CN115844864A - 双硫仑在制备防治主动脉瘤和主动脉夹层药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了双硫仑在制备防治主动脉瘤和/或主动脉夹层药物中的应用，相应的双硫仑药物治疗相比于创伤大、费用昂贵的外科治疗方式，安全性更高，具有临床开发应用前景。

Description

双硫仑在制备防治主动脉瘤和主动脉夹层药物中的应用

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及双硫仑在制备防治主动脉瘤和/或主动脉夹层药物中的应用。

背景技术

主动脉瘤主要是指主动脉的局部或普遍扩张，大于正常直径的50％以上，是一种血管内的疾病，如果主动脉瘤瘤体比较小，对主动脉壁的压迫感是比较小的，一般不会产生主动脉壁破裂的现象。随着瘤体增大，主动脉会进行扩张，慢慢失去弹性，不断的扩张会对主动脉内膜造成撕裂性损伤，血液会通过破损的内膜进入到血管的中层，从而出现主动脉夹层现象。出现主动脉夹层后，血液会沿着血管的长轴方向扩展，使患者出现剧烈的胸痛或者腹痛等症状，严重时会导致主动脉壁破裂，造成大出血的现象，对患者的生命安全造成一定的威胁。

主动脉瘤和主动脉夹层(aortic aneurysm and dissection,AAD)是严重危害人类健康的心血管疾病之一，主动脉瘤是主动脉的永久性且不可逆的局部扩张，主动脉夹层是由主动脉内膜撕裂或主动脉壁内出血，导致主动脉壁层分离。在65岁或以上的男性中，AAD的发病率高达6％，发生急性并发症时，如果不立即进行手术干预，AAD破裂的死亡率高达80％。目前认为AAD的发病机制主要与炎症浸润、细胞凋亡、平滑肌细胞表型转换和细胞外基质降解有关，但是由于其潜在的病理机制尚不明确，所以目前仍没有有效的药物投入临床广泛的应用，还是以外科手术治疗为主。众所周知，外科治疗创伤大，术后并发症多，花费昂贵，医保负担沉重，并且着重点是放在治疗而不是预防。因此，深入探究AAD的发病机制，并据此发明相关的药物来防治AAD是十分紧迫和必要的。

发明内容

本课题组在研究中发现，GSDMD与主动脉瘤和主动脉夹层的形成和发展方面之间可能存在一定的关系，于是推测GSDMD抑制剂在主动脉瘤和主动脉夹层这类大血管疾病治疗中具有潜在的应用价值。经过对多种GSDMD抑制剂的筛选，尝试用双硫仑(disulfiram)对AAD模型小鼠进行治疗，意外地发现取得了较为理想的治疗效果。

鉴于此，本发明提供了如下技术方案：

双硫仑在制备防治主动脉瘤药物、防治主动脉夹层药物、或者防治主动脉瘤和主动脉夹层(AAD)药物中的应用。

优选上述药物用于防治主动脉瘤和主动脉夹层(AAD)，即同时防治主动脉瘤和主动脉夹层两种症状发生。

在一种实施方式中，上述药物中包含治疗有效量的双硫仑作为唯一活性成分。

在另一种可选的实施方式中，上述药物是药物组合物，除了包含治疗有效量的双硫仑作为活性成分外，还包含一种以上主动脉瘤治疗剂或者主动脉夹层治疗剂，即双硫仑与一种以上用于治疗主动脉瘤的药物或者用于治疗主动脉夹层的药物配合使用。

其中双硫仑的治疗有效量根据药物剂型不同而可能发生变化。可选地，双硫仑的治疗有效量可以采用或者参照已批准的双硫仑药品的给药剂量。

例如，上述主动脉瘤治疗剂可以选自下组：β-受体拮抗剂，例如普萘洛尔，作用于血管壁上的β受体，与其特异性结合导致血管壁扩张，该治疗剂能够有效控制如马凡综合征时主动脉管壁的扩张；四环类抗生素，例如强力霉素(又称为多西环素)，主要是通过抗炎来发挥作用；血管紧张素II受体阻滞剂，例如氯沙坦、缬沙坦等，当患者有β受体阻滞剂的禁忌症，或使用β受体阻滞剂不能很好控制血压时，可遵医嘱使用此类药物；他汀类药物，例如阿托伐他汀、洛伐他汀等，可降低胆固醇，减少动脉阻塞。

上述主动脉夹层治疗剂可以选自下组：阿片类药物，例如吗啡、哌替啶；β受体阻滞剂，例如美托洛尔、艾司洛尔。

可选地，上述药物还包含一种以上药学上可接受的载体。

上述药物的剂型可以是口服制剂或者注射剂。

所述口服制剂选自下组：片剂、胶囊剂(包括但不限于分散型胶囊和明胶胶囊)、颗粒剂、粉剂、溶液、糖浆剂。

所述口服制剂中，药学上可接受的载体包括下组中的一种以上：填充剂或增量剂，粘合剂，湿润剂，崩解剂，吸收剂，润滑剂，缓冲剂，络合剂，着色剂。

当药物的剂型是注射剂时，适用于静脉注射、静脉滴注。

本发明首次发现了双硫仑在预防、延缓和/或治疗主动脉瘤和主动脉夹层中的独特效果，其能够降低AAD高发病率、高死亡率的风险，相比于创伤大、费用昂贵的外科治疗方式，其无创性的口服给药方式安全性更好，具有重要的临床应用和商业价值。

附图说明

图1显示了使用BAPN建模的小鼠AAD模型主动脉组织的照片。其中，Vehicle+BAPN是对照组AAD小鼠，Disulfiram+BAPN是双硫仑治疗组。

图2是使用BAPN建模的小鼠AAD模型死亡率统计曲线。其中，Vehicle+BAPN是对照组AAD小鼠，Disulfiram+BAPN是双硫仑治疗组，纵坐标是存活率％，横坐标是饲养天数。

图3显示了BAPN建模的小鼠AAD发生率及严重程度统计柱形图。其中，rupture是主动脉破裂，health是未发生AAD，纵坐标是发生率％。

图4显示了BAPN建模的小鼠AAD模型治疗前后的主动脉最大径。

图5显示了BAPN建模的小鼠AAD模型治疗前后的血管HE、EVG染色照片。

图6显示了BAPN建模的小鼠AAD模型治疗前后的血管的免疫荧光检测照片。

图7显示了BAPN建模的小鼠AAD模型治疗前后的主动脉组织细胞蛋白的SDS-PAGE凝胶电泳照片。其中，照片显示了炎症因子IL-1β、IL-18泳带，actin是内参。

具体实施方式

发明人在对主动脉瘤和主动脉夹层发生发展的临床机理研究中，关注了大量与炎症相关的细胞因子或者细胞/组织分泌蛋白水平的变化情况，GSDMD属于其中之一。GSDMD属于gasdermin家族，在哺乳动物中高度保守，含有约480个氨基酸，分为两个结构域，C-末端抑制结构域和N-末端效应结构域。当细胞受到炎症浸润时，会激活依赖caspase-1的经典细胞焦亡信号通路，或caspase-4/5/11的非经典细胞焦亡信号通路，活化的caspase-1/4/5/11会剪切GSDMD的C-末端抑制结构域，使得N-末端效应结构域发挥作用，其可在细胞膜上寡聚化，并形成孔道，而细胞内的促炎症因子，如IL-18、IL-1β、TNF-α因直径小于孔道的内径，即释放出胞发挥促炎作用；另一方面，质膜上的GSDMD孔道破坏了细胞内外的渗透压，导致细胞膨胀溶解。有研究发现，针对GSDMD参与的细胞焦亡过程中选择性抑制NLRP3炎症小体能够通过减轻细胞炎症来改善动脉粥样硬化、血管钙化以及腹主动脉瘤等疾病。但是相比于仅仅抑制上游单一NLRP3炎症小体或者下游促炎症因子的生物制剂不同，GSDMD作为各种炎症信号通路最后执行者，有理由推测，直接的GSDMD抑制剂是值得进一步探究，有可能在主动脉瘤和主动脉夹层这类大血管疾病治疗中具有应用潜力。

双硫仑(disulfiram)是GSDMD介导膜孔形成的抑制剂，也是一种已在临床应用多年的戒酒药，中文别名：戒酒硫；双(二乙硫代氨基甲酰)二硫化物；双硫伦；二硫化四乙基秋兰姆；促进剂TETD；双硫伦；双硫醒。戒酒者停用含酒精饮料至少12小时后才能服用双硫仑。据国外报道，在治疗初期，一天最大剂量为500mg，持续1～2周；以后的维持剂量为125～500mg/d，取决于患者对不良反应的耐受性。另一种用法为，第一天剂量为800mg，以后200mg/d，维持量100～200mg/d。均为早晨一次服用。口服双硫仑主要在胃肠道吸收，双硫仑临床主要使用片剂。长期的临床应用已证实双硫仑临床作用明确，患者耐受性以及安全性良好。相比于“老药”的作用，近年来双硫仑被发现还具有更多的临床应用价值，如改善肿瘤患者长期预后，应用于抗焦虑症等神经精神类疾病以及病毒感染相关疾病的作用。双硫仑的“老药新用”与其近年来才明确的抗炎作用、尤其是发挥GSDMD抑制作用的药理机制是密不可分的。简而言之，双硫仑能够共价修饰人/小鼠焦亡执行蛋白GSDMD的Cys191/Cys192位点，来进一步抑制其活化后对质膜的打孔和细胞焦亡过程，减少TNF、IL-6、IL-1β等炎症介质的释放，减轻炎症对疾病的影响。

双硫仑应用于临床治疗AAD的具体实施方式是作为药物活性成分制备防治主动脉瘤和/或主动脉夹层药物。应理解，本文中所用的术语“或”有时意指“和/或”，术语“或者”有时意指“并且/或者”。如在本文中的短语诸如“A和/或B”中使用的术语“和/或”旨在包括A和B两者；A或B；A(单独)；和B(单独)。同样地，如短语诸如“A、B和/或C”中使用的术语“和/或”旨在涵盖以下实施方案中的每一个：A、B和C；A、B或C；A或C；A或B；B或C；A和C；A和B；B和C；A(单独)；B(单独)；和C(单独)。因此，防治主动脉瘤和/或主动脉夹层药物包括主动脉瘤防治药物、主动脉夹层防治药物、或者主动脉瘤和主动脉夹层(含两种病症)防治药物。

该药物可以是包含治疗有效量的双硫仑的单一组分药物、或者还包含其他组分例如药学上可接受的载体的药物组合物。

在本文中，为了描述在药物或者药物组合物中的作用，可以将活性成分双硫仑称为“活性化合物”。

本文采用的短语“药学上可接受的”指在合理的医学判断范围内，适合与人类和动物的组织接触使用而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理的效益/风险比率相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。药学上可接受的载体是本领域周知的，这些载体包括液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封材料。每种载体在与制剂的其他成分相容并且对患者无害的意义上必须是“可接受的”，包括例如水性溶液(如水或生理缓冲盐水)或其他溶剂或媒介物(如二醇类、甘油、油(如橄榄油)或可注射的有机酯)。可以选择赋形剂，例如，以实现药剂的延迟释放或以选择性地靶向一种或多种细胞、组织或器官。药物组合物可以呈剂量单位形式，如片剂、胶囊剂(包含分散型胶囊和明胶胶囊)、颗粒剂、粉剂、溶液、糖浆剂、栓剂、注射剂等。

如本文所用的术语“有效量”是指减轻疾病或病况的至少一种或多种症状所需的治疗量，并且涉及提供所需效果的药物组合物的足够量。因此，术语“治疗有效量”是指当施用于典型主体时，足以引起特定效果的治疗量。在各种背景下，如本文所用的有效量还包括足以延迟疾病况状的发展，改变疾病况状的过程(例如但不限于，减缓疾病况状的进展)，或逆转疾病况状的量。应当理解，本领域已知有许多方式来确定用于给定应用的有效量。例如，用于剂量确定的药理学方法可用于治疗背景中。在治疗性或预防性应用的背景下，施用于主体的组合物的量将取决于疾病的类型和严重性以及个体的特征，例如总体健康状况、年龄、性别、体重和对药物的耐受性。它还取决于疾病的程度、严重性和类型。本领域技术人员将能够根据这些和其他因素来确定合适的剂量。组合物还可以与一种或多种另外的治疗化合物组合施用。

该药物剂型除了包含主成分双硫仑外，还可以包含药学上可接受的载体。可以用作药学上可接受的载体的材料的一些实例包括：(1)糖(诸如乳糖、葡萄糖和蔗糖)；(2)淀粉(诸如玉米淀粉和马铃薯淀粉)；(3)纤维素及其衍生物(诸如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和乙酸纤维素)；(4)粉状黄蓍胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石；(8)赋形剂(诸如可可脂和栓剂蜡)；(9)油类(诸如花生油、棉籽油、红花子油、芝麻油、橄榄油、玉米油和大豆油)；(10)二醇类(如丙二醇)；(11)多元醇(如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇)；(12)酯类(诸如油酸乙酯和月桂酸乙酯)；(13)琼脂；(14)缓冲剂(诸如氢氧化镁和氢氧化铝)；(15)海藻酸；(16)无热原水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；以及(21)药剂中采用的其他无毒相容物质。

可以通过很多施用途径中的任何一种将药物制剂施用至主体，所述施用途径包括例如，口服(例如，作为在水性溶液或非水性溶液或悬浮液中的灌服剂、片剂、胶囊剂(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、大丸剂、粉剂、颗粒剂、用于应用至舌的糊剂)；通过口腔粘膜吸收(例如，舌下地)；皮下；经皮(例如作为应用至皮肤的贴剂)；以及局部(例如，作为应用至皮肤的乳霜、软膏或喷雾剂)。双硫仑化合物也可以经配制用于吸入。在某些实施方案中，双硫仑化合物可以简单地被溶解或被悬浮在无菌水中。

上述术语“主体”表示人或动物。通常，动物是脊椎动物，例如灵长类动物、啮齿动物、家畜或狩猎动物。灵长类动物包括黑猩猩、食蟹猴、蜘蛛猴和猕猴，例如恒河猴。啮齿动物包括小鼠、大鼠、土拨鼠、雪貂、兔和仓鼠。家畜和狩猎动物包括牛、马、猪、鹿、野牛、水牛、猫科动物物种(例如家猫)、犬科动物物种(例如狗、狐狸、狼)。在一些实施方案中，主体是哺乳动物，例如灵长类动物比如人。术语“个体”、“患者”和“主体”在本文中可互换使用。优选地，主体是哺乳动物。哺乳动物可以是人、非人灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、马或牛，但不限于这些实例。有利地，可以使用非人哺乳动物作为代表具有/产生了阿卡波糖耐药性的II型糖尿病的动物模型的主体。主体可以是雄性或雌性。显然，当“主体”表示动物时，防治主动脉瘤和/或主动脉夹层药物就是指兽药或者动物用药。

所述药物制剂可以方便地以单位剂型呈现，并且可以通过药学领域中众所周知的任何方法制备。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将根据所治疗的宿主、特定的施用模式而变化。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性成分的量将通常是产生治疗效果的化合物的量。通常，以重量计，此量的范围为约1％至约99％的活性成分，例如约5％至约70％。

制备这些制剂或组合物的方法包括使活性化合物(诸如双硫仑)与载体以及任选一种或多种辅助成分结合的步骤。通常，通过将双硫仑与液体载体或精细粉碎的固体载体或两者均匀地且密切地结合，并且然后使产品成型(如果必要的话)，而制备制剂。

适合于口服施用的本发明的制剂可以是下列形式：胶囊剂(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、扁囊剂、丸剂、片剂、糖锭(使用调味基底，通常是蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)、亲液物、粉剂、颗粒剂、或作为水性或非水性液体中的溶液或混悬液、或作为水包油或油包水液体乳剂、或作为酏剂或糖浆剂、或作为软锭剂(使用惰性基质(如明胶和甘油、或蔗糖和阿拉伯胶))和/或作为漱口剂等，每种含有预定量的双硫仑作为活性成分。组合物或化合物也可以作为大丸剂、药糖剂或糊剂施用。

为了制备用于口服施用的固体剂型(胶囊剂(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、片剂、丸剂、糖衣丸、粉剂、颗粒剂等)，将活性成分与一种或多种药学上可接受的载体(如柠檬酸钠或磷酸二钙)和/或下列中的任何混合：(1)填充剂或增量剂(诸如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露糖醇和/或硅酸)；(2)粘合剂(诸如例如，羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯胶)；(3)湿润剂(诸如甘油)；(4)崩解剂(诸如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸盐以及碳酸钠)；(5)溶液阻滞剂(诸如石蜡)；(6)吸收加速剂(诸如季铵化合物)；(7)润湿剂(诸如例如，鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯)；(8)吸收剂(诸如高岭土和膨润土)；(9)润滑剂(诸如滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、硫酸月桂酸钠及其混合物)；(10)络合剂(诸如改性的或未改性的环糊精)；以及(11)着色剂。在胶囊剂(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、片剂和丸剂情况下，药物组合物也可以包含缓冲剂。相似类型的固体组合物也可以用作软填充的和硬填充的明胶胶囊中的填充剂，其使用此类赋形剂，如乳糖以及高分子量聚乙二醇等。

可以通过压缩或模塑制造片剂，任选地使用一种或多种辅助成分。可以使用粘合剂(例如，明胶或羟丙基甲基纤维素)、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、崩解剂(例如，乙醇酸淀粉钠，或交联羧甲基纤维素钠)、表面活性剂或分散剂，制备压制片剂。可以通过在适合的机器中模塑用惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物制造模制片剂。

药物组合物的片剂以及其他固体剂型(如糖衣丸、胶囊剂(包括分散型胶囊和明胶胶囊)、丸剂和颗粒剂)可以任选地被刻痕，或制备有包衣和壳(如肠溶包衣以及其他药物配制领域中众所周知的包衣)。它们也可以经配制以提供其中活性成分的缓慢释放或控制释放，其使用例如不同比例的羟丙基甲基纤维素以提供期望的释放曲线，其他聚合物基质、脂质体和/或微球体。可以通过例如通过截留细菌的过滤器过滤，或通过并入无菌固体组合物形式的灭菌剂对它们灭菌，所述无菌固体组合物可以在临使用前溶解在无菌水或一些其他无菌可注射介质中。这些组合物也可以任选地含有乳浊剂，并且可以是仅在或优先地在胃肠道的某个部分(任选地，以延迟方式)释放一种或多种活性成分的组合物。可以被使用的包埋组合物的实例包含聚合物质和蜡。活性成分也可以是微囊化的形式，其在适当时具有上述赋形剂中的一种或多种。

可用于口服施用的液体剂型包括药学上可接受的乳剂、用于重构的亲液物、微乳剂、溶液、混悬液、糖浆剂和酏剂。除活性成分之外，液体剂型可以含有本领域中通常使用的惰性稀释剂(诸如例如，水或其他溶剂、环糊精及其衍生物)、增溶剂和乳化剂(诸如乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、油类(特别地，棉籽油、落花生油、玉米油、胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氢呋喃醇、聚乙二醇和失水山梨糖醇的脂肪酸酯，及其混合物)。

除惰性稀释剂之外，口服组合物也可以包含助剂(如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、风味剂、着色剂、芳香剂和防腐剂)。

除活性化合物之外，混悬液可以含有悬浮剂(诸如例如，乙氧基化异硬脂醇、聚氧乙烯山梨糖醇和失水山梨糖醇酯、微晶纤维素、偏氢氧化铝、膨润土、琼脂和黄蓍胶，及其混合物)。

用于局部施用或经皮施用的剂型包括粉剂、喷雾剂、软膏、糊剂、乳霜、洗液、凝胶剂、溶液、贴剂和吸入剂。活性化合物可以在无菌条件下与药学上可接受的载体、以及与可能需要的任何防腐剂、缓冲剂或推进剂混合。

除活性化合物之外，软膏、糊剂、乳霜和凝胶剂可以含有赋形剂(如动物脂肪和植物脂肪、油类、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅酮、膨润土、硅酸、滑石和氧化锌，或其混合物)。

除活性化合物之外，粉剂和喷雾剂可以含有赋形剂(如乳糖、滑石、硅酸、氢氧化铝、硅酸钙和聚酰胺粉末，或这些物质的混合物)。喷雾剂可以额外含有通常的推进剂(如氯氟代烃和挥发性的未被取代的烃类(如丁烷和丙烷))。

经皮贴剂具有提供将活性化合物至身体的受控递送的额外优势。这样的剂型可以通过将活性化合物溶解或分散在适当的介质中而制造。吸收增强剂也可以被用于增加化合物穿过皮肤的通量。这样的通量的速率可以通过提供速率控制膜或将化合物分散在聚合物基质或凝胶中被控制。

可以被用在本发明的药物组合物中的适合的水性载体和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其适合的混合物、植物油(如橄榄油)和可注射的有机酯(如油酸乙酯)。可以被用在本发明的药物组合物中的适合的水性载体和非水性载体的实例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其适合的混合物、植物油(如橄榄油)和可注射的有机酯(如油酸乙酯)。例如，可以通过使用包衣材料(如卵磷脂)、在分散体的情况下通过保持所需的颗粒尺寸，以及通过使用表面活性剂，保持适当的流动性。例如，可以通过使用包衣材料(如卵磷脂)、在分散体的情况下通过保持所需的颗粒尺寸，以及通过使用表面活性剂，保持适当的流动性。

这些组合物还可以含有助剂(如防腐剂、润湿剂、乳化剂和分散剂)。可以通过包括各种抗细菌剂和抗真菌剂(例如，对羟苯甲酸甲酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等)，确保预防微生物的作用。将等渗剂(如糖、氯化钠等)包括在组合物内也可以是期望的。此外，可以通过包括延迟吸收的试剂(如单硬脂酸铝和明胶)引起可注射药物形式的延长吸收。

在一些情况下，为了延长药物的效果，期望的是减缓来自皮下注射或肌内注射的药物的吸收。这可以通过使用具有不良水溶性的结晶材料或无定形材料的液体悬浮液实现。药物的吸收速率则取决于其溶解速率，所述溶解速率进而可以取决于晶体尺寸和结晶形式。或者，肠胃外施用的药物形式的延迟的吸收通过将药物溶解或悬浮在油媒介物中实现。

通过在可生物降解的聚合物(如聚交酯-聚乙交酯)中形成主题化合物的微囊化的基质而制造可注射储库形式。根据药物与聚合物的比例以及采用的特定聚合物的性质，可以控制药物释放速率。其他可生物降解的聚合物的实例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。也通过将药物截留在与身体组织相容的脂质体或微乳中制备储库可注射制剂。

为了用于本发明的方法中，可以给予活性化合物本身与或将其作为药物组合物给予，所述药物组合物含有例如0.1％至99.5％(更优选地，0.5％至90％)的活性成分与药学上可接受的载体的组合。

药物组合物中的活性成分的实际剂量水平可以变化，以获得活性成分的量，所述活性成分的量对实现对于特定患者、组合物和施用模式的期望的治疗响应是有效的，而对患者无毒。

选择的剂量水平将取决于各种因素，包括采用的特定化合物或化合物的组合、或其酯、盐或酰胺的活性，施用途径，施用时间，所采用的一种或多种特定化合物的排泄率，治疗持续时间，与所采用的一种或多种特定化合物组合使用的其他药物、化合物和/或材料，所治疗的患者的年龄、性别、体重、病况、总体健康状况和在先病史，以及医学领域中众所周知的类似因素。

本领域中具有普通技术的医师或兽医可以容易地确定和开具所需要的药物组合物的治疗有效的量。例如，医师或兽医可以起始于处于低于为实现期望的治疗效果所需要的水平的药物组合物或化合物的剂量，并且逐渐增加剂量直至实现期望的效果。“治疗有效的量”表示足以引起期望的治疗效果的化合物的浓度。通常理解，化合物的有效的量将根据主体的重量、性别、年龄和病史变化。影响有效的量的其他因素可以包括但不限于，患者病况的严重程度、所治疗的病症、化合物的稳定性、以及(如果需要)与双硫仑一起施用的另一类型的治疗剂。可以通过药剂的多次施用递送较大的总剂量。确定功效和剂量的方法是本领域技术人员已知的。

通常，本发明的组合物和方法中使用的活性化合物的适合的日剂量将是对产生治疗效果有效的最低剂量的化合物的量。这样的有效剂量将通常取决于如上所述的因素。

如果需要，活性化合物的有效日剂量可以作为分开施用的一、二、三、四、五、六或更多的亚剂量，任选地以单位剂量形式，在全天以适当的时间间隔施用。在本发明的某些实施方案中，活性化合物可以每天施用两次或三次。在其他实施方案中，活性化合物将每天施用一次。

接受此治疗的患者是任何有需要的动物，包括灵长类动物(特别是人)；和其他哺乳动物(如马、牛、猪、羊、猫和狗)；家禽；以及通常的宠物。

在本发明的某些实施方案中，双硫仑可以单独使用、或者与另一类型的主动脉瘤和/或主动脉夹层治疗剂联合施用。

双硫仑在AAD中的预防和保护作用尚未见报道，我们通过动物实验，证实了双硫仑可以单独用于主动脉瘤和主动脉夹层的治疗。应用β-氨基丙腈(β-Aminopropionitrile，BAPN)构建了AAD疾病模型，并分为双硫仑治疗组和生理盐水对照组，评估两组小鼠生存率、AAD发生率、血管破裂率、血管最大径、主动脉壁内组织结构、炎症浸润情况以及弹性纤维损伤情况等指标，结果显示：双硫仑治疗组较生理盐水对照组能够显著地降低AAD的发生率、致死率和主动脉扩张程度，维持主动脉壁内结构组织相对稳定，减少炎症浸润和弹性纤维蛋白损伤。

上述发现本身就是对AAD这类目前发病机制不明确、只能从外科治疗出发的疾病治疗策略的有力补充，双硫仑有希望能够在预防AAD发生、延缓AAD进展、提高患者的生存率和生存质量方面发挥重要作用。

以下结合具体实施例对本发明做进一步详细说明。应理解，以下实施例仅用于说明本发明而非用于限定本发明的范围。

本发明的实施例中，如果对于实验操作温度没有做出具体说明，则该温度通常指室温(10-30℃)。

本文中涉及到多种物质的添加量、含量及浓度，其中所述的百分含量，除特别说明外，皆指质量百分含量。

统计分析：本研究中数值变量均以均数±标准误表示，两组间比较采用双尾Student t检验，三组间比较采用ANOVA检验。当P<0.05时，认为具有统计学差异。

实施例1：构建小鼠AAD模型

实验动物及动物模型制备：

SPF级雄性C57BL/6小鼠，购自上海杰思捷实验动物有限公司，周龄为3-4周，体重8-12g。

在饮用水中加入BAPN(1g/kg/d，购自Sigma-Aldrich，St Louis)，建模周期为4周，即构建得到AAD模型。

实施例2：双硫仑治疗实验

分组：

将小鼠AAD模型分为两组，对照组隔日腹腔注射生理盐水(Vehicle)，药物(Disulfiram)治疗组隔日腹腔注射双硫仑药物(50mg/kg，MCE HY-B0240)，药物治疗持续整个建模周期。建模周期结束后即处死取材。实验方案得到复旦大学动物管理与伦理委员会批准。

主动脉组织总体评价：

建模结束后，取材，拍摄主动脉组织(见图1)，统计死亡率(见图2)，AAD发生率及严重程度(见图3)，以及主动脉最大径(见图4)。结果显示：对照组主动脉组织病变程度严重(见图1)；双硫仑治疗组较生理盐水对照组能够显著地降低AAD的发生率、致死率和主动脉扩张程度。

主动脉组织病理评价：

建模周期结束后，取血管，进行HE、EVG染色(见图5)。结果显示：对照组结构染色可见弹性纤维断裂和紊乱程度较双硫仑治疗组更重，表明双硫仑治疗组较生理盐水对照组能够维持主动脉壁内结构相对稳定和减轻弹性纤维损伤。

主动脉炎症细胞浸润情况：

建模周期结束后，取血管，进行免疫荧光检测(图6)。结果显示：双硫仑治疗组的血管炎症细胞共定位免疫荧光强度低，较生理盐水对照组能够明显减少中性粒细胞对主动脉的浸润及中性粒细胞胞外诱捕网的发生。

主动脉组织炎症因子产生情况：

建模周期结束后，分别提取两组AAD模型的主动脉组织细胞蛋白。步骤简述如下：颈椎脱臼处死小鼠，75％乙醇擦拭皮肤，剪开胸腔及腹腔，剪切主动脉组织，冻存于液氮中。待提取蛋白质时，从液氮中取出，称取0.1g左右主动脉组织，在平皿中剪碎组织，并转移到匀浆器。预冷裂解液中添加PMSF(10μg/ml)。取1.0ml预冷裂解缓冲液，迅速加入匀浆器，冰浴条件下充分研磨。组织研磨液转移至1.5ml离心管。4℃，15000rpm，离心10min。取上清组织蛋白粗提取液至新的1.5ml离心管，收集总蛋白。进行蛋白定量，-80℃保存。

对提取的两组主动脉组织细胞蛋白进行Western blot检测(见图7)。结果显示：生理盐水对照组的炎症因子IL-1β、IL-18含量明显高于双硫仑治疗组，表明双硫仑治疗组较生理盐水对照组能够明显抑制炎症因子IL-1β、IL-18的产生。

本发明通过上面的实施例进行举例说明，证实双硫仑可以明显降低AAD的发生率、致死率和主动脉扩张程度，维持主动脉壁内结构相对稳定，减少炎症浸润和弹性纤维损伤，为双硫仑应用于临床防治AAD提供理论依据，同时也为AAD防治提供了新方案。

Claims (10)

1.双硫仑在制备防治主动脉瘤和/或主动脉夹层药物中的应用。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物用于防治主动脉瘤和主动脉夹层。

3.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述药物中包含治疗有效量的双硫仑作为唯一活性成分；或者

所述药物是药物组合物，除了包含治疗有效量的双硫仑作为活性成分外，还包含一种以上主动脉瘤治疗剂或者主动脉夹层治疗剂。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述主动脉瘤治疗剂选自下组：β-受体拮抗剂；四环类抗生素；血管紧张素II受体阻滞剂；他汀类药物。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述主动脉夹层治疗剂选自下组：阿片类药物；β受体阻滞剂。

6.如权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述药物还包含一种以上药学上可接受的载体。

7.如权利要求2或3所述的应用，其特征在于，所述药物的剂型是口服制剂或者注射剂。

8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述口服制剂选自下组：片剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂、溶液、糖浆剂。

9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述口服制剂中，药学上可接受的载体包括下组中的一种以上：填充剂或增量剂，粘合剂，湿润剂，崩解剂，吸收剂，润滑剂，缓冲剂，络合剂，着色剂。

10.如权利要求7所述的应用，其特征在于，当药物的剂型是注射剂时，适用于静脉注射或者静脉滴注。

Images