CN115417827B - 6-氨基-1,3,5-三嗪类化合物及其合成方法和应用 - Google Patents

6-氨基-1,3,5-三嗪类化合物及其合成方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种6‑氨基‑1，3，5‑三嗪类化合物或其可药用的盐，化合物结构如通式(I)所示。所述化合物对BTK均有较强的抑制作用，同时能够拮抗肿瘤细胞Raji、Ramos增殖，通过选择性与BTK的不可逆结合并抑制其活性，阻断BCR信号通路，对淋巴瘤有较好的抑制作用。
Figure DDA0003874391220000011

Description

6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物及其合成方法和应用
技术领域
本发明涉及一种化合物、合成方法及用途，具体为6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物及其合成方法和应用。
背景技术
淋巴瘤是最常见的淋巴造血系统恶性肿瘤，一般原发于淋巴结或结外淋巴组织。目前，淋巴瘤已经成为全球十大恶性肿瘤之一，其发病率逐年上升。因此，研发用于治疗淋巴瘤的药物具有重要的临床意义。B细胞受体(B cell receptor，BCR)信号通路是调控淋巴细胞生长的重要途径，BCR信号通路的过度激活是多种淋巴瘤发病的主要原因。布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase，BTK)主要在B细胞中表达，是BCR信号通路的关键组成部分，它能够调控B细胞正常的增殖、生长以及凋亡，BTK活性失调可导致成熟B细胞淋巴组织增生性疾病和随后的癌症进展。因此，BTK被认为是治疗B细胞淋巴瘤的有效靶点。目前已有五种BTK抑制剂成功上市，证明了BTK抑制剂对于多种B细胞淋巴瘤有出色的疗效，但目前上市的BTK小分子抑制剂仍存在一定的缺陷，例如普遍存在因药物脱靶导致的严重不良反应及长期服药导致的获得性耐药等问题。因此，开发新型高效、高选择性的BTK抑制剂具有重要意义。
BTK作为BCR信号通路和B细胞存活中的关键调控激酶，是治疗B细胞恶性肿瘤的重要靶点。2013年，首个BTK抑制剂Ibrutinib上市，这使得B细胞淋巴瘤的治疗获得了突破性进展。Ibrutinib的成功上市，证明了BTK抑制剂作为淋巴瘤治疗药物的可行性。然而，近年来B细胞淋巴瘤发病率不断上升，Ibrutinib长期用药导致的不良反应和严重副作用不容忽视，已有的BTK抑制剂不能完全满足治疗需求，因此，亟需开发更具有选择性的BTK抑制剂。在目前已报道大量结构新颖的BTK抑制剂中，可逆抑制剂虽在选择性等方面具有一定优势，但其药代动力学不佳等种种缺陷导致仍未有相关药物上市；BTK-PROTACs相关化合物虽具有新颖的作用模式，但PROTAC类药物的开发仍处于早期阶段，其成药性和非特异性毒性仍未明朗。因此，开发新型选择性不可逆BTK抑制剂仍是目前BTK抑制剂研究重点关注的方向。
发明内容
发明目的：本发明的目的在于提供一种6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物。本发明另一个目的是提供所述6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物的合成方法。本发明还有一个目的是提供所述6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物在制备治疗淋巴瘤药物中的应用。
技术方案：本发明所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐，化合物结构如通式(I)所示：
Figure BDA0003874391200000021
其中，
R1选自-(CH2)mCH3、-H、卤素、-O(CH2)nCH3中的任一种，
m，n分别选自0、1、2、3中的任一个，
R2选自以下结构：
Figure BDA0003874391200000022
R选自以下结构：
Figure BDA0003874391200000023
所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐，所述卤素选自F、Cl、Br、I中的任一种。
所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐，化合物选自如下：
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(A1)
N-(4-(4-((4-甲基-3-丙烯酰胺基苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(A2)
N-(4-(4-((4-甲氧基-3-丙烯酰胺苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(A3)
N-(4-(4-((1-丙烯酰基二氢吲哚-6-基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(A4)
N-(4-(4-氨基-6-((3-(N-甲基丙烯酰胺基)苯基)氨基)-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(A5)
N-(4-(4-((4-氟-3-丙烯酰胺苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(A6)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(A7)
(E)-N-(4-(4-氨基-6-((3-(2-丁烯酰胺基)-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(A8)
N-(4-(4-氨基-6-((3-丙酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)-苯基)氨基)-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(A9)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(B1)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-氟苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(B2)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-(三氟甲基)苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(B3)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲氧基苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(B4)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)苯甲酰胺(C1)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-甲基苯甲酰胺(C2)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-三氟甲基苯甲酰胺(C3)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-3-三氟甲基苯甲酰胺(C4)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-异丙基苯甲酰胺(C5)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-甲氧基苯甲酰胺(C6)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-羟基苯甲酰胺(C7)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-环己基苯甲酰胺(C8)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-(1，4-苯并二恶烷-6-基)-甲酰胺(C9)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-(1，3-苯并二恶茂-5-基)-甲酰胺(C10)
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺基-4-(吗啉基-4-羰基)苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-(苯并噻吩-2-基)-甲酰胺(C11)。
Figure BDA0003874391200000041
所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐的合成方法，包括以下步骤：
Figure BDA0003874391200000051
药物组合物，包含所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐、药学上可接受的载体。
所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐或所述的组合物在制备BTK抑制剂中的应用。
所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐或所述的组合物在制备选择性不可逆BTK抑制剂中的应用。
所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐或所述的药物组合物在制备治疗淋巴瘤药物中的应用。
本发明所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物，该化合物为选择性不可逆BTK抑制剂，其通过选择性与BTK的不可逆结合并抑制其活性，阻断BCR信号通路，发挥治疗淋巴瘤，特别是B细胞淋巴瘤的作用。
有益效果：本发明与现有技术相比，具有如下优点：本发明合成的大部分化合物对BTK均有较强的抑制作用，同时能够拮抗肿瘤细胞Raji、Ramos增殖，其中化合物C11的抑制活性最佳，进一步实验结果表明，C11可以将细胞周期阻滞在G1期，且可以显著地诱导细胞凋亡。
附图说明
图1为在Raji细胞中C11对于细胞凋亡和细胞周期的影响实验结果。
具体实施方式
实施例1
N-(4-(4-((3-丙烯酰胺苯基)氨基)-6-氨基-1，3，5-三嗪-2-基)-2-甲基苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺(A1)的合成
合成路线：
Figure BDA0003874391200000061
步骤1：
将4-溴-2甲基苯腈17(2.0g，10.2mmol)溶于10mL四氢呋喃中，在N2保护下加入30.6mL BH3·THF，冰浴下反应1h，然后85℃反应过夜。通过TLC监测反应结束后，加入甲醇淬灭反应。将反应减压浓缩至干，柱层析得到白色固体18(1.81g，89％)。1H NMR(300MHz，Methanol-d4)δ7.44-7.22(m，3H)，3.90(s，2H)，2.38(s，3H).
步骤2：
将4-叔丁基苯甲酸19(1g，5.6mmol)溶解在10mL无水DCM中，加入催化量DMF，在冰浴N2保护下缓慢滴加草酰氯(2.85g，22.5mmol)，有白色烟雾生成，TLC监测反应结束后，将4-溴-2-甲基苄胺18(1.12g，5.6mmol)及DIPEA(2.17g，16.8mmol)加入上述反应液中，有大量浓烟生成，室温下反应1h，TLC监测反应结束后，加水淬灭反应。混合溶液水洗后，用饱和NaCl溶液洗涤，有机相减压浓缩至干，柱层析纯化后得到白色固体20(1.62g，80％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.10(s，1H)，7.95(d，J＝8.1Hz，2H)，7.57(dd，J＝8.0，5.8Hz，3H)，7.36(d，J＝7.8Hz，1H)，7.21(t，J＝7.9，7.9Hz，1H)，2.30(s，3H)，1.35(s，9H).
步骤3：
将N-(4-溴-2-甲基苄基)-4-叔丁基苯甲酰胺20(1g，2.8mmol)及联硼酸频哪醇酯(706mg，5.5mmol)，溶于15mL无水二氧六环中，向混合溶液中加入乙酸钾(817mg，8.3mmol)以及Pd(dppf)2Cl2(101mg，0.14mmol)。用N2置换反应体系中的空气，在N2保护下100℃搅拌6h。反应液浓缩后，柱层析纯化得到白色固体21(820mg，72％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.81-7.65(m，4H)，7.54-7.44(m，2H)，7.36(d，J＝7.4Hz，1H)，6.24(s，1H)，4.70(d，J＝5.4Hz，2H)，2.42(s，3H)，1.40(s，12H)，1.30(d，J＝8.4Hz，9H).
步骤4：
将21(500mg，1.2mmol)溶于10mLTHF/H2O(4∶1)中，加入NaIO4(789mg，3.7mmol)，室温搅拌30min，加入1.5mL 1N盐酸，搅拌3h。反应液加入EA水洗，饱和NaCl溶液洗涤，收集有机相减压浓缩至干后直接用于下一步反应。
步骤5：
将3-硝基苯胺23(1g，7.2mmol)溶于20mL乙腈中，向溶液中加入NaHCO3(730mg，8.7mmol)，然后在N2保护、冰浴下缓慢滴加丙烯酰氯(11.5g，10.9mmol)。TLC监测反应结束后，将反应液倒入大量水中，水析，过滤得到白色固体24(1.32g，95％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.63(s，1H)，8.70(t，J＝2.2，2.2Hz，1H)，7.96(dddd，J＝14.6，8.3，2.2，1.0Hz，2H)，7.63(t，J＝8.2，8.2Hz，1H)，6.52-6.26(m，2H)，5.84(dd，J＝9.7，2.3Hz，1H).
步骤6：
向10mL水中加入NH4Cl(836mg，15.6mmol)配置NH4Cl溶液。将N-(3-硝基苯基)丙烯酰胺24(1g，5.2mmol)溶于10mL乙醇中，向溶液中加入配置好的NH4Cl溶液及还原铁粉(875mg，15.6mmol)，85℃加热搅拌1h。反应结束待反应液冷却后，用硅藻土过滤，滤饼用乙醇洗涤，收集滤液减压浓缩，柱层析纯化后得到黄色固体25(720mg，85％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.80(s，1H)，7.05-6.88(m，2H)，6.81-6.70(m，1H)，6.42(dd，J＝16.9，10.0Hz，1H)，6.33-6.14(m，2H)，5.69(dd，J＝10.0，2.2Hz，1H)，5.07(s，2H).
步骤7：
将1，3，5-三嗪(500mg，2.72mmo1)溶于8mLTHF中，加入Na2CO3(288mg，2.72mmol)。冰浴下，向反应液中缓慢滴加25(440mg，2.72mmol)的THF溶液。反应2h，TLC监测反应结束后，将反应液倒入水中搅拌，水析，过滤，得到白色固体26(813mg，96％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ11.15(s，1H)，10.25(s，1H)，7.88(d，J＝2.0Hz，1H)，7.51(tt，J＝4.8，4.8，2.4，2.4Hz，1H)，7.41-7.23(m，2H)，6.60-6.16(m，2H)，5.76(dd，J＝10.0，2.2Hz，1H).
步骤8：
将N-(3-((4，6-二氯-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺26(500mg，1.6mmol)溶于5mL THF中，加入30％氨水(127uL，3.2mmol)，45℃加热搅拌，反应1h。反应结束后，将反应液倒入水中搅拌，水析，过滤得到白色固体27(405mg，86％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.12(s，1H)，9.94(s，1H)，7.70(s，1H)，7.58(s，2H)，7.44(d，J＝8.6Hz，2H)，7.24(t，J＝8.1，8.1Hz，1H)，6.46(dd，J＝16.9，10.0Hz，1H)，6.25(dd，J＝17.0，2.2Hz，1H)，5.74(dd，J＝10.0，2.2Hz，1H).
步骤9：
将N-(3-((4-氨基-6-氯-1，3，5-三嗪-2-基)氨基)苯基)丙烯酰胺27(200mg，0.69mmol)，(4-((4-(叔丁基)苯甲酰胺基)甲基)-3-甲基苯基)硼酸5(223mg，0.69mmol)，K2CO3(190mg，1.37mmol)和Pd(dppf)2Cl2(50mg，0.069mmol)加入5mL二氧六环和0.5mL水的混合溶液中。用N2置换反应体系中的空气，在N2保护下封管中100℃加热反应过夜。反应结束后，减压蒸馏除去溶剂，柱层析得到白色固体A1(155mg，42％)。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.09(s，1H)，9.52(s，1H)，8.93(s，1H)，8.37-8.05(m，3H)，7.87(d，J＝8.1Hz，2H)，7.50(d，J＝8.1Hz，3H)，7.38-7.21(m，3H)，7.03(d，J＝43.7Hz，2H)，6.60-6.09(m，2H)，5.71(d，J＝10.1Hz，1H)，4.52(d，J＝5.5Hz，2H)，2.40(s，3H)，1.31(s，9H).13C NMR(101MHz，DMSO-d6)δ167.13，166.34，164.68，163.01，154.10，141.02，140.33，139.14，135.31，135.16，132.04，131.49，129.77，128.56，127.21，126.85，125.64，125.14，116.45，113.61，111.68，40.65，34.64，30.98，18.87.HRMS(ESI)m/z calcd for C31H33N7O2[M+Na]+535.2696；found535.2690.
实施例2
A2的合成
Figure BDA0003874391200000081
参照实施例1的合成方法，将N-(3-氨基苯基)丙烯酰胺替换成N-(5-氨基-2-甲基苯基)丙烯酰胺，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.50(d，J＝14.5Hz，2H)，8.95(t，J＝5.8，5.8Hz，1H)，8.17(d，J＝10.3Hz，3H)，7.89(d，J＝8.3Hz，2H)，7.51(d，J＝8.3Hz，3H)，7.33(d，J＝8.0Hz，1H)，7.14(d，J＝8.4Hz，2H)，7.02(s，1H)，6.54(dd，J＝17.0，10.2Hz，1H)，6.23(dd，J＝16.9，2.0Hz，1H)，5.67(d，J＝10.3Hz，1H)，4.53(d，J＝5.7Hz，2H)，2.40(s，3H)，2.16(s，3H)，1.31(s，9H).
实施例3
A3的合成
Figure BDA0003874391200000091
参照实施例1的合成方法，将N-(3-氨基苯基)丙烯酰胺替换成N-(5-氨基-2-甲氧基苯基)丙烯酰胺，其他条件不变。1H NMR(300MHz，Methanol-d4)δ8.67(s，1H)，8.24-8.10(m，2H)，7.82(d，J＝8.2Hz，2H)，7.52(d，J＝8.2Hz，2H)，7.36(d，J＝8.3Hz，2H)，6.99(d，J＝8.9Hz，1H)，6.60(dd，J＝16.9，10.2Hz，1H)，6.42-6.27(m，1H)，5.74(d，J＝10.2Hz，1H)，4.64(s，2H)，3.89(s，3H)，2.45(s，3H)，1.35(s，9H).
实施例4
A4的合成
Figure BDA0003874391200000092
参照实施例1的合成方法，将N-(3-氨基苯基)丙烯酰胺替换成1-(6-氨基二氢吲哚)-2-丙烯酮XX，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.45(s，1H)，8.95(t，J＝5.8，5.8Hz，1H)，8.30(s，2H)，7.88(d，J＝8.2Hz，2H)，7.58-6.84(m，8H)，6.76(dd，J＝16.5，10.3Hz，1H)，6.33-6.23(m，1H)，5.79-5.68(m，1H)，4.53(d，J＝5.7Hz，2H)，4.22(t，J＝8.4，8.4Hz，2H)，3.10(t，J＝8.4，8.4Hz，2H)，2.42(s，3H)，1.31(s，9H).
实施例5
A5的合成
Figure BDA0003874391200000093
参照实施例1的合成方法，将N-(3-氨基苯基)丙烯酰胺替换成N-甲基-N-(3-氨基苯基)丙烯酰胺，其他条件不变。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.71(s，1H)，8.93(t，1H)，8.13(s，1H)，8.08(d，1H)，7.95(s，1H)，7.92-7.84(m，2H)，7.76(d，1H)，7.50(d，2H)，7.41-7.32(m，2H)，7.19(d，2H)，6.88(d，1H)，6.16(d，2H)，5.57(t，1H)，4.53(d，2H)，3.29(d，3H)，2.40(s，3H)，1.30(s，9H).
实施例6
A6的合成
Figure BDA0003874391200000101
参照实施例1的合成方法，将N-(3-氨基苯基)丙烯酰胺替换成N-(2-氟-5-氨基苯基)丙烯酰胺，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.93(s，1H)，9.57(s，1H)，8.96(t，J＝5.8，5.8Hz，1H)，8.71(s，1H)，8.20(d，J＝12.5Hz，2H)，7.91-7.83(m，2H)，7.50(d，J＝8.4Hz，2H)，7.34(d，J＝8.1Hz，1H)，7.25-6.86(m，4H)，6.63(dd，J＝17.0，10.1Hz，1H)，6.27(dd，J＝17.0，2.0Hz，1H)，5.72(d，J＝10.3Hz，1H)，4.54(d，J＝5.7Hz，2H)，2.41(s，3H)，1.30(s，9H).
实施例7
A7的合成
Figure BDA0003874391200000102
参照实施例1的合成方法，将N-(3-氨基苯基)丙烯酰胺替换成N-(5-氨基-2-(吗啉基-4-羰基)苯基)丙烯酰胺，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.91(s，1H)，9.75(s，1H)，8.96(t，J＝5.8，5.8Hz，1H)，8.18(d，J＝13.8Hz，3H)，7.88(d，J＝8.4Hz，2H)，7.69(s，1H)，7.51(d，J＝8.4Hz，2H)，7.34(d，J＝8.0Hz，1H)，7.24(d，J＝8.4Hz，2H)，7.07(s，1H)，6.50(dd，J＝17.0，10.2Hz，1H)，6.23(dd，J＝17.0，2.0Hz，1H)，5.69(d，J＝10.9Hz，1H)，4.53(d，J＝5.6Hz，2H)，3.57(s，6H)，2.41(s，3H)，1.31(s，9H).
实施例8
A8的合成
Figure BDA0003874391200000111
参照实施例1的合成方法，将N-(3-氨基苯基)丙烯酰胺替换成(E)-N-(5-氨基-2-(吗啉基-4-羰基)苯基)-2-丁烯酰胺，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.72(d，J＝17.9Hz，2H)，8.97(t，J＝5.8，5.8Hz，1H)，8.19(d，J＝10.4Hz，3H)，7.89(d，J＝8.0Hz，2H)，7.67(s，1H)，7.51(d，J＝8.1Hz，2H)，7.35(d，J＝8.0Hz，1H)，7.22(d，J＝8.5Hz，2H)，7.07(s，2H)，6.78(dq，J＝13.8，6.8，6.7，6.7Hz，1H)，6.18(d，J＝15.3Hz，1H)，4.54(d，J＝5.6Hz，2H)，3.52(s，8H)，2.41(s，3H)，1.81(d，J＝6.9Hz，3H)，1.31(s，9H).
实施例9
A9的合成
Figure BDA0003874391200000112
参照实施例1的合成方法，将N-(3-氨基苯基)丙烯酰胺替换成N-(5-氨基-2-(吗啉基-4-羰基)苯基)丙酰胺，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.72(s，1H)，9.61(s，1H)，8.96(t，J＝5.8，5.8Hz，1H)，8.45-8.07(m，3H)，7.88(d，J＝8.1Hz，2H)，7.66(s，1H)，7.50(d，J＝8.1Hz，2H)，7.35(d，J＝8.0Hz，1H)，7.29-6.95(m，3H)，4.54(d，J＝5.7Hz，2H)，3.52(s，8H)，2.42(s，3H)，2.29(q，J＝7.7，7.6，7.6Hz，2H)，1.30(s，9H)，1.05(t，J＝7.5，7.5Hz，3H).
实施例10
B1的合成
Figure BDA0003874391200000121
参照实施例1的合成方法，将N-(3-氨基苯基)丙烯酰胺替换成N-(5-氨基-2-(吗啉基-4-羰基)苯基)丙烯酰胺，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.89(s，1H)，9.75(s，1H)，9.06(t，J＝6.0，6.0Hz，1H)，8.34(d，J＝7.8Hz，2H)，8.16(s，1H)，7.87(d，J＝8.1Hz，2H)，7.73(s，1H)，7.46(dd，J＝30.9，8.0Hz，4H)，7.24(d，J＝8.5Hz，3H)，6.50(dd，J＝16.9，10.1Hz，1H)，6.24(d，J＝17.0Hz，1H)，5.69(d，J＝10.2Hz，1H)，4.58(d，J＝5.8Hz，2H)，3.57(s，8H)，1.30(s，9H).
实施例11
B2的合成
Figure BDA0003874391200000122
参照实施例10的合成方法，将4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸替换成3-氟-4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.88(s，1H)，9.80(s，1H)，9.04(t，J＝5.9，5.9Hz，1H)，8.44-7.98(m，3H)，7.92-7.83(m，2H)，7.69(s，1H)，7.53-7.44(m，3H)，7.26(t，J＝12.2，12.2Hz，3H)，6.50(dd，J＝17.0，10.2Hz，1H)，6.25(dd，J＝16.9，2.0Hz，1H)，5.76-5.65(m，1H)，4.60(d，J＝5.7Hz，2H)，3.69-3.35(m，8H)，1.30(s，9H).
实施例12
B3的合成
Figure BDA0003874391200000131
参照实施例10的合成方法，将4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸替换成3-三氟甲基-4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.85(d，J＝8.9Hz，2H)，9.14(t，J＝5.9，5.9Hz，1H)，8.65(d，J＝12.9Hz，2H)，7.91(d，J＝8.1Hz，2H)，7.69-7.10(m，7H)，6.47(dd，J＝17.0，10.1Hz，1H)，6.18(d，J＝17.0Hz，1H)，5.61(s，1H)，4.74(d，J＝5.6Hz，2H)，3.56(s，8H)，1.32(s，9H).
实施例13
B4的合成
Figure BDA0003874391200000132
参照实施例10的合成方法，将4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸替换成3-甲氧基-4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.89(s，1H)，9.74(s，1H)，8.89(t，J＝6.0，6.0Hz，1H)，8.13(s，1H)，7.97(d，J＝7.9Hz，1H)，7.92(d，J＝1.5Hz，1H)，7.91-7.84(m，2H)，7.70(s，1H)，7.55-7.48(m，2H)，7.25(dd，J＝17.0，8.2Hz，4H)，6.47(dd，J＝17.0，10.2Hz，1H)，6.20(dd，J＝17.0，2.0Hz，1H)，5.66(d，J＝10.1Hz，1H)，4.51(d，J＝5.8Hz，2H)，3.91(s，3H)，3.56(s，8H)，1.31(s，9H).
实施例14
C1的合成
Figure BDA0003874391200000141
参照实施例10的合成方法，将4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸替换成3-甲基-4-(苯甲酰胺基甲基)苯基硼酸，其他条件不变。1H NMR(300MHz，Methanol-d4)δ6.99(d，J＝8.5Hz，2H)，6.77-6.71(m，6H)，3.83(t，J＝6.0Hz，2H)，3.67(s，3H)，3.12(q，J＝9.8Hz，2H)，2.77(t，J＝7.2Hz，4H)，2.62(m，2H)，1.77(p，J＝6.4Hz，2H)，1.46(s，6H).
实施例15
C2的合成
Figure BDA0003874391200000144
参照实施例10的合成方法，将4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸替换成3-甲基-4-((4-甲基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.90(d，J＝5.4Hz，1H)，9.74(d，J＝5.1Hz，1H)，8.93(d，J＝6.1Hz，1H)，8.17(d，J＝11.1Hz，3H)，7.84(d，J＝6.8Hz，2H)，7.67(s，1H)，7.29(tt，J＝24.4，24.4，5.6，5.6Hz，5H)，7.07(s，1H)，6.50(td，J＝13.4，10.2，5.3Hz，1H)，6.24(dd，J＝17.0，4.9Hz，1H)，5.75-5.64(m，1H)，4.52(d，J＝5.9Hz，2H)，3.57(s，6H)，3.27(s，2H)，2.4l(d，J＝5.3Hz，3H)，2.36(d，J＝5.2Hz，3H).
实施例16
C3的合成
Figure BDA0003874391200000143
参照实施例10的合成方法，将4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸替换成3-甲基-4-((4-三氟甲基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.92(s，1H)，9.76(s，1H)，9.27(t，J＝5.7，5.7Hz，1H)，8.50-8.00(m，5H)，7.89(d，J＝8.1Hz，2H)，7.69(s，1H)，7.38(d，J＝8.0Hz，1H)，7.25(d，J＝8.4Hz，2H)，7.09(s，1H)，6.51(dd，J＝17.0，10.2Hz，1H)，6.24(dd，J＝17.0，2.0Hz，1H)，5.71(d，J＝10.4Hz，1H)，4.57(d，J＝5.6Hz，2H)，3.58(s，6H)，3.31(s，2H)，2.42(s，3H).
实施例17
C4的合成
Figure BDA0003874391200000151
参照实施例10的合成方法，将4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸替换成3-甲基-4-((3-三氟甲基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.89(s，1H)，9.74(s，1H)，9.26(t，J＝5.7，5.7Hz，1H)，8.41-8.11(m，5H)，7.94(d，J＝7.8Hz，1H)，7.76(t，J＝7.8，7.8Hz，1H)，7.67(s，1H)，7.38(d，J＝8.0Hz，1H)，7.28-6.96(m，3H)，6.50(dd，J＝17.0，10.2Hz，1H)，6.23(dd，J＝17.1，2.0Hz，1H)，5.69(d，J＝9.7Hz，1H)，4.57(d，J＝5.5Hz，2H)，3.57(s，8H)，2.42(s，3H).
实施例18
C5的合成
Figure BDA0003874391200000152
参照实施例10的合成方法，将4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸替换成3-甲基-4-((4-异丙基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.89(s，1H)，9.73(s，1H)，8.93(t，J＝5.8，5.8Hz，1H)，8.48-8.00(m，3H)，7.92-7.82(m，2H)，7.68(s，1H)，7.35(t，J＝7.7，7.7Hz，3H)，7.23(d，J＝8.5Hz，3H)，6.50(dd，J＝17.0，10.2Hz，1H)，6.23(dd，J＝17.0，2.0Hz，1H)，5.73-5.64(m，1H)，4.53(d，J＝5.7Hz，2H)，3.47(s，8H)，2.95(hept，J＝6.8，6.8，6.7，6.7，6.7，6.7Hz，1H)，2.40(s，3H)，1.22(d，J＝6.8Hz，6H).
实施例19
C6的合成
Figure BDA0003874391200000161
参照实施例10的合成方法，将4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸替换成3-甲基-4-((4-甲氧基苯甲酰氨基)甲基)苯基硼酸，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.90(s，1H)，9.74(s，1H)，8.87(d，J＝7.1Hz，1H)，8.18(d，J＝9.7Hz，3H)，7.93(d，J＝8.8Hz，2H)，7.68(s，1H)，7.38-6.99(m，6H)，6.51(dd，J＝16.9，10.0Hz，1H)，6.24(d，J＝17.2Hz，1H)，5.70(d，J＝10.3Hz，1H)，4.52(d，J＝5.6Hz，2H)，3.82(s，3H)，3.57(s，8H)，2.40(s，3H).
实施例20
C7的合成
Figure BDA0003874391200000162
参照实施例10的合成方法，将4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸替换成3-甲基-4-((4-羟基苯甲酰氨基)甲基)苯基硼酸，其他条件不变。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.01(s，1H)，9.91(s，1H)，9.75(s，1H)，8.76(t，J＝5.8，5.8Hz，1H)，8.17(d，J＝10.7Hz，3H)，7.81(dd，J＝8.7，2.0Hz，2H)，7.68(s，1H)，7.33(d，J＝8.0Hz，1H)，7.30-6.97(m，3H)，6.85-6.79(m，2H)，6.50(ddd，J＝17.2，10.2，1.8Hz，1H)，6.24(dd，J＝17.0，2.0Hz，1H)，5.70(d，J＝10.3Hz，1H)，4.50(d，J＝5.6Hz，2H)，3.57(s，6H)，3.30(s，2H)，2.40(s，3H).
实施例21
C8的合成
Figure BDA0003874391200000171
参照实施例10的合成方法，将4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸替换成3-甲基-4-((4-环己基苯甲酰氨基)甲基)苯基硼酸，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.91(s，1H)，9.75(s，1H)，8.94(t，J＝5.8，5.8Hz，1H)，8.51-8.04(m，3H)，7.92-7.81(m，2H)，7.68(s，1H)，7.33(dd，J＝8.4，3.3Hz，3H)，7.23(d，J＝8.4Hz，2H)，7.07(s，1H)，6.50(dd，J＝17.0，10.2Hz，1H)，6.23(dd，J＝17.0，2.0Hz，1H)，5.82-5.57(m，1H)，4.52(d，J＝5.7Hz，2H)，3.73-3.43(m，6H)，3.29(s，2H)，2.56(td，J＝11.3，9.8，5.6Hz，1H)，2.40(s，3H)，1.84-1.74(m，4H)，1.50-1.20(m，6H).
实施例22
C9的合成
Figure BDA0003874391200000172
参照实施例10的合成方法，将4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸替换成3-甲基4-(((1，4-苯并二恶烷-6-基)甲酰胺基)甲基)苯基硼酸，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.92(s，1H)，9.76(s，1H)，8.87(t，J＝5.8，5.8Hz，1H)，8.17(d，J＝10.0Hz，3H)，7.68(s，1H)，7.47(d，J＝13.0Hz，2H)，7.28(dd，J＝33.3，8.2Hz，3H)，7.07(s，1H)，6.95(d，J＝8.3Hz，1H)，6.51(dd，J＝17.0，10.2Hz，1H)，6.24(d，J＝17.0Hz，1H)，5.71(d，J＝10.2Hz，1H)，4.50(d，J＝5.6Hz，2H)，3.57(s，6H)，3.28(s，2H)，2.39(s，3H).
实施例23
C10的合成
Figure BDA0003874391200000181
参照实施例10的合成方法，将4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸替换成3-甲基-4-(((1，3-苯并二恶茂-5-基)甲酰胺基)甲基)苯基硼酸，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.92(s，1H)，9.75(s，1H)，8.87(t，J＝5.8，5.8Hz，1H)，8.18(d，J＝9.1Hz，3H)，7.68(s，1H)，7.54(dd，J＝8.1，1.8Hz，1H)，7.48(d，J＝1.7Hz，1H)，7.34(d，J＝8.0Hz，1H)，7.24(d，J＝8.4Hz，2H)，7.08(s，1H)，7.02(d，J＝8.1Hz，1H)，6.51(dd，J＝17.0，10.2Hz，1H)，6.24(dd，J＝17.0，2.0Hz，1H)，6.11(s，2H)，5.72(dd，J＝10.2，2.0Hz，1H)，4.51(d，J＝5.6Hz，2H)，3.57(s，6H)，3.31(s，2H)，2.40(s，3H).
实施例24
C11的合成
Figure BDA0003874391200000182
参照实施例10的合成方法，将4-((4-叔丁基苯甲酰胺基)甲基)苯基硼酸替换成3-甲基-4-(((苯并噻吩-2-基)甲酰胺基)甲基)苯基硼酸，其他条件不变。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.92(s，1H)，9.77(s，1H)，9.31(t，J＝5.7，5.7Hz，1H)，8.52-7.89(m，6H)，7.68(s，1H)，7.52-7.36(m，3H)，7.24(d，J＝8.4Hz，2H)，7.09(s，1H)，6.50(dd，J＝17.0，10.2Hz，1H)，6.24(dd，J＝17.0，2.0Hz，1H)，5.68(d，J＝10.2Hz，1H)，4.56(d，J＝5.6Hz，2H)，3.56(s，6H)，3.29(s，2H)，2.42(s，3H).
实施例25
活性测试
(一)抗增殖活性实验
1、实验材料
Burkitt’s淋巴瘤细胞Raji细胞株(南京厉行生物)；Burkitt’s淋巴瘤细胞Ramos细胞株(广州赛库生物技术有限公司)；RPMI1640不完全培养基(江苏凯基生物技术股份有限公司)；胎牛血清(Gibco公司)；Cell Counting Kit-8(CCK-8试剂盒，上海陶术生物科技有限公司)；ESCO CO2培养箱；显微镜(江南永新XD-202)；离心机(DM0412)；酶标分析仪(Thermo)；高压蒸汽灭菌锅(Zealway)。
2、测试方法
取出对数生长期的待测试细胞，加入培养基配置成8×104-105个/mL的细胞悬液，将细胞悬液接种至96孔板中，每孔100μL，培养4h。向提前配置好的10mM药物DMSO储备液中加入1640培养基，将药物浓度稀释为100μM，50μM，25μM，12.5μM，6.25μM，3.125μM。细胞在96孔板中培养4h后，每孔加入100μL含药培养基，每个给药浓度3个复孔。将加入相同体积培养基替代含药培养基的复孔作为对照组，将无细胞也无含药培养基液的培养基复孔作为空白组。给药后培养48h，每孔加入10μL CCK-8试剂，避光孵育1h，用酶标仪检测在450nm的吸光度(OD值)，按照公式计算抑制率：抑制率＝1-(实验组OD值-空白组OD值)/(对照组OD值-空白组OD值)×100％。并根据各给药浓度下的抑制率，使用GraphPad Prism软件计算出IC50。
3、实验结果
表1化合物的BTK抑制活性及抗增殖活性
Figure BDA0003874391200000191
Figure BDA0003874391200000201
(二)细胞凋亡与细胞周期实验
1、实验材料
Raji细胞，1640培养基，Gibco胎牛血清，细胞周期试剂(凯基生物，KGA512)，凯基Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒(凯基生物，KGA08)。
2、实验步骤
细胞凋亡实验步骤：取对数生长期细胞，在6孔板中培养。给药10μM 24h后，收集加入4℃预冷的PBS完全重悬细胞，1500rpm离心5min，弃去上清。加入200μL 1×BindingBuffer重悬细胞沉淀，加入5uL Annexin-V，混匀后避光孵育15min，然后加入5μLPI，混匀后室温避光反应15min，在1h内，在流式细胞仪上检测。Annexin V-FITC的绿色荧光通过FITC通道(FL1)检测，PI红色荧光通过PI通道(FL2)检测。其中，流式细胞仪参数为：激发波长Ex＝488nm，发射波长FL1(Em＝525±20nm)；FL2(Em＝585±21nm)。用FlowJo软件分析早期凋亡、晚期凋亡、死亡以及正常细胞的比例。
细胞周期实验步骤：取对数生长期细胞，在6孔板中培养。给药10μM 24h后，用PBS洗涤细胞，离心2000rpm，5min，随后收集细胞并将细胞浓度调整为1×106/mL，取用1mL单细胞悬液。将制备的细胞悬液离心，弃去上清液，向细胞中加入70％的冷乙醇溶液固定细胞，4℃保存过夜。染色前，用PBS洗涤固定液，1000rpm离心3min。临用前，将Rnase A：PI工作液按1∶9体积配制成染色工作液。加入提前配制好的500μL PI/RNase A染色工作液孵育细胞，室温避光30-60min。最后，上机检测，记录激发波长488nm处红色荧光。
3、实验结果
如图1所示，在给药24h后，C11可以显著诱导Raji细胞凋亡，总凋亡率为33.43％，其促凋亡作用与阳性药Ibrutinib(34.89％)相当；与阳性药Ibrutinib类似，C11可以将细胞周期阻滞在G0/G1期。

Claims (8)

1.一种6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐，其特征在于，化合物结构如通式(I)所示：
Figure FDA0004190245080000011
其中，
R1选自-(CH2)mCH3、-H、卤素、-O(CH2)nCH3中的任一种，
m,n分别选自0、1、2、3中的任一个，
R2选自以下结构：
Figure FDA0004190245080000012
R选自以下结构：
Figure FDA0004190245080000013
2.根据权利要求1所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐，其特征在于，所述卤素选自F、Cl、Br、I中的任一种。
3.根据权利要求1所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐，其特征在于，化合物选自如下：
Figure FDA0004190245080000021
Figure FDA0004190245080000031
Figure FDA0004190245080000041
Figure FDA0004190245080000051
Figure FDA0004190245080000061
4.一种权利要求1所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
Figure FDA0004190245080000062
5.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐、药学上可接受的载体。
6.如权利要求1所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐或权利要求5所述的组合物在制备BTK抑制剂中的应用。
7.如权利要求1所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐或权利要求5所述的组合物在制备选择性不可逆BTK抑制剂中的应用。
8.如权利要求1所述的6-氨基-1，3，5-三嗪类化合物或其可药用的盐或权利要求5所述的药物组合物在制备治疗淋巴瘤药物中的应用。
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