CN115490903B - 一种多功能丝素蛋白彩色隐形眼镜及其制备方法 - Google Patents
一种多功能丝素蛋白彩色隐形眼镜及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115490903B CN115490903B CN202211217085.XA CN202211217085A CN115490903B CN 115490903 B CN115490903 B CN 115490903B CN 202211217085 A CN202211217085 A CN 202211217085A CN 115490903 B CN115490903 B CN 115490903B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lens
- solution
- silk fibroin
- anthocyanin
- ultrapure water
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J7/00—Chemical treatment or coating of shaped articles made of macromolecular substances
- C08J7/12—Chemical modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J7/00—Chemical treatment or coating of shaped articles made of macromolecular substances
- C08J7/04—Coating
- C08J7/06—Coating with compositions not containing macromolecular substances
- C08J7/065—Low-molecular-weight organic substances, e.g. absorption of additives in the surface of the article
-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02C—SPECTACLES; SUNGLASSES OR GOGGLES INSOFAR AS THEY HAVE THE SAME FEATURES AS SPECTACLES; CONTACT LENSES
- G02C7/00—Optical parts
- G02C7/02—Lenses; Lens systems ; Methods of designing lenses
- G02C7/04—Contact lenses for the eyes
- G02C7/049—Contact lenses having special fitting or structural features achieved by special materials or material structures
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08J—WORKING-UP; GENERAL PROCESSES OF COMPOUNDING; AFTER-TREATMENT NOT COVERED BY SUBCLASSES C08B, C08C, C08F, C08G or C08H
- C08J2389/00—Characterised by the use of proteins; Derivatives thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Ophthalmology & Optometry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
- Eyeglasses (AREA)
Abstract
本发明涉及隐形眼镜领域,具体涉及一种多功能丝素蛋白彩色隐形眼镜及其制备方法。本发明提供一种丝素蛋白彩色隐形眼镜,具有花青素染色的镜片;所述镜片为二氧化硅纳米粒子、丙烯酰胺、丝素蛋白的反应产物;所述镜片在进行花青素染色之前或之后经过氢氟酸溶液浸泡。所述丝素蛋白彩色隐形眼镜具有良好的生物相容性、高透氧性以及花青素活性。
Description
本申请要求申请号为202210423254.9,申请日为2022年04月21日,发明名称为“一种多功能丝素蛋白彩色隐形眼镜及其制备方法”的中国发明专利申请的优先权。
技术领域
本发明涉及隐形眼镜领域,具体涉及一种基于花青素染色的多功能丝素蛋白彩色隐形眼镜及其制备方法。
背景技术
随着科学的发展,隐形眼镜从单一功能(矫正功能)逐步朝向多功能兼顾(治疗、预防、美容等)方向发展。隐形眼镜基于其三维网络空间结构可在网络中负载特定药物分子,在佩戴过程中药物分子缓慢释放用于治疗眼部疾病。如果镜片能在佩戴过程中提示药物的释放量将对眼部疾病的治疗意义重大,但目前相关研究甚少。另外,在隐形眼镜中根据工艺加入颜料或染料分子即可制备具有美容装饰功能的彩色隐形眼镜。彩色隐形眼镜由于其装饰美容效果的强吸引力,在年轻人群众中被广泛追捧。但目前的彩色隐形眼镜基础材质仍然以聚合物水凝胶为主,彩色部分根据工艺更多是采用金属居多的颜料。这就导致彩色隐形眼镜在没有克服微塑料对环境产生威胁风险的同时,还进一步增加了配戴过程中对眼睛健康带来的极大安全隐患。此外,许多隐形眼镜的透气性不好,长期佩戴会导致眼角膜缺氧,使眼睛出现红肿、疼痛的情况。
因此,有必要开发一种安全性高、透气性好的多功能彩色隐形眼镜。
发明内容
为满足上述领域的需求,本发明使用二氧化硅纳米粒子、丙烯酰胺、丝素蛋白制成多孔丝素蛋白膜,并采用花青素对多孔丝素蛋白膜进行染色,得到一种安全性高、透氧性好且绿色环保的彩色隐形眼镜。
一方面,本发明提供一种丝素蛋白彩色隐形眼镜,其特征在于,具有花青素染色的镜片;所述镜片为二氧化硅纳米粒子、丙烯酰胺、丝素蛋白的反应产物;所述镜片在进行花青素染色之前或之后经过氢氟酸溶液浸泡。
优选地,所述镜片的制备方法包括:将二氧化硅纳米粒子溶液、丙烯酰胺溶液、丝素蛋白溶液混匀后滴入隐形眼镜模具中,风干得到镜片。
优选地,所述二氧化硅纳米粒子溶液的浓度为0.1%~10%(g/mL),所述丙烯酰胺溶液的浓度为0.01%~1%(g/mL),所述丝素蛋白溶液的浓度为1%~20%(g/mL);将所述二氧化硅纳米粒子溶液、所述丙烯酰胺溶液和所述丝素蛋白溶液按照1:1:10的体积比混匀。
优选地,所述二氧化硅纳米粒子的粒径为1~20nm。
优选地,采用整体浸染法或旋涂法对风干的镜片进行花青素染色;
所述整体浸染法包括如下步骤:将风干的镜片依次浸泡于质量分数为1~10%的氢氟酸溶液和无菌超纯水中各20~120分钟;用无菌超纯水清洗镜片;将洗净的镜片浸泡于pH为7~8的5~50%(g/mL)的花青素溶液中,于25~45℃振荡孵育5~50小时;取出着色的镜片,放入无菌超纯水中浸泡30~300分钟;用无菌超纯水清洗镜片,即得到整体着色镜片;
所述旋涂法包括如下步骤:将镜片放于旋涂仪中,打开旋涂仪,将花青素溶液滴涂在镜片的部分位置,待液体逐渐渗入镜片内,再重复滴涂;将着色的镜片依次浸泡于质量分数为1~10%的氢氟酸溶液和无菌超纯水中各20~120分钟;用无菌超纯水清洗镜片,即得到部分着色镜片。
另一方面,本发明提供制备丝素蛋白彩色隐形眼镜的方法,其特征在于,包括如下步骤:将二氧化硅纳米粒子溶液、丙烯酰胺溶液、丝素蛋白溶液混匀后滴入隐形眼镜模具中,风干得到镜片;对风干的镜片进行花青素染色;在进行花青素染色之前或之后用氢氟酸溶液浸泡所述镜片。
优选地,所述二氧化硅纳米粒子溶液的浓度为0.1%~10%(g/mL),所述丙烯酰胺溶液的浓度为0.01%~1%(g/mL),所述丝素蛋白溶液的浓度为1%~20%(g/mL);将所述二氧化硅纳米粒子溶液、所述丙烯酰胺溶液和所述丝素蛋白溶液按照1:1:10的体积比混匀。
优选地,所述二氧化硅纳米粒子的粒径为1~20nm。
优选地,将二氧化硅纳米粒子溶液、丙烯酰胺溶液、丝素蛋白溶液混匀后滴入隐形眼镜模具中,置于温度为25~45℃、湿度为10%~50%的环境中进行风干。
优选地,采用整体浸染法或旋涂法对风干的镜片进行花青素染色;
所述整体浸染法包括如下步骤:将风干的镜片依次浸泡于质量分数为1~10%的氢氟酸溶液和无菌超纯水中各20~120分钟;用无菌超纯水清洗镜片;将洗净的镜片浸泡于pH为7~8的5~50%(g/mL)的花青素溶液中,于25~45℃振荡孵育5~50小时;取出着色的镜片,放入无菌超纯水中浸泡30~300分钟;用无菌超纯水清洗镜片,即得到整体着色镜片;
所述旋涂法包括如下步骤:将镜片放于旋涂仪中,打开旋涂仪,将花青素溶液滴涂在镜片的部分位置,待液体逐渐渗入镜片内,再重复滴涂;将着色的镜片依次浸泡于质量分数为1~10%的氢氟酸溶液和无菌超纯水中各20~120分钟;用无菌超纯水清洗镜片,即得到部分着色镜片。
本发明提供的多功能丝素蛋白彩色隐形眼镜包含丝素蛋白镜片以及结合在丝素蛋白镜片上的花青素。所述丝素蛋白镜片是丙烯酰胺分子及二氧化硅纳米颗粒双重诱导的多孔丝素蛋白膜,其制备方法为:将二氧化硅纳米粒子和丙烯酰胺分子与丝素蛋白溶液共混,诱导无定型结构的丝素蛋白形成结晶稳定的多孔丝素蛋白膜,然后通过反复浸泡和冲洗去除丙烯酰胺。所述丝素蛋白镜片的多孔结构赋予了隐形眼镜抗蓝光、高透氧的功能。所述丝素蛋白镜片通过静电作用与花青素分子结合,从而发挥花青素活性成分的作用。为了使花青素分子成功着色镜片,本发明采用花青素分子浸染法对镜片进行染色,该方法中花青素分子与丝素蛋白中的氨基酸残基发生静电吸附物理作用,从而得到染色稳定的彩色隐形眼镜。该染色原理一方面可提高花青素分子与丝素蛋白的结合稳定性,另一方面又不影响花青素分子的物理化学性能。
在一些实施例中,所述丙烯酰胺分子诱导丝素蛋白成膜的反应中,丝素蛋白浓度为1%~20%,丙烯酰胺浓度为0.01%~1%,二氧化硅纳米粒子的掺杂浓度为0.1%~10%。在一些实施例中,所述二氧化硅纳米粒子的粒径为1~20nm。在一些实施例中,所述丙烯酰胺分子诱导丝素蛋白成膜的温度范围为25~45℃。在一些实施例中,所述丙烯酰胺分子诱导丝素蛋白成膜的湿度范围为10%~50%。在一些实施例中,所述花青素染色的彩色镜片包括整体着色彩片和环形着色彩片。在一些实施例中,所述整体着色彩片的染色方法为整体浸染法。在一些实施例中,所述环形着色彩片的染色方法为旋涂法。
本发明提供的丝素蛋白彩色隐形眼镜的主料组分及其功效如下:
丝素蛋白:一种优异的天然高分子纤维蛋白已被广泛应用于生物医用材料领域。作为一种天然的生物材料,丝素蛋白拥有很多显著的优良性能,例如:好的生物相容性,合适的力学性能,低免疫性以及可控的降解速率,另外丝素蛋白在成形过程中可以实现由水溶性变成水不溶性的多尺度结构。目前,丝蛋白支架已被广泛用于多种组织工程,包括软骨、神经、血管等的修复。除此之外,其来源可靠,获取方便,也是其应用广泛的一大优势。
丙烯酰胺:用作有机合成的原料及高分子材料的原料。通常可溶于水,尤其对水中的蛋白质、淀粉的絮凝有良好的效果。具有絮凝性、增稠性、耐剪切性、降阻性、分散性等优良性能。
花青素:一种抗氧化剂,它具有很强的抗氧化、抗过敏能力,可以保护脑神经不被氧化以及防止有害物质对大脑的损害,可以改善睡眠,具有安神镇静的效果,而且它还能够延缓衰老。同时还可以预防视力下降,有保护眼睛的作用。并且它对弹性蛋白酶和胶原蛋白酶有一定的抑制作用,可以滋润皮肤,使皮肤具有弹性,同时还可以防治暴晒导致的皮肤损伤症状。
二氧化硅纳米粒子:一种表面惰性无机化合物纳米颗粒,可以作为模板掺杂在聚合物中,之后经过氢氟酸浸泡便可溶解,使聚合物内部形成微孔。本发明将这种作用应用到隐形眼镜里,大大提高了镜片的透氧性。
综上,本发明提供的丝素蛋白彩色隐形眼镜至少具有以下有益效果:
安全性高:用于制备镜片的丝素蛋白和花青素均来源于自然,具有良好的生物相容性,对人体安全。镜片的多孔结构使其具有高透氧性,可避免眼角膜缺氧导致的眼睛红肿和疼痛,保护佩戴者的眼球健康。
多功能:本发明的丝素蛋白彩色隐形眼镜能够发挥花青素活性成分的作用,抵抗蓝光,预防视力下降。基于花青素分子自身的活性成分,还可以实现对眼球疾病或负载药物的检测。
环保:构成镜片的丝素蛋白和花青素均可在自然环境中降解,对环境无污染。
附图说明
图1是本发明的一个实施例中的丝素蛋白彩色隐形眼镜的制备流程图。如图所示,该制备流程包括以下主要步骤:将二氧化硅纳米粒子溶液、丙烯酰胺试剂与丝素蛋白溶液混合;将混合液滴入隐形眼镜模具中,风干定型;染色。
图2是本发明的一个实施例中的整体着色的丝素蛋白彩色隐形眼镜的镜片纵剖面示意图。
图3是本发明的一个实施例中的环形着色的丝素蛋白彩色隐形眼镜的镜片纵剖面示意图。
图4是本发明的镜片和对照镜片的红外光谱图。
图5是本发明的镜片(1)和对照镜片(2)的透光率。
图6是本发明的镜片(A)和对照镜片(B)的断面形貌对比(标尺为2μm)。
图7是本发明的镜片在生理盐水中随时间存放的照片及质量保留率曲线。
图8是本发明的镜片的细胞毒性检测。其中(A)为利用MTT法测定本发明的镜片上附着和增殖的细胞数量的结果;(B)为倒置荧光显微镜(IFM)照片,显示在本发明的镜片表面培养的细胞的生长状况。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述,需要理解的是,以下实施例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。
主要试剂:
二氧化硅纳米粒子溶液购自南京彩纳生物科技有限公司,粒径为1~20nm,货号MS-50-101。丙烯酰胺购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司,货号A108465-100g。丝素蛋白购买自苏州丝美特生物技术有限公司,货号LPSXKOA001。花青素购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司,货号C302404-25g。
溶液配制:
1%(g/mL)二氧化硅纳米粒子溶液:购置的二氧化硅纳米粒子溶液的浓度为5%(g/mL),使用时加超纯水五倍稀释至1%(g/mL)。
0.2%(g/mL)的丙烯酰胺溶液:称取0.02g丙烯酰胺固体颗粒加入10mL超纯水中,配制得到0.2%(g/mL)的丙烯酰胺溶液。
4%(g/mL)的丝素蛋白溶液:称取2g丝素蛋白固态颗粒加入50mL超纯水中,配制得到4%(g/mL)的丝素蛋白溶液。
4%(w/w)的氢氟酸溶液:购置的氢氟酸溶液的质量分数为40%,使用时加超纯水稀释10倍,得到4%(w/w)的氢氟酸溶液。
10%(g/mL)的花青素PBS溶液(pH=7.5):称取1g花青素固态颗粒加入10mL PBS溶液中,配制得到10%(g/mL)的花青素PBS溶液。
20%(g/mL)的花青素PBS溶液(pH=7.5):称取2g花青素固态颗粒加入至10mL PBS溶液中,配制得到20%(g/mL)的花青素PBS溶液。
若未特别说明,以下实施例所使用的试剂均为本领域常规试剂,可商购获得或按照本领域常规方法配制而得,规格为实验室纯级即可。若未特别说明,以下实施例所使用的实验方法和条件均为本领域常规实验方法和条件,可参考相关实验手册、公知文献或厂商说明书。除非另有定义,本文使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。
实施例1、花青素染色的整体着色型多孔丝素蛋白隐形眼镜的制备
1、多孔丝素蛋白镜片的制备
取0.1mL 1%(g/mL)二氧化硅纳米粒子溶液、0.1mL 0.2%(g/mL)的丙烯酰胺溶液和1mL 4%(g/mL)的丝素蛋白溶液,加入到5mL的离心管中混合均匀,取其中100μL混合液滴入到隐形眼镜模具中,置于25~45℃、通风处风干,得到含有二氧化硅纳米粒子和丙烯酰胺分子的丝素蛋白镜片;将镜片依次浸泡于4%(w/w)的氢氟酸溶液和无菌超纯水中各30分钟,然后去掉浸泡液,加入无菌超纯水清洗30分钟,如此反复清洗三次,最后将清洗好的丝素蛋白镜片放入无菌生理盐水中保存待用。
2、花青素染色
将步骤1制备和清洗好的丝素蛋白镜片放入10%(g/mL)的花青素PBS溶液中(pH=7.5),放入37℃恒温摇床中,设定摇床转速是50rpm,48小时后取出花青素染色后的丝素蛋白镜片,放入无菌超纯水中浸泡30分钟,去除浸泡液后加入无菌超纯水清洗,如此反复清洗三次,最后将清洗好的花青素染色的镜片放入无菌生理盐水中保存待用。
实施例2、花青素染色的环形着色型丝素蛋白隐形眼镜的制备
1、多孔丝素蛋白镜片的制备
取0.1mL 1%(g/mL)二氧化硅纳米粒子溶液、0.1mL 0.2%(g/mL)的丙烯酰胺溶液和1mL 4%(g/mL)的丝素蛋白溶液,加入到5ml的离心管中混合均匀,取其中100μL混合液滴入到隐形眼镜模具中,置于25~45℃、通风处风干,得到含有丙烯酰胺分子和二氧化硅纳米粒子的丝素蛋白镜片。
2、花青素染色
将上述得到的风干镜片(仍在模具中)放于旋涂仪(北京赛德凯斯电子有限责任公司;KW-4A)中,打开旋涂仪,用移液枪移取20%(g/mL)的花青素PBS溶液(pH=7.5),均匀滴涂在镜片的侧面位置,转至通风处,待液体逐渐渗入至镜片内,重复3次后得到环形着色的彩色镜片;将镜片依次浸泡于4%(w/w)的氢氟酸溶液和无菌超纯水中各30分钟,然后去掉浸泡液,加入无菌超纯水清洗30分钟,最后将清洗好的镜片放入无菌生理盐水中保存待用。
实施例3、多孔丝素蛋白隐形眼镜的结构和性能测试
委托东南大学生物医学工程学院生物电子学国家重点实验室对上述实施例2制备得到的丝素蛋白镜片(以下简称为本发明的镜片)的化学结构、透光率、含水量、表面形貌、稳定性和生物毒性进行检测。
以下实验中使用的对照镜片的制备方法如下:取0.1mL 1%(g/mL)二氧化硅纳米粒子溶液、0.05mL 0.2%(g/mL)的甘油溶液和1mL 4%(g/mL)的丝素蛋白溶液,加入到5ml的离心管中混合均匀,取其中100μL混合液滴入到隐形眼镜模具中,置于25~45℃、通风处风干,然后按照上述实施例2中的花青素染色方法进行染色,得到对照镜片。
1、镜片的化学结构
家蚕丝素膜主要有SilkⅠ和SilkⅡ两种结晶结构,其中丝素蛋白SilkⅠ结构对应的酰胺Ⅰ、酰胺Ⅱ区的红外吸收峰分别在1655cm-1,1545cm-1附近;而β折叠结构的吸收峰则分别在1620cm-1,1530cm-1附近。纯丝素蛋白主要是以无定型结构为主,丝素纤维则主要以SilkⅡ结构为主。从图4的红外光谱结果中可以看出,本发明的镜片和对照镜片都是以SilkⅠ和SilkⅡ的结晶结构共存。可见丙烯酰胺和甘油与丝素蛋白溶液共混都可以诱导无定型结构的丝素蛋白形成部分结晶,从而减小其溶失率,增加力学性能。
2、透光率测试
人眼视网膜上有三种可以感受光线的细胞,分别是杆体细胞、锥体细胞与神经结细胞。它们对不同波长光敏感程度不同,峰值分别位于507nm、555nm及490nm附近,而标准的三原色光中红光、绿光、蓝光的波长分别为700nm、546.1nm、435.8nm,故综合考虑选取492nm、550nm、700nm作为透光性测试点。透光率即特定波长的光线透过单位厚度的材料的百分率。当光线通过隐形眼镜时会发生折射和反射,这就给佩戴者的视觉带来了干扰,使得佩戴者眼中的世界与真实的世界产生了偏差。为了最大化地削弱这种偏差就需要制作镜片的材料具有很好的透光率。按照我国的国家标准规定,软性亲水隐形眼镜的透光率应不低于92%。
本次实验中,我们采用光纤光谱仪对本发明的镜片和对照镜片的瞳孔区进行了透光率的对比检测,两种镜片各检测6片。重复试验结果相似,如图5所示。从图5中可以看出,本发明的镜片的干态和湿态瞳孔区在波长400nm-800nm时的透光率都在92%以上,符合我国规定的隐形眼镜透光率的标准;而对照镜片的干态瞳孔区在波长400nm-800nm时的透光率在92%以上,湿态瞳孔区在波长400nm-800nm时的透光率在50%以下。
3、镜片的含水量测试
隐形眼镜按含水量的不同可以分为两种:低含水量镜片和高含水量镜片。含水量低于50%的镜片为低含水量镜片,含水量大于50%的镜片为高含水量镜片。含水量高的镜片本身较柔软,透氧性较好,佩戴舒适。
我们选取了6片本发明的镜片进行含水性能检测。首先测量了镜片水溶胀平衡时的重量WB,然后再烘箱中50℃进行烘干24h,之后测量干镜片的干重WD,则含水量WC计算公式为:
WC=100%—WB/WD*100% (3.1)
表1本发明的镜片的含水量测定结果
通过对6个样品的重复计算,得到本发明的镜片的平均含水量为77.42%,属于高含水量镜片,符合佩戴指标,较柔软舒适。
4、镜片的表面形貌测试
从图6的扫描电镜图片可知,本发明的镜片(图6A)和对照镜片(图6B)的断面均显示出了均一的微观结构,无明显的相分离现象,说明两者的结构相容性较好。从断面电镜图可观察到,对照镜片(图6B)的断面大多是无规的条状颗粒,空隙较大,这也侧向说明了该镜片遇水后泛白的原因。而本发明的镜片在其内部有大量的直径约为50nm~700nm的孔洞出现,这是由于镜片在浸泡过程中,丙烯酰胺从共混膜中溶出,所以留下大量的纳米孔洞。这些孔洞由于尺寸较小,并不影响其透光性能。除此之外,这些孔洞一方面可以使更多的水进入镜片内部,提高镜片的含水量;另一方面也侧向提高了镜片的透氧量,优化了镜片的使用性能。
5、隐形眼镜稳定性的测定
本实验中,隐形眼镜稳定性的测定是在隐形眼镜常用的存储生理盐水中进行的。图7是本发明的镜片在生理盐水中放置两天内的照片及随时间的质量保留率曲线。从曲线可看出,本发明的镜片在两天的存储中基本没有质量损失,稳定性较高。
6、隐形眼镜生物毒性检测
在生物学实验中,用于研究材料的生物相容性研究的实验方法有很多种,对于同时研究细胞增殖和细胞活性,MTT法是最常用的方法。其原理是外源性的MTT可以将活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜并沉积在细胞中,而这种还原却无法对死细胞实现。然后通过二甲基亚枫将活细胞中的甲臜溶解出来,并用酶标仪在492nm波长处测定其光吸收值,在一定细胞数值范围内,甲臜结晶形成的量与细胞数成正比。因此,可以根据测得的吸光度OD值,来判断活细胞数量,OD值越大,细胞活性越强,相应材料的毒性也就越小。
图8A中OD值(492nm吸光度)与3T3细胞的数量成正比关系,显示了利用MTT法测定的3T3细胞在本发明的镜片上培养1~4天的生存能力。在每个基质的细胞培养过程中,其OD值均是从开始到第3天显著增加,表明细胞增殖呈急剧上升的状态,类似于生长在体内环境中。与第3天的细胞生存能力相比,OD值在第4天并没有显著增加,表明细胞在本发明的镜片和空白模板基质上的生长达到饱和。这表明本发明的镜片具有良好的生物相容性,可以促进细胞增殖。此外,细胞增殖试验进一步证明丙烯酰胺并无残留,没有显著影响细胞的生存能力,确定本发明的镜片的生物相容性良好。
进一步地,通过倒置荧光显微镜(IFM)观察细胞在本发明的镜片表面培养过程中的形貌。利用钙黄绿素对存活的细胞染成绿荧光色,我们可以在显微镜下直观地观察到细胞的形貌和数量。结果如图8B所示,在本发明的镜片表面培养的3T3细胞均呈现出标准的梭形,类似于成纤维细胞的自然形态。此外,在所有培养基板上,细胞密度在四天的培养过程中均显著增加,进一步证实了利用MTT法测定细胞增殖的准确性。本发明的镜片表现出良好的增殖能力与细胞形貌,因此具有优良的生物相容性,对人体的健康没有影响。
经检验,上述表征结果均符合我国隐形眼镜的行业标准(GB 11417.2-89《软性亲水接触镜》)。同时,本发明的镜片的含水量与透光率等数据均优于我国现有隐形眼镜佩戴指标,生物相容性优良,对人体安全无毒。
上述实施例仅仅是本发明的部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
Claims (5)
1.一种丝素蛋白彩色隐形眼镜,其特征在于,具有花青素染色的镜片;所述镜片为二氧化硅纳米粒子、丙烯酰胺和丝素蛋白的反应产物;所述镜片在进行花青素染色之前或之后经过氢氟酸溶液浸泡;
所述镜片的制备方法包括:将二氧化硅纳米粒子溶液、丙烯酰胺溶液、丝素蛋白溶液混匀后滴入隐形眼镜模具中,风干得到镜片;
所述二氧化硅纳米粒子溶液的浓度为0.1%~10%g/mL,所述丙烯酰胺溶液的浓度为0.01%~1%g/mL,所述丝素蛋白溶液的浓度为1%~20%g/mL;将所述二氧化硅纳米粒子溶液、所述丙烯酰胺溶液和所述丝素蛋白溶液按照1:1:10的体积比混匀;
采用整体浸染法或旋涂法对风干的镜片进行花青素染色;
所述整体浸染法包括如下步骤:将风干的镜片依次浸泡于质量分数为1~10%的氢氟酸溶液和无菌超纯水中各20~120分钟;用无菌超纯水清洗镜片;将洗净的镜片浸泡于pH为7~8的5~50%g/mL的花青素溶液中,于25~45℃振荡孵育5~50小时;取出着色的镜片,放入无菌超纯水中浸泡30~300分钟;用无菌超纯水清洗镜片,即得到整体着色镜片;
所述旋涂法包括如下步骤:将镜片放于旋涂仪中,打开旋涂仪,将花青素溶液滴涂在镜片的部分位置,待液体逐渐渗入镜片内,再重复滴涂;将着色的镜片依次浸泡于质量分数为1~10%的氢氟酸溶液和无菌超纯水中各20~120分钟;用无菌超纯水清洗镜片,即得到部分着色镜片。
2.根据权利要求1所述的丝素蛋白彩色隐形眼镜,其特征在于,所述二氧化硅纳米粒子的粒径为1~20nm。
3.制备丝素蛋白彩色隐形眼镜的方法,其特征在于,包括如下步骤:将二氧化硅纳米粒子溶液、丙烯酰胺溶液、丝素蛋白溶液混匀后滴入隐形眼镜模具中,风干得到镜片;对风干的镜片进行花青素染色;在进行花青素染色之前或之后用氢氟酸溶液浸泡所述镜片;
所述二氧化硅纳米粒子溶液的浓度为0.1%~10%g/mL,所述丙烯酰胺溶液的浓度为0.01%~1%g/mL,所述丝素蛋白溶液的浓度为1%~20%g/mL;将所述二氧化硅纳米粒子溶液、所述丙烯酰胺溶液和所述丝素蛋白溶液按照1:1:10的体积比混匀;
采用整体浸染法或旋涂法对风干的镜片进行花青素染色;
所述整体浸染法包括如下步骤:将风干的镜片依次浸泡于质量分数为1~10%的氢氟酸溶液和无菌超纯水中各20~120分钟;用无菌超纯水清洗镜片;将洗净的镜片浸泡于pH为7~8的5~50%g/mL的花青素溶液中,于25~45℃振荡孵育5~50小时;取出着色的镜片,放入无菌超纯水中浸泡30~300分钟;用无菌超纯水清洗镜片,即得到整体着色镜片;
所述旋涂法包括如下步骤:将镜片放于旋涂仪中,打开旋涂仪,将花青素溶液滴涂在镜片的部分位置,待液体逐渐渗入镜片内,再重复滴涂;将着色的镜片依次浸泡于质量分数为1~10%的氢氟酸溶液和无菌超纯水中各30~300分钟;用无菌超纯水清洗镜片,即得到部分着色镜片。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述二氧化硅纳米粒子的粒径为1~20nm。
5.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,将二氧化硅纳米粒子溶液、丙烯酰胺溶液、丝素蛋白溶液混匀后滴入隐形眼镜模具中,置于温度为25~45℃、湿度为10%~50%的环境中进行风干。
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2022104232549 | 2022-04-21 | ||
CN202210423254 | 2022-04-21 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN115490903A CN115490903A (zh) | 2022-12-20 |
CN115490903B true CN115490903B (zh) | 2023-07-21 |
Family
ID=84472359
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202211217085.XA Active CN115490903B (zh) | 2022-04-21 | 2022-09-30 | 一种多功能丝素蛋白彩色隐形眼镜及其制备方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN115490903B (zh) |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1379055A (zh) * | 2001-04-06 | 2002-11-13 | 浙江大学 | 化学交联结构的丝素凝胶、海绵状丝素凝胶材料制备方法 |
CN103861149A (zh) * | 2014-03-14 | 2014-06-18 | 苏州大学 | 一种持久透明的丝素蛋白膜及其制备方法 |
TWI593995B (zh) * | 2016-12-09 | 2017-08-01 | Univ Nat Formosa | Preparation of Dye-free Colored Contact Lens with Silk Fibroin Protein and Its Products |
TWI670303B (zh) * | 2018-11-14 | 2019-09-01 | 國立虎尾科技大學 | 以仿生結構製作抗紫外線之生物分解性透明薄膜及其製法 |
CN110695515A (zh) * | 2019-09-18 | 2020-01-17 | 清华大学 | 利用飞秒激光在蚕丝薄膜上加工纳米锥阵列的方法及系统 |
CN112533626A (zh) * | 2018-06-04 | 2021-03-19 | 柯坤生物科技公司 | 丝基产品制剂和使用方法 |
CN115327796A (zh) * | 2022-08-09 | 2022-11-11 | 重庆大学 | 一种防蓝光有机隐形眼镜及制备方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
SG11202101578WA (en) * | 2018-08-17 | 2021-03-30 | Agency Science Tech & Res | Lens for use in a human or animal body, and production methods thereof |
-
2022
- 2022-09-30 CN CN202211217085.XA patent/CN115490903B/zh active Active
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1379055A (zh) * | 2001-04-06 | 2002-11-13 | 浙江大学 | 化学交联结构的丝素凝胶、海绵状丝素凝胶材料制备方法 |
CN103861149A (zh) * | 2014-03-14 | 2014-06-18 | 苏州大学 | 一种持久透明的丝素蛋白膜及其制备方法 |
TWI593995B (zh) * | 2016-12-09 | 2017-08-01 | Univ Nat Formosa | Preparation of Dye-free Colored Contact Lens with Silk Fibroin Protein and Its Products |
CN112533626A (zh) * | 2018-06-04 | 2021-03-19 | 柯坤生物科技公司 | 丝基产品制剂和使用方法 |
TWI670303B (zh) * | 2018-11-14 | 2019-09-01 | 國立虎尾科技大學 | 以仿生結構製作抗紫外線之生物分解性透明薄膜及其製法 |
CN110695515A (zh) * | 2019-09-18 | 2020-01-17 | 清华大学 | 利用飞秒激光在蚕丝薄膜上加工纳米锥阵列的方法及系统 |
CN115327796A (zh) * | 2022-08-09 | 2022-11-11 | 重庆大学 | 一种防蓝光有机隐形眼镜及制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
丝素蛋白水凝胶在生物医学领域的应用研究进展;张悦;饶婷;吴美玲;陈佳琳;左保齐;;现代丝绸科学与技术(第03期);第35-41页 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN115490903A (zh) | 2022-12-20 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Devarayan et al. | Reversible and universal pH sensing cellulose nanofibers for health monitor | |
Srivastava et al. | Enhanced potential of biomimetic, silver nanoparticles functionalized Antheraea mylitta (tasar) silk fibroin nanofibrous mats for skin tissue engineering | |
Pawar et al. | Increasing capillary diameter and the incorporation of gelatin enhance axon outgrowth in alginate-based anisotropic hydrogels | |
Unal et al. | Glioblastoma cell adhesion properties through bacterial cellulose nanocrystals in polycaprolactone/gelatin electrospun nanofibers | |
ITVR20010098A1 (it) | Procedimento per l'ottenimento di idrogeli di fibroina di seta. | |
KR101877031B1 (ko) | 약물이 담지된 콘택트렌즈 | |
Wang et al. | Processing and characterization of powdered silk micro-and nanofibers by ultrasonication | |
CN114982958B (zh) | 靶向修饰负载虾青素牛乳外泌体纳米制剂及其制备方法 | |
CN109824922A (zh) | 一种具有红外光响应的水凝胶材料及其制备方法 | |
CN107837276A (zh) | 局部给药的药物组合物 | |
CN115490903B (zh) | 一种多功能丝素蛋白彩色隐形眼镜及其制备方法 | |
CN112390282A (zh) | 一种亲水性氧化锌量子点及其制备方法和用途 | |
Ganesan et al. | Development and characterization of nanofibrous mat from PVA/Tridax Procumbens (TP) leaves extracts | |
CN115327796A (zh) | 一种防蓝光有机隐形眼镜及制备方法 | |
CN113621149A (zh) | 一种3d打印抗菌水凝胶敷料及其制备方法 | |
CN106270548A (zh) | 利用丝胶蛋白原位绿色合成纳米银的方法及其产品 | |
Tretiach et al. | Isidia ontogeny and its effect on the CO2 gas exchanges of the epiphytic lichen Pseudevernia furfuracea (L.) Zopf | |
CN111939085B (zh) | 一种蚕丝面膜的制备方法及产品 | |
CN107837275A (zh) | 局部给药的药物组合物 | |
Wang et al. | Preparation and characterization of natural fragrant microcapsules | |
ALTEMEMY et al. | Synthesis and Characterization of Silk Fibroin-Coated Mesoporous Silica Nanoparticles for Tioguanine Targeting to Leukemia. | |
CN111137899A (zh) | 一种多功能铁杂化介孔二氧化硅纳米载体及其制备方法 | |
CN113499273B (zh) | 含有红景天苷纳米粒的染发剂及其制备方法和使用方法 | |
CN113559018B (zh) | 含超声聚合多酚纳米粒的染发剂及其制备方法和使用方法 | |
CN113520997B (zh) | 负载那他霉素及银的纳米介孔碳滴眼液及其制备方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |