CN115624654B - 一种盐酸小檗碱在屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量技术及其复合材料中的应用 - Google Patents

一种盐酸小檗碱在屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量技术及其复合材料中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及牙槽骨缺损修复的骨增量技术领域，具体地说是一种盐酸小檗碱在屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量技术及其复合材料中的应用。该骨增量复合材料的主要构成物质含有人工合成原位自固化可降解骨替代材料和盐酸小檗碱。材料原位自固化后可维持植入后的骨形成空间，同时小檗碱阻挡软组织长入缺损区，促进成骨作用。采用本发明在骨修复领域，尤其是牙槽骨缺损骨增量技术领域，具有如下优势特点：不需要屏障膜，可以减去翻瓣引起的创伤，简化外科操作，减少手术时间和成本；没有屏障膜的阻隔，有利于发挥骨膜的成骨作用；可在微创条件下将材料注入或导入受植区，实现最大限度保护成骨微环境，更加有利于骨愈合。

Description

一种盐酸小檗碱在屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量技术 及其复合材料中的应用
技术领域
本发明涉及盐酸小檗碱在牙槽骨缺损修复的骨增量技术及其复合材料的临床应用领域，具体地说是一种盐酸小檗碱在屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量技术及其复合材料中的应用。
背景技术
受植区良好的骨条件是实现种植体与骨结合的重要因素，充足的骨量对种植体的支持固定、改善种植修复的美观效果、延长种植体使用寿命等方面均有重要意义。有超过40％的种植体骨结合需要进行骨增量。临床主要的骨增量方法是骨粉和/或骨块外覆屏障膜技术，即引导骨再生(guided bone regeneration，GBR)技术，目前广泛应用于口腔牙种植体受植区骨缺损修复，以及牙周病、根尖周病引起的牙槽骨缺损的临床修复中，具有良好的骨再生修复效果。GBR技术的原理是使用屏障膜隔绝快速增生的成纤维细胞和上皮细胞，提供一个相对封闭的组织生长环境，使骨缺损区具有再生能力的细胞最大限度地增殖分化，促进新骨的形成。
屏障膜的使用至关重要，但屏障膜的使用使GBR技术存在以下几个问题：1.屏障膜隔离了受植区来自骨膜的骨性细胞、血管和神经，阻碍了骨膜的成骨作用。2.可吸收屏障膜的空间维持能力较差，若成骨过程中屏障膜发生塌陷，或屏障膜与骨之间出现较大动度可引起纤维结缔组织生成增加，则成骨的效果将无法保障；不可吸收膜有膜暴露风险且需要二次手术取出。3.通常需要切开翻瓣放置屏障膜，同时松解骨膜以减小张力，造成较大创伤，影响局部血供。4.临床操作较复杂，技术敏感性较高。
为解决上述问题，学者们对不使用外源性屏障膜的GBR的技术进行了探索：1.硫酸钙屏障膜。基础研究和临床应用研究均有报道，学者们认为硫酸钙能够凝固并形成纳米多孔细胞屏障膜，从而防止不需要的软组织细胞早期侵入移植物。硫酸钙屏障膜的使用有两种方式：第一种与传统屏障膜类似，在骨移植材料表面覆盖厚度为1.5～2mm调和成糊剂的硫酸钙后直接缝合；另一种方式为硫酸钙与羟基磷灰石、β-磷酸三钙等组成双磷酸材料，使用时与液相物质调和后塑形直接植入骨增量部位，不覆盖屏障膜。2.磷酸钙水门汀/羟甲基纤维素复合屏障膜。研究认为利用磷酸钙水门汀凝固后可以阻碍上皮细胞长入的特性，在牙周引导组织再生术中代替屏障膜。
但上述方法均不能有效阻挡软组织进入受植区，原因是：1.硫酸钙屏障在2～3周内完全降解、吸收导致其过早失去屏障功能，从而无法阻止上皮组织的迁移；2.由于缝合加压或术后的软组织运动，以及体液的溶解作用导致凝固后的硫酸钙屏障膜、磷酸钙水门汀/羟甲基纤维素复合屏障膜在术后初期发生破裂，从而丧失屏障功能。
发明内容
本发明的目的在于提供一种盐酸小檗碱在屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量技术及其复合材料中的应用，解决现有GBR技术中需要屏障膜所引起的阻碍骨膜成骨作用、手术操作较复杂、创伤较大等问题。
本发明的技术方案是：
一种盐酸小檗碱在屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量技术及其复合材料中的应用。
进一步的，优选为口腔牙种植体受植区骨缺损，以及牙周病、根尖周病引起的牙槽骨缺损的骨增量技术及其复合材料中的应用。
进一步的，按质量份数计，复合材料中，原位自固化可降解骨替代材料90～99.9份，盐酸小檗碱0.1～10份。
进一步的，原位自固化可降解骨替代材料由固相组成物和液相组成物调和而成，固相组成物和液相组成物的质量比例范围0.5～3:1，该固相组成物的组成含有以下物质中的一种或两种及以上：磷酸四钙、α-磷酸三钙、磷酸氢钙、硫酸钙、羟基磷灰石、β-磷酸三钙和碳酸钙；该液相组成物的组成含有以下物质中的一种或两种及以上：水、柠檬酸水溶液、Na2HPO4水溶液、NaH2PO4.2H2O水溶液、聚乙烯吡咯烷酮水溶液和H3PO4水溶液。
进一步的，复合材料中，优选的盐酸小檗碱摩尔浓度范围为1～100μM。
进一步的，复合材料中，优选的盐酸小檗碱摩尔浓度范围为5～15μM。
进一步的，优选的盐酸小檗碱浓度有效抑制成纤维细胞增殖、迁移过程的同时，促进成骨细胞分化。
进一步的，该复合材料在临床应用过程中不需要采用屏障膜。
进一步的，该复合材料在临床应用过程中采用微创手术。
本发明的设计思想是：
原位自固化可降解材料，如：磷酸钙人工骨(calcium phosphate cement,CPC)，这类材料具有良好的自固化性、可塑性、生物相容性、体内降解性和骨引导性。微创注入或导入骨缺损区，固化后与骨组织形成良好粘结不易溃散，并具有一定机械强度，可以维持骨形成空间，提供良好的骨传导和骨诱导。
盐酸小檗碱(berberine hydrochloride，BBH)的主要成分是小檗碱又名黄连素，是多种中草药的活性成分，属于我国自主研发的药用植物单体药物之一。其药理作用广泛，具有潜在的抗糖尿病、降血脂、抗肿瘤、抗心血管疾病和抗氧化等活性，目前在临床上，主要作为治疗胃肠道疾病的抗炎、抗菌的非处方药物。文献报道BBH可以抑制成纤维细胞增殖迁移；一些国内外临床试验和基础实验已经初步证实了BBH可以治疗类风湿关节炎、骨关节炎和骨质疏松症等骨相关疾病；另外，有文献报道壳聚糖微球吸附小檗碱对金黄色葡萄球菌具有较好的抗菌活性。
本发明研究团队发现，适当浓度的BBH在有效抑制成纤维细胞增殖迁移的同时可以促进成骨细胞的分化。
鉴于上述原位自固化可降解材料和盐酸小檗碱的特性，本发明首次将二者结合应用于口腔牙槽骨缺损的修复。利用材料原位自固化特点维持植入后的骨形成空间；利用小檗碱阻挡软组织长入受植区，同时促进成骨作用。另外，还具备以下特点：不需要屏障膜，手术可以不用翻瓣，降低创伤，简化外科操作，减少手术时间和成本；没有膜的阻隔，有利于发挥骨膜的成骨作用；因其可被注入或导入受植区实现微创手术，最大限度保护成骨微环境，更加有利于骨愈合。参见附图1，A1和A2为GBR技术，B1和B2为屏障修复一体化骨增量技术。
本发明具有如下优点及有益效果：
1、本发明所述的修复口腔骨缺损的骨增量材料，原位自固化可降解骨水泥材料+盐酸小檗碱，与现有材料相比，可以有效抑制成纤维细胞的增殖迁移，同时促进成骨细胞的分化。临床应用时，材料原位自固化后可维持植入后的骨形成空间，同时小檗碱阻挡软组织长入缺损区，促进成骨作用。
2、本发明所述材料的屏障修复一体化口腔骨缺损骨增量技术，与现有骨增量技术相比，具有如下优势：(1)在临床应用时不需要屏障膜，可以简化外科操作，减少手术时间和成本；(2)受植区由于没有屏障膜的阻隔，有利于发挥骨膜的成骨作用；(3)由于材料的可注射或可导入性，可实现微创手术修复，手术创口可减小30～50％，最大限度保护成骨微环境，更加有利于骨愈合。
附图说明
图1为本发明所述的区别于引导骨再生技术(GBR)的屏障修复一体化牙槽骨缺损骨增量技术：A1-A2为作为对比技术的引导骨再生技术(GBR)，B1-B2为本发明所述屏障修复一体化牙槽骨缺损骨增量技术；其中，①为屏障膜，②为牙龈，③为骨膜，④为牙槽骨，⑤为骨植入材料，⑥为种植体。
图2为含0μM盐酸小檗碱和本发明所述的以含5μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥作为屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量复合材料的体外实验(3种体外实验细胞模型：L929成纤维细胞模型、MC3T3-E1前成骨细胞模型、L929和MC3T3-E1共培养细胞模型)结果图。其中，图2-A为L929和MC3T3-E1共同培养，含0μM盐酸小檗碱(Control)和含5μM盐酸小檗碱(Berberine)的磷酸四钙材料对两种细胞的增殖迁移的影响；图2-B为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含5μM盐酸小檗碱(Berberine)的磷酸四钙材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响(左图为4天，右图为7天)，横坐标的Runx2、ALP、Col1、Ocn分别代表：Runx2是参与成骨细胞分化和骨骼形态发生过程的转录因子；ALP是骨形成所必需的酶，成骨细胞分化的早期标志之一；Col1是骨基质中最主要的具有特异性的胶原纤维成分，反映成骨分化的重要指标之一；Ocn是由成骨细胞所分泌的非胶原蛋白，其表达量可以直接反映成骨细胞的分化水平，提示成骨细胞进入骨矿化发生期；纵坐标的The Expression Levels代表成骨分化相关基因Runx2、ALP、Col1、Ocn的mRNA表达水平；图2-C为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含5μM盐酸小檗碱(Berberine)的磷酸四钙材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响，Alizarin redstaining on 21 days代表茜素红染色21天。
图3为含0μM盐酸小檗碱和本发明所述的以含10μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥作为屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量复合材料的体外实验(3种体外实验细胞模型：L929成纤维细胞模型、MC3T3-E1前成骨细胞模型、L929和MC3T3-E1共培养细胞模型)结果图。其中，图3-A为L929和MC3T3-E1共同培养，含0μM盐酸小檗碱(Control)和含10μM盐酸小檗碱(Berberine)的磷酸四钙材料对两种细胞的增殖迁移的影响；图3-B为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含10μM盐酸小檗碱(Berberine)的磷酸四钙材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响(左图为4天，右图为7天)，横坐标的Runx2、ALP、Col1、Ocn分别代表：Runx2是参与成骨细胞分化和骨骼形态发生过程的转录因子；ALP是骨形成所必需的酶，成骨细胞分化的早期标志之一；Col1是骨基质中最主要的具有特异性的胶原纤维成分，反映成骨分化的重要指标之一；Ocn是由成骨细胞所分泌的非胶原蛋白，其表达量可以直接反映成骨细胞的分化水平，提示成骨细胞进入骨矿化发生期；纵坐标的The Expression Levels代表成骨分化相关基因Runx2、ALP、Col1、Ocn的mRNA表达水平；图3-C为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含10μM盐酸小檗碱(Berberine)的磷酸四钙材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响，Alizarin red staining on 21 days代表茜素红染色21天。
图4为含0μM盐酸小檗碱和本发明所述的以含15μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥作为屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量复合材料的体外实验(3种体外实验细胞模型：L929成纤维细胞模型、MC3T3-E1前成骨细胞模型、L929和MC3T3-E1共培养细胞模型)结果图。其中，图4-A为L929和MC3T3-E1共同培养，含0μM盐酸小檗碱(Control)和含15μM盐酸小檗碱(Berberine)的磷酸四钙材料对两种细胞的增殖迁移的影响；图4-B为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含15μM盐酸小檗碱(Berberine)的磷酸四钙材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响(左图为4天，右图为7天)，横坐标的Runx2、ALP、Col1、Ocn分别代表：Runx2是参与成骨细胞分化和骨骼形态发生过程的转录因子、ALP是骨形成所必需的酶，成骨细胞分化的早期标志之一、Col1是骨基质中最主要的具有特异性的胶原纤维成分，反映成骨分化的重要指标之一、Ocn是由成骨细胞所分泌的非胶原蛋白，其表达量可以直接反映成骨细胞的分化水平，提示成骨细胞进入骨矿化发生期；纵坐标的The Expression Levels代表成骨分化相关基因Runx2、ALP、Col1、Ocn的mRNA表达水平；图4-C为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含15μM盐酸小檗碱(Berberine)的磷酸四钙材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响，Alizarin red staining on 21 days代表茜素红染色21天。
图5为含0μM盐酸小檗碱和本发明所述的以含5μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥作为屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量复合材料的体外实验(3种体外实验细胞模型：L929成纤维细胞模型、MC3T3-E1前成骨细胞模型、L929和MC3T3-E1共培养细胞模型)结果图。其中，图5-A为L929和MC3T3-E1共同培养，含0μM盐酸小檗碱(Control)和含5μM盐酸小檗碱(Berberine)的α-磷酸三钙材料对两种细胞的增殖迁移的影响；图5-B为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含5μM盐酸小檗碱(Berberine)的α-磷酸三钙材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响(左图为4天，右图为7天)，横坐标的Runx2、ALP、Col1、Ocn分别代表：Runx2是参与成骨细胞分化和骨骼形态发生过程的转录因子、ALP是骨形成所必需的酶，成骨细胞分化的早期标志之一、Col1是骨基质中最主要的具有特异性的胶原纤维成分，反映成骨分化的重要指标之一、Ocn是由成骨细胞所分泌的非胶原蛋白，其表达量可以直接反映成骨细胞的分化水平，提示成骨细胞进入骨矿化发生期；纵坐标的The Expression Levels代表成骨分化相关基因Runx2、ALP、Col1、Ocn的mRNA表达水平；图5-C为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含5μM盐酸小檗碱(Berberine)的α-磷酸三钙材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响，Alizarin red staining on 21 days代表茜素红染色21天。
图6为含0μM盐酸小檗碱和本发明所述的以含10μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥作为屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量复合材料的体外实验(3种体外实验细胞模型：L929成纤维细胞模型、MC3T3-E1前成骨细胞模型、L929和MC3T3-E1共培养细胞模型)结果图。其中，图6-A为L929和MC3T3-E1共同培养，含0μM盐酸小檗碱(Control)和含10μM盐酸小檗碱(Berberine)的α-磷酸三钙材料对两种细胞的增殖迁移的影响；图6-B为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含10μM盐酸小檗碱(Berberine)的α-磷酸三钙材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响(左图为4天，右图为7天)，横坐标的Runx2、ALP、Col1、Ocn分别代表：Runx2是参与成骨细胞分化和骨骼形态发生过程的转录因子、ALP是骨形成所必需的酶，成骨细胞分化的早期标志之一、Col1是骨基质中最主要的具有特异性的胶原纤维成分，反映成骨分化的重要指标之一、Ocn是由成骨细胞所分泌的非胶原蛋白，其表达量可以直接反映成骨细胞的分化水平，提示成骨细胞进入骨矿化发生期；纵坐标的The Expression Levels代表成骨分化相关基因Runx2、ALP、Col1、Ocn的mRNA表达水平；图6-C为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含10μM盐酸小檗碱(Berberine)的α-磷酸三钙材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响，Alizarin red staining on 21 days代表茜素红染色21天。
图7为含0μM盐酸小檗碱和本发明所述的以含15μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥作为屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量复合材料的体外实验(3种体外实验细胞模型：L929成纤维细胞模型、MC3T3-E1前成骨细胞模型、L929和MC3T3-E1共培养细胞模型)结果图。其中，图7-A为L929和MC3T3-E1共同培养，含0μM盐酸小檗碱(Control)和含15μM盐酸小檗碱(Berberine)的α-磷酸三钙对两种细胞的增殖迁移的影响；图7-B为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含15μM盐酸小檗碱(Berberine)的α-磷酸三钙材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响(左图为4天，右图为7天)，横坐标的Runx2、ALP、Col1、Ocn分别代表：Runx2是参与成骨细胞分化和骨骼形态发生过程的转录因子、ALP是骨形成所必需的酶，成骨细胞分化的早期标志之一、Col1是骨基质中最主要的具有特异性的胶原纤维成分，反映成骨分化的重要指标之一、Ocn是由成骨细胞所分泌的非胶原蛋白，其表达量可以直接反映成骨细胞的分化水平，提示成骨细胞进入骨矿化发生期；纵坐标的The Expression Levels代表成骨分化相关基因Runx2、ALP、Col1、Ocn的mRNA表达水平；图7-C为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含15μM盐酸小檗碱(Berberine)的α-磷酸三钙材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响，Alizarin red staining on 21 days代表茜素红染色21天。
图8为含0μM盐酸小檗碱和本发明所述的以含5μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥作为屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量复合材料的体外实验(3种体外实验细胞模型：L929成纤维细胞模型、MC3T3-E1前成骨细胞模型、L929和MC3T3-E1共培养细胞模型)结果图。其中，图8-A为L929和MC3T3-E1共同培养，含0μM盐酸小檗碱(Control)和含5μM盐酸小檗碱(Berberine)的硫酸钙材料对两种细胞的增殖迁移的影响；图8-B为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含5μM盐酸小檗碱(Berberine)的硫酸钙材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响(左图为4天，右图为7天)，横坐标的Runx2、ALP、Col1、Ocn分别代表：Runx2是参与成骨细胞分化和骨骼形态发生过程的转录因子、ALP是骨形成所必需的酶，成骨细胞分化的早期标志之一、Col1是骨基质中最主要的具有特异性的胶原纤维成分，反映成骨分化的重要指标之一、Ocn是由成骨细胞所分泌的非胶原蛋白，其表达量可以直接反映成骨细胞的分化水平，提示成骨细胞进入骨矿化发生期；纵坐标的The Expression Levels代表成骨分化相关基因Runx2、ALP、Col1、Ocn的mRNA表达水平；图8-C为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含5μM盐酸小檗碱(Berberine)的硫酸钙材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响，Alizarin redstaining on 21 days代表茜素红染色21天。
图9为含0μM盐酸小檗碱和本发明所述的以含10μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥作为屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量复合材料的体外实验(3种体外实验细胞模型：L929成纤维细胞模型、MC3T3-E1前成骨细胞模型、L929和MC3T3-E1共培养细胞模型)结果图。其中，图9-A为L929和MC3T3-E1共同培养，含0μM盐酸小檗碱(Control)和含10μM盐酸小檗碱(Berberine)的硫酸钙材料对两种细胞的增殖迁移的影响；图9-B为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含10μM盐酸小檗碱(Berberine)的硫酸钙材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响(左图为4天，右图为7天)，横坐标的Runx2、ALP、Col1、Ocn分别代表：Runx2是参与成骨细胞分化和骨骼形态发生过程的转录因子、ALP是骨形成所必需的酶，成骨细胞分化的早期标志之一、Col1是骨基质中最主要的具有特异性的胶原纤维成分，反映成骨分化的重要指标之一、Ocn是由成骨细胞所分泌的非胶原蛋白，其表达量可以直接反映成骨细胞的分化水平，提示成骨细胞进入骨矿化发生期；纵坐标的The Expression Levels代表成骨分化相关基因Runx2、ALP、Col1、Ocn的mRNA表达水平；图9-C为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含10μM盐酸小檗碱(Berberine)的硫酸钙材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响，Alizarin redstaining on 21 days代表茜素红染色21天。
图10为含0μM盐酸小檗碱和本发明所述的以含15μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥作为屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量复合材料的体外实验(3种体外实验细胞模型：L929成纤维细胞模型、MC3T3-E1前成骨细胞模型、L929和MC3T3-E1共培养细胞模型)结果图。其中，图10-A为L929和MC3T3-E1共同培养，含0μM盐酸小檗碱(Control)和含15μM盐酸小檗碱(Berberine)的硫酸钙材料对两种细胞的增殖迁移的影响；图10-B为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含15μM盐酸小檗碱(Berberine)的硫酸钙材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响(左图为4天，右图为7天)，横坐标的Runx2、ALP、Col1、Ocn分别代表：Runx2是参与成骨细胞分化和骨骼形态发生过程的转录因子、ALP是骨形成所必需的酶，成骨细胞分化的早期标志之一、Col1是骨基质中最主要的具有特异性的胶原纤维成分，反映成骨分化的重要指标之一、Ocn是由成骨细胞所分泌的非胶原蛋白，其表达量可以直接反映成骨细胞的分化水平，提示成骨细胞进入骨矿化发生期；纵坐标的The Expression Levels代表成骨分化相关基因Runx2、ALP、Col1、Ocn的mRNA表达水平；图10-C为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含15μM盐酸小檗碱(Berberine)的硫酸钙材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响，Alizarin redstaining on 21 days代表茜素红染色21天。
图11为含0μM盐酸小檗碱和本发明所述的以含5μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥作为屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量复合材料的体外实验(3种体外实验细胞模型：L929成纤维细胞模型、MC3T3-E1前成骨细胞模型、L929和MC3T3-E1共培养细胞模型)结果图。其中，图11-A为L929和MC3T3-E1共同培养，含0μM盐酸小檗碱(Control)和含5μM盐酸小檗碱(Berberine)的羟基磷灰石对两种细胞的增殖迁移的影响；图11-B为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含5μM盐酸小檗碱(Berberine)的羟基磷灰石材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响(左图为4天，右图为7天)，横坐标的Runx2、ALP、Col1、Ocn分别代表：Runx2是参与成骨细胞分化和骨骼形态发生过程的转录因子、ALP是骨形成所必需的酶，成骨细胞分化的早期标志之一、Col1是骨基质中最主要的具有特异性的胶原纤维成分，反映成骨分化的重要指标之一、Ocn是由成骨细胞所分泌的非胶原蛋白，其表达量可以直接反映成骨细胞的分化水平，提示成骨细胞进入骨矿化发生期；纵坐标的The Expression Levels代表成骨分化相关基因Runx2、ALP、Col1、Ocn的mRNA表达水平；图11-C为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含5μM盐酸小檗碱(Berberine)的羟基磷灰石材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响，Alizarinred staining on 21 days代表茜素红染色21天。
图12为含0μM盐酸小檗碱和本发明所述的以含10μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥作为屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量复合材料的体外实验(3种体外实验细胞模型：L929成纤维细胞模型、MC3T3-E1前成骨细胞模型、L929和MC3T3-E1共培养细胞模型)结果图。其中，图12-A为L929和MC3T3-E1共同培养，含0μM盐酸小檗碱(Control)和含10μM盐酸小檗碱(Berberine)的羟基磷灰石对两种细胞的增殖迁移的影响；图12-B为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含10μM盐酸小檗碱(Berberine)的羟基磷灰石材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响(左图为4天，右图为7天)，横坐标的Runx2、ALP、Col1、Ocn分别代表：Runx2是参与成骨细胞分化和骨骼形态发生过程的转录因子、ALP是骨形成所必需的酶，成骨细胞分化的早期标志之一、Col1是骨基质中最主要的具有特异性的胶原纤维成分，反映成骨分化的重要指标之一、Ocn是由成骨细胞所分泌的非胶原蛋白，其表达量可以直接反映成骨细胞的分化水平，提示成骨细胞进入骨矿化发生期；纵坐标的The Expression Levels代表成骨分化相关基因Runx2、ALP、Col1、Ocn的mRNA表达水平；图12-C为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含10μM盐酸小檗碱(Berberine)的羟基磷灰石材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响，Alizarin red staining on 21 days代表茜素红染色21天。
图13为含0μM盐酸小檗碱和本发明所述的以含15μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥作为屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量复合材料的体外实验(3种体外实验细胞模型：L929成纤维细胞模型、MC3T3-E1前成骨细胞模型、L929和MC3T3-E1共培养细胞模型)结果图。其中，图13-A为L929和MC3T3-E1共同培养，含0μM盐酸小檗碱(Control)和含15μM盐酸小檗碱(Berberine)的羟基磷灰石对两种细胞的增殖迁移的影响；图13-B为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含15μM盐酸小檗碱(Berberine)的羟基磷灰石材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响(左图为4天，右图为7天)，横坐标的Runx2、ALP、Col1、Ocn分别代表：Runx2是参与成骨细胞分化和骨骼形态发生过程的转录因子、ALP是骨形成所必需的酶，成骨细胞分化的早期标志之一、Col1是骨基质中最主要的具有特异性的胶原纤维成分，反映成骨分化的重要指标之一、Ocn是由成骨细胞所分泌的非胶原蛋白，其表达量可以直接反映成骨细胞的分化水平，提示成骨细胞进入骨矿化发生期；纵坐标的The Expression Levels代表成骨分化相关基因Runx2、ALP、Col1、Ocn的mRNA表达水平；图13-C为含0μM盐酸小檗碱(Control)和含15μM盐酸小檗碱(Berberine)的羟基磷灰石材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响，Alizarin red staining on 21 days代表茜素红染色21天。
图14为本发明所述的以含15μM盐酸小檗碱的骨水泥作为屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量复合材料的体内实验：A1-A2-A3-A4为作为对比技术的引导骨再生技术(GBR)，B1-B2-B3为本发明所述屏障修复一体化牙槽骨缺损骨增量技术，A4和B3为材料植入6周的Micro-CT三维成像图(绿色部分M为新生骨，红色部分N为残余植入材料)。其中，①为空白组，②为Bio-Oss松质骨小颗粒，③为Bio-Oss松质骨小颗粒+Bio-Gide膜(可吸收生物屏障膜)，④为CPC，⑤为CPC+BBH；(1)为空白组，(2)为Bio-Oss松质骨小颗粒+Bio-Gide膜(可吸收生物屏障膜)，(3)为CPC，(4)为CPC+BBH。
具体实施方式
在具体实施过程中，一种盐酸小檗碱在屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量技术及其复合材料中的应用，按照本发明构建牙槽骨缺损骨增量复合材料体系，以L929成纤维细胞、MC3T3-E1前成骨细胞、L929和MC3T3-E1共培养细胞模型为体外实验模型，以大鼠颅骨临界骨缺损模型为体内实验模型。
下面，通过实施例和附图对本发明进一步详细阐述。
实施例1
本实施例中，采用含有0μM、5μM不同浓度盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥为实验材料。按质量份数计，实验材料的主要成分和含量如下：磷酸四钙、磷酸氢钙各2份，柠檬酸水溶液和Na2HPO4水溶液各2份，柠檬酸水溶液的浓度为0.4mol/L，Na2HPO4水溶液的浓度为0.5mol/L，盐酸小檗碱的摩尔浓度分别为0μM、5μM。
(1)建立3种体外实验细胞模型：L929成纤维细胞模型、MC3T3-E1前成骨细胞模型、L929和MC3T3-E1共培养细胞模型。
(2)检测材料对L929和MC3T3-E1细胞增殖能力的影响。
(3)利用L929和MC3T3-E1共培养模型，检测材料对L929和MC3T3-E1迁移情况的影响。
(4)检测材料对MC3T3-E1成骨分化的作用。
实验结果如下：
(1)含5μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对L929细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
Group代表实验组别，Blank代表空白，Control代表对照，Berberine代表盐酸小檗碱，Relative Growth Rate代表相对增长率，d代表天(下同)。
(2)含5μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
L929和MC3T3-E1共同培养条件下，含5μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对两种细胞的增殖迁移的影响如图2-A所示，含5μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响如图2-B所示，含5μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响如图2-C所示。
实施例2
本实施例中，采用含有0μM、10μM不同浓度盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥为实验材料。按质量份数计，实验材料的主要成分和含量如下：磷酸四钙、磷酸氢钙各2份，柠檬酸水溶液和Na2HPO4水溶液各1份，柠檬酸水溶液的浓度为0.2mol/L，Na2HPO4水溶液的浓度为0.25mol/L，盐酸小檗碱的摩尔浓度分别为0μM、10μM。
实验方法：
同实施例1的方法(1)、(2)、(3)、(4)。
实验结果如下：
(1)含10μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对L929细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
(2)含10μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
Group Blank Control(0μM) Berberine(10μM) Relative Growth Rate
1d 0.235±0.003 0.469±0.003 0.458±0.007 97.58％
2d 0.194±0.004 0.856±0.001 0.809±0.005 94.46％
4d 0.175±0.022 1.790±0.038 1.837±0.034 102.63％
7d 0.165±0.051 2.980±0.011 2.817±0.020 94.54％
L929和MC3T3-E1共同培养条件下，含10μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对两种细胞的增殖迁移的影响如图3-A所示，含10μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响如图3-B所示，含10μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响如图3-C所示。
实施例3
本实施例中，采用含有0μM、15μM不同浓度盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥为实验材料。按质量份数计，实验材料的主要成分和含量如下：磷酸四钙、磷酸氢钙各2份，柠檬酸水溶液和Na2HPO4水溶液各3份，柠檬酸水溶液的浓度为0.6mol/L，Na2HPO4水溶液的浓度为0.75mol/L，盐酸小檗碱的摩尔浓度分别为0μM、15μM。
实验方法：
同实施例1的方法(1)、(2)、(3)、(4)。
实验结果如下：
(1)含15μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对L929细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
(2)含15μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
L929和MC3T3-E1共同培养条件下，含15μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对两种细胞的增殖迁移的影响如图4-A所示，含15μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响如图4-B所示，含15μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响如图4-C所示。
实施例4
本实施例中，采用含有0μM、5μM不同浓度盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥为实验材料。按质量份数计，实验材料的主要成分和含量如下：α-磷酸三钙、磷酸氢钙各2份，柠檬酸水溶液1.5份，柠檬酸水溶液的浓度为0.45mol/L，盐酸小檗碱的摩尔浓度分别为0μM、5μM。
实验方法：
同实施例1的方法(1)、(2)、(3)、(4)。
实验结果如下：
(1)含5μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对L929细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
(2)含5μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
L929和MC3T3-E1共同培养条件下，含5μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对两种细胞的增殖迁移的影响如图5-A所示，含5μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响如图5-B所示，含5μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响如图5-C所示。
实施例5
本实施例中，采用含有0μM、10μM不同浓度盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥为实验材料。按质量份数计，实验材料的主要成分和含量如下：α-磷酸三钙、磷酸氢钙各2份，柠檬酸水溶液2.5份，柠檬酸水溶液的浓度为0.75mol/L，盐酸小檗碱的摩尔浓度分别为0μM、10μM。
实验方法：
同实施例1的方法(1)、(2)、(3)、(4)。
实验结果如下：
(1)含10μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对L929细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
(2)含10μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
L929和MC3T3-E1共同培养条件下，含10μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对两种细胞的增殖迁移的影响如图6-A所示，含10μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响如图6-B所示，含10μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响如图6-C所示。
实施例6
本实施例中，采用含有0μM、15μM不同浓度盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥为实验材料。按质量份数计，实验材料的主要成分和含量如下：α-磷酸三钙、磷酸氢钙各2份，柠檬酸水溶液2份，柠檬酸水溶液的浓度为0.6mol/L，盐酸小檗碱的摩尔浓度分别为0μM、15μM。
实验方法：
同实施例1的方法(1)、(2)、(3)、(4)。
实验结果如下：
(1)含15μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对L929细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
(2)含15μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
/>
L929和MC3T3-E1共同培养条件下，含15μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对两种细胞的增殖迁移的影响如图7-A所示，含15μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响如图7-B所示，含15μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响如图7-C所示。
实施例7
本实施例中，采用含有0μM、5μM不同浓度盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥为实验材料。按质量份数计，实验材料的主要成分和含量如下：硫酸钙、磷酸氢钙各2份，NaH2PO4.2H2O水溶液、H3PO4水溶液各2份，NaH2PO4.2H2O水溶液的浓度为0.5mol/L，H3PO4水溶液的浓度为1mol/L，盐酸小檗碱的摩尔浓度分别为0μM、5μM。
实验方法：
同实施例1的方法(1)、(2)、(3)、(4)。
实验结果如下：
(1)含5μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对L929细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
(2)含5μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
L929和MC3T3-E1共同培养条件下，含5μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对两种细胞的增殖迁移的影响如图8-A所示，含5μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响如图8-B所示，含5μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响如图8-C所示。
实施例8
本实施例中，采用含有0μM、10μM不同浓度盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥为实验材料。按质量份数计，实验材料的具体成分和含量如下：硫酸钙、磷酸氢钙各2份，NaH2PO4.2H2O水溶液、H3PO4水溶液各1份，NaH2PO4.2H2O水溶液的浓度为0.25mol/L，H3PO4水溶液的浓度为0.5mol/L，盐酸小檗碱的摩尔浓度分别为0μM、10μM。
实验方法：
同实施例1的方法(1)、(2)、(3)、(4)。
实验结果如下：
(1)含10μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对L929细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
(2)含10μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
L929和MC3T3-E1共同培养条件下，含10μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对两种细胞的增殖迁移的影响如图9-A所示，含10μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响如图9-B所示，含10μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响如图9-C所示。
实施例9
本实施例中，采用含有0μM、15μM不同浓度盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥为实验材料。按质量份数计，实验材料的具体成分和含量如下：硫酸钙、磷酸氢钙各2份，NaH2PO4.2H2O水溶液、H3PO4水溶液各3份，NaH2PO4.2H2O水溶液的浓度为0.75mol/L，H3PO4水溶液的浓度为1.5mol/L，盐酸小檗碱的摩尔浓度分别为0μM、15μM。
实验方法：
同实施例1的方法(1)、(2)、(3)、(4)。
实验结果如下：
(1)含15μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对L929细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
/>
(2)含15μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
L929和MC3T3-E1共同培养条件下，含15μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对两种细胞的增殖迁移的影响如图10-A所示，含15μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响如图10-B所示，含15μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响如图10-C所示。
实施例10
本实施例中，采用含有0μM、5μM不同浓度盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥为实验材料。按质份数计，实验材料的具体成分和含量如下：羟基磷灰石、β-磷酸三钙、碳酸钙各1份，柠檬酸水溶液、聚乙烯吡咯烷酮水溶液各1.5份，柠檬酸水溶液的浓度为0.45mol/L，聚乙烯吡咯烷酮水溶液的质量浓度为3.75％(W/V)，盐酸小檗碱的摩尔浓度分别为0μM、5μM。
实验方法：
同实施例1的方法(1)、(2)、(3)、(4)。
实验结果如下：
(1)含5μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对L929细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
(2)含5μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对MC3T3-E1细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
L929和MC3T3-E1共同培养条件下，含5μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对两种细胞的增殖迁移的影响如图11-A所示，含5μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响如图11-B所示，含5μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响如图11-C所示。
实施例11
本实施例中，采用含有0μM、10μM不同浓度盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥为实验材料。按质量份数计，实验材料的具体成分和含量如下：羟基磷灰石、β-磷酸三钙、碳酸钙各1份，柠檬酸水溶液、聚乙烯吡咯烷酮水溶液各2.5份，柠檬酸水溶液的浓度为0.75mol/L，聚乙烯吡咯烷酮水溶液的质量浓度为6.25％(W/V)，盐酸小檗碱的摩尔浓度分别为0μM、10μM。
实验方法：
同实施例1的方法(1)、(2)、(3)、(4)。
实验结果如下：
(1)含10μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对L929细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
(2)含10μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对MC3T3-E1细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
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L929和MC3T3-E1共同培养条件下，含10μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对两种细胞的增殖迁移的影响如图12-A所示，含10μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响如图12-B所示，含10μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响如图12-C所示。
实施例12
本实施例中，采用含有0μM、15μM不同浓度盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥为实验材料。按质量份数计，实验材料的具体成分和含量如下：羟基磷灰石、β-磷酸三钙、碳酸钙各1份，柠檬酸水溶液、聚乙烯吡咯烷酮水溶液各2份，柠檬酸水溶液的浓度为0.6mol/L，聚乙烯吡咯烷酮水溶液的质量浓度为5％(W/V)，盐酸小檗碱的摩尔浓度分别为0μM、15μM。
实验方法：
同实施例1的方法(1)、(2)、(3)、(4)。
实验结果如下：
(1)含15μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对L929细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
(2)含15μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对MC3T3-E1细胞增殖的影响(OD值，均值±标准差，n＝3)
L929和MC3T3-E1共同培养条件下，含15μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对两种细胞的增殖迁移的影响如图13-A所示，含15μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨分化相关基因表达的影响如图13-B所示，含15μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料对MC3T3-E1成骨矿化的影响如图13-C所示。
实施例13
本实施例中，实验组材料：含有0μM、15μM盐酸小檗碱的磷酸钙骨水泥(CPC，CPC+BBH)；按质量份数计，实验级材料的具体成分和含量如下：磷酸四钙、磷酸氢钙各2份，柠檬酸水溶液和Na2HPO4各1份，柠檬酸水溶液的浓度为0.6mol/L，Na2HPO4水溶液的浓度为0.5mol/L，盐酸小檗碱的摩尔浓度分别为0μM、15μM。对照组材料：GBR技术经典材料产自瑞士的Geistlich Bio-Oss松质骨小颗粒+Bio-Gide膜(可吸收生物屏障膜)；实验动物：雄性SD大鼠。
实验方法：
(1)大鼠双侧颅骨直径5mm缺损模型的建立。
(2)植入实验组和对照组材料，空白组不植入材料。
实验结果见附图14。
由图1可以看出，对比技术的引导骨再生技术(GBR)通常需要切开翻瓣放置屏障膜，同时松解骨膜以减小张力，造成较大创伤。本发明的骨植入材料含有原位自固化可降解骨替代材料(如：磷酸钙骨水泥)和盐酸小檗碱，可以将其导入或者通过注射器直接注入种植体和牙龈内侧的骨膜之间，在不需要屏障膜的情况下，可以减去翻瓣引起的创伤，没有屏障膜的阻隔，屏障修复一体化骨增量技术可以不影响骨膜的成骨作用，微创实现骨增量。
由图2可以看出，本发明所述的含5μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料可以抑制成纤维细胞的增殖，但对成骨细胞的增殖基本无影响；在两种细胞共同培养时可以抑制成纤维细胞增殖迁移，同时促进成骨细胞向伤口增殖迁移；该材料对成骨分化基因的表达和矿化水平略有提高。
由图3可以看出，本发明所述的含10μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料可以抑制成纤维细胞的增殖，但对成骨细胞的增殖基本无影响；在两种细胞共同培养时可以抑制成纤维细胞增殖迁移，同时促进成骨细胞向伤口增殖迁移；该材料对成骨分化基因的表达和矿化水平有提高。
由图4可以看出，本发明所述的含15μM盐酸小檗碱的磷酸四钙骨水泥实验材料可以显著抑制成纤维细胞的增殖，但对成骨细胞的增殖影响较小；在两种细胞共同培养时可以抑制显著成纤维细胞增殖迁移，同时促进成骨细胞向伤口增殖迁移；该材料对成骨分化基因的表达和矿化水平显著提高。
由图5可以看出，本发明所述的含5μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料可以抑制成纤维细胞的增殖，但对成骨细胞的增殖基本无影响；在两种细胞共同培养时可以抑制成纤维细胞增殖迁移，同时促进成骨细胞向伤口增殖迁移；该材料对成骨分化基因的表达和矿化水平略有提高。
由图6可以看出，本发明所述的含10μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料可以抑制成纤维细胞的增殖，但对成骨细胞的增殖基本无影响；在两种细胞共同培养时可以抑制成纤维细胞增殖迁移，同时促进成骨细胞向伤口增殖迁移；该材料对成骨分化基因的表达和矿化水平有提高。
由图7可以看出，本发明所述的含15μM盐酸小檗碱的α-磷酸三钙骨水泥实验材料可以显著抑制成纤维细胞的增殖，但对成骨细胞的增殖影响较小；在两种细胞共同培养时可以抑制显著成纤维细胞增殖迁移，同时促进成骨细胞向伤口增殖迁移；该材料对成骨分化基因的表达和矿化水平显著提高。
由图8可以看出，本发明所述的含5μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料可以抑制成纤维细胞的增殖，但对成骨细胞的增殖基本无影响；在两种细胞共同培养时可以抑制成纤维细胞增殖迁移，同时促进成骨细胞向伤口增殖迁移；该材料对成骨分化基因的表达和矿化水平略有提高。
由图9可以看出，本发明所述的含10μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料可以抑制成纤维细胞的增殖，但对成骨细胞的增殖基本无影响；在两种细胞共同培养时可以抑制成纤维细胞增殖迁移，同时促进成骨细胞向伤口增殖迁移；该材料对成骨分化基因的表达和矿化水平有提高。
由图10可以看出，本发明所述的含15μM盐酸小檗碱的硫酸钙骨水泥实验材料可以显著抑制成纤维细胞的增殖，但对成骨细胞的增殖影响较小；在两种细胞共同培养时可以抑制显著成纤维细胞增殖迁移，同时促进成骨细胞向伤口增殖迁移；该材料对成骨分化基因的表达和矿化水平显著提高。
由图11可以看出，本发明所述的含5μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料可以抑制成纤维细胞的增殖，但对成骨细胞的增殖基本无影响；在两种细胞共同培养时可以抑制成纤维细胞增殖迁移，同时促进成骨细胞向伤口增殖迁移；该材料对成骨分化基因的表达和矿化水平略有提高。
由图12可以看出，本发明所述的含10μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料可以抑制成纤维细胞的增殖，但对成骨细胞的增殖基本无影响；在两种细胞共同培养时可以抑制成纤维细胞增殖迁移，同时促进成骨细胞向伤口增殖迁移；该材料对成骨分化基因的表达和矿化水平有提高。
由图13可以看出，本发明所述的含15μM盐酸小檗碱的羟基磷灰石骨水泥实验材料可以显著抑制成纤维细胞的增殖，但对成骨细胞的增殖影响较小；在两种细胞共同培养时可以抑制显著成纤维细胞增殖迁移，同时促进成骨细胞向伤口增殖迁移；该材料对成骨分化基因的表达和成骨矿化水平显著提高。
由图14可以看出，本发明所述的含15μM盐酸小檗碱的磷酸钙骨水泥实验材料的成骨效果不低于Bio-Oss松质骨小颗粒+Bio-Gide膜(可吸收生物屏障膜)。
实施例结果表明，本发明所述的屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量复合材料，具有抑制成纤维细胞增殖和迁移、促进成骨细胞分化的作用。按照本发明所述的骨缺损处微创注入复合材料进行修复临床应用方法，创新点在于不需要屏障膜即可实现抑制软组织长入缺损区，同时促进成骨作用。

Claims (5)

1.一种盐酸小檗碱在制备屏障修复一体化的牙槽骨缺损骨增量技术的复合材料中的应用，其特征在于，所述骨缺损骨增量技术为口腔牙种植体受植区骨缺损，以及牙周病、根尖周病引起的牙槽骨缺损的骨增量技术，利用小檗碱阻挡软组织长入受植区，同时促进成骨作用；
按质量份数计，复合材料中，原位自固化可降解骨替代材料90～99.9份，盐酸小檗碱0.1～10份；
原位自固化可降解骨替代材料由固相组成物和液相组成物调和而成，固相组成物和液相组成物的质量比例范围0.5～3:1，该固相组成物的组成含有以下物质中的一种或两种及以上：磷酸四钙、α-磷酸三钙、磷酸氢钙、硫酸钙、羟基磷灰石、β-磷酸三钙和碳酸钙；该液相组成物的组成含有以下物质中的一种或两种及以上：水、柠檬酸水溶液、Na2HPO4水溶液、NaH2PO4.2H2O水溶液、聚乙烯吡咯烷酮水溶液和H3PO4水溶液；
复合材料中，盐酸小檗碱摩尔浓度范围为1～100μM。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，复合材料中，盐酸小檗碱摩尔浓度范围为5～15μM。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，盐酸小檗碱浓度有效抑制成纤维细胞增殖、迁移过程的同时，促进成骨细胞分化。
4.根据权利要求1或3所述的应用，其特征在于，该复合材料在临床应用过程中不需要采用屏障膜。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，该复合材料在临床应用过程中采用微创手术。
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