CN115735769B - 一种通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法 - Google Patents

一种通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115735769B
CN115735769B CN202211496446.9A CN202211496446A CN115735769B CN 115735769 B CN115735769 B CN 115735769B CN 202211496446 A CN202211496446 A CN 202211496446A CN 115735769 B CN115735769 B CN 115735769B
Authority
CN
China
Prior art keywords
fir
psk
embryogenesis
somatic
alpha
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202211496446.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN115735769A (zh
Inventor
陈金慧
吴华
郝兆东
施季森
郑仁华
陆叶
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Forestry University
Original Assignee
Nanjing Forestry University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Forestry University filed Critical Nanjing Forestry University
Priority to CN202211496446.9A priority Critical patent/CN115735769B/zh
Publication of CN115735769A publication Critical patent/CN115735769A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN115735769B publication Critical patent/CN115735769B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A40/00—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production
    • Y02A40/10—Adaptation technologies in agriculture, forestry, livestock or agroalimentary production in agriculture
    • Y02A40/22—Improving land use; Improving water use or availability; Controlling erosion
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
    • Y02P60/40—Afforestation or reforestation

Landscapes

  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)

Abstract

本申请公开了一种通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法，属于植物组培技术领域。该方法为在将愈伤组织从继代培养基中转移到体胚诱导培养基中进行诱导培养步骤中，在体胚诱导培养基中至少添加有PSK‑α和DMTU。本申请的DCF和DAB染色实验证实，PSK‑α处理可以明显降低杉木体胚发生过程H2O2含量，说明PSK‑α可以通过维持氧化还原稳态来促进杉木的体胚发生。同时，H2O2高浓度处理会减少杉木体胚诱导产生的子叶胚数，而PSK‑α则可以缓解H2O2处理对杉木体胚诱导的负面影响。另外，DMTU处理可以提高杉木体细胞胚的子叶胚形成个数，并且在存在PSK‑α的情况下，DMTU协同PSK‑α进一步降低了H2O2含量并提高了杉木体胚发生效率，具有很好的实用性。

Description

一种通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法
技术领域
本申请属于植物育种技术领域，涉及植物体胚发生技术，具体涉及一种通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法。
背景技术
杉木(Cunninghamialanceolata(Lame.)Hook)是我国南方最常见的常绿针叶树。据全国第九次森林资源清查结果显示，杉木人工林面积和立木蓄积量均位于全国用材树种的首位。杉木人工林面积约占我国人工林面积24％左右，占全球人工林面积的6.1％，立木蓄积量占我国人工林蓄积量的25％左右。杉木生长速度快，干形通直圆满，材性优良，木材文理美观，是重要的造林和经济树种。目前，育种策略由传统育种发展到与分子生物学紧密相连，并且处于基因组信息的选择育种的新阶段。
体细胞胚胎发生技术是一种快速有效的优良无性繁殖技术，目前已应用于规模化繁殖，基础科学研究和遗传体系建立等方面。杉木体胚发生技术的应用可以为杉木分子育种和转基因提供新的可能。因此，为提升杉木人工林的产量和质量，杉木的良种选育和繁育技术研究一直是国家林木种业发展的重点。其中，建立高效的杉木体细胞胚胎发生体系基础研究，实现杉木良种细胞工程种苗繁育产业化应用研究，并取得了一定的突破。但是，木本植物的不同树种、品系间体胚发生频率差异很大。不同物种甚至是同一物种不同基因型所需培养基都不尽相同。所以实现木本植物体细胞胚胎发生的研究，任重而道远。
目前本申请人实验室已建立了杉木体胚发生体系，但是体胚发生效率较低，需要进一步优化杉木体胚发生体系。
发明内容
针对现有技术中存在的不足，本申请所要解决的技术问题是提供一种通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法，DMTU协同PSK-α处理可以有效的降低产生ROS酶的转录表达水平，并且诱导一些H2O2清除剂发生转录重编程，从而降低愈伤组织内部的氧化还原环境，并促进杉木体细胞胚胎发生。
为解决上述技术问题，本申请采用的技术方案为：
一种通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法：在将愈伤组织从继代培养基中转移到体胚诱导培养基中进行诱导培养步骤中，在体胚诱导培养基中添加有PSK-α和DMTU。
所述的通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法，所述的PSK-α添加浓度为0.1mg/L。
所述的通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法，所述的体胚诱导培养基：1/2DCR基本培养基+1.0-5.0mg/L赤霉素(GA)+10mg/L Vc+6.0-8.0mg/LABA+150-170g/LPEG+0.5g/L水解酪蛋白+25g/L麦芽糖+2.0g/L Ac+水晶洋菜2.8g/L，pH＝5.8。
所述的通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法，所述的DMTU添加浓度为10mM。
所述的通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法，选取继代培养21天，生长状态一致的愈伤组织接种于体胚诱导培养基中。每块杉木愈伤组织重0.2g，每皿接种8块，随后放入培养箱，23℃暗培养。
所述的通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法，选取继代培养21天，生长状态一致的愈伤组织接种于体胚诱导培养基中。每块杉木愈伤组织重0.2g，每皿接种8块，随后放入培养箱，23℃暗培养；所述的体胚诱导培养基：1/2DCR基本培养基+1.0-5.0mg/L赤霉素(GA)+10mg/L Vc+6.0-8.0mg/L ABA+150-170g/L PEG+0.5g/L水解酪蛋白+25g/L麦芽糖+2.0g/L Ac+水晶洋菜2.8g/L，pH＝5.8；在所述的体胚诱导培养基中添加有0.1mg/LPSK-α，10mM DMTU。
有益效果：与现有技术相比，本申请的技术优势在于：
1)DCF和DAB染色实验证实，PSK-α处理可以明显降低杉木体胚发生过程H2O2含量；同时，qRT-PCR实验发现，PSK-α处理可以降低过氧化物酶基因PRXs的表达，说明PSK-α可以通过降低杉木体胚发生过程H2O2的生产，从而控制氧化还原稳态，阻止愈伤组织褐化并促进杉木体胚发生。
2)H2O2高浓度处理会减少杉木体胚诱导产生的子叶胚个数，而外源添加PSK-α后可以明显增加杉木诱导产生的子叶胚个数，说明杉木体细胞胚胎诱导时H2O2含量过高不利于杉木体细胞胚胎发生，而PSK-α可以缓解H2O2对杉木体胚发生的抑制作用。
3)DMTU可以提高杉木体细胞胚的子叶胚形成个数，说明降低H2O2含量有利于杉木体细胞胚胎发生，并且在存在PSK-α的情况下，DMTU协同PSK-α进一步通过降低H2O2含量提高杉木体细胞胚胎发生效率，具有很好的实用性。
附图说明
图1是ABA，PEG和PSK-α三个因素不同组合处理对于杉木体胚发生的影响结果图；(A-C)是单个因素处理的结果，(D-F)是两两因素组合处理的结果，(G)是三种因素组合处理的结果，(H)是不同处理50d后，每皿中体细胞胚发育至子叶胚的个数统计分析图；图距测度为0.2毫米。
图2(A)是有无PSK处理条件下，杉木体胚发生过程中LOX基因表达谱的比较；(B)是有无PSK处理条件下，杉木体胚发生过程中PPO基因表达谱的比较；(C)是有无PSK处理条件下，杉木体胚发生过程中PRX基因表达谱的比较；
图3(A)是杉木体胚诱导早期胚性胚柄团DCF染色结果；(B)是杉木体胚诱导早期胚性胚柄团DAB染色结果；(C、D)是杉木体胚诱导过程中，添加H2O2处理对于体胚诱导的负面影响，以及PSK缓解H2O2负面影响的作用；(E，F)是DMTU和PSK处理对杉木体胚发生的影响结果图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本申请做进一步的说明。
以下实施例所使用的实验材料为2017年洋口国有林场采集的杉木未成熟球果，以其未成熟种子诱导形成的胚性胚柄团为起始材料。N，N′-二甲基硫脲(N，N′-Dimethylthiourea，DMTU)采购于sigma公司，纯度＞97％。
H2O2组织染色方法为：
DCF染色：DCF使用无水DMSO溶解，制成10mM的DCF储备溶液。将1μl上述储备液溶解在1ml 1×PBS中，涡旋约15-30秒，制备成10μM的染料。将PEM与染料在室温下黑暗室中孵育5至15分钟。在室温下，使用1×PBS洗涤三次，每次5分钟。使用共焦显微镜拍摄图像。
DAB染色：将50mg DAB(Sigma)溶解于45mL蒸馏水中，使用0.1N HCl调节pH至3.8。在磁力搅拌器上适当搅拌，完全溶解后，溶液将变清澈，呈浅棕色。定容至50mL，即得到1mg/mL的DAB工作液。将愈伤组织置于试管中，浸入DAB染色液中检测H2O2。用铝箔包住管子，在室温下静置1-3h。将染好的愈伤组织取出，至于蔡斯显微镜下观察染色部位。
实施例1
根据胚性细胞团诱导、增殖和体胚诱导等不同阶段的养分、植物生长激素和细胞分裂素的不同需求，配置不同组分的培养基，具体如下。
1)胚性细胞团诱导培养基：
DCR基本培养基+2.0-6.0mg/L 2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)+0.5-1.0mg/L 6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)+0.5-1.0 mg/L 6-呋喃氨基嘌呤(6-KT)+10mg/L维生素C(Vc)+0.5g/L水解酪蛋白+15g/L麦芽糖+2.5g/L活性炭(Ac)+水晶洋菜2.4g/L，pH＝5.8。
2)胚性细胞团继代培养基：
DCR基本培养基+0.5-2.0mg/L 2，4-D+0.5-1.0mg/L 6-BA+0.5-1.0 mg/L 6-KT+10mg/L Vc+0.5g/L水解酪蛋白+15g/L麦芽糖+2.5g/LAc+水晶洋菜2.4g/L，pH＝5.8。
3)体胚诱导培养基：
1/2DCR基本培养基+1.0-5.0mg/L赤霉素(GA)+10mg/L Vc+6.0-8.0mg/LABA+(0、50、100、150、170)g/LPEG+0.5g/L水解酪蛋白+25g/L麦芽糖+2.0g/LAc+水晶洋菜2.8g/L，pH＝5.8。
培养基高温高压灭菌后添加(0，0.10mg/L)PSK-α(抽滤灭菌，pH＝5.8)。
1、材料消毒灭菌
将杉木种子从球果中取出置于广口瓶中，瓶口用纱布封口后用流水冲洗30min。在超净工作台中，将种子转入无菌三角瓶中，用75％酒精消毒30s，10％次氯酸钠消毒15min，无菌水清洗3次，备用。
2、胚性细胞团的诱导与继代培养
在无菌超净工作台中，将灭菌后的种子置于无菌滤纸上，用解剖刀和镊子在解剖镜下除去种皮，在种子尖端用解剖刀划一道伤口后，接种于胚性细胞团诱导培养基上。每皿接种8粒种子，培养皿封口后，放入培养箱，23℃暗培养，21-25天继代培养一次。
胚性细胞团被成功诱导后，进入继代培养和增殖培养阶段，以维持胚性细胞团的稳定增殖。在无菌超净工作台中，将每块重约0.2g杉木胚性细胞团接种于继代培养基中，每皿接种8块，随后放入培养箱，23℃暗培养，21-25天继代一次。
3、杉木体细胞胚胎的诱导
在无菌超净工作台中，将每块重约0.2g杉木胚性细胞团接种于体胚诱导培养基上，每皿接种8块，随后放入培养箱，23℃暗培养。
4、显微观察
体细胞胚状态的观察采用体视显微镜(Leica，S8AP0)，胚性胚柄团的显微结构及体胚不同发育时期的观察使用倒置显微镜(Leica，DMI4000)。
5、实验数据统计
使用student’s t-test进行数据差异显著性分析。
6、ABA，PEG，PSK-α对杉木体胚发生的影响
裸子植物体胚发育后期需要添加ABA和PEG，给植物胁迫处理，诱导植物体细胞胚胎成熟。ABA促进体胚分化，提高正常体胚发生频率，而PEG通过调节培养基渗透压促进体胚发生。研究ABA，PEG和PSK-α三因素对杉木体胚发生的联合影响，可以为裸子植物体胚发生体系的优化提供理论依据。
如图1所示，经过50天的体胚诱导培养，仅在含有添加了PEG和PSK-α，以及添加了PEG、PSK-α和ABA的2种培养基中形成体细胞胚，子叶胚个数分别为7个/皿、28个/皿；而在其他培养基成分相同的情况下，单独ABA，PSK-α，或者PEG；仅添加ABA和PSK-α，以及仅添加ABA和PEG均无子叶胚形成。以上结果表明，ABA有利于杉木体胚发生，PEG和PSK-α在杉木体胚发生中起到不可或缺的作用。此外，从胚性细胞团的表形上对比发现，添加ABA中胚性细胞团体积没有变化；添加PSK-α中胚性细胞团体积增大；添加PEG中胚性细胞团表面形成大量早期原胚；添加ABA和PSK-α中形成少数早期原胚；添加ABA和PEG中形成少数早期原胚。
但是结果发现杉木体胚发生过程中杉木愈伤组织容易褐化，如图1所示。杉木体胚发生过程中需要添加PEG，PEG在培养基中起到调节渗透压的作用，与水胁迫诱导有关。在体胚诱导培养基中，添加高浓度170g/LPEG，有利于促进杉木体胚发生。但是将杉木胚性胚柄团接种于高渗透压的体胚诱导培养基中，容易导致胚性胚柄团褐化。而PSK-a能有效阻止杉木胚性细胞团褐化，促进早期原胚和成熟子叶胚的产生。
实施例2
将继代培养21天生长状态一致的胚性细胞团分别接种于添加0mg/L、0.1mg/LPSK-α的体胚诱导培养基上。每块杉木胚性细胞团重约0.2g，每皿接种8块，随后放入培养箱，23℃暗培养。分别于接种后0、1、3、5、7、15、30、40天八个时间点进行材料收集。每个时间点收集5皿(每皿为一个实验重复)。材料置于2ml离心管中，并迅速用液氮冷冻，放于-80摄氏度冰箱保存。并在体细胞胚诱导不同时间点对胚性胚柄团进行形态学观察及体胚诱导个数的统计。
体胚诱导培养基：1/2DCR基本培养基+1.0-5.0mg/L赤霉素(GA)+10mg/L Vc+6.0-8.0mg/L ABA+150-170g/L PEG+0.5g/L水解酪蛋白+25g/L麦芽糖+2.0g/LAc+水晶洋菜2.8g/L，pH＝5.8。培养基高温高压灭菌后添加(0，0.10mg/L)PSK-α(抽滤灭菌，pH＝5.8)。
本实施例利用Pacific Sequel测序平台对混合样本(接种于体胚诱导培养基后0、1、3、5、7、15、30、40天八个时间点的材料)进行测序。
结果如图2显示，转录组数据表明，愈伤组织从继代培养培养基转移到体胚诱导培养基上后，酚类化合物通路被激活，愈伤组织受到活性氧胁迫，易导致愈伤组织极褐化；而PSK-α通过降低LOX转录水平阻碍PPOs与苯丙烷和类黄酮接触；通过降低PPO转录水平阻碍苯丙烷和黄酮类化合物被PPOs催化生成醌类化合物，抑制酶促褐变的发生，阻止愈伤组织褐化。PSK-α处理可以有效的降低ROS生成酶过氧化物酶PRXs的转录表达水平，从而降低胚性细胞团内部的氧化还原环境。
实施例3
选取继代培养21天，生长状态一致的愈伤组织接种于体胚诱导培养基中。每块杉木愈伤组织重0.2g，每皿接种8块，随后放入培养箱，23℃暗培养。每组实验5个实验重复。
体胚诱导培养基：1/2DCR基本培养基+5.0mg/L赤霉素(GA)+6.0mg/L ABA+170g/LPEG+5.0g/L肌醇+10mg/L Vc+0.2g/L脯氨酸+0.2g/L天冬氨酸+0.45g/L谷氨酰胺+0.5g/L水解酪蛋白+25g/L麦芽糖+2.0g/LAc+水晶洋菜2.8g/L，pH 5.8。
对照组：在上述体胚诱导培养基中不添加任何额外组分。试验组：在上述体胚诱导培养基中添加：PSK-α添加浓度0.1mg/L；DMTU添加浓度为：10mM；H2O2添加浓度为：0，2，4mM。
1)PSK-α处理对杉木体胚H2O2含量的影响
如图3所示，经过DCF和DAB染色实验，发现对照组(没有PSK-α处理)的愈伤组织DCF荧光更强、DAB染色更深，PSK-α处理的愈伤组织DCF荧光弱且DAB染色较浅，表明PSK-α处理可以有效抑制H2O2在愈伤组织中积累。
2)H2O2处理对杉木体胚发生的影响
在杉木体胚诱导培养基中添加不同浓度(0，2，4mM)的H2O2，进行体细胞胚胎诱导，观察体细胞形成效率。结果如图3显示，对照组没有进行H2O2处理时，子叶胚形成个数为24个/皿，经过2mMH2O2处理后，子叶胚形成个数减少为5个/血i，经4mMH2O2处理后无子叶胚形成。表明经过高浓度H2O2处理后，子叶胚形成个数明显减少，高浓度H2O2抑制杉木子叶胚的产生。此外，在添加H2O2的体胚诱导培养基中再添加0.1mg/L PSK发现，经过2mMH2O2处理子叶胚形成个数为68个/皿，经4mMH2O2处理后子叶胚形成个数为5个/皿。有PSK处理的体胚形成个数明显高于只有H2O2处理的试验组(图3)，说明PSK-α可以降低H2O2对杉木体胚发生的抑制作用。
3)DMTU处理对杉木体胚发生的影响
在体胚诱导培养基中添加N，N′-二甲基硫脲(DMTU)，结果如图3所示，在没有PSK-α处理时，对照组子叶胚个数为11个/皿，添加DMTU后叶胚个数为27个/皿，两者比较差异显著；在有PSK-α处理时，没有添加DMTU子叶胚个数为101个/皿，而添加DMTU后子叶胚个数为131个/皿，且两者比较差异显著，说明DMTU处理能协同PSK-α提高杉木体细胞胚胎发生效率。
本申请实施例1的结果表明杉木体胚发生过程中杉木胚性细胞团容易褐化，本申请实施例2的转录组数据也显示，胚性细胞团从继代培养培养基转移到体胚诱导培养基上后，酚类化合物通路被激活，胚性细胞团受到活性氧胁迫，易导致胚性细胞团极褐化；而PSK-α通过降低LOX转录水平阻碍PPOs与苯丙烷和类黄酮接触；通过降低PPOs转录水平阻碍苯丙烷和黄酮类化合物被PPOs催化生成醌类化合物，抑制酶促褐变的发生，阻止胚性细胞团褐化。本申请中DCF和DAB染色证实，PSK-α处理可以明显降低杉木体胚发生过程H2O2含量，结果与本申请前期研究获得的转录组数据相符，说明PSK-α可以通过降低ROS生成酶的表达，降低杉木体胚发生过程H2O2含量，从而维持胚性细胞团内部的氧化还原环境，阻止胚性细胞团褐化。
胁迫处理使外植体产生应激反应，从而诱导植物体细胞胚胎发生。但是，植物应对外界胁迫能力有限，过度的应激反应也不利于植物体细胞胚胎发生，比如，导致植物组织褐化[Nicolas J，Billaud C，Retired J P，et a1.BROWNING|Enzymatic-BiochemicalAspects[J].Encyclopedia of Food Sciences and Nutrition(Second Edition)，2003：678-686.]。植物适应性应激反应才是体细胞胚胎发生的关键[Pasternak T P，Prinsen E，Ayaydin F，et a1.The role of auxin，pH，and stress in the activation ofembryogenic cell division in leaf protoplast-derived cells of alfalfa[J].Plant Physiology，2002，129(4)：1807-1819.]，H2O2含量过高会抑制顶端分生组织发育[Zeng J，Dong Z，Wu H，et al.Redox regulation of plant stem cell fate[J].TheEMBO Journal，2017，36(19)：2844-2855.]。本申请的结果证实，H2O2高浓度处理会减少杉木子叶胚个数，PSK-α处理可以增加子叶胚的个数，说明杉木体细胞胚胎诱导时H2O2含量过高不利于杉木体细胞胚胎发生，而PSK-α可以缓解H2O2对杉木体胚发生的抑制作用。
综上所述，进行杉木体细胞胚胎发生时，需要将胚性细胞团从继代培养基中转移到体胚诱导培养基中。体胚诱导培养基中高浓度的ABA和PEG对胚性细胞团具有胁迫作用，导致胚性细胞团内部发生活跃的氧化还原反应，同时增加了H2O2含量。然而，H2O2含量过高不利于杉木体细胞胚胎发生。DMTU协同PSK-α处理，可以降低杉木体细胞胚胎发生过程中H2O2含量，有利于杉木体细胞胚胎发生。

Claims (2)

1.一种通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法，其特征在于：在将愈伤组织从继代培养基中转移到体胚诱导培养基中进行体胚诱导培养步骤中，在体胚诱导培养基中添加有PSK-α和DMTU；所述的PSK-α添加浓度为0.1mg/L；所述的DMTU添加浓度为10mM；所述的体胚诱导培养基：1/2DCR基本培养基+1.0-5.0mg/L赤霉素+10mg/L Vc+6.0-8.0mg/LABA+150-170g/L PEG+0.5g/L水解酪蛋白+25g/L麦芽糖+2.0g/L Ac+水晶洋菜2.8g/L，pH＝5.8。
2.根据权利要求1所述的通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法，其特征在于：选取继代培养21天，生长状态一致的愈伤组织接种于体胚诱导培养基中；每块杉木愈伤组织重0.2g，每皿接种8块，随后放入培养箱，23℃暗培养。
CN202211496446.9A 2022-11-25 2022-11-25 一种通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法 Active CN115735769B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211496446.9A CN115735769B (zh) 2022-11-25 2022-11-25 一种通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211496446.9A CN115735769B (zh) 2022-11-25 2022-11-25 一种通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN115735769A CN115735769A (zh) 2023-03-07
CN115735769B true CN115735769B (zh) 2023-09-08

Family

ID=85338684

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211496446.9A Active CN115735769B (zh) 2022-11-25 2022-11-25 一种通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115735769B (zh)

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103070074A (zh) * 2013-01-30 2013-05-01 南京林业大学 一种杉木体细胞胚胎发生方法
CN106069786A (zh) * 2016-08-11 2016-11-09 岭南师范学院 一种在桉树组织培养中抗褐化和促进不定芽分化的方法
CN109874675A (zh) * 2019-04-09 2019-06-14 南京林业大学 一种利用去离子甲酰胺促进杉木体胚发生的方法
CN110896859A (zh) * 2019-11-28 2020-03-24 南京林业大学 一种利用水杨酸促进杉木体胚发生的方法
CN110915654A (zh) * 2019-11-28 2020-03-27 南京林业大学 一种利用亚精胺促进杉木体胚发生的方法
CN110915653A (zh) * 2019-11-28 2020-03-27 南京林业大学 一种利用氨基寡糖素促进杉木体胚发生的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103070074A (zh) * 2013-01-30 2013-05-01 南京林业大学 一种杉木体细胞胚胎发生方法
CN106069786A (zh) * 2016-08-11 2016-11-09 岭南师范学院 一种在桉树组织培养中抗褐化和促进不定芽分化的方法
CN109874675A (zh) * 2019-04-09 2019-06-14 南京林业大学 一种利用去离子甲酰胺促进杉木体胚发生的方法
CN110896859A (zh) * 2019-11-28 2020-03-24 南京林业大学 一种利用水杨酸促进杉木体胚发生的方法
CN110915654A (zh) * 2019-11-28 2020-03-27 南京林业大学 一种利用亚精胺促进杉木体胚发生的方法
CN110915653A (zh) * 2019-11-28 2020-03-27 南京林业大学 一种利用氨基寡糖素促进杉木体胚发生的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
The plant peptide hormone phytosulfokine promotes somatic embryogenesis by maintaining redox homeostasis in Cunninghamia lancelolata;Zhaodong Hao等;《The Plant Journal》;第113卷(第4期);第716-733页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN115735769A (zh) 2023-03-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Silveira et al. Polyamine effects on the endogenous polyamine contents, nitric oxide release, growth and differentiation of embryogenic suspension cultures of Araucaria angustifolia (Bert.) O. Ktze.
RU2467067C2 (ru) Растительная клеточная линия, полученная из камбия травянистого растения с запасающим корнем, и способ ее выделения
Schuller et al. Somatic embryogenesis from seed explants of Abies alba
Belmonte et al. Alterations of the glutathione redox state improve apical meristem structure and somatic embryo quality in white spruce (Picea glauca)
Rojas-Martínez et al. The hyperhydricity syndrome: waterlogging of plant tissues as a major cause
Wang et al. Cryopreservation of grapevine (Vitis vinifera L.) embryogenic cell suspensions by encapsulation-dehydration and subsequent plant regeneration
Chen et al. High-frequency somatic embryogenesis from germinated zygotic embryos of Schisandra chinensis and evaluation of the effects of medium strength, sucrose, GA 3, and BA on somatic embryo development
Pirttilä et al. Role of origin and endophyte infection in browning of bud-derived tissue cultures of Scots pine (Pinus sylvestris L.)
CA2700337A1 (en) Plant stem cell line derived from quiescent center and method for isolating the same
Malabadi et al. Role of antioxidants and amino acids on somatic embryogenesis of Pinus patula
Cristea et al. Effect of AgNO3 on androgenesis of Brassica oleracea L. anthers cultivated in vitro
Oliveira et al. Plant regeneration from protoplasts of long-term callus cultures of Actinidia deliciosa var. deliciosa cv. Hayword (Kiwifruit)
Tereso et al. Zygotic and somatic embryo morphogenesis in Pinus pinaster: comparative histological and histochemical study
Khatun et al. Effects of Pluronic F-68 on shoot regeneration from cultured jute cotyledons and on growth of transformed roots
Camloh Spore germination and early gametophyte development of Platycerium bifurcatum
Malik et al. High-frequency organogenesis from direct seed culture in Lathyrus
CN115735769B (zh) 一种通过控制氧化还原稳态来促进杉木体胚发生的方法
Reis Moura et al. In vitro culture of tree fern spores from Cyatheaceae and Dicksoniaceae families
WO2021103166A1 (zh) 一种利用亚精胺促进杉木体胚发生的方法
Pan et al. Plant regeneration from mesophyll protoplasts of Echinacea purpurea
Liu et al. Plant regeneration from leaf explants of Rhodiola fastigiata
Ogita et al. Somatic embryogenesis from immature and mature zygotic embryos of Cryptomeria japonica I: Embryogenic cell induction and its morphological characteristics
Zarek A practical method for overcoming the dormancy of Taxus baccata isolated embryos under in vitro conditions
Singh et al. In vitro selection of NaCl-tolerant callus lines and regeneration of plantlets in a bamboo (Dendrocalamus strictus Nees)
Kamo et al. Regeneration from long-term embryogenic callus of the Rosa hybrida cultivar Kardinal

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant