝匀浆的小瓶解冻。将病毒原液在PBS中稀释10倍，相当于约2×107个病毒RNA拷贝。用200μL稀释的病毒原液通过在尾静脉中进行静脉注射感染无胸腺裸大鼠。在感染前1小时开始治疗大鼠，并继续每天治疗一次，直到第14天。每天对大鼠称重并检查临床征象，直到实验结束(感染后第21天)。从感染后第1天至第14天，每周采集一次血液，每3天采集一次粪便，通过RT-qPCR对病毒载量进行定量。从感染后第15天至第21天，每3天采集一次粪便，用于对病毒载量进行定量。在感染后第21天，通过腹腔内注射致死剂量对大鼠实施安乐死，通过心脏穿刺采集血液，并在用PBS进行心内灌注后采集肝脏。分析血液和肝脏是否存在病毒RNA(RT-qPCR)并进行组织病理学分析。
组 大鼠数量 剂量(mg/kg) 频率 MOA
媒介物 6 - QD 管饲法
利巴韦林 6 30mg/kg QD i.p.
测试化合物 6 高剂量(例如200mg/kg) QD 管饲法
测试化合物 中等剂量(例如70mg/kg) QD 管饲法
测试化合物 6 低剂量(例如20mg/kg) QD 管饲法
索非布韦 6 待确定 QD 管饲法
Figure BDA0003886246660000431
研究设计：
·感染后第-1天或第-2天：将5周龄(110g至130g)纯合雌性无胸腺裸Hsd:RH-Foxn1rnu大鼠(褐家鼠(Rattus norvegicus)，Envigo,Horst,The Netherlands)分成4至6组(5只动物/组)；给它们贴上耳标。
·感染后第0天：根据上述时间表，从感染前1小时开始，对大鼠称重并通过管饲法或腹腔内给药(利巴韦林或IFN)进行治疗。用200μL的1％大鼠HEV品系LA-B350肝匀浆(相当于约2×107个病毒RNA拷贝)进行静脉内感染。
·感染后第1天至第14天：每天给大鼠称重并每天治疗一次。监测动物的活动性、护理和行为。每3天采集一次粪便，每周从尾部采集一次血液(血清)，通过RT-qPCR对病毒载量进行定量。当达到人道终点(驼背、毛皮褶皱、体重减轻≥20％、昏睡)时，将对动物实施安乐死。
·感染后第15天至第20天：每天给大鼠称重。监测动物的活动性、护理和行为。每3天采集一次粪便，通过RT-qPCR对病毒载量进行定量。当达到人道终点(驼背、毛皮褶皱、体重减轻≥20％、昏睡)时，将对动物实施安乐死。
·感染后第21天：对动物实施安乐死：采集肝脏、血液(血清)和粪便。
样品处理：
肝脏：1)通过RT-qPCR对病毒载量进行定量
2)组织学检查
血液：通过RT-qPCR对病毒载量进行定量
粪便：通过RT-qPCR对病毒载量进行定量
所公开的主题不限于本文所述的具体实施方案和实施例的范围。实际上，除了所描述的那些之外，根据前面的描述和附图，本公开的各种修改形式对于本领域技术人员将变得显而易见。此类修改旨在落入所附权利要求书的范围内。
本文引用的所有参考文献(例如，出版物或专利或专利申请)出于所有目的全文以引用方式并入本文中，其程度就如同每个单独的参考文献(例如，出版物或专利或专利申请)被具体地和单独地表示为出于所有目的全文以引用方式并入。其他实施方案在以下权利要求书内。

Claims (13)

1.一种用于在治疗有需要的受试者的戊型肝炎感染中使用的化合物，其中所述化合物是式(I)的化合物
Figure FDA0003886246650000011
或其药学上可接受的盐；
其中：
碱选自由(b-1)、(b-2)、(b-3)、(b-4)、(b-5)、(b-6)、(b-7)和(b-8)组成的组：
Figure FDA0003886246650000012
R1选自由H、C(＝O)C1-4烷基和
Figure FDA0003886246650000013
组成的组；
R2选自由H和C(＝O)C1-4烷基组成的组；并且
R3选自由H和F组成的组。
2.根据权利要求1所述用于使用的化合物，其中碱是(b-4)或(b-8)。
3.根据权利要求1或2所述用于使用的化合物，其中R1选自由H和C(＝O)C1-4烷基组成的组。
4.根据权利要求1至3中任一项所述用于使用的化合物，其中R1是H。
5.根据权利要求1至3中任一项所述用于使用的化合物，其中R1是C(＝O)C1-4烷基。
6.根据权利要求1至5中任一项所述用于使用的化合物，其中R2是C(＝O)C1-4烷基。
7.根据权利要求1至6中任一项所述用于使用的化合物，其中R3为F。
8.根据权利要求1所述用于使用的化合物，其中所述化合物选自由下列组成的组：
Figure FDA0003886246650000021
或其药学上可接受的盐。
9.根据权利要求1所述用于使用的化合物，其中所述化合物是：
Figure FDA0003886246650000022
10.一种用于在治疗有需要的戊型肝炎感染中使用的药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至9中任一项所述的化合物以及药学上可接受的媒介物。
11.根据权利要求1至9中任一项所述用于使用的化合物或根据权利要求10所述用于使用的药物组合物，其中所述戊型肝炎感染是慢性HEV感染。
12.根据权利要求1至9中任一项所述用于使用的化合物或根据权利要求10所述用于使用的药物组合物，其中所述HEV感染属于基因型1、基因型2或基因型3。
13.根据权利要求1至9中任一项所述用于使用的化合物或根据权利要求10所述用于使用的药物组合物，其中所述受试者是孕妇、免疫受损的受试者或免疫缺陷的受试者。
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