CN115485022A - 用于生产乳样产物的方法 - Google Patents

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Abstract

一种用于生产哺乳动物乳样产物例如人乳样产物的方法，该方法包括：生成源自哺乳动物成体母乳干细胞(mBSC)例如源自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞，以及从乳腺细胞中表达哺乳动物乳样产物，例如，人乳样产物。

Description

用于生产乳样产物的方法
技术领域
本发明涉及一种用于体外生产哺乳动物乳样产物例如人乳样产物的方法，该方法包括：通过培养和分化，和/或包括乳腺细胞的乳腺样腺体类器官，生成此类源自哺乳动物成体母乳干细胞(hBSC)例如人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞，以及从此类乳腺细胞和/或乳腺样腺体类器官中表达哺乳动物乳样产物，例如，人乳样产物。本发明还涉及能够由此类方法获得的哺乳动物乳样产物，例如，人乳样产物。
背景技术
哺乳动物的尤其是人乳是具有多种组分的复杂流体，每种组分可充分地有助于婴儿和甚至母体的健康。越来越多证据表明人母乳在至少前6个月中是最合适的营养来源。人乳中许多组分在牛奶中要么完全缺乏，要么含量很低，要么不太活跃，而这些组分是生产婴儿配方食品的基础。其包括，例如，乳铁蛋白、生长因子、长链多价不饱和脂肪酸或低聚糖。虽然最近在婴儿配方食品组分方面有了重大发展，人乳组分当前一直被用作开发婴儿配方食品的黄金标准，要想实现人造乳在当前制造工艺下是根本无法实现的。
目前，人乳的唯一来源是人供体(进行母乳喂养的母亲)。用于非商业用途(人乳库(human milk biobank))和商业用途的捐赠均有报道。然而，母乳捐赠是有限的，并且受到监管和安全方面的严格管控，有时还受到来自伦理或宗教的约束。
在哺乳动物的尤其是人乳中发现的干细胞称为人成体母乳干细胞(hBSC)。hBSC表现出高度适于人造并可在培养中分化为多种类型细胞的特点，更重要地是，hBSC可分化为形成人乳腺腺体的小叶肺泡结构所需的三种细胞系(Hassiotou F.等人，Stem Cells，2012)。然而，此类文献不证明此类细胞的功能性。
相应地，本发明的目的在于在培养的细胞中再现哺乳动物乳例如人乳的表达。本发明的目的还在于由培养的细胞分泌物制备针对客户定制的哺乳动物乳样产物，例如人乳样产物，培养的细胞分泌物可适应于受体的特定需求和/或生成人乳生物活性物质，以补充基于牛奶的现有婴儿营养解决方案。
发明内容
本发明解决了上述技术问题。
在一个方面，本发明提供了一种用于生产可食用的哺乳动物乳样产物的方法，该方法包括：
A')生成源自哺乳动物成体母乳干细胞(mBSC)的乳腺细胞；
B')从源自哺乳动物成体母乳干细胞(mBSC)的此类乳腺样腺体类器官中表达哺乳动物乳样产物。
另一方面，本发明提供了一种可通过以下方法获得的哺乳动物乳样产物，该方法包括：
A')生成源自哺乳动物成体母乳干细胞(mBSC)的乳腺细胞；
B')从此类源自哺乳动物成体母乳干细胞(mBSC)的乳腺细胞中表达哺乳动物乳样产物。
另一方面，本发明提供了一种能够通过以下方法获得的哺乳动物乳样产物，该方法包括：
A')生成源自哺乳动物成体母乳干细胞(mBSC)的乳腺细胞；
B')从此类源自哺乳动物成体母乳干细胞(mBSC)的乳腺细胞中表达哺乳动物乳样产物；
其用于治疗。
另一方面，本发明提供了能够通过以下方法获得的哺乳动物乳样产物的用途，该方法包括：
A')生成源自哺乳动物成体母乳干细胞(mBSC)的乳腺细胞；
B')从此类源自哺乳动物成体母乳干细胞(mBSC)的乳腺细胞中表达哺乳动物乳样产物；
其用作对受试者有需要的治疗剂。
在一个方面，本发明提供了一种用于生产可食用的人乳样产物的方法，该方法包括：
A)生成源自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞；
B)从源自人成体母乳干细胞(hBSC)的此类乳腺样腺体类器官中表达人乳样产物。
另一方面，本发明提供了一种能够通过以下方法获得的人乳样产物，该方法包括：
A)生成源自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞；
B)从此类源自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞中表达人乳样产物。
另一方面，本发明提供了一种能够通过以下方法获得的人乳样产物，该方法包括：
A)生成源自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞；
B)从此类源自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞中表达人乳样产物；
其用于治疗。
另一方面，本发明提供了一种使用能够通过以下方法获得的人乳样产物的用途，该方法包括：
A)生成源自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞；
B)从此类源自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞中表达人乳样产物；
其用作对受试者有需要的治疗剂。
具体实施方式
定义
在本发明的上下文中，术语“体外”指在试管、培养皿、生物反应器或生物体外其他地方进行或发生。
在本发明的上下文中，术语“哺乳动物”指属于哺乳类动物物种的动物，例如，人、牛、猴、骆驼、绵羊和山羊等。
在本发明的上下文中，术语“乳腺细胞”或“乳腺样细胞”指表达CK18细胞标记物并源自哺乳动物诱导多能干细胞(miPSC)尤其是人成体母乳干细胞(hBSC)的分泌型上皮细胞。人成体母乳干细胞可以在有适当的知情同意书的情况下从供体获得。在本发明的一个实施方案中，BSC未经工程化。在一个实施方案中，其未经工程化为包括外源核酸和/或包括外源核酸的诱导型基因表达系统，其中，该诱导型基因表达系统被配置成表达激素或信号传导因子。在一个实施方案中，外源核酸和/或包括外源核酸的诱导型基因表达系统促进细胞分化为乳腺细胞。
在本发明的上下文中，术语“乳腺样腺体类器官”或“乳腺样类器官”指小型和简化的乳腺腺体，其以二维或三维(2D/3D)生长并包含如上文所定义的乳腺细胞。
在本发明的上下文中，术语“人乳样产物”和/或“人母乳样产物”指由根据本发明的方法产生的乳腺细胞和/或乳腺样腺体类器官表达的可食用产物。根据本发明，“人乳样产物”是如下所定义的“标准人乳样产物”或“非标准人乳样产物”。人乳样产物的非限制性示例选自：补充剂、强化剂、人母乳替代物(或代用品)和仅富含一种和/或一部分通常可在营养良好的母亲的人母乳中发现的生物活性物质和常量及微量营养物质的成分。
在本发明的一个实施方案中，人乳样产物的组分与营养良好的母亲的人母乳的组分(例如，就生物活性物质和常量及微量营养物质及其含量而言)类似。在此类实施方案中，人乳样产物也可以称为“标准人乳样产物”和/或“人母乳代用品”或“人母乳替代物”。在此类实施方案中，根据本发明的标准人乳样产物至少包含通常可在营养良好的母亲的人母乳中发现的常量和微量营养物质。在一个实施方案中，根据本发明的标准人乳样产物包含：蛋白质、肽、脂质(包括亚油酸和α-亚麻酸)、碳水化合物、维生素(包括维生素A、维生素D3、维生素E、维生素K、硫胺素、核黄素、烟酸、维生素B6、维生素B12、泛酸、叶酸、维生素C和生物素)、矿物质(包括铁、钙、磷、镁、钠、氯化物、钾、锰、碘、硒、铜和锌)、胆碱、肌醇和左旋肉碱。在一个实施方案中，根据本发明的标准人乳样产物还包含选自以下的至少一种生物活性物质：生长因子、细胞因子、益生菌、胞外囊泡(例如乳脂球和/或外泌体)和来自外泌体(例如miRNA)和分泌型IgA的生物活性物质。
在一个实施方案中，根据本发明的标准人乳样产物不是天然形成的人乳房分泌的产物。
在另一个实施方案中，根据本发明的人乳样产物可适应于将接收该产物的婴儿的特定需求。该产物可以仅包含一种和/或一部分通常可在营养良好的母亲的人母乳中发现的生物活性物质和常量及微量营养物质。在此类实施方案中，人母乳样产物也可称为术语“非标准人乳样产物”。在一个实施方案中，根据本发明的非标准人乳样产物包括选自以下的营养物质或生物活性物质中的一种或多种：蛋白质、肽、脂质(包括亚油酸和α-亚麻酸)、碳水化合物(包括人乳低聚糖)、维生素(包括维生素A、维生素D3、维生素E、维生素K、硫胺素、核黄素、烟酸、维生素B6、维生素B12、泛酸、叶酸、维生素C和生物素)、矿物质(包括铁、钙、磷、镁、钠、氯化物、钾、锰、碘、硒、铜和锌)、胆碱、肌醇、左旋肉碱、生长因子、细胞因子、益生菌、胞外囊泡(例如乳脂球和/或外泌体)、来自外泌体(例如miRNA)和分泌型IgA的生物活性物质。非标准人乳样产物的非限制性示例选自：补充剂、强化剂和仅富含一种和/或一部分通常可在营养良好的母亲的人母乳中发现的生物活性物质和常量及微量营养物质的成分。
在本发明的上下文中，术语“未修饰的人乳样产物”指经过根据本发明的方法的步骤A)和B)生成的乳腺细胞和/或乳腺样腺体类器官表达的但未受根据本发明的方法的任选步骤C)的进一步处理的人乳样产物。未修饰的人乳样产物可以包括标准人乳样产物和非标准人乳样产物。
在本发明的上下文中，术语“修饰的人乳样产物”指经过根据本发明的方法的步骤A)和B)生成的乳腺细胞和/或乳腺样腺体类器官表达的并经受根据本发明的方法的任选步骤C)的进一步处理的人乳样产物。
修饰的人乳样产物可以包括标准人乳样产物和非标准人乳样产物。
在本发明的上下文中，术语“EB”指类胚体。
在本发明的上下文中，术语“mEB”指“MammoCult培养基培养的类胚体”。
在本发明的上下文中，术语“类胚体(EB)”、“MammoCult培养基培养的类胚体(mEB)”、“乳腺球”和/或“球体”指由多能干细胞(PSC)在本发明的方法的步骤A)中悬浮形成的三维聚集体。
在本发明的上下文中，术语“婴儿”指年龄在12个月以下的儿童，如年龄在9个月以下的儿童，尤其是年龄在6个月以下的儿童。
在本发明的上下文中，婴儿可为任何足月婴儿或早产婴儿。在本发明的一个实施方案中，所述婴儿选自早产婴儿和足月婴儿。
术语“足月婴儿”指以足月或37周龄或更大的胎龄出生的婴儿。
术语“早产婴儿”指以小于37周的胎龄出生的婴儿。
在本发明的上下文中，术语“出生体重”意指出生后获得的胎儿或新生儿的首个体重。
在本发明的上下文中，术语“低出生体重”指小于2500g(最重至并包括2499g)的出生体重。
在本发明的上下文中，术语“非常低出生体重”指小于1500g(最重至并包括1499g)的出生体重。
在本发明的上下文中，术语“极低出生体重”指小于1000g(最重至并包括999g)的出生体重。
术语“小于胎龄婴儿”指出生体重低于妊娠期增长图表中出生体重参考平均值超过2个标准差的婴儿，或是出生体重低于从同一胎龄婴儿获得的人群体重数据的第10百分位的婴儿。术语“小于胎龄婴儿”包括由于组成型起因或遗传起因或者因宫内生长受限而造成出生时个头偏小的婴儿。
在本发明的上下文中，术语“幼儿”或“学步儿童”指年龄在1岁和3岁之间的儿童。
如本文所用，术语“婴儿配方食品”指旨在用于婴儿的营养组合物，并且如CodexAlimentarius,(Codex STAN 72-1981)中所定义以及Codex Alimentarius,(Codex STAN72-1981)中定义的婴儿特制品(包括特殊医疗用途食品)。该术语也指用于为出生后头几个月内的婴儿提供特定营养的食料，其本身即可满足这类人群的营养需求(符合2006年12月22日颁布的针对婴儿配方食品和较大婴儿配方食品的欧盟委员会指令91/321/EEC2006/141/EC中第2(c)条的规定)。婴儿配方食品涵盖一段婴儿配方食品和后续配方食品或者说二段配方食品。通常，1段婴儿配方食品从婴儿出生起作为母乳替代物，而2段婴儿配方食品或者较大婴儿配方食品从婴儿第6个月起作为母乳替代物。
“成长乳”(或GUM)从一岁开始提供。它通常为适合幼儿的特定营养需要的含乳饮料。这些是用于与其他食物结合喂食给12个月至2到3岁儿童的营养组合物。
在本发明的上下文中，术语“强化剂”是指包含一种或多种对婴儿或幼儿具有营养有益效果的营养物质的组合物。
所谓术语“乳强化剂”意指用于强化或补充人母乳、婴儿配方食品、成长乳或经其他营养物质强化的人母乳的任何组合物。因此，本发明的人乳强化剂可在溶解于人母乳、婴儿配方食品、成长乳或用其它营养物质强化的人母乳中后施用，或者它可以作为独立组合物施用。
当作为独立组合物施用时，本发明的人乳强化剂也可被鉴定为“补充剂”。在一个实施方案中，本发明的乳强化剂是补充剂。
所谓术语“人乳强化剂”意指用于强化或补充人母乳或经其它营养物质强化的人母乳的任何组合物。根据本发明的“人乳强化剂”可旨在施用于早产、具有非常低出生体重(VLBW)或具有极低出生体重(ELBW)的婴儿。
根据本发明的乳强化剂可为粉末或液体形式。
液体形式的乳强化剂组合物具有一些特定有益效果。例如，如果要与递送一定重量或体积的校准液滴的包装相连接，那么液体配制物可能更为方便。
此外，液体配制物更易与待强化的组合物混合，而粉末配制物在一些情况下可能结块。
根据本发明的方法
如本文所定义的根据本发明的方法包括如本文所定义的步骤A)和B)中的任一步骤和如本文所定义的任选步骤C)。
步骤A-由hBSC生成乳腺细胞和/或乳腺样类器官。
根据本发明的方法，在步骤A)中生成乳腺样细胞和/或类器官结构。
可根据任何已公布的利用hBSC的方法来生成此类乳腺样细胞和/或类器官结构。
在一个实施方案中，此类乳腺样细胞和/或类器官结构可根据Hassiotou F.等人2012年在Stem Cells(据此全文以引用方式并入)中所描述的过程生成。
上文提到的科学出版物中描述的方法(下文也称为“Hassiotou出版物”)表示产生来自hBSC的人乳腺样细胞和/或类器官的方案。
在本发明的一个实施方案中，提供了一种用于生产人乳样产物的方法，该方法包括：在步骤a)中生成来自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞，其中该步骤a)包括：
i)在合适的培养基(例如，MammoCult培养基，可任选补充有抗生素-抗有丝分裂溶液和二性霉素)中培养hBSC，并在一周之后收集由其形成的乳腺球；以及
ii)在合适的系统(诸如乳腺分化培养基，其包括例如具有L-谷氨酰胺的培养基RPMI(Roswell Park Memorial Institute)1640，任选补充有胎牛血清(FBS)、胰岛素、表皮生长因子(EGF)、氢化可的松、抗生素-抗有丝分裂溶液和二性霉素)中使此类乳腺球生长至少1周，例如2至4周，以产生乳腺细胞。
在本发明的一个实施方案中，提供了一种用于生产人乳样产物的方法，该方法包括：在步骤a)中生成来自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞，其中该步骤a)包括：
i)在合适的培养基(例如，MammoCult培养基)中在非贴壁的乳腺球形成条件下聚集和培养hBSC；以及
ii)在合适的3D系统中(例如，由基质蛋白如基质胶和/或胶原蛋白构成的混合漂浮胶质，或非贴壁培养皿中的悬浮式培养物中)中使此类乳腺球生长至少10天，以生成乳腺细胞。
在一个实施方案中，通过应用经过补充特定因子(例如，甲状旁腺激素(pTHrP)、氢化可的松、胰岛素、FGF10和HGF)而进行调理的培养基(例如，EpiCultB)，获得步骤A)中的乳腺定型。
在本发明的一个实施方案中，方法包括：在步骤A)中生成乳腺样类器官。
在本发明的一个实施方案中，该在步骤A)中生成乳腺样类器官的方法包括：在选自以下的条件下培养上述细胞：2D单层细胞，2D而具有粘附的EB，在非贴壁培养皿中悬浮和在混合漂浮胶质中。
在另一个优选的实施方案中，步骤A)中的乳腺球(mEB)在合适的系统(例如，如Hastiotou F.等人2012年在Stem Cells中所描述的混合漂浮胶质培养系统)中生长至少15天。
在更优选的实施方案中，步骤A)中的乳腺球(mEB)在合适的系统(例如，如Hastiotou F.等人2012年在Stem Cells中所描述的混合漂浮胶质培养系统)中生长20天。
在一个实施方案中，根据本发明的方法提供根据步骤A)[例如，在步骤A)i)和/或步骤A)ii)中]的培养条件，该培养条件适应于生成源自能够分泌标准人乳样产物的人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞。
在一个实施方案中，控制营养物质和仿生刺激的递送，以影响细胞生长、分化和组织形成。在一个实施方案中，此类控制在生物反应器中进行。
在一个实施方案中，根据本发明的方法提供根据步骤A)[例如，在步骤A)i)和/或步骤A)ii)中]的培养条件，该培养条件适应于生成源自能够分泌非标准人乳样产物的人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞。
在一个优选的实施方案中，提供了一种用于生产人乳样产物的方法，该方法包括：在步骤A)中生成来自人hBSC的乳腺细胞，其中该步骤A)包括：在合适的3D培养系统中(例如，3D悬浮条件下)引导hBSC分化为乳腺腺体细胞(例如，乳腺细胞)持续至少42天。
在另一个优选的实施方案中，提供了一种用于生产人乳样产物的方法，该方法包括：在步骤A)中生成来自hBSC的乳腺细胞，其中该步骤A)包括：
i)通过在合适的3D培养系统中(例如，3D悬浮条件下)在合适的培养基(例如，MammoCult培养基)中培养hBSC至少12天(第-2天到第10天)，引导hBSC分化为非神经外胚层细胞；以及
ii)在合适的3D包埋系统中(例如，在由基质蛋白诸如基质胶和/或I型胶原蛋白构成的混合漂浮胶质)中培养所形成的mEB(乳腺球)至少30天，优选32天，以生成乳腺细胞。
在本发明的特别优选的实施方案中，提供了一种生产人乳样产物的方法，该方法包括：在步骤A)中生成来自hBSC的乳腺细胞，其中步骤A)i)定义如下：
i)通过在标准培养基E8(包括如Chen等人2011年在Nat Methods中所描述的DMEM/F12、L-抗坏血酸-2-磷酸酯镁、亚硒酸钠、FGF2、胰岛素、NaHCO3和转铁蛋白、TGFβ1或NODAL)或mTeSRTM中孵育hBSC持续2天(第-2天到第0天)，生成类胚体(EB)，并且通过在包括基础培养基和增殖补充剂并补充有肝素(通常为4μg/mL)和氢化可的松(通常为0.48μg/mL)的完全MammoCult培养基(StemCell Technologies)中孵育EB持续10天(第0天到第10天)，生产高度富含非神经外胚层细胞的mEB(乳腺球)，并且其中
步骤A)ii)被进一步分为子步骤并且包括以下步骤i)、iii)和iv)：
ii)在补充有EpiCult增殖补充剂和甲状旁腺激素(pTHrP)的完全EpiCultB培养基中孵育mEB(乳腺球)储蓄5天(第10天到第15天)；
iii)通过在补充有EpiCult增殖补充剂、氢化可的松、胰岛素、FGF10和HGF的EpiCultB培养基中孵育mEB(乳腺球)持续20天(第15天到第35天)，促进分支和肺泡分化和乳腺细胞特化；以及
iv)通过在补充有EpiCult增殖补充剂、氢化可的松、胰岛素、FBS、催乳素、孕酮和β-雌二醇的EpiCultB培养基中孵育mEB(乳腺球)持续7天(第35天到第42天)，诱导乳蛋白质表达。
步骤iv)优选地导致分化出乳蛋白质表达细胞尤其是乳腺细胞和/或乳腺样腺体类器官。
在本发明的另一特别优选的实施方案中，提供了一种生产人乳样产物的方法，该方法包括：在步骤A)中生成来自hBSC的乳腺细胞，其中步骤A)i)定义如下：
i)通过在标准培养基E8(包括如Chen等人2011年在Nat Methods中所描述的DMEM/F12、L-抗坏血酸-2-磷酸酯镁、亚硒酸钠、FGF2、胰岛素、NaHCO3和转铁蛋白、TGFβ1或NODAL)或mTeSRTM中孵育hBSC持续2天(第-2天到第0天)，生成类胚体(EB)，并且通过在补充有MammoCult增殖补充剂、氢化可的松和肝素的MammoCultB培养基中孵育EB持续10天(第0天到第10天)，生产高度富含非神经外胚层细胞的mEB(乳腺球)，其中步骤A)ii)被进一步分为子步骤并且包括以下步骤ii)、iii)和iv)：
ii)将所形成的mEB(乳腺球)包埋在补充有EpiCult增殖补充剂和甲状旁腺激素(pTHrP)的EpiCultB培养基中漂浮的基质胶和I型胶原蛋白的混合物中持续5天(第10天到第15天)；
iii)通过在补充有EpiCult增殖补充剂、氢化可的松、胰岛素、FGF10和HGF的EpiCultB培养基中孵育包埋的mEB(乳腺球)持续20天(第15天到第35天)，促进分支和肺泡分化和乳腺细胞特化；以及
iv)通过在补充有EpiCult增殖补充剂、氢化可的松、胰岛素、FBS、催乳素、孕酮和β-雌二醇的EpiCultB培养基中孵育mEB(乳腺球)持续7天(第35天到第42天)，诱导乳蛋白质表达。
步骤iv)优选地导致分化出乳蛋白质表达细胞尤其是乳腺细胞和/或乳腺样腺体类器官。
本文所提及的标准培养基E8(包括如Chen等人2011年在Nat Methods中所描述的DMEM/F12、L-抗坏血酸-2-磷酸酯镁、亚硒酸钠、FGF2、胰岛素、NaHCO3和转铁蛋白、TGFβ1或NODAL)可商购获得，例如，来自ThermoFischer Scientific的“Essential 8TM培养基”，目录编号A1517001(还可参见https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/A1517001#/A1517001)。
mTeSRTM培养基可从STEMCELL Technologies公司商购获得，目录编号85850(还可参见https://www.stemcell.com/mtesr1.html)。此类培养基还描述于2007年9月CurrentProtocols in Stem Cell Biology第1期第2卷中的“Defined,Feeder-Independentmedium for human hembryonic stem cell culture”。
在一个实施方案中，在如上文针对特别优选的实施方案所定义的步骤iii)和/或iv)优选地导致形成/分化出至少乳腺细胞、腔细胞和基底细胞。在此上下文中，乳腺细胞优选地表达一种或多种、优选地选自以下的所有标记物：β-酪蛋白、乳蛋白质和激素受体。此外，腔细胞优选地表达一种或多种、优选地选自以下的所有标记物：EpCAM、MUC1、CD49F、GATA3、CK8和CK18。此外，基底细胞优选地表达选自以下的一种或多种标记物：CK14、α-平滑肌肌动蛋白和P63。
在另一个实施方案中，在上述针对特别优选的实施方案定义的步骤ii)和/或iv)中诱导mEB(乳腺球)之后，可获得乳腺样腺体类器官，其表达选自以下的一种或多种标记物：β-酪蛋白、乳蛋白质和激素受体，腔细胞，该腔细胞表达选自以下的一种或多种标记物：EpCAM、MUC1、CD49F、GATA3、CK8和CK18，和基底细胞，该基底细胞表达选自以下的一种或多种标记物：CK14、α-平滑肌肌动蛋白和P63。
在本发明的一个实施方案中，提供了上述用于生产标准人乳样产物的方法。
在另一个实施方案中，提供了上述用于生产非标准人乳样产物的方法。
在一个实施方案中，控制营养物质和仿生刺激的递送，以影响细胞生长、分化和组织形成。在一个实施方案中，此类控制在生物反应器中进行。
步骤B—表达人母乳样产物
在本发明的一个实施方案中，方法包括从源自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺样类器官表达人乳样产物，优选地根据步骤A)制备人成体母乳干细胞。表达人乳样产物优选地在诱导来自此类乳腺细胞和/或乳腺样腺体类器官的人乳样产物表达时发生。
在一个实施方案中，通过应用补充有催乳因子(例如，催乳素、氢化可的松和胰岛素)的特定培养基(例如，EpiCult B)，诱导泌乳的乳腺细胞。
具体地讲，从源自优选地根据步骤A)制备的人母乳干细胞(BSC)的乳腺样类器官获得的人乳样产物含有人乳中的生物活性物质，其选自包含以下项的组或由以下项组成的组：蛋白质、脂质或低聚糖，优选地，人乳低聚糖等。发明人特别设法识别尤其是低聚糖(乳糖)、脂质(C 12:0、C16:0、C18:0、C18:1n-9、C18:2脂肪酸)和蛋白质(乳铁蛋白，α-乳白蛋白)。
在本发明的一个实施方案中，从源自人母乳干细胞(BSC)的乳腺样类器官获得的人乳样产物为标准人乳产物。在本发明的另一个实施方案中，从源自人母乳干细胞(BSC)的乳腺样类器官获得的人乳样产物为非标准人乳产物。
步骤C—进一步进行处理，以生产修饰的人母乳样产物
在本发明的一个任选实施方案中，方法包括另外的步骤C)，其针对能够由步骤B)获得的人乳样产物执行，并包括：对此类产物执行另外的处理，以提供修饰的人乳样产物。
在一个实施方案中，对人母乳样产物执行的另外的处理可选自：纯化步骤、分离过程、提取过程、分级步骤、富集过程、酶处理、添加另外的组分(例如，不可由人乳腺的腺体类器官表达的组分(诸如例如，免疫球蛋白、益生菌、维生素和/或矿物质)或其组合)。
人乳样产物
标准人母乳样产物
在本发明的一个实施方案中，人母乳样产物是标准人母乳样产物。
根据科学研究文献，母乳喂养的有益效果为人们所熟知，而使用标准人母乳样产物的可能性使其带来许多同样熟知的健康有益效果。
在此类实施方案中，标准人母乳样产物可在无法实现实际母乳喂养的情况下用作母乳喂养的替代物。
在此类实施方案中，使用标准人母乳样产物旨在用于例如支持分泌较少乳或在生产6个月后停止泌乳的女性延长母乳喂养的时间。
类似地，使用标准人母乳样产物旨在用于例如允许在疾病使母亲无法实际完成母乳喂养的情况下也能实现母乳喂养。
在另一个实施方案中，标准人母乳样产物旨在在母乳无法自然开始分泌的情况下使用，例如，婴儿是经过领养的。
在一个实施方案中，根据本发明的标准人乳样产物不是天然形成的人母乳分泌的产物。
在一个实施方案中，标准人母乳样产物用于为婴儿提供最佳营养。
在一个实施方案中，标准人母乳样产物用于实现婴儿的健康生长。
在一个实施方案中，标准人母乳样产物用于预防婴儿感染和过肥以及促进婴儿免疫发展。
在一个实施方案中，标准人母乳样产物是未修饰的人母乳样产物。
在另一个实施方案中，标准人母乳样产物为修饰的人母乳样产物。
在一个实施方案中，根据本发明的标准人乳样产物包含：蛋白质、脂质、碳水化合物、维生素和矿物质。在另一个实施方案中，根据本发明的标准人乳样产物包含：蛋白质、脂质、碳水化合物、维生素、矿物质和生物活性物质。
在一个实施方案中，根据本发明的标准人乳样产物包含：蛋白质、脂质(包括亚油酸和α-亚麻酸)、碳水化合物、维生素(包括维生素A、维生素D3、维生素E、维生素K、硫胺素、核黄素、烟酸、维生素B6、维生素B12、泛酸、叶酸、维生素C和生物素)、矿物质(包括铁、钙、磷、镁、钠、氯化物、钾、锰、碘、硒、铜和锌)、胆碱、肌醇和左旋肉碱。
在另一个实施方案中，根据本发明的标准人乳样产物还包含选自以下的至少一种生物活性物质：生长因子、细胞因子、益生菌、胞外囊泡(例如乳脂球和/或外泌体)、来自外泌体(例如miRNA)和分泌型IgA的生物活性物质。
可以根据本发明的方法，例如，通过包括添加生长因子、细胞因子、益生菌、胞外囊泡(例如，乳脂球和/或外泌体)、来自外泌体(例如miRNA)和分泌型IgA的生物活性物质的步骤C)，制备此类标准人母乳样产物。
在一个实施方案中，标准人母乳样产物含有益生菌。
此类标准人母乳样产物可根据本发明的方法，例如，通过包括添加可从几种可商购获得的来源获得的益生菌(例如，乳双歧杆菌、婴儿双歧杆菌和鼠李糖乳杆菌)的步骤C)来进行制备。
在此类实施方案中，标准人母乳样产物可用于优化胃肠道功能和/或促进免疫。
在一个实施方案中，标准人母乳样产物含有分泌型IgA和益生菌。
此类标准人母乳样产物可根据本发明的方法，例如，通过包括添加益生菌和分泌型IgA的组合的步骤C)进行制备，该组合可根据，例如，专利申请WO2009/156301和WO2009/156367中所描述进行制备，其内容据此以引用方式并入本文。在此类实施方案中，标准人母乳样产物可用于预防免疫球蛋白缺乏症和/或预防婴儿和幼儿的复发感染。
非标准人母乳样产物
在一个实施方案中，根据本发明的非标准人乳样产物可选自：乳强化剂、补充剂和/或适应于特殊目的的人母乳代用品。
人乳强化剂和人乳生物活性补充剂
在一个实施方案中，本发明的方法提供了一种非标准人母乳样产物，其可用于强化从哺乳期母亲获得的天然人母乳或用于强化婴儿配方食品。
在另一个实施方案中，本发明的方法提供了一种非标准人母乳样产物，其可用作对其有需要的婴儿或幼儿的补充剂。
在此类实施方案中，非标准人母乳样产物可用于提供健康生长和/或降低发展通常与婴儿或幼儿的特定病状相关的疾病的风险(诸如例如，哮喘、过敏、认知改变)和/或促进赶上生长速度、发展免疫、预防感染。
值得注意的是，结合根据本发明的方法的事实情况，此类强化剂或补充剂中的人来源的成分(尤其是生物活性成分)应当使这类成分保持完整或更高的功能性。
非标准人母乳样产物旨在用作强化剂。此类非标准人母乳样产物旨在用作强化剂，并且可根据本发明的方法，例如，通过包括从能够由步骤B)获得的未修饰的人母乳样产物中分离和/或富集某些生物活性物质的步骤C)进行制备。此类分离步骤可通过对能够由步骤B)获得的未修饰的人母乳样产物进行经典的分级、富集和/或纯化来进行。
旨在用作补充剂的非标准人母乳样产物可包括选自以下的一种或多种生物活性物质：人乳低聚糖(例如，2FL、3FL、LNT、LnNT、DiFl、6SL和/或3SL)、脂质、生长因子(例如，表皮生长因子(EGF)、肝素结合表皮生长因子)、细胞因子(例如，转化生长因子β2(TGFβ-2))、IL-1。IL-2、IL-6、IL-10、IL-18、干扰素γ(INF-γ)、TNF-α、胞外囊泡(例如，乳脂球和/或外泌体)、包括微RNA的外泌体和抗微生物/保护生物活性物质(例如，乳铁蛋白、溶菌酶、乳凝集素)。此类旨在用作补充剂的非标准人母乳样产物可根据本发明的方法，例如，通过包括从能够由步骤B)获得的未修饰的人母乳样产物中分离这些生物活性物质的步骤C)进行制备。此类分离步骤可通过对能够由步骤B)获得的未修饰的人母乳样产物进行经典的分级、富集和/或纯化来进行。
在一个实施方案中，非标准人母乳样产物是一种补充剂或乳强化剂，其含有岩藻糖基化人乳低聚糖，例如，2FL和/或3FL。此类补充剂或乳强化剂用于使因FUT2基因不活跃而不分泌岩藻糖基化低聚糖的女性的人母乳特性更完整。此类旨在用作强化剂或补充剂的非标准人母乳样产物可根据本发明的方法，例如，通过包括从能够由步骤B)获得的未修饰的人母乳样产物中分离和/或富集岩藻糖基化低聚糖(例如，2FL和/或3FL)的步骤C)进行制备。
在此类实施方案中，标准人母乳样产物可用于优化胃肠道功能和/或促进免疫。
用于患有遗传疾病的婴儿的人母乳样产物
在一个实施方案中，根据本发明的非标准人母乳样产物可适应于解决先天患有遗传疾病的婴儿的特定需求。
半乳糖血症
在此类实施方案中，非标准人母乳样产物可适应于患有半乳糖血症的婴儿的需要。半乳糖血症是影响婴儿半乳糖代谢能力的罕见遗传疾病。
在此类实施方案中，非标准人母乳样产物应不含乳糖和/或含有乳糖的糖类。在此类实施方案中，非标准人母乳样产物可用于使受半乳糖血症影响的婴儿健康生长。
在一个实施方案中，可根据本发明的方法，通过包括针对能够由步骤B)获得的未修饰的人母乳样产物进行的酶处理(乳糖酶处理)或膜分级和超滤处理的步骤C)，获得不含乳糖和/或含有乳糖的糖类的非标准人母乳样产物。
在另一个实施方案中，可根据本发明的方法，通过在步骤A)中使用α-乳白蛋白缺陷型hBSC，来获得不含乳糖和/或含有乳糖的糖类的非标准人母乳样产物。
苯丙酮尿症
在此类实施方案中，非标准人母乳样产物可适应于患有苯丙酮尿症(PKU)的婴儿的需要。PKU的出现是由于将苯丙氨酸转化为酪氨酸的苯丙氨酸羟化酶缺失或无法作用。如不予治疗，此症将使大脑中毒而导致重度精神发育迟滞。
在此类实施方案中，非标准人母乳样产物应不含或减少苯丙氨酸。在此类实施方案中，非标准人母乳样产物可用于使受PKU影响的婴儿健康生长。在一个实施方案中，非标准人母乳样产物减少了苯丙氨酸，其方式使得苯丙氨酸含量相对于接收苯丙氨酸的受试者的体重保持在20mg/kg以下。
在一个实施方案中，可根据本发明的方法，通过包括针对能够由步骤B)获得的未修饰的人母乳样产物进行酶处理(蛋白质水解)或过滤处理的步骤C)，获得减少或不含苯丙氨酸的非标准人母乳样产物。
在一个实施方案中，可根据本发明的方法，通过包括针对能够由步骤B)获得的未修饰的人母乳样产物进行酶处理(蛋白质水解)或过滤处理的步骤C)，获得减少苯丙氨酸的非标准人母乳样产物。
在另一个实施方案中，可根据本发明的方法，通过在步骤B)中提供可提供有限量的或不提供苯丙氨酸的培养基(诸如例如，来自乳清的含有糖巨肽(GMP)的培养基)，获得减少苯丙氨酸的非标准人母乳样产物。
应当理解，本文所公开的详细说明的各个方面和实施方案是制造和使用本发明的具体方式的示例，当结合权利要求书和本文的详细说明进行考虑时这些内容并不限制本发明的范围。还应当理解，本发明的各方面和实施方案的特征可与来自本发明的相同或不同方面和实施方案的其他特征组合。
如在具体实施方式和所附权利要求书中所用，单数形式“一个”、“一种”和“该”包括复数指代物，除非上下文另外明确规定。
本发明的附加实施方案
i)用于生产非标准人乳样产物的方法，该方法包括：
A)生成源自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞乳腺样腺体类器官；
B)从此类来自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞中分泌所述人乳样产物。
ii)根据实施方案i)所述的方法，该方法任选包括：步骤C)，由此根据实施方案i)所述的人乳样产物进一步经过处理，以获得修饰的人乳样产物。
iii)根据实施方案i)或ii)所述的用于生产人乳样产物的方法，其中根据步骤A)的培养条件适应于生成源自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞，该乳腺细胞能够分泌非标准人乳样产物。
iv)根据实施方案ii)或iii)中任一项所述的方法，其中通过向步骤B)的所述人乳样产物中添加未由步骤B)中该乳腺细胞分泌的一种或多种人母乳组分，在步骤C)中获得修饰的人乳样产物。
v)根据实施方案i)至iv)中任一项所述的方法，其中所述乳腺细胞是在步骤A)中生成的乳腺样类器官结构的一部分。
vi)人乳样产物，所述人乳样产物能够根据实施方案i)至v)中任一项所述的方法获得。
vii)根据实施方案vi)所述的人乳样产物，其用于治疗。
viii)根据实施方案vi)所述的人母乳样产物作为母乳喂养替代物的用途。
应当理解，对本文所述的目前优选的实施方案作出的各种变化和修改对于本领域的技术人员将为显而易见的。可在不脱离本发明的实质和范围并在不减少所伴随的优点的情况下作出这些变化和修改。因此，此类变化和修改旨在由所附权利要求书涵盖。
实验部分
实施例1
hBSC的培养和向乳腺细胞的分化
本发明人的目的是将hBSC与从供体收集的人母乳细胞分离，并在乳腺分化条件下分化期间收集上清液用于分析(在Hassiotou F.等人，Stem Cells，2012中所述的条件)，以在由此分泌的营养物质的基础上展示乳腺细胞功能性。
材料
母乳捐赠样品
在获得签署的知情同意书后获得的母乳捐赠在表达后使用高达3小时。
球体形成培养基的配制物
500ml MammoCult培养基试剂盒补充有3％青链霉素混合物和2μl/ml二性霉素(表1)。
表1：球体形成培养基
Figure BDA0003911839780000181
Figure BDA0003911839780000191
乳腺分化培养基的配制物
500ml具有L-谷氨酰胺的RPMI1640补充有20％ FBS，4μg/ml胰岛素，20ng/ml EGF，0.5μg/ml氢化可的松，5％青链霉素混合物，和2μL/ml二性霉素(表2)
表2：乳腺分化培养基
Figure BDA0003911839780000192
实验设计
1.1分离人母乳细胞(hBMC)
·用PBS(磷酸盐缓冲盐水)稀释每种母乳捐赠(1:1)并且离心(800xg，20分钟，20℃)。
·去除脂肪层和液体部分脱脂乳，并将细胞团块在PBS中洗涤三次(300xg，5分钟，20℃)。
·通过流式细胞术确定细胞活力。
1.2用胚胎干细胞标记物染色人母乳细胞(hBMC)
针对活力并且用针对胚胎干细胞标志物的抗体(根据每个抗体制造商的说明)将来自每个捐赠的100μL hBMC样品染色：
表3：流式细胞术抗体
目标 制造商
OCT4-AlexaFluor488 BioLegend
SOX2-PE BioLegend
NANOG-AlexaFluor647 BioLegend
SSEA4-PE/Cy7 BioLegend
TRA-1-60-PerCP/Cyanine5.5 BioLegend
活力405/452固定染料 Miltenyi Biotec
·通过FACS(具有五个激光器的LSRII-新细胞分析仪，Becton Dickinson)分析细胞。
1.3培养物hBMC作为球体
·在37℃和5％CO2下，在球体形成培养基中，在超低结合6孔培养皿(Corning)(3ml/孔)中培养来自每个捐赠的剩余hBMC(参见表1)。
1.4在乳腺分化条件下培养hBMC(3-4周)以及上清液收集
·在37℃和5％CO2下，在组织培养24孔培养皿(Corning)中，每个母乳捐赠1-3个孔(1ml培养基/孔)，将初级hBMC球体在乳腺分化培养基中孵育4周(参见表2)。收集球体并离心(300g，5分钟)。丢弃培养基并在5分钟内添加1ml胰蛋白酶。此后，将细胞离心，去除胰蛋白酶并将1ml乳腺培养基添加到细胞中。
·每周，从每个孔收集上清液并储存于(-20±5℃)。
·将新鲜的乳腺分化培养基添加到每个孔中。
1.5通过ELISA进行α-乳白蛋白和乳铁蛋白检测
通过ELISA，根据每个ELISA试剂盒制造商的说明，分析上清液的α-乳白蛋白(Cloud clone，目录号SEB018Hu)和乳铁蛋白(Cloud clone，目录号SEA780Hu)。
2结果
2.1流式细胞术：
如表4中所报告，来自所有三个供体的hBMC表达所有五种标志物。
TRA-1-160表达是最高的，来自所有活细胞为23.5％-33.4％。SSEA4、SOX2和NANOG具有更宽的表达范围，来自所有活细胞分别为2.5％-21％，6.2％-22.1％，和0.9％-22.2％。OCT4表达是最低的，来自所有活细胞为0.1％-2.7％。
表4：流式细胞术结果
Figure BDA0003911839780000222
2.2培养物外观：
在低结合培养皿中的mammocult培养基中一周后，hBMC形成球体。一旦细胞在培养皿中铺板在乳腺培养基中，它们中的一些连接到表面并表现出乳腺样形态。
2.3ELISA：
在1周培养后，来自乳腺培养基中的hBMC培养物的乳铁蛋白和α-乳白蛋白分泌的ELISA结果在此表7中报告，如下针对每个供体。
表7
供体 1 2 3
乳铁蛋白(μg/mL) 48 95 80
乳白蛋白(μg/mL) 0.8 5.5 4.8
3总结和结论
·hBMC表达各种水平的胚胎干细胞标志物，确认存在能够分化成各种细胞系的胚胎干细胞。
·在乳腺分化条件下，这些胚胎干细胞中的一些细胞获得了乳腺样形态，其保持约两周。
因此，在本研究的条件下，乳腺样细胞表现出分化并且能够培养。
实施例2
分析由乳腺细胞分泌的脂质
方法：分析如上文所述在过程1.4中在1和2周时获得的上清液，以研究由乳腺细胞分泌的若干脂质类别中包含的脂肪酸的存在。配备7693自动取样机的7890A气相色谱仪配备有熔融石英CP-Sil 88毛细管柱(100％氰丙基聚硅氧烷)，该自动取样机配备有制备性站点模块；使用100m×0.25mm ID×0.25mm的膜厚度，同时使用以250℃加热的分流进样器(1:25的比率)和在300℃下被操作的火焰电离检测器。
通过甲醇氯酸(methanolic chloridric acid)直接对样本进行酯交换反应来进行脂肪酸甲酯(FAME)的制备。使用毛细管气相色谱(GC)FID法进行FAME的分离。
FAME的识别通过保留时间(RT)进行，并与外标进行比较。FA的定量通过使用甲基C11:0作为内标进行计算。用TAG C13:0作为第二内标来控制上述方法的酯交换性能。
·向10mL螺旋盖玻璃试管添加250mL上清液样品。
·添加300ml内标FAME C11:0溶液
·添加300ml内标TAG C13:0溶液
·添加2mL甲醇。
·添加2mL甲醇/HCI(3N)。
·添加1mL己烷。
·给试管紧固地盖上盖子并剧烈摇动。
·加热100℃/60分钟，偶尔摇动。
·使其冷却至室温(约15分钟)。
·添加2mL水。
·以1200g离心5分钟。
·将己烷相(上层相)过滤通过含有玻璃棉和无水硫酸钠的巴斯德吸管，进入清洁的空GC小瓶中。
结果：分析显示，如表5、图1和表6、图2中所报告的脂肪酸分别存在1周和2周；示出乳腺细胞用于脂质生产的功能性。
表5
脂肪酸 平均所有供体(第1周) SD
C-12:0 0.3
C-16:0 7.3 4.9
C-18:0 1.9 2.0
C-18:1n9 5.7 1.7
C-18:2 3.2 0.6
表6
脂肪酸 平均所有供体(第2周) SD
C-12:0 1.4
C-16:0 8.3 2.6
C-18:0 2.8 1.3
C-18:1n9 5.0 2.5
C-18:2 2.6 0.7
实施例3
分析上清液中的蛋白质
方法：根据Dzieciatkowska等人所述的过程，识别如上所述在1.4中在1周时获得的上清液样品中的蛋白质(Dzieciatkowska M.,Hill R,and Hansen KC,Methods MolBiol.2014；1156:53–66；GeLC-MS/MS Analysis of Complex Protein Mixtures)。简而言之，通过一维SDS-PAGE分析分离培养上清液中的蛋白质。在蛋白质染色后，切除检测到的蛋白质条带并凝胶内消化，然后通过LC-MS/MS分析分离和检测释放的肽。使用Mascot(MatrixScience)，通过蛋白质数据库检索进一步处理MS谱。应用严格的过滤标准(肽质量容差：5ppm；半胰蛋白酶切割；错误发现率(FDR)：1％；角蛋白污染滤出)，以在上清液中的牛蛋白质的高背景下检测人蛋白质(由于培养基中存在胎牛血清)。
结果：在该分析中已经识别出三种不同的人乳蛋白，即α-2-巨球蛋白、间α-胰蛋白酶抑制剂重链H2和乳铁蛋白。例如，用独特的不同于对应的同源牛乳铁蛋白肽的14种相匹配肽识别人乳铁蛋白。来自乳铁蛋白的人和牛的肽的串联MS肽谱匹配的两个实施例在下图3和图4中给出。这些结果证实了hBMC培养物的上清液中存在人乳蛋白，例如乳铁蛋白。
实施例4
上清液中碳水化合物的分析
方法：根据Austin和Bénet针对人乳所述的过程，分析如上所述在1.4中在1、2和3周时获得的上清液样品中是否存在乳糖或人乳低聚糖[Austin,S.；Benet,T.Quantitativedetermination of non-lactose milk oligosaccharides.Analytica Chimica Acta2018,1010,86-96]。简而言之，将一个等分试样的初级细胞上清液与海带三糖溶液混合，之后用2-氨基苯甲酰胺标记。标记后，用UHPLC分析样品并且针对假设等摩尔响应因子的麦芽三糖的校准曲线定量检测到的乳糖或低聚糖。
结果在图5中报告。
结果：在1、2和3周分化时，在初级细胞上清液中发现乳糖，浓度在10mg/L和25mg/L之间变化。
应当理解，对本文所述的目前优选的实施方案作出的各种变化和修改对于本领域的技术人员将为显而易见的。可在不脱离本发明的实质和范围并在不减少所伴随的优点的情况下作出这些变化和修改。因此，此类变化和修改旨在由所附权利要求书涵盖。

Claims (14)

1.用于生产哺乳动物乳样产物的方法，所述方法包括：
A)生成源自哺乳动物成体母乳干细胞(mBSC)的乳腺细胞乳腺样腺体类器官；
B)从此类来自哺乳动物成体母乳干细胞(mBSC)的乳腺细胞中分泌所述哺乳动物乳样产物。
2.根据权利要求1所述的方法，所述方法用于生产非标准人乳样产物，所述方法包括：
A)生成源自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞乳腺样腺体类器官；
B)从此类来自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞中分泌所述人乳样产物；
其中此类非标准人乳样产物包括选自以下的营养物质或生物活性物质中的一种或多种：蛋白质、肽、脂质、碳水化合物、维生素、矿物质、胆碱、肌醇、左旋肉碱、生长因子、细胞因子、益生菌、胞外囊泡、来自外泌体和分泌型IgA的生物活性物质。
3.根据权利要求1或2所述的方法，所述方法任选包括步骤C)，由此根据权利要求1所述的人乳样产物进一步经过处理以获得修饰的人乳样产物。
4.根据权利要求3所述的方法，其中步骤C)选自：纯化步骤、分离过程、提取过程、分级步骤、富集过程、酶处理、添加另外的组分及其组合。
5.根据权利要求2至4中任一项所述的用于生产人乳样产物的方法，其中根据步骤A)的培养条件适应于生成源自人成体母乳干细胞(hBSC)的乳腺细胞，所述乳腺细胞能够分泌非标准人乳样产物。
6.根据权利要求3至5中任一项所述的方法，其中通过向步骤B)的所述人乳样产物中添加未由步骤B)中所述乳腺细胞分泌的一种或多种人母乳组分，在步骤C)中获得修饰的人乳样产物。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述乳腺细胞是在步骤A)中生成的乳腺样类器官结构的一部分。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述人乳样产物由选自以下的生物活性物质组成或包含选自以下的生物活性物质：低聚糖、脂质和蛋白质。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述人乳样产物由选自以下的生物活性物质组成或包含选自以下的生物活性物质：乳糖、C12:0、C16:0、C18:0、C18:1n-9、C18:2、乳铁蛋白和α-乳白蛋白。
10.人乳样产物，所述人乳样产物能够根据权利要求2至9中任一项所述的方法获得。
11.根据权利要求10所述的人乳样产物，所述人乳样产物包含选自以下的生物活性物质或由选自以下的生物活性物质组成：低聚糖、脂质和蛋白质。
12.根据权利要求11所述的人乳样产物，所述人乳样产物包含选自以下的生物活性物质或由选自以下的生物活性物质组成：乳糖、C12:0脂肪酸，C16:0脂肪酸，C18:0脂肪酸，C18:1n-9脂肪酸，C18:2脂肪酸、乳铁蛋白和α-乳白蛋白。
13.根据权利要求10至12中任一项所述的人乳样产物，其用于治疗。
14.根据权利要求10至12中任一项所述的人母乳样产物作为母乳喂养替代物的用途。
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