CN115505463A - 一种水性脱蜡剂及其制备方法与应用 - Google Patents

一种水性脱蜡剂及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明属于病理学组织切片技术领域，具体涉及一种水性脱蜡剂及其制备方法与应用。本发明的水性脱蜡剂成分安全、环保、毒性小，脱蜡效果与二甲苯相当。其不易引起组织变形、硬化，能够得到透明、脱蜡效果较好的组织切片染色样本，且不会对组织细胞结构和组织细胞内其他成分以及组织抗原造成破坏，符合临床病理诊断和研究所要求优质染色片的要求，同时也符合实验室环保的要求。本发明的水性脱蜡剂应用于病理检测组织脱蜡时，无有害气体产生，人体皮肤接触无害，有效避免技术人员身体受到伤害；使用完毕的废液属于无害废液，可直接排放，无环境污染，并节约二甲苯净化成本。

Description

一种水性脱蜡剂及其制备方法与应用
技术领域
本发明属于病理学组织切片技术领域，具体涉及一种水性脱蜡剂及其制备方法与应用。
背景技术
目前癌症的早期诊断主要依靠病理切片的染色结果进行判断，所以病理切片染色技术的快速高效就显得尤为重要。其中，石蜡组织切片是在观察组织形态和免疫组织化学（IHC）等定性分析中最常用的一种切片技术，被广泛的应用于临床病理诊断和实验研究中。由于病理石蜡组织切片为石蜡包埋的组织切片，非水溶性，不能直接用于免疫组织化学（IHC）等检测。检测前必须对切片进行预处理，即需要脱蜡、水化、抗原修复及内源性过氧化物酶阻断的处理。传统的石蜡组织切片预处理基本步骤为：二甲苯脱蜡、乙醇梯度水化、抗原修复、漂洗、阻断、再漂洗。经过一系列操作处理后，方可进行免疫组织化学（IHC）染色、苏木精-伊红（HE）染色等特殊染色实验。
病理染色中常用的脱蜡剂是二甲苯，为无色透明液体，有芳香烃的特殊气味。其为45%～70%的间二甲苯、15%～25%的对二甲苯和10%～15%的邻二甲苯三种异构体所组成的混合物，易流动，能与无水乙醇、乙醚和其他许多有机溶剂混溶。二甲苯具有刺激性气味，易燃，在水中不溶，容易对环境造成一定的污染。二甲苯属于低毒类化学物质，能够麻痹中枢神经和植物神经，并刺激粘膜，容易对长期接触的人员的生理系统造成一定程度的伤害。长期使用还可引起免疫功能低下、贫血、皮炎、湿疹和皮肤干燥等症状，对病理工作人员的身体健康产生严重危害。同时，在病理组织处理过程中，使用二甲苯容易使得病理组织收缩、硬化。为此，寻找一种无毒、能替代二甲苯的透明脱蜡剂已经成为当前亟待解决的问题。
发明内容
本发明为了克服上述现有技术中的不足，提供了一种成分环保、节约净化成本、减轻环境污染、效果好、毒性低、有效避免病理工作人员身体受到伤害的水性脱蜡剂，主要用于病理组织切片染色前的脱蜡水化处理，解决了现有技术中存在的部分问题。
为实现上述发明目的，本发明通过以下技术方案实现：
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
0.5%~5.5%的表面活性剂、0.02%~0.3%的抗氧化剂以及0.02%~0.3%的防腐剂；
其中，所述表面活性剂按重量百分比计包括0.25%~3.5%的非离子表面活性剂以及0.25%~2.0%的阴离子表面活性剂。
表面活性剂，是指能使目标溶液表面张力显著下降的物质。具有固定的亲水亲油基团，在溶液的表面能定向排列。表面活性剂主要分为阳离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、非离子表面活性剂、两性离子表面活性剂。非离子表面活性剂具有很高的表面活性，良好的增溶、洗涤、抗静电、钙皂分散等性能，刺激性小，还有优异的润湿和洗涤功能。其乳化能力更高，并具有一定的耐硬水能力，在固体表面上不发生强烈吸附，是净洗剂、乳化剂配方中不可或缺的成分。其无毒、无刺激、生物降解性好，是新一代“绿色产品”。
但其水溶液受浊点限制较大，随着温度的升高极易出现浑浊现象，甚至发生沉淀。而非离子表面活性剂与阴离子表面活性剂的相容性好，在非离子表面活性剂溶液中加入阴离子表面活性剂复配使用能显著增大其浊点，且对非离子表面活性剂不存在临界最低浓度，在浓度极低时就能对浊点产生影响。在非离子表面活性剂与阴离子表面活性剂的复配体系中会形成混合胶束，产生协同增效作用，有效提高产品的表面活性，同时减少表面活性剂的用量，降低生产成本。与阴离子表面活性剂相比，阳离子表面活性剂毒性更大，容易对病理组织切片的组织结构造成破坏。而两性离子表面活性剂对非离子表面活性剂的浊点基本没有影响，且两性离子表面活性剂成本较高，多用于化学工业废水、废液的处理。
作为优选，所述非离子表面活性剂为聚氧乙烯醚类和/或烷基葡糖苷类和/或脂肪酸甘油酯类和/或多元醇类表面活性剂。
作为优选，所述非离子表面活性剂为聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、C8~C16烷基葡糖苷、单硬脂酸甘油酯、脂肪酸山梨坦、聚山梨酯中的一种或多种的组合。
作为进一步优选，所述非离子表面活性剂为聚氧乙烯-8-辛基苯基醚与C8~C16烷基葡糖苷的组合。所述聚氧乙烯-8-辛基苯基醚的重量百分比浓度为1.2%，所述C8~C16烷基葡糖苷的重量百分比浓度为0.65%。
聚氧乙烯-8-辛基苯基醚在水溶液中不易发生电离，具有较高的稳定性。其与其他类型的表面活性剂的相容性好，具有较强的溶解性能。C8~C16烷基葡糖苷具有高表面活性、黏度较高、泡沫丰富、细腻稳定的特点。C8~C16烷基葡糖苷与聚氧乙烯-8-辛基苯基醚进行复配使用，有明显协同增效作用。可在硬水中使用，对组织表皮层、黏膜和活细胞的刺激性极低，在自然环境中易于生物降解，环境污染少。当非离子表面活性剂的浓度低于0.25%时，只能用作细胞通透剂，不能溶解组织或细胞表层的石蜡。当非离子表面活性剂的浓度高于3.5%时，容易对切片组织中的脂质层组织产生局部刺激，造成损伤，继而影响后续染色实验。
作为优选，所述阴离子表面活性剂为C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、C10~C16烷基苯磺酸钠、硬脂酸中的一种或多种的组合。
作为进一步优选，所述阴离子表面活性剂为C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠与C10~C16烷基苯磺酸钠的组合。所述C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠与C10~C16烷基苯磺酸钠的重量百分比浓度均为0.575%。
C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠以及C10~C16烷基苯磺酸钠具有去油、润湿、发泡、分散的表面活性，易氧化，起泡力强，去污力高，对颗粒石蜡污垢、蛋白污垢和油性污垢有显著的去除效果。且C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠与C10~C16烷基苯磺酸钠的去污力随加热温度的升高而增强，对石蜡的溶解作用高于非离子表面活性剂。当阴离子表面活性剂的浓度低于0.25%时，只能对颗粒状石蜡起到分散的作用。当阴离子表面活性剂的浓度高于2%时，会对切片组织中的脂质层组织产生局部刺激和损伤，影响染色效果。
作为优选，所述抗氧化剂为柠檬酸、丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）中的一种或多种的组合。
作为进一步优选，所述抗氧化剂的浓度为0.16%。
柠檬酸所具有的螯合作用和调节pH值的特性使其在水性脱蜡剂中能增加抗氧化的性能，抑制酶的活性，延长脱蜡剂的保存期。当抗氧化剂的浓度低于0.02%时，抗氧化作用不明显。当抗氧化剂的浓度高于0.3%时，容易对骨、钙化组织的染色产生影响。
作为优选，所述防腐剂为液体生物防腐剂PC300、PC150、PC950中的一种或多种的组合。
作为进一步优选，所述防腐剂的浓度为0.16%。
当防腐剂的浓度低于0.02%时，防腐效果不明显。当防腐剂的浓度高于0.3%时会对免疫组化染色实验中组织或细胞抗原的表达产生影响。
作为进一步优选，一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
0.2%~2.5%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.05%~1%的C8~C16烷基葡糖苷、0.125%~1%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.125%~1%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.02%~0.3%的柠檬酸以及0.02%~0.3%的液体生物防腐剂PC300。
一种如上所述的水性脱蜡剂的制备方法，包括如下步骤：
（S.1）分别称取上述重量百分比的非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、抗氧化剂以及防腐剂；
（S.2）将步骤（S.1）中称取的非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂与蒸馏水混合均匀，然后加入防腐剂搅拌均匀，最后加入抗氧化剂混匀，得到水性脱蜡剂。
如上所述的水性脱蜡剂在病理切片染色实验中的应用。
一种病理切片染色方法，包括如下步骤：
取组织石蜡块进行切片、烤片，然后配制如上所述的水性脱蜡剂并进行预加热，再将组织石蜡切片置于水性脱蜡剂中恒温浸泡，然后取出组织石蜡切片用水冲洗即完成脱蜡，最后进行染色。
作为优选，一种病理切片染色方法，具体包括如下步骤：
取组织石蜡块进行切片、烤片，然后配制水性脱蜡剂并加热至70~80℃，再将组织石蜡切片置于水性脱蜡剂中恒温浸洗或滴洗，然后取出组织石蜡切片用水冲洗即完成脱蜡，最后进行染色。
非离子表面活性剂和阴离子表面活性剂的溶解度随温度升高而加大。当温度超过80℃时，其溶解度急剧下降，使溶液出现混油或分层，冷却后又恢复澄明。这种由澄清变成浑浊或分层的现象称为起昙，该转变温度称为昙点。故而温度过高会降低非离子表面活性剂和阴离子表面活性剂的溶解度，致使脱蜡效果受影响。温度低于70℃，又会影响临界胶束浓度，不能溶解石蜡。
因此，本发明具有以下有益效果：
（1）本发明的水性脱蜡剂成分安全、环保、毒性小，脱蜡效果与二甲苯相当。其不易引起组织变形、硬化，能够得到透明、脱蜡效果较好的组织切片染色样本，且不会对组织细胞结构和组织细胞内其他成分以及组织抗原造成破坏，符合临床病理诊断和研究所要求优质染色片的要求，同时也符合实验室环保的要求；
（2）本发明的水性脱蜡剂应用于病理检测组织脱蜡时，无有害气体产生，人体皮肤接触无害，有效避免技术人员身体受到伤害；使用完毕的废液属于无害废液，可直接排放，无环境污染，并节约二甲苯净化成本。
附图说明
图1为水性脱蜡剂制备工艺流程图。
图2为水性脱蜡剂使用流程示意图。
图3为实施例1~6中水性脱蜡剂效果对比图。
图4为实施例7~12中水性脱蜡剂效果对比图。
图5为实施例13~15、对比例1~3中水性脱蜡剂效果对比图。
图6为对比例4~9中水性脱蜡剂效果对比图。
图7为对比例10~15中水性脱蜡剂效果对比图。
图8为对比例16~17中水性脱蜡剂效果对比图。
图9为水性脱蜡剂进行滴洗、浸洗效果对比图。
图10为水性脱蜡剂饱和程度测试示意图。
图11为心脏组织脱蜡后HE染色实验效果对比图。
图12为心脏组织脱蜡后IHC染色实验效果对比图。
图13为心脏组织脱蜡后特殊染色（弹力纤维染色）实验效果对比图。
具体实施方式
下面结合说明书附图以及具体实施例对本发明做进一步描述。本领域普通技术人员在基于这些说明的情况下将能够实现本发明。此外，下述说明中涉及到的本发明的实施例通常仅是本发明一部分的实施例，而不是全部的实施例。因此，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
实施例1
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。
水性脱蜡剂的制备方法包括如下步骤：
（S.1）分别称取上述重量百分比的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、C8~C16烷基葡糖苷、C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、C10~C16烷基苯磺酸钠、柠檬酸以及液体生物防腐剂PC300；
（S.2）将步骤（S.1）中称取的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、C8~C16烷基葡糖苷、C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、C10~C16烷基苯磺酸钠与蒸馏水混合均匀，然后加入液体生物防腐剂PC300搅拌均匀，最后加入柠檬酸混匀，得到水性脱蜡剂。
采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法，包括如下步骤：
取病理组织石蜡块进行切片、烤片。然后按照上述制备方法配制水性脱蜡剂并加热至75℃。再将病理组织石蜡切片置于水性脱蜡剂中恒温浸洗，浸洗时间为10min×2次。然后取出病理组织石蜡切片用水冲洗即完成脱蜡，最后进行染色。
作为另一种实施方式，采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法，包括如下步骤：
取病理组织石蜡块进行切片、烤片。然后按照上述制备方法配制水性脱蜡剂并加热至75℃。再将病理组织石蜡切片置于水性脱蜡剂中恒温滴洗，滴洗时间为1min×5次。然后取出病理组织石蜡切片用水冲洗即完成脱蜡，最后进行染色。
实施例2
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
0.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1相同。
实施例3
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
2.5%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
实施例4
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.05%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
实施例5
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、1%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
实施例6
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.125%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
实施例7
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、1%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
实施例8
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、1%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.125%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
实施例9
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、1%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、1%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
实施例10
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.02%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
实施例11
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.3%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
实施例12
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.02%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
实施例13
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.3%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
实施例14
本实施例与实施例1的区别在于：本实施例中采用水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法中，将配制的水性脱蜡剂加热至70℃。本实施例中水性脱蜡剂的组分及水性脱蜡剂的制备方法与实施例1中相同。
实施例15
本实施例与实施例1的区别在于：本实施例中采用水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法中，将配制的水性脱蜡剂加热至80℃。本实施例中水性脱蜡剂的组分及水性脱蜡剂的制备方法与实施例1中相同。
对比例1
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.16%的柠檬酸以及0.3%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例2
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例3
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例4
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
0.1%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例5
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
3%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例6
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.01%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例7
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、2%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例8
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.05%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例9
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、2%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例10
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.05%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例11
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、2%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例12
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.01%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例13
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.4%的柠檬酸以及0.16%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例14
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.01%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例15
一种水性脱蜡剂，包括以下重量百分比的组分：
1.2%的聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、0.65%的C8~C16烷基葡糖苷、0.575%的C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、0.575%的C10~C16烷基苯磺酸钠、0.16%的柠檬酸以及0.35%的液体生物防腐剂PC300。本实施例中水性脱蜡剂的制备方法以及采用上述水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法与实施例1中相同。
对比例16
本对比例与实施例1的区别在于：本对比例中采用水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法中，将配制的水性脱蜡剂加热至60℃。本对比例中水性脱蜡剂的组分及水性脱蜡剂的制备方法与实施例1中相同。
对比例17
本对比例与实施例1的区别在于：本对比例中采用水性脱蜡剂进行病理切片染色的方法中，将配制的水性脱蜡剂加热至90℃。本对比例中水性脱蜡剂的组分及水性脱蜡剂的制备方法与实施例1中相同。
分别按照实施例1~15、对比例1~17的制备方法配制水性脱蜡剂的各组实验数据如表1所示。分别按照实施例1~15、对比例1~17的制备方法配制的水性脱蜡剂的脱蜡效果对比图如图3~图8所示。
表1
Figure 819866DEST_PATH_IMAGE002
从表1及图3~图8中数据分析可知，正常扁桃体生发中心几乎所有的外周B和T细胞必须呈现至少中等强度的胞质阳性反应，棕褐色（图片中呈深黑色）显色区域分布均匀且颜色呈中等强度，代表脱蜡效果较好，组织上没有蜡粒残留，不会影响染色以及胞质显色，蓝色（胞核，图片中呈浅灰色）和褐色（胞质，图片中呈深黑色）分布比例较均匀以及显色对比较明显，如实施例1。实施例2和实施例4脱蜡不干净，有蜡滴杂质残留影响阅片。实施例3褐色（图片中呈深黑色）显色区域较少且较浅，说明高浓度的离子表面活性剂会影响抗原抗体结合，显色越浅，说明酶降解底物的量越小，与酶标抗体（或抗原）相结合的对应的待测抗原（或抗体）量也就越少。其他实施例或对比例都或多或少的有蜡杂质残留（对比例1、4、6、8、16等），显色不均（较浅或较深）影响后续阅片，扁桃体组织受损（对比例5、11等）。
【性能测试及分析】
【试验1】水性脱蜡剂使用方式效果对比
按照实施例1的制备方法配制600ml水性脱蜡剂，加热至75℃时分别对扁桃体组织切片进行恒温滴洗或浸洗，其中浸洗时间为10min×2次，滴洗时间为1min×5次。脱蜡效果如图9所示。
从图9中数据分析可知，水性脱蜡剂的使用方式主要包括2种：浸洗法和滴洗法。而分别采用这两种方式对扁桃体组织切片进行脱蜡，脱蜡效果无明显差异。说明本发明的水性脱蜡剂不受其操作方式/使用场景的限制，无论是手工进行切片染色前的脱蜡处理，还是配套在各类的全自动染色机上，都能起到良好的脱蜡效果。
【试验2】水性脱蜡剂饱和程度测试
按照实施例1的制备方法配制600ml水性脱蜡剂，加热至75℃时分别依次等量平均加入三个染色缸（编号分别为A、B、C）中。再依次分别向染色缸A、染色缸B、染色缸C中加入50片、100片、150片病理组织确认脱蜡的饱和程度。水性脱蜡剂饱和程度测试结果如图10所示。
从图10中数据分析可知，染色缸A中溶液清澈，染色缸B中有少量病理组织悬浮于溶液中，染色缸C中溶液浑浊。由此说明本发明的水性脱蜡剂200ml可溶解的石蜡切片数量在100张以上，重复使用率较高，且溶解在水性脱蜡剂中的石蜡基本都沉浸于容器底部，不会对后续脱蜡过程造成影响。
【试验3】心脏组织脱蜡后染色效果对比实验
按照实施例1的制备方法配制600ml水性脱蜡剂，加热至75℃时分别对6张心脏组织切片进行10分钟的浸洗脱蜡，然后分别进行HE染色、IHC染色、特殊染色（弹力纤维染色）实验。和二甲苯（对照组）处理过的心脏组织切片进行染色效果的比较。结果如下图11、图12和图13所示。
从图11、图12和图13中数据分析可知，利用水性脱蜡剂对心脏组织切片浸洗脱蜡后进行HE染色、IHC染色、特殊染色（弹力纤维染色）实验，染色效果和利用二甲苯（对照组）处理过的心脏组织切片进行染色实验的效果较为一致，说明本发明的水性脱蜡剂是可以对组织切片起到很好脱蜡效果的溶液，并且可以起到替代常用脱蜡剂-二甲苯的作用。通过对切片脱蜡后的染色效果来看，扁桃体组织胞核、胞质等部位染色比较充分，抗原定位清晰，背景干净，且与经二甲苯脱蜡后的组织无较大差异。
以上所述仅是对本发明的优选实施例及原理进行了详细说明，对本领域的普通技术人员而言，依据本发明提供的思想，在具体实施方式上会有改变之处，而这些改变也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种水性脱蜡剂，其特征在于，包括以下重量百分比的组分：
0.5%~5.5%的表面活性剂、0.02%~0.3%的抗氧化剂以及0.02%~0.3%的防腐剂；
其中，所述表面活性剂按重量百分比计包括0.25%~3.5%的非离子表面活性剂以及0.25%~2.0%的阴离子表面活性剂。
2.根据权利要求1所述的一种水性脱蜡剂，其特征在于，所述非离子表面活性剂为聚氧乙烯醚类和/或烷基葡糖苷类和/或脂肪酸甘油酯类和/或多元醇类表面活性剂。
3.根据权利要求2所述的一种水性脱蜡剂，其特征在于，所述非离子表面活性剂为聚氧乙烯-8-辛基苯基醚、C8~C16烷基葡糖苷、单硬脂酸甘油酯、脂肪酸山梨坦、聚山梨酯中的一种或多种的组合。
4.根据权利要求1所述的一种水性脱蜡剂，其特征在于，所述阴离子表面活性剂为C10~C16醇聚氧乙烯醚硫酸酯钠、C10~C16烷基苯磺酸钠、硬脂酸中的一种或多种的组合。
5.根据权利要求1所述的一种水性脱蜡剂，其特征在于，所述抗氧化剂为柠檬酸、丁基羟基茴香醚（BHA）、二丁基羟基甲苯（BHT）中的一种或多种的组合。
6.根据权利要求1所述的一种水性脱蜡剂，其特征在于，所述防腐剂为液体生物防腐剂PC300、PC150、PC950中的一种或多种的组合。
7.一种如权利要求1~6中任意一项所述的水性脱蜡剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
（S.1）分别称取上述重量百分比的非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂、抗氧化剂以及防腐剂；
（S.2）将步骤（S.1）中称取的非离子表面活性剂、阴离子表面活性剂与蒸馏水混合均匀，然后加入防腐剂搅拌均匀，最后加入抗氧化剂混匀，得到水性脱蜡剂。
8.如权利要求1~6中任意一项所述的水性脱蜡剂在病理切片染色实验中的应用。
9.一种病理切片染色方法，其特征在于，包括如下步骤：
取组织石蜡块进行切片、烤片，然后配制如权利要求1~6中任意一项所述的水性脱蜡剂并进行预加热，再将组织石蜡切片置于水性脱蜡剂中恒温浸泡，然后取出组织石蜡切片用水冲洗即完成脱蜡，最后进行染色。
10.根据权利要求9所述的一种利用水性脱蜡剂在病理切片染色实验中的染色方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
取组织石蜡块进行切片、烤片，然后配制水性脱蜡剂并加热至70~80℃，再将组织石蜡切片置于水性脱蜡剂中恒温浸洗或滴洗，然后取出组织石蜡切片用水冲洗即完成脱蜡，最后进行染色。
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