CN115803356A - 包括至少一种弹性体基质和非硫酸化多糖的生物材料及其用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种包括至少一种弹性体基质和多糖的生物材料，及其在组织增强、重建和/或填充中的用途，优选地在软组织和/或上皮组织缺损的增强、重建和/或填充中的用途，优选地在皮肤和/或粘膜修复中的用途。

Description

包括至少一种弹性体基质和非硫酸化多糖的生物材料及其 用途

技术领域

本发明涉及一种生物材料及其在组织增强、重建和/或填充中的用途，优选地在软组织缺损和/或上皮组织的增强、重建和/或填充中的用途，优选地在皮肤、牙龈和/或粘膜修复中的用途。

背景技术

“膜龈”牙周手术解决了天然牙齿和种植牙周围的与牙龈-粘膜软组织缺损引起的功能、美学和生物学发病有关联的问题。例如，牙龈退缩导致笑容不美观，它也可能是自发和/或诱发过敏的来源，促进深龋的发展，并且导致与牙周炎症有关的功能性不适，这可能会危及牙齿支持组织（牙周），支持组织使牙齿能够固定在上颌骨和下颌骨基底上。

这种牙周病导致边缘牙龈和上皮-结缔连接处相对于釉质牙骨质界向顶端移动。它们的病因是多因素的，与一些易感因素（薄生物型、骨裂、角质化组织的高度和厚度低、牙齿位置不正等）、机械因素如创伤性刷牙、细菌因素（存在菌斑和炎症）或其他因素如咬合创伤、吸烟等）关联。软组织缺损，特别是口腔和牙齿软组织，可能是由于创伤或手术摘除造成的，其经常导致软组织的原始解剖结构的损失。此外，软组织的变化对病人的美学外观产生负面影响，从而影响他们的满意度。根据缺损的大小，组织变形可以通过软组织增强或通过软组织重建或通过手术技术进行美学矫正。

这种组织管理也能够结合其他适应症，如种植体周围组织和上颌骨脊的改善。为了解决这种组织缺失，必须考虑采用外科组织移植技术。

文献中记录了多种手术方法，以实现牙根覆盖（或暴露的种植体表面覆盖），用于牙龈退缩治疗，组织增厚，以获得厚实的生物型，并且增强角质化的牙龈带，这是长期牙周和种植体周围环境耐久性所必需的。这些技术大多需要第二个腭部手术部位，（自体移植取自口腔，这延长了干预时间，并且可能成为术后不良后果的来源，有许多缺点（疼痛、术中或术后大量出血、发病率、延迟愈合、骨坏死、异感或腭部永久感觉缺失都有报道）。这些缺点有时与解剖学上的限制有关，因为腭部太细，不适合提供足够量的组织，或者当患者反对从另一个“供体”部位提取组织样本时，患者会拒绝接受医疗护理，因为这很痛苦，并且可能导致并发症。

第一种修复软组织缺损的解决方案是移植病人身体其他部位的部分结缔组织。这因此被称为结缔组织自体移植。自体移植不会产生防御性免疫反应，因为组织来自于患者。然而，它导致了移植组织中相当多的细胞死亡。移植组织产生新的细胞的能力能够补偿这种损失，但这特别取决于移植组织的血管化。事实上，后者对组织重建至关重要：血管为细胞增殖提供必要的能量和养分。此外，自体移植需要两个手术部位（先切除再移植），这可能会引起并发症（疼痛、脓肿、神经痛）。填充所需的移植物的大小代表了另一个重要的限制。

另一个替代方案是使用异体替代物。

一种照惯例由行医者用于重建软组织和/或填充软组织缺损的异体皮替代物是由Biohorizon公司销售的AlloDerm®产品。AlloDerm®是一种无细胞的人类来源真皮基质，来自于人类捐献者尸体皮肤，经过物理和化学处理，包括组织深皮化，这通过消除所有的细胞内容（上皮细胞、结缔组织、病毒和细菌）导致半桥粒的固定纤维与基底角质细胞分离，这意味着在不改变胶原纤维束或损害基底膜复合物的条件下，去除表皮层的所有细胞成分，而不损害结缔组织基质的成分。这个过程留下了细胞外胶原蛋白，为细胞生长和组织重构提供了基础。

另一种照惯例由行医者用于软组织重建和/或填充软组织缺损的异体替代物是由Botiss公司销售的Mucoderm®产品。Mucoderm®是一种基于来自猪真皮的I/III型天然胶原蛋白和弹性蛋白的基质。

然而，这些产品有许多缺点。事实上，这些产品的成本相对较高，需要很长的术后监测，而且基质的早期暴露会限制移植物的血管化，从而导致覆盖退缩的潜力下降。此外，Mucoderm®会经历一个坏死的过程。AlloDerm®或Mucoderm®被新形成的组织的愈合和替代的过程特别缓慢，大约为10周。事实上，由于其非生命结构，AlloDerm®或Mucoderm®的愈合和替代取决于周围组织中存在的细胞和血管，这导致合并减慢，这可能导致结构和功能不正常。此外，他们的大分子结构与生理上的牙龈不同，尽管它们的大分子组成应该是相似的。事实上，异体替代物的高度密集的胶原蛋白网络似乎限制了体外细胞定植和组织体外和体内重构。事实上，牙龈细胞外基质是不断重构的，以抵御机械应力。然而，观察到的纤维化过程是由于牙龈在移植部位的非生理性重构造成的。此外，外来多核巨细胞的持续存在可能会诱发异体替代物的不良整合和持续的临床红肿。此外，已经证明，Mucoderm®一旦移植后在发生重构过程的愈合过程中会收缩，从而导致伤口的收缩。此外，已经证明，在种植体经受高机械应力时，Mucoderm®会出现崩裂问题，引起高炎症反应。最后，某些异体替代物的动物来源有时可能会导致因宗教或哲学信仰而被拒绝。

其他外科领域也在寻找允许填充由于创伤（烧伤、（剥离、撕裂）、老化或病变造成的组织缺损或损失的生物相容性材料；或在创伤、老化或病变后增强组织的生物相容性材料。例如，许多公司专门设计用于增强妇科、泌尿系统或内脏（或腔壁）手术的种植体。这些材料可以被设计用于治疗血管伤口、消化道伤口、腹脏突出等。因此，这些生物材料可以被用于设计用于治疗盆腔器官脱垂的增强种植体，更特别地用于治疗女性盆腔器官脱垂（前（泌尿系统，膀胱膨出，压力性尿失禁）、中（生殖器，阴道脱垂）和/或后（消化道脱肛）），或男性佩罗尼氏病。然后，该生物材料可以被制成可伸展增强片、膜或任何形状的种植物芯。目前使用的取得不同程度成功的生物材料都是异种来源的（诸如Pelvicol®，由Bard FranceSAS销售）或合成的（聚丙烯，诸如Parietex®，由SOFRADIM销售）。然而，在种植体经受高机械应力，Pelvicol®会出现崩裂问题，引起高炎症反应。

文献US2012/239161描述了一种基于己内酯和琼脂或明胶的弹性体基质。文献CN108034225描述了一种包括弹性体基质和壳聚糖的复合材料的制备方法。

因此，需要提供一种新的生物材料，能够增强、重建和/或填充组织缺损，便于行医者使用，并且在弹性和体积保持方面具有适合种植在软组织中的机械性能。还需要一种具有良好生物相容性和适合组织再生的降解性的生物材料。也需要提供一种非动物来源的生物材料。

发明内容

因此，本发明的主题是一种用于组织修复的生物材料，其包括：

- 至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化糖聚合物。

本发明的另一个主题是该生物材料在组织修复中，优选地在软组织和/或上皮组织修复中，优选地在皮肤和/或粘膜修复中的用途。

本发明的另一个主题是一种用于制备生物材料的方法。

具体实施方式

因此，本发明的主题是一种用于组织修复的生物材料，其包括：

- 至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化糖聚合物。

本发明的优点是提供了一种促进细胞迁移和血管化的多孔的生物可吸收/生物可降解弹性生物材料。根据本发明的生物材料还提供了更好的组织生物整合，没有任何微生物污染的风险。

在本发明的含义中，术语“生物材料”意指用于并且适用于医疗应用的材料。有利地，根据本发明的生物材料是一种物理支撑物，成纤维细胞能够在该物理支撑物的表面和内部粘附、迁移和增殖，该物理支撑物能够吸收或可生物降解，从而允许其被新形成的结缔组织所替代。

有利地，根据本发明的生物材料至少包括一种弹性体基质和非硫酸化多糖，其个别的性质结合在一起，具有极大的改善的整体性能，这些特性是单独使用该至少一种弹性体基质或非硫酸化多糖所不能观察到的。

发明人出人意料地表明，根据本发明的包括至少一种弹性体基质和非硫酸化多糖的生物材料具有：

- 足以承受细胞施加的应力，而且也足以承受待修复区域的再生过程，并且足以成为这个区域软组织的支撑的机械性能，

- 允许成纤维细胞、养分和参与这些过程调节的其他分子的循环，同时允许本发明的生物材料的内部血管化的多孔性和相互连通性，

- 允许细胞粘附和吸附参与这些过程调节的分子的粗糙度。

有利地，本发明人已经表明，该生物材料在植入患者体内后，能够激活胶原蛋白的合成和血管化，使受损组织快速重建。

在本发明的一个特定实施例中，非硫酸化多糖可以通过共价键连接到弹性体基质上。在本发明的另一个特定实施例中，非硫酸化多糖能够被分散在弹性体基质中和其表面。

在本发明的含义中，术语“弹性体基质”意指由单个弹性体或者两种或多种弹性体系统的组合组成的结构，该结构能够包括非硫酸化多糖。有利地，该弹性体基质的异氰酸酯指数在0.1和6.0之间。有利地，异氰酸酯指数在0.1和5.0之间，有利地在0.2和4.9之间，有利地在0.3和4.8之间，有利地在0.4和4.7之间，有利地在0.5和4.7之间，有利地在0.6和4.6之间，有利地在0.7和4.5之间，有利地在0.8和4.5之间，有利地在0.9和4.5之间，有利地在1到4.5之间，有利地在1.05到4.5之间，有利地在1.1和4.5之间，有利地在1.2和4.5之间，有利地在1.3和4.5之间，有利地在1.4和4.5之间，有利地在1.5和4.5之间，有利地在2.0和4.5之间，有利地在2.5和4.5之间，有利地在2.6和4.4之间，有利地在2.7和4.3之间，有利地在2.8和4.2之间，有利地在2.9和4.1之间，有利地在3.0和4.0之间。

有利地，根据本发明的该至少一种弹性体基质具有良好的生物降解性、良好的生物相容性和良好的机械性能。

在本发明的含义中，术语“弹性体”意指一种或多种交联后获得的具有“橡胶弹性”性质的聚合物。在本发明的一个特定实施例中，弹性体必须是生物相容的和可生物降解的。有利地，本发明的生物材料的压缩杨氏模量在1 kPa和1000 kPa之间，优选地在50 kPa和900 kPa之间，优选地在50 kPa和800 kPa之间，优选地在50 kPa和700 kPa之间，优选地在50 kPa和600 kPa之间，优选地在50 kPa和500 kPa之间，优选地在100 kPa和400 kPa之间。

在本发明的含义中，术语“生物相容的”弹性体基质是指这样一种弹性体基质，它有利地既能与患者体内的种植相容，而且与其中包含的非硫酸化多糖相容，并且一旦生物材料被植入人类或动物患者体内，适合于软组织重建。

在本发明的含义中，术语“与患者体内的种植相容”是指弹性体基质在种植后从治疗学角度看具有例如在指令2001/83/EC的含义中的有利的效益/风险比。

在本发明的含义中，“与非硫酸化多糖相容”是指弹性体基质允许合并非硫酸化多糖，而不会或轻微降低该非硫酸化多糖在弹性体基质中的活性。有利地，非硫酸化多糖被合并到弹性体基体中。换言之，在根据本发明制造生物材料的过程中，非硫酸化多糖被直接地合并到弹性体基质中。

在本发明的含义中，术语“可生物降解的”弹性体基质意指可生物再吸收和/或可生物降解和/或可生物吸收的弹性体基质，其共同目标是逐渐消失，在已经种植该材料的人类或动物患者体内弹性体基质有一种或多种不同或互补的降解、溶解或吸收机制。

在本发明的一个特定实施例中，根据本发明的该至少一种弹性体基质包括基于聚(酯-脲-氨酯)的弹性体。

在本发明的一个特别有利的实施例中，根据本发明的生物材料的该至少一种弹性体基质包括基于聚（酯-脲-氨酯）的弹性体，该酯选自己内酯低聚物（PCL）、乳酸低聚物（PLA）、乙醇酸低聚物（PGA）、羟基丁酸酯低聚物（PHB）、羟基戊酸酯低聚物（PVB）、对二氧环己酮低聚物（PDO）、聚（己二酸乙二醇酯）低聚物（PEA）、聚（己二酸丁二醇酯）低聚物（PBA）或其组合。

在一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括聚（己内酯-脲-氨酯）基弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括聚（乳酸-脲-氨酯）基弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括聚（乙醇酸-脲-氨酯）基弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）基弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括聚（羟基丁酸酯-脲-氨酯）基弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括聚（对二氧环己酮-脲-氨酯）基弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括聚（己二酸乙二醇酯-脲-氨酯）基弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括聚（己二酸丁二醇酯-脲-氨酯）基弹性体的基质。

在一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）和聚（乳酸-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）和聚（乙醇酸-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）和聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）和聚（羟基丁酸酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）和聚（对二氧环己酮-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）和聚（己二酸乙二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）和聚（己二酸丁二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（乳酸-脲-氨酯）和聚（乙醇酸-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（乳酸-脲-氨酯）和聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是基于聚（乳酸-脲-氨酯）和聚（羟基丁酸酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（乳酸-脲-氨酯）和聚（对二氧环己酮-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（乳酸-脲-氨酯）和聚（己二酸乙二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（乳酸-脲-氨酯）和聚（己二酸丁二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（乙醇酸-脲-氨酯）和聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（乙醇酸-脲-氨酯）和聚（羟基丁酸酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（乙醇酸-脲-氨酯）和聚（对二氧环己酮-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（乙醇酸-脲-氨酯）和聚（己二酸乙二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（乙醇酸-脲-氨酯）和聚（己二酸丁二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）和聚（羟基丁酸酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）和聚（对二氧环己酮-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）和聚（己二酸乙二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）和聚（己二酸丁二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（羟基丁酸酯-脲-氨酯）和聚（对二氧环己酮-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（羟基丁酸酯-脲-氨酯）和聚（己二酸乙二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（羟基丁酸酯-脲-氨酯）和聚（己二酸丁二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（对二氧环己酮-脲-氨酯）和聚（己二酸乙二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（对二氧环己酮-脲-氨酯）和聚（己二酸丁二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己二酸乙二醇酯-脲-氨酯）和聚（己二酸丁二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）、聚（乳酸-脲-氨酯）和聚（乙醇酸-脲-氨酯）的弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）、聚（乳酸-脲-氨酯）、聚（乙醇酸-脲-氨酯）和聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）、聚（乳酸-脲-氨酯）、聚（乙醇酸-脲-氨酯）和聚（羟基丁酸酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）、聚（乳酸-脲-氨酯）、聚（乙醇酸-脲-氨酯）和聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）、聚（乳酸-脲-氨酯）、聚（乙醇酸-脲-氨酯）、聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）和聚（羟基丁酸酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）、聚（乳酸-脲-氨酯）、聚（乙醇酸-脲-氨酯）、聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）、聚（羟基丁酸酯-脲-氨酯）和聚（对二氧环己酮-脲-氨酯）的弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）、聚（乳酸-脲-氨酯）、聚（乙醇酸-脲-氨酯）、聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）、聚（羟基丁酸酯-脲-氨酯）、聚（对二氧环己酮-脲-氨酯）和聚（己二酸乙二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。

在另一个特定的实施例中，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）、聚（乳酸-脲-氨酯）、聚（乙醇酸-脲-氨酯）、聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）、聚（羟基丁酸酯-脲-氨酯）、聚（对二氧环己酮-脲-氨酯）、聚（己二酸乙二醇酯-脲-氨酯）和聚（己二酸丁二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。

这些弹性体确实允许实现本发明，而且具有细胞相容性、允许恢复缺损组织的生理应力、避免恢复后重新手术以及允许正确重建缺损组织的优点。特别有利地，多孔生物材料的该至少一种弹性体基质是包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体的基质。这种包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体的基质还具有拥有弹性体性质、为基质提供柔性以及适合组织重建的的相互连接的多孔结构。

在本发明的一个特定实施例中，非硫酸化多糖可以选自卡拉胶、藻酸盐、黄原胶、壳聚糖、甲壳素、透明质酸、糖原、纤维素及其衍生物、果胶、淀粉及其衍生物、糊精和木聚糖，或其混合物。有利地，非硫酸化多糖因此可以由单一多糖或非硫酸化多糖的混合物组成。

在本发明的一个特别有利的实施例中，根据本发明的非硫酸化多糖是透明质酸。

在本发明中，术语“透明质酸”是指交联或非交联的透明质酸，单独或作为混合物；可选择地，通过取代进行化学改性的透明质酸，单独或作为混合物；和/或可选择地，以其盐的形式的透明质酸，单独或作为混合物。

有利地，透明质酸是一种高分子量的透明质酸。

在本发明中，术语“高分子量透明质酸”是指分子量大于或等于1000 kDa的透明质酸。相反，术语“低分子量透明质酸”是指分子量小于1000 kDa的透明质酸。

在本发明的一个特定的实施例中，透明质酸的分子量大于或等于1000 kDa，有利地大于或等于10,000 kDa，有利地大于或等于100,000 kDa，有利地大于或等于1,000,000kDa，有利地大于或等于1,500,000 kDa，有利地大于或等于2,000,000 kDa。有利地，根据本发明的透明质酸的分子量是1,500,000 kDa。有利地，高分子量的透明质酸的使用，除了这些非免疫原性和抗血管生成的特性外，还可以在愈合的早期阶段使基质大分子，特别是胶原蛋白的结构化，这是低分子量的透明质酸所不能获得的。

在本发明的一个有利实施例中，根据本发明的生物材料包括：

- 包括基于聚（酯-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，该酯选自己内酯低聚物（PCL）、乳酸低聚物（PLA）、乙醇酸低聚物（PGA）、羟基丁酸酯低聚物（PHB）、羟基戊酸酯低聚物（PVB）、对二氧环己酮低聚物（PDO）、聚（己二酸乙二醇酯）低聚物（PEA）、聚（己二酸丁二醇酯）低聚物（PBA）或其组合。

- 非硫酸化多糖。

在本发明的第一个特定实施例中，根据本发明的多孔生物材料包括：

- 包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化多糖。

在本发明的第二个特定实施例中，根据本发明的多孔生物材料包括：

- 包括基于聚（乳酸-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化多糖。

在本发明的第三个特定实施例中，根据本发明的多孔生物材料包括：

- 包括基于聚（乙醇酸-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化多糖。

在本发明的第四个特定实施例中，根据本发明的多孔生物材料包括：

- 包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）和聚（乳酸-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化多糖。

在本发明的第五个特定实施例中，根据本发明的多孔生物材料包括：

- 包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）和聚（乙醇酸-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化多糖。

在本发明的第六个特定实施例中，根据本发明的多孔生物材料包括：

- 包括基于聚（乳酸-脲-氨酯）和聚（乙醇酸-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化多糖。

在本发明的第七个特定实施例中，根据本发明的多孔生物材料包括：

- 包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）、聚（乳酸-脲-氨酯）和聚（乙醇酸-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化多糖。

在本发明的第八个特定实施例中，根据本发明的多孔生物材料包括：

- 包括基于聚（羟基丁酸酯-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化多糖。

在本发明的第九个特定实施例中，根据本发明的多孔生物材料包括：

- 包括基于聚（羟基戊酸酯-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化多糖。

在本发明的第十个特定实施例中，根据本发明的多孔生物材料包括：

- 包括基于聚（对二氧环己烷-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化多糖。

在本发明的第十一个特定实施例中，根据本发明的多孔生物材料包括：

- 包括基于聚（己二酸乙二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化多糖。

在本发明的第十二个特定实施例中，根据本发明的多孔生物材料包括：

- 包括基于聚（己二酸丁二醇酯-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化多糖。

有利地，根据前述实施例（实施例1至12）中的一个，非硫酸化多糖可以是透明质酸。有利地，透明质酸是一种高分子量的透明质酸。

在本发明的一个特别有利的实施例中，根据本发明的多孔生物材料包括：

- 包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 透明质酸。

有利地，该多孔生物材料包括：

- 包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 高分子量的透明质酸。

有利地，该多孔生物材料仅由以下项组成：

- 包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 高分子量的透明质酸。

在本发明的一个有利实施例中，根据本发明的生物材料包含：

- 包括基于聚（酯-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，该酯选自己内酯低聚物（PCL）、乳酸低聚物（PLA）、乙醇酸低聚物（PGA）、羟基丁酸酯低聚物（PHB）、羟基戊酸酯低聚物（PVB）、对二氧环己酮低聚物（PDO）、聚（己二酸乙二醇酯）低聚物（PEA）、聚（己二酸丁二醇酯）低聚物（PBA）或其组合。

- 非硫酸化多糖。

有利地，该多孔生物材料包含：

- 包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 高分子量的透明质酸。

有利地，本发明人已经证明，透明质酸，特别是高分子量的透明质酸，和包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质的特定组合，允许增加细胞迁移，而且与单独使用包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体的多孔弹性体基质相比，可以在多孔生物材料内部和外围更好地进行血管化和组织重建。实上，加入酸性透明质酸会导致胶原蛋白合成的增加，从而可以获得更有结构的组织。

在本发明的一个特定实施例中，生物材料的多尺度孔径在50 μm和2000 μm之间。在本发明中，术语“孔径”和“孔直径”可以互换使用。所谓的“多尺度孔径”是指孔径的可变分布，也就是说，包括几个微米的孔和较小尺寸的孔，比例可变。举例来说，多尺度孔径在50μ m和2000 μ m之间的生物材料是在同一生物材料中同时包括可变孔径在50 μ m至2000 μm之间的孔。作为非限制性的示例，多尺度孔径在50 μ m和2000 μ m之间的生物材料是指在同一生物材料中同时包括例如孔径为50 μm的孔、孔径为100μm的孔、孔径为500 μm的孔、孔径为1500 μm的孔、孔径为2000 μm的孔。有利地，生物材料的多尺度孔径在50 μm和1200 μm之间。有利地，平均孔径在500 μm和700 μm之间。

有利地，该生物材料的多尺度孔径在500 μm和2000 μm之间。

在本发明的一个有利实施例中，生物材料的孔具有粗糙表面。

在本发明的一个特定实施例中，生物材料的总孔隙度大于或等于60%。在本发明的含义中，术语“总孔隙度”是指材料的空隙体积与生物材料的总体积之比。

有利地，生物材料的总孔隙度大于60%，有利地大于61%，有利地大于62%，有利地大于63%，有利地大于64%，有利地大于65%，有利地大于66%，有利地大于67%，有利地大于68%，有利地大于69%，有利地大于70%，有利地大于71%，有利地大于72%，有利地大于73%，有利地大于74%，有利地大于75%，有利地大于76%，有利地大于77%，有利地大于78%，有利地大于79%，有利地大于80%，有利地大于81%，有利地大于82%，有利地大于83%，有利地大于84%，有利地大于85%，有利地大于86%，有利地大于87%，有利地大于88%，有利地大于89%，有利地大于90%，有利地大于91%，有利地大于92%，有利地大于93%，有利地大于94%，有利地大于95%，有利地大于96%，有利地大于97%，有利地大于98%，有利地大于99%。在本发明的一个有利的实施例中，生物材料的总孔隙度大于80%。有利地，生物材料的总孔隙度在60%和95%之间，有利地在61%和89%之间，有利地在62%和88%之间，有利地在63%和87%之间，有利地在64%和86%之间，有利地在65%和85%之间，有利地在66%和84%之间，有利地在67%和83%之间，有利地在68%和82%之间，有利地在69%和81%之间，有利地在70%和80%之间。在本发明的一个有利的实施例中，多孔生物材料的总孔隙度在70%和95%之间。

在本发明的一个有利实施例中，生物材料的孔间相互连通性在60%和100%之间。有利地，孔间相互连通性在65%和100%之间，有利地在70%和100%之间，有利地在75%和100%之间，有利地在80%和100%之间，有利地在85%和100%之间，有利地在90%和100%之间，有利地在91%和100%之间，有利地在92%和100%之间，有利地在93%和100%之间，有利地在94%和100%之间，有利地在95%和100%之间，有利地在96%和100%之间，有利地在97%和100%之间，有利于在98%和100%之间，有利地在99%和100%之间。在本发明的一个特别有利的实施例中，孔间相互连通性大于65%，有利地大于70%，有利地大于75%，有利地大于80%，有利地大于85%，有利地大于90%，有利地大于91%，有利地大于92%，有利地大于93%，有利地大于94%，有利地大于95%，有利地大于96%，有利地大于97%，有利地大于98%，有利地大于99%。在本发明的一个有利实施例中，生物材料的孔间相互连通性是100%。

在一个有利实施例中，根据本发明的生物材料的孔径在50 μm至2000 μm之间，总孔隙度大于或等于60%，孔间相互连通性在60%和100%之间。

有利地，根据本发明的生物材料的平均孔径在50 μm至1200 μm之间，总孔隙度在60%和95%之间，孔间相互连通性在60%和100%之间。

有利地，根据本发明的生物材料的平均孔径在500 μm至700 μm之间，总孔隙度在70%和95%之间，孔间相互连通性是100%。

在一个特别有利的实施例中，包括至少一种弹性体基质和透明质酸的多孔生物材料，该至少一种弹性体基质包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体，该生物材料的孔径在500 μm至2000 μm之间，总孔隙度在60%和95%之间，孔间相互连通性在60%和100%之间。

有利地，包括至少一种弹性体基质和透明质酸的生物材料，该至少一种弹性体基质包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体，该生物材料的孔径在500 μm至700 μm之间，总孔隙度在70%和95%之间，孔间相互连通性是100%。材料的孔隙度、孔径及其相互连通性对生物材料的血管化和逐渐吸收的能力有很大影响。

因此，由于其总孔隙度在60%和95%之间，其孔径在50 μm和2000 μm之间，其孔间相互连通性为100%，包括至少一种弹性体基质和透明质酸的生物材料，该至少一种弹性体基质包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体，该生物材料特别适用于结缔组织和血管的细胞粘附和迁移。事实上，相互连通的多孔网络使其可以引导细胞的附着和生长，从而引导新形成的组织的生长。此外，透明质酸的存在刺激了血管生成，从而有可能改善生物材料的再血管化和整合。同时，成纤维细胞在生物材料内部和外围粘附和增殖。生物材料的吸收和同步发生的存在于生物材料内部和外围的成纤维细胞产生胶原蛋白，导致其在几个月后被新形成的结缔组织完全替代。因此，包括至少一种弹性体基质和透明质酸的生物材料，该至少一种弹性体基质包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体，该生物材料促进血管再生、软组织的快速整合，并且为自体结缔组织提供安全的替代。

根据本发明的生物材料的尺寸取决于组织缺损的大小和厚度。在本发明的一个特别实施例中，生物材料的尺寸在5 mm至20 cm之间，厚度在100 μm至4 cm之间。

有利地，生物材料的尺寸在5 mm和20 cm之间，有利地在10 mm和20 cm之间，有利地在50 mm和20 cm之间，有利地在100 mm和20 cm之间，有利地在500 mm和20 cm之间，有利地在1 cm和20 cm之间，有利地在2 cm和20 cm之间，有利地在3 cm和20 cm之间，有利地在4cm和20 cm之间，有利地在5 cm和20 cm之间，有利地在6 cm和20 cm之间，有利地在7 cm和20 cm之间，有利地在8 cm和20 cm之间，有利地在9 cm和20 cm之间，有利地在10 cm和20cm之间，有利地在11 cm和20 cm之间，有利地在12 cm和20 cm之间，有利地在13 cm和20 cm之间，有利于14 cm和20 cm之间，有利地在15 cm和20 cm之间。

有利地，生物材料的厚度在100 µm和4 cm之间，有利地在200 µm和4 cm之间，有利地在500 µm和4 cm之间，有利地在1 mm和4 cm之间，有利地在2 mm和4 cm之间，有利地在3mm和4 cm之间，有利地在4 mm和4 cm之间，有利地在5 mm和4 cm之间，有利地在6 mm和4 cm之间，有利地在7 mm和4 cm之间，有利地在8 mm和4 cm之间，有利地在9 mm和4 cm之间，有利地在1 cm和4 cm之间，有利于1 cm和3 cm之间。

在一个特别有利的实施例中，当根据本发明的生物材料被用于增强、重建和/或填充粘膜，特别是牙龈的组织缺损时，生物材料的厚度在1至3 mm之间。

在一个特别有利的实施例中，生物材料的表面积是至少25 mm²。有利地，生物材料的表面积是至少50 mm²，有利地至少100 mm²，有利地至少150 mm²，有利地至少200 mm²，有利地至少250 mm²，有利地至少300 mm²，有利地至少350 mm²，有利地至少400 mm²，有利地至少450 mm²，有利地至少500 mm²，有利地至少550 mm²，有利地至少600 mm²，有利地至少650mm²，有利地至少700 mm²，有利地至少750 mm²，有利地至少800 mm²，有利地至少850 mm²，有利地至少900 mm²，有利地至少950 mm²，有利地至少1000 mm²，有利地至少15 cm²，有利地至少20 cm²，有利地至少25 cm²，有利地至少30 cm²，有利地至少35 cm²，有利地至少40 cm²，有利地至少45 cm²，有利地至少50 cm²，有利地至少55 cm²，有利地至少60 cm²，有利地至少65cm²，有利地至少70 cm²，有利地至少75 cm²，有利地至少80 cm²，有利地至少85 cm²，有利地至少90 cm²，有利地至少95 cm²，有利地至少100 cm²，有利地至少150 cm²，有利地至少200cm²，有利地至少250 cm²，有利地至少300 cm²，有利地至少350 cm²，有利地至少400 cm²，在一个有利的实施例中，生物材料的体积在25 mm²和400 cm²之间。

在本发明的一个特定实施例中，生物材料的体积是至少1 mm³。有利地，生物材料的体积是至少2 mm³，有利地至少3 mm³，有利地至少4 mm³，有利地至少5 mm³，有利地至少6mm³，有利地至少7 mm³，有利地至少8 mm³，有利地至少9 mm³，有利地至少10 mm³，有利地至少20 mm³，有利地至少30 mm³，有利地至少40 mm³，有利地至少50 cm³，有利地至少60 mm³，有利地至少70 mm³，有利地至少80 mm³，有利地至少90 mm³，有利地至少100 mm³，有利地至少150mm³，有利地至少200 mm³，有利地至少250 mm³，有利地至少300 mm³，有利地至少350 mm³，有利地至少400 mm³，有利地至少450 mm³，有利地至少500 mm³，有利地至少550 mm³，有利地至少600 mm³，有利地至少650 mm³，有利地至少700 mm³，有利地至少750 mm³，有利地至少800mm³，有利地至少850 mm³，有利地至少900 mm³，有利地至少950 mm³，有利地至少1 cm³，有利地至少1.5 cm³，有利地至少2 cm³，有利地至少2.5 cm³，有利地至少3 cm³，有利地至少3.5cm³，有利地至少4 cm³，有利地至少4.5 cm³，有利地至少5 cm³，有利地至少5.5 cm³，有利地至少6 cm³，有利地至少6.5 cm³，有利地至少7 cm³，有利地至少7.5 cm³，有利地至少8 cm³，有利地至少8.5 cm³，有利地至少9 cm³，有利地至少9.5 cm³，有利地至少10 cm³。在一个有利的实施例中，生物材料的体积在1 mm³和10 cm³之间。

在本发明的一个有利的实施例中，根据本发明的生物材料可以是海绵、薄膜、膜、颗粒、单块或伤口敷料的形式。

在本发明的一个有利实施例中，根据本发明的生物材料被单独使用。在本发明的另一个实施例中，生物材料可以进一步与活性剂结合使用。有利地，活性剂被布置在根据本发明的生物材料的孔内，部分或完全地覆盖生物材料的孔。有利地，活性剂可以通过以下方法之一添加：用活性剂覆盖生物材料，将生物材料浸泡在活性剂中，将活性剂喷洒到生物材料上，将活性剂蒸到生物材料上，或本领域技术人员熟知的使之有可以填充和/或填入该生物材料的孔的任何其他技术。有利地，活性剂可以是对于应用到植入部位具有理想的生理特性的任何治疗或药物活性剂（包括但不限于核酸、蛋白质、脂质和碳水化合物）。治疗剂包括但不限于抗感染剂，如抗生素和抗病毒剂；化学治疗剂（如抗癌剂）；抗排斥剂；镇痛剂和镇痛制品；抗炎剂；激素，如类固醇；生长因子（包括但不限于，细胞因子、趋化因子和白细胞介素），凝血因子（因子VII，VIII，IX，X，XI，XII，V），白蛋白，纤维蛋白原、冯·维勒布兰德因子（Von Willebrand factor），凝血酶抑制剂，抗血栓形成剂，溶栓剂，纤维蛋白溶解剂，血管痉挛抑制剂，钙通道抑制剂，血管扩张剂，抗高血压剂，抗菌剂，抗生素，抗体，表面糖蛋白受体抑制剂，抗血小板药物，抗有丝分裂药物，微管抑制剂，抗血小板药物，抗有丝分裂剂，微管抑制剂，肌动蛋白抑制剂抗分泌剂，重构抑制剂，反义核苷酸，抗代谢物，抗增殖剂，抗癌化学治疗剂，抗炎类固醇，非甾体抗炎剂，免疫抑制剂，生长激素拮抗剂，生长因子，多巴胺激动剂，放射治疗剂，肽，蛋白质，酶，细胞外基质成分，血管紧张素转换酶（ACE）抑制剂，自由基清除剂，螯合剂，抗氧化剂，抗聚合酶，抗病毒剂，光动力治疗剂和基因治疗剂以及其他天然存在的或经基因改造的蛋白质，多糖，糖蛋白和脂蛋白，或其组合，该列表不具有限制性。在本发明的一个特别有利的实施例中，活性剂是治疗剂的组合，特别是抗生素和生长因子的组合。

本发明的另一个方面涉及根据本发明的生物材料在增强、重建和/或填充组织缺损中的用途。在本发明的含义中，术语“组织缺损的增强”意指由于生物材料的生物相容性，特别是由于透明质酸的存在，通过诱导胶原蛋白合成和/或胶原蛋白沉积来增加组织密度。

在本发明的含义中，术语“组织缺损的重建”意指由于生物材料的生物相容性，特别是由于透明质酸的存在，通过诱导胶原蛋白的合成和/或胶原蛋白的沉积来修复组织缺损。

在本发明的含义中，术语“组织缺损的填充”意指由于生物材料的生物相容性，特别是由于透明质酸的存在，通过诱导胶原蛋白合成和/或胶原蛋白沉积来填充组织缺损。

在本发明的一个特定实施例中，组织增强、重建和/或填充按体积大于或等于待增强、重建和/或填充的组织缺损的体积的5%。有利地，组织增强、重建和/或填充按体积大于或等于该组织的体积的6%。有利地，组织增强、重建和/或填充按体积大于或等于待增强、重建和/或填充的组织缺损的体积的7%，有利地大于或等于8%，有利地大于或等于9%，有利地大于或等于10%，有利地大于或等于11%，有利地大于或等于12%，有利地大于或等于13%，有利地大于或等于14%，有利地大于或等于15%，有利地大于或等于16%，有利地大于或等于17%，有利地大于或等于18%，有利地大于或等于19%，有利地大于或等于20%，有利地大于或等于21%，有利地大于或等于22%，有利地大于或等于23%，有利地大于或等于24%，有利地大于或等于25%，有利地大于或等于26%，有利地大于或等于27%，有利地大于或等于28%，有利地大于或等于29%，有利地大于或等于30%，有利地大于或等于31%，有利地大于或等于32%，有利地大于或等于33%，有利地大于或等于34%，有利地大于或等于35%，有利地大于或等于36%，有利地大于或等于37%，有利地大于或等于38%，有利地大于或等于39%，有利地大于或等于40%，有利地大于或等于41%，有利地大于或等于42%，有利地大于或等于43%，有利地大于或等于44%，有利地大于或等于45%，有利地大于或等于46%，有利地大于或等于47%，有利地大于或等于48%，有利地大于或等于49%。有利地，组织增强、重建和/或填充按体积小于或等于待增强、重建和/或填充的组织缺损的体积的50%。

在本发明的一个特定的实施例中，根据本发明的多孔生物材料能够被用于人类或动物的组织增强、重建和/或填充。举例来说，动物可以是马、小马、狗、猫、老鼠、小鼠、猪、母猪、奶牛、肉牛、公牛、小牛、山羊、绵羊、公羊、母羊羔、羔羊、驴、骆驼、单峰骆驼，该列表并不具有局限性。

有利地，根据本发明的多孔生物材料能够被用于软组织和/或上皮组织的缺损的增强、重建和/或填充。

在本发明的含义中，术语“软组织”意指非骨质且不由上皮细胞组成的组织，它们围绕、支持和连接器官和其他组织。有利地，软组织围绕、支持和连接器官和其他身体部位；赋予身体形状和结构；保护器官；使液体，诸如血液，从一个身体部位循环到另一个；储存能量。

在本发明的一个特定的实施例中，根据本发明的生物材料能够被用于人类或动物来源的软组织增强、重建和/或填充。有利地，软组织可以选自：纤维组织，肌肉，特别是平滑肌、骨骼肌和心肌，滑膜组织，血管，淋巴管，内脏和神经，该列表不具有局限性。

在一个特定的实施例中，根据本发明的生物材料能够被用于人类或动物来源的任何类型上皮组织的增强、重建和/或填充。有利地，根据本发明的生物材料能够被用于在皮肤和/或粘膜中增强、重建和/或填充缺损。有利地，粘膜可以是口腔黏膜。

在一个特定的实施例中，根据本发明的生物材料能够被用于增强、重建和/或填充任何类型的上皮组织，有利地用于增强、重建和/或填充牙龈，特别是获得牙根覆盖，用于治疗牙龈退缩，增厚组织以获得厚实的生物型，增加角质化牙龈带，恢复牙齿的支撑和锚定，或重建牙周炎后的组织。

在一个特定的实施例中，根据本发明的生物材料能够被用于增强软组织和/或上皮组织的缺损，特别是在妇科、泌尿系统或内脏（或脏壁）手术的情况下，例如，增强血管伤口、消化道伤口或腹脏突出。在另一个实施例中，根据本发明的生物材料可以被用于设计用于治疗盆腔器官脱垂的增强种植体，更特别地用于治疗女性盆腔器官脱垂：前期（泌尿系统，膀胱膨出，压力性尿失禁）、中期（生殖器，阴道脱垂）和/或后期（消化道脱肛））。

本发明的另一个方面涉及根据本发明的生物材料在烧伤治疗中的用途。有利地，根据本发明的生物材料对治疗烧伤特别有用。有利地，根据本发明的生物材料特别对治疗热烧伤、冷烧伤、电烧伤、化学烧伤和放射性烧伤及光化学烧伤特别有用。

本发明的一个方面涉及根据本发明的生物材料在治疗烧伤，有利地在治疗热烧伤、冷烧伤、电烧伤、化学烧伤、辐射烧伤和光化学烧伤中的用途。

在本发明的含义中，“热烧伤”是指由外部接触火焰、热蒸汽或沸腾的液体，或由接触引起的外部热烧伤（其严重程度取决于物体的温度和接触时间），以及涉及呼吸道或消化道并且由吸收或吸入热产品（食物、气体，特别是燃烧产生的气体）或腐蚀性物质（化学产品）引起的内部热烧伤。

在本发明中，“冷烧伤“是指冻伤。冻伤可能是由寒冷的东西和摩擦引起的。

在本发明中，术语“电烧伤”意指由于电弧（爆燃造成的热烧伤）或直接接触导体（总是很深）而导致的与皮肤、粘膜（可选地是内部的）、组织的软部位有关的部分或全部破坏。

在本发明中，术语“化学烧伤”意指由于强酸（盐酸、硫酸、硝酸）或强碱（氢氧化钠、氢氧化钾）的腐蚀性作用而导致的与皮肤、粘膜（可选地是内部的）、组织的软部位有关的部分或全部破坏。

在本发明中，术语“放射性烧伤”是指由电磁辐射引起的、由冠状细胞体引起的烧伤或放射性皮炎。

在本发明的一个特定的实施例中，根据本发明的生物材料能够被用于人类或动物的烧伤治疗。举例来说，动物可以是马、小马、狗、猫、老鼠、小鼠、猪、母猪、奶牛、公牛、肉牛、小牛、山羊、绵羊、公羊、母羊羔、羔羊、驴、骆驼、单峰骆驼，该列表并不具有局限性。

本发明的另一个方面涉及一种制备根据本发明的生物材料的方法。在本发明的一个特定的实施例中，根据本发明的生物材料通过poly-HIPE方法（具有高内相的乳液的形成和聚合/交联）获得。高内相乳液或HIPE由不混溶的液/液分散系统组成，其中内相，也称为分散相，所占体积大于乳液总体积的74 - 75%，也就是说，体积大于单分散球体的紧凑包装在几何学上可能的体积。

在一个特定的实施例中，该制备生物材料的方法包括以下步骤：

a) 制备包括合成聚(酯-脲-氨酯)所需的化合物的有机相，

b) 将非硫酸化多糖溶于水液相中，然后将溶解的非硫酸化多糖加入步骤a）的有机相中，形成乳液，

c) 将在步骤b)获得的乳液进行聚合/交联，以获得该生物材料，

d) 清洗在步骤c)中获得的该生物材料，和

e) 干燥在步骤d)中获得的该生物材料。

在本发明的一个实施例中，步骤a)在于制备包括合成聚(酯-聚氨酯)所需的化合物的有机相。有利地，有机相还包括低聚物、有机溶剂、交联剂、催化剂和表面活性剂。有利地，有机相包括有机溶剂、聚己内酯三醇低聚物、司盘80表面活性剂、六亚甲基二异氰酸酯交联剂（HMDI）和二月桂酸二丁基锡催化剂（DBTDL）。有利地，有机溶剂是甲苯。

在一个特定的实施例中，步骤a)包括第一步骤a1)将聚己内酯三醇低聚物和司盘80表面活性剂溶于有机溶剂中，然后是第二步骤a2)将交联剂HMDI和催化剂DBTDL加入步骤a1)的溶液中以形成有机相。在本发明的一个有利的实施例中，使用了2.4 mL有机溶剂，1.3g聚己内酯三醇低聚物，1.3 g司盘80表面活性剂，1.04 mL HMDI交联剂和12滴DBTDL催化剂。有利地，本领域的技术人员将知道如何根据多孔生物材料所需孔径来调整甲苯、聚己内酯三醇低聚物、司盘80表面活性剂、HMDI交联剂和DBTDL催化剂的用量。有利地，有机溶剂是甲苯。

在一个特定的实施例中，步骤b)的过程在于将非硫酸化多糖溶解于水液相中，然后将溶解的非硫酸化多糖加入步骤a）的有机相中，形成乳液。在本发明的一个特定实施例中，非硫酸化多糖必须已经被溶解于水液相中。在本发明的一个特定实施例中，水液相是无菌蒸馏水。有利地，本领域技术人员将知道如何根据生物材料所需的孔径来调整水的用量。在本发明的一个有利实施例中，蒸馏水的用量为50 mL。

在本发明的一个特定实施例中，在搅拌的同时将水液相逐渐倒入有机相中，直到获得乳液。有利地，非硫酸化多糖的引入浓度为至少0.5 mg/mL，有利地浓度至少为1.0 mg/mL，有利地浓度至少为1.5 mg/mL，有利地浓度至少为2.0 mg/mL，有利地浓度至少为2.5mg/mL，有利地浓度至少为3.0 mg/mL，有利地浓度至少为3.5 mg/mL，有利地浓度至少为4.0mg/mL，有利地浓度至少为4.5 mg/mL，有利地浓度至少为5.0 mg/mL，有利地浓度至少为5.5mg/mL，有利地浓度至少为6.0 mg/mL，有利地浓度至少为6.5 mg/mL，有利地浓度至少为7.0mg/mL，有利地浓度至少为7. 5 mg/mL，有利地浓度至少为8.0 mg/mL，有利地浓度至少为8.5 mg/mL，有利地浓度至少为9.0 mg/mL，有利地浓度至少为9.5 mg/mL，有利地浓度至少为10.0 mg/mL，有利地至少10.5 mg/mL的浓度，有利地至少11.0 mg/mL的浓度，有利地至少11.5 mg/mL的浓度，有利地至少12.0 mg/mL的浓度，有利地至少12.5 mg/mL，有利地浓度至少为13.0 mg/mL，有利地浓度至少为13.5 mg/mL，有利地浓度至少为14.0 mg/mL，有利地浓度至少为14.5 mg/mL，有利地浓度至少为15.0 mg/mL，有利地浓度至少为15.5 mg/mL，有利地浓度至少为16.0 mg/mL，有利地浓度至少为16.5 mg/mL，有利地浓度至少为17.0 mg/mL，有利地浓度至少为17.5 mg/mL，有利地浓度至少为18.0 mg/mL，有利地浓度至少为18.5mg/mL，有利地浓度至少为19.0 mg/mL，有利地浓度至少为19.5 mg/mL，有利地浓度至少为20.0 mg/mL。有利地，非硫酸化多糖的引入浓度在0.5 mg/mL和20 mg/mL之间。

在一个特定的实施例中，多糖是透明质酸，有利地是高分子量的透明质酸。有利地，透明质酸的引入浓度为至少0.5 mg/mL，有利地浓度至少为1.0 mg/mL，有利地浓度至少为1.5 mg/mL，有利地浓度至少为2.0 mg/mL，有利地浓度至少为2.5 mg/mL，有利地浓度至少为3.0 mg/mL，有利地浓度至少为3.5 mg/mL，有利地浓度至少为4.0 mg/mL，有利地浓度至少为4.5 mg/mL，有利地浓度至少为5.0 mg/mL，有利地浓度至少为5.5 mg/mL，有利地浓度至少为6.0 mg/mL，有利地浓度至少为6.5 mg/mL，有利地浓度至少为7.0 mg/mL，有利地浓度至少为7. 5 mg/mL，有利地浓度至少为8.0 mg/mL，有利地浓度至少为8.5 mg/mL，有利地浓度至少为9.0 mg/mL，有利地浓度至少为9.5 mg/mL，有利地浓度至少为10.0 mg/mL，有利地至少10.5 mg/mL的浓度，有利地至少11.0 mg/mL的浓度，有利地至少11.5 mg/mL的浓度，有利地至少12.0 mg/mL的浓度，有利地至少12.5 mg/mL，有利地浓度至少为13.0 mg/mL，有利地浓度至少为13.5 mg/mL，有利地浓度至少为14.0 mg/mL，有利地浓度至少为14.5mg/mL，有利地浓度至少为15.0 mg/mL，有利地浓度至少为15.5 mg/mL，有利地浓度至少为16.0 mg/mL，有利地浓度至少为16.5 mg/mL，有利地浓度至少为17.0 mg/mL，有利地浓度至少为17.5 mg/mL，有利地浓度至少为18.0 mg/mL，有利地浓度至少为18.5 mg/mL，有利地浓度至少为19.0 mg/mL，有利地浓度至少为19.5 mg/mL，有利地浓度至少为20.0 mg/mL。

在本发明的一个特定实施例中，非硫酸化多糖的量相对于存在于乳液中的水液相的重量按重量计（w/w）在0.05%和2.0%之间。有利地，非硫酸化多糖相对于存在于乳液中的水液相的重量按重量计（w/w）为至少0.05%，有利地至少0.06%，有利地至少0.07%，有利地至少0.08%，有利地至少0.09%，有利地至少0.10%，有利地至少0.20%，有利地至少0.30%，有利地至少0.40%，有利地至少0.50%，有利地至少0.60%，有利地至少0.70%，有利地至少0.80%，有利地至少0.90%，有利地至少1.0%，有利地至少1.10%，有利地至少1.20%，有利地至少1.30%，有利地至少1.40%，有利地至少1.50%，有利地至少1.60%，有利地至少1.70%，有利地至少1.80%，有利地至少1.90%，有利地至少2.0%。有利地，非硫酸化多糖的量相对于存在于乳液中的水液相的重量来说按重量计（w/w）在0.05%和2.0%之间。有利地，非硫酸化多糖的量相对于存在于乳液中的水液相的重量来说按重量计（w/w）在0.06%和2.0%之间，有利地在0.07%和2.0%之间，有利地在0.08%和2.0%之间，有利地在0.09%和2.0%之间，有利地在0.10%和2%之间，有利地在0.20%和2.0%之间，有利地在0.30%和2.0%之间，有利地在0.40%和2.0%之间，有利地在0.50%和2.0%之间，有利地在0.60%和2.0%之间，有利地在0.70%和2.0%之间，有利地在0.80%和2.0%之间，有利地在0.90%和2.0%之间，有利地在1.0%和2.0%之间，有利地在1.10%和2.0%之间，有利地在1.20%和2.0%之间，有利地在1.30%和2.0%之间，有利地在1.40%和2.0%之间，有利地在1.50%和2.0%之间，有利地在1.60%和2.0%之间，有利地在1.70%和2.0%之间，有利地在1.80%和2.0%之间，有利地在1.90%和2.0%之间。在本发明的一个特定实施例中，非硫酸化多糖的量相对于存在于乳液中的水液相的重量来说按重量计（w/w）为0.10 %。

在本发明的一个特定实施例中，透明质酸的量相对于存在于乳液中的水液相的重量来说按重量计（w/w）在0.05%和2.0%之间。有利地，透明质酸相对于存在于乳液中的水液相的重量按重量计（w/w）为至少0.05%，有利地至少0.06%，有利地至少0.07%，有利地至少0.08%，有利地至少0.09%，有利地至少0.10%，有利地至少0.20%，有利地至少0.30%，有利地至少0.40%，有利地至少0.50%，有利地至少0.60%，有利地至少0.70%，有利地至少0.80%，有利地至少0.90%，有利地至少1.0%，有利地至少1.10%，有利地至少1.20%，有利地至少1.30%，有利地至少1.40%，有利地至少1.50%，有利地至少1.60%，有利地至少1.70%，有利地至少1.80%，有利地至少1.90%，有利地至少2.0%。有利地，透明质酸的量相对于存在于乳液中的水液相的重量来说按重量计（w/w）在0.05%和2.0%之间。有利地，非硫酸化多糖的量相对于存在于乳液中的水液相的重量来说按重量计（w/w）在0.06%和2.0%之间，有利地在0.07%和2.0%之间，有利地在0.08%和2.0%之间，有利地在0.09%和2.0%之间，有利地在0.10%和2%之间，有利地在0.20%和2.0%之间，有利地在0.30%和2.0%之间，有利地在0.40%和2.0%之间，有利地在0.50%和2.0%之间，有利地在0.60%和2.0%之间，有利地在0.70%和2.0%之间，有利地在0.80%和2.0%之间，有利地在0.90%和2.0%之间，有利地在1.0%和2.0%之间，有利地在1.10%和2.0%之间，有利地在1.20%和2.0%之间，有利地在1.30%和2.0%之间，有利地在1.40%和2.0%之间，有利地在1.50%和2.0%之间，有利地在1.60%和2.0%之间，有利地在1.70%和2.0%之间，有利地在1.80%和2.0%之间，有利地在1.90%和2.0%之间。在本发明的一个特定实施例中，透明质酸相对于存在于乳液中的水液相的重量来说按重量计（w/w）为0.10 %。

在一个特定的实施例中，该方法的步骤c)包括聚合/交联步骤b)中获得的乳液，以获得根据本发明的该生物材料。有利地，交联是在模具中进行的，以便赋予生物材料所需的形状。有利地，将步骤b)中获得的乳液在30 ℃和80 ℃之间的温度下放置10至30小时。有利地，将步骤b)中获得的乳液放置于35 ℃至65 ℃之间的温度下，有利地置于40 ℃至60 ℃之间的温度下，有利地置于45 ℃至65 ℃之间的温度下，有利地置于50 ℃至60 ℃之间的温度下，有利地置于55 ℃的温度下。有利地，将步骤b)中获得的乳液在30 ℃至70 ℃的温度下放置10至30小时，有利地放置11至29小时，有利地放置12至29小时，有利地放置13至28小时，有利地放置14至27小时，有利地放置15至27小时，有利地放置16至27小时，有利地放置17至27小时，有利地放置18至26小时，有利地放置19至25小时，有利地放置20至24小时，有利地放置22小时。有利地，本领域技术人员将知道如何根据生物材料所需的孔径来调整温度。

在本发明的一个特定实施例中，步骤c)中获得的根据本发明的生物材料在步骤d)之前被退火。有利地，在步骤c)中获得的根据本发明的生物材料在至少50 ℃的温度下退火至少1小时。有利地，在步骤c)中获得的根据本发明的生物材料在100 ℃的温度下退火2小时。

在一个特定的实施例中，步骤d)的清洗步骤可以去除在交联过程中合成聚（酯-脲-氨酯）所需的试剂中未发生反应的试剂，以及仍然存在的表面活性剂和催化剂。有利地，步骤d)的清洗是使用以下产品之一执行的：二氯甲烷、二氯甲烷/正己烷、正己烷、水、这些产品的混合物或这些产品的连续应用。有利地，步骤d)的清洗是通过使根据本发明的干燥的多孔生物材料与二氯甲烷接触至少24小时，然后用二氯甲烷/正己烷(50%体积/50%体积)清洗至少24小时，接着用正己烷清洗至少24小时，然后用蒸馏水最后清洗至少24小时。

在一个特定的实施例中，根据本发明的方法还可以包括在步骤c)和步骤d)之间的干燥步骤。有利地，这个干燥步骤可以通过在露天或烤箱中干燥来执行。有利地，本领域技术人员将知道如何根据待干燥的材料来调整烤箱温度。有利地，干燥是通过露天晾晒至少7天来进行的。

有利地，步骤e)的干燥可以通过在露天或烤箱中干燥来执行。有利地，本领域技术人员将知道如何根据待干燥的材料来调整烤箱温度。有利地，干燥是通过露天晾晒至少15天来进行的。

在一个特定的实施例中，根据本发明的方法还可以包括在干燥该生物材料的步骤e)之后的灭菌步骤f)。在一个特定的实施例中，灭菌步骤f)能够直接在干燥的生物材料上执行，或者在水介质中对生物材料进行真空清洗后进行。有利地，灭菌是在水介质中进行真空清洗后执行。

在一个实施例中，灭菌步骤f)能够按以下方式执行：

f1) 将根据本发明的生物材料在真空下放置在无菌水中1小时，

f2) 更换无菌水，并且将根据本发明的生物材料在真空下放置在更换的无菌水中4小时，

f3) 将得自步骤e2)的根据本发明的生物材料在真空下放置在70%乙醇中1小时，

f4) 用无菌水更换70%乙醇，并且将来自步骤e3)的根据本发明的生物材料在环境压力下放置在无菌水中过夜，

f5) 将步骤f4)产生的根据本发明的生物材料在高压灭菌器中用水消毒。

在另一个实施例中，灭菌步骤f)能够通过gamma（γ）辐照执行。在另一个实施例中，灭菌步骤f)能够通过beta（β）辐照执行。有利地，β和/或γ辐照的剂量可以在15至45kGy之间。有利地，β和/或γ辐照的剂量是25 kGy。有利地，β和/或γ辐照的剂量是15 kGy。

在另一个实施例中，灭菌步骤f)能够通过使生物材料与环氧乙烷接触来执行。

在另一个实施例中，灭菌步骤f)能够通过使生物材料与来自气体的等离子体相接触来执行。

在另一个实施例中，灭菌步骤f)能够通过用电子束（E-beam，Faisceau E）照射生物材料来执行。电子束辐照治疗有以下优点：缩短处理时间，提高供应线的效率，减少弹性体基质被削弱的风险，减少生物材料的氧化损伤，弹性体基质没有颜色变化，使其清洁和安全。此外，电子束辐照处理是一种生态处理。

在一个特定的实施例中，根据本发明的方法还可以包括在灭菌步骤f)之后保存该生物材料的步骤g)。有利地，保存该材料的步骤g)通过使生物材料与70%乙醇接触来执行，直到使用为止。

在本发明的一个特定的实施例中，该生物材料的制备方法包括以下步骤：

a) 制备包括合成聚（酯-脲-氨酯）所需的化合物的有机相，

b) 将非硫酸化多糖溶解在水液相中，然后将溶解的非硫酸化多糖加入步骤a)的有机相中，形成乳液，

c) 将在步骤b)获得的乳液进行聚合/交联，以获得该多孔生物材料，和

d) 清洗在步骤c)中获得的该多孔生物材料，

e) 干燥在步骤d)中获得的该生物材料，

f) 对步骤d)得到的生物材料进行灭菌，和

g) 可选地，储存生物材料。

在本发明的一个特别有利的实施例中，该制备根据本发明的生物材料的工艺包括以下步骤：

a) 制备包括合成聚（酯-脲-氨酯）所需的化合物的有机相，该步骤a)包括第一步骤a1)将聚己内酯三醇低聚物和司盘80表面活性剂溶于有机溶剂中，然后是第二步骤a2)将交联剂HMDI和催化剂DBTDL加入步骤a1)的溶液中以形成有机相，

b) 将非硫酸化多糖溶解于基于无菌蒸馏水的水液相中，然后将溶解于有机溶剂的非硫酸化多糖加入步骤a）的液体中，形成乳液，

c) 将在步骤b)获得的乳液进行聚合/交联，以获得该多孔生物材料，和

d) 清洗在步骤c)中获得的该生物材料，和

e) 将在步骤d)中获得的该生物材料干燥至少15天，

f) 对步骤e)得到的多孔生物材料进行灭菌，和

g) 可选地，储存生物材料。

在本发明的一个特别有利的实施例中，该制备根据本发明的生物材料的方法包括以下步骤：

a) 制备包括合成聚（酯-脲-氨酯）所需的化合物的有机相，该步骤a)包括第一步骤a1)将聚己内酯三醇低聚物和司盘80表面活性剂溶于甲苯中，然后是第二步骤a2)将交联剂HMDI和催化剂DBTDL加入步骤a1)的溶液中以形成有机相，

b) 将透明质酸，有利地将高分子量的透明质酸溶解于基于无菌蒸馏水的水液相中，然后将溶解于有机溶剂的非硫酸化多糖加入步骤a）的液体中，形成乳液，

c) 将在步骤b)获得的乳液进行聚合/交联，以获得该多孔生物材料，和

d) 清洗在步骤c)中获得的该生物材料，

e) 将在步骤d)中获得的该生物材料干燥至少15天，

f) 对步骤e)得到的多孔生物材料进行灭菌，和

g) 可选地，储存生物材料。

附图

图1：图1示出了根据本发明的多孔生物材料。图像通过3D显微镜（VHX Keyence）获得；

图2：图2示出了透明质酸（a）、单独的聚（己内酯-脲-氨酯）弹性体基质（b）、根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料（c）和c和b光谱的减法（d）的傅立叶变换红外光谱（FTIR）分析；

图3：图3表示单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质（a，c）和根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料（b和d）在37 ℃体外降解和在55 ℃和75 ℃加速降解时的质量损失和质量吸收率；

图4：图4表示细胞（牙龈成纤维细胞）从第10天到第40天在单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质（弹性体基质）和根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料（弹性体基质-AH）内的迁移情况；

图5：图5表示细胞（牙龈成纤维细胞）在单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质（弹性体基质）和根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料（弹性体基质-AH）内迁移20天后的定植情况。（3D数字显微镜- hemalun染色）；

图6：图6表示在培养10天后，细胞（牙龈成纤维细胞）在单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质（弹性体基质）和根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料（弹性体基质-AH）的孔底和外围的外观。（光学显微镜 - × 40放大率）；

图7：图7表示在大鼠皮下植入36天后，单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质（弹性体基质）和根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料（弹性体基质-AH）的细胞化情况。(材料由白框标注；†新生血管；*多核巨细胞）（3D数字显微镜-苏木精/伊红染色）；

图8：图8表示在大鼠皮下植入36天后，在单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质（弹性体基质）和根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料（弹性体基质-AH）内的胶原蛋白的结构。(材料由白框标注）（3D数字显微镜-苦味酸天狼猩红染色--×4和×40放大率）；

图9：图9表示在大鼠皮下植入36天后，在单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质（弹性体基质）和根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料（弹性体基质-AH）内存在的T淋巴细胞的标记。(材料由黑框标注）（3D数字显微镜-CD3标记--×4和×40放大率）；

图10：图10表示在大鼠皮下植入36天后，在单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质（弹性体基质）和根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料（弹性体基质-AH）内存在的巨噬细胞的标记。(材料由黑框标注）（3D数字显微镜-CD163标记--×4和×40放大率）；

图11：图11表示在透明质酸用阿尔新蓝染色后，对单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质（弹性体基质）和根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料（弹性体基质-AH）获得的光密度的平均值；

图12：图12表示在15 kGy的β辐射前后，单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质（弹性体基质）和根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料（弹性体基质-AH）。图像通过3D显微镜（VHX Keyence）获得。

示例

示例1：根据本发明的多孔生物材料的配方和合成

首先，高分子量的透明质酸在37 ℃下在无菌蒸馏水中溶解24小时。然后通过0.2μm的过滤器过滤该溶液。在第二步中，这个水溶液被倒入包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质合成所需的化合物的有机相中，以获得高内相乳液。随后，这个乳液的聚合/交联导致了根据本发明的多孔生物材料的生产。测试了几种浓度的透明质酸。测试了水相/有机相的几种体积比。还研究了不同的合成温度。这些不同的参数影响材料的孔径。在用作牙龈替代物的情况下，留用的支架是具有直径从50μm到1400μm，平均尺寸为600+/-170μm的孔的那些材料。这些材料在下面的示例中进行了表征。

为获得根据本发明的多孔生物材料所选择的配方和合成方法是：

- 水相中的透明质酸浓度：1 mg/mL；

- 水相/有机相体积比：92.5/7.5%，

- 合成温度：37 °C下18 h；55 °C下4 h；100 °C下2 h。

示例2：根据本发明的多孔生物材料的物理化学和机械性能

根据本发明获得的生物材料的物理化学性能通过以下方式进行测试：

- 傅立叶变换红外光谱（FTIR）用于分析合成的生物材料中存在的化学功能；

- 3D显微镜（VHX Keyence）用于生物材料的形态观察；

- 测量体积吸收率（rv）以确定多孔结构的相互连通性；

- 通过膨胀测量交联节点之间的平均摩尔质量（Mc），使其可以评估多孔生物材料的杨氏模量（E₁ ^*）。

1.相互连通性/孔隙度

通过3D显微镜获得的图像（图1）显示，根据本发明的生物材料具有高度相互连接的多孔形态（孔隙度= 90+/-2%）（rv = 100%），多尺度孔径的直径范围在50 µm到1400 µm之间，平均尺寸为600+/-170 µm。

2.化学成分和亲水性

FTIR分析（图2）证实了聚（己内酯-脲-氨酯）基弹性体基质中存在透明质酸。单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质的光谱显示了这些材料的重要波段，例如氨酯的-NH基团在3333 cm^-1、1537 cm^-1和1248 cm^-1，酯的-C=O基团在1730 cm^-1和脲的-C=O基团在1620 cm^-1，脲的-CNH基团在1575 cm^-1，以及-COO酯基团在1164 cm^-1。对单独的聚（己内酯-脲-氨酯）基弹性体基质和根据本发明的多孔生物材料对应的光谱之间做减法，突出了后者中透明质酸的存在，特别是存在多糖环的-CCH、-OCH和-COH基团在1612 cm^-1的典型频带，以及1554 cm^-1和1381 cm^-1频带。

透明质酸的并入增加了材料的亲水性，这在水接触角的测量中得到了证明：单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质的θ= 112+/-16°，而包括透明质酸的多孔生物材料的θ=69+/-12°。因此，根据本发明的多孔生物材料具有更适合粘附成纤维细胞的表面亲水性，这些成纤维细胞在水接触角为60°至80°的表面上具有更大的粘附性。

此外，将材料浸泡在蒸馏水中15天得到的吸水率，从单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质的约400%，变为包括透明质酸的多孔生物材料的约700%。这表明，根据本发明的多孔生物材料将更适合于液体渗透，因此也更适合于细胞浸润。

3.机械性能

交联节点之间的平均摩尔质量（Mc）是通过甲苯膨胀测量确定的。单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质的Mc值为4860 +/- 240 g/mol，这使得可以评估多孔材料的杨氏模量E₁ ^*。220 +/- 25 kPa的值证明了该材料的弹性性质。根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料（与单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质的孔隙度和孔径相当）的Mc值是5380 +/- 1460 g/mol，这使得可以估计E₁ ^*值为123 +/- 11 kPa。因此，透明质酸参与了根据本发明的多孔生物材料的模量的轻微下降，同时保留了聚合物基质的弹性性质，这将使根据本发明的生物材料能够抵抗细胞在材料内迁移时由成纤维细胞施加的收缩力。

4.降解动力学

在产生用于组织工程学的多孔生物材料的过程中，一个重要的标准是其可吸收性，因为它必须随着时间的推移被新形成的组织取代。体外降解研究根据标准ISO 10993-13执行。其中，降解动力学通过测量在37 °C、55 °C和75 °C下的质量损失和水吸附速率进行评估（图3）。在37 °C和55 °C下，单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质和根据本发明的包括透明质酸的生物材料之间在6个月内未观察到差异。在75 ℃下的加速降解试验表明，根据本发明的包括透明质酸的生物材料比单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质的降解速度略快。这是由于材料亲水性的增加。根据本发明的生物材料在37 ℃下可稳定6个月以上。由于更严格的条件，生物材料的寿命在体内会大大减少；然而，根据本发明的生物材料具有足够的稳定性用于组织工程应用。

示例3：根据本发明的多孔生物材料与细胞（牙龈成纤维细胞）之间的相互作用——体外研究

用牙龈成纤维细胞进行定植试验，以测试根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料和单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质的“吸引”力。这些材料沉积在80%汇合度的牙龈成纤维细胞床上。在接触材料后的10天、30天和40天，测定细胞的迁移情况。通过酶处理分离细胞后，对存在于材料上和材料内的细胞进行计数。得到的结果显示，细胞能够迁移到材料中（图4）。牙龈成纤维细胞能够在材料的孔的表面迁移、增殖和扩散（图5）。

有趣地，当细胞在根据本发明的多孔生物材料（包括透明质酸）的外围时，存在于孔底的细胞直接与材料垂直（图6）。皮肤成纤维细胞已被证明在基于交联透明质酸的皮肤填充物附近扩散并且趋于一致，通常导致成纤维细胞功能的改善（Quan et al., Journal of Investigative Dermatology, 2013, vol 133, pages 658-667）。尽管这个结果更多的是归因于填充产品对皮肤细胞外基质的结构性增强，但从我们的结果来看，很明显，根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料对其周围的细胞有影响。

示例4：根据本发明的多孔生物材料在大鼠皮下口袋模型中的软组织再生潜力的体内研究

通过沿大鼠（Sprague-Dawley，8周雄性）背侧中线皮下植入支架进行体内试验。该研究可以评估根据本发明的多孔生物材料在植入过程中的生物相容性、生物整合性和有效性。

为了评估根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料相对于单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）弹性体基质的有效性，在皮下植入该基质后，对几批动物进行监测，直至36天。根据本发明的材料的有效性通过对动物处死后收集的材料进行组织学研究进行评估。对于每个研究时间，7天和36天，每批5只大鼠（20只大鼠）：单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质动物组—包括非硫酸化多糖的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质动物组。

皮下口袋模型在于在大鼠背部做正中切口，和建立皮下口袋，将待评估的材料插入其中。

1.手术过程

动物用氯胺酮/甲苯噻嗪（50/15 mg/kg）以1.2 mL/kg肌肉注射进行麻醉。对动物的背部进行剪毛，然后用Betadine®进行消毒。在大鼠的背部做一个正中切口，抬起双侧的皮瓣。将聚合物基质（直径1 cm，厚度2至3 mm）插入正中线的两侧，并且加以稳定。然后用可吸收的5.0缝合线将皮肤平面缝合。

每天对动物进行监测，观察它们的一般状况和行为。在整个实验过程中，动物没有显示出活动能力下降，没有显示出攻击性的迹象。体重曲线有规律地演变。在伤口处，没有炎症或坏死的证据。

2.种植体的制备

将聚（己内酯-脲-氨酯）基弹性体基质从其储存介质（70%乙醇）中取出，在搅拌下用生理盐水冲洗5分钟。然后将它们放在皮下袋中。

3.组织学

7天和36天后，动物被处死。取出弹性体基质，用10%多聚甲醛固定，在不断增加的酒精浴中干燥，然后嵌入石蜡中。然后用手动切片机制作5 µM的切片。

脱蜡和复水后，切片用海马伦-伊红（矾紫：在5%的钾明矾水溶液中加入0.2%的苏木红/2%的伊红水溶液）或用苦味酸天狼猩红（在饱和的苦味酸溶液中加入0.1%的苦味酸天狼猩红）来检测胶原蛋白。

4.结果

植入实验大鼠皮下背部区域的生物材料的孔被纤维结缔组织所侵占，如用矾紫-伊红（图7）和苦味酸天狼猩红（图8）染色后的组织学切片所示。

植入7天后，离表面最近的生物材料的三分之一的孔被纤维结缔组织侵入，其中存在许多成纤维细胞型的细胞。植入36天后，在单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质中仅有不到50 %的孔中有定植，而根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料中有约100 %的孔中有定植（图7）。在高倍放大镜下，单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质的孔被结膜基质侵入，该结膜基质似乎不完全粘附在孔的表面。这个表面看上去被许多圆核细胞定植，这些细胞可能是炎症细胞以及红细胞。相反，根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料的孔被与孔表面保持接触的纤维结缔组织侵入。与单独的弹性体基质相比，圆核细胞的数量似乎大大减少，表明炎症成分的减少。结缔组织中存在完全构成的血管，红细胞在其中受到很好的限制，没有渗出的迹象。多核巨细胞也存在于孔的表面和材料本身上。孔内的结缔组织仍与生物材料接触。植入后36天，注意到淋巴细胞和巨噬细胞的数量减少，在根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料中更为明显（图9和图10）。根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料似乎更具相容性。

示例5：透明质酸定量检测

透明质酸的定量检测是通过使用阿尔新蓝的比色法进行的。简而言之，将单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质（弹性体基质）和根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料（弹性体基质-AH）切割、称重，然后在阿尔新蓝溶液中培养2小时。去除多余的染料，然后用醋酸钠缓冲溶液（50 mM/MgCl 250 mM，pH 5.8）取代。然后将这些材料在60%的乙醇溶液中培养，然后在80%的乙酸溶液中培养。在675 nm处测量光密度。在制造过程的各个步骤中进行了透明质酸的定量检测，并且可以确定根据本发明的多孔生物材料的平均浓度为425 μg的HA/g（见图11）。

示例6：β和γ辐射消毒

β处理的灭菌是通过电离方法进行的，在于以可控的速度将生物材料连续输送到电子加速器发射的β射线中。测试的剂量为15、25和45 Gy。例如，在以下处理条件下，获得25kGy +/- 10%的剂量：频率640 Hz/扫描设定值2.6/转数：1 /速度：0.898 m/min。

γ处理的灭菌是通过电离方法进行的，在于将生物材料暴露在由钴60源发射的γ辐射中持续有限时间。执行的剂量是25 kGy +/- 10%。

通过3D显微镜获得的图片（图12）显示，对于在15 kGy的β辐射灭菌，单独的基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体基质（弹性体基质）和根据本发明的包括透明质酸的多孔生物材料（弹性体基质-AH）没有显示任何结构改变。对于15至45 kGy的β和γ辐射剂量，无论根据本发明的生物材料是干燥的还是在水介质中，都得到了相同的结果。

Claims (15)

1.一种用于组织修复的生物材料，其包括：

- 至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化多糖。

2.根据权利要求1所述的生物材料，其特征在于，所述至少一种弹性体基质包括基于聚（酯-脲-氨酯）的弹性体，该酯选自己内酯低聚物（PCL）、乳酸低聚物（PLA）、乙醇酸低聚物（PGA）、羟基丁酸酯低聚物（PHB）、羟基戊酸酯低聚物（PVB）、对二氧环己酮低聚物（PDO）、聚（己二酸乙二醇酯）低聚物（PEA）、聚（己二酸丁二醇酯）低聚物（PBA）或其组合。

3.根据权利要求1和2中任一所述的生物材料，其特征在于，所述非硫酸化多糖是透明质酸。

4.根据权利要求1至3中任一所述的生物材料，其特征在于，所述弹性体基质的异氰酸酯指数在0.1和6.0之间。

5.根据权利要求1至4中任一所述的生物材料，其特征在于，所述生物材料的多尺度孔径在500 μm和2000 μm之间。

6.根据权利要求1至5中任一所述的生物材料，其特征在于，所述生物材料的总孔隙度大于或等于60%。

7.根据权利要求1至6中任一所述的生物材料，其特征在于，它包括；

- 包括基于聚（己内酯-脲-氨酯）的弹性体的至少一种弹性体基质，和

- 非硫酸化多糖，

其特征是，所述非硫酸化多糖是分子量大于或等于1000 kDa的透明质酸。

8.根据权利要求1至7中任一所述的生物材料，其特征在于，所述生物材料是以海绵、薄膜、敷料、颗粒、单块或膜的形式。

9.根据权利要求1至8任一所述的生物材料，用于组织缺损的增强、重建和/或填充，有利地用于软组织和/或上皮组织缺损的增强、重建和/或填充，优选地用于皮肤和/或口腔黏膜缺损的增强、重建和/或填充。

10.根据权利要求9所述的生物材料，其中，重建和/或组织填充的体积大于或等于待增强、重建和/或填充的组织缺损的体积的5%。

11.根据权利要求1至10任一所述的生物材料，其用于牙龈组织的重建和/或增强。

12.根据权利要求1至10任一所述的生物材料，其用于内脏和/或盆腔和/或腔壁组织的重建和/或增强，有利地用于盆腔器官脱垂的治疗、盆腔组织的修复、腔壁的重建和/或增强、消化伤口的重建和/或增强。

13.根据权利要求1至10任一所述的生物材料，其用于烧伤的治疗，有利地用于热烧伤、冷烧伤、电烧伤、化学烧伤、辐射烧伤和光化学烧伤的治疗。

14.一种制备生物材料的方法，其包括以下步骤：

a) 制备包括合成聚（酯-脲-氨酯）所需的化合物的有机相，

b) 将非硫酸化多糖溶解于水液相中，然后将溶解的非硫酸化多糖加入步骤a）的有机相中，形成乳液，

c) 将在步骤b)获得的乳液进行聚合/交联，以获得所述生物材料，

d) 清洗在步骤c)中获得的所述生物材料，和

e) 干燥在步骤d)中获得的所述生物材料。

15.根据权利要求14所述的制备生物材料的方法，其中所述非硫酸化多糖的量相对于存在于所述乳液中的水液相的重量按重量计（w/w）在0.05%和2.0%之间。

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