CN115413588B - 一种研究snx17与lrp4表达互做的实验模型制备系统 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统，包括供给总控模块、供给输送模块、培养模块、背部注射模块、足部注射模块、负压定位模块、过表达实验反应模块，所述供给总控模块设置在所述供给输送模块下方，若干个所述培养模块为一组，环形分布在所述供给输送模块四周，所述培养模块靠近所述供给输送模块一侧设置有用于驱赶实验鼠的驱赶单元；利用供给总控模块与供给输送模块形成控制输送通路，此时培养模块环形分布在供给输送模块的四周，将水路、电路、气路、物料通路继承在供给输送模块的内部往四周培养模块输送，实验鼠进行自动化饲料、监控、注射，简化结构，保证模型的培养质量，缩小模型之间由于自身问题导致的结论误差，提高结论精确度。
Description
技术领域
本发明涉及实验模型制备技术领域，具体是一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统。
背景技术
分拣微管连接蛋白 17（Sorting nexin 17，SNX17）是位于胞内的一种衔接蛋白，因对NPxY/NxxY基序具有高亲和力，能够结合包含NPxY/NxxY 基序的多种内化膜蛋白（如低密度脂蛋白受体家族成员）,LRP4 作为低密度脂蛋白受体家族中的一员，其胞内区亦存在NPxY 基序,MG患者肋间肌中SNX17与AChR共定位确认了SNX17与LRP4的胞外互作关系，这为SNX17通过与LRP4互作进而影响 AChR 聚集提供了可能,LRP4 作为 I 型单次跨膜蛋白和终板膜功能单位信号传递过程的先行者，LRP4 自身抗体通过与 LRP4 交联诱导 LRP4 内化，减少了细胞膜上 LRP4 的表达，进而通过 Agrin-LRP4-MuSK 信号通路影响AChR 的聚集，这也是抗 LRP4 抗体阳性 MG 的重要发生机制之一。
为了研究SNX17敲低和过表达对EAMG实验鼠的LRP4影响，需要在EAMG实验鼠的模型基础上，在右腿处再次注射SNX17 敲低、过表达及对照腺相关病毒，左腿作为模型对照，在病毒注射 21 天后，通过小动物活体光学成像系统对 EGFP 标记的腺相关病毒在实验鼠体内进行了分子成像，以观察感染情况，由于受到EAMG实验鼠的造模成功率和二次注射成功率的影响，因此EAMG作为首批制备模型，EAMG的造模成功率约为60%，此时EAMG构建模型时，需要制备更多，从而保证成功的EAMG模型数量具有一定余量，余量确保二次注射实验鼠的成功数量满足实验需求。
为了最优地评估MG的治疗，需要准确地概括人类疾病的标准化动物模型，因此MG的常用EAMG模型，目前常用人工合成鼠源的AChR-α亚单位97-116多段(R97-116）制备EAMG模型；实验时为了建立对照组，因此实验鼠的数量使用较多，制备实验模型时，首先对实验鼠进行饲养，饲养要求为通风、消毒、采光良好、恒温23摄氏度，恒湿50%左右，昼夜对半、氨浓度不超过14mg/m3，提供灭菌水以及无菌颗粒饲料，实验的动物要求自由进水，实验前需要喂养观察1周；实验过程中，需要对实验鼠背部、足垫多点皮下注射，且注射三次，分别在首次免疫后，第30天、45天进行强化接种，因此实验鼠模型从开始到制备，至少需要53天，由于数量较多，同时时间较长，由于不同的实验鼠自身体质、性格、习惯具有差别，在注射时，可能由于体质原因导致出现不良反应，以及性格习惯问题例如不爱动，使每个实验鼠之间在受到注射后，由于上述的变量原因，导致最终注射后的实验鼠状态一致性较低，从而使对照结果的准确度降低。
发明内容
本发明的目的在于提供一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统，包括供给总控模块、供给输送模块、培养模块、背部注射模块、足部注射模块、负压定位模块、过表达实验反应模块，所述供给总控模块设置在所述供给输送模块下方，若干个所述培养模块为一组，环形分布在所述供给输送模块四周，若干组所述培养模块垂直分布，所述培养模块靠近所述供给输送模块一侧设置有用于驱赶实验鼠的驱赶单元，所述培养模块内部设置有改变实验鼠生存空间环境的诱导单元，所述背部注射模块、所述足部注射模块位于所述培养模块的上下端，所述背部注射模块上设置有采集实验鼠背部图像信息的上方图像采集单元，所述足部注射模块上设置有采集实验鼠底部图像信息的下方图像采集单元，所述负压定位模块设置在所述培养模块的底部，用于对实验鼠脚掌部、腹部定位，所述过表达实验反应模块的底部设置有收纳下肢的包围单元、固定在所述包围单元底部对足部支撑的足底支撑单元、固定在包围单元底端束缚脚踝的脚踝束缚单元、通过牵引绳连接用于检测所述足底支撑单元移动拉力的阻力施加单元、用于注射SNX17敲低以及SNX17过表达的腓肠肌注射单元、用于检测肌电的机电检测单元，所述包围单元上开设有操作口，所述过表达实验反应模块下方设置有对所述足底支撑单元施加拉力使腿部伸直的牵引单元。
作为本发明再进一步的方案：所述供给输送模块的外壁固定连接有分层板，所述培养模块、所述背部注射模块、所述足部注射模块通过所述分层板分层。
作为本发明再进一步的方案：所述供给输送模块的内部设置有对所述背部注射模块、所述足部注射模块提供注射液的注射液供应单元、对所述培养模块内部养殖槽提供水源、食物的养分供应单元、为所述负压定位模块与所述供给总控模块内部吸引机提供气体通路的气体输送单元、以及用于对所述上方图像采集单元、所述下方图像采集单元图像传递以及所述背部注射模块、所述足部注射模块传递注射移动信号的信号电力输送单元。
作为本发明再进一步的方案：所述培养模块的顶面所述供给输送模块的一侧固定连接有注射孔板，所述培养模块远离所述供给输送模块的一端铰接有封闭门。
作为本发明再进一步的方案：所述负压定位模块的表面开设有若干个矩阵分布的注射孔，所述注射孔内壁固定连接有环形吸引区，所述环形吸引区通过封闭连接区与支管连通，若干个所述支管与所述气体输送单元连通。
作为本发明再进一步的方案：所述供给总控模块内部设置有两个注射液供应仓，其中一个注射液供应仓内为1：1.5：1.5比例的鼠源性AChR-亚单位-多肽、CFA、PBS混合乳剂，另一个注射液供应仓为CFA与PBS按1：1形成的混合乳剂。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
利用供给总控模块与供给输送模块形成控制输送通路，此时培养模块环形分布在供给输送模块的四周，将水路、电路、气路、物料通路继承在供给输送模块的内部往四周的培养模块输送，使该制备系统对实验鼠进行自动化饲料、监控、注射，简化结构，使输送路线更加平滑顺畅，在长时间的大量模型建立中，解放了科研人员的培养时间，可以着手其他实验，同时能够保证模型的培养质量，缩小模型之间由于自身问题导致的结论误差，提高结论精确度。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统的立体示意图；
图2为一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统的主视示意图；
图3为一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统中负压定位模块的示意图；
图4为一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统的组成示意图；
图5为一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统的过表达实验反应模块的组成示意图；
图中：1、供给总控模块；2、供给输送模块；21、分层板；22、注射液供应单元；23、养分供应单元；24、气体输送单元；25、信号电力输送单元；3、培养模块；31、注射孔板；32、驱赶单元；33、诱导单元；4、背部注射模块；41、上方图像采集单元；5、足部注射模块；51、下方图像采集单元；6、负压定位模块；61、环形吸引区；62、封闭连接区；63、注射孔；64、支管；7、过表达实验反应模块；71、包围单元；711、操作口；72、机电检测单元；73、脚踝束缚单元；74、足底支撑单元；75、牵引单元；76、阻力施加单元；77、腓肠肌注射单元。
具体实施方式
请参阅图1、图2、图3、图4，图5本发明的组成
包括供给总控模块1、供给输送模块2、培养模块3、背部注射模块4、足部注射模块5、负压定位模块6，过表达实验反应模块7；供给总控模块1设置在供给输送模块2下方，若干个培养模块3为一组，环形分布在供给输送模块2四周，若干组培养模块3垂直分布；培养模块3靠近供给输送模块2一侧设置有用于驱赶实验鼠的驱赶单元32，培养模块3内部设置有改变实验鼠生存空间环境的诱导单元33。
背部注射模块4、足部注射模块5位于培养模块3的上下端，背部注射模块4上设置有采集实验鼠背部图像信息的上方图像采集单元41，足部注射模块5上设置有采集实验鼠底部图像信息的下方图像采集单元51。
负压定位模块6设置在培养模块3的底部，用于对实验鼠脚掌部、腹部定位，供给输送模块2的外壁固定连接有分层板21，培养模块3、背部注射模块4、足部注射模块5通过分层板21分层。
过表达实验反应模块7的底部设置有收纳下肢的包围单元71、固定在包围单元71底部对足部支撑的足底支撑单元74、固定在包围单元71底端束缚脚踝的脚踝束缚单元73、通过牵引绳连接用于检测足底支撑单元74移动拉力的阻力施加单元76、用于注射SNX17敲低以及SNX17过表达的腓肠肌注射单元77、用于检测肌电的机电检测单元72，包围单元71上开设有操作口711，过表达实验反应模块7下方设置有对足底支撑单元74施加拉力使腿部伸直的牵引单元75；
由于SNX17可与内化LRP4相互作用，介导LRP4再循环回膜，并在Agrin的刺激下，促进肌管细胞中MuSK的磷酸化及AChR的聚集，基于上述机理，上调EAMG实验鼠腓肠肌中的SNX17可显著改善NMJ处AChR的碎片化形态，减轻肌纤维的病理性损伤，并使EAMG实验鼠腿肌无力症状得到一定程度的恢复，因此通过对EAMG实验鼠注射SNX17敲低病毒以及SNX17过表达病毒，通过肌力检测，根据肌力检测反向体现SNX17与LRP4的作用关系。
由于病毒注射至感染完成需要21天，因此过表达实验反应模块7可以采用拆卸连接的方式固定在1的下方，通过与供给输送模块2、培养模块3管路连通即可，设置的目的主要在EAMG实验鼠的基础上，进行二次注射实验；
首先过表达实验反应模块7为仓体，此时实验鼠位于过表达实验反应模块7的内部，通过将过表达实验反应模块7底部的孔体开启，实验鼠受到重力影响，或者在过表达实验反应模块7上方设置压力机构，对鼠背施加压力，使实验鼠的下肢通过包围单元71进入足底支撑单元74内，脚掌与足底支撑单元74接触，脚踝束缚单元73为环形气囊，此时脚踝束缚单元73充气后，将实验鼠脚踝处进行收紧，从而达到下肢固定的目的，在注射时，通过牵引单元75对足底支撑单元74施加下拉力，此时将实验鼠的下肢向下拉伸，使腓肠肌露出，由于操作口711的存在，使腓肠肌注射单元77可以在实验鼠的腓肠肌内注射SNX17过表达病毒或者SNX17敲低病毒，从而建立两种模型与EAMG模型进行对照，通过牵引单元75释放，阻力施加单元76采用拉力传感器配合弹性绳对牵引单元75施拉力，通过对实验鼠诱导，促进实验鼠腿部运动，通过阻力施加单元76获取粗略的肌肉拉力信息，同时机电检测单元72可以针刺腓肠肌内侧头肌肉最高点，通过引导电极导入肌电信号，获取实验鼠的肌电图，进一步反应肌肉情况，从而通过SNX17敲低后的EAMG实验鼠、SNX17过表达后的EAMG实验鼠与EAMG实验鼠的腓肠肌肌力粗对比、精对比，进一步验证SNX17对EAMG模型之间的关系，获取SNX17与LRP4相互作用后的直接影响结论。
供给输送模块2的内部设置有对背部注射模块4、足部注射模块5提供注射液的注射液供应单元22、对培养模块3内部养殖槽提供水源、食物的养分供应单元23、为负压定位模块6与供给总控模块1内部吸引机提供气体通路的气体输送单元24、以及用于对上方图像采集单元41、下方图像采集单元51图像传递以及背部注射模块4、足部注射模块5传递注射移动信号的信号电力输送单元25。
培养模块3的顶面供给输送模块2的一侧固定连接有注射孔板31，培养模块3远离供给输送模块2的一端铰接有封闭门。
供给总控模块1位于最下方，供给总控模块1的内部设置有储存单元、输送动力单元、数据采集处理单元，其中储存单元储存有需要注射的乳液、混合液、无菌水以及颗粒饲料，输送动力单元主要有液体输送机构、颗粒输送机构以及空气输送机构，液体输送机构为了对乳液、混合液输送至背部注射模块4、足部注射模块5进行注射，同时液体输送机构可以将无菌水通过养分供应单元23输送至培养模块3内部的饮食槽内部，颗粒输送机构主要为了将颗粒饲料通过养分供应单元23的另一个通道输送至培养模块3内部的饮食槽内部，对实验鼠进行饲养，而空气输送机构主要为了通过气体输送单元24对负压定位模块6施加负压，使实验鼠的足部、腹部可以吸附在负压定位模块6上，为后续的注射对实验鼠起到定位作用，数据采集处理单元主要为了对上方图像采集单元41、下方图像采集单元51的数据进行采集，上方图像采集单元41、下方图像采集单元51将数据采集后，通过数据采集处理单元处理后，通过控制器控制背部注射模块4、足部注射模块5选择注射区域注射。
供给输送模块2设置在供给总控模块1的上方，供给输送模块2与供给总控模块1连通，此时供给输送模块2形成供给总控模块1与培养模块3之间的连接通道，供给输送模块2通过分层板21为培养模块3提供固定支点，在供给输送模块2的内部设置有注射液供应单元22、养分供应单元23、气体输送单元24以及信号电力输送单元25，此时将注射液供应单元22、养分供应单元23、气体输送单元24、信号电力输送单元25集中设置在中部，使注射液供应单元22、养分供应单元23、气体输送单元24、信号电力输送单元25在与培养模块3、背部注射模块4、足部注射模块5、负压定位模块6连接时更加平顺，同时不会导致空间占用，使多个培养模块3可以集中控制，同时使边缘处的培养模块3更加方便实验人员操作。
培养模块3主要对实验鼠提供饲料空间，培养模块3的外端设置门主要为了使实验鼠取出更加方便，而培养模块3的外端上方设置有注射孔板31，注射孔板31主要与背部注射模块4对应，通过背部注射模块4穿过注射孔板31对实验鼠进行背部注射，为了保证实验鼠的生活空间，因此培养模块3的空间较大，为了降低背部注射模块4的运动区间，因此设置了驱赶单元32，驱赶单元32底部与培养模块3的内壁底面留有间隙，为了对饮食槽进行让位，驱赶单元32通过气动件或者机械件控制推动，将实验鼠通过驱赶单元32限制在培养模块3的内部，且位于注射孔板31的下方，此时实验鼠的身体与驱赶单元32贴合平行，驱赶单元32靠近实验鼠的一侧可以设置为弧形面，由于弧形面突出，此时弧形面可以将实验鼠的背部配合培养模块3进行挤压，进而便于背部注射模块4对挤压处皮下注射，同时诱导单元33安装在培养模块3的内部，通过诱导单元33可以释放刺激性气味、安抚性气味、刺激性声音、安抚性声音等对实验鼠起到影响，使实验鼠自身均处于频繁的运动态或者安静态，缩减误差。
背部注射模块4、足部注射模块5位于培养模块3的上下侧，背部注射模块4与足部注射模块5上设置有移动机构、角度调节机构以及推送机构，枕头安装在背部注射模块4、足部注射模块5上，通过上方图像采集单元41、下方图像采集单元51采集图像信息判断采集位置，通过背部注射模块4、足部注射模块5带动针头调节角度与位置，通过推送机构将针头推送至实验鼠背部、足垫处，完成注射。
负压定位模块6设置在培养模块3的底部远离供给输送模块2的一端，由于驱赶单元32的推动作用，使实验鼠向外侧移动，进而使实验鼠位于负压定位模块6的顶部，此时通过负压定位模块6吸气，将实验鼠的腹部以及脚掌处吸附在负压定位模块6表面，进而实现固定作用，此时通过足部注射模块5将针刺入脚垫处进行注射。
请参考图1、图2、图3、图4，本发明的使用流程
养殖阶段
将多只体重为160g-180g的雌性实验鼠放入培养模块3的内部，此时将培养模块3端部门进行关闭，此时供给总控模块1内部的无菌水以及颗粒饲料通过供给输送模块2内部的养分供应单元23输送至培养模块3内部的饲养槽内部，通过定时器、定量器在一周内定时定量向饲料槽投喂饲料，保证温度23摄氏度、湿度50%，通过上方图像采集单元41获取实验鼠一周内的状态，并将异常实验鼠排除实验组。
初次免疫阶段
负压定位模块6的表面开设有若干个矩阵分布的注射孔63，注射孔63内壁固定连接有环形吸引区61，环形吸引区61通过封闭连接区62与支管64连通，若干个支管64与气体输送单元24连通；
经过养殖阶段排出的实验鼠组成实验组，养殖一周后，开始初次注射，注射时分为标准组与对照组；
在供给总控模块1内部的储存单元内注入1：1.5：1.5比例的鼠源性AChR-亚单位-多肽、CFA、PBS混合乳剂，另一个储存单元注入CFA与PBS按1：1形成的混合乳剂，通过液体输送机构将液体输送至背部注射模块4、足部注射模块5内部，此时通过驱赶单元32在培养模块3内移动，将实验鼠推至培养模块3的端部，受到驱赶单元32与培养模块3配合夹持影响，实验鼠身体与驱赶单元32平行夹持在驱赶单元32与培养模块3之间，此时通过上方图像采集单元41采集实验鼠背部图像，通过信号电力输送单元25传递至数据采集器经过数据处理后，通过控制器调节背部注射模块4的注射位置，穿过注射孔板31对实验鼠背部多点注射，此时气体输送单元24内部抽气，气体通过支管64、封闭连接区62传递至环形吸引区61产生吸力，将实验鼠的腹部以及脚部吸附在环形吸引区61处，此时通过下方图像采集单元51采集下方图像信息后，判断脚垫位置，通过足部注射模块5调节注射点位，通过注射孔63进行注射。
初次免疫观察阶段
按照养殖阶段方式继续养殖30天，通过上方图像采集单元41对实验鼠的初次免疫阶段的状态进行监测，判断实验鼠是否出现异常行为，异常行为主要为同一组内个别实验鼠与该组实验鼠出现异样行为，例如运动力下降、食欲下降、叫唤等，此时通过上方图像采集单元41将异样实验鼠取出，对照组与标准组之间的实验鼠具有一致性，进一步缩小结论误差。
干预调整阶段
初次免疫治疗后，通过诱导单元33对实验鼠进行干预诱导，例如恐惧诱导超声波，使22kHz叫声抑制实验鼠的运动行为，或者欲求诱导超声波，50kHz激发实验鼠的社会探究行为，提高实验鼠的运动活性，通过诱导单元33可以对实验鼠的状态进行调整干预，使实验鼠均处于低运动状态或者高运动状态，进而保证实验鼠的状态具有一致性，进一步缩小由于实验鼠行为一致性不足造成的结论误差。
经过观察阶段与调节阶段后的实验鼠，在30天、45天时，分别强化注射，获得免疫，完成模型制备。
SNX17在EAMG模型表现实验
将上述制备的EAMG实验鼠模型放置过表达实验反应模块7的内部，使实验鼠下肢位于包围单元71内，通过脚踝束缚单元73的环形气囊充气，使脚踝固定在足底支撑单元74的表面，通过牵引单元75对下肢向下拉伸，使腓肠肌注射单元77穿过操作口711对腓肠肌注射SNX17敲低病毒，制备EAMG-SNX17敲低模型，在注射前通过诱导实验鼠运动，通过阻力施加单元76获取实验鼠标准肌力A，通过机电检测单元72获取肌电图图形A1；
将上述制备的EAMG实验鼠模型放置过表达实验反应模块7的内部，使实验鼠下肢位于包围单元71内，通过脚踝束缚单元73的环形气囊充气，使脚踝固定在足底支撑单元74的表面，通过牵引单元75对下肢向下拉伸，使腓肠肌注射单元77穿过操作口711对腓肠肌注射SNX17过表达病毒，制备EAMG-SNX17过表达模型，在注射前通过诱导实验鼠运动，通过阻力施加单元76获取实验鼠标准肌力B，通过机电检测单元72获取肌电图图形B1；
实验鼠继续饲养21天，观察病毒感染情况，选择感染合格的EAMG-SNX17敲低模型、EAMG-SNX17过表达模型；
按照上述方式，获得EAMG-SNX17敲低模型的实验鼠肌力A2，通过机电检测单元72获取肌电图图形A3；
获得EAMG-SNX17过表达模型的实验鼠肌力B2，通过机电检测单元72获取肌电图图形B3；
通过与实验鼠的标准肌力以及肌力图表现，EAMG-SNX17敲低模型的肌电图中第五波幅衰减率接近50%，EAMG-SNX17敲低模型腿部力量略低于EAMG模型对照组；
EAMG-SNX17过表达实验模型腓肠肌肌电图中第五波幅的衰减值约为10%，最后对实验鼠的腿部力量也进行了测定，EAMG-SNX17过表达实验模型腿部力量显著高于EAMG模型对照组实验鼠的腿部力量；
证明过表达 SNX17 可以有效改善小鼠的肌无力症状；
通过western blot检测EAMG-SNX17敲低模型腓肠肌中LRP4 和磷酸化 MuSK 的表达；
与模型对照组相比，SNX17的敲低显著降低了 LRP4 蛋白的表达和 MuSK 的磷酸化水平P < 0.05；
过表达 EAMG 实验鼠腓肠肌中的 SNX17 后，通过 western blot 检测了腓肠肌中 LRP4 和磷酸化 MuSK 的表达；
与模型对照组相比，SNX17 的过表达显著增加了LRP4蛋白的表达和MuSK的磷酸化水平P < 0.05，而SNX17 过表达后，肌丝上AChR的碎片化程度有所改善，AChR得到一定程度的恢复，尽管 SNX17 过表达后实验鼠的腿部力量仍低于正常对照组P < 0.01，但显著高于模型对照组实验鼠的腿部力量P < 0.01，证明过表达 SNX17 可以有效改善实验鼠的肌无力症状。
以上所述的，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (4)
1.一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统，其特征在于：包括供给总控模块（1）、供给输送模块（2）、培养模块（3）、背部注射模块（4）、足部注射模块（5）、负压定位模块（6）、过表达实验反应模块（7）；
所述供给总控模块（1）设置在所述供给输送模块（2）下方，若干个所述培养模块（3）为一组，环形分布在所述供给输送模块（2）四周，若干组所述培养模块（3）垂直分布；
所述培养模块（3）靠近所述供给输送模块（2）一侧设置有用于驱赶实验鼠的驱赶单元（32），所述培养模块（3）内部设置有改变实验鼠生存空间环境的诱导单元（33）；
所述背部注射模块（4）、所述足部注射模块（5）位于所述培养模块（3）的上下端，所述背部注射模块（4）上设置有采集实验鼠背部图像信息的上方图像采集单元（41），所述足部注射模块（5）上设置有采集实验鼠底部图像信息的下方图像采集单元（51）；
所述负压定位模块（6）设置在所述培养模块（3）的底部，用于对实验鼠脚掌部、腹部定位；
所述过表达实验反应模块（7）的底部设置有收纳下肢的包围单元（71）、固定在所述包围单元（71）底部对足部支撑的足底支撑单元（74）、固定在包围单元（71）底端束缚脚踝的脚踝束缚单元（73）、通过牵引绳连接用于检测所述足底支撑单元（74）移动拉力的阻力施加单元（76）、用于注射SNX17敲低以及SNX17过表达的腓肠肌注射单元（77）、用于检测肌电的肌电检测单元（72），所述包围单元（71）上开设有操作口（711），所述过表达实验反应模块（7）下方设置有对所述足底支撑单元（74）施加拉力使腿部伸直的牵引单元（75）；
所述供给输送模块（2）的外壁固定连接有分层板（21），所述培养模块（3）、所述背部注射模块（4）、所述足部注射模块（5）通过所述分层板（21）分层；所述供给输送模块（2）的内部设置有对所述背部注射模块（4）、所述足部注射模块（5）提供注射液的注射液供应单元（22）、对所述培养模块（3）内部养殖槽提供水源、食物的养分供应单元（23）、为所述负压定位模块（6）与所述供给总控模块（1）内部吸引机提供气体通路的气体输送单元（24）、以及用于对所述上方图像采集单元（41）、所述下方图像采集单元（51）图像传递以及所述背部注射模块（4）、所述足部注射模块（5）传递注射移动信号的信号电力输送单元（25）。
2.根据权利要求1所述的一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统，其特征在于：所述培养模块（3）的顶面所述供给输送模块（2）的一侧固定连接有注射孔板（31），所述培养模块（3）远离所述供给输送模块（2）的一端铰接有封闭门。
3.根据权利要求1所述的一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统，其特征在于：所述负压定位模块（6）的表面开设有若干个矩阵分布的注射孔（63），所述注射孔（63）内壁固定连接有环形吸引区（61），所述环形吸引区（61）通过封闭连接区（62）与支管（64）连通，若干个所述支管（64）与所述气体输送单元（24）连通。
4.根据权利要求1所述的一种研究SNX17与LRP4表达互做的实验模型制备系统，其特征在于：所述供给总控模块（1）内部设置有两个注射液供应仓，其中一个注射液供应仓内为1：1.5：1.5比例的鼠源性AChR-亚单位97-116多肽、CFA、PBS混合乳剂，另一个注射液供应仓为CFA与PBS按1：1形成的混合乳剂。
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Citations (2)
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|---|---|---|---|---|
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006034323A (ja) * | 2004-07-22 | 2006-02-09 | Woo Young Medical Co Ltd | 薬液定量自動注入装置及びその注入制御方法 |
| CN111690614A (zh) * | 2020-05-27 | 2020-09-22 | 吴宏伟 | 一种标准化肿瘤动物模型的建立方法及培养装置 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 重症肌无力患者肌细胞中LRP4胞内区与SNX17的相互作用;安颖;吕杰;张迎娜;高峰;张婧;方华;李倩如;杜英;张清勇;王金兰;张运克;;郑州大学学报(医学版)(第02期);第129-134页 * |
Also Published As
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