CN115835911A - 用于治疗自身免疫性疾病的咪唑并[1,2-a]吡啶化合物 - Google Patents

用于治疗自身免疫性疾病的咪唑并[1,2-a]吡啶化合物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及式(I)化合物，其中R1、R2、R3、R4、R5和A如本文所述，以及所述化合物的药学上可接受的盐，并且涉及包括所述化合物的组合物和使用所述化合物的方法。

Description

用于治疗自身免疫性疾病的咪唑并[1,2-a]吡啶化合物
本发明涉及可用于哺乳动物的治疗和/或预防的有机化合物，尤其涉及可用于治疗系统性红斑狼疮或狼疮肾炎的TLR7和/或TLR8和/或TLR9的拮抗剂。
技术领域
自身免疫性结缔组织病(CTD)包括典型的自身免疫综合征，诸如系统性红斑狼疮(SLE)、原发性干燥综合征(pSjS)、混合性结缔组织病(MCTD)、皮肌炎/多发性肌炎(DM/PM)、类风湿关节炎(RA)和系统性硬化症(SSc)。除RA以外，对患者来说，没有真正有效且安全的疗法。SLE代表典型的CTD，其患病率为20-150/100,000，并在不同器官引起广泛的炎症和组织损伤，从皮肤和关节的常见症状到肾、肺或心力衰竭。传统上，SLE已使用非特异性抗炎药或免疫抑制剂进行治疗。但是，长期使用免疫抑制药物，例如，皮质类固醇仅部分有效，并伴有非预期毒性和副作用。贝利尤单抗是过去50年中唯一获得FDA批准的用于狼疮的药物，尽管仅对部分SLE患者具有适度延迟的疗效(Navarra,S.V.等人，Lancet2011,377,721.)。其他生物制剂，诸如抗CD20 mAb、抗特定细胞因子的mAb或其可溶受体，在大多数临床研究中均失败了。因此，需要新型疗法，其在更大比例的患者群组中提供持续改善，并且对于在许多自身免疫以及自身炎症性疾病中的长期使用而言更安全。
Toll样受体(TLR)是模式识别受体(PRR)的重要家族，可以引发多种免疫细胞产生广泛的免疫应答。核内体TLR7、TLR8和TLR9作为天然的宿主防御传感器，可识别衍生自病毒、细菌的核酸；具体地，TLR7/TLR8和TLR9分别识别单链RNA(ssRNA)和单链CpG-DNA。然而，TRL7、TRL8、TRL9的异常核酸传感被认为是广泛的自身免疫性疾病和自身炎症性疾病的关键节点(Krieg,A.M.等人，Immunol.Rev.2007,220,251.Jiménez-Dalmaroni,M.J.等人，Autoimmun Rev.2016,15,1.Chen,J.Q.等人，Clinical Reviews in Allergy&Immunology2016,50,1.)。抗RNA和抗DNA抗体是SLE的公认诊断标志，并且这些抗体可以将自身RNA和自身DNA两者传递至内体。自身RNA复合物可以被TLR7和TLR8识别，而自身DNA复合物可以触发TLR9活化。实际上，在SLE(系统性红斑狼疮)患者中，自身RNA和自身DNA从血液和/或组织中的缺陷清除很明显。据报道，TLR7和TLR9在SLE组织中被上调，并分别与狼疮性肾炎的慢性和活性有关。在SLE患者的B细胞中，TLR7表达与抗RNP抗体的产生相关，而TLR9表达与IL-6和抗dsDNA抗体水平相关。一致地，在狼疮小鼠模型中，抗RNA抗体需要TLR7，抗核小体抗体需要TLR9。另一方面，小鼠中TLR7或人TLR8的过度表达会促进自身免疫和自身炎症。此外，TLR8的活化特别有助于mDC/巨噬细胞的炎症性细胞因子分泌，嗜中性粒细胞胞外捕网过程(NETosis)，Th17细胞的诱导和Treg细胞的抑制。除了描述的TLR9在促进B细胞自身抗体产生中的作用外，pDC中通过自身DNA活化TLR9还会导致诱导I型IFN和其他炎症性细胞因子。考虑到pDC和B细胞两者中TLR9的这些作用，它们都是自身免疫性疾病发病机理的关键因素，而且在许多自身免疫性疾病患者中大量存在可轻易活化TLR9的自身DNA复合物，在抑制TLR7和TLR8途径基础之上，它对于进一步阻断自身DNA介导的TLR9途径可能具有额外益处。总之，TLR7、TLR8和TLR9途径代表了治疗自身免疫性疾病和自身炎症性疾病的新治疗靶点，针对这些疾病，不存在有效的不含类固醇和无细胞毒性的口服药物，并且从非常上游就抑制了所有这些途径可能会带来令人满意的治疗效果。因此，我们发明了靶向和抑制TLR7、TLR8和TLR9的口服化合物，用于治疗自身免疫性疾病和自身炎症性疾病。
发明内容
本发明涉及具有式(I)的新型化合物，
Figure BDA0004045388100000031
其中
R1为H或C1-6烷基；
R2为C1-6烷基或C1-6烷氧基；
R3为H或C1-6烷基；
R4为H、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基或(C1-6烷基)2氨基；
R5为(5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶基)哌嗪基；(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)哌啶基；(C1-6烷基哌嗪基)哌啶基；(羟基C1-6烷基)哌嗪基；(吗啉基羰基)哌嗪基；1,3,4,6,7,8,9,9a-八氢吡嗪并[1,2-a]吡嗪基；3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；4-氧杂-1,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基；氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基；氨基(C1-6烷基)氮杂环丁烷基；氨基(C1-6烷基)哌啶基；氨基哌啶基或哌嗪基哌啶基；
A为CH、N或CR6，其中R6为C1-6烷基；
或其药学上可接受的盐。
本发明的另一目的涉及式(I)的新型化合物。它们的制备、基于根据本发明化合物的药物及其生产，以及式(I)化合物作为TLR7和TLR8和TLR9拮抗剂以及用于治疗或预防系统性红斑狼疮或狼疮肾炎的用途。式(I)化合物表现出优异的TLR7和TLR8和TLR9拮抗活性。此外，式(I)化合物还表现出良好的细胞毒性、光毒性、溶解性、hPBMC、人微粒体稳定性、AO(人胞浆醛氧化酶)和SDPK特征以及低CYP抑制作用。
具体实施方式
定义
术语“C1-6烷基”表示含有1至6个，特别是1至4个碳原子的饱和、直链或支链烷基，例如，甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基等。特别地，“C1-6烷基”基团为甲基、乙基和正丙基。
术语“卤素”和“卤基”在本文中可互换使用，表示氟、氯、溴或碘。
术语“卤代C1-6烷基”表示C1-6烷基基团，其中C1-6烷基基团的至少一个氢原子已被相同或不同的卤素原子，特别是氟原子取代。卤代C1-6烷基的实例包括单氟-、二氟-或三氟-甲基、-乙基或-丙基、例如3,3,3-三氟丙基、2-氟乙基、三氟乙基、氟甲基、二氟甲基、二氟乙基或三氟甲基。
术语“药学上可接受的盐”表示在生物学上或其他方面不是不期望的盐。“药学上可接受的盐”包括酸加成盐和碱加成盐两者。
“药用酸加成盐”是指与无机酸和有机酸形成的那些药学上可接受的盐，所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、碳酸、磷酸等，所述有机酸可以选自脂肪族、脂环族、芳族、芳脂族、杂环、羧酸和磺酸类有机酸，诸如甲酸、乙酸、丙酸、乙醇酸、葡萄糖酸、乳酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、马来酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、天冬氨酸、抗坏血酸、谷氨酸、邻氨基苯甲酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、双羟萘酸、苯乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、和水杨酸等。
术语“药用碱加成盐”表示与有机或无机碱形成的那些药学上可接受的盐。可接受的无机碱的示例包括钠、钾、铵、钙、镁、铁、锌、铜、锰和铝盐。衍生自药用有机无毒碱的盐包括伯胺、仲胺和叔胺，取代胺(包括天然存在的取代胺)、环胺和碱性离子交换树脂(诸如异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、2-二乙氨基乙醇、氨丁三醇、二环己胺，赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、哈胺(hydrabamine)、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡糖胺、甲基葡糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、N-乙基哌啶和多胺树脂)的盐。
术语“药物活性代谢物”表示通过特定化合物或其盐在体内的代谢产生的药理活性产物。进入人体后，大多数药物均是化学反应的底物，可能改变其物理性质和生物学效应。这些通常影响本发明化合物极性的代谢转化改变了药物在体内分布和从体内排泄的方式。然而，在某些情况下，药物代谢是治疗效果所必需的。
术语“治疗有效量”是表示本发明的化合物或分子的量，当将其施用于受试者时，(i)治疗或预防特定疾病、病症或疾患，(ii)减弱、改善或消除特定疾病、病症或疾患的一种或多种症状，或(iii)预防或延迟本文所述的特定疾病、病症或疾患的一种或多种症状的发作。治疗有效量取决于化合物，所治疗的疾病状态，所治疗疾病的严重程度，受试者的年龄和相对健康状况，施用途径和形式，主治医学或兽医的判断和其他因素。
术语“药物组合物”表示包含治疗有效量的活性药物成分和一起施用于有此需要的哺乳动物(例如人)的药用赋形剂的混合物或溶液。
TLR7和TLR8和TLR9的拮抗剂
本发明涉及(i)，其为式(I)化合物，
Figure BDA0004045388100000051
其中
R1为H或C1-6烷基；
R2为C1-6烷基或C1-6烷氧基；
R3为H或C1-6烷基；
R4为H、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基或(C1-6烷基)2氨基；
R5为(5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶基)哌嗪基；(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)哌啶基；(C1-6烷基哌嗪基)哌啶基；(羟基C1-6烷基)哌嗪基；(吗啉基羰基)哌嗪基；1,3,4,6,7,8,9,9a-八氢吡嗪并[1,2-a]吡嗪基；3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；4-氧杂-1,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基；氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基；氨基(C1-6烷基)氮杂环丁烷基；氨基(C1-6烷基)哌啶基；氨基哌啶基或哌嗪基哌啶基；
A为CH、N或CR6，其中R6为C1-6烷基；
或其药学上可接受的盐。
本发明的又一个实施例为(ii)根据(i)所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中A为CH或N。
本发明的又一个实施例为(iii)根据(i)或(ii)所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中R1为H。
本发明的又一个实施例为(iv)根据(i)至(iii)中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中R3为H。
本发明的又一个实施例为(v)根据(i)至(iv)中任一项所述的式(I)化合物，其中R4为C1-6烷基、卤代C1-6烷基或C1-6烷氧基。
本发明的又一个实施例为(vi)根据(i)至(v)中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中R5为(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)哌啶基；3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基；哌嗪基哌啶基或5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基。
本发明的又一个实施例为(vii)根据(i)至(vi)中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中(3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基)-1-哌啶基；3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基；4-甲氧基-3-氨基-吡咯烷-1-基；4-哌嗪-1-基-1-哌啶基或5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基。
本发明的又一实施例为(viii)根据(i)至(vii)中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1为H；
R2为C1-6烷基或C1-6烷氧基；
R3为H；
R4为C1-6烷基、卤代C1-6烷基或C1-6烷氧基；
R5为(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)哌啶基；3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基；哌嗪基哌啶基或5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基；
A为CH或N；
或其药学上可接受的盐。
本发明的又一个实施例为(ix)根据(i)至(viii)中任一项所述的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中
R1为H；
R2为甲基或甲氧基；
R3为H；
R4为乙基、二氟甲基或甲氧基；
R5为(3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基)-1-哌啶基；3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基；4-甲氧基-3-氨基-吡咯烷-1-基；4-哌嗪-1-基-1-哌啶基或5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基；
A为CH或N；
或其药学上可接受的盐。
本发明的另一实施例为式(I)化合物，其选自以下化合物：
1-[6-异丙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]哌啶-4-胺；
6-[2-异丙基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；
6-[2-异丙基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；
1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-异丙基-2-吡啶基]哌啶-4-胺；
[(2S)-1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-异丙基-2-吡啶基]哌嗪-2-基]甲醇；
9-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-异丙基-2-吡啶基]-4-氧杂-1,9-二氮杂螺[5.5]十一烷；
6-[2-异丙基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-7,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；
2-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-异丙基-2-吡啶基]-1,3,4,6,7,8,9,9a-八氢吡嗪并[1,2-a]吡嗪；
8-甲基-6-[5-甲基-6-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-1-哌啶基]-3-吡啶基]咪唑并[1,2-a]吡啶；
6-[2-(二氟甲基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；
6-[2-(二氟甲基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；
1-[1-[6-(二氟甲基)-5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-3-甲基-氮杂环丁烷-3-胺；
3-[6-(二氟甲基)-5-(8-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷；
2-[1-[6-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷；
(3R,4R)-1-[1-[6-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-4-甲氧基-吡咯烷-3-胺；
2-[1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷；
(3R,4R)-1-[1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]-4-哌啶基]-4-甲氧基-吡咯烷-3-胺；
[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-基]-吗啉-2-基-甲酮；
2-[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶；
1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]-4-甲基-哌啶-4-胺；
6-[2-乙基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；
3-[3-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷；
N,N-二甲基-3-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)吡啶-2-胺；
6-[4-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-1-哌啶基]-N,N-二甲基-3-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-胺；
6-[2-甲氧基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；
(3R,4R)-1-[1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]-4-哌啶基]-4-甲氧基-吡咯烷-3-胺；
6-[4-乙基-2-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)嘧啶-5-基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；和
2-[1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷；
或其药学上可接受的盐。
合成
本发明的化合物可以通过任何常规方法制备。在以下方案和示例中提供了合成这些化合物及其原料的合适方法。除非另有说明，否则所有取代基，特别是R1、R2、R3、R4、R5和A如上文所定义。此外，除非另有明确说明，否则所有反应、反应条件、缩写和符号均具有有机化学领域普通技术人员众所周知的含义。
制备式(I)化合物的一般合成路线如下所示。
方案1
Figure BDA0004045388100000091
其中X1和X2为卤素；A为N或CR6；PG为保护基团，例如Boc；L为未取代或经取代的选自以下的基团：哌嗪基、哌啶基、1,3,4,6,7,8,9,9a-八氢吡嗪并[1,2-a]吡嗪基、3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基、4-氧杂-1,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基、5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基、氮杂环丁烷基和吡咯烷基；G为5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶基、氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基、C1-6烷基哌嗪基和哌嗪基。
在合适的碱(例如KOAc)和合适的钯催化剂(例如PdCl2(DPPF)-CH2Cl2加合物)的存在下，用双(频哪醇合)二硼来处理式(IV)化合物，以得到式(V)化合物。用合适的催化剂(例如PdCl2(DPPF)-CH2Cl2加合物)和合适的碱(例如K2CO3)在式(V)化合物与式(VI)化合物之间进行Suzuki偶联反应，以得到式(VII)化合物。在催化剂(例如RuPhos Pd G2)和合适的碱(诸如Cs2CO3或t-BuONa)的存在下，式(VII)化合物经历与化合物(VIII)的Buchwald-Hartwig胺化，以得到式(IX)化合物。将式(IX)化合物在酸性条件(例如TFA)下脱保护，以得到(I-1)化合物。在Buchwald-Hartwig胺化条件下，用催化剂(例如RuPhos Pd G2)和合适的碱(诸如Cs2CO3或t-BuONa)，将式(I-1)化合物与式(X)化合物偶联，以得到式(XI)化合物。将式(XI)化合物在酸性条件(例如TFA)下脱保护，以得到式(I-2)化合物。
方案2
Figure BDA0004045388100000101
其中A为N或CR6；PG为保护基团，例如Boc；n为0、1或2；M为氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基、C1-6烷基哌嗪基或哌嗪基。
在催化剂(例如RuPhos Pd G2)和合适的碱(诸如Cs2CO3或t-BuONa)的存在下，式(VII)化合物经历与化合物(XII)的Buchwald-Hartwig胺化，以得到式(XIII)化合物。使用还原剂(例如NaBH(OAc)3)用式XIV化合物来处理式XIII化合物，以得到式XV化合物。将式(XV)化合物在酸性条件(例如TFA)下脱保护，以得到I-3化合物。
方案3
Figure BDA0004045388100000111
其中X为卤素，A为N或CR6；n为0、1或2。
式VII和XIII化合物也可以经由方案3获得。
在合适的碱(例如KOAc)和合适的钯催化剂(例如PdCl2(DPPF)-CH2Cl2加合物)的存在下，用双(频哪醇合)二硼来处理式(VI)化合物，以得到式(XVII)化合物。在Suzuki偶联条件下，用合适的催化剂(例如PdCl2(DPPF)-CH2Cl2加合物)和合适的碱(例如K2CO3)将式(XVII)化合物与式(IV)化合物偶联，以得到式(VII)化合物。
本发明的化合物可以以非对映体或对映体的混合物形式获得，它们可以通过本领域熟知的方法分离，例如，(手性)HPLC或SFC。
本发明还涉及一种制备式(I)化合物的方法，该方法包括以下任何步骤：
a)将式(IX)化合物，
Figure BDA0004045388100000121
用酸脱保护，以得到式(I-1)化合物，
Figure BDA0004045388100000122
b)将式(XI)化合物，
Figure BDA0004045388100000123
用酸脱保护，以得到式(I-2)化合物，
Figure BDA0004045388100000124
c)将式(XV)化合物，
Figure BDA0004045388100000125
用酸脱保护，以得到式(I-3)化合物，
Figure BDA0004045388100000126
其中
L为未取代或经取代的选自以下的基团：哌嗪基、哌啶基、1,3,4,6,7,8,9,9a-八氢吡嗪并[1,2-a]吡嗪基、3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基、4-氧杂-1,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基、5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基、氮杂环丁烷基和吡咯烷基；
G为5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶基、氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基、C1-6烷基哌嗪基和哌嗪基；
M为氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基、C1-6烷基哌嗪基或哌嗪基；
n为0、1或2；
在步骤a)、b)和c)中，酸可以为例如TFA。
当根据上述方法制造时，式(I)化合物也是本发明的目的。
适应症和治疗方法
本发明提供了可以用作TLR7和/或TLR8和/或TLR9拮抗剂的化合物，其抑制通过TLR7和/或TLR8和/或TLR9通路的活化以及相应的下游生物学事件，包括但不限于通过产生所有类型的细胞因子和各种形式的自身抗体介导的先天性和适应性免疫应答。因此，本发明的化合物可用于在表达此类受体的所有类型的细胞中阻断TLR7和/或TLR8和/或TLR9，所述细胞包括但不限于浆细胞样树突细胞、B细胞、T细胞、巨噬细胞、单核细胞、中性粒细胞、角质形成细胞、上皮细胞。如此，该化合物可用作系统性红斑狼疮和狼疮肾炎的治疗剂或预防剂。
本发明提供了治疗或预防有需要的患者的系统性红斑狼疮和狼疮肾炎的方法。
另一实施例包括治疗或预防需要这种治疗的哺乳动物中系统性红斑狼疮和狼疮肾炎的方法，其中所述方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的式(I)的化合物、其立体异构体、互变异构体、前药或药学上可接受的盐。
实例
通过参考以下实例将更全面地理解本发明。但是，它们不应被解释为限制本发明的范围。
缩写
通过参考以下实例将更全面地理解本发明。但是，它们不应被解释为限制本发明的范围。
本文使用的缩写如下：
ACN： 乙腈
Boc2O： 二碳酸二叔丁酯
NaBH(OAc)3： 三乙酰氧基硼氢化钠
DCM： 二氯甲烷
DIPEA： N,N-二异丙基乙胺
DMF： N,N-二甲基甲酰胺
EtOAc or EA： 乙酸乙酯
FA： 甲酸
IC50： 半抑制浓度
LCMS 液相色谱－质谱
MS： 质谱
PE： 石油醚
prep-HPLC： 制备型高效液相色谱
PdCl2(dppf)-CH2Cl2： [1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)
RuPhos Pd G2： 氯(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯)[2-(2'- 氨基-1,1'-联苯)]钯(II)第二代
SFC： 超临界流体色谱
TEA： 三甲胺
TFA： 三氟乙酸
v/v： 体积比
PBS： 磷酸盐缓冲盐水
一般实验条件
使用以下仪器之一通过快速色谱法纯化中间体和最终化合物：i)Biotage SP1系统和Quad 12/25Cartridge模块。ii)ISCO combi-flash色谱仪。硅胶品牌和孔径：i)KP-SIL
Figure BDA0004045388100000141
粒径：40-60μm；ii)CAS登录号：硅胶：63231-67-4，粒径：47-60微米硅胶；iii)青岛海洋化学有限公司的ZCX，孔：200-300或300-400。
中间体和最终化合物在反相色谱柱上通过制备型HPLC纯化，反相色谱柱使用XBridgeTM Prep-C18(5μm,OBDTM 30×100mm)色谱柱，SunFireTM Prep-C18(5μm,OBDTM 30×100mm)色谱柱，Phenomenex Synergi-C18(10μm,25×150mm)或Phenomenex Gemini-C18(10μm,25×150mm)。Waters AutoP纯化系统(样品管理器2767，泵2525，检测器：Micromass ZQ和UV 2487，溶剂系统：乙腈和0.1％氢氧化铵在水中的溶液；乙腈和0.1％ FA在水中的溶液，或乙腈和0.1％ TFA在水中的溶液)。或Gilson-281纯化系统(泵322，检测器：UV 156，溶剂系统：乙腈和0.05％氢氧化铵在水中的溶液；乙腈和0.225％ FA在水中的溶液；乙腈和0.05％ HCl在水中的溶液；乙腈和0.075％ TFA在水中的溶液；或乙腈和水)。
为了进行SFC手性分离，中间体分离通过手性柱(Daicel chiralpak IC,5μm,30×250mm)、AS(10μm,30×250mm)或AD(10μm,30×250mm)，使用Mettler Toledo MultigramIII系统SFC、Waters 80Q制备型SFC或Thar 80制备型SFC，溶剂系统：CO2和IPA(0.5％ TEA的IPA溶液)或CO2和MeOH(0.1％ NH3·H2O的MeOH溶液)，背压100bar，在254或220nm处检测UV。
使用LC/MS(WatersTM Alliance 2795-Micromass ZQ、Shimadzu Alliance2020-Micromass ZQ或Agilent Alliance 6110-Micromass ZQ)获得化合物的LC/MS光谱，LC/MS条件如下(运行时间3或1.5分钟)：
酸性条件I：A：0.1％ TFA在H2O中的溶液；B：0.1％ TFA在乙腈中的溶液；
酸性条件II：A：0.0375％ TFA在H2O中的溶液；B：0.01875％ TFA在乙腈中的溶液；
碱性条件I：A：0.1％ NH3·H2O在H2O中的溶液；B：乙腈；
碱性条件II：A：0.025％ NH3·H2O在H2O中的溶液；B：乙腈；
中性条件：A：H2O；B：乙腈。
质谱(MS)：通常仅报告表示母体质量的离子，除非另有说明，否则所引用的质量离子为正质量离子(MH)+。
使用Bruker Avance 400MHz获得NMR谱。
微波辅助反应在Biotage Initiator Sixty微波合成仪中进行。所有涉及对空气敏感的试剂的反应均在氩气或氮气气氛下进行。除非另有说明，否则试剂按原样购自商业供应商，未经进一步纯化。
制备实例
以下实例旨在说明本发明的含义，但绝不代表对本发明含义的限制：
中间体A1
6-溴-7,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000161
向5-溴-3,4-二甲基吡啶-2-胺(207mg，1.03mmol，CAS号374537-97-0，供应商：Bide Pharmatech，目录BD70340)、2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(406mg，2.06mmol，CAS号2032-35-1，供应商：Bide Pharmatech，目录PBN20120554)在2-丙醇(2mL)中的溶液加入4-甲基苯磺酸吡啶(25.9mg，103μmol，CAS号24057-28-1，供应商：Bide Pharmatech，目录BD148963-100g)，然后将混合物在130℃下搅拌12小时。然后将混合物冷却至室温，并且过滤所得悬浮液。收集滤饼并且真空干燥，以得到6-溴-7,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(200mg，86.3％产率)，其为浅棕色固体。MS计算值225(M+H+)，测量值225(M+H+)。
中间体A2
6-溴-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000162
将5-溴-3-甲基-吡啶-2-胺(935mg，5.0mmol，CAS号，供应商：Bide Pharmatech，目录)、氯丙酮(0.44mL，5.5mmol，CAS号，供应商：Bide Pharmatech，目录)在DMF(5mL)中的溶液在90℃下搅拌2小时。然后将混合物冷却至室温并且将所得悬浮液在DCM(20mL)与饱和NaHCO3溶液(30mL)之间分配。分离出有机层，用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，然后真空浓缩，以得到6-溴-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶(300mg，26.7％产率)，其为浅棕色固体。MS计算值225(M+H+)，测量值225(M+H+)。
中间体A3
6-溴-8-甲氧基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000171
类似于Int-A1的制备，Int-A3使用5-溴-3-甲氧基-吡啶-2-胺(CAS号42409-58-5，供应商：Bide Pharmatech，目录BD196595)代替5-溴-3,4-二甲基吡啶-2-胺来进行制备。获得Int-A3(320mg)，其为浅黄色固体。MS：计算值227(M+H+)；测量值227(M+H+)。
中间体B1
3-溴-6-氯-2-异丙基吡啶
Figure BDA0004045388100000172
根据以下方案制备化合物Int-B1：
Figure BDA0004045388100000173
步骤1：制备5-溴-6-异丙基吡啶-2-胺
Figure BDA0004045388100000174
在0℃下向6-异丙基吡啶-2-胺(3.2g，23.5mmol，CAS号78177-12-5，供应商：Accela ChemBio Inc，目录SY006009-5g)在MeOH(40mL)中的溶液加入N-溴代琥珀酰亚胺(4.18g，23.5mmol，CAS号128-08-5，供应商：Accela ChemBio Inc，目录SY001733)。然后将混合物升温至室温并且在室温下搅拌16小时。在反应完成后，将混合物用水(60mL)猝灭并且用EA(50mL)萃取两次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并在真空中浓缩。然后将残余物通过快速色谱法来进行纯化，用EA/PE(0％至50％)梯度洗脱，以得到5-溴-6-异丙基吡啶-2-胺(3.8g，75.2％产率)，其为黄色油状物。MS：计算值215(M+H+)；测量值215(M+H+)。
步骤2：制备3-溴-6-氯-2-异丙基吡啶
Figure BDA0004045388100000181
将5-溴-6-异丙基吡啶-2-胺(3.6g，16.7mmol)、氯化亚铜(I)(828mg，8.37mmol，CAS号7758-89-6，供应商：Bide Pharmatech，目录BD122484)和氯化铜(II)(3.38g，25.1mmol，CAS号10125-13-0，供应商：Accela ChemBio Inc，目录SY009935)在1,2-二氯乙烷(40mL)中的悬浮液在0℃下搅拌10分钟。然后向所得悬浮液中加入亚硝酸叔丁酯(3.45g，3.98mL，33.5mmol，CAS号540-80-7，供应商：TCI Shanghai，目录N0357)。将混合物在0℃下于N2气氛下再搅拌1小时，然后将混合物在70℃下搅拌48小时。在反应完成后，将混合物冷却到室温，用水(30mL)猝灭，用DCM(30mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO4干燥、过滤，并且真空浓缩。将残余物通过快速色谱法来进行纯化，用EA/PE(0％至20％)梯度洗脱，以得到3-溴-6-氯-2-异丙基吡啶(2.475g，63.1％产率)，其为黄色油状物。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ7.90(d,J＝8.3Hz,1H),7.14(d,J＝8.3Hz,1H),3.53(td,J＝6.7,13.5Hz,1H),1.24(d,J＝6.7Hz,6H)。MS计算值234(M+H+)，测量值234(M+H+)。
中间体B2
6-氯-2-异丙基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶
Figure BDA0004045388100000191
向3-溴-6-氯-2-异丙基吡啶(2.475g，10.6mmol)、双(频哪醇合)二硼(3.22g，12.7mmol，CAS号73183-34-3，供应商：Accela ChemBio Inc，目录SY001323)、乙酸钾(2.59g，26.4mmol)在二噁烷(18mL)中的混合物加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(862mg，1.06mmol)，然后将混合物在90℃下于N2气氛下搅拌2小时。冷却后，将混合物过滤，并且将固体用EA(20mL)洗涤两次。将合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤，并且在真空下浓缩。将残余物通过快速色谱法来进行纯化，用EA/PE(0％至40％)梯度洗脱，以得到6-氯-2-异丙基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(2.8g，94.2％产率)，其为浅黄色固体。MS计算值282(M+H+)，测量值282(M+H+)。
中间体B3
3-溴-6-氯-2-乙基-吡啶
Figure BDA0004045388100000192
类似于化合物Int-B1的制备，化合物Int-B3通过使用6-乙基吡啶-2-胺代替步骤1中6-异丙基吡啶-2-胺来进行制备。MS计算值220(M+H+)，测量值220(M+H+)。
中间体B4
6-氯-2-乙基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶
Figure BDA0004045388100000193
类似于化合物Int-B2的制备，化合物Int-B4通过使用3-溴-6-氯-2-乙基-吡啶代替3-溴-6-氯-2-异丙基-吡啶来进行制备。MS计算值268(M+H+)，测量值268(M+H+)。
中间体B5
3-溴-6-氯-2-(二氟甲基)吡啶
Figure BDA0004045388100000201
将3-溴-6-氯吡啶甲醛(1.5g，6.8mmol)溶解在DCM(20mL)中，并且将溶液冷却至-78℃，然后加入(二乙基氨基)三氟化硫(4.39g，3.6mL，27.2mmol，CAS号38078-09-0，供应商：PharmaBlock Sciences(Nanjing),Inc.，目录PBLY8231)，将混合物在-78℃下搅拌30min，然后在室温下搅拌10小时。在反应完成后，用2M K2CO3溶液(30mL)猝灭该混合物，并且将所得混合物用DCM(50mL)萃取两次。将合并的有机层真空浓缩，然后将残余物通过快速色谱柱来进行纯化，用EA/PE(0％至50％)梯度洗脱，以得到3-溴-6-氯-2-(二氟甲基)吡啶(1.5g，90.9％产率)，其为浅黄色固体。MS计算值242(M+H+)，测量值242(M+H+)。
中间体B6
5-溴-2-氯-3-乙基-吡啶
Figure BDA0004045388100000202
类似于化合物Int-B1的制备，化合物Int-B6通过使用3-乙基吡啶-2-胺(CAS号78177-12-5，供应商：Accela ChemBio Inc，目录SY006009)代替步骤1中6-异丙基吡啶-2-胺来进行制备。获得5-溴-2-氯-3-乙基-吡啶(500mg)，其为黄色液体。MS计算值221(M+H+)，测量值221(M+H+)。
中间体B7
2-氯-3-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶
Figure BDA0004045388100000211
类似于化合物Int-B2的制备，化合物Int-B7通过使用5-溴-2-氯-3-乙基-吡啶代替3-溴-6-氯-2-异丙基-吡啶来进行制备。获得2-氯-3-乙基-5-(3,3,4,4-四甲基-1λ3,2,5-溴二氧戊环(bromadioxolan)-1-基)吡啶(190mg)，其为黄色油状物。MS计算值268(M+H+)，测量值268(M+H+)。
实例1
1-[6-异丙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]哌啶-4-胺
Figure BDA0004045388100000212
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0004045388100000221
步骤1：制备6-(6-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000222
向6-氯-2-异丙基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(800mg，2.84mmol)、6-溴-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(600mg，2.84mmol，CAS号217435-65-9，供应商：Accela ChemBio Inc，目录SY039846)和PddCl2(DPPF)(232mg，284μmol)在二噁烷(20mL)和Na2CO3(2M，6mL)的混合溶剂中的混合物通入N2，并且将混合物在90℃下搅拌1小时。在反应完成后，然后将混合物真空浓缩，并且将残余物通过快速色谱法来进行纯化，用EA/PE(0％至100％)梯度洗脱，以得到6-(6-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(600mg，66.5％产率)，其为浅棕色油状物。MS：计算值286(M+H+)；测量值286(M+H+)。
步骤2：制备(1-(6-异丙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0004045388100000231
向6-(6-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(50mg，175μmol)、哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯(42mg，210μmol)和Cs2CO3(171mg，525μmol)在二噁烷(2mL)中的溶液加入RuPhos Pd G2(13.6mg，17.5μmol)，并且将反应混合物在105℃下于N2下搅拌16小时。在反应完成后，然后将混合物真空浓缩，并且将残余物通过快速色谱法来进行纯化，用MeOH/DCM(0％至15％)梯度洗脱，以得到(1-(6-异丙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(47mg，59.7％产率)，其为浅黄色固体。MS：计算值450(M+H+)；测量值450(M+H+)。
步骤3：制备1-[6-异丙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]哌啶-4-胺
Figure BDA0004045388100000232
向在0℃下冷却的(1-(6-异丙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-基)哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(47mg)在DCM(2mL)中的溶液加入TFA(1mL)。将反应混合物在室温搅拌2小时。在反应完成后，然后将混合物真空浓缩，并且通过制备型HPLC来纯化残余物，以得到1-[6-异丙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]哌啶-4-胺(34mg，98％产率)，其为浅黄色固体。MS：计算值350(M+H+)；测量值350(M+H+)。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.57(s,1H),8.23(d,J＝2.1Hz,1H),8.08(d,J＝2.1Hz,1H),7.69(s,1H),7.46(d,J＝8.7Hz,1H),6.80(d,J＝8.7Hz,1H),4.60(br d,J＝13.7Hz,2H),3.46-3.36(m,1H),3.09-2.96(m,3H),2.70(s,3H),2.14-2.04(m,2H),1.64(dq,J＝4.2,12.2Hz,2H),1.21(d,J＝6.7Hz,6H)。
实例2
6-[2-异丙基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000241
类似于实例1的制备，标题化合物通过使用4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(CAS号205059-24-1，供应商：Bide Pharmatech，目录BD57121)代替步骤2中哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯来进行制备。
获得实例2(40mg)，其为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.58(s,1H),8.24(d,J＝2.1Hz,1H),8.08(d,J＝2.1Hz,1H),7.69(s,1H),7.49(d,J＝8.7Hz,1H),6.83(d,J＝8.8Hz,1H),4.70(br d,J＝13.7Hz,2H),3.74-3.58(m,9H),3.09-2.96(m,3H),2.70(s,3H),2.25(br d,J＝11.0Hz,2H),1.80(dq,J＝4.0,12.1Hz,2H),1.22(d,J＝6.7Hz,6H)。MS：计算值419(M+H+)；测量值419(M+H+)。
实例3
6-[2-异丙基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000251
步骤1：制备6-(6-氯-2-异丙基-3-吡啶基)-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000252
类似于化合物1a的制备，化合物3a通过使用6-溴-2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(Int-A2)代替步骤1中6-溴-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶来进行制备。MS：计算值300(M+H+)；测量值300(M+H+)。
步骤2：制备6-[2-异丙基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000253
类似于实例1的制备，标题化合物通过使用6-(6-氯-2-异丙基-3-吡啶基)-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶和4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯代替步骤2中6-(6-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯来进行制备。
获得实例3(7mg)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.47-8.44(m,1H),7.94(d,J＝1.0Hz,1H),7.62(t,J＝1.2Hz,1H),7.44(d,J＝8.7Hz,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,1H),4.69(br d,J＝13.6Hz,2H),3.61-3.47(m,9H),3.06-2.91(m,3H),2.66(s,3H),2.58(d,J＝1.0Hz,3H),2.24-2.16(m,2H),1.75(dq,J＝4.1,12.1Hz,2H),1.20(d,J＝6.6Hz,6H)。MS：计算值432(M+H+)；测量值432(M+H+)。
实例4
1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-异丙基-2-吡啶基]哌啶-4-胺
Figure BDA0004045388100000261
类似于实例1的制备，标题化合物通过使用6-(6-氯-2-异丙基-3-吡啶基)-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶代替步骤2中6-(6-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶来进行制备。
获得实例4(12mg)，其为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.46(s,1H),7.94(d,J＝1.1Hz,1H),7.61(s,1H),7.43(d,J＝8.7Hz,1H),6.78(d,J＝8.7Hz,1H),4.59(br d,J＝13.6Hz,2H),3.46-3.35(m,1H),3.06-2.95(m,3H),2.66(s,3H),2.58(d,J＝0.9Hz,3H),2.07(br s,2H),1.63(dq,J＝4.2,12.2Hz,2H),1.20(d,J＝6.6Hz,6H)。MS：计算值364(M+H+)；测量值364(M+H+)。
实例5
[(2S)-1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-异丙基-2-吡啶基]哌嗪-2-基]甲醇
Figure BDA0004045388100000262
类似于实例1的制备，标题化合物通过使用6-(6-氯-2-异丙基-3-吡啶基)-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶和(3S)-3-(羟基甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(CAS号314741-40-7，供应商：PharmaBlock(Nanjing)R&D Co.Ltd，目录PBN20121940)代替步骤2中6-(6-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯来进行制备。
获得实例5(12mg)，其为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.49(s,1H),7.97-7.93(m,1H),7.64(s,1H),7.50(d,J＝8.7Hz,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,1H),4.46(br dd,J＝2.5,14.0Hz,1H),3.96(dq,J＝4.8,11.0Hz,2H),3.77(br d,J＝13.0Hz,1H),3.66-3.50(m,2H),3.41-3.31(m,2H),3.23(dt,J＝4.0,12.5Hz,1H),3.04(td,J＝6.6,13.3Hz,1H),2.66(s,3H),2.59(s,3H),1.20(dd,J＝2.9,6.7Hz,6H)。MS：计算值493(M+H+)；测量值493(M+H+)。
实例6
9-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-异丙基-2-吡啶基]-4-氧杂-1,9-二氮杂螺[5.5]十一烷
Figure BDA0004045388100000271
类似于实例1的制备，标题化合物通过使用6-(6-氯-2-异丙基-3-吡啶基)-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶和1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-甲酸叔丁酯(CAS号1368040-61-2，供应商：Bide Pharmatech，目录BD00848365)代替步骤2中6-(6-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯来进行制备。
获得实例6(11mg)，其为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.46(s,1H),7.94(d,J＝1.0Hz,1H),7.62(s,1H),7.43(d,J＝8.7Hz,1H),6.77(d,J＝8.8Hz,1H),4.22-4.13(m,2H),4.02-3.93(m,2H),3.37-3.32(m,2H),3.26-3.18(m,2H),3.13(s,2H),3.02(quin,J＝6.7Hz,1H),2.66(s,3H),2.58(d,J＝0.9Hz,3H),2.07(br d,J＝12.8Hz,2H),1.75-1.64(m,2H),1.20(d,J＝6.6Hz,6H)。MS：计算值420(M+H+)；测量值420(M+H+)。
实例7
6-[2-异丙基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-7,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000281
步骤1：制备6-(6-氯-2-异丙基-3-吡啶基)-7,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000282
类似于化合物1a的制备，化合物7a通过使用6-溴-7,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(Int-A1)代替步骤1中6-溴-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶来进行制备。MS：计算值300(M+H+)；测量值300(M+H+)。
步骤2：制备6-[2-异丙基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-7,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000283
类似于实例1，标题化合物通过使用6-(6-氯-2-异丙基-3-吡啶基)-7,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶和4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(CAS号205059-24-1，供应商：Bide Pharmatech，目录BD57121-5g)代替步骤2中6-(6-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯来进行制备。
获得实例7(13mg)，其为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.46(s,1H),8.11(d,J＝2.1Hz,1H),8.00(d,J＝2.1Hz,1H),7.33(d,J＝8.7Hz,1H),6.81(d,J＝8.7Hz,1H),4.71(br t,J＝12.8Hz,2H),3.71-3.48(m,9H),3.03-2.93(m,2H),2.69-2.60(m,4H),2.23(s,5H),1.78(dq,J＝3.5,11.9Hz,2H),1.19(d,J＝6.6Hz,3H),1.11(d,J＝6.6Hz,3H)。MS：计算值433(M+H+)；测量值433(M+H+)。
实例8
2-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-异丙基-2-吡啶基]-1,3,4,6,7,8,9,9a-八氢吡嗪并[1,2-a]吡嗪
Figure BDA0004045388100000291
类似于实例1的制备，标题化合物通过使用6-(6-氯-2-异丙基-3-吡啶基)-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶和八氢-2H-吡嗪并[1,2-a]吡嗪-2-甲酸叔丁酯(CAS号1159825-34-9，供应商：Pharmablock，目录：PB07063)代替步骤2中6-(6-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯来进行制备。
获得实例8(13.6mg)，其为白色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06(s,1H),7.57(s,1H),7.37(d,J＝8.4Hz,1H),6.96(s,1H),6.66(br d,J＝8.6Hz,1H),4.43-4.19(m,2H),3.16-2.74(m,7H),2.63-2.48(m,5H),2.43(s,3H),2.41-2.13(m,3H),1.17(br d,J＝6.6Hz,6H)。MS：计算值405(M+H+)；测量值405(M+H+)。
实例9
8-甲基-6-[5-甲基-6-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-1-哌啶基]-3-吡啶基]咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000301
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0004045388100000302
步骤1：制备8-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000303
向6-溴-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(1g，4.74mmol)、双(频哪醇合)二硼(1.44g，5.69mmol，CAS号73183-34-3，供应商：Accela ChemBio Inc，目录SY001323)、乙酸钾(1.16g，11.8mmol)在二噁烷(8mL)中的混合物加入PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(387mg，0.47mmol)，然后将混合物在90℃下于N2气氛下搅拌2小时。冷却后，将混合物滤出并且将固体用EA(20mL)洗涤两次。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥、过滤并浓缩，以得到粗制8-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶(1g，81.7％产率)，其为黑色固体，不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。MS计算值259(M+H+)，测量值259(M+H+)。
步骤2：制备1-(1-(5-溴-3-甲基吡啶-2-基)哌啶-4-基)-4-甲基哌嗪
Figure BDA0004045388100000311
向5-溴-2-氟-3-甲基吡啶(95mg、500μmol)、1-甲基-4-(哌啶-4-基)哌嗪(91.6mg、500μmol)在DMSO(1mL)中的混合物加入DIPEA(64.6mg，87.3μL，500μmol)，然后将混合物在130℃下搅拌16小时。冷却至室温后，然后将反应混合物用水(10mL)稀释，并且用EA(15mL)萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并在真空中浓缩。将残余物通过快速色谱法来进行纯化，用EA/PE(0％至50％)梯度洗脱，以得到1-(1-(5-溴-3-甲基吡啶-2-基)哌啶-4-基)-4-甲基哌嗪(36mg，20％产率)，其为无色油状物。MS计算值353(M+H+)，测量值353(M+H+)。
步骤3：制备8-甲基-6-[5-甲基-6-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-1-哌啶基]-3-吡啶基]咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000321
向1-(1-(5-溴-3-甲基吡啶-2-基)哌啶-4-基)-4-甲基哌嗪(36mg，102μmol)、8-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶(50mg，194μmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(8mg，10.2μmol)在二噁烷(2mL)和Na2CO3(2M，1mL)的混合溶剂中的混合物通入N2，然后将混合物在90℃下搅拌1小时。冷却至室温后，将混合物用EtOAC(20mL)稀释，用水、盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并且将有机层真空浓缩。通过制备型HPLC来纯化残余物，以得到8-甲基-6-[5-甲基-6-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-1-哌啶基]-3-吡啶基]咪唑并[1,2-a]吡啶(10mg)，其为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ8.62(s,1H),8.38-8.34(m,1H),7.92(d,J＝1.2Hz,1H),7.83(d,J＝1.8Hz,1H),7.64(d,J＝1.3Hz,1H),7.47(s,1H),3.61(br d,J＝12.8Hz,2H),3.19-2.95(m,8H),2.92-2.79(m,3H),2.73(s,3H),2.62(s,3H),2.38(s,3H),2.06(br d,J＝11.2Hz,2H),1.79(br d,J＝3.3Hz,2H)。MS：计算值405(M+H+)；测量值405(M+H+)。
实例10
6-[2-(二氟甲基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000322
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0004045388100000331
步骤1：制备4-[1-[5-溴-6-(二氟甲基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0004045388100000332
将3-溴-6-氯-2-(二氟甲基)吡啶(70mg，289μmol)、4-(4-哌啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(100mg，371μmol，CAS号205059-24-1，供应商：Bide Pharmatech，目录BD57121)和K2CO3(70mg，506μmol)在DMF(2mL)中的混合物在125℃下搅拌16小时。
在反应完成后，然后将混合物真空浓缩，然后将残余物通过快速色谱柱来进行纯化，用MeOH/DCM(0％至15％)梯度洗脱，以得到4-[1-[5-溴-6-(二氟甲基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(136mg，98％产率)，其为黄色油状物。MS：计算值476(M+H+)；测量值476(M+H+)。
步骤2：制备4-[1-[6-(二氟甲基)-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0004045388100000341
向8-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶(80mg，310μmol)、4-[1-[5-溴-6-(二氟甲基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(140mg，295μmol，CAS号205059-24-1，供应商：Bide Pharmatech，目录BD57121)和K2CO3(85.7mg，620μmol)在二噁烷(5mL)和水(1mL)的混合溶剂中的混合物加入PdCl2(DPPF)-CH2Cl2加合物(22.7mg，31μmol)，并且将混合物在80℃下于N2气氛下搅拌16小时。
在反应完成后，然后将混合物真空浓缩。然后将残余物通过快速色谱柱来进行纯化，用MeOH/DCM(0％至10％)梯度洗脱，以得到4-[1-[6-(二氟甲基)-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(89mg，54.5％产率)，其为黄色油状物。MS：计算值527(M+H+)；测量值527(M+H+)。
步骤3：制备6-[2-(二氟甲基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000342
向4-[1-[6-(二氟甲基)-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯在DCM(4mL)中的溶液加入TFA(1mL)，然后将混合物在25℃下搅拌1小时。
在反应完成后，将混合物真空浓缩，然后通过制备型HPLC来纯化残余物，以得到6-[2-(二氟甲基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶(23mg，23.6％产率)，其为浅黄色粉末。1H NMR(400MHz,CD3OD,298K)δ(ppm)＝8.23-8.26(m,1H),7.85(d,J＝1.3Hz,1H),7.55-7.61(m,2H),7.07(s,1H),6.99(d,J＝8.8Hz,1H),6.38-6.68(m,1H),4.55(br d,J＝13.3Hz,2H),2.83-2.94(m,6H),2.49-2.67(m,8H),2.00(br d,J＝12.5Hz,2H),1.45-1.58(m,2H)。MS：计算值427(M+H+)；测量值427(M+H+)。
实例11
6-[2-(二氟甲基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000351
步骤1：制备2,8-二甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000352
将6-溴-2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(2.25g，10mmol)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(817mg，1mmol)、双(频哪醇合)二硼(3.05g，12mmol，CAS号73183-34-3，供应商：Accela ChemBio Inc，目录：SY001323)和乙酸钾(2.45g，25mmol)在1,4-二噁烷(8.5mL)中的混合物在90℃下于氩气气氛下搅拌2小时。在反应完成后，将混合物真空浓缩，以得到2,8-二甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶的粗产物，其为棕色油状物，不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。MS：计算值273(M+H+)；测量值273(M+H+)。
步骤2：制备6-[2-(二氟甲基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000361
类似于实例10的制备，标题化合物通过使用2,8-二甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶代替步骤2中8-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶来进行制备。
获得实例11(24mg)，其为黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD,298K)δ(ppm)＝8.53(s,1H),7.97(d,J＝1.1Hz,1H),7.67-7.70(m,1H),7.62-7.67(m,1H),7.09(d,J＝8.8Hz,1H),6.39-6.72(m,1H),4.68(br d,J＝13.6Hz,2H),3.48-3.55(m,4H),3.35-3.47(m,5H),3.01(br t,J＝12.0Hz,2H),2.66(s,3H),2.57-2.61(m,3H),2.18(br d,J＝11.1Hz,2H),1.72(qd,J＝12.1,4.0Hz,2H)。MS：计算值441(M+H+)；测量值441(M+H+)。
实例12
1-[1-[6-(二氟甲基)-5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-3-甲基-氮杂环丁烷-3-胺
Figure BDA0004045388100000362
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0004045388100000371
步骤1：制备1-[6-(二氟甲基)-5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]哌啶-4-酮
Figure BDA0004045388100000372
向6-[6-氯-2-(二氟甲基)-3-吡啶基]-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶(462mg，1.50mmol)、哌啶-4-酮盐酸盐(305mg，2.25mmol)和碳酸铯(2.20g，6.75mmol)在1,4-二噁烷(10mL)中的混合物加入RuPhos Pd G2(175mg，225μmol)，并且将混合物在110℃下于氩气气氛下搅拌16小时。
将反应混合物通过硅藻土垫进行过滤，并且将滤液真空浓缩，以得到粗材料，其为棕色油状物。将残余物通过快速色谱法(硅胶)来进行纯化，用0至30％的MeOH在DCM中的溶液洗脱，以得到1-[6-(二氟甲基)-5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]哌啶-4-酮(131mg，23.58％产率)，其为浅棕色固体。MS：计算值371(M+H+)，测量值371(M+H+)。
步骤2：制备N-[1-[1-[6-(二氟甲基)-5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-3-甲基-氮杂环丁烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0004045388100000381
向N-(3-甲基氮杂环丁烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯盐酸盐(38.8mg，174μmol，CAS号1408076-37-8，供应商：Pharmablock，目录号：PB03046-01)、1-[6-(二氟甲基)-5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]哌啶-4-酮(43mg，116μmol)在EtOH(1.0mL)中的溶液加入乙酸(10.5mg，10.0μL，174μmol)，并且将反应混合物在50℃下搅拌1小时。然后向所得混合物加入氰基硼氢化钠(21.9mg，348μmol)，并且将混合物在50℃下于氩气气氛下进一步搅拌16小时。
将反应混合物快速穿过快速色谱柱，用0至40％的MeOH在DCM中的溶液洗脱，以得到粗制N-[1-[1-[6-(二氟甲基)-5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-3-甲基-氮杂环丁烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯，其为黄色油状物，不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。MS：计算值541(M+H+)；测量值541(M+H+)。
步骤3：制备1-[1-[6-(二氟甲基)-5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-3-甲基-氮杂环丁烷-3-胺
Figure BDA0004045388100000382
向来自先前步骤的N-[1-[1-[6-(二氟甲基)-5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-3-甲基-氮杂环丁烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯在DCM(2.0mL)中的溶液加入TFA(1.14g，0.77mL，10mmol)，并且将反应混合物在室温下于氩气气氛下搅拌16小时。
将混合物真空浓缩并且通过制备型HPLC来纯化残余物，以得到1-[1-[6-(二氟甲基)-5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-3-甲基-氮杂环丁烷-3-胺(10.5mg，历经2步，23.83％产率)，其为白色粉末。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.17-8.09(m,1H),7.59(s,1H),7.58-7.52(m,1H),7.02(s,1H),7.00-6.94(m,1H),6.52(t,JH-F＝54.5Hz,1H),4.51-4.34(m,2H),3.38-3.32(m,2H),3.07(d,J＝8.2Hz,2H),3.00-2.89(m,2H),2.55(s,3H),2.50-2.37(m,4H),1.85(br d,J＝10.5Hz,2H),1.42(s,3H),1.34-1.20(m,2H)。MS：计算值441(M+H+)；测量值441(M+H+)。
实例13
3-[6-(二氟甲基)-5-(8-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷
Figure BDA0004045388100000391
步骤1：制备8-甲氧基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000392
类似于化合物9a的制备，化合物13a通过使用6-溴-8-甲氧基-咪唑并[1,2-a]吡啶代替6-溴-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶来进行制备。获得8-甲氧基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶(380mg)，其为棕色油状物。MS计算值275(M+H+)，测量值275(M+H+)。
步骤2：制备9-[5-溴-6-(二氟甲基)-2-吡啶基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯
Figure BDA0004045388100000401
类似于化合物10b的制备，化合物13b通过使用3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯代替步骤1中4-(4-哌啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯来进行制备。MS：计算值460(M+H+)；测量值459(M+H+)。
步骤3：制备3-[6-(二氟甲基)-5-(8-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷
Figure BDA0004045388100000402
类似于实例10的制备，标题化合物通过使用8-甲氧基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶和9-[5-溴-6-(二氟甲基)-2-吡啶基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯代替步骤2中8-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶和4-[1-[5-(1,5-二甲基-6-氧代-3-吡啶基)-6-异丙基-2-吡啶基]-4-哌啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯来进行制备。
获得实例13(12mg，17.9％产率)，其为黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD,298K)δ(ppm)＝8.35(d,J＝1.1Hz,1H),8.23(d,J＝2.1Hz,1H),8.03(d,J＝2.1Hz,1H),7.67(d,J＝8.8Hz,1H),7.33-7.36(m,1H),7.03(d,J＝8.8Hz,1H),6.42-6.75(m,1H),4.13-4.19(m,3H),3.70-3.78(m,4H),3.17-3.27(m,4H),1.78-1.85(m,4H),1.65-1.73(m,4H)。MS：计算值428(M+H+)；测量值428(M+H+)。
实例14
2-[1-[6-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷
Figure BDA0004045388100000411
步骤1：制备6-(6-氯-2-乙基-3-吡啶基)-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000412
类似于化合物1a的制备，化合物14a通过使用6-氯-2-乙基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(Int-B4)代替步骤1中6-氯-2-异丙基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(Int-B2)来进行制备。
步骤2：制备1-[6-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]哌啶-4-酮
Figure BDA0004045388100000413
向6-(6-氯-2-乙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(544mg，2.00mmol)、哌啶-4-酮盐酸盐(407mg，3.00mmol)和碳酸铯(2.93g，9.00mmol)在1,4-二噁烷(20mL)中的混合物加入RuPhos Pd G2(233mg，300μmol)，然后将混合物在110℃下于氩气气氛下搅拌16小时。
将反应混合物通过硅藻土垫进行过滤，并且将滤液真空浓缩，以得到粗产物，其为棕色油状物。将残余物通过快速色谱法来进行纯化，用0至30％的MeOH在DCM中的溶液洗脱，以得到1-[6-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]哌啶-4-酮(106mg，15.85％产率)，其为深棕色固体。MS：计算值335(M+H+)；测量值335(M+H+)。
步骤3：制备2-[1-[6-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁酯
Figure BDA0004045388100000421
向5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁酯(54.2mg，0.238mmol，CAS号1251005-61-4，供应商：Pharmablock，目录号：PBN20111065)、1-[6-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶酮(53.0mg，0.158mmol)在1.6mL的EtOH中的溶液加入乙酸(19.0mg，18.1μL，0.317mmol)，并且将反应混合物在50℃下搅拌1小时。然后向所得混合物加入氰基硼氢化钠(19.9mg，0.317mmol)，并且将混合物在50℃下于氩气气氛下进一步搅拌16小时。
将反应混合物快速穿过快速色谱柱，用0至40％的MeOH在DCM中的溶液洗脱，以得到2-[1-[6-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁酯的粗品，其为浅黄色油状物，不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。MS：计算值547(M+H+)；测量值547(M+H+)。
步骤4：2-[1-[6-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷
Figure BDA0004045388100000431
向来自先前步骤的2-[1-[6-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁酯在DCM(3.1mL)中的溶液加入TFA(1.80g，1.21mL)，并且将反应混合物在室温下于氩气气氛下搅拌16小时。
将混合物真空浓缩并且通过制备型HPLC来纯化残余物，以得到2-[1-[6-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷(13.5mg，历经2步，15.24％产率)，其为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.62(s,1H),8.23(d,J＝2.1Hz,1H),8.09(d,J＝2.1Hz,1H),7.73(s,1H),7.57(d,J＝8.7Hz,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,1H),4.62(br d,J＝13.8Hz,2H),4.44(br d,J＝11.6Hz,2H),4.35(d,J＝12.0Hz,2H),4.07-4.00(m,2H),3.61-3.57(m,1H),3.56(s,2H),3.29-3.27(m,2H),3.02(brt,J＝12.2Hz,2H),2.74-2.66(m,5H),2.14(br d,J＝12.1Hz,2H),1.55(qd,J＝12.1,4.2Hz,2H),1.21(t,J＝7.5Hz,3H)。MS：计算值447(M+H+)；测量值447(M+H+)。
实例15
(3R,4R)-1-[1-[6-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-4-甲氧基-吡咯烷-3-胺
Figure BDA0004045388100000441
类似于实例14的制备，标题化合物通过使用N-[(3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS号1932066-52-8，供应商：Pharmablock，目录号：PBZ4728)代替步骤3中5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁酯来进行制备。
获得实例15(8.7mg)，其为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.63-8.61(m,1H),8.23(d,J＝2.2Hz,1H),8.09(d,J＝2.1Hz,1H),7.75-7.72(m,1H),7.58(d,J＝8.8Hz,1H),6.92(d,J＝8.8Hz,1H),4.62(br d,J＝13.3Hz,2H),4.26-4.22(m,1H),4.12-3.97(m,2H),3.82-3.67(m,2H),3.55(br dd,J＝10.9,6.3Hz,2H),3.46(s,3H),3.03(br t,J＝12.0Hz,2H),2.75-2.67(m,5H),2.25(br s,2H),1.86-1.73(m,2H),1.21(t,J＝7.5Hz,3H)。MS：计算值435(M+H+)；测量值435(M+H+)。
实例16
2-[1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷
Figure BDA0004045388100000442
步骤1：制备6-(6-氯-2-乙基-3-吡啶基)-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000451
类似于化合物1a的制备，化合物16a通过使用6-氯-2-乙基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(Int-B4)和6-溴-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶(Int-A1)代替步骤1中6-氯-2-异丙基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(Int-B2)和6-溴-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶来进行制备。
步骤2：制备2-[1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷
Figure BDA0004045388100000452
类似于实例14的制备，标题化合物通过使用6-(6-氯-2-乙基-3-吡啶基)-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶代替步骤2中6-(6-氯-2-乙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶来进行制备。
获得实例16(25.7mg)，其为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.51(s,1H),7.94(d,J＝1.0Hz,1H),7.66(s,1H),7.55(d,J＝8.7Hz,1H),6.90(d,J＝8.8Hz,1H),4.61(br d,J＝13.6Hz,2H),4.44(br d,J＝11.6Hz,2H),4.40-4.30(m,2H),4.08-3.98(m,2H),3.61-3.51(m,3H),3.30-3.22(m,2H),3.02(br t,J＝12.3Hz,2H),2.73-2.64(m,5H),2.61-2.56(m,3H),2.14(br d,J＝12.2Hz,2H),1.55(br dd,J＝12.1,3.8Hz,2H),1.20(t,J＝7.5Hz,3H)。MS：计算值461(M+H+)；测量值461(M+H+)。
实例17
(3R,4R)-1-[1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]-4-哌啶基]-4-甲氧基-吡咯烷-3-胺
Figure BDA0004045388100000461
类似于实例14的制备，标题化合物通过使用6-(6-氯-2-乙基-3-吡啶基)-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶代替步骤2中6-(6-氯-2-乙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶，并且使用N-[(3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(CAS号1932066-52-8，供应商：Pharmablock，目录号：PBZ4728)代替步骤3中5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁酯来进行制备。
获得实例17(44.5mg)，其为浅黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.60(s,1H),7.98(d,J＝1.0Hz,1H),7.82-7.74(m,1H),7.71-7.66(m,1H),7.18(d,J＝9.2Hz,1H),4.55(brd,J＝13.6Hz,2H),4.32-4.24(m,1H),4.20-4.09(m,1H),4.09-3.99(m,1H),3.90-3.73(m,2H),3.72-3.59(m,2H),3.46(s,3H),3.29-3.18(m,2H),2.81(q,J＝7.5Hz,2H),2.68(s,3H),2.61-2.57(m,3H),2.43-2.23(m,2H),2.00-1.82(m,2H),1.21(t,J＝7.5Hz,3H)。MS：计算值449(M+H+)；测量值449(M+H+)。
实例18
[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-基]-吗啉-2-基-甲酮
Figure BDA0004045388100000462
Figure BDA0004045388100000471
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0004045388100000472
步骤1：制备4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0004045388100000473
向6-(6-氯-2-乙基吡啶-3-基)-2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶(357mg，1.25mmol)、1-boc-哌嗪(349mg，1.88mmol)和碳酸铯(1.22g，3.75mmol)在1,4-二噁烷(8mL)中的混合物加入RuPhos Pd G2(146mg，0.188mmol)，然后将混合物在110℃下于氩气气氛下搅拌16小时。
冷却至室温后，将反应混合物通过硅藻土垫进行过滤，并且真空浓缩。将残余物通过快速色谱法来进行纯化，用0至40％的EtOAc(含有10％的MeOH)在石油醚中的溶液洗脱，以得到4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(321mg，58.96％产率)，其为浅黄色固体。MS：计算值436(M+H+)；测量值436(M+H+)。
步骤2：制备6-(2-乙基-6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000481
向4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(321mg，0.737mmol)在DCM(15mL)中的溶液加入TFA(4.20g，2.82mL，36.9mmol)，并且将反应混合物在室温下于氩气气氛下搅拌16小时。
将反应混合物真空浓缩，然后在DCM(100mL)与饱和K2CO3(100mL)之间分配。分离出有机层，并且用饱和K2CO3(50mL)洗涤三次，经Na2SO4干燥并且真空浓缩。将残余物通过快速色谱法来进行纯化，用0至80％的MeOH在DCM中的溶液洗脱，以得到6-(2-乙基-6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶(118mg，47.73％产率)，其为灰白色固体。MS：计算值336(M+H+)；测量值336(M+H+)。
步骤3：制备2-[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-羰基]吗啉-4-甲酸叔丁酯
Figure BDA0004045388100000482
向6-(2-乙基-6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶(39.0mg，0.116mmol)、4-boc-2-吗啉甲酸(40.3mg，0.174mmol，CAS号189321-66-2，供应商：Pharmablock，目录号：PBN20121307)、DIPEA(60.1mg，81μL，0.465mmol)在DCM(3mL)中的溶液加入EDCI(33.4mg，0.174mmol)。将反应混合物在室温下于氩气气氛下搅拌16小时。在反应完成后，将混合物快速穿过快速色谱柱，用0至40％的MeOH在DCM中的溶液洗脱，以得到粗制2-[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-羰基]吗啉-4-甲酸叔丁酯，其为黄色油状物，不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。MS：计算值549(M+H+)；测量值549(M+H+)。
步骤4：制备[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-基]-吗啉-2-基-甲酮
Figure BDA0004045388100000491
向2-[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-羰基]吗啉-4-甲酸叔丁酯(如上制备)在DCM(2.3mL)中的溶液加入FA(1.33g，0.900mL，11.6mmol)。将反应混合物在室温下于氩气气氛下搅拌16小时。将混合物真空浓缩并且通过制备型HPLC来纯化残余物，以得到[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-基]-吗啉-2-基-甲酮(25.7mg，历经2步，49.39％产率)，其为白色粉末。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.10-8.08(m,1H),7.58-7.56(m,1H),7.43(d,J＝8.6Hz,1H),6.99(s,1H),6.71(d,J＝8.7Hz,1H),4.37(dd,J＝8.1,3.8Hz,1H),3.94-3.85(m,1H),3.85-3.45(m,9H),3.04-2.92(m,2H),2.85(br d,J＝3.3Hz,2H),2.67(q,J＝7.5Hz,2H),2.55(s,3H),2.45-2.42(m,3H),1.19(t,J＝7.5Hz,3H)。MS：计算值449(M+H+)；测量值449(M+H+)。
实例19
2-[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶
Figure BDA0004045388100000501
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0004045388100000502
步骤1：制备2-[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-基]-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸叔丁酯
Figure BDA0004045388100000503
将6-(2-乙基-6-哌嗪-1-基-3-吡啶基)-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶(39.0mg，0.116mmol)、2-氯-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸叔丁酯(47.0mg，0.174mmol，CAS号1196156-15-6，供应商：Bide Pharmatech，目录：BD259018)、RuPhos PdG2(13.6mg，0.017mmol)和碳酸铯(113mg，0.349mmol)在1,4-二噁烷(1mL)中的混合物在110℃下于氩气气氛下搅拌16小时。将反应混合物真空浓缩，然后将残余物通过快速色谱柱(硅胶)来进行纯化，用0至40％的MeOH在DCM中的溶液洗脱，以得到2-[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-基]-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸叔丁酯的粗品，其为黄色油状物，不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。MS：计算值569(M+H+)；测量值569(M+H+)。
步骤2：制备2-[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶
Figure BDA0004045388100000511
向2-[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-基]-6,8-二氢-5H-吡啶并[3,4-d]嘧啶-7-甲酸叔丁酯在DCM(3mL)中的溶液加入TFA(1.33g，0.900mL，11.6mmol)，并且将反应混合物在室温下于氩气气氛下搅拌16小时。
将混合物真空浓缩并且通过制备型HPLC来纯化残余物，以得到2-[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶(39.4mg，历经2步，58.30％产率)，其为浅黄色粉末。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.62(s,1H),8.32(s,1H),8.00-7.97(m,1H),7.81(d,J＝9.2Hz,1H),7.70(s,1H),7.18(d,J＝9.2Hz,1H),4.23(s,2H),4.03(dd,J＝6.4,4.0Hz,4H),3.95-3.79(m,4H),3.52(t,J＝6.2Hz,2H),2.97(t,J＝6.1Hz,2H),2.83(q,J＝7.5Hz,2H),2.68(s,3H),2.60(s,3H),1.23(t,J＝7.5Hz,3H)。MS：计算值469(M+H+)；测量值469(M+H+)。
实例20
1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]-4-甲基-哌啶-4-胺
Figure BDA0004045388100000512
Figure BDA0004045388100000521
类似于实例1的制备，标题化合物通过使用6-(6-氯-2-乙基吡啶-3-基)-2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶和N-(4-甲基哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯(CAS号163271-08-7，供应商：Pharmablock，目录号：PB02909)代替步骤2中6-(6-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯来进行制备。
获得实例20(4.0mg)，其为灰白色粉末。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.08(s,1H),7.57(s,1H),7.39(d,J＝8.6Hz,1H),6.98(s,1H),6.70(d,J＝8.6Hz,1H),3.91-3.77(m,2H),3.62-3.45(m,2H),2.65(q,J＝7.5Hz,2H),2.55(s,3H),2.43(s,3H),1.75-1.60(m,4H),1.28(s,3H),1.18(t,J＝7.5Hz,3H)。MS：计算值364(M+H+)；测量值364(M+H+)。
实例21
6-[2-乙基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000522
类似于实例1的制备，标题化合物通过使用6-(6-氯-2-乙基吡啶-3-基)-2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶和4-(哌啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯代替步骤2中6-(6-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶和哌啶-4-基氨基甲酸叔丁酯来进行制备。
获得实例21(31mg)，其为黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD,298K)δ(ppm)＝1.21(t,J＝7.52Hz,3H),1.73-1.87(m,2H),2.21(br d,J＝11.13Hz,2H),2.59(d,J＝0.86Hz,3H),2.67(s,3H),2.70-2.80(m,2H),3.12(br t,J＝11.98Hz,2H),3.37-3.48(m,5H),3.49-3.56(m,4H),4.58(br d,J＝13.69Hz,2H),7.01(d,J＝9.05Hz,1H),7.62-7.70(m,2H),7.96(d,J＝1.10Hz,1H),8.52-8.59(m,1H)。MS：计算值419(M+H+)；测量值419(M+H+)。
实例22
3-[3-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷
Figure BDA0004045388100000531
步骤1：制备6-(6-氯-5-乙基-3-吡啶基)-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000532
类似于化合物1a的制备，标题化合物通过2-氯-3-乙基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(Int-B7)代替步骤1中6-氯-2-异丙基-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)吡啶(Int-B2)来进行制备。
步骤2：制备3-[3-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷
Figure BDA0004045388100000533
类似于实例1的制备，标题化合物通过使用6-(6-氯-5-乙基-3-吡啶基)-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶和3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-甲酸叔丁酯代替步骤2中6-(6-氯-2-异丙基吡啶-3-基)-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶和N-(4-哌啶基)氨基甲酸叔丁酯(CAS号73874-95-0，供应商：Accela ChemBio，目录SY002020)来进行制备。
获得实例22(2mg)，其为黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD,298K)δ(ppm)＝8.98-8.96(m,1H),8.45(d,J＝2.4Hz,1H),8.24(d,J＝2.2Hz,1H),8.10-8.06(m,2H),8.02(d,J＝2.4Hz,1H),3.27-3.19(m,8H),2.83-2.75(m,2H),2.73(s,3H),1.81(td,J＝5.8,13.6Hz,8H),1.36(t,J＝7.5Hz,3H)。MS：计算值390(M+H+)；测量值390(M+H+)。
实例23
N,N-二甲基-3-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)吡啶-2-胺
Figure BDA0004045388100000541
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0004045388100000551
步骤1：制备3-溴-6-氯-N,N-二甲基-吡啶-2-胺
Figure BDA0004045388100000552
将3-溴-6-氯-2-氟-吡啶(1300mg，6.18mmol)、二甲胺盐酸盐(554.11mg，6.8mmol)和K2CO3(853.84mg，6.18mmol)在DMF(10mL)中的混合物在100℃下搅拌过夜。在反应完成后，用水(30mL)稀释该混合物，并且将所得混合物用EtOAc(30mL)萃取三次。然后将合并的有机层用盐水洗涤，经Na2SO4干燥，并且真空浓缩。然后将残余物通过快速色谱柱来进行纯化，用EA/PE(0％至50％)梯度洗脱，以得到3-溴-6-氯-N,N-二甲基-吡啶-2-胺(1000mg，68.73％)，其为无色油状物。MS：计算值235(M+H+)；测量值235(M+H+)。
步骤2：制备[6-氯-3-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-二甲基-胺
Figure BDA0004045388100000561
将8-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶(200mg，0.775mmol)、3-溴-6-氯-N,N-二甲基-吡啶-2-胺(182.48mg，0.775mmol)、2MK2CO3(0.5mL，1mmol)和PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(128.11mg，0.155mmol)在1,4-二噁烷(5mL)中的混合物在100℃下于N2气氛下搅拌2小时。在反应完成后，然后将混合物真空浓缩，然后将残余物通过快速色谱柱来进行纯化，用EA/PE(0％至50％)梯度洗脱，以得到[6-氯-3-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-二甲基-胺(200mg，90.01％产率)，其为棕色固体。MS：计算值287(M+H+)；测量值287(M+H+)。
步骤3：制备4-[1-[6-(二甲基氨基)-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0004045388100000562
向[6-氯-3-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-二甲基-胺(45.4mg，0.158mmol)、4-(4-哌啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(127.95mg，0.475mmol，CAS号205059-24-1，供应商：Bide Pharmatech，目录BD57121)、Cs2CO3(51.6mg，158μmol)在二噁烷(15mL)中的混合物加入Ruphos Pd G2(50mg，158μmol)，然后将混合物在100℃下搅拌过夜。在反应完成后，然后将混合物真空浓缩，然后将残余物通过快速色谱柱来进行纯化，用MeOH/DCM(0％至15％)梯度洗脱，以得到4-[1-[6-(二甲基氨基)-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(40mg，48.61％)，其为深棕色固体。MS：计算值520(M+H+)；测量值520(M+H+)。
步骤4：制备N,N-二甲基-3-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)吡啶-2-胺
Figure BDA0004045388100000571
向4-[1-[6-(二甲基氨基)-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]哌嗪-1-甲酸叔丁酯(30mg，0.058mmol)在DCM(10mL)中的溶液加入TFA(0.3mL)，然后将混合物在室温下搅拌过夜。在反应完成后，将混合物真空浓缩，然后通过制备型HPLC来纯化残余物，以得到二甲基-[3-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-(4-哌嗪子基哌啶子基(piperazinopiperidino))-2-吡啶基]胺(4mg，15.19％)，其为灰白色粉末。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ＝8.24-8.12(m,1H),7.71(d,J＝1.2Hz,1H),7.48-7.41(m,1H),7.28(d,J＝8.3Hz,1H),7.16(s,1H),6.23(d,J＝8.3Hz,1H),4.40-4.31(m,2H),2.92-2.81(m,4H),2.77-2.69(m,2H),2.64-2.60(s,6H),2.59-2.55(m,4H),2.48-2.44(s,3H),2.43-2.35(m,1H),1.94-1.85(m,2H),1.49-1.38(m,2H)。MS：计算值420(M+H+)；测量值420(M+H+)。
实例24
6-[4-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-1-哌啶基]-N,N-二甲基-3-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-胺
Figure BDA0004045388100000581
步骤1：制备N-[(3R,4R)-1-(1-苄基-4-哌啶基)-4-甲氧基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0004045388100000582
向1-苄基哌啶-4-酮(525mg，2.77mmol，CAS号3612-20-2，供应商：BidePharmatech)、N-[(3S,4S)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(500mg，2.31mmol，128739-92-4，供应商：PharmaBlock Sciences(Nanjing),Inc.，目录PBN20121069)、AcOH(14.0mg，0.23mmol)在DCM(25mL)中的混合物加入NaBH(OAc)3(2.43g，11.5mmol)，并且将混合物在40℃下搅拌6小时。在反应完成后，然后将混合物真空浓缩。然后将残余物通过快速色谱柱来进行纯化，用MeOH/DCM(0％至20％)梯度洗脱，以得到N-[(3R,4R)-1-(1-苄基-4-哌啶基)-4-甲氧基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(800mg，88.9％产率)，其为黄色油状物。MS：计算值390(M+H+)，测量值390(M+H+)。
步骤2：制备N-[(3R,4R)-4-甲氧基-1-(4-哌啶基)吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0004045388100000583
向N-[(3R,4R)-1-(1-苄基-4-哌啶基)-4-甲氧基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(800mg，2.1mmol)在MeOH(10mL)中的溶液加入碳载钯(10重量％负载，50mg)，然后将混合物在25℃下于H2气氛下搅拌6小时。在反应完成后，然后将混合物真空浓缩，以得到粗制N-[(3R,4R)-4-甲氧基-1-(4-哌啶基)吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(500mg，80.3％产率)，其为棕色固体。MS：计算值300(M+H+)；测量值300(M+H+)。
步骤3：制备6-[4-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-1-哌啶基]-N,N-二甲基-3-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-胺
Figure BDA0004045388100000591
类似于实例23的制备，标题化合物通过使用N-[(3R,4R)-4-甲氧基-1-(4-哌啶基)吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯代替步骤3中化合物4-(4-哌啶基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯来进行制备。
获得实例24(1.5mg)，其为灰白色粉末。1H NMR(400MHz,甲醇-d4)δ(ppm)＝8.21(d,J＝0.9Hz,1H),7.71(d,J＝1.3Hz,1H),7.43(d,J＝1.2Hz,1H),7.28(d,J＝8.3Hz,1H),7.20-7.13(m,1H),6.29-6.18(m,1H),4.48(br s,2H),4.27(br d,J＝13.3Hz,2H),3.26(s,3H),2.99-2.91(m,2H),2.84-2.74(m,2H),2.69-2.65(m,1H),2.62(s,6H),2.45(s,3H),2.40-2.33(m,1H),2.32-2.26(m,1H),1.91-1.82(m,2H),1.47-1.35(m,2H)。MS：计算值450(M+H+)；测量值450(M+H+)。
实例25
6-[2-甲氧基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000601
类似于实例23的制备，标题化合物通过使用3-溴-6-氯-2-甲氧基-吡啶代替步骤2中3-溴-6-氯-N,N-二甲基-吡啶-2-胺来进行制备。
获得实例25(12mg，17.9％产率)，其为黄色固体。1H NMR(400MHz,CD3OD,298K)δ(ppm)＝8.86-8.84(m,1H),8.20(d,J＝2.1Hz,1H),8.03-7.99(m,2H),7.73(d,J＝8.4Hz,1H),6.52(d,J＝8.6Hz,1H),4.61-4.54(m,2H),3.97(s,3H),3.44-3.37(m,4H),3.25-3.19(m,4H),3.17-3.08(m,1H),3.02-2.91(m,2H),2.67(s,3H),2.09(br d,J＝12.3Hz,2H),1.73-1.61(m,2H)。MS：计算值407(M+H+)；测量值407(M+H+)。
实例26
(3R,4R)-1-[1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]-4-哌啶基]-4-甲氧基-吡咯烷-3-胺
Figure BDA0004045388100000602
根据以下方案制备标题化合物：
Figure BDA0004045388100000611
步骤1：制备1-(4-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-酮
Figure BDA0004045388100000612
向2-氯-4-乙基嘧啶(1.43g，10mmol，CAS号188707-99-5，供应商：Accela ChemBioInc，目录号：SY021045)和哌啶-4-酮盐酸盐(2.03g，15mmol)在DMF(15mL)中的溶液加入K2CO3(4.84g，35mmol)，并且将混合物在130℃下于氩气气氛下搅拌16小时。在反应完成后，将反应混合物通过硅藻土垫进行过滤，然后真空浓缩。将残余物通过快速色谱法来进行纯化，用0至50％ EA/PE洗脱，以得到1-(4-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-酮(1.62g，78.92％)，其为无色油状物。MS：计算值206(M+H+)；测量值206(M+H+)。
步骤2：制备1-(5-溴-4-乙基-嘧啶-2-基)哌啶-4-酮
Figure BDA0004045388100000621
在0℃下，向1-(4-乙基嘧啶-2-基)哌啶-4-酮(522mg，2.54mmol)在DCM(7mL)中的溶液加入硅胶(5mg)和NBS(498mg，2.80mmol)。在黑暗中于氩气气氛下，将反应混合物在室温下搅拌16小时。
将混合物真空浓缩，并且将残余物通过快速色谱法来进行纯化，用0至30％ EA/PE洗脱，以得到1-(5-溴-4-乙基-嘧啶-2-基)哌啶-4-酮(464mg，64.23％产率)，其为无色油状物。MS：计算值284(M+H+)；测量值284(M+H+)。
步骤3：制备1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-酮
Figure BDA0004045388100000622
向8-甲基-6-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷-2-基)咪唑并[1,2-a]吡啶(9a，258mg，1mmol)和1-(5-溴-4-乙基-嘧啶-2-基)哌啶-4-酮(341mg，1.2mmol)在二噁烷(4mL)中的溶液加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)(73mg，0.1mmol)和碳酸钾(276mg，2mmol)。在氩气气氛下，将反应混合物在80℃下搅拌16小时。
将混合物真空浓缩，并且将残余物用DCM稀释并通过硅藻土垫进行过滤。将滤液真空浓缩，并且将残余物通过快速色谱法来进行纯化，用0至60％的EtOAc(含有10％的MeOH)在石油醚中的溶液洗脱，以得到1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-酮(161mg，48.0％产率)，其为浅黄色固体。MS：计算值336(M+H+)；测量值336(M+H+)。
步骤4：制备N-[(3R,4R)-1-[1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]-4-哌啶基]-4-甲氧基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯
Figure BDA0004045388100000631
向1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]哌啶-4-酮(43.6mg，0.130mmol)和N-[(3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(42.2mg，0.195mmol)在EtOH(1.3mL)中的溶液加入乙酸(15.6mg，7.54μL，0.260mmol)，并且将反应混合物在50℃下搅拌1小时。然后向所得混合物加入氰基硼氢化钠(16.3mg，0.260mmol)，并且将混合物在50℃下于氩气气氛下进一步搅拌16小时。在反应完成后，然后将混合物真空浓缩，并且将残余物通过快速色谱柱来进行纯化，用0至60％的MeOH在DCM中的溶液洗脱，以得到粗制N-[(3R,4R)-1-[1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]-4-哌啶基]-4-甲氧基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯，其为黄色油状物，不经进一步纯化即直接用于下一步骤中。MS：计算值536(M+H+)；测量值536(M+H+)。
步骤5：制备(3R,4R)-1-[1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]-4-哌啶基]-4-甲氧基-吡咯烷-3-胺
Figure BDA0004045388100000632
向来自先前步骤的N-[(3R,4R)-1-[1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]-4-哌啶基]-4-甲氧基-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯在DCM(2.6mL)中的溶液加入TFA(1.48g，0.99mL，13.0mmol)，并且将反应混合物在室温下于氩气气氛下搅拌16小时。将混合物真空浓缩，并且将残余物通过制备型HPLC来进行纯化，以得到(3R,4R)-1-[1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]-4-哌啶基]-4-甲氧基-吡咯烷-3-胺(20.3mg，历经2步，28.41％产率)，其为白色粉末。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.65(s,1H),8.25-8.22(m,2H),8.09(d,J＝2.2Hz,1H),7.75(s,1H),5.07(d,J＝13.8Hz,2H),4.32-4.19(m,1H),4.11(dd,J＝8.2,12.5Hz,1H),4.06-3.95(m,1H),3.78(s,2H),3.67-3.52(m,2H),3.46(s,3H),3.00(t,J＝12.1Hz,2H),2.74-2.62(m,5H),2.26(s,2H),1.79-1.64(m,2H),1.22(t,J＝7.5Hz,3H)。MS：计算值436(M+H+)；测量值436(M+H+)。
实例27
6-[4-乙基-2-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)嘧啶-5-基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶
Figure BDA0004045388100000641
类似于实例26的制备，标题化合物通过使用哌嗪-1-甲酸叔丁酯代替步骤4中N-[(3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯来进行制备。获得6-[4-乙基-2-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)嘧啶-5-基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶(8.3mg)，其为白色粉末。1HNMR(400MHz,CD3OD,298K)δ8.66-8.63(m,1H),8.25-8.21(m,2H),8.09(d,J＝2.2Hz,1H),7.75(s,1H),5.07(d,J＝13.6Hz,2H),3.59-3.40(m,9H),3.02(t,J＝11.9Hz,2H),2.72-2.65(m,5H),2.20(d,J＝11.5Hz,2H),1.69(dd,J＝4.1,12.2Hz,2H),1.22(t,J＝7.5Hz,3H)。MS：计算值406(M+H+)；测量值406(M+H+)。
实例28
2-[1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷
Figure BDA0004045388100000651
类似于实例26的制备，标题化合物通过使用5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-8-甲酸叔丁酯代替步骤4中N-[(3R,4R)-4-甲氧基吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯来进行制备。获得2-[1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷(28.7mg)，其为白色粉末。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.65(s,1H),8.26-8.20(m,2H),8.09(d,J＝2.2Hz,1H),7.75(s,1H),5.05(br d,J＝13.7Hz,2H),4.45(br d,J＝11.5Hz,2H),4.40-4.31(m,2H),4.12-3.95(m,2H),3.66-3.50(m,3H),3.30-3.26(m,2H),3.00(br t,J＝12.0Hz,2H),2.74-2.64(m,5H),2.13(br d,J＝10.9Hz,2H),1.47(dq,J＝4.2,12.1Hz,2H),1.21(t,J＝7.5Hz,3H)。MS：计算值448(M+H+)；测量值448(M+H+)。
实例29
为了确定式(I)化合物在HEK293-Blue-hTLR-7/8/9细胞测定中的活性，进行以下检测。
HEK293-Blue-hTLR-7细胞测定：
稳定的HEK293-Blue-hTLR-7细胞系购自InvivoGen(Cat.#:hkb-htlr7,SanDiego,California,USA)。这些细胞最初设计用于通过监测NF-κB活化来研究人TLR7刺激。将SEAP(分泌的胚胎碱性磷酸酶)报告基因置于与五个NF-κB和AP-1结合位点融合的IFN-β最小启动子的控制下。通过用TLR7配体刺激HEK-Blue hTLR7细胞使NF-κB和AP-1活化以诱导SEAP。因此，在配体(诸如R848(Resiquimod))的刺激下孵育20小时，报告基因表达被TLR7拮抗剂降低。使用QUANTI-BlueTM试剂盒(Cat.#:rep-qb1,Invivogen,San Diego,Ca,USA)在640nm波长下测定细胞培养上清液SEAP报告基因的活性，在碱性磷酸酶存在的条件下该检测培养基变成紫色或蓝色。
HEK293-Blue-hTLR7细胞以250,000～450,000个细胞/mL的密度，以170μL的体积，在含有4.5g/L葡萄糖、50U/mL青霉素、50mg/mL链霉素、100mg/mL Normocin、2mM L-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活的胎牛血清的Dulbecco's Modified Eagle培养基(DMEM)中的96孔板中将孵育，其中，在上述DMEM中，在1％的最终DMSO存在下以连续稀释添加20μL的测试化合物并添加10μL的20uM R848，在37℃下于CO2孵育箱中进行20小时的孵育。然后，将来自每个孔的20μL上清液与180μL Quanti-blue底物溶液在37℃下孵育2小时，并使用分光光度计在620～655nm处读取吸光度。TLR7活化导致下游NF-κB活化的信号传导途径已被广泛接受，因此对类似的报告基因检测方法进行了修改以评估TLR7拮抗剂。
HEK293-Blue-hTLR-8细胞测定：
稳定的HEK293-Blue-hTLR-8细胞系购自InvivoGen(Cat.#:hkb-htlr8,SanDiego,California,USA)。这些细胞最初设计用于通过监测NF-κB活化来研究人TLR8刺激。将SEAP(分泌的胚胎碱性磷酸酶)报告基因置于与五个NF-κB和AP-1结合位点融合的IFN-β最小启动子的控制下。通过用TLR8配体刺激HEK-Blue hTLR8细胞使NF-κB和AP-1活化以诱导SEAP。因此，在配体(诸如R848)的刺激下孵育20小时，报告基因表达被TLR8拮抗剂降低。使用QUANTI-BlueTM试剂盒(Cat.#:rep-qb1,Invivogen,San Diego,Ca,USA)在640nm波长下测定细胞培养上清液SEAP报告基因的活性，在碱性磷酸酶存在的条件下该检测培养基变成紫色或蓝色。
HEK293-Blue-hTLR8细胞以250,000～450,000个细胞/mL的密度，以170μL的体积，在含有4.5g/L葡萄糖、50U/mL青霉素、50mg/mL链霉素、100mg/mL Normocin、2mM L-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活的胎牛血清的Dulbecco's Modified Eagle培养基(DMEM)中的96孔板中将孵育，其中，在上述DMEM中，在1％的最终DMSO存在的条件下以连续稀释度添加20μL的测试化合物并添加10μL的60uM R848，在37℃下于CO2孵育箱中进行20小时的孵育。然后，将来自每个孔的20μL上清液与180μL Quanti-blue底物溶液在37℃下孵育2小时，并使用分光光度计在620～655nm处读取吸光度。TLR8活化导致下游NF-κB活化的信号传导途径已被广泛接受，因此对类似的报告基因检测方法进行了修改以评估TLR8拮抗剂。
HEK293-Blue-hTLR-9细胞测定：
稳定的HEK293-Blue-hTLR-9细胞系购自InvivoGen(Cat.#:hkb-htlr9,SanDiego,California,USA)。这些细胞最初设计用于通过监测NF-κB活化来研究人TLR9刺激。将SEAP(分泌的胚胎碱性磷酸酶)报告基因置于与五个NF-κB和AP-1结合位点融合的IFN-β最小启动子的控制下。通过用TLR9配体刺激HEK-Blue hTLR9细胞使NF-κB和AP-1活化以诱导SEAP。因此，在配体(诸如ODN2006(Cat.#:tlrl-2006-1,Invivogen,San Diego,California,USA))的刺激下孵育20小时，报告基因表达被TLR9拮抗剂降低。使用QUANTI-BlueTM试剂盒(Cat.#:rep-qb1,Invivogen,San Diego,California,USA)在640nm波长下测定细胞培养上清液SEAP报告基因的活性，在碱性磷酸酶存在的条件下该检测培养基变成紫色或蓝色。
HEK293-Blue-hTLR9细胞以250,000～450,000细胞/mL的密度，以170μL的体积，在含有4.5g/L葡萄糖、50U/mL青霉素、50mg/mL链霉素、100mg/mL Normocin、2mM L-谷氨酰胺、10％(v/v)热灭活的胎牛血清的Dulbecco's Modified Eagle培养基(DMEM)中的96孔板中孵育,其中在上述DMEM中，在1％的最终DMSO存在下以连续稀释添加20μL测试化合物并添加10μL的20uM ODN2006，在37℃下于CO2孵育箱中进行20小时的孵育。然后，将来自每个孔的20μL上清液与180μL Quanti-blue底物溶液在37℃下孵育2小时，并使用分光光度计在620～655nm处读取吸光度。TLR9活化导致下游NF-κB活化的信号传导途径已被广泛接受，因此对类似的报告基因检测方法进行了修改以评估TLR9拮抗剂。
式(I)化合物具有<0.1μM的人TLR7和/或TLR8抑制活性(IC50值)和<0.5μM的人TLR9抑制活性。表1显示了本发明化合物的活性数据。
表1.本发明化合物在HEK293-Blue-hTLR-7/8/9细胞测定中的活性
Figure BDA0004045388100000671
Figure BDA0004045388100000681
实例30
hERG通道抑制测定：
hERG通道抑制测定是一种高度灵敏的测量，可鉴定表现出与体内心脏毒性相关的hERG抑制作用的化合物。将hERG K+通道克隆到人体内，并在CHO(中国仓鼠卵巢)细胞系中稳定表达。CHOhERG细胞用于膜片钳(电压钳，全细胞)实验。电压模式刺激细胞以活化hERG通道并传导IKhERG电流(hERG通道的快速延迟向外整流钾电流)。细胞稳定几分钟后，以0.1Hz(6bpm)的刺激频率记录IKhERG的振幅和动力学。此后，将测试化合物以增加的浓度加入制剂中。对于每种浓度，都试图达到稳态效果，通常在3-10分钟内达到此效果，此时施加下一个最高浓度。记录每种药物浓度下IKhERG的振幅和动力学，并将其与对照值进行比较(以100％计)。(参考文献：Redfern WS,Carlsson L,Davis AS,Lynch WG,MacKenzie I,PalethorpeS,Siegl PK,Strang I,Sullivan AT,Wallis R,Camm AJ,Hammond TG.2003；Relationships between preclinical cardiac electrophysiology,clinical QTinterval prolongation and torsade de pointes for a broad range of drugs:evidence for a provisional safety margin in drugdevelopment.Cardiovasc.Res.58:32-45,Sanguinetti MC,Tristani-Firouzi M.2006；hERG potassium channels and cardiac arrhythmia.Nature 440:463-469,Webster R,Leishman D,Walker D.2002；Towards a drug concentration effect relationship forQT prolongation and torsades de pointes.Curr.Opin.Drug Discov.Devel.5:116-26)。
hERG的结果在表2中给出。安全比(hERG IC20/EC50)>30表示通过抑制TLR7/8/9通路与潜在的hERG相关心脏毒性来区分药理学的充分安全窗。
表2.hERG和安全比结果
Figure BDA0004045388100000691
实例31
基于人PBMC细胞的测定
与HEK报告细胞系不同，人外周血单核细胞(PBMC)代表血液中的主要人免疫细胞，其主要由淋巴细胞、单核细胞和树突状细胞组成。这些细胞表达TLR7、TLR8或TLR9，并因此是对相应配体刺激的自然应答者。这些TLR一经活化，PBMC在体外和体内都会分泌相似的细胞因子和趋化因子，因此，TLR7/TLR8/TLR9拮抗剂在人PBMC中的体外效能可很容易地转化为其在体内的药效学应答。
通过密度梯度(Ficoll-PaqueTM PLUS，GE Healthcare life Sciences)从新鲜抽取的肝素化锂(锂肝素加采血管(Lithium Heparin Plus blood Collection tube)，BD
Figure BDA0004045388100000702
)健康供体全血中分离人外周血单核细胞(PBMC)。简而言之，在带有多孔屏障的50mL锥形管(Leucosep管，Greiner bio-one)中，用25mL PBS(不含Ca2+、Mg2+)稀释50mL血液，其中15.5mL Ficoll-Paque在旋转后置于下层。在制动器处于关闭位置的情况下，将试管在800×g(1946rpm)离心20分钟，然后从血沉棕黄层中收集PBMC。然后将细胞在PBS中洗涤两次，并通过在室温下将其悬浮于2mL(红细胞裂解缓冲液，Alfa Aesar)中5至10分钟来裂解红细胞。在PBS中进行最终洗涤后，将PBMC以2×106细胞/mL的最终浓度重悬浮于补充有10％胎牛血清(Sigma)的含GlutaMAXTM(Gibco)的RPMI-1640培养基中，并以150μL/孔(3×105细胞/孔)在组织培养物处理的圆底96孔板(Corning Incorporated)中接种。将在100％ DMSO中溶解并连续稀释的拮抗剂化合物(本发明的化合物)添加到细胞中(重复两次)，以得到最终浓度为1％的DMSO(v/v)。将PBMC用拮抗剂化合物在37℃，5％CO2下孵育30分钟，然后按如下方式(指示最终浓度)在每孔48μL完全培养基中添加各种TLR激动剂：对于TLR9为1μM的CpG ODN 2216(InvivoGen)，对于TLR8为1μg/mL的ORN 06/LyoVec(InvivoGen)，以及对于TLR7和TLR8为1μg/mL的R848(InvivoGen)。将PBMC在37℃下用5％CO2孵育过夜。收集细胞培养上清液，并根据制造商推荐的方案(eBioscience，ThermoFisher Scientific)通过Luminex测定(ProcartaPlexTM Multiplex Immunoassay，Invitrogen)或ELISA程序评估各种人类细胞因子的水平。另用细胞活力测定(CellTiter
Figure BDA0004045388100000703
Luminescent Cell Viability Assay，Promega)检查细胞的活力。
表3.hPBMC结果
Figure BDA0004045388100000701
Figure BDA0004045388100000711
实例32
人微粒体稳定性测定
人微粒体稳定性测定用于早期评估人肝微粒体中测试化合物的代谢稳定性。
将人肝微粒体(Cat.NO.:452117,Corning,USA；Cat.NO.:H2610,Xenotech,USA)在37℃下于100mM磷酸钾缓冲液(pH 7.4)中与测试化合物预孵育10分钟。通过添加NADPH再生系统来引发反应。最终的孵育混合物在100mM磷酸钾缓冲液(pH 7.4)中含1μM测试化合物、0.5mg/mL肝微粒体蛋白、1mM MgCl2、1mM NADP、1单位/mL异柠檬酸脱氢酶和6mM异柠檬酸。在37℃下孵育0、3、6、9、15和30分钟后，将300μL冷乙腈(包括内标)添加到100μL孵育混合物中以终止反应。沉淀和离心后，通过LC-MS/MS测定样品中残留的化合物量。还制备并分析了零和30分钟无NADPH再生系统的对照。通过上述测定进行检测，本发明的化合物显示出良好的人肝微粒体稳定性，结果示如下表4所示。
表4.人肝微粒体对本发明化合物的稳定性
Figure BDA0004045388100000712
Figure BDA0004045388100000721
实例33
3T3体外光毒性测定
光毒性被定义为在皮肤第一次暴露于某些化学物质并随后暴露于光之后引起的毒性反应，或者是类似的在全身性施用化学物质后通过皮肤照射引起的毒性反应。本研究中使用的测定旨在通过使用Balb/c 3T3小鼠成纤维细胞的简单体外细胞毒性测定来检测化学物质的光毒性潜力。该测试的原理是比较在暴露或不暴露于无毒剂量的UVA-光下进行测试时化学物质的细胞毒性。细胞毒性表示为细胞生长速率的剂量依赖性降低，该降低取决于处理后一天对活性染料中性红的吸收。
1.方法
制备储备溶液和测试物品的剂量
即将开始暴露于细胞之前，称重少量物质并在DMSO中新鲜配制。将该原液或适当的DMSO稀释液加入细胞悬液中，以获得所需的最终浓度。所有溶液通常在Eppendorf瓶盖中制备，使用后丢弃。
参比物质
氯丙嗪(HCL)(Sigma，批次/批号：120M1328V)，测试浓度：300μg/mL，溶剂：PBS/3％DMSO
UV吸收光谱的测量
用Lambda-2光谱光度计(Perkin Elmer)在240nm和400nm之间记录吸收光谱本身或用UV-A或UV-B预照射的吸收光谱。
Figure BDA0004045388100000722
Figure BDA0004045388100000731
光毒性的测定
对于该研究，改进的Borenfreund和Puerner的中性红吸收(NRU)分析(Borenfreund,E,Puerner JA.Toxicity determined in vitro by morphologicalalterations and Neutral Red absorption.Toxicology Lett.1985；24:119-124.)根据INVITTOX方案第78号(ERGATT/FRAME data bank of in vitro techniques intoxicology.INVITTOX PROTOCOL No 78.3T3 NRU Phototoxicity Assay.March 1994)进行了调整，以检查测试物品的可能的光毒性潜力。该测定基于中性红染料向培养的鼠成纤维细胞的溶酶体中的主动吸收。因为已知溶酶体膜是许多光毒性化合物的作用部位，所以该测定法可以提供潜在的光毒性损伤的量度。
制备细胞培养物
在37℃在6％ CO2的潮湿气氛中将鼠成纤维细胞克隆A 31(ATCC编号CCL 163，第108代)在含有sDMEM(杜贝克氏基本必需培养基，其中补充有10％小牛血清、2mM L-谷氨酰胺、100单位/ml的青霉素和100μg/ml的链霉素)的175cm2组织培养级烧瓶中培养。在细胞接近汇合之前，通过胰蛋白酶消化将它们从烧瓶中移出。在用于测定之前，在体积为100μl的sDMEM中将细胞以1×104个细胞/孔的浓度转移到96孔微量滴定板中，并使其附着24小时。
暴露于测试物品
为了与鼠成纤维细胞一起孵育，将测试物品稀释在PBS/3％ DMSO中(详细浓度见结果)。
将培养基(杜贝克氏改良伊格尔培养基(DMEM)，GlutaMAX(Gibco Ref 21885-025)，10％胎牛血清(FBS)(Gibco Ref 10270-106)，100IU/ml青霉素和100μg/ml链霉素(Gibco Ref 15140-122))从孔中移出，并且将鼠成纤维细胞用PBS洗涤。然后加入100μL含测试物品的PBS/3％ DMSO，并将靶细胞在37℃用6％ CO2孵育1小时。
UV暴露
对于每个测试物品，按照表6制备微量滴定板。将“UVA板”暴露于约5J/cm2的UVA光下，将“深色板”置于黑暗中，作为细胞毒性对照。含有盐酸氯丙嗪的板作为阳性对照。UV通量使用UV计量器(Dr.
Figure BDA0004045388100000742
RM21)测量。
UV照射后，将测试物品从孔中取出(用PBS的一个洗涤步骤)，并替换为sDMEM。然后将靶细胞在37℃在6％ CO2中孵育过夜。
表5. 96孔微量滴定板设置
Figure BDA0004045388100000741
96孔微量滴定板的制备如下：
每块板含有带有细胞和溶剂但没有测试物品的孔，这些测试物品未与中性红溶液(0％标准品-S1)一起孵育，或用中性红(100％标准品-S2)染色以计算标准细胞活力曲线。标有U01-U08的孔包含不同的测试物品浓度。
中性红吸收
将要使中性红(NR)染色溶液的新鲜制备如下：
·将0.4％的储备水溶液避光并在使用前过滤以除去NR晶体。
·然后在sDMEM中制备1:40稀释的储备溶液，并添加到细胞中。
孵育后，待测孔中装有100μL含有中性红的sDMEM。将靶细胞与NR在37℃在6％ CO2中孵育3小时。
中性红吸收测量
从靶细胞中去除未掺入的中性红，并用至少100μL PBS洗涤孔。然后加入150μL中性红脱附溶液(1％冰醋酸，50％乙醇水溶液)以定量萃取所掺入的染料。在微量滴定板振荡器上剧烈振荡至少10分钟后，直到从细胞中提取出中性红并形成均匀溶液为止，使用SPECTRAmax PLUS微量滴定板读数器(Molecular Devices)测量所得有色溶液在540nm的吸收。
细胞活力的计算
用SOFTmax Pro软件包(Molecular Devices)计算细胞活力。首先根据以下公式使用程序的线性曲线拟合选项，计算两点标准曲线(0％和100％活力)：
Y＝A+(B×X)
(A＝线的y截距；B＝线的斜率；
0％细胞活力＝含溶剂但无测试物品和中性红的细胞；
100％细胞活力＝含溶剂和中性红但无测试物品的细胞)
通过这种方式，计算与浓度增加的测试化学品一起孵育的细胞的活力。氯丙嗪(HCl)作为实验的阳性对照。
IC50值的计算
所有计算均使用SOFTmax Pro分析软件包进行
(分子器件-有关详细信息，请参见：http://www.mbl.edu/jbpc/files/2014/05/SoftMax_Pro_User_Guide.pdf)
光毒性区分因子的计算
为了评估光毒性潜力，比较在有和没有UV暴露下确定的IC50值。
因子＝IC50(-UV)/IC50(+UV)
为区分光毒性和非光毒性测试化学品，应用了＞5的截断因子(Liebsch M,Spielmann H,Balls M,Brand M,
Figure BDA0004045388100000751
B,Dupuis J,Holzhüter HG,Klecak G,L.Eplattenier H,Lovell W,Maurer T,Moldenhauer F,Moore L,Pape W,PfannenbeckerU,Potthast JM,De Silva O,Steiling W,Willshaw A.First results of the EC/COLIPAValidation Project.In Vitro Phototoxicity Testing.In:In Vitro SkinToxicology:Irritation,Phototoxicity,Sensitization；Vol.10.Alternative Methodsin Toxicology,-Eds.Rougier A,Maibach HI,Goldberg AM；Mary Ann Liebert Publ.:New York,USA 1994,pp.243-251)。
即使在最高测试浓度下对鼠成纤维细胞也没有细胞毒性的测试物品，但在UV暴露后显示出细胞活力的强烈剂量依赖性下降，也被认为具有光毒性(Spielmann H,Balls M,Dupuis J,Pape WJW,Pechovitch G,Silva DeO,Holzhütter,HG,Clothier R,Desolle P,Gerberick F,Liebsch M,Lowell WW,Maurer T,Pfannenbecker U,Potthast JM,Csato M,Sladowski D,Steiling W,Brantom P.The international EU/COLIPA in vitrophototoxicity validation study:Results of phase II(blind trial).Part 1:The3T3 NRU phototoxicity test.Toxicology in Vitro 1998,12:305-327)。
测试结果如下所示，本发明的化合物显示出非常好的光毒性。
表6.本发明化合物的3T3测试结果
实例编号 光毒性因子 IC<sub>50</sub>(UV-A)(μg/mL)
14 1 100
实例34
平行人工膜渗透率测定(PAMPA)
PAMPA(平行人工膜渗透率测定)为候选药物的一线渗透率筛选。该测定使用人造磷脂膜来模拟跨细胞吸收条件，并且生成可以用于化合物排序和优化的渗透率值，以及用于预测肠吸收的计算机模型的输入参数。
在疏水性PVDF 96孔微量滴定滤板(MultiScreen滤板，Millipore，#MAIPN4550)中进行渗透实验。每个孔均涂覆有PVDF膜，该膜用含有1％卵磷脂(Sigma,P3556-1G)的5μL十二烷(Sigma,D221104)来进行制备。
典型PAMPA实验方案如下：将供体板放置在Teflon受体板上，该受体板已经预先填充有150μL的100mM PBS缓冲液(2.6g KH2PO4和18.5g K2HPO4.3H2O溶解在约1000mL的超纯水中并且充分混合。使用1M氢氧化钠或1M盐酸来将pH调节至7.40±0.05)，该缓冲液含有5％DMSO。每个受体孔的底部上的过滤器填充有300μL的100mM PBS缓冲液(2.6g KH2PO4和18.5gK2HPO4.3H2O溶解在约1000mL的超纯水中，充分混合。使用1M氢氧化钠或1M盐酸来将pH调节至7.40±0.05)。将所得夹层在室温下于不断振摇(300rpm)下孵育4小时。然后拆开夹层。孵育前，加标20μL配量溶液并且与250μL PBS和130μL猝灭溶液(乙腈)混合，作为T0样品。孵育后，从受体室中收集270μL溶液，然后加入130μL乙腈。从供体室中收集20μL溶液，并且加入250μL PBS和130μL乙腈。所有样品中化合物的浓度均通过LC-MS/MS来进行确定，并且用于确定渗透率(Pe，10-6cm/s)的方程如下。
Figure BDA0004045388100000771
VD为供体孔的体积；VR为受体孔的体积；面积为膜的活性表面积；时间为孵育时间(该测定中为14,400s)；CR和CD分别为完成测定时受体溶液和供体溶液中的化合物浓度；C0为孵育前供体溶液中的化合物浓度。
PAMPA测定的主要读数为以10-6cm/s表示的渗透率值Pe。所确定的次要读数为供体区室和受体区室中化合物的量以及膜中的化合物保留。取决于渗透率和膜保留，将化合物分类为“低”(Pe<0.2并且膜保留<20％)或“中和高”(Pe>＝0.2；或Pe<0.2并且膜保留>＝20％)。每个样品以三重复方式测量；确定渗透常数Pe的标准偏差。当受体溶液和供体溶液中的样品达到平衡(无动力学信息)时、当参比物沉淀(浊度测量)时或在分析限制的情况下，不会显示结果。
表7.平行人工膜渗透率测定(PAMPA)
实例编号 PAMPA Pe(10<sup>-6</sup>cm/s) 膜保留(％) PAMPA类别
2 0.87 22.73 中和高
3 0.8 20.3 中和高
4 1.2 17.52 中和高
5 2.1 17.82 中和高
7 1.2 20.4 中和高
8 0.85 34.49 中和高
9 0.88 49 中和高
10 0.81 17.7 中和高
11 0.84 9.47 中和高
12 1 7.03 中和高
21 0.73 28 中和高
22 0.5 26.45 中和高
实例35
雄性Wister-Han大鼠的单剂量药代动力学(PK)研究
通过对雄性Wister-Han大鼠(供应商：Beijing Vital River Laboratory AnimalTechnology Co.,Ltd)的单剂量PK研究，评估了选定化合物的药代动力学特性。简而言之，两组动物以2mg/kg静脉内施用(IV，推注)或以10mg/kg口服施用(PO，通过管饲法)单剂量的相应的化合物。在给药后5min(仅对于IV)、15min、30min、1h、2h、4h、7h和24h时，经由颈静脉收集血样(大约150μL)。将血样置于含有EDTA-K2抗凝剂的管中，并且在4℃下以3000rpm的转速离心15min以从样品中分离血浆。离心后，将所得血浆转移至干净的管，以用于用LC/MS/MS来进行生物分析。使用非区室分析来计算药代动力学参数。基于IV给药后的血浆浓度-时间曲线来获得分布体积(Vss)、半衰期(T1/2)和清除率(CL)。从PO剂量后的实验观察来直接记录峰值浓度(Cmax)。使用线性梯形法则来计算血浆浓度-时间曲线下面积(AUC0-last)，直至最后可检测浓度。基于IV和PO给药后的剂量归一化AUC0-last来计算生物利用度(F)。
药物的Vss代表药物在身体组织而不是血浆中分布的程度。Vss与分布到组织中的药物量成正比。Vss越高表明组织分布的量越大。
在表9中给出了在IV和PO施用后PK参数的结果。
表8用于本发明的化合物的PK参数
Figure BDA0004045388100000781
实例36
人胞浆醛氧化酶(AO)底物测定
人胞浆AO底物测定用于评估在有和没有选定的醛氧化酶(AO)抑制剂的情况下，在人肝细胞胞质溶胶中的测试化合物的代谢稳定性。在深孔96孔板中进行胞质孵育。在60分钟时间段内监测测试化合物的转化和经氧化的代谢物的形成。孵育体积为0.4mL/孔，并且时间点为0.5分钟、3.5分钟、6.5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、45分钟和60分钟。将人肝细胞胞质溶胶(1mg蛋白质/mL，BD UltraPoolTM人细胞胞质溶胶)和测试化合物(1μM，重复两次)或对照化合物(即，已知的AO底物；1μM，重复两次)在37℃下于水浴中孵育。在每个对应的时间点处，加入120μL猝灭溶液(肼苯哒嗪在乙腈中的溶液，50μM，最终孵育中的总有机浓度≤1％)以停止反应，并且取出40μL样品。将所有样品板充分混合并且以3220×g的转速离心10分钟至20分钟，并且用水或缓冲液稀释上清液以适合于进行LC/MS/MS分析。
为了确定测试化合物和对照化合物的体外消除率，将分析物/内标峰面积比转化为剩余百分比，其方程如下：
Figure BDA0004045388100000791
并且根据剩余％与时间的对数线性图来计算半衰期(分钟)。根据肝细胞胞质溶胶孵育中的底物消失率来计算肝脏内在清除率(CLint)体外值的估计结果，如下所示：CLint(胞质溶胶)＝0.693/半衰期/mg胞质溶胶蛋白/mL。
表9用于本发明的化合物的AO参数
Figure BDA0004045388100000792
*卡巴泽伦是一种醛氧化酶(AO)底物和磷酸二酯酶抑制剂，该卡巴泽伦产生浓度依赖性正性肌力反应。在人体中，该化合物经由AO进行的4-羟基化作用转化为二氮杂萘酮代谢物而几乎完全清除。

Claims (20)

1.一种式(I)化合物，
Figure FDA0004045388090000011
其中
R1为H或C1-6烷基；
R2为C1-6烷基或C1-6烷氧基；
R3为H或C1-6烷基；
R4为H、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基或(C1-6烷基)2氨基；
R5为(5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶基)哌嗪基；(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)哌啶基；(C1-6烷基哌嗪基)哌啶基；(羟基C1-6烷基)哌嗪基；(吗啉基羰基)哌嗪基；1,3,4,6,7,8,9,9a-八氢吡嗪并[1,2-a]吡嗪基；3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；4-氧杂-1,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基；氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基；氨基(C1-6烷基)氮杂环丁烷基；氨基(C1-6烷基)哌啶基；氨基哌啶基或哌嗪基哌啶基；
A为CH、N或CR6，其中R6为C1-6烷基；
或其药学上可接受的盐。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中A为CH或N。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R1为H。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的化合物，其中R3为H。
5.根据权利要求4所述的化合物，其中R4为C1-6烷基、卤代C1-6烷基或C1-6烷氧基。
6.根据权利要求5所述的化合物，其中R5为(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)哌啶基；3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基；哌嗪基哌啶基或5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中R5为(3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基)-1-哌啶基；3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基；4-甲氧基-3-氨基-吡咯烷-1-基；4-哌嗪-1-基-1-哌啶基或5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基。
8.根据权利要求1所述的化合物，其中
R1为H；
R2为C1-6烷基或C1-6烷氧基；
R3为H；
R4为C1-6烷基、卤代C1-6烷基或C1-6烷氧基；
R5为(氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基)哌啶基；3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基；氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基；哌嗪基哌啶基或5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基；
A为CH或N；
或其药学上可接受的盐。
9.根据权利要求8所述的化合物，其中
R1为H；
R2为甲基或甲氧基；
R3为H；
R4为乙基、二氟甲基或甲氧基；
R5为(3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基)-1-哌啶基；3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-3-基；4-甲氧基-3-氨基-吡咯烷-1-基；4-哌嗪-1-基-1-哌啶基或5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷-2-基；
A为CH或N；
或其药学上可接受的盐。
10.一种化合物，其选自：
1-[6-异丙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]哌啶-4-胺；
6-[2-异丙基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；
6-[2-异丙基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；
1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-异丙基-2-吡啶基]哌啶-4-胺；
[(2S)-1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-异丙基-2-吡啶基]哌嗪-2-基]甲醇；
9-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-异丙基-2-吡啶基]-4-氧杂-1,9-二氮杂螺[5.5]十一烷；
6-[2-异丙基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-7,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；
2-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-异丙基-2-吡啶基]-1,3,4,6,7,8,9,9a-八氢吡嗪并[1,2-a]吡嗪；
8-甲基-6-[5-甲基-6-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)-1-哌啶基]-3-吡啶基]咪唑并[1,2-a]吡啶；
6-[2-(二氟甲基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；
6-[2-(二氟甲基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；
1-[1-[6-(二氟甲基)-5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-3-甲基-氮杂环丁烷-3-胺；
3-[6-(二氟甲基)-5-(8-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷；
2-[1-[6-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷；
(3R,4R)-1-[1-[6-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-4-哌啶基]-4-甲氧基-吡咯烷-3-胺；
2-[1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷；
(3R,4R)-1-[1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]-4-哌啶基]-4-甲氧基-吡咯烷-3-胺；
[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-基]-吗啉-2-基-甲酮；
2-[4-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]哌嗪-1-基]-5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶；
1-[5-(2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-乙基-2-吡啶基]-4-甲基-哌啶-4-胺；
6-[2-乙基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-2,8-二甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；
3-[3-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-2-吡啶基]-3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷；
N,N-二甲基-3-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)吡啶-2-胺；
6-[4-[(3R,4R)-3-氨基-4-甲氧基-吡咯烷-1-基]-1-哌啶基]-N,N-二甲基-3-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)吡啶-2-胺；
6-[2-甲氧基-6-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)-3-吡啶基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；
(3R,4R)-1-[1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]-4-哌啶基]-4-甲氧基-吡咯烷-3-胺；
6-[4-乙基-2-(4-哌嗪-1-基-1-哌啶基)嘧啶-5-基]-8-甲基-咪唑并[1,2-a]吡啶；和
2-[1-[4-乙基-5-(8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)嘧啶-2-基]-4-哌啶基]-5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷；
或其药学上可接受的盐。
11.一种用于制备根据权利要求1至10中任一项所述的化合物的方法，其包括以下步骤中的任一者：
a)将式(IX)化合物，
Figure FDA0004045388090000051
用酸脱保护，以得到式(I-1)化合物，
Figure FDA0004045388090000052
b)将式(XI)化合物，
Figure FDA0004045388090000053
用酸脱保护，以得到式(I-2)化合物，
Figure FDA0004045388090000054
c)将式(XV)化合物，
Figure FDA0004045388090000055
用酸脱保护，以得到式(I-3)化合物，
Figure FDA0004045388090000056
其中
PG为保护基团；
L为未取代或经取代的选自以下的基团：哌嗪基、哌啶基、
1,3,4,6,7,8,9,9a-八氢吡嗪并[1,2-a]吡嗪基、3,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基、4-氧杂-1,9-二氮杂螺[5.5]十一烷基、5-氧杂-2,8-二氮杂螺[3.5]壬烷基、氮杂环丁烷基和吡咯烷基；
G为5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶基、氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基、C1-6烷基哌嗪基和哌嗪基；
M为氨基(C1-6烷氧基)吡咯烷基、C1-6烷基哌嗪基或哌嗪基；
n为0、1或2；
在步骤a)、b)和c)中，所述酸为TFA；
R1至R6和A如权利要求1至10中任一项中所定义。
12.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物或药学上可接受的盐，其用作治疗活性物质。
13.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至10中任一项所述的化合物以及治疗惰性载体。
14.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物用于治疗或预防系统性红斑狼疮或狼疮肾炎的用途。
15.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于治疗或预防系统性红斑狼疮或狼疮肾炎。
16.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物用于制备药物的用途，所述药物用于TLR7和TLR8和TLR9拮抗剂。
17.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物或药学上可接受的盐，其用于治疗或预防系统性红斑狼疮或狼疮肾炎。
18.根据权利要求1至10中任一项所述的化合物或药学上可接受的盐，其根据权利要求11所述的方法制备。
19.一种用于治疗或预防系统性红斑狼疮或狼疮肾炎的方法，所述方法包括施用治疗有效量的如权利要求1至10中任一项中所定义的化合物。
20.如前所述的本发明。
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