CN115677682A - 螺环类plk4抑制剂及其用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医药技术领域，具体涉及用作PLK4抑制剂的化合物、其药学上可接受的盐、其酯及其异构体，以及含有该类化合物的药物组合物、制剂、其制备方法及用途。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及用作PLK4抑制剂的化合物、其药学上可接受的盐、其酯或其异构体，药物组合物，药物制剂，制备方法以及用途。
背景技术
Polo样激酶(polo-like kinases,PLKs)是一类高度保守的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，其N端均有一个高度同源的丝氨酸/苏氨酸激酶结构域，其C端具有polo盒结构域(polo-box domain,PBD)，该结构域可以调节PLKs激酶活性并与该蛋白的亚细胞动态定位有关。PLKs家族成员较多，其在人体内有4种亚型，分别是PLK1、PLK2、PLK3和PLK4，它们在细胞周期各个时相的调控中发挥至关重要的作用。
其中，PLK4于1994年被发现，其广泛存在于真核生物中，小鼠PLK4位于13号染色体，分为a、b两个亚型，人类PLK4位于染色体4q28，仅有一个PLK4蛋白，全程970个氨基酸，与小鼠PLK4-a具有高度同源性。PLK4的氨基酸序列尚与其他PLKs有较大差异，其他PLKs的PBD都有两个串联排列的polo盒，而PLK4只有一个polo盒。
研究发现，PLK4被发现主要在分裂活跃的组织和细胞中表达，PLK4蛋白的mRNA在睾丸中表达水平最高，在肿瘤细胞株如Hela、SKOV-3、Saos-2、A-431等中也有表达。在正常周期性循环的细胞中，PLK4蛋白的mRNA水平在G0期细胞中不表达、在G1期末期增加，并在S期和M期持续上升，有丝分裂结束后，在G1期早期逐渐下降。研究表明这种精确调控对于细胞生长和细胞分裂时维持细胞核的完整性是必要的。
PLK4是中心粒复制的主要调控因子之一，复制过程中，其激活后可促进微管蛋白向中心粒募集，从而促进中心粒逐渐成熟。Habedanck首先发现，过量表达野生型PLK4可导致细胞中心粒数目增加，而PLk4表达不足也可引起细胞内中心粒数目减少以及中心体结构异常。肿瘤细胞中，经常发生中心体结构和数目的异常，而异常伴随着细胞分裂缺陷和基因组不稳定。现已发现PLK4在部分肿瘤组织和细胞系中表达异常，并受到P53的调控，可能参与了肿瘤的发生、发展，因而PLK4是肿瘤靶向治疗的一个潜在靶点。
目前，尚无PLK4激酶抑制剂药物上市，其中The University Health Network研发的CFI-400945是一种选择性PLK4激酶抑制剂，表现出良好的抗肿瘤活性，其尚处于临床试验中。因此，开发新型PLK4激酶抑制剂、丰富临床药物种类、提高药品可及性具有重要的医学价值和社会意义。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种结构新颖的、具有PLK4激酶抑制活性的化合物，进一步地，本发明提供了一种结构新颖的、具有更优药效活性、安全性更佳的PLK4激酶抑制活性的化合物。
本发明可解决的技术问题还包括，本发明化合物可用于治疗由PLK4所介导的癌症性疾病。
本发明的技术方案如下：
在一个方面，本申请提供如下通式(I)所示化合物、其药学上可接受的盐、其酯或其异构体，
R1选自氢、C1-6烷基；
每个R2独立地选自氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、苯基、杂芳基或两个相邻的R2相互连接形成苯环、杂芳环，所述的苯基、苯环、杂芳基、杂芳环任选被1-3个S1取代，所述的S1选自卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基；
每个R3独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基；
环B选自苯基、杂芳基；
每个R4独立地选自R4a或R4b；
每个R4a独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基；
每个R4b独立地选自
其中环A选自任选被1-3个S2取代的如下基团：3-6元环烷基、3-6元杂环基、6-10元稠杂环基、7-12元螺杂环基；所述的S2选自羟基、卤素、氰基、羧基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基、(R5)(R6)NC(O)-、C1-6烷氧基-C1-6烷基-、羧基C1-6烷基；
L1选自化学键或C1-4亚烷基，其中C1-4亚烷基中的任一碳原子任选被-C(O)、-NR5-、-S(O)y-和/或-O-取代；y选自0、1或2；
R5、R6分别独立地选自氢、C1-6烷基；
m选自0、1、2、3、4；
n选自0、1、2、3；
p选自0、1、2、3、4。
在另一优选方案中，所述式(I)化合物具有如下通式(I’)所示结构，
R1选自氢、C1-4烷基；
每个R2独立地选自氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基、或两个相邻的R2相互连接形成苯环，所述的苯基、苯环任选被1-2个S1取代，所述的S1选自C1-4烷基、C1-4烷氧基；
每个R3独立地选自C1-4烷基、C1-4烷氧基；
每个R4独立地选自R4a或R4b；
每个R4a独立地选自氢、卤素、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基；
每个R4b独立地选自
其中环A选自任选被1-2个S2取代的如下基团：3-6元环烷基、3-6元杂环基、6-8元稠杂环基、7-11元螺杂环基；所述的S2选自羟基、卤素、氰基、羧基、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷氧基、(R5)(R6)NC(O)-、C1-4烷氧基-C1-4烷基-、羧基C1-4烷基；
L1选自化学键、或C1-3亚烷基，其中C1-3亚烷基中的任一碳原子任选被-C(O)、-NR5-、-S(O)y-和/或-O-取代；y选自0、1或2；
R5、R6分别独立地选自氢、C1-4烷基；
m选自0、1、2、3、4；
n选自0、1、2、3；
p选自0、1、2、3、4。
在另一技术方案中，R1选自氢、甲基、乙基。
在另一技术方案中，R1选自氢。
在另一技术方案中，R3选自甲基、甲氧基；n选自0、1或2。
在式(I’)一个方案中，R2选自苯基；
R4选自
环A选自任选被1-2个S2取代的如下基团：5-6元环烷基、5-6元杂环基、6-8元稠杂环基、7-10元螺杂环基；所述的S2选自羟基、氰基、羧基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、H2NC(O)-、H3CO-CH2-、HOOC-CH2-；
L1选自C1-3亚烷基，其中C1-3亚烷基中的1-2碳原子任选被-C(O)-、-N(R5)-、和/或-O-取代；
R5独立地选自氢、甲基、乙基；
m选自1。
在另一技术方案中，R4选自
环A选自任选被1-2个S2取代的如下基团：5-6元环烷基、5-6元含氮杂环基、6-8元含氮稠杂环基、7-10元含氮螺杂环基；L1、S2如前一技术方案所述。
在另一技术方案中，环A选自任选被1-2个S2取代的如下基团：环戊基、环己基、吡咯烷基、四氢呋喃基、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、
其中K1或K2分别独立的选自CH、CH2、O、N、NH，且K1、K2不同时为CH和/或CH2；L1、S2如前一技术方案所述。
在另一技术方案中，
选自
其中环A任选被1-2个S2取代，K1、K2独立的选自CH2、O、NH；L1、S2如前一技术方案所述。
在另一技术方案中，L1选自C1-3亚烷基，其中C1-3亚烷基中1个碳原子任选被-N(R5)-取代。
在另一技术方案中，L1选自-CH2-、-CH2-NR5-、-CH2-O-、-CH2-NR5-CH2-，R5独立地选自氢、甲基。
在另一技术方案中，R4选自
在式(I’)一个方案中，两个相邻的R2相互连接形成苯环，所述的苯环任选被1-2个S1取代，所述的S1选自甲基、甲氧基、乙氧基；
R4选自
环A选自任选被1-2个S2取代的如下基团：6-8元稠杂环基、7-10元螺杂环基；所述的S2选自甲基、甲氧基；
L1选自C1-3亚烷基，其中C1-3亚烷基中的1-2碳原子任选被-C(O)-、-N(R5)-、和/或-O-取代；
R5独立地选自氢、甲基；
m选自2。
在另一技术方案中，R4选自
环A选自任选被1-2个S2取代的如下基团：6-8元含氮稠杂环基、7-10元含氮螺杂环基；S2选自甲基、甲氧基。
在另一技术方案中，环A选自任选被1-2个S2取代的如下基团：
其中K1或K2分别独立的选自CH2、O、NH，且K1或K2不同时为CH2。
在另一技术方案中，
选自
其中环A选自任选被1-2个S2取代，K1、K2分别独立的选自CH2、O、NH。
在另一技术方案中，L1选自-CH2-、-CH2-NR5-、-CH2-O-、-CH2-NR5-CH2-，R5独立地选自氢、甲基。
在另一技术方案中，R4选自
在式(I’)一个方案中，两个相邻的R2相互连接形成苯环，所述的苯环任选被1-2个S1取代，所述的S1选自甲基、甲氧基；
R4选自
在式(I’)一个方案中，本申请进一步提供如下通式所示的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其异构体：
R1、R3、n、L1、环A、S1、S2如本发明任一方案所定义；
q1、q2分别独立地选自0、1或2。
在另一技术方案中，本申请进一步提供如下通式所示的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其异构体：
R1、R3、n、L1、环A、S1、S2如本发明任一方案所定义；
q1、q2分别独立地选自0、1或2；
M选自N或CH。
本申请前述技术方案中的任一取代基及其任一可选基团可以相互组合形成新的完整的技术方案，所形成的新的技术方案与本申请记载的方案具有相同或相似的技术效果，均包括在本发明的范围之内。
本发明以上技术方案之间可以相互组合进行限定，所形成的新的方案均包括在本发明范围之内。
在另一优选的实施方案中，所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其异构体具有如下所示的结构，
在另一方面，本申请还提供一种药物制剂，含有本发明任一方案所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯或其异构体，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂，该药物制剂可为药学上可接受的任一剂型。药学上可接受的赋形剂是无毒性、与活性成分相容且其他方面生物学性质上适用于生物体的物质。特定赋形剂的选择将取决于用于治疗特定患者的给药方式或疾病类型和状态。药学上可接受的赋形剂其实例包括但不限于药学领域常规的溶剂、稀释剂、分散剂、助悬剂、表面活性剂、等渗剂、增稠剂、乳化剂、粘合剂、润滑剂、稳定剂、水合剂、乳化加速剂、缓冲剂、吸收剂、着色剂、离子交换剂、脱模剂、涂布剂、矫味剂、和抗氧化剂等。必要时，还可以在药物组合物中加入香味剂、防腐剂和甜味剂等。
在某些实施方案中，上述药物制剂可以以口服、肠胃外、直肠或经肺给药等方式施用于需要这种治疗的患者或受试者。用于口服给药时，所述药物组合物可制成口服制剂，例如可以制成常规的口服固体制剂，如片剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂等；也可制成口服液体制剂，如口服溶液剂、口服混悬剂、糖浆剂等。制成口服制剂时，可以加入适宜的填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂等。用于肠胃外给药时，上述药物制剂也可制成注射剂、包括注射液、注射用无菌粉末与注射用浓溶液。制成注射剂时，可采用现有制药领域中的常规方法生产，配置注射剂时，可以不加入附加剂，也可以根据药物的性质加入适宜的附加剂。用于直肠给药时，所述药物组合物可制成栓剂等。用于经肺给药时，所述药物组合物可制成吸入制剂、气雾剂、粉雾剂或喷雾剂等。
在另一方面，本申请还提供一种药物组合物，其含有本发明任一方案所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯或其异构体，以及一种或多种第二治疗活性剂，所述的第二治疗活性剂可与本申请PLK4激酶抑制剂化合物组合用于治疗和/或预防由其介导的相关性疾病。在另一优选例中，所述的第二治疗活性剂包括抗肿瘤剂(包括化学药剂、生物制、CAR-T疗法、免疫调节剂)、降低不良反应的药剂(如止吐剂、化疗减毒药、升血药)、抗菌药、镇痛药、放射增敏药、营养药剂。在另一优选例中，所述的第二治疗活性剂选自抗肿瘤剂，如抗体类药物、细胞毒类药物、激素类药物、生物反应调节剂(如增强免疫功能)、细胞分化诱导剂、细胞凋亡诱导剂、血管生成抑制剂、表皮生长因子受体抑制剂等。
在另一方面，本申请还提供含有本发明任一方案所述化合物、其药学上可接受的盐、其酯或其异构体在制备药物中的用途，所述药物用于预防和/或治疗受试者的与PLK4介导的相关疾病；优选地，所述的PLK4介导的相关疾病为细胞异常增殖性疾病。在另一个实施方案中，所述的PLK4介导的相关疾病为细胞异常增殖性疾病。在另一个实施方案中，所述细胞异常增殖性疾病为癌症，选自下组：肺癌、乳腺癌、结肠癌、脑癌、咽癌、鼻咽癌、口咽癌、头颈癌、成神经细胞瘤、前列腺癌、黑色素瘤、多形性成胶质细胞瘤、卵巢癌、宫颈癌、淋巴癌、白血病、肉瘤、伴肿瘤效应、骨肉瘤、生殖细胞瘤、神经胶质瘤或间皮瘤。在另一个实施方案中，所述的癌症是肺癌、乳腺癌、结肠癌、脑癌、成神经细胞癌、前列腺癌、黑色素瘤、多形性成胶质细胞瘤或卵巢癌。在另一个实施方案中，该癌症是一种乳腺癌。在另一个实施方案中，该癌症是一种基底亚型乳腺癌或一种管腔B亚型乳腺癌。在另一具体实施例中，该癌症是一种软组织癌，包括来源于身体的任何软组织的肿瘤。这些软组织连接、支持、围绕身体不同结构和器官，包括但不限于：平滑肌、骨骼肌、腱、纤维组织、脂肪组织、血管和淋巴管、血管周围组织、神经、间充质细胞、滑膜组织。因此，软组织癌可以是脂肪组织、肌肉组织、神经组织、关节组织、血管、淋巴管以及纤维组织癌。软组织癌可以是良性的或恶性的。在另一实施方案中，软组织癌选自纤维肉瘤、胃肠肉瘤、平滑肌肉瘤、去分化脂肪肉瘤、多形脂肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、圆形细胞肉瘤、滑膜肉瘤。在另一个实施方案中，所述细胞异常增殖性疾病为癌症，如人乳腺癌。
在另一方面，本申请还提供了一种治疗癌症的方法，包给予有效量的本发明任一方案所述化合物或药物组合物或药物制剂。在一个实施方案中，本发明化合物抑制肿瘤的生长。在另一个实施例中，本发明化合物抑制过量表达PLK4的肿瘤的生长。在另一个实施例中，本发明化合物通过诱导肿瘤细胞的凋亡或通过抑制肿瘤细胞的增殖来抑制肿瘤生长。所述的癌症如前文所述。
在另一实施方案中，本发明的方法可以是与本领域中已知的用于治疗所要求的疾病或适应症的其他疗法相组合的组合疗法。在一个实施方案中，将一种或多种其他抗增殖或抗癌的疗法与本发明的化合物或包含其的药物组合物或药物制剂进行组合。在一个实施方案中，将本发明化合物与其他抗癌药物(即第二治疗活性剂)组合用于治疗癌症，所述的其他抗癌药物如前文所述。在一个实施方案中，与本发明化合物组合使用的抗癌疗法包括外科手术、放射疗法、内分泌疗法。
说明和定义
在本申请中，除非另有说明，否则本文中所使用的科学和技术名词具有本领域技术人员通常所理解的含义，然而为了更好的理解本发明，下面提供了部分术语的定义。当本申请提供的术语的定义与本领域技术人员所通常理解的含义不相符时，以本申请所提供的术语的定义和解释为准。
术语“药学上可接受的”指在合理的医学判断范围内适合与人类和动物的组织接触使用而无过度的毒性、刺激、过敏反应或其它的问题或并发症，与合理的收益/风险比相当的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
本发明所述的“药学上可接受的盐”指化合物中存在的酸性官能团(例如-COOH、-OH、-SO3H等)与适当的无机或者有机阳离子(碱)形成的盐，包括与碱金属或碱土金属形成的盐、铵盐，以及与含氮有机碱形成的盐；以及化合物中存在的碱性官能团(例如-NH2等)与适当的无机或者有机阴离子(酸)形成的盐，包括与无机酸或有机酸(例如羧酸等)形成的盐。这些盐可以在化合物合成、分离、纯化期间就被制备，或者单独使用经过纯化的化合物的游离形式与适合的酸或碱反应。本发明部分化合物获得其三氟乙酸盐的形式，但不限于本发明游离体化合物与其他接受的酸或碱形成新的盐。
本发明化合物的异构体包括几何异构体以及立体异构体，根据本发明所述的“异构体”的具体例子例如顺反异构体、对映异构体、非对映异构体、互变异构体、阻转异构体及其外消旋混合物和其他混合物，所有这些混合物都属于本发明的范围之内。
术语“对映异构体”是指互为镜像关系的立体异构体。
术语“互变异构体”是指官能团异构体的一种，其通过一个或多个双键位移而具有不同的氢的连接点，例如，酮和它的烯醇形式是酮-烯醇互变异构体。
术语“非对映异构体”是指分子具有两个或多个手性中心，并且分子间为非镜像的关系的立体异构体。
术语“顺反异构体”是指分子中双键或者成环碳原子单键不能自由旋转而产生的不同空间排列方式所形成的不同构型。
术语“阻转异构体”由于单键旋转受到阻碍或旋转非常缓慢从而能够分离出来的立体异构体。
本发明化合物可通过对映体特异性合成或从对映异构体混合物拆分个别对映异构体形式制备。常规拆分技术包括使用光学活性酸形成对映异构体对的每一异构体的游离碱的盐(接着分步结晶和游离碱再生)、使用光学活性胺形成对映异构体对的每一对映异构体的酸形式的盐(接着分步结晶和游离酸再生)、使用光学纯酸、胺或醇形成对映异构体对的每一对映异构体中的每一种的酯或酰胺(接着为色谱分离和手性助剂去除)或使用各种众所周知的色谱方法拆分起始物质或最终产物的对映异构体的混合物。
当公开的化合物的立体化学通过结构命名或描绘时，命名或描绘的立体异构体相对于其他立体异构体为至少60％重量、70％重量、80％重量、90％重量、99％重量或99.9％重量纯。当单一异构体通过结构命名或描绘时，所描绘或命名的对映异构体为至少60％重量、70％重量、80％重量、90％重量、99％重量或99.9％光学纯。光学纯度重量％为对映异构体的重量与对映异构体重量加上其光学异构体的重量比率。
当用未表明立体化学的结构来命名或描绘所公开的化合物并且所述化合物具有至少一个导致异构的元素(如手性中心、双键、不能自由旋转的成环碳原子)时，所述名称或结构涵盖所述化合物的各异构体的混合物或者一种对映异构体相对于其他异构体增浓的混合物。
术语“治疗有效量”、“有效量”是指当给予受试者本发明化合物时足以产生有益的或所希望的效果；所述的效果可以是预防肿瘤的产生，和/或抑制肿瘤的生长，和/或限制肿瘤的扩散,和/或减小肿瘤体积，和/或改善与癌症相关的临床症状或指标。但应认识到，本发明化合物的总日用量须由主诊医师在可靠的医学判断范围内作出决定。对于任何具体的患者，具体的治疗有效剂量水平须根据多种因素而定，所述因素包括所治疗的障碍和该障碍的严重程度；所采用的具体化合物的活性；所采用的具体组合物；患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食；所采用的具体化合物的给药时间、给药途径和排泄率；治疗持续时间；与所采用的具体化合物组合使用或同时使用的药物；及医疗领域公知的类似因素。例如，本领域的做法是，化合物的剂量从低于为得到所需治疗效果而要求的水平开始，逐渐增加剂量，直到得到所需的效果。
本发明所述“任选被取代”是指被取代基上的一个或多个氢原子可以被一个或多个取代基“取代”或“不取代”的两种情形。
本发明中，任何变量在化合物的组成或结构中出现一次以上时，其在每一种情况下的定义都是独立的，取代基可以相同也可以不同。
本发明所述的当L1选自化学键时，是指环A通过化学键与被取代基相连。
当一个取代基的键可以交叉连接到一个环上的两个原子时，这种取代基可以与这个环上的任意原子相键合。例如，结构单元
表示取代基R可以在苯环上的任意一个位置发生取代。
本发明通式(I’)中的结构单元
中表述的R3取代位置为左侧苯环结构。
当所述的取代基中没有指明与其他结构相连的具体原子时，表明该取代基可以通过其任何原子与其他相连结构键合，例如，哌啶基作为取代基，是指哌啶环上任意一个环原子均可连接到被取代的基团上。当取代基结构中出现
表示该原子为键合原子，例如，
表示环上的N原子为键合原子。
除非另有说明，用楔形实线键
和楔形虚线键
表示一个立体中心的绝对构型。用直形实线键
和直形虚线键
表示立体中心的相对构型，一实一虚线表示反式，双实或双虚表示顺式；当化合物结构中出现顺式结构时，也用cis-来标识；当化合物结构中出现反式结构时，也用trans-来标识。
本发明所述的“卤素”是指氟原子、氯原子、溴原子或碘原子。
本发明所述的“C1-6烷基”表示直链或支链的含有1-6个碳原子的烷基，包括例如“C1-5烷基”、“C1-4烷基”、“C1-3烷基”、“C1-2烷基”、“C2-6烷基”、“C2-5烷基”、“C2-4烷基”、“C2-3烷基”、“C3-6烷基”、“C3-5烷基”、“C3-4烷基”、“C4-6烷基”、“C4-5烷基”、“C5-6烷基”等，具体实例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、异戊基、2-甲基丁基、新戊基、1-乙基丙基、正己基、异己基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1,2-二甲基丙基等。本发明所述的“C1-4烷基”指C1-6烷基中的含有1-4个碳原子的具体实例。
本发明所述的“卤代C1-6烷基”是指C1-6烷基中的氢分别被一个或多个卤素所取代，包括“卤代C1-4烷基”，如“氟代甲基”包括一氟甲基、二氟甲基、三氟甲基；C1-6烷基如前文所定义。
本发明所述的“羧基C1-6烷基””是指C1-6烷基中的氢分别被一个或多个羧酸所取代，包括“羧基C1-4烷基”。
本发明所述的“C1-6亚烷基”是指直链或支链的含1-6个碳原子的烷烃去除两个氢原子所衍生的基团，包括“C1-5亚烷基”、“C1-4亚烷基”、“C1-3亚烷基”、“C1-2亚烷基”，具体实例包括但不限于：-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH(CH2)CH2-、-CH2CH2CH2CH2-、-CH(CH2)CH2CH2-、-CH(CH2CH2)CH2-、-C(CH2)(CH2)CH2-、-CH2CH2CH2CH2CH2-等；优选，C1-6亚烷基为直链的基团。所述亚烷基可以进一步被可选的取代基取代。
本发明中当L1为具体的“亚烷基”时，具体基团的撰写方式并不限制其与两侧取代基的连接方向。例如L1为-CH2-NH-，所述化合物结构包括以下两种：苯环-CH2-NH-环A、环A-CH2-NH-苯环。
本发明所述“C1-6烷氧基”指术语“C1-6烷基”通过氧原子与其他结构相连接的基团，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、1-甲基乙氧基、丁氧基、2-甲基丁氧基、3-甲基丁氧基、1,1-二甲基丙氧基、1,2-二甲基丙氧基等；优选C1-4烷氧基，优选C1-3烷氧基；其中“C1-6烷基”如前文所定义。
本发明所述“卤代C1-6烷氧基”是指C1-6烷氧基中的氢分别被一个或多个卤素所取代，包括“卤代C1-4烷基”，如三氟甲氧基。
本发明所述的“环烷基”是指环烷烃部分去除一个氢原子衍生的饱和环状烷基团，包括单环或多环烃基；所述的多环烃基是指由两个或两个以上环状结构通过螺、桥、稠等方式连接形成的多环基团。本发明环烷基优选3-8元环烷基，优选3-8元单环烷基，更优选3-6元单环烷基，其实例包括但不限于，环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基。
本发明所述的“某元杂环基”是指环中包含一至多个杂原子的、饱和或部分饱和但非芳香性的单环基团，所述的杂原子优选1-3个选自N、O、S，优选1-2个选自N或O，所述杂环中的环碳原子以及杂原子可以被进一步氧代，形成含有C(O)、NO、SO、S(O)2基团的环状基团，也包含在本发明所述杂环基的定义范围内。进一地，所述杂环基优选3-6元饱和杂环基、4-6元饱和杂环基、5-6元饱和杂环基、5-6元部分饱和杂环基、4-6元饱和含氮杂环基、5-6元饱和含氮杂环基等。其中所述的“含氮杂环基”是指环状基团中至少含有一个氮原子，还可以包含其它结构的杂原子，例如，仅包含1个或2个氮原子，或者，包含1个氮原子和其他的1个或2个杂原子(例如C(O)和/或O原子)，或者，包含2个氮原子和其他的1个或2个杂原子。所述杂环基的具体实例包括但不限于：吡咯烷基、咪唑烷基、呋喃烷基、噁唑烷基、哌嗪基、哌啶基、吗啉基。
本发明所述的“稠杂环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用两个相邻的原子所形成的、含有至少一个环原子为杂原子的、饱和或部分饱和的非芳香性环状基团，所述的杂原子优选1-3个选自N、O、S，优选1-2个选自N或O，所述杂环中的环碳原子以及杂原子可以被进一步氧代，形成含有C(O)、NO、SO、S(O)2基团的环状基团，也包含在本发明所述杂环基的定义范围内。本发明所述的稠杂环基包括8-14元稠杂环基、8-12元稠杂环基、8-10元稠杂环基、9-13元稠杂环基、9-12元稠杂环基、9-10元稠杂环基、6-8元稠杂环基，进一步优选为8-10元含氮杂环基、6-8元含氮稠杂环基，进一步优选8-10元饱和含氮杂环基、6-8元饱和含氮稠杂环基，优选双环稠杂环基。稠和方式包括但不限于5-6元杂环基并5-6元杂环基、5-6元杂环基并5-6元环烷基、苯并5-6元杂环基、苯并5-6元饱和杂环基、5-6元杂芳基并5-6元杂环基、5-6元杂芳基并5-6元饱和杂环基、苯并5-6元杂环基并5-6元杂环基等。所述的“含氮杂稠杂环基”是指稠环基团中至少含有一个氮原子，还可以包含其它结构的杂原子，例如，仅包含1个或2个氮原子，或者，包含一个氮原子和其他的1个或2个杂原子(例如C(O)和/或O原子)，或者，包含2个氮原子和其他的1个或2个杂原子。所述的稠杂环基的具体实例包括但不限于：
本发明中“并环”和“稠环”具有相同的概念。
本发明所述的“螺杂环基”是指由两个或两个以上环状结构彼此共用一个环原子所形成的、含有至少一个环原子为杂原子的、饱和或部分饱和的环状结构。所述杂原子优选1-3个选自N、O、S、SO、S(O)2，优选1-2个选自N或O。本发明所述的螺杂环基包括：5-12元螺杂环基、7-11元螺杂环基、7-10元螺杂环基、8-9元螺杂环基等；进一步优选为7-10元含氮螺杂环基、9-11元饱和螺杂环基、9-11元饱和螺杂环基、9-11元含氮螺杂环基、9-11元含氮饱和螺杂环基。具体实例包括但不仅限于：
除非特别说明，本发明所述的“饱和环”，包括是指环内不含有双键(不考虑互变异构的情况)、成环化学键均为饱和键的环，比如
结构，其碳氧双键是在环外、并且不参与成环，其被认为是饱和结构。所述“部分饱和环”是指不饱和键在环内、部分成环化学键为双键或三键、部分为单键的环，比如
结构，因环内含有一个双键，可被认为部分饱和结构。
本发明所述的“杂芳基”是指环中包含一至多个杂原子的、具有芳香性的单环或多环基团，所述杂原子N、O、S，所述杂芳基中杂原子可以被进一步氧代，形成含有C(O)、NO、SO、S(O)2基团的环状基团，也包含在本发明所述杂环基的定义范围内，所述杂芳基独立地包含1-3个N和/或O。本发明的杂芳基优选为单杂芳基，优选“5-6元单杂芳基”、“5-6元含氮单杂芳基”、“6元含氮单杂芳基”，所述的“含氮杂芳基”中的杂原子至少含有一个氮原子，例如，仅包含1个或2个氮原子，或者，包含一个氮原子和其他的1个或2个杂原子(例如S和/或O原子)，或者，包含2个氮原子和其他的1个或2个杂原子。所述杂芳基的具体实例包括但不限于：呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、噁唑基、异噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基等。所述杂芳环参照适用杂芳基定义。
在本发明实施例中，标题化合物的命名是借助Chemdraw通过化合物结构转化过来的。若化合物名称与化合物结构存在不一致的情况，可通过综合相关信息和反应路线辅助确定；无法通过其他来确认的，以给出的化合物结构式为准。
本发明中部分化合物的制备方法引用了前述类似化合物的制备方法。本领域人员应当知晓，在使用或参照使用其引用的制备方法时，反应物的投料比、反应溶剂、反应温度等可根据反应物的不同，进行适当的调整。
本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。
具体实施方式
1、实验仪器汇总：
本发明的化合物结构是通过核磁共振(NMR)或/和液质联用色谱(LC-MS)，或超高效液质联用色谱(UPLC-MS)来确定的。NMR化学位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。NMR的测定是用Bruker Neo 400M或者Bruker Ascend 400核磁仪器，测定溶剂为氘代二甲基亚砜(DMSO-d6)，氘代甲醇(CD3OD)和氘代氯仿(CDCl3)，重水(D2O)，内标为四甲基硅烷(TMS)。
液质联用色谱LC-MS的测定用Agilent 1260-6125B single quadrupole massspectrometer，柱子为Welch Biomate column(C18,2.7um,4.6*50mm)或者waters H-ClassSQD2，柱子为Welch Ultimate column(XB-C18,1.8um,2.1*50mm)质谱仪(离子源为电喷雾离子化)。
超高效液质联用色谱UPLC-MS的测定用Waters UPLC H-class SQD质谱仪(离子源为电喷雾离子化)。
HPLC的测定使用Waters e2695-2998或Waters ARC和Agilent 1260或AgilentPoroshell HPH高效液相色谱。
制备HPLC使用Waters 2555-2489(10μm，ODS 250cm×5cm)或GILSON TrilutionLC，柱子为Welch XB-C18柱(5um,21.2*150mm)。
手性HPLC测定使用waters acquity UPC2；柱子为Daicel chiralpak AD-H(5um,4.6*250mm),Daicel chiralpak OD-H(5um,4.6*250mm),Daicel chiralpak IG-3(3um,4.6*150mm),Chiral Technologies Europe AD-3(3um,3.0*150mm)和Trefoil TMTechnology Trefoil TM AMY1(2.5um,3.0*150mm)。
超临界流体色谱(SFC)使用waters SFC 80Q，柱子为Daicel Chiralcel OD/OJ/OZ(20x250mm,10um)或Daicel Chiralpak IC/IG/IH/AD/AS(20x 250mm,10um)。
薄层层析硅胶板使用烟台江友硅胶开发有限公司GF254硅胶板或乳山市上邦新材料有限公司GF254硅胶板，TLC采用的规格是0.15mm～0.20mm，制备型20x20cm，柱层析一般使用于成化工200～300目硅胶为载体。
本发明实施例中的起始原料是已知的并且可以在市场上买到，或者可以采用或按照本领域已知的方法来合成。
除非特别说明，本发明实施例中所用混合溶剂比为体积比，具体表述方式包括但不限于：石油醚/乙酸乙酯＝3/1。
本发明制备例中，终产物中采用星号*标识的碳原子为手性结构，表明该终产物为多种异构体结构
本发明实施例中，当出现“M”时，其含义为“mol/L”，为试剂浓度；“nM”表示nmol/L。
本发明实施例中，所述“室温”通常是指25±5℃。
本申请部分化合物的纯化试剂中含有三氟乙酸，故所得化合物含有三氟乙酸或以三氟乙酸盐形式存在，含有三氟乙酸的化合物或化合物的三氟乙酸盐形式与游离碱具有相同或相似的性质、生物活性。本领域技术人员应该明确，化合物的三氟乙酸盐与适当的碱(例如，NaOH、Na2CO3)反应制备游离碱化合物，或通过化合物制备三氟乙酸盐均为较常规的手段，本申请所公开的化合物三氟乙酸盐形式及其其制备可以视为等同公开了游离碱化合物结构及其制备。
实施例1A-1C：
(1S,3R,7S)-1-(3-((E)-4-((((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)甲基苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-7-苯基-5-氮杂螺[2.4]庚-4-酮及其异构体
反应路线:
操作步骤：
步骤1：在冰水浴下，将氢化钠(900.0毫克，22.5毫摩尔，60％分散于矿物油中)溶于N,N-二甲基甲酰胺(30毫升)中。随后，在冰水浴下向上述溶液中加入4-苯基吡咯烷-2-酮(3.0克，18.6毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(30毫升)溶液。搅拌10分钟后，再向上述反应液中加入对甲氧基苯甲基氯(3.0克，18.6毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(30毫升)的溶液。反应液在室温下反应1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应体系中加氯化铵水溶液(150毫升)淬灭。混合液用乙酸乙酯(70毫升×3次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(50毫升×1次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3/1)得到1-(4-甲氧基苄基)-4-苯基吡咯烷-2-酮(5.1克，收率97.1％)。
MS(ESI)M/Z:282.1[M+H]+.
步骤2：将1-(4-甲氧基苄基)-4-苯基吡咯烷-2-酮(5.0克，17.8毫摩尔)，和氢化钠(4.1克，103.2毫摩尔，60％分散于矿物油中)加入到甲苯(100毫升)中。在室温下向上述溶液中缓慢加入甲醇(3.4克，106.7毫摩尔)。然后再加入对氯苯甲酸甲酯(8.2克，48.0毫摩尔)，在98摄氏度下反应过夜。
LCMS监测显示原料消失后，向反应液中加入40毫升氯化铵水溶液，混合液用乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(50毫升×1次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到3-(4-氯苯甲酰基)-1-(4-甲氧基苄基)-4-苯基吡咯烷-2-酮(2.2克，收率29.5％)。
MS(ESI)M/Z:420.3[M+H]+.
步骤3：将3-(4-氯苯甲酰基)-1-(4-甲氧基苄基)-4-苯基吡咯烷-2-酮(2.2克，5.24毫摩尔)溶于二氯甲烷(40毫升)中。随后，向上述溶液中加入1,5-二氮杂二环[5.4.0]十一-5-烯(1.6克，10.5毫摩尔)和对甲苯磺酰叠氮(1.6克，7.9毫摩尔)。反应液在室温下反应过夜。
LCMS监测显示原料消失后，向反应体系中加碳酸氢钠水溶液(100毫升)淬灭。混合液用二氯甲烷(50毫升×3次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(50毫升×1次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到3-重氮-1-(4-甲氧基苄基)-4-苯基吡咯烷-2-酮(700毫克，收率43.4％)。
MS(ESI)M/Z:308.2[M+H]+.
步骤4：将3-重氮-1-(4-甲氧基苄基)-4-苯基吡咯烷-2-酮(698.0毫克，2.3毫摩尔)和1-(4-甲氧基苄基)-6-乙烯基-1H-吲唑(400.0毫克，1.52毫摩尔)溶于1,4-二氧六环(15毫升)中。反应液在95摄氏度下反应过夜。
LCMS监测显示原料消失后，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到5-(4-甲氧基苄基)-1-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吲唑-6-基)-7-苯基-5-氮杂螺[2.4]庚-4-酮(650.0毫克，收率54.2％)。
MS(ESI)M/Z:544.2[M+H]+.
步骤5：向5-(4-甲氧基苄基)-1-(1-(4-甲氧基苄基)-1H-吲唑-6-基)-7-苯基-5-氮杂螺[2.4]庚-4-酮(650.0毫克，1.2毫摩尔)中加入三氟乙酸(10毫升)，再加入三氟甲磺酸(0.5毫升)反应液在100摄氏度下反应2天。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液加入到碳酸氢钠水溶液(50毫升)中，用二氯甲烷/甲醇＝10/1(40毫升×3次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(40毫升×1次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。得残留物用乙醇打浆得滤液，将滤液减压浓缩得到1-(1H-吲唑-6-基)-7-苯基-5-氮杂[2.4]庚-4-酮(450.0毫克，以三氟甲磺酸盐计算，收率82.8％)。
MS(ESI)M/Z:304.0[M+H]+。
步骤6：将1-(1H-吲唑-6-基)-7-苯基-5-氮杂[2.4]庚-4-酮(450.0毫克，1.5毫摩尔)和碳酸钾(404.0毫克，3.0毫摩尔)加入到N,N-二甲基甲酰胺(9毫升)中，然后再加入碘单质(639.0毫克，2.5毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(3毫升)溶液，在室温下反应过夜。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液中加入水(40毫升)，搅拌30分钟，过滤，得到1-(3-碘-1H-吲唑-6-基)-7-苯基-5-氮杂[2.4]庚-4-酮(225.0毫克，收率35.3％)。
MS(ESI)M/Z:430.0[M+H]+.
步骤7：将1-(3-碘-1H-吲唑-6-基)-7-苯基-5-氮杂[2.4]庚-4-酮(225.0毫克，0.5毫摩尔)、(2S,6R)-2,6-二甲基-4-(4-((E)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苄基吗啉(281.0毫克，0.8毫摩尔)、碳酸钠(278.0毫克，2.6毫摩尔)和氯化锂(66.0毫克，1.6毫摩尔)溶于混合溶剂中(1,4-二氧六环/水＝4/1，15毫升)中。在室温搅拌15分钟，然后再加入四三苯基磷钯(30.0毫克，0.03毫摩尔)。最后反应体系用氮气置换掉空气。反应液在98摄氏度下反应过夜。
LCMS监测显示原料消失后，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到的产物再进行制备纯化得到(1S,3R,7S)1-(3-((E)-4-((((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-7-苯基-5-氮杂螺[2.4]庚-4-酮(三氟乙酸盐)，三个异构体：1A化合物(3.46毫克，收率1.0％)，1B化合物(6.26毫克，收率1.8％)，1C化合物(9.97毫克，收率2.9％)。理论有四个异构体，但只分离得到三个。
HPLC手性柱：Daicel IG-3(25*250mm,10um)，温度：30℃，流动相：CO2/MeOH(0.2％Methanol Ammonia)＝65/35，流速：100g/min，压力：100bar,检测波长：214nm,循环时间：15min。
实施例1A:
HPLC保留时间：6.803min，ee值：95％.
MS(ESI)M/Z:533.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.83-7.72(m,3H),7.64-7.50(m,4H),7.44(d,J＝3.4Hz,2H),6.98(s,1H),6.79-6.74(m,4H),4.35(s,2H),4.00(dd,J＝9.8,7.2Hz,1H),3.86-3.81(m,2H),3.41-3.35(m,3H),3.25-3.19(m,1H),2.95-2.87(m,1H),2.81-2.74(m,2H),1.90-1.82(m,1H),1.51-1.44(m,1H),1.25-1.22(m,6H).
实施例1B:
HPLC保留时间：7.401min，ee值：96％.
MS(ESI)M/Z:533.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.11(d,J＝8.4Hz,1H),7.80(d,J＝8.1Hz,2H),7.58(s,2H),7.55(d,J＝8.1Hz,2H),7.26-7.20(m,3H),7.10-7.05(m,2H),6.94-6.87(m,2H),4.36(s,2H),3.86-3.78(m,3H),3.40-3.33(m,4H),3.08-3.02(m,1H),2.82-2.76(m,2H),2.05-1.99(m,1H),1.63-1.59(m,1H),1.25-1.22(m,6H).
实施例1C:
HPLC保留时间：8.400min，ee值：95％。
MS(ESI)M/Z:533.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.02-7.91(m,1H),7.80-7.74(m,2H),7.57-7.50(m,4H),7.48-7.41(m,3H),7.37-7.23(m,4H),4.35(s,2H),4.14-3.78(m,4H),3.64-3.45(m,1H),3.40-3.32(m,3H),2.84-2.74(m,2H),2.08-1.37(m,2H),1.25-1.21(m,6H).
实施例2A-2D：
(1S,3S,6S)-1-(3-((E)-4-(((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-6-苯基-5-氮杂螺[2.4]庚-4-酮及其异构体
反应路线:
操作步骤：
步骤1：在冰水浴下，将氢化钠(600.0毫克，14.9毫摩尔，60％分散于矿物油中)溶于N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)中。随后，在冰水浴下向上述溶液中加入5-苯基吡咯烷-2-酮(2.0克，12.4毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(20毫升)溶液。搅拌10分钟后，再向上述反应液中加入对甲氧基苯甲基氯(1.9克，12.4毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(10毫升)的溶液。反应液在室温下反应1小时。
LCMS监测显示原料消失后，向反应体系中加氯化铵水溶液(150毫升)淬灭。混合液用乙酸乙酯(70毫升×3次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(50毫升×1次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝3/1)得到1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基吡咯烷-2-酮(3.4克，收率97.1％)。
MS(ESI)M/Z:282.5[M+H]+.
步骤2：在-70摄氏度下，将1mol/L的六甲基二硅基胺基锂(24毫升，24.2毫摩尔)加入到四氢呋喃(50毫升)中。随后，向其中加入1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基吡咯烷-2-酮(3.4克，12.1毫摩尔)。在-70摄氏度下向上述溶液中缓慢加入2,2,2-三氟乙醇(2.8克，14.5毫摩尔)。在滴加过程中反应液温度不得超过-60摄氏度。在-70摄氏度下继续搅拌45分钟。然后升到室温反应1小时。
TLC监测显示原料消失后，向反应液中加入10％的盐酸水溶液(20毫升)淬灭，然后再加入40毫升水，混合液用乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(50毫升×1次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。得到粗品1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-3-(2,2,2-三氟乙酰基)吡咯烷-2-酮(4.6克)直接用于下一步。
步骤3：将1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基-3-(2,2,2-三氟乙酰基)吡咯烷-2-酮(4.6克，12.1毫摩尔)溶于二氯甲烷(80毫升)中。随后，向上述溶液中加入1,5-二氮杂二环[5.4.0]十一-5-烯(3.7克，24.2毫摩尔)和对甲苯磺酰叠氮(3.6克，18.1毫摩尔)。反应液在室温下反应过夜。
LCMS监测显示原料消失后，向反应体系中加碳酸氢钠水溶液(100毫升)淬灭。混合液用二氯甲烷(50毫升×3次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(50毫升×1次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝2/1)得到3-重氮-1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基吡咯烷-2-酮(1.3克，收率35.0％)。
MS(ESI)M/Z:308.2[M+H]+.
步骤4：将溴化甲基三苯基磷(1.2克，3.4毫摩尔)和叔丁醇钾(380毫克，3.4毫摩尔)溶于无水四氢呋喃(50毫升)中，于冰浴下反应2小时，然后加入3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-甲醛(1.0克，2.8毫摩尔)，自然升温至室温反应。
LCMS监测显示原料消失后，加入水淬灭反应，混合液用乙酸乙酯(50毫升×3次)萃取，合并有机相，有机相先用亚硫酸氢钠(50毫升×1次)洗涤，再用饱和食盐水(50毫升×1次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6-乙烯基-1H-吲唑(550.0毫克，收率55.5％)。
MS(ESI)M/Z:355.2[M+H]+.
步骤5：将3-重氮-1-(4-甲氧基苄基)-5-苯基吡咯烷-2-酮(674.0毫克，2.2毫摩尔)和3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-6-乙烯基-1H-吲唑(520.0毫克，1.47毫摩尔)溶于1,4-二氧六环(15毫升)中。反应液在95摄氏度下反应过夜。
LCMS监测显示原料消失后，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/1)得到1-(3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5-(4-甲氧基苄基)-6-苯基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-4-酮(550.0毫克，收率39.3％)。
MS(ESI)M/Z:634.4[M+H]+.
步骤6：将1-(3-碘-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5-(4-甲氧基苄基)-6-苯基-5-氮杂螺[2.4]庚烷-4-酮(550.0毫克，0.9毫摩尔)、(2S,6R)-2,6-二甲基-4-(4-((E)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)乙烯基)苄基吗啉(465.0毫克，1.3毫摩尔)、碳酸钾(300.0毫克，2.2毫摩尔)和[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(50.0毫克，0.07毫摩尔)溶于混合溶剂中(1,4-二氧六环/水＝4/1，15毫升)中。将反应体系用氮气置换掉空气。反应液在100摄氏度下反应3小时。
LCMS监测显示原料消失后，减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化得到1-(3-((E)-4-((((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)甲基)苯乙烯基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5-(4-甲氧基苄基)-6-苯基-5-氮杂[2.4]庚-4-酮(250.0毫克，收率39.1％)。
MS(ESI)M/Z:737.1[M+H]+。
步骤7：向1-(3-((E)-4-((((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)甲基)苯乙烯基)-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5-(4-甲氧基苄基)-6-苯基-5-氮杂[2.4]庚-4-酮(250.0毫克，0.34毫摩尔)中加入三氟乙酸(4毫升)，再加入三氟甲磺酸(0.5毫升)反应液在100摄氏度下反应3小时。
LCMS监测显示原料消失后，将反应液加入到碳酸氢钠水溶液(20毫升)中，用二氯甲烷/甲醇(10/1，20毫升×3次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(50毫升×1次)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。得残留物经制备型高效液相色谱纯化得到四个异构体(三氟乙酸盐)：2A化合物(6.8毫克，收率3.1％)，2B化合物(1.88毫克，收率0.9％)，2C化合物(9.97毫克，收率4.5％)，2D化合物(8.68毫克，收率4.0％)。
HPLC手性柱：Daicel IG-3(25*250mm,10um)，温度：30℃，流动相：CO2/MeOH(0.2％Methanol Ammonia)＝65/35，流速：100g/min，压力：100bar,检测波长：214nm,循环时间：15min。
实施例2A：
HPLC保留时间：7.266min，ee值：93％.
MS(ESI)M/Z:533.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.91(d,J＝8.5Hz,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,2H),7.59-7.42(m,4H),7.31-7.14(m,6H),6.95-6.85(m,1H),4.82(dd,J＝8.8,4.7Hz,1H),4.29(s,2H),3.88-3.74(m,2H),3.40-3.32(m,2H),2.84-2.66(m,3H),2.62-2.49(m,1H),1.77-1.41(m,3H),1.25-1.20(m,6H).
实施例2B：
HPLC保留时间：7.792min，ee值：95％.
MS(ESI)M/Z:533.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.09(d,J＝8.5Hz,1H),7.79(d,J＝8.2Hz,2H),7.59-7.47(m,4H),7.36-7.26(m,6H),7.15-6.99(m,1H),4.74-4.65(m,1H),4.31(s,2H),3.89-3.76(m,2H),3.41-3.32(m,2H),2.84-2.66(m,3H),2.31-2.16(m,1H),1.97-1.83(m,1H),1.79-1.63(m,1H),1.51-1.34(m,1H),1.25-1.20(m,6H).
实施例2C：
HPLC保留时间：8.424min，ee值：92％.
MS(ESI)M/Z:533.3[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.98(d,J＝8.4Hz,1H),7.79(d,J＝8.1Hz,2H),7.54(d,J＝8.5Hz,4H),7.46-7.32(m,6H),7.10(dd,J＝8.5,1.4Hz,1H),4.88-4.84(m,1H),4.35(s,2H),3.89-3.75(m,2H),3.42-3.34(m,2H),3.09-2.96(m,1H),2.84-2.65(m,2H),2.55-2.45(m,1H),2.24-2.09(m,1H),1.98-1.80(m,1H),1.50-1.37(m,1H),1.26-1.19(m,6H).
实施例2D：
HPLC保留时间：8.724min，ee值：95％.
MS(ESI)M/Z:533.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.00(d,J＝8.6Hz,1H),7.78(d,J＝8.0Hz,2H),7.59-7.45(m,4H),7.44-7.29(m,6H),7.29-7.24(m,1H),5.07-4.97(m,1H),4.31(s,2H),3.89-3.77(m,2H),3.40-3.34(m,2H),2.83-2.70(m,3H),2.69-2.58(m,1H),2.35-2.24(m,1H),1.95-1.82(m,1H),1.44-1.42(m,1H),1.26-1.20(m,6H).
实施例3：
(1R,2S)-2-(3-((E)-4-(((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)甲基)苯乙烯基)-4-甲氧基-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮
反应路线:
操作步骤：
步骤1：在室温和氮气保护下，将氢化钠(29.0毫克，1.2毫摩尔)溶于无水四氢呋喃(4毫升)中，再加入三甲基碘化亚砜(99.0毫克，0.45毫摩尔)，在室温搅拌30分钟，随后将(E)-3-((3-碘-4-甲氧基-1H-吲唑-6-基)亚甲基)-5-甲氧基二氢吲哚-2-酮(80毫克，0.15毫摩尔)，在室温下搅拌过夜。
LC-MS监测显示原料消失后，向反应液中加入氯化铵水溶液(20毫升)淬灭。用乙酸乙酯(30毫升×2次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(20毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。得到产品2-(3-碘-4-甲氧基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-吲哚]-2-酮粗品直接用于下一步(82.0毫克，收率100.0％)。
MS(ESI)M/Z:546.1[M+H]+.
步骤2：在室温和氮气保护下，将上一步2-(3-碘-4-甲氧基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-吲哚]-2-酮粗品(82.0毫克，0.15毫摩尔)和(2R,6S)-2,6-二甲基-4-(4-((E)-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)乙烯基)苄基吗啉(80.0毫克，0.22毫摩尔)溶于1,4-二氧六环(4毫升)。随后，加入碳酸钾(51.0毫克，0.36毫摩尔)，水(1毫升)，Pd(dppf)Cl2(10.0毫克，0.013毫摩尔)，然后氮气置换。在100摄氏度下搅拌3小时。
TLC监测显示原料消失后，加入氯化铵溶液(20毫升)，混合液用乙酸乙酯(50毫升×2次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(20毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝40/1)得到2-(3-((E)-4-(((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)甲基)苯乙烯基)-4-甲氧基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(70.0毫克，收率71.7％)。
MS(ESI)M/Z:649.4[M+H]+.
步骤3：在室温下，将2-(3-((E)-4-(((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)甲基)苯乙烯基)-4-甲氧基-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(70.0毫克，0.11毫摩尔)溶于甲醇(4毫升)，随后，加入甲基磺酸(200.0毫克，2.1毫摩尔)，反应液在60摄氏度下搅拌2小时。
TLC监测显示原料消失后，加入碳酸氢钠水溶液,混合液用二氯甲烷(30毫升×3次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(20毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用反相制备柱制备得到(1R,2S)-2-(3-((E)-4-(((2S,6R)-2,6-二甲基吗啉代)甲基)苯乙烯基)-4-甲氧基-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(三氟乙酸盐，3.08毫克，收率5.0％)。
MS(ESI)M/Z:565.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CH3OD)δ7.79-7.70(m,3H),7.63-7.53(m,3H),7.09(s,1H),6.86(d,J＝8.5Hz,1H),6.66(dd,J＝8.5,2.6Hz,1H),6.40(s,1H),5.74(d,J＝2.5Hz,1H),4.37(s,2H),3.92(s,3H),3.88-3.82(m,2H),3.42-3.35(m,3H),3.30(s,3H),2.83-2.75(m,2H),2.30-2.15(m,2H),1.26(s,3H),1.25(s,3H).
实施例4：
2-(1-(4-(E)-2-(6-(1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧螺[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2-基)-1H-吲唑-3-乙烯基)苄基)哌啶-4-基)乙酸
反应路线:
操作步骤：
步骤1：将6-溴-1H-吲唑(50克，0.25摩尔)的无水二甲基亚砜(250毫升)用叔丁醇钾(34克，0.3摩尔)。在室温下搅拌10分钟后，加入氯化苄(38g，0.3摩尔)，然后加入所得混合物在室温下搅拌4小时。
将反应液慢慢倒入饱和氯化铵水溶液(500毫升)中，混合液用甲叔醚(500毫升×2次)萃取。合并有机相，有机相先用饱和食盐水(500毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得粗品直接用于下一步。
步骤2：上步所得残余物(45克)溶于氯化苄(70毫升)中，在150摄氏度下加热反应8小时。
反应结束后蒸馏出氯化苄，然后用石油醚重结晶，过滤得1-苄基-6-溴-1H-吲唑(40克，产率55.6％)。
步骤3：将1-苄基-6-溴-1H-吲唑(40克，0.14摩尔)和三氟(乙烯基)硼酸钾(22克，0.17摩尔)和碳酸钠(30克，0.28摩尔)和[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(2.5克，3.41毫摩尔)溶于1,4-二氧六环(800毫升)和水(200毫升)中，然后氮气置换三次。反应液加热至90摄氏度，搅拌3小时。
TLC监测显示原料消失后，将反应液慢慢倒水溶液(1升)中，混合液用乙酸乙酯(500毫升×2次)萃取。合并有机相，有机相先用饱和食盐水(500毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝30/1)得到1-苄基-6-乙烯基-1H-吲唑(28克，收率85.6％)。
MS(ESI)M/Z:234.9[M+H]+.
步骤4：将铁氰酸钾(93克，282.1毫摩尔)，碳酸钾(39克，282.1摩尔)，氢化奎宁1,4-(2,3-二氮杂萘)二醚(733毫克，9.4毫摩尔)和锇酸钾(346毫克，9.4毫摩尔)溶于混合溶剂(叔丁醇/水＝1/1，800毫升)中，然后在冰水浴下加入1-苄基-6-乙烯基-1H-吲唑(22克，94毫摩尔)反应液在0摄氏度下搅拌4小时后升室温反应2小时。
TLC监测显示原料消失后，将反应液加入硫代硫酸钠(190克)搅拌30分钟，然后加入水(500毫升)，用乙酸乙酯(300毫升×2次)萃取。合并有机相，有机相先用硫代硫酸钠(200毫升)洗涤，再用饱和食盐水(300毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用10毫升/克的甲苯加热溶解，然后冷却析出固体，过滤得到(S)-1-(1-苄基-1H-吲唑-6-基)乙烷-1,2-二醇(21克，99.0％e.e，收率84.0％)。
MS(ESI)M/Z:268.8[M+H]+.
步骤5：将(S)-1-(1-苄基-1H-吲唑-6-基)乙烷-1,2-二醇(9克，33.58毫摩尔)溶于二氯甲烷(180毫升)中，再加入三乙胺(8.48克，83.96毫摩尔)。然后在冰水浴下缓慢滴加甲基磺酰氯(8.07克，70.52毫摩尔)，在室温下反应2小时。
TLC监测显示原料消失后，将反应液慢慢倒1摩尔/升的盐酸水溶液(200毫升)中，混合液用二氯甲烷(100毫升×2次)萃取。合并有机相，有机相先用1摩尔/升的盐酸水溶液(100毫升)洗涤，再用饱和的碳酸钠水溶液(50毫升)洗涤，用饱和食盐水(100毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。得到(S)-1-(1-苄基-1H-吲唑-6-基)乙烷-1,2-二基二甲磺酸酯(14克，收率98.0％)。
MS(ESI)M/Z:424.7[M+H]+.
步骤6：将5-甲氧基二氢吲哚-2,3-二酮(30克，169.4毫摩尔)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200毫升)中，加入氢化钠(60％，10.2克，255毫摩尔)和溴化苄(31.8克，182.4毫摩尔)。室温搅拌3小时。
TLC监测显示原料消失后，将反应液慢慢倒氯化铵水溶液(600毫升)中，混合液用乙酸乙酯(600毫升×2次)萃取。合并有机相，有机相先用饱和食盐水(600毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。得到1-苄基-5-甲氧基二氢吲哚-2,3-二酮(24克，收率53.1％)。
步骤7：将1-苄基-5-甲氧基二氢吲哚-2,3-二酮(20克，74.9毫摩尔)溶于二甲基亚砜(60毫升)加入水合肼(7.4克，148毫摩尔)反应液加热至140摄氏度，搅拌3小时。
TLC监测显示原料消失后，将反应液慢慢倒水(600毫升)中，混合液用乙酸乙酯(600毫升×2次)萃取。合并有机相，有机相先用1M稀盐酸洗涤，再用饱和食盐水(600毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩得到1-苄基-5-甲氧基二氢吲-2-酮(14克，收率73.9％)。
MS(ESI)M/Z:254.2[M+H]+.
步骤8：将1-苄基-5-甲氧基二氢吲-2-酮(8.35克，33.02毫摩尔)溶于干燥的四氢呋喃(250毫升)，在冰水浴下加入氢化钠(2.77克，69.34毫摩尔)，在此温度下搅拌15分钟，再滴加(S)-1-(1-苄基-1H-吲唑-6-基)乙烷-1,2-二基二甲磺酸酯(14克，33.02毫摩尔)的四氢呋喃(400毫升)溶液，在冰水浴下反应2小时。
TLC监测显示原料消失后，将反应液中加入饱和氯化铵水溶液(300毫升)中，混合液用乙酸乙酯(300毫升×2次)萃取。合并有机相，有机相先用饱和食盐水(200毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝1/1)，然后用石油醚和乙酸乙酯的混合溶剂(石油醚/乙酸乙酯＝5/1)打浆得到(1R,2S)-1’-苄基-2-(1-苄基-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(11.7克，收率73.0％)。
MS(ESI)M/Z:486.2[M+H]+.
步骤9：将(1R,2S)-1’-苄基-2-(1-苄基-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(11.7克，24.12毫摩尔)溶于四氢呋喃(350毫升)中，在0摄氏度下加入叔丁醇钾(54.5克，0.48摩尔)和二甲基亚砜(36克，0.46摩尔)，再通入氧气反应三小时，然后用氧气球在室温下反应过夜。
TLC监测显示原料消失后，在反应液中加入饱和的氯化铵水溶液(200毫升)中，混合液用乙酸乙酯(200毫升×2次)萃取。合并有机相，有机相先用饱和食盐水(100毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：乙酸乙酯)得到(1R,2S)-2-(1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(4克，收率55.6％)。
MS(ESI)M/Z:306.1[M+H]+.
步骤10：将(1R,2S)-2-(1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(4克，13.11毫摩尔)溶于混合溶剂(N,N-二甲基甲酰胺/甲醇＝5/4，18毫升)中，再加入碳酸钾(3.6克，26.22毫摩尔)，然后加入碘(4.31克，17.0毫摩尔)、乙烯基硼酸频那醇酯(601.6毫克，3.91毫摩尔)和N,N-二异丙基乙胺(503.9毫克，3.91毫摩尔)的N,N-二甲基甲酰胺(6毫升)溶液，在室温下反应过夜。
TLC监测显示原料消失后，在反应液中加入硫代硫酸钠(3克)和水(16毫升)，搅拌30分钟，然后加入50毫升水，过滤得到固体为(1R,2S)-2-(3-碘-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(湿重5.7克，收率100.9％)。
MS(ESI)M/Z:431.9[M+H]+.
步骤11：将(1R,2S)-2-(3-碘-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(4.3克，9.98毫摩尔)，(E)-4-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)乙烯基)苯甲醛(3.35克，12.97毫摩尔)，碳酸钠(2.12克，19.95毫摩尔)和四三苯基磷钯(500毫克，0.5毫摩尔)溶于混合溶剂(二氧六环/水＝4/1，100毫升)中，然后氮气置换三次。反应液加热至85摄氏度，搅拌过夜。
TLC监测显示原料消失后，将反应液慢慢倒入水(100毫升)中，混合液用乙酸乙酯(100毫升×2次)萃取。合并有机相，有机相先用饱和食盐水(50毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝30/1)得到4-((E)-2-(6-((1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧代螺[环丙烷-1,3’-吲哚]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苯甲醛(3.5克，收率82.0％)。
MS(ESI)M/Z:436.1[M+H]+.
步骤12：将公用中间体INT-B(200毫克，0.46毫摩尔)溶于1,2-二氯乙烷(5毫升)和四氢呋喃(5毫升)，依次加入4-哌啶乙酸乙酯盐酸盐(190毫克，0.92毫摩尔)、N,N-二异丙基乙胺(237毫克，1.8毫摩尔)和三乙酰氧基硼氢化钠(195毫克，0.92毫摩尔)，最后加入醋酸(2滴)。室温反应过夜。
LCMS监测显示原料消失后，先减压浓缩旋去1,2-二氯乙烷和四氢呋喃的混合溶液，再用水(10毫升×3次)和二氯甲烷(10毫升×2次)分液，合并有机相后干燥减压浓缩,得2-(1-(4-(E)-2-(6-(1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧螺[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2-基)-1H-吲唑-3-乙烯基)苄基)哌啶-4-基)乙酸乙酯粗品(206毫克，收率76.0％)。
MS(ESI)M/Z:591.0[M+H]+.
步骤13:将步骤L的2-(1-(4-(E)-2-(6-(1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧螺[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2-基)-1H-吲唑-3-乙烯基)苄基)哌啶-4-基)乙酸乙酯粗品(206毫克，0.46毫摩尔)和氢氧化钠(42毫克，1.4毫摩尔)加入到水(10毫升)和四氢呋喃(10毫升)的混合溶液中。
TLC监测,显示原料消失后，先将反应液体系中的四氢呋喃减压蒸干。随后将所得反应液水相加入三氟乙酸进行制备，(色谱柱：SP ODS-A 50mm×250mm；流动相：水(含有1毫升/升三氟乙酸)和乙腈(含有1毫升/升三氟乙酸)；流速:60毫升/分钟；梯度：在15分钟内，乙腈从10％升到60％；检测波长：210nm和254nm)。收集产品，减压冻干，得到目标产物2-(1-(4-(E)-2-(6-(1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧螺[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2-基)-1H-吲唑-3-乙烯基)苄基)哌啶-4-基)乙酸(三氟乙酸盐)(24.2毫克，收率12.3％)。
MS(ESI)M/Z:562.9[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.03(d,J＝8.4Hz,1H),7.76(d,J＝8.0Hz,2H),7.56-7.48(m,5H),7.06(d,J＝8.5Hz,1H),6.83(d,J＝8.4Hz,1H),6.61(dd,J＝8.5,2.6Hz,1H),5.57(d,J＝2.6Hz,1H),4.31(s,2H),3.52(d,J＝12.5Hz,2H),3.36(t,J＝8.4Hz,2H),3.26(s,3H),3.05(t,J＝12.6Hz,2H),2.30(d,J＝6.4Hz,2H),2.24(dd,J＝7.9,4.8Hz,1H),2.18(dd,J＝9.0,4.8Hz,1H),2.09-2.03(m,2H),1.57-1.41(m,2H).
实施例5：
4-(4-((E)-2-(6-(1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧螺环[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基氨基)环己烷羧酸
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物4-(4-((E)-2-(6-(1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧螺环[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基氨基)环己烷羧酸(三氟乙酸盐，收率6.8％)。
MS(ESI)M/Z:563.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.03(d,J＝8.4Hz,1H),7.74(d,J＝8.4Hz,2H),7.53-7.48(m,5H),7.05(d,J＝8.0Hz,1H),6.83(d,J＝8.8Hz,1H),6.62(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),5.58(d,J＝2.8Hz,1H),4.25(s,2H),3.36(t,J＝8.4Hz,1H),3.26(s,3H),3.18(m,1H),2.30-2.24(m,4H),2.23-2.17(m,3H),1.63-1.44(m,4H).
实施例6：
(1R,2S)-2-(3-((E)-4-(2-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷基-7-甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-5’甲氧螺环[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物(1R,2S)-2-(3-((E)-4-(2-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷基-7-甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-5’甲氧螺环[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2’-酮(三氟乙酸盐，收率12.7％)。
MS(ESI)M/Z:547.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.03(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(d,J＝8.1Hz,2H),7.59-7.46(m,5H),7.09-7.03(m,1H),6.83(d,J＝8.4Hz,1H),6.61(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.57(d,J＝2.5Hz,1H),4.56(s,2H),4.41(s,2H),4.29(s,2H),3.50-3.42(m,2H),3.39-3.36(m,1H),3.26(s,3H),3.06-2.95(m,2H),2.43-2.33(m,2H),2.28-2.15(m,2H),1.96-1.84(m,2H).
实施例7：
(1R,2S)-2-(3-((E)-4-((7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物(1R,2S)-2-(3-((E)-4-((7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(三氟乙酸盐，收率48.9％)。
MS(ESI)M/Z:547.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(d,J＝8.0Hz,2H),7.58-7.48(m,5H),7.08(dd,J＝8.5,1.4Hz,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),6.63(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.60(d,J＝2.5Hz,1H),4.44(s,2H),4.05(q,J＝10.7Hz,4H),3.64(dt,J＝19.8,5.4Hz,4H),3.39(t,J＝8.5Hz,1H),3.29(s,3H),2.24(ddd,J＝24.3,8.5,4.8Hz,2H),1.90(t,J＝5.4Hz,4H).
实施例8：
1-(4-((E)-2-(6-((1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧螺环[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2-yl)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基)哌啶-4-羧酸
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物1-(4-((E)-2-(6-((1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧螺环[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2-yl)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基)哌啶-4-羧酸(三氟乙酸盐，收率20.1％)。
MS(ESI)M/Z:549.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.21(brs,1H),10.46(s,1H),9.46(brs,1H),8.09(d,J＝8.4Hz,1H),7.81(dd,J＝8.2,4.1Hz,2H),7.64-7.50(m,5H),7.06(d,J＝8.4Hz,1H),6.76(d,J＝8.4Hz,1H),6.58(dd,J＝8.5,2.6Hz,1H),5.67(d,J＝2.5Hz,1H),4.39-4.26(m,3H),3.49-3.35(m,2H),3.30(s,3H),3.26-3.18(m,1H),3.03-2.90(m,2H),2.39-2.33(m,1H),2.14-2.04(m,2H),2.03-1.97(m,1H),1.80-1.65(m,2H).
实施例9：
(1R,2S)-2-3-(4-(2-氧杂-6-氮杂-螺[3,3]庚烷-6-甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-5’甲氧螺环[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物(1R,2S)-2-3-(4-(2-氧杂-6-氮杂-螺[3,3]庚烷-6-甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-5’甲氧螺环[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2’-酮(三氟乙酸盐，收率12.5％)。
MS(ESI)M/Z:519.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.03(d,J＝8.4Hz,1H),7.80-7.70(m,2H),7.53(s,2H),7.51-7.45(m,3H),7.06(d,J＝8.4Hz,1H),6.83(d,J＝8.5Hz,1H),6.61(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.57(d,J＝2.5Hz,1H),4.85-4.71(m,2H),4.37(s,2H),4.36-4.28(m,2H),4.06(s,2H),3.60(s,1H),3.52(s,1H),3.36(t,J＝8.5Hz,1H),3.26(s,3H),2.27-2.15(m,2H).
实施例10：
1-(4-((E)-2-(6-((1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧代螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基)-4-甲基哌啶-4-腈
反应路线:
操作步骤：
步骤1：在室温下，将化合物4-((E)-2-(6-(((1R,2S)-5'-甲氧基-2'-氧螺环[环丙烷-1,3'-吲哚啉]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苯甲醛(200毫克，0.46毫摩尔，制备方法参照实施例4)和4-甲基哌啶-4-腈盐酸盐(295.0毫克，1.84毫摩尔)，N,N-二异丙基乙胺(119.0毫克，0.92毫摩尔)溶于1，2-二氯乙烷(6毫升)和四氢呋喃(2毫升)中，依次加入三(乙酰氧基)硼氢化钠(195.0毫克，0.92毫摩尔)和醋酸(0.3毫升)。反应液室温搅拌过夜。
LC-MS监测显示原料消失后，加入饱和碳酸氢钠水溶液(20毫升)淬灭。用二氯甲烷(30毫升×2次)萃取。合并有机相，有机相先用饱和食盐水(10毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得粗品制备提纯得1-(4-((E)-2-(6-((1R,2S)-5'-甲氧基-2′-氧代螺[环丙烷-1,3′-二氢吲哚]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基)-4-甲基哌啶-4-腈(三氟乙酸盐，59.2毫克，收率23.6％)。
MS(ESI)M/Z:544.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06(d,J＝8.4Hz,1H),7.80(d,J＝8.2Hz,2H),7.59-7.56(m,4H),7.51(s,1H),7.08(d,J＝8.6Hz,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),6.63(dd,J＝8.5,2.6Hz,1H),5.60(d,J＝2.5Hz,1H),4.45(s,2H),3.68-3.58(m,2H),3.41-3.37(m,1H),3.31-3.23(m,5H),2.34-2.25(m,3H),2.23-2.19(m,1H),1.90-1.78(m,2H),1.50(s,3H).
实施例11：
(1R,2S)-5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物(1R,2S)-5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(三氟乙酸盐，收率11.0％)。
MS(ESI)M/Z:521.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(d,J＝8.2Hz,2H),7.58-7.50(m,5H),7.08(dd,J＝8.6,1.4Hz,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),6.64(dd,J＝8.5,2.6Hz,1H),5.60(d,J＝2.5Hz,1H),4.29(s,2H),4.08(dd,J＝11.8,4.6Hz,2H),3.52-3.44(m,3H),3.41-3.37(m,1H),3.29(s,3H),2.27(dd,J＝7.9,4.8Hz,1H),2.21(dd,J＝9.0,4.8Hz,1H),2.17-2.09(m,2H),1.73(qd,J＝12.2,4.7Hz,2H).
实施例12：
(1R,2S)-5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-(((((R)-四氢呋喃-3-基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-吲哚]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物(1R,2S)-5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-(((((R)-四氢呋喃-3-基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-吲哚]-2’-酮(三氟乙酸盐，收率18.8％)。
MS(ESI)M/Z:507.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ7.97-7.87(m,1H),7.67-7.62(m,2H),7.44-7.38(m,5H),7.00-6.91(m,1H),6.78-6.69(m,1H),6.56-6.47(m,1H),5.52-5.45(m,1H),4.15(s,2H),3.99-3.92(m,2H),3.90-3.84(m,1H),3.79-3.73(m,1H),3.69-3.62(m,1H),3.30-3.24(m,1H),3.17-3.15(m,3H),2.40-2.28(m,1H),2.16-2.06(m,2H),2.04-1.95(m,1H).
实施例13：
(1R,2S)-2-(3-((E)-4-((4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物(1R,2S)-2-(3-((E)-4-((4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2’-酮(三氟乙酸盐，收率1.9％)。
MS(ESI)M/Z:535.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06(d,J＝8.4Hz,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,2H),7.59-7.51(m,5H),7.09(d,J＝8.6Hz,1H),6.85(d,J＝8.5Hz,1H),6.68-6.61(m,1H),5.60(d,J＝2.5Hz,1H),4.37(s,2H),3.42-3.36(m,5H),3.29(s,3H),2.30-2.19(m,2H),1.87-1.80(m,4H),1.31(s,3H).
实施例14：
1-(4-((E)-2-(6-((1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧螺环[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基)-4-甲基哌啶-4-羧酰胺
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物1-(4-((E)-2-(6-((1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧螺环[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基)-4-甲基哌啶-4-羧酰胺(三氟乙酸盐，收率8.9％)。
MS(ESI)M/Z:561.9[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.07-8.00(m,1H),7.80-7.72(m,2H),7.58-7.48(m,5H),7.11-7.01(m,1H),6.89-6.79(m,1H),6.66-6.58(m,1H),5.62-5.55(m,1H),4.32(s,2H),3.50-3.40(m,2H),3.38-3.34(m,1H),3.27(s,3H),3.15-3.02(m,2H),2.44-2.32(m,2H),2.28-2.15(m,2H),1.81-1.60(m,2H),1.26(s,3H).
实施例15：
(1R,2S)-5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((四氢-1H-呋喃[3,4-c]吡咯-5(3H)-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-吲哚]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物(1R,2S)-5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((四氢-1H-呋喃[3,4-c]吡咯-5(3H)-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-吲哚]-2’-酮(三氟乙酸盐，收率28.8％)。
MS(ESI)M/Z:533.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06(d,J＝8.5Hz,1H),7.78(d,J＝7.8Hz,2H),7.58-7.50(m,5H),7.08(d,J＝8.5Hz,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),6.63(dd,J＝8.5,2.6Hz,1H),5.60(d,J＝2.5Hz,1H),4.39(s,2H),3.95-3.66(m,4H),3.62-3.46(m,2H),3.40-3.37(m,1H),3.29(s,3H),3.17-3.04(m,2H),2.99-2.86(m,2H),2.30-2.17(m,2H).
实施例16：
1-(4-((E)-2-(6-((1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧螺环[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基)哌啶-4-羧酰胺
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物1-(4-((E)-2-(6-((1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧螺环[环丙烷-1,3’-吲哚啉]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基)哌啶-4-羧酰胺(三氟乙酸盐，收率5.4％)。
MS(ESI)M/Z:548.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.03(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(d,J＝7.6Hz,2H),7.56-7.48(m,5H),7.06(d,J＝8.3Hz,1H),6.83(d,J＝8.5Hz,1H),6.61(dd,J＝8.4,2.5Hz,1H),5.57(d,J＝2.5Hz,1H),4.35(s,2H),3.62-3.53(m,2H),3.38-3.35(m,1H),3.26(s,3H),3.12-2.98(m,2H),2.60-2.48(m,1H),2.26-2.16(m,2H),2.13-2.04(m,2H),1.98-1.83(m,2H).
实施例17：
(1R,2S)-5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((((S)-四氢呋喃-3-基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物(1R,2S)-5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((((S)-四氢呋喃-3-基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2'-酮(三氟乙酸盐，收率44.3％)。
MS(ESI)M/Z:507.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(d,J＝8.2Hz,2H),7.61-7.49(m,5H),7.08(d,J＝8.5Hz,1H),6.85(d,J＝8.5Hz,1H),6.63(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.60(d,J＝2.5Hz,1H),4.27(s,2H),4.13-4.03(m,2H),4.02-3.95(m,1H),3.91-3.85(m,1H),3.80-3.73(m,1H),3.38(t,J＝8.5Hz,1H),3.28(s,3H),2.48-2.40(m,1H),2.29-2.19(m,2H),2.16-2.07(m,1H).
实施例18：
2-(3-((E)-4-((7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物2-(3-((E)-4-((7-氧杂-2-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(三氟乙酸盐，收率7.0％)。
MS(ESI)M/Z:547.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.78(d,J＝8.2Hz,2H),7.58-7.48(m,5H),7.08(dd,J＝8.5,1.4Hz,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),6.63(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.60(d,J＝2.5Hz,1H),4.44(s,2H),4.05(q,J＝10.6Hz,4H),3.64(d,J＝19.3Hz,4H),3.39(t,J＝8.5Hz,1H),3.29(s,3H),2.24(ddd,J＝24.2,8.5,4.8Hz,2H),1.90(d,J＝5.3Hz,4H).
实施例19：
2-(3-((E)-4-((4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物2-(3-((E)-4-((4-羟基-4-甲基哌啶-1-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(三氟乙酸盐，收率9.78％)。
MS(ESI)M/Z:535.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06(d,J＝8.4Hz,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,2H),7.60-7.49(m,5H),7.09(d,J＝8.4Hz,1H),6.85(d,J＝8.5Hz,1H),6.63(dd,J＝8.5,2.6Hz,1H),5.60(d,J＝2.5Hz,1H),4.36(s,2H),3.43-3.34(m,5H),3.29(s,3H),2.24(ddd,J＝24.4,8.5,4.8Hz,2H),1.83(s,4H),1.31(s,3H).
实施例20：
1-(4-((E)-2-(6-((1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基)-4-甲基哌啶-4-羧酸
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物1-(4-((E)-2-(6-((1R,2S)-5’-甲氧基-2’-氧螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基)-4-甲基哌啶-4-羧酸(三氟乙酸盐，收率41.10％)。
MS(ESI)M/Z:563.4[M+H]+.
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.21(brs,1H),10.45(s,1H),9.33(brs,1H),8.09(d,J＝8.4Hz,1H),7.81(t,J＝7.4Hz,2H),7.67-7.48(m,5H),7.09-7.02(m,1H),6.75(d,J＝8.4Hz,1H),6.58(dd,J＝8.5,2.6Hz,1H),5.67(d,J＝2.6Hz,1H),4.40-4.30(m,2H),3.36(d,J＝12.2Hz,2H),3.30(s,3H),3.26-3.10(m,2H),2.88(q,J＝12.0Hz,1H),2.36(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),2.19(d,J＝14.1Hz,1H),2.00(dd,J＝8.9,4.6Hz,2H),1.84-1.73(m,1H),1.59(t,J＝13.6Hz,1H),1.16(s,3H).
实施例21：
1-(4-((E)-2-(6-(5’-甲氧基-2’-氧螺环[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基)-4-甲基哌啶-4-羧酰胺
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物1-4-((E)-2-(6-(5’-甲氧基-2’-氧螺环[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基)-4-甲基哌啶-4-羧酰胺(三氟乙酸盐，收率4.8％)。
MS(ESI)M/Z:562.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06(d,J＝8.4Hz,1H),7.78(d,J＝7.9Hz,2H),7.60-7.49(m,5H),7.05(d,J＝8.4Hz,1H),6.85(d,J＝8.5Hz,1H),6.63(dd,J＝8.4,2.6Hz,1H),5.60(d,J＝2.5Hz,1H),4.34(s,2H),3.52-3.43(m,2H),3.42-3.37(m,1H),3.29(s,3H),3.17-3.05(m,2H),2.46-2.06(m,4H),2.02-1.60(m,2H),1.28(s,3H).
实施例22：
1-(4-((E)-2-(6-(5’-甲氧基-2’-氧代螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基)-4-甲基哌啶-4-腈
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物1-(4-((E)-2-(6-(5’-甲氧基-2’-氧代螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2-基)-1H-吲唑-3-基)乙烯基)苄基)-4-甲基哌啶-4-腈(三氟乙酸盐，收率4.4％)。
MS(ESI)M/Z:544.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.04(d,J＝8.4Hz,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,2H),7.61-7.46(m,5H),7.07(d,J＝8.4Hz,1H),6.83(d,J＝8.5Hz,1H),6.62(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.58(d,J＝2.5Hz,1H),4.44(s,2H),3.62(d,J＝13.2Hz,2H),3.44-3.31(m,3H),3.28(s,3H),2.33-2.15(m,4H),1.81(t,J＝14.1Hz,2H),1.48(s,3H).
实施例23：
5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((四氢-1H-呋喃并[3,4-c]吡咯-5(3H)-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((四氢-1H-呋喃并[3,4-c]吡咯-5(3H)-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(三氟乙酸盐，收率22.0％)。
MS(ESI)M/Z:533.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06(d,J＝8.4Hz,1H),7.79(d,J＝8.1Hz,2H),7.59-7.49(m,5H),7.08(d,J＝8.5Hz,1H),6.86(d,J＝8.4Hz,1H),6.64(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.60(d,J＝2.5Hz,1H),4.42(s,2H),3.95-3.65(m,4H),3.62-3.48(m,2H),3.42-3.36(m,2H),3.29(s,3H),3.13-2.90(m,3H),2.24(ddd,J＝24.1,8.5,4.8Hz,2H).
实施例24：
5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(三氟乙酸盐，收率3.1％)。
MS(ESI)M/Z:535.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(d,J＝8.0Hz,2H),7.58-7.44(m,5H),7.08(dd,J＝8.4,1.3Hz,1H),6.85(d,J＝8.5Hz,1H),6.63(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.60(d,J＝2.5Hz,1H),4.26(s,2H),3.99(dd,J＝12.0,4.0Hz,2H),3.51-3.34(m,3H),3.28(s,3H),3.00(d,J＝7.1Hz,2H)2.24(ddd,J＝24.2,8.4,4.7Hz,2H),2.08-2.02(m,1H),1.73(d,J＝13.2Hz,2H),1.46-1.29(m,2H).
实施例25：
5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((((S)-四氢呋喃-3-基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((((S)-四氢呋喃-3-基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(三氟乙酸盐，收率5.4％)。
MS(ESI)M/Z:507.1[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.06(d,J＝8.4Hz,1H),7.78(d,J＝7.9Hz,2H),7.58-7.45(m,5H),7.09(d,J＝8.6Hz,1H),6.86(d,J＝8.5Hz,1H),6.64(dd,J＝8.4,2.5Hz,1H),5.61(d,J＝2.6Hz,1H),4.28(s,2H),4.13-4.04(m,2H),4.02-3.96(m,1H),3.91-3.85(m,1H),3.81-3.74(m,1H),3.42-3.38(m,1H),3.29(s,3H),2.52-2.40(m,1H),2.30-2.20(m,2H),2.16-2.08(m,1H).
实施例26：
5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((((R)-四氢呋喃-3-基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((((R)-四氢呋喃-3-基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(三氟乙酸盐，收率18.1％)。
MS(ESI)M/Z:507.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.02(d,J＝8.3Hz,1H),7.74(d,J＝8.2Hz,2H),7.55-7.45(m,5H),7.04(d,J＝8.6Hz,1H),6.81(d,J＝8.5Hz,1H),6.60(dd,J＝8.4,2.6Hz,1H),5.56(d,J＝2.5Hz,1H),4.24(s,2H),4.09-4.00(m,2H),3.98-3.92(m,1H),3.86-3.81(m,1H),3.77-3.69(m,1H),3.38-3.33(m,1H),3.25(s,3H),2.49-2.35(m,1H),2.20(ddd,J＝24.0,8.5,4.8Hz,2H),2.14-2.01(m,1H).
实施例27：
(1R,2S)-5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得到目标产物(1R,2S)-5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-((((四氢-2H-吡喃-4-基)甲基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(三氟乙酸盐，收率8.3％)。
MS(ESI)M/Z:535.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.02(d,J＝8.4Hz,1H),7.74(d,J＝8.1Hz,2H),7.55-7.45(m,5H),7.05(d,J＝8.4Hz,1H),6.82(d,J＝8.4Hz,1H),6.60(dd,J＝8.5,2.6Hz,1H),5.57(d,J＝2.5Hz,1H),4.23(s,2H),3.96(dd,J＝11.6,4.3Hz,2H),3.47-3.31(m,3H),3.26(s,3H),2.97(d,J＝7.1Hz,2H),2.26-2.15(m,2H),2.05-1.90(m,1H),1.73-1.65(m,2H),1.42-1.32(m,2H).
实施例28：
(1R,2S)-2-(3-((E)-4-((1-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮
反应路线:
操作步骤：
步骤1：将对溴溴苄(400毫克，1.6毫摩尔)，1-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷(203毫克，1.6毫摩尔)和碳酸铯(522毫克，1.6毫摩尔)加入乙腈(10毫升)中，反应液在45摄氏度下搅拌3小时。
LCMS显示原料消失后，反应液用乙酸乙酯(100毫升)稀释，过滤，滤液浓缩干得7-(4-溴苄基)-1-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷(湿重500毫克，收率105.9％)直接用于下一步。
MS(ESI)M/Z:296.2[M+H]+.
步骤2：将7-(4-溴苄基)-1-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷(500毫克，1.69毫摩尔)溶于甲苯(10毫升)。向其中加入2-乙烯基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(287毫克，1.86毫摩尔)和N,N-二异丙基乙胺(438毫克，3.39毫摩尔)。随后加入四氟硼酸三叔丁基膦(50毫克，0.17毫摩尔)和三(二亚苄基丙酮)二钯(50毫克，0.08毫摩尔)，然后氮气置换，在90摄氏度下搅拌3小时。
LCMS监测显示原料消失后，加入氯化铵溶液(100毫升)，混合液用乙酸乙酯(100毫升×2次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(50毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物用硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚/乙酸乙酯＝10/1)得到(E)-7-(4-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)乙烯基)苄基)-1-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷(300毫克，收率48.0％)。
MS(ESI)M/Z:370.3[M+H]+.
步骤3：将化合物Int-B-3(100毫克，0.23毫摩尔)和(E)-7-(4-(2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼杂环戊烷-2-基)乙烯基)苄基)-1-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬烷(300毫克，0.81毫摩尔)溶于1,4-二氧六环(4毫升)。随后，加入碳酸钾(90毫克，0.58毫摩尔)，水(1毫升)和[1,1’-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(15毫克，0.02毫摩尔)，然后氮气置换三次。反应液加热至100摄氏度，搅拌2小时。
LCMS监测显示原料消失后，加入水(20毫升)，混合液用乙酸乙酯(30毫升×2次)萃取，合并有机相，有机相先用饱和食盐水(10毫升)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥，过滤，最后减压浓缩。所得残余物制备提纯得到(1R,2S)-2-(3-((E)-4-((1-氧杂-7-氮杂螺[3.5]壬-7-基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)-5’-甲氧基螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(三氟乙酸盐，24.75毫克，收率19.5％)。
MS(ESI)M/Z:547.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.03(d,J＝8.3Hz,1H),7.76(dd,J＝8.3,2.7Hz,2H),7.57-7.46(m,5H),7.06(dd,J＝8.5,1.4Hz,1H),6.83(d,J＝8.5Hz,1H),6.61(dd,J＝8.4,2.6Hz,1H),5.57(d,J＝2.6Hz,1H),4.61-4.50(m,2H),4.36-4.30(m,2H),3.52-3.31(m,3H),3.26(s,3H),3.21-3.03(m,2H),2.50(t,J＝7.8Hz,2H),2.41-2.32(m,2H),2.21(ddd,J＝25.6,8.5,4.8Hz,2H),1.96-1.86(m,2H).
实施例29：
5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮
制备方法参考实施例4，最后得产品5’-甲氧基-2-(3-((E)-4-(((四氢-2H-吡喃-4-基)氨基)甲基)苯乙烯基)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3’-二氢吲哚]-2’-酮(三氟乙酸盐，50.4毫克，收率30.8％)。
MS(ESI)M/Z:521.0[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(d,J＝8.1Hz,2H),7.60-7.48(m,5H),7.08(d,J＝8.4Hz,1H),6.85(d,J＝8.4Hz,1H),6.63(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),5.59(d,J＝2.5Hz,1H),4.28(s,2H),4.08(dd,J＝11.7,4.5Hz,2H),3.52-3.43(m,3H),3.38(t,J＝8.4Hz,1H),3.28(s,3H),2.26(dd,J＝7.9,4.8Hz,1H),2.20(dd,J＝9.1,4.8Hz,1H),2.17-2.09(m,2H),1.73(qd,J＝12.2,4.7Hz,2H).
实施例30：
(1R,2S)-5'-甲氧基-2-(3-((E)-4-((R)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-基)甲基)苯乙烯)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮
制备方法参考实施例4，最后得产品(1R,2S)-5'-甲氧基-2-(3-((E)-4-((R)-2-(甲氧基甲基)吡咯烷-1-基)甲基)苯乙烯)-1H-吲唑-6-基)螺[环丙烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(三氟乙酸盐，25.4毫克，收率25.8％)。
MS(ESI)M/Z:535.2[M+H]+.
1H NMR(400MHz,CD3OD)δ8.05(d,J＝8.4Hz,1H),7.77(d,J＝8.1Hz,2H),7.54-7.48(m,5H),7.08(d,J＝8.4Hz,1H),6.82(d,J＝8.4Hz,1H),6.62(dd,J＝8.5,2.5Hz,1H),4.60(d,J＝12.0Hz,1H),4.28(d,J＝12.0Hz,1H),3.80-3.83(m,1H),3.57(d,J＝4.8Hz,2H),3.42(s,3H),3.30-3.32(m,2H),3.26(s,3H),1.91-2.26(m,7H).
生物活性实验
以下通过具体实施方式进一步阐述本发明化合物对PLK4靶点具有较好的抑制活性、选择性、具有较好的肿瘤抑制活性，可有效用于PLK4靶点介导的肿瘤相关疾病的治疗。本发明化合物的有益效果包括但不限于以下具体实施内容。
实验例1、PLK4体外结合实验
本实验采用LanthaScreen的方法测试化合物对ATP类似物Tracer与PLK4结合的竞争性抑制作用，并得出化合物对PLK4的结合活性。
1.实验材料
GST标记PLK4蛋白，荧光标记GST抗体，荧光标记ATP类似物Tracer均购自ThermoFisher公司，DMSO购自Sigma公司，384孔板购自Perkinelemer公司，表面活性剂Brij-35，HEPES，EGTA和氯化镁均购自Sigma公司。
2.实验方法:
(1)用超纯水配制1×Kinase buffer。后续操作避免灯光或阳光直接照射。
(2)在1×Kinase buffer中加入PLK4蛋白和GST抗体到反应浓度。
(3)移液器吹打混匀后加入384孔板，16μL孔。
(4)1500rpm离心微孔板1分钟。
(5)准备125倍的最高浓度的待测化合物和阳性对照化合物，DMSO溶解。
(6)准备500倍Tracer荧光底物，DMSO溶解。
(7)将准备好的化合物和Tracer，DMSO加入TECAN D300E加样器的加样槽。
(8)按照预先设定的加样位置加样，阳性对照为最高浓度的阳性化合物，阴性对照为DMSO，所有测试化合物三倍稀释，测试九个浓度。所用实验孔DMSO终浓度为1％。
(9)1500rpm离心微孔板1分钟。
(10)室温避光静置60分钟
(11)用Perkinelmer的酶标仪Envision读取两个荧光波段的读值，利用615nm/665nm比值计算化合物抑制率。
计算公式：
其中：Conversion％_sample是样品孔的比值读数；Conversion％_min：没有加化合物只有DMSO的孔信号比值，代表没有抑制时读数；Conversion％_max：加入最高浓度阳性化合物的实验孔信号比值，代表完全抑制时读数。
拟合量效曲线
以浓度的log值作为X轴，百分比抑制率为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism 5的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶的结合活性。
计算公式：Y(Ki)＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))；Top是指最大响应，Bottom是指基线响应，Hill Slope是指曲线的坡度。
3.实验结果
当结合活性Ki≤10nM时，以字母A表示；当10nM<Ki≤50nM时，以字母B表示；当Ki>50nM时，以字母C表示。实验结果参见表1。
4.实验结论
本发明实施例化合物对PLK4激酶具有较好的结合活性，具有潜在药物开发价值。
实验例2、PLK4体外酶学实验
本实验采用ADP-Glo的方法测试化合物对PLK3和PLK4激酶活性的抑制作用，采用Lance Ultra的方法测试化合物对PLK1和PLK2激酶活性的抑制作用，并得出化合物对PLK1，PLK2，PLK3，PLK4激酶活性的半数抑制浓度IC50。
1.实验材料
PLK1和PLK2购自BPS公司，PLK3购自Carna公司，PLK4购自Thermofisher公司，Lance Ultra试剂盒购自PE公司，Danusertib购自Selleckchem公司，DMSO购自Sigma公司，384孔板购自Corning公司。
2.实验方法
2.1 ADP-Glo方法反应过程
(1)配制1×Kinase buffer。
(2)化合物浓度梯度的配制：受试化合物测试浓度为10μM起始，3倍稀释，10个浓度，单孔检测。在384孔板中稀释成100倍终浓度的溶液。用Echo转移50nl到384孔板的化合物孔；阴性对照孔和阳性对照孔中分别加50nL的DMSO。
(3)用1×Kinase buffer配制2倍终浓度的激酶溶液。
(4)在化合物孔和阳性对照孔分别加2.5μl的2倍终浓度的激酶溶液；在阴性对照孔中加2.5μl的1×Kinase buffer。
(5)1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育10分钟。
(6)用1×Kinase buffer配制2倍终浓度的ATP和底物的混合溶液。
(7)加入2.5μl的2倍终浓度的ATP和底物的混合溶液，起始反应。
(8)将384孔板1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温反应3个小时。
(9)加入5μl ADP-Glo Reagent，1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育60分钟。
(10)加入10μl Kinase Detection Reagent，1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育30分钟。
(11)用Envision酶标仪读取发光值RLU。
计算公式：
其中：RLU：样品的化学发光值；Mean(NC)：阴性对照孔均值；Mean(PC)：阳性对照孔均值。
拟合量效曲线
以浓度的log值作为X轴，百分比抑制率为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism 5的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的IC50值。
计算公式：Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))
Top是指最大响应，Bottom是指基线响应，Hill Slope是指曲线的坡度。
2.2 Lance Ultra方法反应过程
(1)配制1×Kinase buffer。
(2)化合物浓度梯度的配制：受试化合物测试浓度为10μM起始，3倍稀释，10个浓度，单孔检测。在384孔板中稀释成100倍终浓度的溶液。用Echo转移50nl到384孔板的化合物孔；阴性对照孔和阳性对照孔中分别加50nl的DMSO。
(3)用1×Kinase buffer配制2倍终浓度的激酶溶液。
(4)在化合物孔和阳性对照孔加5μl的2倍终浓度的激酶溶液；在阴性对照孔中加2.5μl的1×Kinase buffer。
(5)1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育10分钟。
(6)用1×Kinase buffer配制2倍终浓度的ATP和底物的混合溶液。
(7)加入5μl的2倍终浓度的ATP和底物的混合溶液，起始反应。
(8)将384孔板离心，振荡混匀后室温反应一定时间。
(9)加入10μl检测试剂，离心后振荡混匀，室温孵育60分钟。
(10)加入10μl Kinase Detection Reagent，1000rpm离心30秒，振荡混匀后室温孵育30分钟。
(11)用Envision酶标仪读取发光值RFU。
计算公式：
Percent inhibition＝(max-sample ratio)/(max-min)*100
拟合量效曲线
以浓度的log值作为X轴，百分比抑制率为Y轴，采用分析软件GraphPad Prism 5的log(inhibitor)vs.response-Variable slope拟合量效曲线，从而得出各个化合物对酶活性的IC50值。
计算公式：Y＝Bottom+(Top-Bottom)/(1+10^((LogIC50-X)*HillSlope))
Top是指最大响应，Bottom是指基线响应，Hill Slope是指曲线的坡度。
3.实验结果
酶活抑制实验结果参见表1数据。当IC50≤10nM时，以字母A表示；当10nM<IC50≤50nM时，以字母B表示；当IC50>50nM时，以字母C表示。
4、实验结论
结果显示本发明化合物对PLK1、PLK2、PLK3具有较弱或无抑制活性，对PLK4具有较好的抑制活性，表明本发明化合物对PLK4具有较好的选择性，具备药物开发价值。
实验例3、细胞增殖抑制实验
HCC1806/MDA-MB-468细胞增殖抑制实验
本实验采用CellTiter-Glo的方法测试化合物对HCC1806/MDA-MB-468细胞增殖的抑制作用，并得出化合物抑制细胞生长半数的浓度IC50。
1.实验材料
HCC1806购自通派(上海)生物科技有限公司；MDA-MB-468购自美国ATCC细胞库。
1640培养基，胎牛血清(FBS)，Penicillin-Streptomycin，GlutaMAX-ISupplement购自GIBCO。
PF-06873600购自Selleck公司。
CellTiter-Glo试剂，购自Promega公司。
2.实验方法
1)按照每孔600/1500个细胞的密度将HCC1806/NIH:OVCAR-3细胞接种于96孔培养板，每孔100μL。
2)Day 0：使用TECAN向培养板细胞中加入100nL梯度稀释的待测化合物，DMSO终浓度为0.5％，将培养板置于细胞培养箱中孵育168小时(37℃，5％CO2)。空白对照加入每孔30nL的DMSO。
3)Day 7：每孔加入30μL Cell Titer-Glo试剂，室温避光30分钟
4)Envision酶标仪(PerkinElmer)检测化学发光信号。
使用GraphPad Prism 6软件进行数据分析，得出化合物的IC50。
3.实验结果：
细胞活性抑制结果见表1，当IC50≤10nM时，以字母A表示；当10nM<IC50≤50nM时，以字母B表示；当IC50>50nM时，以字母C表示。
4.实验结论
从表1中的实验结果可以看出，本发明实施例化合物对HCC1806/MDA-MB-468细胞系的细胞增殖有着较好的抑制作用,具有较好的细胞活性以及选择性。
表1本发明实施例化合物的体外生物活性数据
实验例4.本发明化合物在CD-1雄性小鼠体内药代动力学测定
以CD-1雄性小鼠为受试动物，研究本发明化合物在1mg/kg或2mg/kg静脉推注和5mg/kg或10mg/kg口服给药后在小鼠体内血浆的药代动力学行为。
1.试验方案
1.1试验药品：
本发明部分化合物。
1.2试验动物
CD-1小鼠(3只/组)，雄性，供货商为上海吉辉实验动物饲养有限公司和维通利华实验动物技术有限公司。
1.3给药
IV和PO实验组都为3只小鼠，IV给药剂量为1mg/kg或2mg/kg，给药体积为5mL/kg；PO给药剂量为5mg/kg或10mg/kg，给药体积为10mL/kg。给药溶媒为10％DMSO/50％PEG400/40％Water。
1.4实验器材
离心机、移液器购自Eppendorf公司。
1.5样品采集
小鼠给药后，在0.0833(IV)、0.25、0.5、1、2、4、8和24小时，静脉采血各0.02mL，置于EDTA-K2试管中，于4℃、4600rmp离心5min分离血浆，于-80℃保存。
1.6样品处理
1)10μL血浆样品加入200μL乙腈沉淀，涡旋混合后离心15分钟。
2)取处理后上清液用水稀释后通过LC/MS/MS分析待测化合物的浓度。
1.7生物分析
液相条件：Shimadzu LC-30AD
质谱条件：AB Sciex API 5500
色谱柱：Phenomenex Kinetex 2.6μm C18
流动相：A：5mM醋酸铵水溶液(含0.05％甲酸)；B：乙腈(含0.1％甲酸)流速：0.5mL/min
洗脱梯度：
| Time(min) | A(％) | B(％) |
| 0.00 | 85.0 | 10.0 |
| 0.50 | 85.0 | 10.0 |
| 2.00 | 5.00 | 95.0 |
| 2.20 | 5.00 | 95.0 |
| 2.21 | 85.0 | 10.0 |
| 2.50 | 85.0 | 10.0 |
2.实验结果与分析
经测定，本发明化合物在小鼠体内具有较高的暴露量、适应的清除率、半衰期，展现出良好的药代动力学性质。
实验例5、受试药物在MDA-MB-468移植瘤模型荷瘤鼠中的体内药效学研究
1实验动物
种属：小鼠
品系：CB17 SCID小鼠
周龄及体重：体重19-24克
性别：雌性
数量：75只(包括分组剩余鼠)
供应商：北京维通利华实验动物技术有限公司
2实验方法
人源乳腺癌MDA-MB-468细胞体外单层培养，培养条件为Leibovitz′s L—15培养基中加10％胎牛血清，1％双抗(青霉素，链霉素)，37℃无CO2培养。一周两次用胰酶-EDTA进行常规消化处理传代。当细胞饱和度为80％-90％，数量到达要求时，收取细胞，计数，接种。将含有10×106个MDA-MB-468细胞的PBS同Matrigel按1∶1的比例混合(终体积为200μL)皮下接种于每只小鼠的右前肢腋窝皮下，在细胞接种后第26天，入组动物肿瘤平均体积达到150mm3时开始分组给药(PG-D0)。每天监测动物的健康状况及死亡情况，例行检查包括观察肿瘤生长和药物治疗对动物日常行为表现的影响如行为活动，摄食摄水量(仅目测)，体重变化(每周三次或每天测量一次体重)，外观体征或其它不正常情况。基于各组动物数量记录了组内动物死亡数和副作用。
3肿瘤测量和实验指标
实验指标是考察肿瘤生长是否被抑制、延缓或治愈。每周两次用游标卡尺测量肿瘤直径。肿瘤体积的计算公式为：V＝0.5a×b2，a和b分别表示肿瘤的长径和短径。化合物的抑瘤疗效用TGI(％)或相对肿瘤增殖率T/C(％)评价。TGI(％)，反映肿瘤生长抑制率。TGI(％)的计算：TGI(％)＝[1-(某处理组给药结束时平均瘤体积-该处理组开始给药时平均瘤体积)/(溶剂对照组治疗结束时平均瘤体积-溶剂对照组开始治疗时平均瘤体积)]×100％。
相对肿瘤增殖率T/C(％)：计算公式如下：T/C％＝TRTV平均值/CRTV平均值×100％(TRTV平均值：治疗组RTV的平均值；CRTV平均值：阴性对照组RTV的平均值)。根据肿瘤测量的结果计算出相对肿瘤体积(relative tumor volume，RTV)，计算公式为RTV＝Vt/V0，其中V0是分组给药时(即d0)测量所得每只小鼠的肿瘤体积，Vt为某一次测量时每只小鼠的肿瘤体积。然后计算出每组的平均值。V0与Vt取同一只小鼠的肿瘤体积数据。
在实验结束后将检测肿瘤重量，并计算Tweight/Cweight百分比，Tweight和Cweight分别表示给药组和溶剂对照组的瘤重。
统计分析，包括每个组的每个时间点的肿瘤体积的平均值和标准误(SEM)两组间比较用T-test进行分析。
4实验结果
药效试验结果显示本发明化合物具有良好的肿瘤抑制效果。
Claims (22)
1.如下通式(I)所示化合物，或其药学上可接受的盐、其酯或其异构体，
R1选自氢、C1-6烷基；
每个R2独立地选自氢、C1-6烷基、C1-6烷氧基、苯基、杂芳基或两个相邻的R2相互连接形成苯环、杂芳环，所述的苯基、苯环、杂芳基、杂芳环任选被1-3个S1取代，所述的S1选自卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基；
每个R3独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷基、卤代C1-6烷氧基；
环B选自苯基、杂芳基；
每个R4独立地选自R4a或R4b；
每个R4a独立地选自氢、卤素、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基；
每个R4b独立地选自
其中环A选自任选被1-3个S2取代的如下基团：3-6元环烷基、3-6元杂环基、6-10元稠杂环基、7-12元螺杂环基；所述的S2选自羟基、卤素、氰基、羧基、C1-6烷基、卤代C1-6烷基、C1-6烷氧基、卤代C1-6烷氧基、(R5)(R6)NC(O)-、C1-6烷氧基-C1-6烷基-、羧基C1-6烷基；
L1选自化学键或C1-4亚烷基，其中C1-4亚烷基中的任一碳原子任选被-C(O)、-NR5-、-S(O)y-和/或-O-取代；y选自0、1或2；
R5、R6分别独立地选自氢、C1-6烷基；
m选自0、1、2、3、4；
n选自0、1、2、3；
p选自0、1、2、3、4。
2.根据权利要求1所述化合物，其具有如下通式(I’)所示的结构，
或其药学可接受的盐、其酯、其异构体，其中，
R1选自氢、C1-4烷基；
每个R2独立地选自氢、C1-4烷基、C1-4烷氧基、苯基、或两个相邻的R2相互连接形成苯环，所述的苯基、苯环任选被1-2个S1取代，所述的S1选自卤素、C1-4烷基、C1-4烷氧基；
每个R3独立地选自C1-4烷基、C1-4烷氧基；
每个R4独立地选自R4a或R4b；
每个R4a独立地选自氢、卤素、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基；
每个R4b独立地选自
其中环A选自任选被1-2个S2取代的如下基团：3-6元环烷基、3-6元杂环基、6-8元稠杂环基、7-11元螺杂环基；所述的S2选自羟基、卤素、氰基、羧基、C1-4烷基、卤代C1-4烷基、C1-4烷氧基、卤代C1-4烷氧基、(R5)(R6)NC(O)-、C1-4烷氧基-C1-4烷基-、羧基C1-4烷基；
L1选自化学键、或C1-3亚烷基，其中C1-3亚烷基中的任一碳原子任选被-C(O)-、-NR5-、-S(O)y-和/或-O-取代；y选自0、1或2；
R5、R6分别独立地选自氢、C1-4烷基；
m选自0、1、2、3、4；
n选自0、1、2、3；
p选自0、1、2、3、4。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中，R1选自氢、甲基、乙基。
4.根据权利要求1-3任一项所述的化合物，其中，R1选自氢。
5.根据权利要求1-4任一项所述的化合物，其中，R3选自甲基、甲氧基；n选自0、1或2。
6.根据权利要求1-5任一项所述的化合物，其中，R2选自苯基；
R4选自
环A选自任选被1-2个S2取代的如下基团：5-6元环烷基、5-6元杂环基、6-8元稠杂环基、7-10元螺杂环基；所述的S2选自羟基、氰基、羧基、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、H2NC(O)-、H3CO-CH2-、HOOC-CH2-；
L1选自C1-3亚烷基，其中C1-3亚烷基中的1-2碳原子任选被-C(O)-、-N(R5)-、和/或-O-取代；
R5独立地选自氢、甲基、乙基；
m选自1。
7.根据权利要求6所述的化合物，其中，环A选自任选被1-2个S2取代的如下基团：环戊基、环己基、吡咯烷基、四氢呋喃基、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、
其中K1或K2分别独立的选自CH、CH2、O、N、NH，且K1、K2不同时为CH和/或CH2。
8.根据权利要求6或7所述的化合物，其中，
选自
其中环A任选被1-2个S2取代，K1、K2分别独立的选自CH2、O、NH。
9.根据权利要求6-8任一项所述的化合物，其中，L1选自-CH2-、-CH2-NR5-、-CH2-O-、-CH2-NR5-CH2-，R5独立地选自氢、甲基。
10.根据权利要求6-9任一项所述的化合物，R4选自
11.根据权利要求1-5任一项所述的化合物，其中，两个相邻的R2相互连接形成苯环，所述的苯环任选被1-2个S1取代，所述的S1选自甲基、甲氧基；
R4选自
环A选自任选被1-2个S2取代的如下基团：6-8元稠杂环基、7-10元螺杂环基；所述的S2选自甲基、甲氧基；
L1选自C1-3亚烷基，其中C1-3亚烷基中的1-2碳原子任选被-C(O)-、-N(R5)-、和/或-O-取代；
R5独立地选自氢、甲基；
m选自2。
12.根据权利要求11所述的化合物，其中，环A选自任选被1-2个S2取代的如下基团：
其中K1或K2分别独立的选自CH、CH2、O、N、NH，且K1、K2不同时为CH和/或CH2。
13.根据权利要求12所述的化合物，其中，
选自
其中环A选自任选被1-2个S2取代，K1、K2分别独立的选自CH2、O、NH。
14.根据权利要求13所述的化合物，其中，L1选自-CH2-、-CH2-NR5-、-CH2-O-、-CH2-NR5-CH2-，R5独立地选自氢、甲基。
15.根据权利要求11-14任一项所述的化合物，R4选自
16.根据权利要求1-5任一项所述的化合物，其中，两个相邻的R2相互连接形成苯环，所述的苯环任选被1-2个S1取代，所述的S1选自甲基、甲氧基；
R4选自
17.根据权利要求1-10任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯或其异构体，具有如下通式所示的结构：
R1、R3、n、L1、环A、S1、S2如权利要求1-10任一项所定义；
q1、q2分别独立地选自0、1或2。
18.根据权利要求11-16任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯或其异构体，具有如下通式所示的结构：
R1、R3、n、L1、环A、S1、S2如权利要求1-16任一项所定义；
q1、q2分别独立地选自0、1或2；
M选自N或CH。
19.根据权利要求1所述的化合物，其药学上可接受的盐、其酯、其异构体，选自
20.含有权利要求1-19任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其异构体的药物组合物，任选地，所述药物组合物还包含一种或多种药学上可接受的载体。
21.一种药物组合物，含有权利要求1-19任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其异构体以及一种或多种第二治疗活性剂；
优选地，所述的第二治疗剂为抗肿瘤剂，选自抗体类药物、细胞毒类药物、激素类药物、生物反应调节剂(如增强免疫功能)、细胞分化诱导剂、细胞凋亡诱导剂、血管生成抑制剂、表皮生长因子受体抑制剂中的一种或多种。
22.权利要求1-19任一项所述的化合物、其药学上可接受的盐、其酯、其异构体在制备药物中的应用，所述药物用于预防和/或治疗受试者的由PLK4介导的相关疾病；
优选地，所述的PLK4介导的相关疾病为细胞异常增殖性疾病；
更优选地，所述细胞异常增殖性疾病为癌症；
更优选地，所述癌症选自下组：肺癌、乳腺癌、结肠癌、脑癌、咽癌、鼻咽癌、口咽癌、头颈癌、成神经细胞瘤、前列腺癌、黑色素瘤、多形性成胶质细胞瘤、卵巢癌、宫颈癌、淋巴癌、白血病、肉瘤、伴肿瘤效应、骨肉瘤、生殖细胞瘤、神经胶质瘤或间皮瘤、软组织癌。
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