CN115552235A - 复合体中包含的药物的纯度评价方法和复合体的制造方法 - Google Patents

复合体中包含的药物的纯度评价方法和复合体的制造方法 Download PDF

Info

Publication number
CN115552235A
CN115552235A CN202180032055.9A CN202180032055A CN115552235A CN 115552235 A CN115552235 A CN 115552235A CN 202180032055 A CN202180032055 A CN 202180032055A CN 115552235 A CN115552235 A CN 115552235A
Authority
CN
China
Prior art keywords
purity
complex
methanol
drug
general formula
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202180032055.9A
Other languages
English (en)
Inventor
冈野翼
氏家识史
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Toray Industries Inc
Biodynamic Research Foundation
Original Assignee
Toray Industries Inc
Biodynamic Research Foundation
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Toray Industries Inc, Biodynamic Research Foundation filed Critical Toray Industries Inc
Publication of CN115552235A publication Critical patent/CN115552235A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F220/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and only one being terminated by only one carboxyl radical or a salt, anhydride ester, amide, imide or nitrile thereof
    • C08F220/02—Monocarboxylic acids having less than ten carbon atoms; Derivatives thereof
    • C08F220/52—Amides or imides
    • C08F220/54—Amides, e.g. N,N-dimethylacrylamide or N-isopropylacrylamide
    • C08F220/58—Amides, e.g. N,N-dimethylacrylamide or N-isopropylacrylamide containing oxygen in addition to the carbonamido oxygen, e.g. N-methylolacrylamide, N-(meth)acryloylmorpholine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F20/00—Homopolymers and copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and only one being terminated by only one carboxyl radical or a salt, anhydride, ester, amide, imide or nitrile thereof
    • C08F20/02—Monocarboxylic acids having less than ten carbon atoms, Derivatives thereof
    • C08F20/52—Amides or imides
    • C08F20/54—Amides, e.g. N,N-dimethylacrylamide or N-isopropylacrylamide
    • C08F20/56—Acrylamide; Methacrylamide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/58—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. poly[meth]acrylate, polyacrylamide, polystyrene, polyvinylpyrrolidone, polyvinylalcohol or polystyrene sulfonic acid resin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
    • C08F8/00—Chemical modification by after-treatment
    • C08F8/30—Introducing nitrogen atoms or nitrogen-containing groups
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
    • G01N2030/027—Liquid chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G01N2030/067—Preparation by reaction, e.g. derivatising the sample

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

公开了能够评价复合体中包含的活性药物主体的纯度的方法和活性药物主体的纯度达到95.0%以上的复合体的制造方法。纯度评价方法具有：反应步骤，其中，在极性溶剂中，使复合体与羟基胺等含氮亲核剂在质子酸存在下反应；和，评价步骤，其中，通过高效液相色谱评价该反应步骤中得到的反应混合物的纯度。复合体的制造方法具有：反应步骤，其中，在极性溶剂中，使蒽环系药物与N‑(2‑羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物在质子酸存在下在10℃以下反应，得到复合体。

Description

复合体中包含的药物的纯度评价方法和复合体的制造方法
技术领域
本发明涉及复合体中包含的药物的纯度评价方法和复合体的制造方法。
背景技术
作为蒽环系药物之一的吡柔比星(以下称为THP)和作为生物体亲和性高分子化合物之一的N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物通过腙键结合得到的复合体(以下称为P-THP)是作为抗肿瘤剂或抗癌剂有用的化合物(专利文献1和2)。
作为P-THP的制造方法，公开了例如使THP与N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物在乙酸存在下反应的方法(非专利文献1)。
此外，作为蒽环系药物之一的多柔比星(以下称为DOX)和N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物通过寡肽结合得到的复合体的定量方法，公开了在该复合体的混合物中添加盐酸进行水解的方法(非专利文献2)。
现有技术文献
专利文献
专利文献1：日本专利第5904602号说明书
专利文献2：国际公开第2017/191843号
非专利文献
非专利文献1：Etrych等人，European Journal of Pharmaceutical Sciences 、2017年、第106卷、p.10-19
非专利文献2：Fraier等人，Journal of Pharmaceuticaland BiomedicalAnalysis 、1995年、第13卷、p.625-633。
发明内容
发明要解决的课题
一般而言，医药品中，以品质确认为目的严格实施纯度评价。例如，日本药典所述的DOX盐酸盐的纯度规定通过定量法示出98.0~108.0%的效价。另一方面，对于以P-THP为首的复合体中，活性药物主体(API；active pharmaceutical ingredient)与高分子化合物(例:聚合物)等结合，因此使用复合体直接进行活性药物主体的纯度评价在技术上是困难的。因此，为了进行活性药物主体的纯度评价，需要从复合体中游离活性药物主体。然而，例如非专利文献2所述的方法中，如果从P-THP中游离THP，则在THP游离的同时THP分解为DOX、其他的分解物，因此现状是难以严格·正确地评价复合体中包含的活性药物主体的纯度(以下，复合体中包含的活性药物主体的纯度，即与高分子化合物结合的活性药物主体的纯度也称为“结合药物纯度”)。此外，针对通过非专利文献1所述的方法制造的P-THP，通过后述本发明的纯度评价方法评价结合药物纯度的结果是，新发现该P-THP不满足日本药典所述的THP纯度标准(95.0%以上)，通过以往方法制造的P-THP在结合药物纯度方面存在问题。
因此，本发明的目的在于，提供能够评价复合体中包含的活性药物主体的纯度的方法。进一步，本发明的目的在于，提供通过本发明的纯度评价方法评价的药物纯度达到95.0%以上的含有蒽环系药物的复合体的制造方法。
用于解决课题的手段
本发明人等为了解决上述课题而反复深入研究的结果发现，使具有腙键的复合体在极性溶剂中与规定的含氮亲核剂在质子酸存在下反应，将蒽环系药物转化为稳定的药物等价物，由此能够进行结合药物纯度评价，进一步使蒽环系药物在极性溶剂中与N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物在质子酸存在下在10℃以下反应，由此能够制造高纯度的复合体，从而完成了本发明。
即，本发明提供以下。
[1]
通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐中包含的药物的纯度评价方法，其具有：
反应步骤，其中，在极性溶剂中，使通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐与选自羟基胺、O-烷基羟基胺和羧酸酰肼中的至少1种含氮亲核剂在质子酸存在下反应；和
评价步骤，其中，通过高效液相色谱评价该反应步骤中得到的反应混合物的纯度，
[化1]
Figure 579128DEST_PATH_IMAGE001
[式中，A表示氢原子或(R)-四氢-2H-吡喃-2-基，b、c、d和e各自独立地表示正整数，用波浪线记载的键表示能够采取E体、Z体中任一构型]。
[2]
根据[1]所述的方法，其中，上述极性溶剂为醇系溶剂，
上述含氮亲核剂为选自羟基胺和羧酸酰肼中的至少1种，
上述质子酸为羧酸。
[3]
根据[1]或[2]所述的方法，其中，上述极性溶剂为甲醇，
上述含氮亲核剂为选自羟基胺、乙酰肼、丙酰肼、丁酰肼和3-甲基丁酰肼中的至少1种，
上述质子酸为乙酸。
[4]
根据[1]~[3]中任一项所述的方法，其中，上述通式(I)中，b为1~10的整数，c为30~500的整数，d为1~50的整数，e为1~50的整数。
[5]
通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐，其通过[1]~[4]中任一项所述的方法评价的情况下，通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐中包含的药物的纯度为95.0%以上，
[化2]
Figure 496269DEST_PATH_IMAGE002
[式中，A表示氢原子或(R)-四氢-2H-吡喃-2-基，b、c、d和e各自独立地表示正整数，用波浪线记载的键表示能够采取E体、Z体中任一构型]。
[6]
根据[5]所述的复合体或其药理学上可接受的盐，其中，A为(R)-四氢-2H-吡喃-2-基，
b为5。
[7]
通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐的制造方法，其具有：
反应步骤，其中，在极性溶剂中，使通式(II)所示的蒽环系药物与通式(III)所示的N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物在质子酸存在下在10℃以下反应，得到通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐，
[化3]
Figure 213689DEST_PATH_IMAGE003
[化4]
Figure 795849DEST_PATH_IMAGE004
[化5]
Figure 610221DEST_PATH_IMAGE005
[式(I)和式(II)中，A表示氢原子或(R)-四氢-2H-吡喃-2-基，式(I)和式(III)中，b、c、d、e和f各自独立地表示正整数，式(I)中，用波浪线记载的键表示能够采取E体、Z体中任一构型]。
[8]
根据[7]所述的制造方法，其中，上述极性溶剂为甲醇，
上述质子酸为乙酸，
上述反应步骤中的反应温度为-30℃~10℃。
[9]
根据[7]或[8]所述的方法，其中，上述通式(I)和上述通式(III)中，b为1~10的整数，c为30~500的整数，d为1~50的整数，e为1~50的整数，f为d和e的和。
具体实施方式
1.复合体中包含的药物的纯度评价方法
本发明所涉及的纯度评价方法具有：反应步骤，其中，在极性溶剂中，使通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐与选自羟基胺、O-烷基羟基胺和羧酸酰肼中的含氮亲核剂在质子酸存在下反应；和，评价步骤，其中，通过高效液相色谱评价该反应步骤中得到的反应混合物的纯度。
[化6]
Figure 370367DEST_PATH_IMAGE006
[式中，A表示氢原子或(R)-四氢-2H-吡喃-2-基，b、c、d和e各自独立地表示正整数，用波浪线记载的键表示能够采取E体、Z体中任一构型]。
应予说明，本说明书和权利要求书中，某一化学式中包含波浪线的情况下，该波浪线表示能够采取E体和Z体中任一构型，该化合物可以是E体单独、Z体单独、E体与Z体的混合物中任一者。
从利用运输设备的运输效率的观点出发，A优选为(R)-四氢-2H-吡喃-2-基。
此外，b、c、d和e只要是正整数则没有特别限制，优选b为1~10的整数(例如5)，c为30~500、特别是50~500的整数，d为1~50的整数，e为1~50的整数。
在此，“复合体”是指通式(II)所示的蒽环系药物与通式(III)所示的N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物通过腙键结合得到的含有蒽环系药物的复合体，通式(II)所示的蒽环系药物是指复合体的有效成分。此外，通式(II)所示的蒽环系药物是指THP或DOX，THP与通式(III)所示的N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物通过腙键结合得到的药物是指P-THP，DOX与通式(III)所示的N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物通过腙键结合得到的药物是指P-DOX。
[化7]
Figure 637400DEST_PATH_IMAGE007
[式中，A表示氢原子或(R)-四氢-2H-吡喃-2-基]。
[化8]
Figure 836300DEST_PATH_IMAGE008
[式中，b、c和f各自独立地表示正整数]。
本说明书中，“通式(I)所示的复合体(以下称为复合体(I))或其药理学上可接受的盐中包含的药物”是指上述复合体或其药理学上可接受的盐中包含的蒽环系药物。
本说明书中，“结合药物纯度”是指复合体(I)中包含的药物的推定纯度，是指基于按照以下的方法得到的高效液相色谱(以下称为HPLC)的色谱图，以去除空白峰的全峰的面积记作100%的情况下测定对象峰的面积百分数。应予说明，该空白峰是指在以下的HPLC的测定条件下，测定甲醇的情况下检测的峰。此外，该测定对象峰根据蒽环系药物的种类、含氮亲核剂的种类而不同，是指以分子量为根据的蒽环系药物的等价物的峰，在以下的分析条件下异构体的峰分离的情况下，将各异构体的峰的面积百分数的和记作测定对象峰的面积百分数。应予说明，以下的说明例示出使用羟基胺作为含氮亲核剂、甲醇作为极性溶剂、乙酸作为质子酸的情况，但添加量等各条件也可以根据所使用的试剂而适当变更。
(1)试样制备
在复合体(10mg)的甲醇(160μL)溶液中，在0℃下添加50重量%羟基胺水溶液(32μL)和乙酸(27μL)，在0℃下进行25小时搅拌。在所得反应混合物(50μL)中，添加甲醇(450μL)，制成测定试样。
(2)HPLC
针对上述制备的测定试样，使用HPLC，在以下的测定条件下进行分析。
检测器：光电二极管阵列检测器(测定波长：488nm)
柱：Scherzo SM-C18(インタクト公司制)
柱尺寸：150×4.6mm(3μm)
柱温度：30℃
流动相：A液 5mmol/L甲酸铵试液/甲醇混合液(95:5)
B液 甲醇/水/甲酸混合液(90:10:0.1)
展开条件：A/B=75/25(0~3分钟)
A/B=75/25~37/63(3~4分钟；线性梯度)
A/B=37/63(4~24分钟)
A/B=37/63~20/80(24~25分钟；线性梯度)
A/B=20/80(25~35分钟)
A/B=20/80~0/100(35~39分钟；线性梯度)
A/B=0/100(39~54分钟)
A/B=0/100~75/25(54~54.1分钟；线性梯度)
A/B=75/25(54.1~59.5分钟)
流速：1.0mL/分钟
注入量：20μL
样品冷却器温度：4℃。
作为本发明所涉及的纯度评价方法中的O-烷基羟基胺，烷基的碳原子数优选为1~4。作为优选的例子，可以举出O-甲基羟基胺、O-乙基羟基胺或O-丙基羟基胺，从抑制副反应的观点出发，优选为O-甲基羟基胺或O-乙基羟基胺，更优选为O-甲基羟基胺。本发明中使用的O-烷基羟基胺可以是单一的化合物，也可以组合使用2种以上的化合物。
此外，作为本发明所涉及的纯度评价方法中的羧酸酰肼，可以举出例如甲酰肼、乙酰肼、丙酰肼、丁酰肼、3-甲基丁酰肼、2,2-二甲基丙酰肼、环己烷甲酰肼或金刚烷-1-甲酰肼，从抑制副反应的观点出发，优选为选自乙酰肼、丙酰肼、丁酰肼和3-甲基丁酰肼中的至少1种，更优选为乙酰肼。本发明中使用的羧酸酰肼可以是单一的化合物，也可以组合使用2种以上的化合物。
作为含氮亲核剂，优选为选自羟基胺和羧酸酰肼中的至少1种，更优选为选自羟基胺、乙酰肼、丙酰肼、丁酰肼和3-甲基丁酰肼中的至少1种，进一步优选为选自羟基胺和乙酰肼中的至少1种。
使用上述的含氮亲核剂从复合体游离药物的情况下，药物转化为对应的药物等价物而游离。游离的药物等价物在反应条件下稳定性优异，因此该方法适合作为结合药物纯度的评价方法。
在此，“药物等价物”是指下述的通式(IV)或通式(V)所示的蒽环系药物等价物。
[化9]
Figure 692130DEST_PATH_IMAGE009
[式(IV)和式(V)中，A表示氢原子或(R)-四氢-2H-吡喃-2-基，G表示氢原子或烷基，用波浪线记载的键表示能够采取E体、Z体中任一构型]。
通式(IV)或通式(V)中，G只要是烷基，则其碳原子数没有特别限制，可以为直链、支链、环状中任一者。作为上述烷基，可以举出例如碳原子数1~10的烷基(例如甲基、乙基、丙基、金刚烷基)、碳原子数1~4的烷基(例如甲基、乙基、丙基)。
优选的实施方式中，通式(IV)或通式(V)所示的蒽环系药物等价物可以为下述式中任一者所示。
[化10]
Figure 685494DEST_PATH_IMAGE010
此外，作为本发明所涉及的纯度评价方法中的质子酸，可以举出例如盐酸、硫酸、磷酸或者氢溴酸等无机酸、甲酸、乙酸、丙酸、丁酸、戊酸、己酸或者苯甲酸等羧酸、甲磺酸或者对甲苯磺酸等磺酸或抗坏血酸，从酸性度的观点出发，优选为羧酸，更优选为乙酸。应予说明，所使用的质子酸可以是单一的化合物，也可以组合使用2种以上的化合物。
此外，作为含氮亲核剂的使用量，从得到充分的反应转化率、且抑制副反应的观点出发，相对于复合体，优选为0.1~100倍重量、更优选为0.5~50倍重量。此外，作为质子酸的使用量，从得到充分的反应转化率、且抑制副反应的观点出发，相对于复合体，优选为0.1~100倍重量、更优选为0.5~50倍重量。
此外，作为本发明所涉及的药物纯度评价方法中的极性溶剂，可以举出例如四氢呋喃或者二甲氧基乙烷等醚系溶剂、乙腈或者丙腈等腈系溶剂、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺或者N-甲基吡咯烷酮等酰胺系溶剂、二甲基亚砜等亚砜系溶剂、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮等脲系溶剂、甲醇、乙醇或者2-丙醇等醇系溶剂或它们的混合溶剂，从溶解复合体的观点出发，优选为甲醇、乙醇或者2-丙醇等醇系溶剂，更优选为甲醇。此外，作为该溶剂的使用量，从抑制副反应的观点出发，相对于复合体，优选为3~100倍重量，更优选为5~20倍重量。
本发明所涉及的纯度评价方法中，含氮亲核剂的优选的方式与质子酸的优选的方式与极性溶剂的优选的方式可以任意组合。作为其组合，可以举出例如羟基胺与羧酸与醇系溶剂、O-烷基羟基胺与羧酸与醇系溶剂或羧酸酰肼与羧酸与醇系溶剂，适合为羟基胺与乙酸与甲醇、乙酰肼与乙酸与甲醇、丙酰肼与乙酸与甲醇、丁酰肼与乙酸与甲醇或3-甲基丁酰肼与乙酸与甲醇。
此外，含氮亲核剂、质子酸和极性溶剂可以被放射性同位素标记，也可以是氘转化体。
此外，本发明所涉及的纯度评价方法中的反应步骤中的反应温度从抑制副反应的观点出发，优选为-10℃~30℃，更优选为-5℃~5℃。此外，反应时间可以根据反应温度等条件而适当选择，从抑制副反应的观点出发，优选为1~40小时，更优选为3~30小时。
2.复合体(I)或其药理学上可接受的盐
本发明所涉及的通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐在通过上述的纯度评价方法评价的情况下，复合体(I)或其药理学上可接受的盐中包含的药物的纯度为95.0%以上。
[化11]
Figure 377506DEST_PATH_IMAGE011
[式中，A表示氢原子或(R)-四氢-2H-吡喃-2-基，b、c、d和e各自独立地表示正整数，用波浪线记载的键表示能够采取E体、Z体中任一构型]。
从利用运输设备的运输效率的观点出发，A优选为(R)-四氢-2H-吡喃-2-基。
此外，b、c、d和e只要是正整数则没有特别限制，优选b为1~10的整数(例如5)，c为30~500、特别是50~500的整数，d为1~50的整数，e为1~50的整数。
此外，优选的实施方式中，通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐可以为以下的通式(I’)所示。
[化12]
Figure 114518DEST_PATH_IMAGE012
[式中，c、d和e各自独立地表示正整数，用波浪线记载的键表示能够采取E体、Z体中任一构型]。
通式(I’)中，c、d和e只要是正整数则没有特别限制，优选c为30~500、特别是50~500的整数，d为1~50的整数，e为1~50的整数。
此外，作为上述的通式(I)所示的复合体的药理学上可接受的盐，可以举出例如盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐或者氢溴酸盐等无机酸盐或草酸盐、丙二酸盐、柠檬酸盐、富马酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、丁二酸盐、酒石酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、马来酸盐、葡糖酸盐、苯甲酸盐、水杨酸盐、昔萘酸盐、帕莫酸盐、抗坏血酸盐、己二酸盐、甲磺酸盐、对甲苯磺酸盐或者肉桂酸盐等有机酸盐。进一步，它们的盐可以形成水合物、溶剂化物或多晶型。
此外，复合体(I)或其药理学上可接受的盐可以被放射性同位素标记，也可以为氘转化体。
复合体(I)或其药理学上可接受的盐也包括它们的水合物、溶剂化物、多晶型、标记体以及它们的混合物。
本发明所涉及的复合体(I)或其药理学上可接受的盐的结合药物纯度从按照日本药典所述的THP纯度标准的观点出发，在通过与上述复合体中包含的药物的纯度评价方法中记载的相同的的方法评价的情况下，为95.0%以上、优选为96.0%以上、更优选为97.0%以上。如果还考虑到按照日本药典所述的DOX盐酸盐的纯度标准的观点，则优选为98.0%以上。结合药物纯度越接近100%则越优选，通过后述本发明的制造方法，得到结合药物纯度至99.5%的物质。
一般而言，医药品中，以品质确认为目的实施纯度评价。例如，日本药典中规定THP的纯度通过定量法示出95.0%以上的效价，高纯度医药品在品质上是优选的。另一方面，使用复合体作为医药品的情况下，从复合体游离的蒽环系药物表现出药效，因此复合体中包含的药物的纯度、即结合药物纯度相当于一般的医药品的纯度，结合药物纯度的评价在医药品的品质管理方面非常重要。因此，该结合药物纯度在医药品的品质管理方面优选为高，使用THP作为蒽环系药物的情况下，需要至少满足日本药典所述的THP的纯度标准，如果还考虑使用DOX盐酸盐作为蒽环系药物的情况，则优选满足日本药典所述的DOX盐酸盐的纯度标准。
复合体(I)或其药理学上可接受的盐的结合药物负载量从药物运输的观点出发，优选为3~20wt%、更优选为4~19wt%、进一步优选为7~17wt%。另一方面，从保存稳定性的观点出发，复合体(I)或其药理学上可接受的盐的结合药物负载量优选为4~20wt%、更优选为10~19wt%、进一步优选为15~19wt%。
本说明书中，“结合药物负载量”是指复合体(I)或其药理学上可接受的盐中包含的药物的推定负载量，可以按照以复合体(I)或其药理学上可接受的盐中包含的药物的纯度评价方法为准的以下的方法，通过测定对象的定量分析算出。基于按照以下的方法得到的HPLC的色谱图，使用测定对象峰的HPLC面积值、和由对应的测定对象标准品制作的标准曲线，通过定量分析算出测定对象峰的摩尔数，由所得摩尔数算出对应的活性药物主体的重量后，通过以下的计算式算出结合药物负载量。
结合药物负载量(wt%)=活性药物主体的重量(mg)/复合体的重量(mg)×100
此外，该测定对象峰是指以分子量为根据的蒽环系药物的等价物的峰，在上述的分析条件下异构体的峰分离的情况下，将各异构体的峰的面积百分数的和记作测定对象峰的HPLC面积值。
(1)试样制备
在2mL容量瓶中，正确称量复合体(20±0.4mg)，添加甲醇(1mL)溶解后，添加50重量%羟基胺水溶液(320μL)和乙酸(270μL)，使用甲醇正确定容为2mL。将所得溶液在0℃下进行25小时搅拌，制成测定试样。
(2)HPLC
针对上述制备的测定试样，使用HPLC，在以下的测定条件下进行分析。
检测器：光电二极管阵列检测器(测定波长：488nm)
柱：Scherzo SM-C18(インタクト公司制)
柱尺寸：150×4.6mm(3μm)
柱温度：30℃
流动相：A液 5mmol/L甲酸铵试液/甲醇混合液(95:5)
B液 甲醇/水/甲酸混合液(90:10:0.1)
展开条件：A/B=75/25(0~3分钟)
A/B=75/25~37/63(3~4分钟；线性梯度)
A/B=37/63(4~24分钟)
A/B=37/63~20/80(24~25分钟；线性梯度)
A/B=20/80(25~35分钟)
A/B=20/80~0/100(35~39分钟；线性梯度)
A/B=0/100(39~54分钟)
A/B=0/100~75/25(54~54.1分钟；线性梯度)
A/B=75/25(54.1~59.5分钟)
流速：1.0mL/分钟
注入量：10μL
样品冷却器温度：4℃。
此外，作为复合体(I)或其药理学上可接受的盐的重均分子量，从安全性的观点出发，优选为25000~85000、更优选为27000~65000、进一步优选为30000~50000。
本说明书中，“重均分子量”是指按照以下的方法算出的分子量。
(1)试样制备
在复合体(5mg)中添加甲醇(500μL)，制成测定试样。
(2)重均分子量
针对上述制备的各测定试样，使用HPLC和MALS，在以下的测定条件下分析，使用分析软件[ASTRA Ver.7.3.2.1764-bit(Wyatt technology)]，算出重均分子量(Mw)(折射率增量：dn/dc=0.175)。
HPLC：LC-40(岛津制作所公司制)
检测器：光电二极管阵列检测器(测定波长:488nm)和差示折射率计
柱：TSKgel α-M(东曹公司制)、和
TSKgel α-2500(东曹公司制)依次连接2根
柱尺寸：TSKgel α-M(300×7.8mm(7μm))
TSKgel α-2500(300×7.8mm(7μm))
柱温度：30℃
流动相：甲醇:0.3mol/L乙酸钠试液(pH6.5)=80:20
流速：0.8mL/分钟
注入量：20μL
样品冷却器温度：4℃
注射器洗涤液：甲醇:水=80:20
MALS：DAWN8(Wyatt technology)
光散射仪器：
校正常数：5.2929/100000[1/Vcm]
RI仪器：
折射常数：1.338。
复合体(I)或其药理学上可接受的盐中，上述结合药物纯度的优选的方式与上述结合药物负载量的优选的方式与上述重均分子量的优选的方式可以任意组合。作为其组合，可以举出例如结合药物纯度为95.0%以上、结合药物负载量为3~20wt%、重均分子量为25000~85000的复合体(I)或其药理学上可接受的盐。
一般而言，医药品为了设定保存条件和有效期间，需要评价其稳定性。作为医药品所涉及的代表性的稳定性试验，有严苛试验、长期保存试验、加速试验等，例如原药的严苛试验用于可能由原药生成的分解产物的鉴定、分析方法的适合性确认、原药的稳定性的预测等，60℃气密条件下的4周的严苛试验用于与25℃气密条件下保存3年对应的开发初期的稳定性预测(吉冈澄江、医药品的稳定性、南江堂、1995年、p.142)。
通过上述的纯度评价方法评价的情况下，结合药物纯度为95.0%以上的复合体(I)或其药理学上可接受的盐可以通过以下的制造方法得到。
3.复合体(I)或其药理学上可接受的盐的制造方法
本发明所涉及的通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐的制造方法具有：反应步骤，其中，在极性溶剂中，使通式(II)所示的蒽环系药物与通式(III)所示的N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物在质子酸存在下在10℃以下反应，得到通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐。
[化13]
Figure 637903DEST_PATH_IMAGE013
[化14]
Figure 254698DEST_PATH_IMAGE014
[化15]
Figure 496324DEST_PATH_IMAGE015
[式(I)和式(II)中，A表示氢原子或(R)-四氢-2H-吡喃-2-基，式(I)和式(III)中，b、c、d、e和f各自独立地表示正整数，用波浪线记载的键表示能够采取E体、Z体中任一构型]。
从利用运输设备的运输效率的观点出发，A优选为(R)-四氢-2H-吡喃-2-基。
此外，b、c、d和e只要是正整数则没有特别限制，优选b为1~10的整数(例如5)，c为30~500、特别是50~500的整数，d为1~50的整数，e为1~50的整数。此外，f为d和e的和。
本发明所涉及的复合体(I)或其药理学上可接受的盐的制造方法可以用作特别是在通过上述的纯度评价方法评价的情况下，结合药物纯度为95.0%以上的复合体(I)或其药理学上可接受的盐的制造方法。
与一般的低分子有机化合物不同，复合体(I)或其药理学上可接受的盐的纯化中，未反应的蒽环系药物、腙键断裂的蒽环系药物之类的低分子化合物可以通过柱色谱、薄层色谱、重结晶或再沉淀之类的纯化操作去除，但无法提高结合药物纯度。即，该复合体在除了复合体上的蒽环系药物的腙键之外的部分结构分解的情况下，只要腙键不断裂，则也无法从复合体分离其药物的分解物，因此结合药物纯度不提高。因此，制造该复合体时的反应步骤在品质管理方面是非常重要的，如何抑制反应步骤中的蒽环系药物的分解决定结合药物纯度。
复合体(I)或其药理学上可接受的盐的制造方法中，作为反应步骤中使用的上述N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物的使用量，可以与目标结合药物负载量一起适当选择，从药物运输效率的观点出发，相对于上述蒽环系药物，优选为1~30倍重量、更优选为3~25倍重量、进一步优选为3~15倍重量。
复合体(I)或其药理学上可接受的盐的制造方法中，作为反应步骤中使用的质子酸，可以举出例如盐酸、硫酸、磷酸或者氢溴酸等无机酸或草酸、丙二酸、柠檬酸、富马酸、乳酸、苹果酸、丁二酸、酒石酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸、葡糖酸、苯甲酸、水杨酸、昔萘酸、帕莫酸、抗坏血酸、己二酸、甲磺酸、对甲苯磺酸或者肉桂酸等有机酸，从酸性度的观点出发，优选为有机酸，更优选为乙酸。应予说明，所使用的质子酸可以是单一的化合物，也可以组合使用2种以上的化合物。
复合体(I)或其药理学上可接受的盐的制造方法中，作为反应步骤中使用的质子酸的使用量，从得到充分的反应转化率的观点出发，相对于上述蒽环系药物，优选为10~300摩尔当量、更优选为20~200摩尔当量。应予说明，在此，“摩尔当量”是指相对于蒽环系药物1摩尔所使用的质子酸的摩尔数。
复合体(I)或其药理学上可接受的盐的制造方法中，作为反应步骤中使用的极性溶剂，可以举出例如四氢呋喃或者二甲氧基乙烷等醚系溶剂、乙腈或者丙腈等腈系溶剂、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺或者N-甲基吡咯烷酮等酰胺系溶剂、二甲基亚砜等亚砜系溶剂、1,3-二甲基-2-咪唑烷酮等脲系溶剂、甲醇、乙醇或者2-丙醇等醇系溶剂或它们的混合溶剂，从溶解复合体的观点出发，优选为甲醇、乙醇或者2-丙醇等醇系溶剂，更优选为甲醇。此外，作为该溶剂的使用量，从能够容易地实施搅拌、且提高单位体积的制造效率的观点出发，相对于上述蒽环系药物，优选为10~200倍重量，更优选为20~70倍重量。
复合体(I)或其药理学上可接受的盐的制造方法中，反应步骤中的反应温度从抑制副反应的观点出发，为10℃以下，从提高单位时间的生产效率的观点出发，优选为-30℃~10℃、特别是-30℃~5℃。此外，反应时间可以根据反应温度等条件适当选择，从提高单位时间的制造效率的观点出发，优选为1~300小时，更优选为10~150小时。
复合体(I)或其药理学上可接受的盐的制造方法中，极性溶剂的优选的方式与质子酸的优选的方式与反应温度的优选的方式可以任意组合。作为其组合，可以举出例如醇系溶剂与有机酸与10℃以下，适合为甲醇与乙酸与-30℃~10℃、特别是-30℃~5℃。
复合体(I)或其药理学上可接受的盐的制造方法中，反应步骤中使用的极性溶剂、通式(II)所示的蒽环系药物、通式(III)所示的N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物和质子酸的添加顺序没有特别限定，从得到充分的反应转化率、且抑制副反应的观点出发，优选在极性溶剂中添加通式(III)所示的N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物溶解后，接着，添加通式(II)所示的蒽环系药物，接着，添加质子酸。
通式(II)所示的蒽环系药物可以直接使用市售品。例如，THP(A为(R)-四氢-2H-吡喃-2-基)可以由日本MicroBiopharm公司购买(定量法：95.0%以上)。此外，DOX盐酸盐(A为氢原子)可以由MedKoo Biosciences公司购买(HPLC纯度：99.0%以上)。此外，通式(III)所示的N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物可以直接使用市售品，可以由例如捷克共和国科学学术高分子化学研究所或Chemical Soft公司购买。
通式(III)所示的N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物关于酰肼基的位置没有特别限制，可以存在规则性，也可以是无规的，可以例如具有酰肼基的单体单元连续2个以上结合。上述N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物的末端结构可以认为形成饱和或者不饱和末端结构(基于脱氢的歧化末端)或二甲基腈末端结构(源自偶氮双异丁腈的自由基引发剂末端)等任一者。
应予说明，可以由捷克共和国科学学术高分子化学研究所或Chemical Soft公司购买的通式(III)所示的N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物的重均分子量为20000~35000，作为共聚成分的酰肼基的含量为5.0~7.0mol%。
复合体(I)或其药理学上可接受的盐可以通过例如柱色谱、薄层色谱、重结晶或再沉淀之类的方法纯化。只要是本领域技术人员，则可以从这些方法中选择与具体的对象化合物相符的方法，或者可以组合，可以容易地对纯化方法进行最优化。本发明所涉及的制造方法中得到的复合体(I)或其药理学上可接受的盐的副产物少，因此可以通过简便的分离纯化操作而得到。此外，如果考虑到商业生产，则优选为例如利用乙酸乙酯和甲醇的混合溶剂的重结晶或再沉淀。
应予说明，复合体(I)或其药理学上可接受的盐的制造方法中，反应步骤后，可以具有沉淀步骤和/或干燥步骤。
作为沉淀步骤中使用的溶剂，可以举出例如四氢呋喃或者二甲氧基乙烷等醚系溶剂、乙腈或者丙腈等腈系溶剂、乙酸乙酯或者乙酸异丙酯等酯系溶剂、甲醇、乙醇或者2-丙醇等醇系溶剂或它们的混合溶剂，从复合体的回收率高、且溶剂馏去容易的观点出发，优选为醇系溶剂和酯系溶剂的混合溶剂，更优选为甲醇和乙酸乙酯的混合溶剂。
作为该混合溶剂的使用量，从能够容易地实施搅拌、且提高单位体积的制造效率的观点出发，相对于通式(II)所示的蒽环系药物，优选为50~1000倍重量，更优选为100~350倍重量。此外，作为该混合溶剂中的酯系溶剂的比率，从复合体回收率高、且去除未反应的蒽环系药物的观点出发，相对于醇系溶剂，优选为1~10倍重量，更优选为2~6倍重量。
沉淀步骤中的搅拌温度从抑制复合体的分解、且去除未反应的蒽环系药物的观点出发，优选为-20℃~50℃，更优选为-10℃~40℃。此外，沉淀步骤中的搅拌时间从抑制复合体的分解、且去除未反应的蒽环系药物的观点出发，优选为0.1~100小时，更优选为0.25~50小时。
干燥步骤中的干燥温度从抑制复合体的分解、且迅速去除残留溶剂的观点出发，优选为-10℃~50℃，更优选为0℃~40℃。此外，作为干燥方法，没有特别限制，从迅速去除残留溶剂的观点出发，优选为减压干燥。此外，减压干燥的减压度从迅速去除残留溶剂的观点出发，优选为500Pa以下。
实施例
以下，举出实施例具体说明本发明，但本发明不限于这些。首先，针对纯度评价方法说明。
(1)试样制备
在通过后述实施例2~15以及比较例1和比较例2得到的固体(10mg)的甲醇(160μL)溶液中，在0℃下添加50重量%羟基胺水溶液(32μL)和乙酸(27μL)，在0℃下进行25小时搅拌。在所得反应混合物(50μL)中添加甲醇(450μL)，作为测定试样。
(2)HPLC
针对上述制备的各测定试样，使用HPLC，通过以下的测定条件进行分析。
HPLC：LC-20AD(岛津制作所公司制)
检测器：光电二极管阵列检测器(测定波长：488nm)
柱：Scherzo SM-C18(インタクト公司制)
柱尺寸：150×4.6mm(3μm)
柱温度：30℃
流动相：A液 5mmol/L甲酸铵试液/甲醇混合液(95:5)
B液 甲醇/水/甲酸混合液(90:10:0.1)
展开条件：A/B=75/25(0~3分钟)
A/B=75/25~37/63(3~4分钟；线性梯度)
A/B=37/63(4~24分钟)
A/B=37/63~20/80(24~25分钟；线性梯度)
A/B=20/80(25~35分钟)
A/B=20/80~0/100(35~39分钟；线性梯度)
A/B=0/100(39~54分钟)
A/B=0/100~75/25(54~54.1分钟；线性梯度)
A/B=75/25(54.1~59.5分钟)
流速：1.0mL/分钟
注入量：20μL
样品冷却器温度：4℃
注射器洗涤液：乙腈/水混合液(60:40)。
(3)结合药物纯度
基于上述测定的HPLC的色谱图，将除了空白峰之外的全峰作为100%的情况下测定对象峰的面积百分数作为结合药物纯度算出。应予说明，该空白峰是指在以下的HPLC的测定条件下，测定甲醇的情况下检测的峰。此外，该测定对象峰是指以分子量为根据的蒽环系药物的等价物的峰，在上述的分析条件下异构体的峰分离的情况下，将各异构体的峰的面积百分数的和记作测定对象峰的面积百分数。
接着，针对结合药物负载量的评价方法进行说明。
(1)试样制备
在2mL容量瓶中，正确称量通过后述实施例2~15以及比较例1和比较例2得到的固体(20±0.4mg)，添加甲醇(1mL)溶解后，添加50重量%羟基胺水溶液(320μL)和乙酸(270μL)，使用甲醇正确定容为2mL。将所得溶液在0℃下进行25小时搅拌，制成测定试样。
(2)HPLC
针对上述制备的测定试样，使用HPLC，通过以下的测定条件进行分析。
检测器：光电二极管阵列检测器(测定波长：488nm)
柱：Scherzo SM-C18(インタクト公司制)
柱尺寸：150×4.6mm(3μm)
柱温度：30℃
流动相：A液 5mmol/L甲酸铵试液/甲醇混合液(95:5)
B液 甲醇/水/甲酸混合液(90:10:0.1)
展开条件：A/B=75/25(0~3分钟)
A/B=75/25~37/63(3~4分钟；线性梯度)
A/B=37/63(4~24分钟)
A/B=37/63~20/80(24~25分钟；线性梯度)
A/B=20/80(25~35分钟)
A/B=20/80~0/100(35~39分钟；线性梯度)
A/B=0/100(39~54分钟)
A/B=0/100~75/25(54~54.1分钟；线性梯度)
A/B=75/25(54.1~59.5分钟)
流速：1.0mL/分钟
注入量：10μL
样品冷却器温度：4℃。
(3)结合药物负载量
基于上述测定的HPLC的色谱图，使用测定对象峰的HPLC面积值、和由对应的测定对象标准品制作的标准曲线，通过定量分析算出测定对象峰的摩尔数，由所得摩尔数算出对应的活性药物主体的重量后，通过以下的计算式算出结合药物负载量。
结合药物负载量(wt%)=活性药物主体的重量(mg)/复合体的重量(mg)×100
此外，该测定对象峰是指以分子量为根据的蒽环系药物的等价物的峰，在上述的分析条件下异构体的峰分离的情况下，将各异构体的峰的面积百分数的和记作测定对象峰的HPLC面积值。
此外，上述的测定对象标准品可以通过以下的方法合成。
合成例1
使用羟基胺的THP等价物的合成(测定对象标准品)：
在THP(625mg、日本MicroBiopharm公司制)的甲醇(8.0mL)悬浮液中，在0℃下添加50重量%羟基胺水溶液(530μL)和乙酸(460μL)，在0℃下进行25小时搅拌。将所得反应混合物通过二氧化硅凝胶柱色谱纯化后，添加乙腈(40mL)、二异丙基醚(100mL)，在25℃下进行2小时搅拌。滤取析出的固体后，在25℃下进行减压干燥，由此得到THP等价物(收量506mg、收率79%)。
合成例2
使用羟基胺的DOX等价物的合成(测定对象标准品)：
在DOX盐酸盐(500mg、MedKoo Biosciences公司制)的甲醇(9.1mL)悬浮液中，在0℃下添加50重量%羟基胺水溶液(610μL)和乙酸(530μL)，在0℃下进行25小时搅拌。在所得反应混合物中，添加甲醇(1.0mL)、乙腈(20mL)，在25℃下进行2小时搅拌。滤取析出的固体后，在25℃下进行减压干燥，由此得到DOX等价物(收量464mg、收率90%)。
接着，针对重均分子量的评价方法进行说明。
(1)试样制备
在通过后述实施例2~15以及比较例1和比较例2得到的固体(5mg)中添加甲醇(500μL)，制成测定试样。
(2)重均分子量
针对上述制备的各测定试样，使用HPLC和MALS，在以下的测定条件下分析，使用分析软件[ASTRA Ver.7.3.2.1764-bit(Wyatt technology)]，算出重均分子量(Mw)(折射率增量：dn/dc=0.175)。
HPLC：LC-40(岛津制作所公司制)
检测器：光电二极管阵列检测器(测定波长:488nm)和差示折射率计
柱：TSKgel α-M(东曹公司制)、和
TSKgel α-2500(东曹公司制)依次连接2根
柱尺寸：TSKgel α-M(300×7.8mm(7μm))
TSKgel α-2500(300×7.8mm(7μm))
柱温度：30℃
流动相：甲醇:0.3mol/L乙酸钠试液(pH6.5)=80:20
流速：0.8mL/分钟
注入量：20μL
样品冷却器温度：4℃
注射器洗涤液：甲醇:水=80:20
MALS：DAWN8(Wyatt technology)
光散射仪器：
校正常数：5.2929/100000[1/Vcm]
RI仪器：
折射常数：1.338。
实施例1
结合药物纯度的评价：
以下，在试验例1~11中示出结合药物纯度的评价方法的研究结果。
试验例1
使用非专利文献2所述的方法的P-THP(比较例1)的水解：
在通过比较例1得到的P-THP(20mg)中，添加1mol/L盐酸(2.0mL)，在85℃下进行20分钟搅拌。将所得反应混合物作为测定试样。针对所得测定试样，通过前述的方法进行HPLC测定的结果是，THP的纯度为1.1%。
试验例2
按照非专利文献2所述的方法的P-THP(比较例1)的水解(反应温度0℃、盐酸)：
在通过比较例1得到的P-THP(20mg)中，添加冷却的1mol/L盐酸(2.0mL、0℃)，在0℃下进行1小时搅拌。将所得反应混合物作为测定试样。针对所得测定试样，通过前述的方法进行HPLC测定的结果是，THP的纯度为0.2%。
试验例3
按照非专利文献2所述的方法的P-THP(比较例1)的水解(反应温度0℃、乙酸)：
在通过比较例1得到的P-THP(20mg)中，添加冷却的1mol/L乙酸水溶液(2.0mL、0℃)，在0℃下进行2小时搅拌。将所得反应混合物作为测定试样。针对所得测定试样，通过前述的方法进行HPLC测定的结果是，THP的纯度为83.3%。
试验例4
使用羟基胺和乙酸的THP的转化：
在THP(1.0mg、日本MicroBiopharm公司制)的甲醇(160μL)悬浮液中，在0℃下添加50重量%羟基胺水溶液(32μL)和乙酸(27μL)，在0℃下进行25小时搅拌。在所得反应混合物(50μL)中添加甲醇(450μL)，作为测定试样。针对所得测定试样，通过前述的方法进行HPLC测定的结果是，THP等价物的纯度为98.9%。
试验例5
THP的纯度评价：
在THP(5.0mg、日本MicroBiopharm公司制)的甲醇(6.0mL)悬浮液中，添加N,N-二甲基甲酰胺(4.0mL)，制成测定试样。针对所得测定试样，通过前述的方法进行HPLC测定的结果是，THP的纯度为99.0%。
试验例1~5的HPLC分析结果示于表1。
[表1]
Figure 771447DEST_PATH_IMAGE016
如表1所示，可知非专利文献2所述的方法中，THP从复合体游离，同时THP分解为结构不明物(试验例1)。此外，按照非专利文献2所述的方法，在反应温度设为0℃的利用盐酸的水解条件下，THP游离的同时，THP转化为DOX，因此使用该方法的情况下也难以算出结合药物纯度(试验例2)。此外，按照非专利文献2所述的方法，在反应温度设为0℃的利用乙酸的水解条件下，向THP的转化率高，但无法完全抑制从THP向DOX的转化，使用该方法的情况下也难以算出结合药物纯度(试验例3)。另一方面，可知替代复合体而使用THP，使用羟基胺和乙酸作为添加剂的情况下，从THP向DOX的转化几乎不进行，与所使用的THP的纯度评价结果相比的情况下，也以良好的纯度得到THP等价物(试验例4、5)。根据以上的结果，可以认为在试验例4的反应条件下，即使使用复合体的情况下，如果同样的反应也进行，则存在能够评价结合药物纯度的可能性。
试验例6
使用羟基胺、乙酸和甲醇的P-THP(比较例1)的结合药物纯度评价：
在通过比较例1得到的P-THP(10mg)的甲醇(160μL)溶液中，在0℃下添加50重量%羟基胺水溶液(32μL)和乙酸(27μL)，在0℃下进行25小时搅拌。在所得反应混合物(50μL)中添加甲醇(450μL)，作为测定试样。针对所得测定试样，通过前述的方法进行HPLC测定的结果是，结合药物纯度为94.5%。
试验例7
使用羟基胺、乙酸和甲醇的P-THP(实施例7)的结合药物纯度评价：
在通过实施例7得到的P-THP(10mg)的甲醇(160μL)溶液中，在0℃下添加50重量%羟基胺水溶液(32μL)和乙酸(27μL)，在0℃下进行25小时搅拌。在所得反应混合物(50μL)中添加甲醇(450μL)，作为测定试样。针对所得测定试样，通过前述的方法进行HPLC测定的结果是，结合药物纯度为98.9%。
试验例8
使用乙酰肼、乙酸和甲醇的P-THP(实施例7)的结合药物纯度评价：
在通过实施例7得到的P-THP(10mg)的甲醇(160μL)溶液中，在0℃下添加乙酰肼(35mg)和乙酸(27μL)，在0℃下进行20小时搅拌。在所得反应混合物(50μL)中添加甲醇(450μL)，作为测定试样。针对所得测定试样，通过前述的方法进行HPLC测定的结果是，结合药物纯度为97.7%。
试验例9
使用丙酰肼、乙酸和甲醇的P-THP(实施例7)的结合药物纯度评价：
在通过实施例7得到的P-THP(10mg)的甲醇(160μL)溶液中，在0℃下添加丙酰肼(42mg)和乙酸(27μL)，在0℃下进行20小时搅拌。在所得反应混合物(50μL)中添加甲醇(450μL)，作为测定试样。针对所得测定试样，通过前述的方法进行HPLC测定的结果是，结合药物纯度为96.0%。
试验例10
使用丁酰肼、乙酸和甲醇的P-THP(实施例7)的结合药物纯度评价：
在通过实施例7得到的P-THP(10mg)的甲醇(160μL)溶液中，在0℃下添加丁酰肼(49mg)和乙酸(27μL)，在0℃下进行20小时搅拌。在所得反应混合物(50μL)中添加甲醇(450μL)，作为测定试样。针对所得测定试样，通过前述的方法进行HPLC测定的结果是，结合药物纯度为96.8%。
试验例11
使用3-甲基丁酰肼、乙酸和甲醇的P-THP(实施例7)的结合药物纯度评价：
在通过实施例7得到的P-THP(10mg)的甲醇(160μL)溶液中，在0℃下添加3-甲基丁酰肼(56mg)和乙酸(27μL)，在0℃下进行20小时搅拌。在所得反应混合物(50μL)中添加甲醇(450μL)，作为测定试样。针对所得测定试样，通过前述的方法进行HPLC测定的结果是，结合药物纯度为96.6%。
试验例6~11的结果示于表2。
[表2]
Figure 352601DEST_PATH_IMAGE017
如表2所示，对通过比较例1得到的P-THP施加试验例4的反应条件的结果可知，对复合体的亲核取代反应良好地进行，但该P-THP未示出95.0%以上的结合药物纯度，通过以往方法制造的P-THP在结合药物纯度方面存在课题(试验例6)。另一方面，可知对通过实施例7得到的P-THP施加与试验例6相同的条件的情况下，示出98.9%这一高结合药物纯度(试验例7)。此外，可知针对通过实施例7得到的P-THP，使用各种羧酸酰肼评价结合药物纯度的情况下，也示出良好的结合药物纯度(试验例8~11)。
实施例2
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物8.8倍重量、乙酸40摩尔当量、甲醇24倍重量、反应温度1~2℃、反应时间15小时条件下的P-THP的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(526mg、捷克共和国科学学术高分子化学研究所制)的甲醇(1.8mL)溶液中，添加THP(60.0mg、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(219μL)，在1~2℃下进行15小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(3.2mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(21mL)中，在33~34℃下进行24小时搅拌。滤取析出的固体后，在31~32℃下进行减压干燥，由此得到P-THP(收量562mg、收率96.1%)。
实施例3
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物9.1倍重量、乙酸32摩尔当量、甲醇58倍重量、反应温度1~2℃、反应时间40小时条件下的P-THP的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(200mg、捷克共和国科学学术高分子化学研究所制)的甲醇(1.6mL)溶液中，添加THP(22.0mg、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(65μL)，在1~2℃下进行40小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(0.3mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(7.7mL)中，在21~22℃下进行2小时搅拌后，滤取析出的固体。将所得固体的甲醇(1.4mL)溶液添加至乙酸乙酯(5.7mL)中，在22~23℃下进行2小时搅拌。滤取析出的固体后，在30~31℃下进行减压干燥，由此得到P-THP(收量205mg、收率92.8%)。
实施例4
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物8.8倍重量、乙酸40摩尔当量、甲醇24倍重量、反应温度1~5℃、反应时间16小时条件下的P-THP的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(3.16g、Chemical Soft公司制)的甲醇(10.8mL)溶液中，添加THP(360mg、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(1.31mL)，在1~5℃下进行16小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(19.2mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(126mL)中，在19~22℃下进行2小时搅拌后，滤取析出的固体。将所得固体的甲醇(24.0mL)溶液添加至乙酸乙酯(96.0mL)中，在17~21℃下进行2小时搅拌。滤取析出的固体后，在30~37℃下进行减压干燥，由此得到P-THP(收量3.43g、收率97.8%)。
实施例5
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物8.8倍重量、乙酸100摩尔当量、甲醇56倍重量、反应温度2~4℃、反应时间15小时条件下的P-THP的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(3.16g、Chemical Soft公司制)的甲醇(25.2mL)溶液中，添加THP(360mg、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(3.28mL)，在2~4℃下进行15小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(2.8mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(126mL)中，在21~22℃下进行2小时搅拌后，滤取析出的固体。将所得固体的甲醇(24.0mL)溶液添加至乙酸乙酯(96.0mL)中，在21~24℃下进行2小时搅拌。滤取析出的固体后，在35~42℃下进行减压干燥，由此得到P-THP(收量3.48g、收率99.3%)。
实施例6
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物8.8倍重量、乙酸40摩尔当量、甲醇24倍重量、反应温度-10~-9℃、反应时间38小时条件下的P-THP的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(526mg、捷克共和国科学学术高分子化学研究所制)的甲醇(1.8mL)溶液中，添加THP(60.0mg、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(219μL)，在-10~-9℃下进行38小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(3.2mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(21mL)中，在1~2℃下进行1小时搅拌后，滤取析出的固体。将所得固体的甲醇(4.0mL)溶液添加至乙酸乙酯(16.0mL)中，在1~5℃下进行1小时搅拌。滤取析出的固体后，在31~32℃下进行减压干燥，由此得到P-THP(收量541mg、收率92.6%)。
实施例7
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物8.8倍重量、乙酸40摩尔当量、甲醇24倍重量、反应温度-30~-29℃、反应时间112小时条件下的P-THP的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(526mg、捷克共和国科学学术高分子化学研究所制)的甲醇(1.8mL)溶液中，添加THP(60.0mg、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(219μL)，在-30~-29℃下进行112小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(3.2mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(21mL)中，在22~23℃下进行0.5小时搅拌。滤取析出的固体后，在32~33℃下进行减压干燥，由此得到P-THP(收量548mg、收率93.7%)。
实施例8
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物8.8倍重量、乙酸40摩尔当量、甲醇24倍重量、反应温度2~5℃、反应时间15小时条件下的P-THP的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(13.2g、捷克共和国科学学术高分子化学研究所制)的甲醇(45.0mL)溶液中，添加THP(1.50g、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(5.47mL)，在2~5℃下进行15小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(79.5mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(525mL)中，在20~22℃下进行1小时搅拌后，滤取析出的固体。将所得固体的甲醇(97.5mL)溶液添加至乙酸乙酯(390mL)中，在22~23℃下进行1小时搅拌。滤取析出的固体后，在31~32℃下进行减压干燥，由此得到P-THP(收量14.2g、收率97.4%)。
实施例9
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物9.8倍重量、乙酸100摩尔当量、甲醇62倍重量、反应温度1~4℃、反应时间46小时条件下的P-DOX盐酸盐的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(200mg、捷克共和国科学学术高分子化学研究所制)的甲醇(1.6mL)溶液中，添加DOX盐酸盐(20.3mg、MedKoo Biosciences公司制)和乙酸(200μL)，在1~4℃下进行46小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(0.3mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(7.7mL)中，在21~22℃下进行1小时搅拌。滤取析出的固体后，在32~33℃下进行减压干燥，由此得到P-DOX盐酸盐(收量219mg、收率99.7%)。
比较例1
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物9.1倍重量、乙酸32摩尔当量、甲醇58倍重量、反应温度29~30℃、反应时间15小时条件下的P-THP的制造方法(参照专利文献1所述的温度和非专利文献1所述的方法)：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(200mg、捷克共和国科学学术高分子化学研究所制)的甲醇(1.6mL)溶液中，添加THP(22.0mg、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(65μL)，在遮光下，在29~30℃下进行15小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(0.3mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(7.7mL)中，在29~32℃下进行24小时搅拌。滤取析出的固体后，在31~34℃下进行减压干燥，由此得到P-THP(收量209mg、收率94.3%)。
比较例2
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物8.8倍重量、乙酸40摩尔当量、甲醇56倍重量、反应温度34~35℃、反应时间17小时条件下的P-THP的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(3.16g、捷克共和国科学学术高分子化学研究所制)的甲醇(25.2mL)溶液中，添加THP(360mg、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(1.31mL)，在34~35℃下进行17小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(4.8mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(126mL)中，在19~23℃下进行1小时搅拌后，滤取析出的固体。将所得固体的甲醇(24.0mL)溶液添加至乙酸乙酯(96.0mL)中，在22~23℃下进行1小时搅拌。滤取析出的固体后，在31~35℃下进行减压干燥，由此得到P-THP(收量3.47g、收率98.9%)。
实施例10
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物24.0倍重量、乙酸100摩尔当量、甲醇56倍重量、反应温度4~7℃、反应时间20小时条件下的P-THP的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(1.20g、捷克共和国科学学术高分子化学研究所制)的甲醇(3.5mL)溶液中，添加THP(50mg、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(0.46mL)，在4~7℃下进行20小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(2.0mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(25mL)中，在22~23℃下进行1小时搅拌后，滤取析出的固体。将所得固体的甲醇(10.0mL)溶液添加至乙酸乙酯(40.0mL)中，在21~23℃下进行1小时搅拌。滤取析出的固体后，在23~24℃下进行减压干燥，由此得到P-THP(收量1.11g、收率89.4%)。
实施例11
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物13.3倍重量、乙酸100摩尔当量、甲醇56倍重量、反应温度2~4℃、反应时间21小时条件下的P-THP的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(0.66g、捷克共和国科学学术高分子化学研究所制)的甲醇(3.5mL)溶液中，添加THP(50mg、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(0.46mL)，在2~4℃下进行21小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(2.0mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(25mL)中，在22~23℃下进行1小时搅拌后，滤取析出的固体，在22~23℃下减压干燥，由此得到P-THP(收量0.70g、收率98.4%)。
实施例12
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物8.8倍重量、乙酸40摩尔当量、甲醇24倍重量、反应温度1~5℃、反应时间19小时条件下的P-THP的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(122.8g、捷克共和国科学学术高分子化学研究所制)的甲醇(420mL)溶液中，添加THP(14.0g、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(51.0mL)，在1~5℃下进行19小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(742mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(4900mL)中，在18~20℃下进行1小时搅拌后，滤取析出的固体。将所得固体的甲醇(910mL)溶液添加至乙酸乙酯(3640mL)中，在18~20℃下进行1小时搅拌。滤取析出的固体后，在16~20℃下进行减压干燥，由此得到P-THP(收量130.2g、收率95.4%)。
实施例13
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物6.7倍重量、乙酸60摩尔当量、甲醇16倍重量、反应温度4~7℃、反应时间22小时条件下的P-THP的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(0.67g、捷克共和国科学学术高分子化学研究所制)的甲醇(2.0mL)溶液中，添加THP(100mg、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(0.55mL)，在4~7℃下进行22小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(2.0mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(25mL)中，在22~23℃下进行1小时搅拌后，滤取析出的固体，在21~22℃下减压干燥，由此得到P-THP(收量0.76g、收率98.6%)。
实施例14
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物5.0倍重量、乙酸60摩尔当量、甲醇16倍重量、反应温度1~5℃、反应时间20小时条件下的P-THP的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(3.00g、捷克共和国科学学术高分子化学研究所制)的甲醇(12.0mL)溶液中，添加THP(600mg、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(3.28mL)，在1~5℃下进行20小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(15.0mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(120mL)中，在19~21℃下进行0.5小时搅拌后，滤取析出的固体。将所得固体的甲醇(27.0mL)溶液添加至乙酸乙酯(120mL)中，在19~23℃下进行1小时搅拌。滤取析出的固体后，在23~24℃下进行减压干燥，由此得到P-THP(收量3.37g、收率93.5%)。
实施例15
N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物4.0倍重量、乙酸40摩尔当量、甲醇16倍重量、反应温度1~4℃、反应时间37小时条件下的P-THP的制造方法：
在N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物(200mg、捷克共和国科学学术高分子化学研究所制)的甲醇(1.0mL)溶液中，添加THP(50mg、日本MicroBiopharm公司制)和乙酸(0.18mL)，在1~4℃下进行37小时搅拌后，在反应混合物中添加甲醇(0.8mL)。将所得反应混合物添加至乙酸乙酯(10mL)中，在1~5℃下进行1小时搅拌后，滤取析出的固体。将所得固体的甲醇(3.0mL)溶液添加至乙酸乙酯(15mL)中，在22~23℃下进行0.5小时搅拌。滤取析出的固体后，在23~24℃下进行减压干燥，由此得到P-THP(收量197mg、收率78.9%)。
实施例2~15以及比较例1和比较例2的结果示于表3。
Figure 687768DEST_PATH_IMAGE019
通过使用羟基胺、乙酸和甲醇的评价方法，评价实施例2~15以及比较例1和比较例2中得到的复合体的结果可知，如表3所示，与比较例1、2相比，通过将反应温度设为10℃以下，得到结合药物纯度高的目的物(实施例2~15)。此外，变更蒽环系药物的种类、N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物的种类的情况下，也示出良好的结合药物纯度(实施例4、5、9)，变更N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物的使用量、乙酸的摩尔当量、甲醇的使用量的情况下，也示出98.0%以上的结合药物纯度(实施例3、5、9)，因此可知对结合药物纯度的提高而言重要的是反应温度。此外，该反应在将反应温度设为-10℃或-30℃左右的情况下也良好地进行(实施例6、7)，可知能够扩大规模制造(实施例8)。
此外，将相对于蒽环系药物的N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物的使用量大幅改变的情况下，通过将反应温度设为10℃以下，也维持98.0%以上的结合药物纯度，可知能够变更结合药物负载量(实施例10~15)。此外，与比较例1相比，进一步提高反应温度的情况下，可知结合药物纯度进一步降低(比较例2)。
实施例16
60℃气密条件下的保存稳定性评价(短期严苛试验中的重均分子量的随时间变化)：
将比较例1和实施例12~15中得到的复合体(5mg)称量至HPLC用小瓶中后，加盖，在60℃烘箱内静置。2周后和4周后各自出库，评价重均分子量。保存稳定性评价开始时的重均分子量记作0周，2周和4周的评价结果示于表4。
[表4]
Figure 603640DEST_PATH_IMAGE020
如表4所示，如果比较重均分子量的随时间变化和结合药物纯度，则结合药物纯度低于95.0%的情况下重均分子量显著增加，即保存稳定性低，与此相对地，如果结合药物纯度为95.0%以上，则复合体的高分子量化现象被显著抑制，可知具有高保存稳定性(比较例1、实施例12)。此外，如果比较重均分子量的随时间变化和结合药物负载量，则通过将结合药物负载量提高至15wt%以上，复合体的高分子量化现象被进一步抑制，可知具有进一步高的保存稳定性(实施例12~15)。
工业实用性
根据本发明所涉及的复合体(I)或其药理学上可接受的盐中包含的药物的纯度评价方法，能够评价结合药物纯度是否满足日本药典所述的THP和DOX盐酸盐的纯度标准。此外，根据本发明的制造方法，能够制造以往没有的高纯度的复合体(I)。

Claims (9)

1.通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐中包含的药物的纯度评价方法，其具有：
反应步骤，其中，在极性溶剂中，使通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐与选自羟基胺、O-烷基羟基胺和羧酸酰肼中的至少1种含氮亲核剂在质子酸存在下反应；和
评价步骤，其中，通过高效液相色谱评价该反应步骤中得到的反应混合物的纯度，
[化1]
Figure DEST_PATH_IMAGE002
式中，A表示氢原子或(R)-四氢-2H-吡喃-2-基，b、c、d和e各自独立地表示正整数，用波浪线记载的键表示能够采取E体、Z体中任一构型。
2.根据权利要求1所述的方法，其中，前述极性溶剂为醇系溶剂，
前述含氮亲核剂为选自羟基胺和羧酸酰肼中的至少1种，
前述质子酸为羧酸。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，前述极性溶剂为甲醇，
前述含氮亲核剂为选自羟基胺、乙酰肼、丙酰肼、丁酰肼和3-甲基丁酰肼中的至少1种，
前述质子酸为乙酸。
4.根据权利要求1~3中任一项所述的方法，其中，前述通式(I)中，b为1~10的整数，c为30~500的整数，d为1~50的整数，e为1~50的整数。
5. 通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐，其通过权利要求1~4中任一项所述的方法评价的情况下，通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐中包含的药物的纯度为95.0%以上，
[化2]
Figure DEST_PATH_IMAGE004
式中，A表示氢原子或(R)-四氢-2H-吡喃-2-基，b、c、d和e各自独立地表示正整数，用波浪线记载的键表示能够采取E体、Z体中任一构型。
6.根据权利要求5所述的复合体或其药理学上可接受的盐，其中，A为(R)-四氢-2H-吡喃-2-基，b为5。
7.通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐的制造方法，其具有：
反应步骤，其中，在极性溶剂中，使通式(II)所示的蒽环系药物与通式(III)所示的N-(2-羟基丙基)甲基丙烯酰胺聚合物在质子酸存在下在10℃以下反应，得到通式(I)所示的复合体或其药理学上可接受的盐，
[化3]
Figure DEST_PATH_IMAGE006
[化4]
Figure DEST_PATH_IMAGE008
[化5]
Figure DEST_PATH_IMAGE010
式(I)和式(II)中，A表示氢原子或(R)-四氢-2H-吡喃-2-基，式(I)和式(III)中，b、c、d、e和f各自独立地表示正整数，用波浪线记载的键表示能够采取E体、Z体中任一构型。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，前述极性溶剂为甲醇，
前述质子酸为乙酸，
前述反应步骤中的反应温度为-30℃~10℃。
9.根据权利要求7或8所述的方法，其中，前述通式(I)和前述通式(III)中，b为1~10的整数，c为30~500的整数，d为1~50的整数，e为1~50的整数，f为d和e的和。
CN202180032055.9A 2020-07-31 2021-07-30 复合体中包含的药物的纯度评价方法和复合体的制造方法 Pending CN115552235A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2020-129825 2020-07-31
JP2020129825 2020-07-31
PCT/JP2021/028274 WO2022025228A1 (ja) 2020-07-31 2021-07-30 複合体に含まれる薬物の純度評価方法及び複合体の製造方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN115552235A true CN115552235A (zh) 2022-12-30

Family

ID=80036356

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202180032055.9A Pending CN115552235A (zh) 2020-07-31 2021-07-30 复合体中包含的药物的纯度评价方法和复合体的制造方法

Country Status (9)

Country Link
US (1) US20230322976A1 (zh)
EP (1) EP4190824A4 (zh)
JP (1) JPWO2022025228A1 (zh)
KR (1) KR20230043822A (zh)
CN (1) CN115552235A (zh)
AU (1) AU2021317978A1 (zh)
BR (1) BR112023000886A2 (zh)
CA (1) CA3189814A1 (zh)
WO (1) WO2022025228A1 (zh)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101444274B1 (ko) * 2006-10-19 2014-09-26 나노캬리아 가부시키가이샤 약제복합체용 블록 공중합체 및 의약조성물
CA2851344C (en) 2011-09-05 2017-10-03 Hiroshi Maeda Polymer-type fluorescent molecule probe
EP3453390B1 (en) 2016-05-06 2024-02-14 Biodynamic Research Foundation Polymerized drug-containing pharmaceutical composition
WO2020105701A1 (ja) * 2018-11-22 2020-05-28 京都薬品工業株式会社 新規ポリマー－活性薬物－コンジュゲート及びその用途

Also Published As

Publication number Publication date
WO2022025228A1 (ja) 2022-02-03
US20230322976A1 (en) 2023-10-12
AU2021317978A1 (en) 2023-02-16
JPWO2022025228A1 (zh) 2022-02-03
BR112023000886A2 (pt) 2023-02-07
CA3189814A1 (en) 2022-02-03
EP4190824A4 (en) 2024-08-21
KR20230043822A (ko) 2023-03-31
EP4190824A1 (en) 2023-06-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP2056106B1 (en) Sugar chain-capturing substance and use thereof
CN110487888B (zh) 组合型基质dhb/dhbh在maldi质谱中对还原糖检测中的应用
US11180477B2 (en) Process for the preparation of osimertinib (AZD9291) or a salt thereof, and “AZD9291 Aniline” or a salt thereof
US20220160883A1 (en) Additive systems for use in protein pegylation
CN115552235A (zh) 复合体中包含的药物的纯度评价方法和复合体的制造方法
Guthrie et al. Ketoxime peptide ligations: oxidative couplings of alkoxyamines to N-aryl peptides
US9108990B2 (en) Cyclopropyl MIDA boronate
CN108864422A (zh) 一种高纯度两端氨基封端的聚乙二醇的制备方法
US20090170948A1 (en) Crystal forms of O-desmethylvenlafaxine fumarate
Dodziuk et al. Synthesis and NMR study of a first generation dendrimer having four branches involving four glycine and one carbomoyl-(3, 7-dimethoxy-2-naphthalene) groups and attempts to complex it with α-, β-or γ-cyclodextrins
EP3656767A1 (en) Beraprost-314d monohydrate crystals and methods for preparation thereof
EP3666752A1 (en) Traceless reductively cleavable linker molecules for peptide purification
CN108264501B (zh) 取代的2-氨基吡啶类化合物及其制备方法
US20220144888A1 (en) Peptide purification method using sulfonate compound
US20200207803A1 (en) Cyclative release of peptidic compounds
CN111032635B (zh) N-甲酰基沃替西汀及其制备方法和沃替西汀的固体制剂
US11702446B2 (en) Acylation process for preparation of N-substituted peptide
Riley et al. Thermal decomposition of matrix metalloproteinase inhibitors: Evidence of solid state dimerization
KR101001734B1 (ko) 고순도의 메톡시폴리에틸렌글리콜에틸말레이마이드의분석방법
CA3099503A1 (en) Phenyl amino sodium propionate derivative, preparation method therefor and application thereof
CN113024407A (zh) 一种沙芬酰胺亚硝杂质化合物及其制备方法
EP3075724A1 (en) Solid form of agomelatine

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination