CN115678833A - 一种干细胞移植手术治疗黄褐斑的新的技术方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了毛囊干细胞移植手术治疗黄褐斑的技术方法，该技术方法包括以下步骤：毛囊的提取；毛囊的分离；毛囊的灭活；毛囊干细胞的体外培养；毛囊干细胞的移植。本发明通过精准提取与分离方法获取含有毛囊干细胞的部分毛囊外毛根鞘，通过体外毛囊分离与毛囊灭活和毛囊干细胞体外培养，实现术后表皮变厚，去除黄褐斑，修复患处皮肤屏障，从而达到临床治愈黄褐斑的目的。

Description

一种干细胞移植手术治疗黄褐斑的新的技术方法

技术领域

本发明涉及毛囊移植技术领域，具体涉及含有毛囊干细胞与毛囊黑素干细胞的毛囊移植术治疗黄褐斑的技术方法。

背景技术

关于黄褐斑的研究很多，可谓汗牛充栋。最新的研究认为：雌/ 孕激素及睾酮的影响、紫外线暴露、种族遗传因素、甲状腺功能紊乱是黄褐斑发生的重要病因。基底膜受损、皮肤血管形成、皮肤屏障失衡、神经肽调节、氧化应激、H19基因低表达及wNT、iNOS信号通路紊乱是黄褐斑发病的重要机制，这些信号通路分子间相互关联，相互影响。研究越来越深、越来越细、越来越复杂，但对治疗帮助并不大。

目前在学术界针对黄褐斑的治疗还是以如何祛除黑色素为重要考量。如氢醌、氨甲环酸、维A酸、果酸以及激光治疗等。尤其激光治疗，开发了不少针对色斑的设备：强脉冲光有IPL、DPL、OPT，激光有调Q激光、皮秒激光或者红宝石、蓝宝石、ND：YAG激光等等。可以说，技术越来越先进，价格越来越昂贵，但仍然搞不定黄褐斑。

所以我们有理由思考，是不是思路错了？

理由1.黄褐斑是一种色素性疾病吗？

黄褐斑表现为颧面部、颊部、额部等部位对称性黄褐色色素沉着斑，显微镜下：表皮基底层和棘细胞层黑色素增加，但无黑素细胞增加，真皮上部可见游离的黑素颗粒或被嗜黑素细胞吞噬。这是发表于《中华皮肤科杂志》2016年第10期的一篇文章，作者为昆明医科大学，作者为朱丽萍等。这是一篇很难得的文章，因为关于黄褐斑病理的公开发表的学术论文，国内外都比较少见，作者发现8例黄褐斑患者均有不同程度的表皮变薄、皮突变平，棘层细胞黑素堆积，真皮毛细血管周围有炎症浸润。但和大多数学术论文一样，该论文的研究重点还是在于黑色素及黑素细胞，对于表皮变薄的问题没有更进一步的探讨。

其实，我们在临床上已经观察到，很多黄褐斑患者存在皮肤屏障受损的证据。因此，黄褐斑不仅仅是一个色素沉着的问题，皮肤屏障受损也非常普遍。只立足于对黑色素的研究而忽视皮肤屏障受损的状况，有可能没有抓住事物的本质。

理由2.黑色素的功过？

黄褐斑的发病机理：黑素细胞并没有增加，而是由于黑素细胞是体积变大，黑素颗粒分泌增多了。但是目前几乎所有治疗黄褐斑的药物、产品以及设备都是针对黑色素的，似乎黑色素成了医生和患者一致对待的公敌。我们知道，黑色素由黑素细胞合成，然后输送到角质形成细胞中发生作用。黑色素的主要作用是散射和吸收紫外线，保护皮肤避免伤害，紫外线也可以诱导黑色素的合成。反过来理解，黑色素是为了保护皮肤免受伤害而产生的！晒了太阳，皮肤为什么会变黑？那是因为皮肤为了抵御紫外线的损伤，合成了更多的黑色素。

附图1黄褐斑形成的病理示意图

因此黑色素对于人体来讲，不但无过，反而有功，所以为什么一定要去除黑色素呢？

理由3.黑色素是唯一防御紫外线的元素吗？

尽管表皮的平均厚度只有0.1毫米，但表皮的机械性屏障对紫外线也具有一定防护作用，角质层可以散射、反射紫外线，还可以吸收短波紫外线，棘细胞层和基底层可以吸收长波紫外线。没有文献去论证表皮层越厚，对紫外线的防御能力越强，因为不需要去论证，事实本身如此。就相当于穿一件厚衣服在阳光下不容易晒伤或晒黑一样的道理。

结论1：生理状况下，表皮物理性屏障和黑素屏障组成抵御紫外线辐射的共同防线，如果紫外线变强，共同防线就会相应地增强；如果共同防线增强程度不足以抵御紫外线，皮肤就可能导致损伤甚至肿瘤。公式1物理性屏障+黑色素屏障＝对紫外线的共同防御力＝紫外线的辐射力。表皮物理性屏障和黑素屏障就相当于人体的物理性防晒剂和化学性防晒剂，前者需要一定的厚度才能达到相应的防晒功能，后者通过吸收紫外线而达到防晒的作用，需要一定的数量。由于皮肤黑素合成速度较快，因此黑素屏障是最先增强起来的，所以紫外线辐射后，皮肤首先是变黑，但长期照射紫外线表皮也可适应性变厚。

结论2：如果表皮物理性屏障受损或者变薄，在紫外线保持不变或者增强的情况下，皮肤只能通过合成更多的黑色素增强黑素屏障，以增强共同防线，达到抵御紫外线辐射的目的。

进一步得出结论3：黄褐斑是由于表皮物理性屏障功能变弱导致黑色素合成增加，从而形成皮肤色素沉积，因此黄褐斑中的色素沉积只是一种继发性损害。上述结论成立的话，黄褐斑所有的病理环节都可以得到很好的解释：由于表皮物理性屏障受损，皮肤不能耐受物理、化学和生物因子的刺激，直接导致毛细血管扩张或者通过炎症反应导致毛细血管扩张，炎症本身会导致色素沉着；由于物屏障变弱，不能抵御紫外线的辐射，因此只能靠增加皮肤的色素以抵御紫外线。

附图2黄褐斑的发病机制模式图

或许有人要问，妊娠导致的黄褐斑怎么解释？也与屏障有关吗？其实大多数妊娠黄褐斑因为皮肤屏障没有受损会自行恢复。而那些没有自行恢复的妊娠黄褐斑一定是皮肤屏障出现了问题。黄褐斑分为色素型、血管型和混合型，后两种能明显观察到表皮屏障受损的情况，但色素型黄褐斑呢？如果物理性屏障没有问题，那就是黑素屏障出现了问题，也就是黑素的合成、转运以及角质形成细胞的代谢出现了故障。

理由4.黄褐斑为什么容易复发？

黄褐斑一个重大特征就是复发。为什么呢？第一个原因就是很多时候侧重于祛斑，而没有去治人，她的行为习惯没有被纠正过来，所以疗程结束后该怎么样就怎么样？所以容易复发。第二个原因，祛斑的重点是去减少黑色素，对于屏障修复不够重视，即便短期内黑色素减少了，但因为无法抵抗紫外线辐射，很快黑色素就会更大量的合成。有时候在祛黑色素的过程中反而导致了皮肤屏障的进一步受损，根据公式1和结论2的原理，黑色素会产生更多。这就是黄褐斑反跳加重的原因。

物理性屏障↓+黑色素屏障↑＝对紫外线的共同防御力＝紫外线的辐射力

理由5.如何治疗黄褐斑？

根据结论1，如果采用激光、光子或者药物的方法抑制黑色素，减少色沉，其实质是降低了黑素屏障功能，降低了共同防线的防御能力，尽管短期内可能取得效果，但由于表皮物理性屏障并没有增强，在紫外线辐射不变、增强甚至减弱的情况下，黄褐斑很容易复发甚至加重。黄褐斑的治疗，首先应该是修复皮肤屏障，在皮肤屏障逐渐变得强大的过程中，适当采用去除黑色素的方式才是正确的。

理由6.如何修复皮肤屏障？

6.1停止伤害皮肤屏障的行为习惯

黄褐斑患者很多有不好的皮肤护理习惯，比如经常去角质、深度清洁、毛巾搓脸等等，也许一两次不会用问题，但若形成习惯，天天如此皮肤屏障就会受到伤害。许多美白淡斑产品对皮肤屏障都有损伤，建议少用。注意休息，不要熬夜。充足的睡眠有助于色素代谢，也有助于皮肤屏障的恢复。紫外线能促进黑色素的合成，暴晒也会导致皮肤屏障的损伤，所以防晒很重要。

6.2促进表皮细胞的增殖

表皮基底层中含有干细胞，其比例约为1％-10％，细胞体积小、致密，细胞核与细胞浆比例大。毛囊中也含有干细胞。绝大多数表皮干细胞处于静息状态，只有当皮肤出现损伤的时候，残存的表皮干细胞分化增殖，快速向表皮上层迁移；另一方面，创缘附近的毛囊干细胞接到损伤修复指令后，也可启动毛囊干细胞-表皮通道参与修复。根据这种原理，我们可以人为制造损伤，这种损伤既能达到“唤醒”表皮干细胞的目的，使其增殖分化，又不至于造成明显的创伤和炎症，使皮肤变得更糟糕。有没有这样的治疗方式呢？

⑴皮肤滚针针体很细，直径在0.2毫米左右，针长0.3-2毫米可选。滚针治疗后，皮肤上会留有数十万个针眼，很多人认为滚针作用的重点在于透皮给药，其实是不正确的。皮肤滚针非常符合刺激表皮干细胞而又不过分伤害皮肤的这种要求，当然术后涂抹生长因子有利于促进干细胞的增殖和分化，这是有文献支持的。但到底需要多长的针，多大的力量，治疗终点是什么，干细胞的“唤醒”作用才最强，需要更进一步的研究。尽管没有太多公开发表的资料证实，但适度的皮肤滚针对于皮肤屏障和黄褐斑的改善是毋庸置疑的。

⑵梅花针临床上也有医生用于治疗斑秃和皮肤屏障受损性疾病，其实质还是对皮肤干细胞的“唤醒”作用。但梅花针的针过长，针体更粗，对皮肤的损伤更重，而且梅花针制造的针眼较皮肤滚针更少，刺激密度不够。

⑶点阵激光作用于皮肤后，会在皮肤上人为制造许多局灶性的热损伤，这种刺激可以唤醒皮肤干细胞，这也是点阵激光修复疤痕的基础。对于黄褐斑的治疗已经有相关报道，但作者将其归因于激光对黑素的破坏。由于点阵激光本身会对皮肤屏障造成伤害，能量及密度过大，造成的伤害可能会大于表皮干细胞“唤醒”后的修复效应。因此，选择适合的参数能够修复黄褐斑皮肤屏障，从而达到淡化色斑的效应，反之，可能适得其反。

6.3抑制角质细胞的脱落

虽然角质层是由4-20层死亡细胞构成的，但却构成了表皮物理性屏障的主要部分。我们知道，天天都有角质细胞从表皮上脱落下来，皮肤屏障受损者脱落更快。根据本文得出的结论，表皮物理性屏障越厚实，皮肤产生的黑素就会更少，因此除了促进表皮干细胞增殖以外，我们还可以通过抑制角质细胞脱落的方式，增厚角质层。角质层细胞通过“灰浆”一样的细胞间质，将死亡的角质细胞粘合在一起，形成类似砖墙的结构，这就是我们熟知的皮肤屏障。越到角质层的外层，可能“灰浆”就会变少或者是功效性成分缺失。因此，如果适度地补充这些“灰浆”成分，让即将脱落角质细胞“粘”起来，表皮物理性屏障会逐渐变得更加厚实。许多医学护肤品含有这些生理性成分或者类似功效的成分，如神经酰胺、透明质酸、胶原蛋白、脂肪酸、青刺果油、天然保湿子等，有助于皮肤屏障的恢复。一些仪器设备如电离子导入、超声导入可以促进功效性成分吸收，也有助于皮肤屏障的恢复。但黄褐斑患者更愿意使用一些美白淡斑的产品，许多厂家也愿意这样去推广，尽管很多美白淡斑成分是不利于角质屏障的。其实，几乎没有美白淡斑护肤品能够真正意义上改善黄褐斑的，即便短时间内有所改善，但很快就会复发，甚至变得更加严重，因为皮肤屏障没有恢复甚至受到了伤害。因此，对于黄褐斑患者，最好使用修复类护肤品，在皮肤屏障逐渐改善以后可以适当使用美白淡斑的护肤品。

理由7.需要祛黑治疗吗？

通过改变不良皮肤保养习惯、促进表皮干细胞增殖以及抑制角质层细胞脱落等手段之后，皮肤屏障得以逐渐恢复，物理性屏障对紫外线的防御力增强之后，根据公式1的原理，皮肤黑色素的含量自然会逐渐减少，这就是为什么很多黄褐斑通过屏障修复得以改善的原因。物理性屏障↑+黑色素屏障↓＝对紫外线的共同防御力＝紫外线的辐射力。当然在皮肤屏障得以逐渐恢复的前提下，可以通过温和的方式促进黑色素的降解、抑制黑色素的合成。这些方式包括但不限于：低能量大光斑调Q激光、温和的强脉冲激光治疗、温和的皮秒激光治疗、口服氨甲环酸以及外用淡化色素的产品。

通过以上理由分析可得出治疗黄褐斑的方法：1、修复黄褐斑皮肤屏障是治愈黄褐斑的前提，2、去除皮肤炎症和血管异常增生是抑制黑素细胞体积增大异常产生黑素颗粒的原因，3、物理性屏障↑+ 黑色素屏障↓＝对紫外线的共同防御力＝紫外线的辐射力4、角质成形细胞不仅可以修复表皮还能够减少紫外线的辐射。能否通过手术的方法植入一种可以促进角质形成细胞增生，从而修复皮肤屏障，抑制血管增生，去除皮肤炎症而抑制病态黑素细胞产生黑素颗粒的自体组织呢？如何实现上述方案，通过实践我们发现毛囊干细胞完全具备该项功能，移植毛囊干细胞可以治疗黄褐斑。

毛囊干细胞是在人的毛囊外根鞘隆突部中的一种。毛囊干细胞属于成体干细胞，在体内处于静息状态，在体外培养作用下表现出惊人的增殖能力。研究发现，毛囊干细胞具有多向分化潜能，它可以分化成表皮、毛囊、皮脂腺，参与皮肤创伤愈合的过程。表皮位于皮肤的浅层，由角化的复层扁平细胞构成，由基底至表面可分为五层，分别是：基底层、棘层、颗粒层、透明层和角质层。基底层的基底细胞是未分化细胞具有一定的分化潜能，其中的新生细胞可逐渐向浅层移动分化为其他几层表皮细胞。然而实际临床实验中皮肤损伤时主要是以毛囊干细胞作为种子细胞来重建表皮结构，当表皮严重受损时毛囊干细胞可向创伤部位迁移并形成新的表皮细胞来促使伤口愈合。Heidari等利用形态学分析以及组织学分析的方法证明，有毛囊干细胞存在的皮肤创伤组织更易形成血管且更易分化成为表皮细胞，组成具有多种功能的表皮结构。

将毛囊干细胞在细胞胶原凝胶混合物中培养25d，可见分化良好的表皮、真皮以及毛发结构出现，并且表皮结构具有明显的基底层、棘层、角化不完全的角质层。在毛囊干细胞形成表皮的过程中，成纤维细胞作为主要的基质成分促进表皮细胞的增殖分化、迁移，调节表皮细胞的形态和相互作用成功，最终成功诱导毛囊干细胞分化为表皮细胞。此外，整合素连接激酶、Pygo2等众多分子物质对皮肤损伤后毛囊干细胞修复作用的激活也起着重要的调节作用。

理想的组织工程皮肤应具备可快速持久黏附、组织相容性好、感染率低、不易再次损伤、可促进皮下组织快速增生等功能，并且移植后可恢复或改善部分皮肤功能。目前董志勇等已通过诱导人毛囊干细胞分化形成了表皮角质形成细胞，构建出具有多层细胞结构且功能较为良好的工程表皮。尽管构建出的工程表皮只有数层细胞构成,尚未达到完整的表皮结构，但毛囊干细胞在皮肤重建、受损皮肤修复以及在组织工程皮肤构建中的作用已不容置疑的。在实际临床实验中已成功将毛囊外根鞘细胞应用于下肢溃疡的治疗，有力证实了毛囊干细胞可促进表皮重建的能力及其临床实际效用。

毛囊干细胞作为一种体外分化能力强，易于获取，增殖能力强，使用较为安全并且具有多向分化潜能的成体干细胞，对于皮肤损伤后组织再生，机体功能恢复过程中血管再生、浅表神经修复、表皮及皮肤附属器官的重建具有重要作用。故此，移植毛囊干细胞不仅可以重建黄褐斑皮肤屏障；还可以抑制黄褐斑的血管增生，清除炎症，恢复黑素细胞正常功能；促进表皮增厚，增强对紫外线的防御能力。

发明内容

本发明的目的在于提供含有毛囊干细胞的外毛根鞘，通过微创手术的方法治疗黄褐斑。采用FUE技术提取并分离出含有毛囊干细胞的外毛根鞘并进行培养，促进毛囊干细胞的分化与增殖，通过培育激活并提高毛囊干细胞活性，促进毛囊干细胞快速转化增殖；然后将毛囊干细胞及其姆环境外毛根鞘精准移植于黄褐斑表皮特定层次，从而抑制了黄褐斑黑素细胞的炎症，减少了黑素颗粒的分泌；同时可以促进表皮增厚，增强对紫外线的防御能力，重建黄褐斑的皮肤屏障，以解决上述背景技术中的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

毛囊干细胞移植术治疗黄褐斑的方法及步骤：

毛囊干细胞移植术治疗黄褐斑的技术方法，该技术方法包括以下步骤：

步骤S1，毛囊的提取，采用FUE技术提取并分离出含有毛囊干细胞的外毛根鞘，提取一个毛囊单位，提取首选单株或者双珠毛囊，优选白色毛发的毛囊。

步骤S2，毛囊的分离，在2-15倍放大镜或电子显微镜下将所述毛囊单位分离出去除表皮组织的单株含有毛囊干细胞的毛囊外毛根鞘。

步骤S3，毛囊的灭活，根据黄褐斑的严重程度选择是否灭活，对于面积小、肤色白，症状轻的患者采取灭活处理，对移植前毛囊进行灭活，方法：在显微镜或放大镜下使用毛囊灭活针去除毛囊毛乳头，使之无法进入下一个毛囊周期；对于面积较大，色素较深，发病严重的患者，移植前毛囊可以不进行灭活处理。另外，如果为白色毛囊，无需灭活处理。

步骤S4，毛囊干细胞的体外培养，将提取分离的含有毛囊干细胞的外毛根鞘的毛囊放入培养液进行培养，达到增强毛囊干细胞活性，抑制黑素细胞形成，促进毛囊干细胞分化增殖。

步骤S5，毛囊干细胞的移植，以毛囊为依托对含有毛囊干细胞的外毛根鞘进行移植，在毛囊种植定位针定位下，使用毛囊种植针把上述外毛根鞘植入黄褐斑区特定层次，从而解决了黄褐斑黑素细胞的炎症，减少了黑素颗粒的分泌；同时可以促进表皮增厚，增强对紫外线的防御能力，重建黄褐斑的皮肤屏障，达到治疗黄褐斑的目的。

进一步的，所述步骤S1的具体方法为，毛囊的提取，采用FUE 技术提取并分离出含有毛囊干细胞的外毛根鞘，提取一个毛囊单位，提取首选单株或者双珠毛囊，优选白色毛发的毛囊。

进一步的，所述步骤S2中，毛囊的分离，在2-15倍放大镜或电子显微镜下将所述毛囊单位分离出去除表皮组织的单株含有毛囊干细胞的毛囊外毛根鞘。准确率高达100％，避免了分离过程中毛囊干细胞和外毛根鞘受损。

进一步的，所述步骤S3中，毛囊的灭活，根据黄褐斑的严重程度选择是否灭活，对于面积小、肤色白，症状轻的患者采取灭活处理，对移植前毛囊进行灭活，方法：在显微镜或放大镜下使用毛囊灭活针去除毛囊毛乳头，使之无法进入下一个毛囊周期；对于面积较大，色素较深，发病严重的患者，移植前毛囊可以不进行灭活处理。另外，如果为白色毛囊，无需灭活处理。

进一步的，所述步骤S4中，毛囊干细胞的体外培养，将提取分离的含有毛囊干细胞的外毛根鞘的毛囊放入培养液进行培养，达到增强毛囊干细胞活性，抑制黑素细胞形成，促进毛囊干细胞分化增殖。

进一步的，所述特殊培养液的主要成分为氨甲环酸注射液、复方甘草酸苷注射液、维生素C注射液和生理盐水。

进一步的，所述步骤S5中，毛囊干细胞的移植，以毛囊为依托对含有毛囊干细胞的外毛根鞘进行移植，在毛囊移植的种植定位针定位下，使用毛囊种植针把上述外毛根鞘植入黄褐斑区特定层次，从而解决了黄褐斑黑素细胞的炎症，减少了黑素颗粒的分泌；同时可以促进表皮增厚，增强对紫外线的防御能力，重建黄褐斑的皮肤屏障，达到治愈黄褐斑的目的。与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

1、本发明通过独特的外毛根鞘体外分离技术获得含有毛囊干细胞的毛囊外毛根鞘并通过移植手术治疗黄褐斑。

2、本发明发明了毛囊干细胞的体外培养技术，通过特制培养液对获得的毛囊干细胞体外进行培育，促进了毛囊干细胞的快速倍增，抑制了黑素细胞的生成。

3、本发明通过毛囊灭活技术，借助放大镜或显微镜和毛囊灭活针，对移植前毛囊进行灭活，能够实现毛囊灭活，抑制黑素颗粒分泌而不长毛。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的具体实施方式一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。

附图1为黄褐斑形成的病理示意图

附图2黄褐斑的发病机制模式图

附图3为本发明的毛囊干细胞移植术治疗黄褐斑的技术方法的流程图。

具体实施方式

以下结合附图3对本发明的优选实施例进行详细说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明的技术关键点：1、外毛根鞘体外分离技术获得含有毛囊干细胞的毛囊外毛根鞘并通过移植手术治疗黄褐斑。2、毛囊干细胞的体外培养技术，对获得的毛囊干细胞进行体外培养，所述特殊培养液的主要成分为氨甲环酸注射液、复方甘草酸苷注射液、维生素C注射液；3、毛囊灭活技术，借助皮肤镜和毛囊灭活针，对移植前毛囊进行灭活，术后不长毛。

实施例一：

如附图3所示，本发明提供一种技术方案：毛囊干细胞移植术治疗黄褐斑的技术方法，该技术方法包括以下步骤：

步骤S1，毛囊的提取，采用FUE技术提取并分离出含有毛囊干细胞的外毛根鞘，提取一个毛囊单位，提取首选单株或者双珠毛囊，优选白色毛发的毛囊。

步骤S2，毛囊的分离，在2-15倍放大镜或电子显微镜下将所述毛囊单位分离出去除表皮组织的单株含有毛囊干细胞的毛囊外毛根鞘。

步骤S3，毛囊的灭活，根据黄褐斑的严重程度选择是否灭活，对于面积小、肤色白，症状轻的患者采取灭活处理，对移植前毛囊进行灭活，方法：在显微镜或放大镜下使用毛囊灭活针去除毛囊毛乳头，使之无法进入下一个毛囊周期；对于面积较大，色素较深，发病严重的患者，移植前毛囊可以不进行灭活处理。另外，如果为白色毛囊，无需灭活处理。

步骤S4，毛囊干细胞的体外培养，将提取分离的含有毛囊干细胞的外毛根鞘的毛囊放入培养液进行培养，达到增强毛囊干细胞活性，抑制黑素细胞形成，促进毛囊干细胞分化增殖。

步骤S5，毛囊干细胞的移植，以毛囊为依托对含有毛囊干细胞的外毛根鞘进行移植，在毛囊移植的种植定位针定位下，使用毛囊种植针把上述外毛根鞘植入黄褐斑区特定层次，从而解决了黄褐斑黑素细胞的炎症，减少了黑素颗粒的分泌；同时可以促进表皮增厚，增强对紫外线的防御能力，重建黄褐斑的皮肤屏障，达到治愈黄褐斑的目的。

在本实施例中，所述步骤S1的具体方法为，毛囊的提取，采用 FUE技术提取并分离出含有毛囊干细胞的外毛根鞘，提取一个毛囊单位，提取首选单株或者双珠毛囊，优选白色毛发的毛囊。

在本实施例中，所述步骤S2中，毛囊的分离，在2-15倍放大镜或电子显微镜下将所述毛囊单位分离出去除表皮组织的单株含有毛囊干细胞的毛囊外毛根鞘。

在本实施例中，所述步骤S3中，毛囊的灭活，根据黄褐斑的严重程度选择是否灭活，对于面积小、肤色白，症状轻的患者采取灭活处理，对移植前毛囊进行灭活，方法：在显微镜或放大镜下使用毛囊灭活针去除毛囊毛乳头，使之无法进入下一个毛囊周期；对于面积较大，色素较深，发病严重的患者，移植前毛囊可以不进行灭活处理。另外，如果为白色毛囊，无需灭活处理。

在本实施例中，所述步骤S4中，毛囊干细胞的体外培养，将提取分离的含有毛囊干细胞的外毛根鞘的毛囊放入培养液进行培养，达到增强毛囊干细胞活性，抑制黑素细胞形成，促进毛囊干细胞分化增殖。

在本实施例中，所述步骤S5中，毛囊干细胞的移植，以毛囊为依托对含有毛囊干细胞的外毛根鞘进行移植，在毛囊种植定位针定位下，使用毛囊种植针把上述外毛根鞘植入黄褐斑区特定层次，从而解决了黄褐斑黑素细胞的炎症，减少了黑素颗粒的分泌；同时可以促进表皮增厚，增强对紫外线的防御能力，重建黄褐斑的皮肤屏障，达到治愈黄褐斑的目的。

实施例二：

如附图3所示，本发明提供的毛囊干细胞移植术治疗白癜风的技术方法，通过实施例一中的技术方法，移植毛囊干细胞到黄褐斑特定层次，促进毛囊干细胞的增殖与分化及组织的形成，实现修复表皮屏障，增强对紫外线的防御能力。

在本实施例中，通过毛囊干细胞移植术治疗白癜风的治愈率达到80％以上。

本发明的技术难点及手术步骤：

技术难点：“存活率“是指种植后的毛囊干细胞能否直接存活，关系到后期的治疗效果，而经过提取得到的自体毛囊干细胞，经过培养激活后种植到黄褐斑病灶区活性更强，保证了术后疗效。

手术步骤：1、采用FUE技术提取并分离出含有毛囊干细胞的外毛根鞘并进行培养，促进毛囊干细胞的分化与增殖，通过培育激活并提高毛囊干细胞活性，促进毛囊干细胞快速转化增殖，术后几乎不长毛；2、“种植”是关系到毛囊干细胞成活的又一重点，种植太浅，成活率低，效果不好，而种植太深就会失去对于皮肤屏障的修复作用，降低疗效，只有精准种植于白斑特定层次，才能实现解决黄褐斑黑素细胞的炎症，减少黑素颗粒的分泌；同时可以促进表皮增厚，增强对紫外线的防御能力，重建黄褐斑的皮肤屏障，以解决上述背景技术中的问题。

本发明的原理：本发明借助皮肤B超和皮肤镜成像精准数据报告，评估黄褐斑病情，采用FUE技术提取并分离出含有毛囊干细胞的外毛根鞘并进行培养，促进毛囊干细胞的分化与增殖，通过培育激活并提高毛囊干细胞活性，促进毛囊干细胞快速转化增殖；然后将毛囊干细胞以及外毛根鞘精准移植于黄褐斑表皮特定层次，解决黄褐斑黑素细胞的炎症，减少黑素颗粒的分泌；同时可以促进表皮增厚，增强对紫外线的防御能力，重建黄褐斑的皮肤屏障。

以上所述仅为本发明的优选实例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

1、本发明通过独特的外毛根鞘体外分离与培养技术对毛囊干细胞进行体外培养，并对外毛根鞘进行移植治疗黄褐斑。

2、本发明通过B超定位和毛囊移植定位针将毛囊干细胞植入表皮特定层次，解决黄褐斑黑素细胞的炎症，减少黑素颗粒的分泌；同时可以促进表皮增厚，增强对紫外线的防御能力，重建黄褐斑的皮肤屏障。

3、本发明经过提取得到的毛囊干细胞，具有不受机体内分泌以及激素影响的特性，相当于在黄褐斑区植入了黑素细胞的抗炎剂，起到永久抑制黑素颗粒过度分泌的作用。

4、本发明改变了以往通过药物和光电美容治疗黄褐斑的传统方法，颠覆了黄褐斑的治疗理念，通过毛囊干细胞移植微创手术治疗黄褐斑，疗效显著优于目前黄褐斑的治疗方法。

5、本发明经患者知情同意和医院伦理委员会讨论通过，既不违返医学伦理，又对患者无害，因为移植的是部分毛囊外毛根鞘，因此符合国家法律法规。

本发明涉及的临床研究方案经医院伦理委员会讨论通过，所有患者均知情同意试验，所取得的试验数据和临床经验既不违返医学伦理，又对患者无害，因为移植的是部分毛囊外毛根鞘，因此符合国家法律法规。

Claims (6)

1.干细胞移植手术治疗黄褐斑的新的技术方法其特征在于毛囊干细胞的体外制备方法，该制备方法包括以下步骤：

步骤S1，毛囊的提取，采用FUE技术提取并分离出含有毛囊干细胞的外毛根鞘，提取一个毛囊单位，提取首选单株或者双株毛囊，优选白色毛发的毛囊；

步骤S2，毛囊的分离，在2-15倍放大镜或电子显微镜下将所述毛囊单位分离出去除表皮组织的单株含有毛囊干细胞的外毛根鞘，准确率高达100％，避免了分离过程中毛囊干细胞和外毛根鞘受损；

步骤S3，毛囊的灭活，根据黄褐斑的严重程度选择是否灭活，对于面积小、肤色白，症状轻的患者采取灭活处理，对移植前毛囊进行灭活：在显微镜或放大镜下使用毛囊灭活针去除毛囊毛乳头，使之无法进入下一个毛囊周期，对于面积较大、色素较深、发病严重的患者，移植前毛囊可以不进行灭活处理；另外，如果为白色毛囊，无需灭活处理；

步骤S4，毛囊干细胞的体外培养，将提取分离的含有毛囊干细胞的外毛根鞘的毛囊放入专用培养液在22-26℃培养1-4小时，达到增强毛囊干细胞活性，抑制黑素细胞形成，促进毛囊干细胞分化增殖，所述特殊培养液的主要成分为氨甲环酸注射液、复方甘草酸苷注射液、维生素C注射液和生理盐水；

步骤S5，毛囊干细胞治疗黄褐斑移植层次的体外定位，通过皮肤镜和/或皮肤CT和/或皮肤B超联合使用，体外定位的毛囊种植针的进针层次即为毛囊外毛根鞘移植的特定层次，体外定位可为含有毛囊干细胞的外毛根鞘精准移植提供术前技术支持。

2.根据权利要求1所述干细胞移植手术治疗黄褐斑的新的技术方法其特征在于毛囊干细胞的体外制备方法之所述步骤S1：毛囊的提取，采用FUE技术提取并分离出含有毛囊干细胞的外毛根鞘，提取一个毛囊单位，提取首选单株或者双珠毛囊，优选白色毛发的毛囊，也可选择有色毛发的毛囊；毛囊干细胞移植治疗黄褐斑，尤其是移植白色毛发的毛囊用于疾病治疗，是本发明的创造性之一。

3.根据权利要求2所述干细胞移植手术治疗黄褐斑的新的技术方法其特征在于毛囊干细胞的体外制备方法之所述步骤S2：毛囊的分离，在2-15倍放大镜或电子显微镜下将所述毛囊单位分离出去除表皮组织的单株含有毛囊干细胞的外毛根鞘，准确率高达100％，避免了分离过程中毛囊干细胞和外毛根鞘受损，体外分离出不含表皮部分的外毛根鞘是本发明的创造性之二。

4.根据权利要求3所述干细胞移植手术治疗黄褐斑的新的技术方法在于毛囊干细胞的体外制备方法之所述步骤S3：毛囊的灭活，根据黄褐斑的严重程度选择是否灭活，对于面积小、肤色白，症状轻的患者采取灭活处理，对移植前毛囊进行灭活，方法：在显微镜或放大镜下使用毛囊灭活针去除毛囊毛乳头，使之无法进入下一个毛囊周期；对于面积较大、色素较深、发病严重的患者，移植前毛囊可以不进行灭活处理；另外，如果为白色毛囊，无需灭活处理，因地制宜的选择性的毛囊灭活方法是本发明的创造性之三所在。

5.根据权利要求4所述干细胞移植手术治疗黄褐斑的新的技术方法其特征在于毛囊干细胞的体外制备方法之所述步骤S4：毛囊干细胞的体外培养，将经步骤1、2和3处理后的毛囊放入专用培养液，在22-26℃培养1-4小时，达到增强毛囊干细胞活性，抑制黑素细胞形成，促进毛囊干细胞分化增殖，所述特殊培养液的主要成分为氨甲环酸注射液、复方甘草酸苷注射液、维生素C注射液和生理盐水；使用无毒性且对人体无害的氨甲环酸注射液、复方甘草酸苷注射液、维生素C注射液联合应用，对毛囊干细胞进行体外培养是本发明的创造性之四。

6.根据权利要求5所述干细胞移植手术治疗黄褐斑的新的技术方法其特征在于毛囊干细胞的体外制备方法之所述步骤S5：毛囊干细胞治疗黄褐斑移植层次的体外定位，通过皮肤镜和/或皮肤CT和/或皮肤B超单独或联合使用，体外定位获得毛囊种植针的层次即为毛囊外毛根鞘移植的特定层次，该层次移植针会产生特殊的皮肤镜、皮肤CT、皮肤B超影像，为含有毛囊干细胞的外毛根鞘精准移植治疗黄褐斑提供可靠的术前技术支持；体外采用皮肤镜、皮肤CT、皮肤B超定位毛囊移植针或种植针在黄褐斑特定层次的特殊影像是本发明的创造性之五。

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