CN115627236A - 一种微藻培养液的常温保存方法 - Google Patents

一种微藻培养液的常温保存方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115627236A
CN115627236A CN202211252595.0A CN202211252595A CN115627236A CN 115627236 A CN115627236 A CN 115627236A CN 202211252595 A CN202211252595 A CN 202211252595A CN 115627236 A CN115627236 A CN 115627236A
Authority
CN
China
Prior art keywords
culture solution
microalgae culture
microalgae
steps
preserving
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211252595.0A
Other languages
English (en)
Inventor
闫路娜
赵丽华
赵国群
陈丹
邢向远
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Aerge Hebei Life Science Co ltd
Hebei University of Science and Technology
Original Assignee
Aerge Hebei Life Science Co ltd
Hebei University of Science and Technology
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Aerge Hebei Life Science Co ltd, Hebei University of Science and Technology filed Critical Aerge Hebei Life Science Co ltd
Priority to CN202211252595.0A priority Critical patent/CN115627236A/zh
Publication of CN115627236A publication Critical patent/CN115627236A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05F—ORGANIC FERTILISERS NOT COVERED BY SUBCLASSES C05B, C05C, e.g. FERTILISERS FROM WASTE OR REFUSE
    • C05F11/00—Other organic fertilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G3/00—Mixtures of one or more fertilisers with additives not having a specially fertilising activity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C05—FERTILISERS; MANUFACTURE THEREOF
    • C05G—MIXTURES OF FERTILISERS COVERED INDIVIDUALLY BY DIFFERENT SUBCLASSES OF CLASS C05; MIXTURES OF ONE OR MORE FERTILISERS WITH MATERIALS NOT HAVING A SPECIFIC FERTILISING ACTIVITY, e.g. PESTICIDES, SOIL-CONDITIONERS, WETTING AGENTS; FERTILISERS CHARACTERISED BY THEIR FORM
    • C05G5/00—Fertilisers characterised by their form
    • C05G5/20—Liquid fertilisers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/89—Algae ; Processes using algae

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pest Control & Pesticides (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种微藻培养液的常温保存方法，涉及的微藻种类包括蛋白核小球藻、固氮鱼腥藻和小单歧藻，属于微藻生物技术领域。通过在微藻培养液（藻细胞浓度2.0×107个/mL～4.0×107个/mL）中添加三碘苯甲酸和山梨酸钾、添加甘油和山梨醇、添加营养物质（葡萄糖、酵母浸粉），并调整pH，采用不透明塑料桶包装。微藻培养液在干燥、阴凉的室内常温保存6个月，活藻细胞浓度为1.40×107个/mL～2.92×107个/mL，藻细胞存活率为70%～73%，满足微藻培养液作为微生物肥料的质量要求。

Description

一种微藻培养液的常温保存方法
技术领域
本发明涉及一种微藻培养液的常温保存方法，尤其是蛋白核小球藻、固氮鱼腥藻和小单歧藻的常温保存方法，属于微藻生物技术领域。
背景技术
微藻是一类能进行光合作用的微生物，具有固碳、固氮能力强，产生胞外多糖和植物激素等活性成分，易于培养等特点。微藻培养液具有改善土壤理化性质、增强土壤理化性质、增强土壤肥力、促进作物生长、提高作物产量与品质的作用。微藻培养液作为微生物肥料已经应用于农业生产，特别是设施蔬菜和水果种植。用于农业生产的常见微藻种类有蛋白核小球藻（Chlorella sp）、固氮鱼腥藻（Anabaena azotica）、小单歧藻、螺旋藻等。微藻培养液作为微生物肥料时需要活的微藻细胞。只有活的微藻细胞才能在土壤中生长、固碳、固氮、分泌生理活性物质，发挥其肥料功效。然而，微藻培养液在储存和运输时微藻细胞很容易死亡，特别是在夏季的高温条件下藻细胞更容易死亡。藻细胞浓度为1×106个/mL以上时，微藻培养液一般自然状态下仅能保存7～10天。采用低温储运可以降低藻细胞死亡率，但需要制冷设备，投资大，运行成本高，难于在实际生产上应用。如何在常温下保持微藻培养液高的藻细胞存活率是微藻生物肥生产中亟需解决的问题。
专利文献CN107325971 A公开了一种淡水微藻常温液态保存配方和制作方法，该配方包含有藻细胞数≥1020CFU/mL的藻类浓缩液、藻类营养液、均质剂， 将pH调至11。 该保存方法使藻细胞暂时休眠，常温液态可保存4个月，但这种方法只适用于藻种的保存，而且保质期较短。专利文献CN 110628632A公开了一种小球藻藻种常温保存的方法，该保存方法是首先将藻细胞浓度调整为2.0×106～5.0×106个/mL，然后加入0 .8～1 .0 g/L尿素、0.4～0.6 g/L KH2PO4、0.25～0.30 g/L NaHCO3、0.05g/L EDTA-2Na、0.07g/L MgSO4，充分搅拌溶解后，再加入0.05％～0.10％甘油和0.006%～0.010%山梨酸钾或苯甲酸钠；调节pH终点为6.9～7.1，常温、弱光放置保存3个月后藻种的存活率可达90％以上。该方法适用于低浓度藻种的常温保存，保质期也不够长。专利文献CN 110157621A公开了一种高浓缩微藻活细胞长效保存剂的制备方法， 该保存剂是通过将光合菌荚膜红假单胞菌与嗜盐菌嗜盐单胞菌在谷氨酸盐培养基中发酵培养获得菌泥， 然后将菌泥包埋在海藻酸钠载体颗粒里，继续将含有无机盐、维生素、有机碳源等营养基质粉末吸附于载体颗粒中，获得光合菌载体颗粒营养盐混合颗粒，经喷雾干燥与粉末均质后制成。该保存剂维持浓缩藻活细胞10-30天的活力而无腐败出现。专利文献CN 113662124A公开了一种微藻保鲜组合物、保鲜剂及其保存方法，该微藻保鲜组合物包括溶菌酶、肉桂精油和苦皮藤素，在该组合物中进一步添加苯甲酸钠、脱氢乙酸钠、羧甲基纤维素钠和硫酸庆大霉素， 获得微藻保鲜剂。该保鲜剂用于常温保存微藻藻液或藻泥，保存时间可长达6个月。该保鲜剂生产、使用成本高，难于应用于微藻培养液（肥料）的实际生产。
发明内容
本发明为解决上述技术问题，提供一种微藻培养液的常温保存方法，使得微藻细胞在常温储存条件下仍然保持较高的存活率，延长微藻培养液的保质期，为发挥肥效奠定基础。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
一种微藻培养液的常温保存方法，所述微藻包括蛋白核小球藻、固氮鱼腥藻和小单歧藻；具体包括如下步骤：
A. 镜检：微藻培养液通过显微镜观察，选择藻细胞生长良好，无原生动物，且藻细胞浓度为2.0×107个/mL～4.0×107个/mL，得到微藻培养液A；
B. 添加三碘苯甲酸和山梨酸钾：向微藻培养液A中分别加入三碘苯甲酸和山梨酸钾，搅拌均匀后得到微藻培养液B；
C. 添加甘油和山梨醇：向微藻培养液B中分别加入甘油和山梨醇，搅拌均匀得到微藻培养液C；
D. 添加营养物质：向微藻培养液C中分别加入葡萄糖和酵母浸粉，搅拌均匀得到微藻培养液D；
E. 调整pH值：采用氢氧化钠或盐酸溶液，将微藻培养液D的pH值调整为6.0～6.5；
F. 灌装储存：将步骤E得到的微藻培养液灌装到不透明的塑料桶中，密封，储存即可。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤A中原生动物包括车轮虫和草履虫。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤B中加入的三碘苯甲酸的终浓度为100～200mg/L，山梨酸钾的终浓度为0.5～0.8g/L。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤C中加入的甘油终浓度为0.3～0.5g/L，山梨醇的终浓度为0.1～0.3 g/L。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤D中加入的葡萄糖终浓度为2.0～3.0g/L，酵母浸粉的终浓度为0.1～0.3 g/L。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述步骤F中将盛有微藻培养液的塑料桶放在干燥、阴凉的室内，常温保存。
本发明技术方案的进一步改进在于：所述微藻培养液经过6个月的储存，活藻细胞浓度为1.40×107个/mL～2.92×107个/mL，藻细胞存活率为70%～73%。
由于采用了上述技术方案，本发明取得的技术进步是：
本发明提供的一种微藻培养液的常温保存方法，方法简单、易行，生产成本低，常温（25℃）保存达到6个月，保存时间长，且微藻培养液的藻细胞存活率70%～73%，藻细胞存活率高，满足微藻培养液作为微生物肥料的质量要求。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步详细说明：
实例1 蛋白核小球藻的常温保存方法
A. 镜检：蛋白核小球藻培养液通过显微镜观察选择藻细胞生长良好，藻细胞浓2.12×107个/mL。蛋白核小球藻培养液中无车轮虫、草履虫等原生动物，得到微藻培养液A。
B.向微藻培养液A分别加入终浓度为100mg/L的三碘苯甲酸和0.5 g/L山梨酸钾，搅拌均匀得到微藻培养液B；
C.向微藻培养液B中分别加入终浓度为0.5 g/L甘油和0.1 g/L山梨醇，搅拌均匀得到微藻培养液C；
D. 添加营养物质：向微藻培养液C中分别加入终浓度为的2.0 g/L葡萄糖和酵母浸粉0.3 g/L，搅拌均匀得到微藻培养液D。
E. 调整pH值：采用氢氧化钠或盐酸溶液，将微藻培养液D的pH值调整为6.5。
F. 灌装：将上述的微藻培养液灌装到不透明的塑料桶中，密封。
G. 储存：将盛有微藻培养液的塑料桶放在干燥、阴凉的室内，常温保存。经过6个月的储存，活藻细胞浓度为1.5×107个/mL，藻细胞存活率为70.7%。
实例2 固氮鱼腥藻的常温保存方法
A. 镜检：固氮鱼腥藻培养液通过显微镜观察选择藻细胞生长良好，藻细胞浓4.03×107个/mL。固氮鱼腥藻培养液中无车轮虫、草履虫等原生动物，得到微藻培养液A。
B.向微藻培养液A分别加入终浓度为200mg/L的三碘苯甲酸和0.8g/L山梨酸钾，搅拌均匀得到微藻培养液B；
C.向微藻培养液B中分别加入终浓度为0.3 g/L甘油和0.3 g/L山梨醇，搅拌均匀得到微藻培养液C；
D. 添加营养物质：向微藻培养液C中分别加入终浓度为的3.0g/L葡萄糖和酵母浸粉0.2 g/L，搅拌均匀得到微藻培养液D。
E. 调整pH值：采用氢氧化钠或盐酸溶液，将微藻培养液D的pH值调整为6.0。
F. 灌装：将上述的微藻培养液灌装到不透明的塑料桶中，密封。
G. 储存：将盛有微藻培养液的塑料桶放在干燥、阴凉的室内，常温保存。经过6个月的储存，活藻细胞浓度为2.94×107个/mL，藻细胞存活率为73%。
实例3 小单歧藻的常温保存方法
A. 镜检：小单歧藻培养液通过显微镜观察选择藻细胞生长良好，藻细胞浓3.1×107个/mL。小单歧藻培养液中无车轮虫、草履虫等原生动物，得到微藻培养液A。
B.向微藻培养液A分别加入终浓度为150 mg/L的三碘苯甲酸和0.5g/L山梨酸钾，搅拌均匀，得到微藻培养液B；
C.向微藻培养液B中分别加入终浓度为0.5 g/L甘油和0.1 g/L山梨醇，搅拌均匀得到微藻培养液C；
D. 添加营养物质：向微藻培养液C中分别加入终浓度为的3.0g/L葡萄糖和酵母浸粉0.2 g/L，搅拌均匀得到微藻培养液D。
E. 调整pH值：采用氢氧化钠或盐酸溶液，将微藻培养液D的pH值调整为6.5。
F. 灌装：将上述的微藻培养液灌装到不透明的塑料桶中，密封。
G. 储存：将盛有微藻培养液的塑料桶放在干燥、阴凉的室内，常温保存。经过6个月的储存，活藻细胞浓度为2.24×107个/mL，藻细胞存活率为72.3%。

Claims (7)

1.一种微藻培养液的常温保存方法，其特征在于：所述微藻包括蛋白核小球藻、固氮鱼腥藻和小单歧藻；具体包括如下步骤：
A. 镜检：微藻培养液通过显微镜观察，选择藻细胞生长良好，无原生动物，且藻细胞浓度为2.0×107个/mL～4.0×107个/mL，得到微藻培养液A；
B. 添加三碘苯甲酸和山梨酸钾：向微藻培养液A中分别加入三碘苯甲酸和山梨酸钾，搅拌均匀后得到微藻培养液B；
C. 添加甘油和山梨醇：向微藻培养液B中分别加入甘油和山梨醇，搅拌均匀得到微藻培养液C；
D. 添加营养物质：向微藻培养液C中分别加入葡萄糖和酵母浸粉，搅拌均匀得到微藻培养液D；
E. 调整pH值：采用氢氧化钠或盐酸溶液，将微藻培养液D的pH值调整为6.0～6.5；
F. 灌装储存：将步骤E得到的微藻培养液灌装到不透明的塑料桶中，密封，储存即可。
2.根据权利要求1所述的一种微藻培养液的常温保存方法，其特征在于：所述步骤A中原生动物包括车轮虫和草履虫。
3.根据权利要求1所述的一种微藻培养液的常温保存方法，其特征在于：所述步骤B中加入的三碘苯甲酸的终浓度为100～200mg/L，山梨酸钾的终浓度为0.5～0.8g/L。
4.根据权利要求1所述的一种微藻培养液的常温保存方法，其特征在于：所述步骤C中加入的甘油终浓度为0.3～0.5 g/L，山梨醇的终浓度为0.1～0.3 g/L。
5.根据权利要求1所述的一种微藻培养液的常温保存方法，其特征在于：所述步骤D中加入的葡萄糖终浓度为2.0～3.0g/L，酵母浸粉的终浓度为0.1～0.3 g/L。
6.根据权利要求1所述的一种微藻培养液的常温保存方法，其特征在于：所述步骤F中将盛有微藻培养液的塑料桶放在干燥、阴凉的室内，常温保存。
7.根据权利要求6所述的一种微藻培养液的常温保存方法，其特征在于：所述微藻培养液经过6个月的储存，活藻细胞浓度为1.40×107个/mL～2.92×107个/mL，藻细胞存活率为70%～73%。
CN202211252595.0A 2022-10-13 2022-10-13 一种微藻培养液的常温保存方法 Pending CN115627236A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211252595.0A CN115627236A (zh) 2022-10-13 2022-10-13 一种微藻培养液的常温保存方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211252595.0A CN115627236A (zh) 2022-10-13 2022-10-13 一种微藻培养液的常温保存方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115627236A true CN115627236A (zh) 2023-01-20

Family

ID=84904505

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211252595.0A Pending CN115627236A (zh) 2022-10-13 2022-10-13 一种微藻培养液的常温保存方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115627236A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117586075A (zh) * 2023-11-17 2024-02-23 天津大学 一种微藻矿物有机肥及其制备方法和应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105779293A (zh) * 2016-05-18 2016-07-20 中国计量大学 一种小球藻的保存方法
CN110628632A (zh) * 2019-10-29 2019-12-31 岳阳渔美康生物科技有限公司 一种小球藻藻种常温保存的方法
US20220195377A1 (en) * 2019-04-10 2022-06-23 Native Microbials, Inc. Methods and systems for stabilization and preservation of microbes

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105779293A (zh) * 2016-05-18 2016-07-20 中国计量大学 一种小球藻的保存方法
US20220195377A1 (en) * 2019-04-10 2022-06-23 Native Microbials, Inc. Methods and systems for stabilization and preservation of microbes
CN110628632A (zh) * 2019-10-29 2019-12-31 岳阳渔美康生物科技有限公司 一种小球藻藻种常温保存的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
程智慧 主编: "铁皮石斛组织培养与集约化优质栽培技术", vol. 1, 中国农业大学出版社, pages: 148 - 149 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117586075A (zh) * 2023-11-17 2024-02-23 天津大学 一种微藻矿物有机肥及其制备方法和应用
CN117586075B (zh) * 2023-11-17 2024-05-24 天津大学 一种微藻矿物有机肥及其制备方法和应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101717301B (zh) 一种胶囊型微生物肥料及制备方法
US20160083807A1 (en) Pseudomonas putida strain as well as its microbial inoculum and application
CN104974962B (zh) 一株不动杆菌属解磷促生细菌y40及其应用
CN102417413A (zh) 一种复合微生物肥料
CN108728379B (zh) 一种用于畜禽粪便快速腐熟的复合菌剂及其制备方法
CN111919709A (zh) 一种含有植物促生菌的牛粪基础载体栽培基质及制备方法
CN106701608A (zh) 一种微生态调节剂
CN107840706A (zh) 一种利用木薯酒精废水生产的微生物肥料及其应用
CN115627236A (zh) 一种微藻培养液的常温保存方法
CN110157621B (zh) 一种高浓缩微藻活细胞长效保存剂的制备方法
CN111393206A (zh) 一种含复合菌有机无机全元生物有机肥及其应用
CN103173387B (zh) 用于促进油菜生长的促生菌及其微生物有机肥料
CN104651267A (zh) 一种具有发酵产碱功能的微生物菌及其应用的有机肥料
CN104450573A (zh) 一种含有微生物多糖和功能微生物的复合生态菌剂
CN105543094B (zh) 一种液态光合细菌高活力保存方法
CN104152373A (zh) 一种可高效降解二甲戊乐灵的菌株及其应用
CN103964928A (zh) 微生物土壤修复剂的制备方法
CN107974423B (zh) 一种土壤生物活化剂及其制备方法
CN110627577A (zh) 一种微生物菌剂有效改良土壤的复合配方及其制备方法
CN113755394B (zh) 一种含解淀粉芽孢杆菌的生物炭基微生物肥料及其应用
CN115997791A (zh) 洋葱伯克霍尔德氏菌在促进植物耐盐碱及降低重金属镉含量中的应用
JP2013132248A (ja) 光合成細菌の培養方法および光合成細菌
CN111793585B (zh) 布氏乳杆菌及其培养法和在农业种植中的应用
WO2022222136A1 (zh) 一种适用于花木的环保育苗肥料及其生产工艺
CN103881922A (zh) 一种利用微生物絮凝剂收获微藻的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination