CN115581718B - 余甘子、千里光组合物及其抗真菌用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于抗真菌治疗技术领域,本发明提供了余甘子、千里光组合物及其抗真菌用途,所述组合物为提取物组合物,其中,组合物中,余甘子提取物、千里光提取物的质量比为(1~5.5):(1.5~20)。本发明提供的组合物联合产生的协同作用,对犬小孢子菌具有抑制作用,采用的藏药组分天然安全,具有极大的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于抗真菌治疗技术领域,尤其涉及余甘子、千里光组合物及其抗真菌用途。
背景技术
皮肤真菌是能够引起皮肤感染的真菌。这些有机体寄居在角蛋白组织中,并引起真菌感染。例如犬小孢子菌可通过动物与动物,动物与人的途径传染,可累及头部、躯干、四肢、指甲,导致头皮及光滑皮肤的浅部的炎症反应,严重时可引起脓癣,其病程长、治愈难、易复发,其发病率高、复发率亦高。
虽然目前临床上使用的抗菌药剂(如酮康唑、阿米卡星、庆大霉素、活力康唑、伊曲康唑、特比萘芬、二性霉素、氟康唑等)对皮肤及浅表部位感染的疗效较好。但持续使用也会导致真菌耐药现象严重,且这些抗菌药物的蓄积毒性较强,常常引起肝肾损伤、消化道刺激、头晕、过敏等,若通过增大药物剂量加强药物的作用效果,此时药物剂量依赖的毒副作用也会随之增加,为治疗过程带来隐患。
中药提取物抗皮肤真菌作用强,不易产生耐药性,对多种皮肤癣菌有杀菌作用,抗菌强度优于西药制剂。
因此,目前亟待开发出一种从天然药用植物中发掘更加温和、安全的抗真菌药物组合,对降低耐药性将具有重要意义。
发明内容
本发明旨在解决现有技术中存在的技术问题,因此,本发明提出余甘子、千里光组合物及其抗真菌用途,本发明发现余甘子、千里光的提取物具有协同作用,能够显著抑制真菌的生长。
余甘子系藏族习用药材。为大戟科油柑属植物余甘子Phyllanthusemblica L. 的干燥成熟果实。冬季至次春果实成熟时采收,除去杂质,干燥。根据世界各国传统药物体系中余甘子的临床药用资料,全世界有近20个国家或民族在自己的传统药物体系中使用余甘子,作为一味重要的传统草药,余甘子已被载入《中国药典》。根据现代研究,余甘子的化学成分主要为含单宁成分,具体为柯子酸、柯黎勒酸、鞣云实素、原柯子酸、柯子裂酸、没食子酸等,另外还有Vc、有机酸、黄酮类成分,具有抗微生物感染、抗氧化、抗肿瘤、降血脂和血糖、降压、补益等多种生物活性,且无明显的毒副作用,在临床上已有多种应用。
千里光(Senecio scandens Buch.-Ham.)为菊科千里光属多年生攀缘草本植物,又名九里明、一扫光、千里及等,始载于《本草拾遗》。全草入药,有清热解毒、清肝明目、去腐生肌、杀虫止痒之效,能治风湿、骨痛、皮炎、湿疹、下痢、疮疖和咽喉肿痛等。千里光有广谱抗生素作用,对金黄色葡萄球菌、伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、乙型副伤寒杆菌、志贺、鲍氏、宋内痢疾杆菌均有较强的抑制作用,在较高浓度下,对致病性大肠杆菌及绿脓杆菌亦有抑制作用,对变形、蜡样等杆菌及八叠球菌也有不同程度的抑制作用。在植物学、药理学和毒理学上,千里光均不同于千里光属其它植物,民间将千里光用于治疗皮肤湿疹、疮疖、伤寒、菌痢、大叶性肺炎、目赤肿痛、杀虫、止痒等多种疾病。
本发明从上百种藏药中选取了余甘子、诃子、甘松、千里光、虎耳草、多刺绿绒蒿、渣驯7种藏药两两之间互相进行搭配,验证其组合对疣状毛癣菌、须癣毛癣菌、犬小孢子菌的影响,结果发现,上述藏药之间的两两组合对疣状毛癣菌、须癣毛癣菌均无协同抑制作用,但适量浓度的余甘子、千里光提取物组合对犬小孢子菌存在协同抑制作用,拓宽了犬小孢子菌的抑菌谱。
本发明的目的是这样实现的:
余甘子、千里光组合物,所述组合物为提取物组合物,其中,组合物中,余甘子提取物、千里光提取物的质量比为(1~5.5):(1.5~20)。
进一步地,所述余甘子提取物、千里光提取物的质量比为(1.5~4):(2~12.5)。进一步地,所述余甘子提取物、千里光提取物的质量比为(1.8~3):(2.5~12.1)。
当质量比或者其它值或参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时,这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围,而不论该范围是否单独公开了。例如,当公开了范围“1至5”时,所描述的范围应被解释为包括范围“1至4”、“1至3”、“1至2”、“1至2和4至5”、“1至3和5”等。当数值范围在本文中被描述时,除非另外说明,否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数。
说明书和权利要求书中的近似用语用来修饰数量,表示本发明并不限定于该具体数量,还包括与该数量接近的可接受的而不会导致相关基本功能的改变的修正的部分。在本申请说明书和权利要求书中,范围限定可以组合和/或互换,如果没有另外说明这些范围包括其间所含有的所有子范围。
进一步地,所述余甘子提取物为醇提物;所述醇提物为乙醇提取物。
进一步地,所述醇提物为无水乙醇提取物。
进一步地,所述千里光提取物为水提物。
本发明提取方法可以采用常规植物提取方法,例如可以选择但不限于加热提取、渗滤提取、超声提取、微波提取、浸渍提取、超临界提取、索式提取等等。进一步地,在本发明的具体实施方式中,所述提取方法为索式提取。
在提取以后,还包括其他的常规制备步骤,例如过滤、浓缩、离心、干燥、蒸发等等。
为尽可能提取余甘子、千里光中的生物活性成分,可对余甘子、千里光进行粉碎处理。
进一步地,所述组合物用于对抗犬小孢子菌引起的感染。
本发明提供了一种前述组合物在制备抑制和/或预防真菌产品中的用途;所述真菌选自犬小孢子菌。
犬小孢子菌属于半知菌门-丝孢菌纲-丝孢菌目-丛梗孢科,属亲动物性真菌,本菌在自然界广泛存在,也可在猫、狗、兔等动物毛发上,可通过动物与动物,动物与人的途径传染,导致头皮及光滑皮肤的浅部的炎症反应,严重时可引起脓癣。犬小孢子菌可累及头部、躯干、四肢、指甲,其病程长、治愈难、易复发,其发病率高、复发率亦高,传染性强的犬小孢子菌曾经报道在某些地区引起群体疾病的爆发,也是导致国内外人们浅部真菌病尤其是头癣的主要病源真菌之一,并可在动物与动物、人与人、人与动物间互相传播,造成严重的公共卫生问题。
本发明产品包括但不限于食品、药物、保健品、消毒剂、卫生用品等。
当产品制备成药物时,所述药物的制剂形式包括但不限于涂抹剂、乳剂、膏剂、气雾剂或膜剂,本领域的其他药剂形式也可适用于本发明。
进一步地,所述产品还包括还包含药学上可接受的辅料或辅助性成分。
本发明所述药学上可接受的辅料,是指除活性成分以外包含在剂型中的物质,包括但不仅限于填充剂(稀释剂)、润滑剂(助流剂或抗粘着剂)、分散剂、湿润剂、粘合剂、调节剂、增溶剂、抗氧剂、抑菌剂、乳化剂、崩解剂等。粘合剂包含糖浆、阿拉伯胶、明胶、山梨醇、黄芪胶、纤维素及其衍生物(如微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、乙基纤维素或羟丙甲基纤维素等)、明胶浆、糖浆、淀粉浆或聚乙烯吡咯烷酮等;填充剂包含乳糖、糖粉、糊精、淀粉及其衍生物、纤维素及其衍生物、无机钙盐(如硫酸钙、磷酸钙、磷酸氢钙、沉降碳酸钙等)、山梨醇或甘氨酸等;润滑剂包含微粉硅胶、硬脂酸镁、滑石粉、氢氧化铝、硼酸、氢化植物油、聚乙二醇等;崩解剂包含淀粉及其衍生物(如羧甲基淀粉钠、淀粉乙醇酸钠、预胶化淀粉、改良淀粉、羟丙基淀粉、玉米淀粉等)、聚乙烯吡咯烷酮或微晶纤维素等;湿润剂包含十二烷基硫酸钠、水或醇等;抗氧剂包含亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酸等;抑菌剂包含0.5%苯酚、0.3%甲酚、0.5%三氯叔丁醇等;调节剂包含盐酸、枸橼酸、氢氧化钾(钠)、枸橼酸钠及缓冲剂(包括磷酸二氢钠和磷酸氢二钠)等;乳化剂包含聚山梨酯-80、没酸山梨坦、普流罗尼克F-68,卵磷酯、豆磷脂等;增溶剂包含吐温-80、胆汁、甘油等。
所述药学上可接受的辅助性成分,它具有一定生理活性,但该成分的加入不会改变上述组合物在疾病治疗过程中的主导地位,而仅仅发挥辅助功效,这些辅助功效仅仅是对该成分已知活性的利用,是医药领域惯用的辅助治疗方式。若将上述辅助性成分与本发明药物组合物配合使用,仍然应属于本发明保护的范围。
相比现有技术的缺点和不足,本发明具有以下有益效果:
本发明药物组合物中的千里光、余甘子均为藏药,毒副作用少;本发明通过实验证明,千里光水提物、余甘子醇提物联用能够协同增效,能有效控制免疫抑制犬小孢子菌感染,为抑制犬小孢子菌药物提供了新选择,拓展了千里光、余甘子的抑菌应用范围,具有广阔的市场前景。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
应当明确的是,下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明,均为常规方法,下述实施例中所使用的材料、试剂等,如无特殊说明,均可从商业途径得到。
实施例1
1、培养基
皮肤癣菌(须癣毛癣菌、疣状毛癣菌、犬小孢子菌)培养基使用沙氏固体培养基和RPMI-1640液体培养基(pH调至7.0),置于4℃储存备用。
2、实验菌株的来源
疣状毛癣菌菌株、须癣毛癣菌菌株由四川省畜牧科学研究院兽医兽药研究所分离鉴定保存,犬小孢子菌来源于北京保藏生物科技有限公司(BJMCC3.601)。
取保存菌株(须癣毛癣菌、犬小孢子菌)接种于沙氏固体培养基上28℃培养7天活化,疣状毛癣菌接种于SDA培养基上35℃培养7天活化。
3、菌液的制备
用含有0.1%吐温-20的灭菌生理盐水(每100mL生理盐水中含有0.85g氯化钠)覆盖平板菌落,用无菌刮棒刮取菌落表面,吸取悬液至试管,置振荡器上振荡5min后,静置10min,抽取上层液体至4~5mL液体培养基中,调整菌悬液浓度为(1~3)×106 CFU/mL,备用。将菌悬液用RPMI1640液体培养基稀释50倍,可进行接种进行药敏实验。
4、真菌药敏试验
藏药余甘子入药部位:成熟果实,甘松入药部位:干燥根及根茎、虎耳草入药部位:全草,诃子入药部位:成熟果实,多刺绿绒蒿入药部位:成熟果实,渣驯成品购自药材市场,为从岩石缝中流出后凝结而成的一种岩石类药物,千里光入药部位:全草。
藏药醇提取物按照如下方法分别制备:将藏药放至高速粉碎机中粉粹,称取100~150g藏药粉末,用滤纸包好后,放入索氏抽提器中,加入无水乙醇索氏提取5~6h,回收醇提取物,在水浴锅上浓缩并定容,即得乙醇提取物备用。
千里光水提取物制备:将藏药至高速粉碎机中粉粹,将称取100~150g粉末,用滤纸包好后,放入索氏抽提器中,加入中性去离子水索氏提取6~8h,回收水提取物,在水浴锅上浓缩并定容,即得水提取物。
药敏板制备:采用M38-A2方案的棋盘式微量液基稀释法制备96孔药敏板,单药药敏试验区,递倍稀释,最后一孔为对照组不加药液。
组合物药物协同实验:
对疣状毛癣菌的协同实验:第一个提取物余甘子在96孔板上按稀释浓度从上到下纵向排布,每孔1μL,第二个其他植物提取物按稀释浓度从左到右横向排布,每孔1μL,记录每一个孔的组合物中各提取物的浓度,同时设单独加入梯度稀释的各植物提取物每孔2μL的组,以及不加任何药物的空白对照组。
对须癣毛癣菌的协同实验:第一个提取物余甘子在96孔板上按稀释浓度从上到下纵向排布,每孔1μL,第二个其他植物提取物按稀释浓度从左到右横向排布,每孔1μL,记录每一个孔的组合物中各提取物的浓度,同时设单独加入梯度稀释的各植物提取物每孔2μL的组,以及不加任何药物的空白对照组。
对犬小孢子菌的协同实验:第一个提取物余甘子在96孔板上按稀释浓度从上到下纵向排布,每孔1μL,第二个其他藏药提取物按稀释浓度从左到右横向排布,每孔1μL,记录每一个孔的组合物中各提取物的浓度,同时设单独加入梯度稀释的各藏药提取物每孔2μL的组,以及不加任何药物的空白对照组。
5、接种和培养:
①向96孔药敏板每孔各加入100μL 稀释好的于终浓度相应倍数的菌悬液(空白对照孔除外)。
②向试管中加入1mL稀释好的于终浓度相应倍数的菌悬液(空白对照孔除外)。
须癣毛癣菌、犬小孢子菌于28℃恒温箱中培养5~7天,疣状毛癣菌于37℃恒温箱中培养5~7天。每天观察生长情况,以阳性对照孔生长良好为准。
6、最低抑菌浓度(MIC值)的判定
按照CLSI M27-A3、CLSI M38-A2制定的标准进行结果判读。只有当生长对照生长良好且质控菌株最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentrations,MIC)值在规定范围内时,方认为试验成功,可进行结果判读。所有试验均进行2次。同一菌株MIC值在2次试验不超过2个稀释度时认为相同。MIC判读标准均定为与生长对照相比生长明显抑制(80%)的最低药物浓度。
7、联合用药效果评价
联合用药效果评价方法参考文献“不同分数抑菌浓度解读标准评估抗真菌药物体外联合效应比较(吴伟伟,2016)”中的A标准:
采用分数抑菌浓度(fractional inhibitory concentration index,FICI)来判断两个药物A和B之间是协同、相加还是拮抗作用,即联合用药时药物的MIC值分别除以单独用药时药物MIC值的商之和,表示为:FICI =(MIC A联合/MIC A单独) +(MIC B联合/MIC B单独)。
如果FICI≤0.5为协同作用,0.5<FICI≤4为无相互作用,FICI>4为拮抗作用。
该方法为临床及实验室标准化协会(CLSI)公认有效方法,使用范围广而普遍,能够在短时间内快速实现对药物相互作用效果的检测,并可以通过对实验数据进一步分析得出可靠结论,结果稳定,可重复性高。
通过以上定义检测组合物的相互作用,结果如表1、表2-1、表2-2、表2-3所示。
表1 单一药物的最小抑菌浓度(MIC)
表2-1植物提取物组合后对疣状毛癣菌的FICI
表2-2植物提取物组合后对须癣毛癣菌的FICI
表2-3植物提取物组合后对犬小孢子菌的FICI
注:表2中,“-”表示与生长对照相比,菌落减少数是对照菌落数的80%以上,则生长明显抑制,“+”表示生长对照相比,菌落减少数是对照菌落数的80%以下,生长无明显抑制,“/”是指无FICI数值,因真菌生长后,就不再计算FICI数值。
表2-1,2-2中,千里光水提物、余甘子醇提物两者相互作用后对疣状毛癣菌、须癣毛癣菌均没有协同抑制作用。
表2-3中,①余甘子醇提物终浓度为3.6535mg/mL、千里光水提物终浓度为2.0016mg/mL(余甘子醇提物:千里光水提物的质量比为3.6535: 2.0016),②余甘子醇提物终浓度为3.6535mg/mL、千里光水提物终浓度为4.0032mg/mL(余甘子醇提物:千里光水提物的质量比为3.6535: 4.0032),③余甘子醇提物终浓度为2.7401mg/mL、千里光水提物终浓度为2.0016mg/mL(余甘子醇提物:千里光水提物的质量比为2.7401: 2.0016),④余甘子醇提物终浓度为2.7401mg/mL、千里光水提物终浓度为4.0032mg/mL(余甘子醇提物:千里光水提物的质量比为2.7401: 4.0032),⑤余甘子醇提物终浓度为2.7401mg/mL、千里光水提物终浓度为8.0064mg/mL(余甘子醇提物:千里光水提物的质量比为2.7401: 8.0064),⑥余甘子醇提物终浓度为1.8267mg/mL、千里光水提物终浓度为12.0096mg/mL(余甘子醇提物:千里光水提物的质量比为1.8267: 12.0096),这6组药物组合中,余甘子醇提物、千里光水提物存在协同抗犬小孢子菌作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (2)
1.一种用于对抗犬小孢子菌引起的感染的余甘子、千里光组合物,其特征在于,所述组合物为提取物组合物,其中,组合物中,余甘子提取物、千里光提取物的质量比为3.6535:2.0016、3.6535: 4.0032、2.7401: 2.0016、2.7401: 4.0032、2.7401: 8.0064或1.8267:12.0096;
所述余甘子提取物为醇提物;所述醇提物为乙醇提取物;所述千里光提取物为水提物。
2.权利要求1所述组合物在制备抑制犬小孢子菌药物中的用途。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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