CN115501342A - 类固醇激素作为孤儿粘附类受体adgrg2拮抗剂配体的应用 - Google Patents
类固醇激素作为孤儿粘附类受体adgrg2拮抗剂配体的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115501342A CN115501342A CN202210983166.4A CN202210983166A CN115501342A CN 115501342 A CN115501342 A CN 115501342A CN 202210983166 A CN202210983166 A CN 202210983166A CN 115501342 A CN115501342 A CN 115501342A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- adgrg2
- antagonist
- deoxycorticosterone
- doc
- receptor
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 101000775058 Homo sapiens Adhesion G-protein coupled receptor G2 Proteins 0.000 title claims abstract description 67
- 102100031836 Adhesion G-protein coupled receptor G2 Human genes 0.000 title claims abstract description 66
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 title claims abstract description 31
- 239000003270 steroid hormone Substances 0.000 title claims abstract description 20
- 239000003446 ligand Substances 0.000 title claims abstract description 17
- ZESRJSPZRDMNHY-YFWFAHHUSA-N 11-deoxycorticosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 ZESRJSPZRDMNHY-YFWFAHHUSA-N 0.000 claims abstract description 51
- ZESRJSPZRDMNHY-UHFFFAOYSA-N de-oxy corticosterone Natural products O=C1CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)C(=O)CO)C4C3CCC2=C1 ZESRJSPZRDMNHY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 51
- 229940119740 deoxycorticosterone Drugs 0.000 claims abstract description 51
- 239000002583 male contraceptive agent Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 18
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 9
- 239000012453 solvate Substances 0.000 claims description 9
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 8
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 5
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 5
- -1 small molecule compound Chemical class 0.000 claims description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 4
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 2
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 claims description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 claims 1
- FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N dehydroepiandrosterone Chemical compound C1[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)(C(CC4)=O)[C@@H]4[C@@H]3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-USOAJAOKSA-N 0.000 abstract description 17
- FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N Dehydroepiandrosterone Natural products C1C(O)CCC2(C)C3CCC(C)(C(CC4)=O)C4C3CC=C21 FMGSKLZLMKYGDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 16
- 229960002847 prasterone Drugs 0.000 abstract description 16
- 239000000556 agonist Substances 0.000 abstract description 13
- 102000019997 adhesion receptor Human genes 0.000 abstract description 9
- 108010013985 adhesion receptor Proteins 0.000 abstract description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 4
- 102000016978 Orphan receptors Human genes 0.000 abstract description 2
- 108070000031 Orphan receptors Proteins 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 210000005239 tubule Anatomy 0.000 description 12
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 8
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 7
- 102000003688 G-Protein-Coupled Receptors Human genes 0.000 description 6
- 108090000045 G-Protein-Coupled Receptors Proteins 0.000 description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 201000010063 epididymitis Diseases 0.000 description 5
- 238000011813 knockout mouse model Methods 0.000 description 5
- 210000004995 male reproductive system Anatomy 0.000 description 5
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 4
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 4
- 208000007466 Male Infertility Diseases 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 description 3
- 230000009103 reabsorption Effects 0.000 description 3
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 101100055108 Mus musculus Adgrg2 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 210000000254 ciliated cell Anatomy 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 230000007783 downstream signaling Effects 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 239000006274 endogenous ligand Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 208000017517 male reproductive system disease Diseases 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 102100023328 G-protein coupled estrogen receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 101000829902 Homo sapiens G-protein coupled estrogen receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001063463 Homo sapiens Leucine-rich repeat-containing G-protein coupled receptor 4 Proteins 0.000 description 1
- 102100031035 Leucine-rich repeat-containing G-protein coupled receptor 4 Human genes 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101100225046 Schizosaccharomyces pombe (strain 972 / ATCC 24843) ecl2 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 108010062475 Type 2 Angiotensin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000025309 Type 2 Angiotensin Receptor Human genes 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000000270 basal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 102000007378 beta-Arrestin 1 Human genes 0.000 description 1
- 108010032969 beta-Arrestin 1 Proteins 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 1
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 1
- 238000000225 bioluminescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229940121657 clinical drug Drugs 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000003596 drug target Substances 0.000 description 1
- 210000000918 epididymis Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000000509 infertility Diseases 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 231100000535 infertility Toxicity 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical group [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
- A61K31/57—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone
- A61K31/573—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of two carbon atoms, e.g. pregnane or progesterone substituted in position 21, e.g. cortisone, dexamethasone, prednisone or aldosterone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
- A61P15/16—Masculine contraceptives
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明提供一种类固醇激素作为孤儿粘附类受体ADGRG2拮抗剂配体的应用,属于生物工程和生物医药技术领域。本发明通过实验证明,类固醇激素脱氧皮质酮可作为孤儿受体ADGRG2的配体,特异性地结合ADGRG2,并拮抗激动剂脱氢表雄酮诱导的ADGRG2下游Gs信号通路,表明其具有作为男性避孕药物的潜力,因此具有良好的实际应用之价值。
Description
技术领域
本发明属于生物工程和生物医药技术领域,具体涉及类固醇激素作为孤儿粘附类受体ADGRG2拮抗剂配体的应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解,而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
目前男性不育正在从一个个人问题转变为一个公共健康问题,现在又将近15%的育龄夫妇是不育症,男性不育症占其中的二分之一。目前对于男性不孕症的治疗研究仍未有确定的机制和靶点。G蛋白偶联受体(GPCRs)是人类基因组编码的最大膜蛋白家族,也是最大的一类药物靶点,目前约有三分之一的临床药物直接作用于GPCR。近年来在男性生殖系统的GPCR研究也越来越多,比如血管紧张素AT2受体在附睾腔的基底细胞调节质子的分泌;LRG4受体在调控附睾上皮和间质细胞地相互作用具有重要作用,LGR4敲除小鼠的附睾小管不能正常地伸长和卷曲;GPER在精子成熟、保护和储存中具有重要作用。
粘附类G蛋白偶联受体(aGPCRs)是GPCR中的第二大家族,一共有33个成员。所有的aGPCRs除了具有经典的七次跨膜结构,还有一些独特的特征,都具有很长且具有粘附类潜力的N端,N端都包括一个经诱导的可自水解的近膜结构域。粘附类受体ADGRG2因在雄性生殖系统中的输出小管和附睾头部特异性高表达,从而引起广泛关注。张道来的研究表明ADGRG2/β-arrestin 1/Gq/CFTR超复合物定位于输出小管中非纤毛细胞的顶端膜,并发挥区域信号中枢的作用,控制管腔内的液体重吸收,维持输出小管和附睾起始段的pH和氯离子稳态,对维持精子发育成熟具有重要功能。ADGRG2的下游信号转导已被广泛研究,其具有组成性的Gs和Gq活力,然而ADGRG2仍未发现其内源性配体。
基于ADGRG2在雄性生殖系统中起到重要作用,其已成为开发男性生殖疾病药物或男性避孕药的新靶点。因此找到特异性结合ADGRG2的内源性配体,并以此开发药物可能构成开发男性生殖疾病治疗药或/和诊断的基础。
发明内容
针对现有技术存在的问题,本发明提供类固醇激素作为孤儿粘附类受体ADGRG2拮抗剂配体的应用。本发明通过研究发现,类固醇激素脱氧皮质酮(DOC)可作为孤儿受体ADGRG2的配体,特异性地结合ADGRG2,并拮抗激动剂脱氢表雄酮(DHEA)诱导的ADGRG2下游Gs信号通路,表明其具有作为男性避孕药物的潜力,因此具有良好的实际应用之价值。
具体的,本发明涉及以下技术方案:
本发明的第一个方面,提供ADGRG2调节剂在制备男性避孕药物中的应用。
其中,所述ADGRG2调节剂是受体ADGRG2拮抗剂或受体ADGRG2抑制表达剂。
进一步的,所述ADGRG2拮抗剂包括抑制ADGRG2的配体、多肽、抗体或小分子化合物。
所述配体包括类固醇激素DOC。
本发明的第二个方面,提供脱氧皮质酮在作为受体ADGRG2拮抗剂配体中的应用。
本发明的第三个方面,提供一种药物组合物,其包含上述脱氧皮质酮或其溶剂化物或其药学上可接受的盐。
以及,一种药物制剂,其包含上述脱氧皮质酮或其溶剂化物或其药学上可接受的盐,和至少一种药学上可接受的辅料和/或载体。
本发明的第四个方面,提供上述脱氧皮质酮或其溶剂化物或其药学上可接受的盐或者上述药物组合物或药物制剂在制备ADGRG2拮抗剂药物或试剂中的应用。
其中,所述ADGRG2拮抗剂药物可以为男性避孕药物。
本发明的第五个方面,提供一种避孕的方法,其包括向受试者施用治疗有效量的DOC或所述药物组合物或药物制剂。
本发明所述受试者是指已经是治疗、观察或实验的对象的动物,优选指哺乳动物,最优选指人,所述受试者为雄(男)性。
以上一个或多个技术方案的有益技术效果:
上述技术方案通过筛选大量的类固醇化合物,发现了ADGRG2的内源性小分子拮抗剂。之前研究表明ADGRG2在调控男性生殖系统输出小管内液体重吸收和维持精子成熟功能方面中的重要作用,在男生生殖领域内技术人员可通过该小分子拮抗剂实现对ADGRG2及其下游通路的调节作用,该拮抗剂具有开发成为男性避孕药的潜能。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解,本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明,并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明实施例1中类固醇激素DOC诱导的粘附类受体ADGRG2的胞外端构型变化dose曲线效果图;
图2为本发明实施例1中类固醇激素DOC抑制激动剂DHEA刺激下鼠源和人源粘附类受体ADGRG2的Gs信号通路效果图;
图3为本发明实施例1中类固醇激素DOC拮抗激动剂DHEA刺激下粘附类受体ADGRG2介导的野生型和ADGRG2敲除小鼠的输出小管原代细胞CFTR电流图。
图4为本发明实施例1中类固醇激素DOC拮抗激动剂DHEA刺激下粘附类受体ADGRG2介导的野生型和ADGRG2敲除小鼠的输出小管原代细胞CFTR电流统计图。
图5为本发明实施例1中类固醇激素DOC抑制的激动剂DHEA刺激下过表达粘附类受体ADGRG2和CFTR或单独表达CFTR的HEK293细胞的CFTR电流图。
具体实施方式
应该指出,以下详细说明都是例示性的,旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明,本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是,这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式,而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的,除非上下文另外明确指出,否则单数形式也意图包括复数形式,此外,还应当理解的是,当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时,其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。下列具体实施方式中如果未注明具体条件的实验方法,通常按照本领域技术内的分子生物学的常规方法和条件,这种技术和条件在文献中有完整解释。参见例如Sambrook等人,《分子克隆:实验手册》中所述的技术和条件,或按照制造厂商所建议的条件。
如前所述,已有研究证明粘附类受体ADGRG2在男性生殖系统功能具有重要调节作用。有鉴于此,本发明提供了一种类固醇激素DOC,该激素可作为粘附类受体ADGRG2的内源性拮抗剂,具有成为男性避孕药的潜能。
本发明的一个具体实施方式中,提供ADGRG2调节剂在制备男性避孕药物中的应用。
其中,所述ADGRG2调节剂是受体ADGRG2拮抗剂或受体ADGRG2抑制表达剂。
本发明的又一具体实施方式中,所述ADGRG2拮抗剂包括抑制ADGRG2的配体、多肽、抗体或小分子化合物。
本发明的又一具体实施方式中,所述配体包括类固醇激素DOC。
本发明的又一具体实施方式中,提供脱氧皮质酮在作为受体ADGRG2拮抗剂配体中的应用。
本发明的又一具体实施方式中,提供一种药物组合物,其包含上述脱氧皮质酮或其溶剂化物或其药学上可接受的盐。
本发明的又一具体实施方式中,提供一种药物制剂,其包含上述脱氧皮质酮或其溶剂化物或其药学上可接受的盐,和至少一种药学上可接受的辅料和/或载体。
本发明所述辅料是指药物组合物或药物制剂中除有效成分之外的成分,其对受试者无毒。本领域常用的辅料比如缓冲剂、稳定剂、防腐剂或赋型剂,常用的赋形剂例如粘合剂、填充剂、润湿剂、崩解剂等。
作为示例,本发明的所述制剂中可选用的赋形剂包括但不限于:所述赋形剂选自磷酸钙、硬脂酸镁、滑石粉、糊精、淀粉、凝胶纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠盐和聚乙烯吡咯烷酮。
本发明所述药物载体可以是药学上可接受的溶剂、悬浮剂、囊泡、纳米材料等,用于将递送至动物或人体内。载体可以是液体或固体,并按照计划的给药方式进行选择,同时,蛋白和脂质体也是药物载体。
本领域技术人员可采用公知的技术将本发明的化合物配制成药物组合物或制剂。比如将本发明上述脱氧皮质酮与药用辅料混合,然后如果需要,使所得混合物形成所需的形状。以及,除本发明提到的以外,合适的药用辅料是本领域已知的,例如参见2005年版的药用辅料手册(原著第四版),作者(英)R.C.罗(RaymondCRowe)(美)P.J.舍斯基(PaulJSheskey)。
本发明的又一具体实施方式中,提供上述脱氧皮质酮或其溶剂化物或其药学上可接受的盐或者上述药物组合物或药物制剂在制备ADGRG2拮抗剂药物或试剂中的应用。
其中,所述ADGRG2拮抗剂药物可以为男性避孕药物。
本发明的又一具体实施方式中,提供一种避孕的方法,其包括向受试者施用治疗有效量的DOC或所述药物组合物或药物制剂。
本发明所述受试者是指已经是治疗、观察或实验的对象的动物,优选指哺乳动物,最优选指人,所述受试者为雄(男)性。
本发明所述治疗有效量是指包括本发明化合物在内的活性化合物或药物制剂的量,该量可引起研究者、兽医、医生或其他医疗人员所追求的组织系统、动物或人的生物学或医学响应,所述响应包括减轻或部分减轻所述治疗疾病、综合征、病症或障碍的症状。
本领域的研究者、兽医、医生或其他医疗人员可根据临床试验或者本领域其他公知的手段获知可使用的治疗有效量的范围。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明,但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例1类固醇激素DOC特异性结合ADGRG2并拮抗ADGRG2下游信号通路,并调控ADGRG2在输出小管中的功能
实验步骤:
1.从阿拉丁试剂官网购买商业化类固醇激素DOC。
2.采用分子生物学方法,构建基因重组的鼠源ADGRG2重组质粒,以HEK293细胞过表达鼠ADGRG2,给予DOC刺激,利用ADGRG2N端的Nluc基团和胞外环上的Flash基团的生物发光共振能量转移方法可以检测DOC诱导的ADGRG2自身构型变化程度,以生物发光功能能量转移的程度反映DHEA与ADGRG2的特异性结合。
3.以HEK293细胞过表达人源或鼠源ADGRG2,利用Glosensor方法可以检测第二信使cAMP的原理,给予固定浓度激动剂DHEA刺激细胞,使胞内cAMP浓度上升,在此基础上给予类固醇拮抗剂,以引起细胞内cAMP浓度下降的程度来表征DOC抑制ADGRG2的Gs信号通路情况。
4.已有研究证明粘附类受体ADGRG2在调控输出小管的水分重吸收方面具有重要作用,并且在输出小管的非纤毛细胞中ADGRG2介导CFTR的电流。方法:分离野生鼠和敲除鼠的输出小管单细胞,腺病毒ADGRG2-promoter-RFP-labeled病毒感染细胞。给予激动剂DHEA刺激原代细胞,再给予拮抗剂DOC刺激,电生理手段记录ADGRG2-promoter-RFP-labeled细胞的电流。
5.HEK293细胞过表达人源或鼠源ADGRG2与CFTR或单独过表达CFTR,先给予固定浓度激动剂DHEA刺激,在此基础上给予拮抗剂DOC刺激,电生理手段记录DOC诱导的两种细胞全细胞电流。
将DOC用PBS配制成工作浓度为10-10M、10-9M、10-8M、10-7M、10-6M、10-5M、10-4M,HEK293细胞过表达Nluc-ADGRG2-ECL1/2/3-Flash,用底物Flash-EDT2 37℃恒温孵育40分钟,PBS清洗两次,再给予不同浓度的DOC刺激,利用多功能酶标仪实时记录荧光值,对结果进行统计分析作图,结果见图1。
将DOC用PBS配制成工作浓度为10-10M、10-9M、10-8M、10-7M、10-6M、10-5M、10-4M,HEK293细胞中共表达人或鼠ADGRG2和Glosensor,给予不同浓度的拮抗剂DOC 37℃孵育半小时,再给予30uM激动剂DHEA刺激,阴性对照为表达空载体pcDNA和Glosensor的HEK293细胞,利用多功能酶标仪实时记录荧光值,对结果进行统计分析作图,结果见图2。
将野生鼠和ADGRG2全身敲除小鼠脱颈处死,分离输出小管,胶原酶消化半小时并打散成单细胞,用腺病毒ADGRG2-promoter-RFP-labeled病毒感染,48h后消化原代细胞至24mm×24mm的玻片上,12h原代细胞贴壁后,取细胞玻片至荧光显微镜的载物台上,给予不同浓度的DOC孵育15min,再用20uM的激动剂DHEA刺激,挑选发红色荧光的原代细胞用HEKAEPC10双探头放大器记录全细胞电流,结果见图3和图4。
体外用HEK293细胞检测DOC诱导的CFTR电流的变化,将DOC用PBS配制成工作浓度为10-10M、10-9M、10-8M、10-7M、10-6M、10-5M、10-4M,在共表达人或鼠ADGRG2与CFTR或单独过表达CFTR的HEK293细胞中,给予不同浓度的拮抗剂DOC刺激15min,再用20uM激动剂DHEA刺激,用HEKA EPC10双探头放大器记录全细胞电流,结果见图5。
实验结果表明,DOC能够特异性地结合黏附类受体ADGRG2,并且诱导胞外环ECL2的变化的半数有效浓度是350nM;DOC可以拮抗黏附类受体ADGRG2受DHEA诱导的Gs通路,其中人源和鼠源半数有效浓度各是8.6nM和37.6nM;DOC可以拮抗DHEA诱导的野生鼠和共表达人或鼠ADGRG2和CFTR的HEK293细胞中的全细胞电流增加,且随着剂量的增加抑制效果增强;体外过表达体系DOC拮抗DHEA诱导的人或鼠ADGRG2介导的CFTR电流增加的半数有效浓度分别是2.5nM和12.7nM。
上述实验结果表明本实施例中提供的类固醇化合物DOC能够靶向ADGRG2成为其特异性配体,并能够有效拮抗激动剂DHEA诱导的Gs信号通路。从而,本发明提供了有前景的化合物,具有发展成为男性避孕药的潜能。
最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.ADGRG2调节剂在制备男性避孕药物中的应用;
所述ADGRG2调节剂是受体ADGRG2拮抗剂或受体ADGRG2抑制表达剂。
2.如权利要求1所述应用,其特征在于,所述ADGRG2拮抗剂包括抑制ADGRG2的配体、多肽、抗体或小分子化合物;
优选的,所述配体包括类固醇激素DOC。
3.脱氧皮质酮在作为受体ADGRG2拮抗剂配体中的应用。
4.一种药物组合物,其特征在于,包含脱氧皮质酮或其溶剂化物或其药学上可接受的盐。
5.一种药物制剂,其特征在于,包含脱氧皮质酮或其溶剂化物或其药学上可接受的盐,和至少一种药学上可接受的辅料和/或载体。
6.如权利要求5所述的药物制剂,其特征在于,所述辅料包括缓冲剂、稳定剂、防腐剂或赋型剂;
所述载体是药学上可接受的溶剂、悬浮剂、囊泡、纳米材料。
7.脱氧皮质酮或其溶剂化物或其药学上可接受的盐或权利要求4所述药物组合物或权利要求5或6所述药物制剂在制备ADGRG2拮抗剂药物或试剂中的应用。
8.如权利要求7所述应用,其特征在于,所述ADGRG2拮抗剂药物包括男性避孕药物。
9.一种避孕的方法,其特征在于,包括向受试者施用治疗有效量的DOC或权利要求4所述药物组合物或权利要求5或6所述药物制剂。
10.如权利要求9所述方法,其特征在于,所述受试者为雄性。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210983166.4A CN115501342B (zh) | 2022-08-16 | 2022-08-16 | 类固醇激素作为孤儿粘附类受体adgrg2拮抗剂配体的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202210983166.4A CN115501342B (zh) | 2022-08-16 | 2022-08-16 | 类固醇激素作为孤儿粘附类受体adgrg2拮抗剂配体的应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115501342A true CN115501342A (zh) | 2022-12-23 |
CN115501342B CN115501342B (zh) | 2024-03-08 |
Family
ID=84501207
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202210983166.4A Active CN115501342B (zh) | 2022-08-16 | 2022-08-16 | 类固醇激素作为孤儿粘附类受体adgrg2拮抗剂配体的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115501342B (zh) |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105616553A (zh) * | 2016-01-10 | 2016-06-01 | 李玉姐 | 一种药物透皮吸收剂的制备及应用 |
CN106977588A (zh) * | 2017-03-15 | 2017-07-25 | 山东大学 | 一种孤儿受体gpr64的配体多肽及其编码序列和应用 |
US20170333522A1 (en) * | 2016-05-08 | 2017-11-23 | Nariman Balenga | Expression and function of gpr64/adgrg2 in endocrine systems and methods to target it therapeutically |
CN114702570A (zh) * | 2022-03-23 | 2022-07-05 | 山东大学 | aGPCR拮抗剂 |
-
2022
- 2022-08-16 CN CN202210983166.4A patent/CN115501342B/zh active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105616553A (zh) * | 2016-01-10 | 2016-06-01 | 李玉姐 | 一种药物透皮吸收剂的制备及应用 |
US20170333522A1 (en) * | 2016-05-08 | 2017-11-23 | Nariman Balenga | Expression and function of gpr64/adgrg2 in endocrine systems and methods to target it therapeutically |
CN106977588A (zh) * | 2017-03-15 | 2017-07-25 | 山东大学 | 一种孤儿受体gpr64的配体多肽及其编码序列和应用 |
CN114702570A (zh) * | 2022-03-23 | 2022-07-05 | 山东大学 | aGPCR拮抗剂 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
张道来: "ADGRG2对输出小管液体重吸收和男性生育能力的调控机制", 中国博士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑, no. 12, pages 067 - 26 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115501342B (zh) | 2024-03-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Cai et al. | Activation of Wnt/β-catenin signalling promotes mesenchymal stem cells to repair injured alveolar epithelium induced by lipopolysaccharide in mice | |
Bock-Marquette et al. | Thymosin β4 activates integrin-linked kinase and promotes cardiac cell migration, survival and cardiac repair | |
Wang et al. | Role of K+ channel expression in polyamine-dependent intestinal epithelial cell migration | |
King et al. | From structure to disease: the evolving tale of aquaporin biology | |
Kuan et al. | The cyclin kinase inhibitor p21WAF1, CIP1 is increased in experimental diabetic nephropathy: potential role in glomerular hypertrophy. | |
Siu et al. | Melatonin and prostate cancer cell proliferation: interplay with castration, epidermal growth factor, and androgen sensitivity | |
JP4571695B2 (ja) | 疾患関連タンパク質 | |
Kariagina et al. | Amphiregulin mediates estrogen, progesterone, and EGFR signaling in the normal rat mammary gland and in hormone-dependent rat mammary cancers | |
González-Agüero et al. | Progesterone effects on cell growth of U373 and D54 human astrocytoma cell lines | |
US20080188449A1 (en) | Treatment of Conditions Caused By Calcium Abnormalities | |
Yu et al. | Kinetic alterations of collagen and elastic fibres and their association with cardiac function in acute myocardial infarction | |
US20060040253A1 (en) | Use of Smad3 inhibitor in the treatment of fibrosis dependent on epithelial to mesenchymal transition as in the eye and kidney | |
US6485972B1 (en) | WNT signalling in reproductive organs | |
Es-Salah-Lamoureux et al. | HIV-Tat induces a decrease in IKr and IKs via reduction in phosphatidylinositol-(4, 5)-bisphosphate availability | |
Gkika et al. | Testosterone‐androgen receptor: the steroid link inhibiting TRPM8‐mediated cold sensitivity | |
ES2595579T3 (es) | Agente tipo SorCS1 para su uso en el tratamiento de la resistencia a la insulina y enfermedades relacionadas con la misma | |
Miao et al. | Inhibition of MyD88 by a novel inhibitor reverses two-thirds of the infarct area in myocardial ischemia and reperfusion injury | |
Li et al. | Transplantation of mesenchymal stem cells modulated Cx43 and Cx45 expression in rats with myocardial infarction | |
Bajpai et al. | Peripubertal aromatase inhibition in male rats has adverse long-term effects on bone strength and growth and induces prostatic hyperplasia | |
CN115501342B (zh) | 类固醇激素作为孤儿粘附类受体adgrg2拮抗剂配体的应用 | |
Bates et al. | Insulin receptor-related receptor expression in non-A intercalated cells in the kidney | |
Omer et al. | Evidence for the role of adenosine 5′-triphosphate-binding cassette (ABC)-A1 in the externalization of annexin 1 from pituitary folliculostellate cells and ABCA1-transfected cell models | |
CN115554403B (zh) | 类固醇激素dhea作为受体adgrg2激动剂配体的应用 | |
Su et al. | Small GTPase Rab14 down-regulates UT-A1 urea transport activity through enhanced clathrin-dependent endocytosis | |
Mahmood et al. | The effects of retinoid status on TGF β expression during mouse embryogenesis |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |