CN115436526B - 拉洛他赛及其有关物质llts-i12的检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种拉洛他赛及其有关物质LLTS‑I12的检测方法，其包括：采用高效液相色谱对供试品溶液进行检测；检测波长：228‑232nm；流动相A：0.04～0.06Vt％的磷酸水，流动相B：乙腈；梯度洗脱，程序为：流动相A和流动相B的体积比变化为：0～5min为59﹕41；5～6min从59﹕41变至30﹕70；6～12min为30:70；12～13min从30﹕70变至10﹕90；13～20min为10﹕90；20～21min从10:90变至59﹕41；21min～30min为59﹕41。该检测方法可实现对拉洛他赛及其有关物质LLTS‑I12的检测，同时排除其他9种杂质对检测的干扰。
Description
技术领域
本发明涉及化学药物分析技术领域，具体而言，涉及一种拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法及应用。
背景技术
众所周知，只有保证药物的纯度，才能保证药物的有效和安全，因此药物纯度的检测方法就显得尤为重要，有关物质(Telated substances)是指在原料药生产中带入的起始物料、试剂、中间体、副产物等物质，也可能是制剂在生产、储藏和运输过程中产生的降解产物、聚合物或晶型转变等特殊杂质。有关物质的种类与药物的合成路线和生产工艺密切相关，不同的合成路线和生产工艺，药品的杂质谱也会发生变化，因此，需要根据不同的合成路线和生产工艺建立合适的分析方法，达到对药物有关物质准确、有效的检测和监控。目前，对于药物纯度的检测方法有多种，其中，有关物质检测是控制药品质量的重要指标。
拉洛他赛是化学药品1.1类新药，为第一代紫杉烷类抗肿瘤药，与紫杉醇和多西他赛的作用机制相同，拉洛他赛通过干扰细胞有丝分裂和分裂间期细胞功能所必需的微管网络从而起到抗肿瘤作用。
拉洛他赛脂质微球注射液为灭菌的注射液，本品主成分为拉洛他赛，辅料为大豆油、中链脂肪酸甘油酯、磷脂、普朗尼克F68、甘油，经过灭菌制成的乳状液体，直接用于静脉注射而不再稀释。除了常规的原料工艺杂质(杂质LLTS-I1～LLTS-I4、杂质LLTS-I6、杂质LLTS-I8～LLTS-I11)和降解杂质(杂质LLTS-I5和杂质LLTS-I7)，杂质LLTS-I12是拉洛他赛脂质微球注射液中的主要降解杂质。杂质LLTS-I12的产生主要与拉洛他赛脂质微球注射液的pH和灭菌时间有关系，其含量较高，因此，为了保证制剂工艺的稳定性、本品质量的可控性，建立杂质LLTS-I12的分析及检测方法尤为重要。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法及应用，以改善上述技术问题。
本发明是这样实现的：
第一方面，本发明提供了一种拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法，其包括以下步骤：采用高效液相色谱对供试品溶液进行检测；
其中，所述高效液相色谱的检测条件包括：
检测波长：228-232nm；
流动相A：体积浓度为0.04～0.06％的磷酸水，流动相B：乙腈；
洗脱方式为梯度洗脱，洗脱程序为：
梯度洗脱的流速为1.4mL/min-1.6mL/min。
第二方面，本发明还提供了上述拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法在检测拉洛他赛原料中的应用。
第三方面，本发明还提供了上述拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法在拉洛他赛脂质微球注射液中的应用。
本发明具有以下有益效果：通过以上设定的色谱条件，可实现对拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测，特别是可对拉洛他赛脂质微球注射液杂质LLTS-I12的定量检测，同时排除其他9种拉洛他赛有关物质(杂质LLTS-I1～LLTS-I2、LLTS-I4～LLTS-I10)对有关物质LLTS-I12和拉洛他赛检测的干扰，建立了拉洛他赛脂质微球注射液中有关物质LLTS-I12的研究方法，可以满足新药对于有关物质的控制要求。该法专属性强，耐用性好，有效控制了拉洛他赛脂质微球注射液的质量。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为高效液相色谱初始比例A-B(60:40)的色谱图的叠加图；
图2为高效液相色谱不同流动相初始比例供试品溶液对比图；
图3为实施例1中各杂质对照品溶液和供试品溶液色谱图的叠加图；
图4为实施例1中杂质LLTS-I12对照品溶液、空白辅料溶液和供试品溶液色谱图叠加图；
图5-图24依次为实施例2-实施例11的杂质LLTS-I12对照品定位色谱图和供试品溶液色谱图；
图25为拉洛他赛标准曲线图；
图26为杂质LLTS-I12标准曲线图；
图27为未破坏原料、制剂和杂质LLTS-I12色谱图的叠加图；
图28为各破坏条件下原料色谱图的叠加图；
图29为各破坏条件下制剂色谱图的叠加图。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明提出的一种拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法及应用进行具体说明。
拉洛他赛原料工艺中产生9个杂质(工艺杂质及降解杂质)，制剂制备过程中会产生的1个降解杂质，该制剂的降解杂质含量约1.5％左右，该品种杂质较多，所以本品的质量控制难度大，要求高，目前，各国药典及相关文献均未涉及有关物质LLTS-I12的检测方法，基于此，发明人按照《化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则》、《化学药物杂质研究技术指导原则》相关要求，并根据本品合成工艺路线、杂质性质，确定有关物质LLTS-I12，经过大量研究和实践，提出了以下检测方法。
本发明的一些实施方式提供了一种拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法，其包括以下步骤：采用高效液相色谱对供试品溶液进行检测；
其中，所述高效液相色谱的检测条件包括：
检测波长：228-232nm；
流动相A：体积浓度为0.05％的磷酸水，流动相B：乙腈；
洗脱方式为梯度洗脱，洗脱程序为：
梯度洗脱的流速为1.4mL/min-1.6mL/min。
其中，有关物质LLTS-I12的杂质结构如下：
一些实施方式，洗脱程序中，0-5min，流动相A和流动相B的体积比维持不变。
进一步对洗脱程序进行优化，一些实施方式中，洗脱程序为：
具体地，一些实施方式中，高效液相色谱采用的色谱柱为C18色谱柱，检测时，色谱柱的柱温为25-35℃，例如，柱温可为25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃或35℃等。
示例性地，高效液相色谱采用的色谱柱为Nano ChromcoreTM 120 C18 4.6mm×250mm，5μm，检测时，色谱柱的柱温为30℃。
为了使得色谱的出峰能够达到预期，对进样量进行了选择，一些实施方式中，高效液相色谱的进样量为5-20μL，例如，进样量可为10μL。
进一步地，为了对待检测物质以及其相关物质进行充分溶解，以达到较佳的检测效果，一些实施方式中，供试品溶液以及检测过程所用有关杂质的对照品溶液采用的溶剂为甲醇。
一些实施方式中，上述高效液相色谱检测过程通过自身对照法对所述供试品溶液中有关杂质的含量进行计算。
具体地，有关杂质的含量的计算方法包括：将供试品溶液、对照溶液分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的色谱峰面积，以自身对照法计算得到供试品溶液中有关杂质的含量。
本发明的一些实施方式还提供了上述拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法在检测拉洛他赛原料中的应用。拉洛他赛原料中也有可能带有杂质LLTS-I12，将拉洛他赛原料溶解后即可以对拉洛他赛原料进行检测，确定其杂质LLTS-I12的含量，进而能够更好的实现质量控制。
本发明的一些实施方式还提供了上述拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法在拉洛他赛脂质微球注射液中的应用。
具体地，分别精密量取进样剂量的杂质LLTS-I1～LLTS-I2、杂质LLTS-I4～LLTS-I10、杂质LLTS-I12对照品定位溶液和供试品溶液，注入液相色谱仪，按照上述实施方式的高效液相色谱检测条件进行检测，并记录色谱图。
以上检测方法能够在保证各有关物质(杂质LLTS-I1～LLTS-I2、LLTS-I4～LLTS-I10)与有效成分(拉洛他赛)、关键杂质LLTS-I12高效分离的基础上，使其具有良好的专属性、重复性与准确度，更好地实现对拉洛他赛及相关制剂的质量控制。
发明人通过以下过程进行了研究和验证了一些色谱参数。
色谱柱：Nano ChromcoreTM 120 C18(5μm，4.6×250mm)；流动相A：0.05Vt％磷酸水；流动相B：乙腈；检测波长：230nm；流速：1.5mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL；溶剂：甲醇。
梯度洗脱程序如下：
杂质LLTS-I12对照品贮备液：精密称取杂质LLTS-I12对照品5.143mg，置50mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。
杂质LLTS-I12定位溶液：精密量取杂质LLTS-I12对照品贮备液1mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。
杂质LLTS-I2和LLTS-I8定位溶液：移取杂质LLTS-I2和LLTS-I8对照品贮备液(约200μg/mL)各100μL，置不同液相小瓶中，加甲醇900μL，混匀，制成浓度均约20μg/mL的杂质定位溶液。
空白辅料溶液：精密量取空白辅料溶液5mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤。
供试品溶液：精密量取本品拉洛他赛脂质微球注射液(210801S批样品)5mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤。
对照溶液：精密量取供试品溶液1mL，置50mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。
结果如图1和图2所示，图1中，图谱从下至上：空白溶剂、杂质LLTS-I12定位溶液、供试品溶液、空白辅料溶液、对照溶液、杂质LLTS-I2定位溶液、杂质LLTS-I8定位溶液。图2中，图谱从下至上：A相-B相(60:40)、A相-B相(59:41)、A相-B相(61:39)、A相-B相(58:42)。
由图1可知，当流动相初始比例A相-B相(60:40)时，空白溶剂和空白辅料均不干扰杂质LLTS-I12和拉洛他赛检测，杂质LLTS-I2和LLTS-I8均不干扰杂质LLTS-I12与拉洛他赛检测，方法合适。由图2可知，当流动相初始比例A相-B相(61:39)时，供试品溶液中杂质LLTS-I12后相邻杂质峰消失，怀疑该峰与杂质LLTS-I12重叠，故此流动相初始比例不合适。当流动相初始比例A相-B相(60:40、59:41、58:42)时，供试品溶液中杂质LLTS-I12与前后杂质分离度均符合要求，杂质检出个数一致，为了保证方法耐用性，所以选择流动相初始比例A相-B相(59:41)为流动相初始比例。
按照《化学药物质量控制分析方法验证技术指导原则》、《化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则》、《化学药物杂质研究技术指导原则》、《化学药物残留溶剂研究技术指导原则》以及现行版《中华人民共和国药典》附录中有关的指导原则进行方法学验证。需要验证项目为专属性、耐用性、线性、准确度、溶液稳定性、重复性、中间精密度、定量限、检测限等。
表1有关物质检查方法学验证结果
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供了一种拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法，其具体为：
(1)检测条件
仪器：Agilent 1260高效液相色谱仪，DAD检测器，检测波长：230nm；
色谱柱：ChromcoreTM 120 C18(4.6×250mm，5μm)色谱柱；
流动相：流动相A和流动相B；
其中，流动相A的配制包括：取水1000mL与0.5mL磷酸混匀；流动相B为乙腈；流速：1.5mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL；按梯度表2进行线性梯度洗脱。
表2梯度洗脱程序表(体积比)
| 时间 | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0 | 59 | 41 |
| 5 | 59 | 41 |
| 6 | 30 | 70 |
| 12 | 30 | 70 |
| 13 | 10 | 90 |
| 20 | 10 | 90 |
| 21 | 59 | 41 |
| 30 | 59 | 41 |
(2)检测步骤
空白辅料溶液：精密量取空白辅料溶液5mL，置10mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过。其他杂质对照品定位溶液的制备：取杂质LLTS-I1～LLTS-I2、LLTS-I4～LLTS-I10对照品各适量，分别加甲醇溶解并稀释制成约含杂质LLTS-I6和LLTS-I9各10μg/mL的溶液，约含杂质LLTS-I1～LLTS-I5、LLTS-I7-LLTS-I8、LLTS-I10各约20μg/mL的溶液，作为各杂质对照品定位溶液。
杂质LLTS-I12对照品定位溶液的制备：取杂质LLTS-I12对照品适量，加甲醇溶解并稀释制成每lmL中约含杂质LLTS-I12 10μg的溶液，作为杂质LLTS-I12对照品定位溶液。
供试品溶液：精密称取本品(210801S批样品)5mL(约相当于拉洛他赛5mg)，置10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
分别精密量取杂质LLTS-I1～LLTS-I2、杂质LLTS-I4～LLTS-I10、杂质LLTS-I12对照品定位溶液、空白辅料溶液和供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按照步骤(1)中的条件进行检测，记录色谱图。见图3～图4(图3为本实施例各杂质和供试品叠加图；图4为本实施例杂质LLTS-I12、供试品和空白辅料溶液叠加图)。在图3中，拉洛他赛的其他杂质(杂质LLTS-I1～LLTS-I2、杂质LLTS-I4～LLTS-I10)均不干扰有关物质LLTS-I12和拉洛他赛的检测。
实施例2
本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，流速为1.4mL/min。供试品溶液中相邻杂质之间分离度见表3，其杂质LLTS-I12对照品定位色谱图和供试品溶液色谱图如图5和图6所示。
表3各成分之间的分离数据
| 化合物 | 保留时间 | 分离度 | 理论板数 | 拖尾因子 |
| 有关物质LLTS-I12 | 4.308 | / | 8126 | 1.06 |
| 未知杂质 | 4.927 | 3.38 | 12416 | 1.02 |
| 拉洛他赛 | 11.512 | 35.27 | 54108 | 1.02 |
实施例3
本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，流速为1.6mL/min。供试品溶液中相邻杂质之间分离度见表4，其杂质LLTS-I12对照品定位色谱图和供试品溶液色谱图如图7和图8所示。
表4各成分之间的分离数据
| 化合物 | 保留时间 | 分离度 | 理论板数 | 拖尾因子 |
| 有关物质LLTS-I12 | 3.811 | / | 7022 | 1.04 |
| 未知杂质 | 4.314 | 2.92 | 10939 | 1.03 |
| 拉洛他赛 | 10.756 | 36.80 | 53163 | 1.02 |
实施例4
本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，柱温为25℃。供试品溶液中相邻杂质之间分离度见表5，其杂质LLTS-I12对照品定位色谱图和供试品溶液色谱图如图9和图10所示。
表5各成分之间的分离数据
| 化合物 | 保留时间 | 分离度 | 理论板数 | 拖尾因子 |
| 有关物质LLTS-I12 | 4.057 | / | 6965 | 1.08 |
| 未知杂质 | 4.669 | 3.37 | 11982 | 1.07 |
| 拉洛他赛 | 11.254 | 35.91 | 51554 | 1.03 |
实施例5
本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，柱温为35℃。供试品溶液中相邻杂质之间分离度见表6，其杂质LLTS-I12对照品定位色谱图和供试品溶液色谱图如图11和图12所示。
表6各成分之间的分离数据
| 化合物 | 保留时间 | 分离度 | 理论板数 | 拖尾因子 |
| 有关物质LLTS-I12 | 4.045 | / | 7474 | 1.01 |
| 未知杂质 | 4.530 | 2.76 | 11930 | 1.01 |
| 拉洛他赛 | 10.967 | 36.57 | 54222 | 1.01 |
实施例6
本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，检测波长为228nm。供试品溶液中相邻杂质之间分离度见表7，其杂质LLTS-I12对照品定位色谱图和供试品溶液色谱图如图13和图14所示。
表7各成分之间的分离数据
| 化合物 | 保留时间 | 分离度 | 理论板数 | 拖尾因子 |
| 有关物质LLTS-I12 | 4.085 | / | 8236 | 1.06 |
| 未知杂质 | 4.615 | 3.12 | 12820 | 1.05 |
| 拉洛他赛 | 11.126 | 37.55 | 57749 | 1.03 |
实施例7
本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，检测波长为232nm。供试品溶液中相邻杂质之间分离度见表8，其杂质LLTS-I12对照品定位色谱图和供试品溶液色谱图如图15和图16所示。
表8各成分之间的分离数据
| 化合物 | 保留时间 | 分离度 | 理论板数 | 拖尾因子 |
| 有关物质LLTS-I12 | 4.077 | / | 8045 | 1.06 |
| 未知杂质 | 4.606 | 3.09 | 12648 | 1.06 |
| 拉洛他赛 | 11.117 | 37.65 | 57770 | 1.02 |
实施例8
本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，磷酸浓度为0.04％。供试品溶液中相邻杂质之间分离度见表9，其杂质LLTS-I12对照品定位色谱图和供试品溶液色谱图如图17和图18所示。
表9各成分之间的分离数据
| 化合物 | 保留时间 | 分离度 | 理论板数 | 拖尾因子 |
| 有关物质LLTS-I12 | 3.997 | / | 7199 | 1.07 |
| 未知杂质 | 4.607 | 3.41 | 11329 | 1.04 |
| 拉洛他赛 | 11.123 | 35.91 | 53941 | 1.02 |
实施例9
本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，磷酸浓度为0.06％。供试品溶液中相邻杂质之间分离度见表10，其杂质LLTS-I12对照品定位色谱图和供试品溶液色谱图如图19和图20所示。
表10各成分之间的分离数据
| 化合物 | 保留时间 | 分离度 | 理论板数 | 拖尾因子 |
| 有关物质LLTS-I12 | 4.006 | / | 7481 | 1.06 |
| 未知杂质 | 4.595 | 3.33 | 11598 | 1.02 |
| 拉洛他赛 | 11.099 | 36.09 | 52949 | 1.02 |
实施例10
本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，流动相水相-有机相初始比例为(58:42)。供试品溶液中相邻杂质之间分离度见表11，其杂质LLTS-I12对照品定位色谱图和供试品溶液色谱图如图21和图22所示。
表11各成分之间的分离数据
实施例11
本实施例参考实施例1的检测方法，区别仅在于：步骤(2)的高效液相色谱检测条件中，流动相水相-有机相初始比例为(60:40)。供试品溶液中相邻杂质之间分离度见表12其杂质LLTS-I12对照品定位色谱图和供试品溶液色谱图如图23和图24所示。
表12各成分之间的分离数据
| 化合物 | 保留时间 | 分离度 | 理论板数 | 拖尾因子 |
| 有关物质LLTS-I12 | 4.392 | / | 8053 | 1.09 |
| 未知杂质 | 4.743 | 1.91 | 12013 | 1.10 |
| 拉洛他赛 | 11.164 | 35.32 | 53322 | 1.02 |
验证试验例
(1)线性与范围
参见实施例1的检测方法，根据杂质LLTS-I12的限度，考察拉洛他赛和杂质LLTS-I12在定量限浓度～6.0％供试品溶液测定浓度范围内，峰面积与浓度的线性关系结果如表13-14和图25-图26所示。
表13拉洛他赛线性测试结果
表14杂质LLTS-I12线性测试结果
(2)定量限与检测限
精密称取杂质及拉洛他赛对照品，加甲醇溶解并稀释配制成一定浓度的溶液，按照实施例1的检测方法进样，当信噪比≥10时即为定量限溶液，当信噪比约为≥3时即为检测限溶液。
表15检测限溶液稀释过程及检测结果
其中，对其稀释方法进行说明：1mL→10mL，0.2mL→20mL，4mL→10mL是指，取1mL起始浓度为191.2464μg/mL的有关物质LLTS-I12储备液，稀释至10mL；再取稀释后的溶液0.2mL，稀释至20mL；再取稀释后的溶液4mL，稀释至10mL，得到检测限溶液。下表16中的定量限溶液稀释过程同理。
表16定量限溶液稀释过程及检测结果
表17定量限测试结果
分别取上述有关物质LLTS-I12的定量限溶液，采用实施例1的色谱条件连续进样6次，测试结果见表16-17。从表中可知，有关物质LLTS-I12的定量限溶液连续进样6次，峰面积RSD小于5.0％，保留时间RSD小于1.0％，相对供试品百分浓度均远远小于0.1％，灵敏度符合要求。
(3)专属性实验数据及图谱
以DAD为检测器，考察210801S批样品(拉洛他赛微球注射液，厂家：山西振东制药股份有限公司)，原料(批号：200701s，厂家：山西振东制药股份有限公司)，辅料(批号：20210802，厂家：山西振东制药股份有限公司)在强制降解条件下杂质降解情况，验证主峰纯度以及主峰与相邻杂质之间的分离度是否符合要求。测试结果分别见图27-29。其中图27为拉洛他赛原料、有关物质LLTS-I12和拉洛他赛脂质微球注射液色谱图叠加图，图28拉洛他赛原料各破坏条件下的色谱图叠加图，图29为拉洛他赛脂质微球注射液各破坏条件下的色谱图叠加图。拉洛他赛脂质微球注射液各破坏条件下，有关物质LLTS-I12与相邻杂质之间的分离度、有关物质LLTS-I12峰纯度见表18。
表18有关物质LLTS-I12专属性实验结果
根据上述结果可知：有关物质LLTS-I12在原料中基本不存在，他的产生来源于制剂工艺(如图27)；在各破坏条件下，原料中的有关物质LLTS-I12基本不会产生，也未检出(如图28)；有关物质LLTS-I12与相邻杂质之间分离度均大于1.5；有关物质LLTS-I12峰纯度角均符合要求；制剂中能检出有关物质LLTS-I12，并且在酸、碱、高温、光照和氧化条件下有关物质LLTS-I12的含量基本无变化，所以酸、碱、氧化、高温和光照不会导致有关物质LLTS-I12降解(如图29)。
综上所述，本发明实施例根据拉洛他赛的原料合成工艺，结合其可能降解途径，对拉洛他赛原料及制剂中可能的降解杂质进行了控制。通过拟定的色谱条件，可实现对拉洛他赛脂质微球注射液有关物质LLTS-I12的定量检测，同时排除其他9种拉洛他赛有关物质(杂质LLTS-I1～LLTS-I2、LLTS-I4～LLTS-I10)对有关物质LLTS-I12和拉洛他赛检测的干扰，建立了拉洛他赛脂质微球注射液中有关物质LLTS-I12的研究方法，可以满足新药对于有关物质的控制要求。该法专属性强，耐用性好，有效控制了拉洛他赛脂质微球注射液的质量，也可以用于实际生产中的有效控制。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法，其特征在于，其包括以下步骤：采用高效液相色谱对供试品溶液进行检测；
其中，所述LLTS-I12的结构式为：；
所述高效液相色谱的检测条件包括：
检测波长：228-232nm；
流动相A：体积浓度为0.04%~0.06%的磷酸水，流动相B：乙腈；
洗脱方式为梯度洗脱，洗脱程序为：
梯度洗脱的流速为1.4mL/min-1.6mL/min；
采用的色谱柱为C18色谱柱，检测时，所述色谱柱的柱温为25-35℃；
进样量为5-20μL。
2.根据权利要求1所述的拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法，其特征在于，洗脱程序中，0-5min，流动相A和流动相B的体积比维持不变。
3.根据权利要求1所述的拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法，其特征在于，洗脱程序为：
。
4.根据权利要求1所述的拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱采用的色谱柱为Nano ChromcoreTM 120 C18 4.6mm×250mm，5μm，检测时，所述色谱柱的柱温为30℃。
5.根据权利要求1所述的拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱的进样量为10μL。
6.根据权利要求1所述的拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法，其特征在于，所述供试品溶液以及检测过程所用有关杂质的对照品溶液采用的溶剂为甲醇。
7.根据权利要求1~6任一项所述的拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法，其特征在于，通过自身对照法对所述供试品溶液中有关杂质的含量进行计算。
8.根据权利要求7所述的拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法，其特征在于，所述有关杂质的含量的计算方法包括：将供试品溶液、对照溶液分别注入高效液相色谱仪中，测定相应的色谱峰面积，以自身对照法计算得到所述供试品溶液中有关杂质的含量。
9.如权利要求1~8任一项所述的拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法在检测拉洛他赛原料中的应用。
10.如权利要求1~8任一项所述的拉洛他赛及其有关物质LLTS-I12的检测方法在拉洛他赛脂质微球注射液中的应用。
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