CN115397465A

CN115397465A - 用于针对抗体的免疫测定的校准和质量控制试剂

Info

Publication number: CN115397465A
Application number: CN202180030592.XA
Authority: CN
Inventors: I·巴哈
Original assignee: Siemens Healthcare Diagnostics Inc
Current assignee: Siemens Healthcare Diagnostics Inc
Priority date: 2020-04-24
Filing date: 2021-04-21
Publication date: 2022-11-25
Also published as: EP4138918A1; WO2021217178A1; US20230152336A1; EP4138918A4

Abstract

本发明公开了校准和/或质量控制试剂，其用于针对微生物的抗体的血清学免疫测定。在所述试剂中，对微生物抗原特异性的抗体与抗‑人Ig抗体复合以形成复合物。还公开了含有试剂的试剂盒和微流体装置，以及生产和使用所述试剂的方法。

Description

用于针对抗体的免疫测定的校准和质量控制试剂

相关申请的交叉引用/援引并入的声明

本申请根据35 USC § 119(e)要求2020年4月24日提交的美国临时申请号63/015,223的权益。上述引用的专利申请的全部内容在此明确通过引入并入本文。

关于联邦资助的研究或开发的声明

不适用。

背景

在2020年6月，美国食品药品监督管理局(FDA)发布了一项由SiemensHealthineers (Tarrytown, NY)开发的基于实验室的总抗体测试的紧急使用授权(EUA)，用于检测SARS-CoV-2抗体的存在，包括血液中的IgM和IgG。SARS-CoV-2病毒表面上的刺突蛋白使病毒能够侵入和感染见于多种器官和血液血管中的人类细胞。SiemensHealthineers的总抗体COV2T测定经设计用于检测针对刺突蛋白的抗体。认为这些抗体中和SARS-CoV-2病毒，并由此预防感染。多种针对SARS-CoV-2开发的潜在疫苗将刺突蛋白纳入其关注点。

正如需要新的和改进的COVID-19免疫测定，存在对于这些免疫测定的校准物的对应需求，以确保其准确性。具体而言，需要用于免疫测定的校准物的抗-病毒抗原抗体，诸如(但不限于) COVID-19免疫测定。由于COVID-19大流行和对这些抗体的巨大需求，这些抗-病毒抗原抗体已变得非常昂贵，并且难以获得所需的量。预测COVID-19免疫测定校准物的需求将达每年数百万小瓶，其换算成克，成本将达数百万美元。因此，这类原材料的成本会是令人望而却步的天文数字，并且这类原材料也有供应问题。因此，急需使得校准物产品中利用的实际抗-病毒抗原抗体最小化的方法。

附图简述

图1示意性地描绘使用包含抗-病毒抗原抗体的校准试剂的CV2T LOCI®免疫测定形式。

图2示意性地描绘使用根据本公开构建的校准试剂的CV2T LOCI®免疫测定形式。

详细描述

在通过示例性语言和结果的方式详细解释本公开的至少一个实施方案之前，应理解，本公开的应用不限于下面的描述中阐述的组分的构建和排列的细节。本公开能够具有其它实施方案，或者能够以各种方式实践或实施。因此，本文使用的语言意欲被给予最广泛的可能范围和含义；并且实施方案意味着是示例性的，而非穷举性的。而且，应理解，本文采用的措辞和术语是为了描述的目的，并且不应被认为是限制性的。

除非本文另有定义，否则结合本公开使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。进一步地，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数，并且复数术语应包括单数。前述技术和程序通常根据本领域众所周知的常规方法、并且如在本说明书通篇引用和讨论的各种一般和更具体的参考文献中所述而实施。与本文所述的分析化学、合成有机化学以及药用和药物化学结合利用的命名及其实验室程序和技术是本领域中众所周知和常用的那些。标准技术用于化学合成和化学分析。

本说明书中提及的所有专利、公开的专利申请和非专利出版物指示本公开所属领域的技术人员的技术水平。在本申请的任何部分中引用的所有专利、公开的专利申请和非专利出版物在本文中明确地通过引用以其整体并入，其程度如同每个单独的专利或出版物被具体和个别地指出通过引用并入一样。

鉴于本公开，无需过度实验即可制备和执行本文公开的所有组合物、试剂盒、设备和/或方法。尽管已经在具体实施方案的方面描述了所述组合物、试剂盒、设备和/或方法，但对于本领域技术人员将显而易见的是，在不脱离本公开的构思、精神和范围的情况下，可对所述组合物、试剂盒、设备和/或方法、以及在本文描述的方法的步骤或步骤顺序中应用变化。认为对于本领域技术人员显而易见的所有此类类似的取代和修改在如所附权利要求书限定的本公开的精神、范围和构思内。

如根据本公开所利用，除非另有指示，否则以下术语应理解为具有以下含义：

与权利要求和/或说明书中的术语“包括”结合使用时，术语“一个/种(a)”或“一个/种(an)”的使用可意味着“一个/种(one)”，但它也与“一个/种或多个/种”、“至少一个/种”和“一个/种或多于一个/种”的含义一致。因此，术语“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该/所述(the)”包括复数指示物，除非上下文另有明确指示。因此，例如，对“一种化合物”的提及可指一种或多种化合物、两种或更多种化合物、三种或更多种化合物、四种或更多种化合物或更大数目的化合物。术语“多个/种”是指“两个/种或更多个/种”。

术语“至少一个/种”的使用将被理解为包括一个/种以及多于一个/种的任何数量，包括但不限于2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、100个/种等。术语“至少一个/种”可延伸多至100或1000或更多个/种，这取决于它所附接的术语；此外，100/1000的数量不视为限制性的，因为更高的限值也可产生令人满意的结果。此外，术语“X、Y和Z中的至少一个/种”的使用将被理解为包括单独的X，单独的Y和单独的Z，以及X、Y和Z的任何组合。序数术语(即，“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等)的使用仅用于区分两个或更多个事项的目的，并且不意味着暗示例如一个事项相对于另一事项的任何顺序或次序或重要性、或任何添加次序。

在权利要求中使用术语“或”用于意指包括性的“和/或”，除非明确指出仅指替代方案或者除非替代方案是互相排斥的。例如，以下任一种都满足条件“A或B”：A为真(或存在)且B为假(或不存在)，A为假(或不存在)且B为真(或存在)，并且A和B两者均为真(或存在)。

如本文所用，对“一个实施方案(one embodiment)”、“一个实施方案(anembodiment)”、“一些实施方案”、“一个实例(one example)”、“例如”或“一个实例(anexample)”的任何引用意指结合该实施方案描述的具体要素、特征、结构或特点包括在至少一个实施方案中。例如，说明书中各个地方出现的短语“在一些实施方案中”或“一个实例”不一定全部是指同一实施方案。此外，对一个或多个实施方案或实例的所有引用都应被解释为对权利要求非限定性的。

在整个申请中，术语“约”用于指示，值包括用于测定该值的组合物/仪器/装置、方法的误差的固有变化，或研究受试者间存在的变化。例如，但非限定性地，当利用术语“约”时，指定值可以与列举值相差正负20%，或15%，或12%，或11%，或10%，或9%，或8%，或7%，或6%，或5%，或4%，或3%，或2%，或1%，因为此类变化适用于执行公开的方法并由本领域普通技术人员所理解。

如在本说明书和一个或多个权利要求中所用，词语“包含(comprising)”(和任何形式的包含，例如“包含(comprise)”和“包含(comprises)”)、“具有(having)”(和任何形式的具有，例如“具有(have)”和“具有(has)”)、“包括(including)”(和任何形式的包括，例如“包括(includes)”和“包括(include)”)或“含有(containing)”(和任何形式的含有，例如“含有(contains)”和“含有(contain)”)都是包括性的或开放式的，并且不排除另外的未列举的要素或方法步骤。

如本文所用的术语“或其组合”是指所述术语之前列出的事项的所有排列和组合。例如，“A、B、C或其组合”意欲包括以下中的至少一个：A、B、C、AB、AC、BC或ABC，并且如果次序在特定上下文中是重要的，则也包括BA、CA、CB、CBA、BCA、ACB、BAC或CAB。继续该实例，明确包括的是含有一个或多个事项或术语的重复的组合，例如BB、AAA、AAB、BBC、AAABCCCC、CBBAAA、CABABB等等。本领域技术人员将理解，除非从上下文可见，否则通常对任何组合中的事项或术语的数量没有限制。

如本文所用，术语“实质上(substantially)”意味着随后描述的事件或情况完全发生或者随后描述的事件或情况在大范围或程度上发生。例如，当与具体事件或情况相关时，术语“实质上”意味着随后描述的事件或情况发生在至少80%的时间、或至少85%的时间、或至少90%的时间、或至少95%的时间。术语“实质上相邻”可以意指两个事项与彼此100%相邻，或者两个事项与彼此密切接近，但与彼此不是100%相邻，或者两个事项之一的一部分与另一事项不是100%相邻，而是与另一事项密切接近。

如本文所用，短语“与……缔合(associated with)”和“与……偶联(coupledto)”包括两个部分彼此直接缔合/结合以及两个部分彼此间接缔合/结合二者。缔合/偶联的非限制性实例包括，例如，通过直接的键或通过间隔基团将一个部分与另一个部分共价结合，直接或借助与所述部分结合的特异性结合对成员将一个部分与另一个部分非共价结合，诸如通过将一个部分溶解在另一个部分中或通过合成而将一个部分掺入另一个部分，和将一个部分涂覆在另一个部分上。

术语“类似物”和“衍生物”在本文中可互换使用，并且是指如下的物质，其在其结构中包含与给定化合物相同的基本碳骨架和碳官能度，但也可以含有对其的一个或多个取代。如本文中所用，术语“取代”将被理解为是指用残基R替换化合物上的至少一个取代基。在某些非限制性实施方案中，R可以包括H，羟基，硫醇，选自氟化物、氯化物、溴化物或碘化物的卤化物，选自下列之一的C1-C4化合物：任选取代的直链、支链或环状烷基，和直链支链或环状烯基，其中任选的取代基选自一种或多种烯基烷基、炔基烷基、环烷基、环烯基烷基、芳基烷基、杂芳基烷基、杂环烷基、任选取代的杂环烯基烷基、芳基环烷基和芳基杂环烷基，其中每个是任选取代的，其中所述任选的取代基选自下列中的一种或多种：烯基烷基、炔基烷基、环烷基、环烯基烷基、芳基烷基、烷基芳基、杂芳基烷基、杂环烷基、任选取代的杂环烯基烷基、芳基环烷基和芳基杂环烷基、苯基、氰基、羟基、烷基、芳基、环烷基、氰基、烷氧基、烷硫基、氨基、-NH(烷基)、-NH(环烷基)₂、羧基和-C(O))-烷基。

如本文所用的术语“样品”将被理解为包括可以根据本公开利用的任何类型的生物样品。可利用的流体生物样品的实例包括但不限于：全血或其任何部分(即，血浆或血清)、尿液、唾液、痰、脑脊液(CSF)、皮肤、肠液、腹膜内液、囊液(cystic fluid)、汗液、间质液、细胞外液、泪液、粘液、膀胱洗液(bladder wash)、精液、粪便、胸膜液、鼻咽液、其组合等。

术语“抗体”在本文中以最广义使用，并且是指例如完整单克隆抗体和多克隆抗体，多特异性抗体(例如，双特异性抗体)，和其表现出结合分析物的期望生物活性的抗体片段及缀合物(诸如但不限于Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、Fd、双抗体、单链抗体和其它抗体片段及其缀合物，其保留完整抗体的可变区的至少一部分)，抗体替代蛋白或肽(即，工程改造的结合蛋白/肽)及其组合或衍生物。所述抗体可以是任何类型或类别(例如，IgG、IgE、IgM、IgD和IgA)或亚类(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。

如本文所用的术语“LOCI®”是指商业使用的基于发光氧通道测定(LOCI®)技术的免疫测定技术。LOCI®先进化学发光测定描述于例如美国专利号5,340,716 (Ullman等人)，其全部内容明确地通过引用并入本文。当前可用的LOCI®技术具有高灵敏度，并且使用几种试剂。具体而言，LOCI®测定要求这些试剂中的两种(被称为“sensibead”和“chemibead”)通过其他特异性结合配偶体测定试剂以如下的方式保持，其中sensibead和chemibead彼此密切接近以实现信号。在暴露于特定波长的光后，sensibead释放单线态氧，并且如果两个珠粒密切接近，则单线态氧被转移至chemibead；这引起化学反应，其导致所述chemibead发出光，所述光可以在不同波长处测量。

本公开的某些非限制性实施方案涉及用于血清学免疫测定的校准或质量控制试剂，所述血清学免疫测定用于检测人类生物样品中针对微生物的抗体。所述试剂包括三种组分：(a)基质；(b)抗-人免疫球蛋白(Ig)抗体；和(c)针对微生物抗原的人抗体。在所述试剂中，所述抗-人Ig抗体和人类抗-微生物抗体形成复合物。这些复合物的形成使能够与微生物抗原的结合的抗体叉臂(prong)增加。换言之，每个抗-人Ig抗体能够结合两个人类抗-微生物抗体(在其Fc片段处)；这些两个人类抗-微生物抗体存在于复合物中，当其未复合时各自分出两个叉臂，与抗-人Ig抗体复合后成为四叉臂或多叉臂抗体。因此，这些复合物在抗原桥接免疫测定中更有效地与微生物抗原交联。

可利用任何本领域已知的或本文中以其它方式考虑的校准或质量控制试剂基质，只要由此产生的试剂能够根据本公开发挥功能。在某些非限制性实施方案中，所述基质可具有与将在免疫测定中测量的样品的制剂/组成/pH有些相似的制剂/组成/pH。然而，在某些非限制性实施方案中，可能期望避免使用未纯化的血清或基于血浆的基质，因为在此类基质中存在的内源性免疫球蛋白可能干扰校准或质量控制试剂的其它组分，以及在校准或质量控制试剂中形成的复合物。

可以根据本公开利用的样品的非限制性实例(和因此，在某些非限制性实施方案中，基于其的基质制剂)包括生物样品诸如，但不限于，全血或其任何部分(即，血浆或血清)、尿液、唾液、痰、脑脊液(CSF)、皮肤、肠液、腹膜内液、囊液、汗液、间质液、细胞外液、泪液、粘液、膀胱洗液、精液、粪便、胸膜液、鼻咽液及其组合。

在某些非限制性实施方案中，所述基质包含实质上耗尽人IgG的人血清或血浆。在某些非限制性实施方案中，所述基质包含来自非人源的血清，诸如(但不限于)马、牛、山羊等。

在其它非限制性实施方案中，所述基质包含基于水的系统，其不含其它组分(即，实质上没有缓冲液或蛋白)。在其它非限制性实施方案中，所述基质包含单独的或与一种或多种蛋白组合的基于缓冲液的系统。

可以根据本公开利用的缓冲液的非限制性实例包括磷酸盐(诸如(但不限于)在磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液或Dulbecco磷酸盐水缓冲液中)、Tris(诸如，但不限于，Tris缓冲盐水溶液)、Bis-Tris、硼酸盐(诸如，但不限于，硼酸盐缓冲盐水溶液)、碳酸盐、柠檬酸盐、甘氨酸、ACES、BES、DIPSO、HEPES、HEPPSO、MOPS、MOPSO、PIPES、PIPPS、TAPSO、TES、生物缓冲液等，以及其任何组合。

可以根据本公开作为所述基质的部分利用的蛋白的非限制性实例包括白蛋白(诸如，但不限于，牛血清白蛋白(BSA))、酪蛋白、非人类免疫球蛋白、转铁蛋白等，以及其任何组合。

此外，如本领域所熟知的，所述基质可含有另外的组分。例如(但非限制性地)，所述基质可包含一种或多种防腐剂、一种或多种填充剂，和/或一种或多种聚合物。可以根据本公开利用的填充剂的非限制性实例包括乳糖、山梨糖醇、海藻糖、蔗糖、甘露醇、甘氨酸等，以及其任何组合。可以根据本公开利用的防腐剂的非限制性实例包括ProClin™ (Rohmand Haas, Philadelphia, PA)、叠氮化钠、硫柳汞、新霉素、克霉唑、两性霉素B、MIT、链霉素、OMADINE® (吡啶硫酮钠；Lonza, Basel, Switzerland)、COSMOCIL® CQ (Lonza,Basel, Switzerland)等，以及其任何组合。可以根据本公开利用的聚合物的非限制性实例包括聚乙二醇(PEG)、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等，以及其任何组合。

在具体(但非限制性的)实施方案中，所述基质包含在PBS中的牛血清白蛋白(BSA)。基质的一个非限制性的实例是在PBS中6%的无蛋白酶BSA，pH 7.4。

利用本公开的校准或质量控制试剂的血清学免疫测定可检测针对任何期望检测的微生物的抗原的人抗体。例如(但非限制性地)，被检测的微生物可为细菌、病毒、原生动物、真菌等。

可以根据本公开检测的细菌的非限制性实例包括不动杆菌属(Acinetobacter)、放线菌属(Actinomyces)、气单胞菌属(Aeromonas)、聚合杆菌属(Aggregatibacter)、阿托波氏菌属(Atopobium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、拟杆菌属(Bacteroides)、巴尔通氏体属(Bartonella)、双歧杆菌属(Bifidobacterium)、疏螺旋体属(Borellia)、布鲁氏菌属(Brucella)、弯曲杆菌属(Campylobacter)、衣原体属(Chlamydia)、嗜衣原体属(Chlamydophila)、梭菌属(Clostridium)、棒杆菌属(Corynebacterium)、考克斯氏体属(Coxiella)、艾肯氏菌属(Eikenella)、肠杆菌属(Enterobacter)、肠球菌属(Enterococcus)、埃希氏菌属(Escherichia)、真杆菌属(Eubacterium)、弗朗西丝氏菌属(Francisella)、梭杆菌属(Fusobacterium)、加德纳氏菌属(Gardnerella)、嗜血菌属(Haemophilis)、螺杆菌属(Helicobacter)、克雷伯氏菌属(Klebsiella)、乳杆菌属(Lactobacillus)、李斯特氏菌属(Listeria)、动弯杆菌属(Mobiluncus)、莫拉氏菌属(Moraxella)、分枝杆菌属(Mycobacterium)、支原体属(Mycoplasma)、奈瑟氏球菌属(Neisseria)、微单胞菌属(Parviomonas)、巴斯德氏菌属(Pasteurella)、卟啉单胞菌属(Porphyromonas)、普雷沃氏菌属(Prevotella)、丙酸杆菌属(Propionibacterium)、变形菌属(Proteus)、假单胞菌属(Pseudomonas)、立克次氏体属(Rickettsia)、沙门氏菌属(Salmonella)、沙雷氏菌属(Serratia)、志贺氏菌属(Shigella)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、链球菌属(Streptococcus)、坦纳菌属(Tannerella)、密螺旋体属(Treponema)、弧菌属(Vibrio)以及耶尔森氏菌属(Yersinia)物种等。

可以根据本公开检测的病毒的非限制性实例包括腺病毒、星状病毒、冠状病毒、柯萨奇病毒、巨细胞病毒(CMV)、埃可病毒、脑炎病毒、肠道病毒、爱泼斯坦-巴尔二氏病毒(EBV)、红细胞病毒、汉坦病毒、肝炎病毒、疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒(HIV)、流感病毒、诺如病毒、乳头瘤病毒、副流感病毒、副粘病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒、轮状病毒、风疹病毒、麻疹病毒、水痘-带状疱疹病毒、西尼罗病毒和寨卡病毒等。

可以根据本公开检测的原生动物的非限制性实例包括蛔虫、巴贝斯虫、隐孢子虫(Cryptosporidium)、环孢子虫(Cyclospora)、内阿米巴虫(Entamoeba)、蛲虫(Enterobius)、贾第虫(Giardia)、膜壳绦虫(Hymenolepis)、板口线虫(Necator)、疟原虫(Plasmodium)、类圆线虫(Strongyloides)、绦虫(Taenia)、弓形虫(Toxoplasma)和毛滴虫(Trichomonas)物种等。

可以根据本公开检测的真菌的非限制性实例包括酵母、霉菌等，包括(但不限于)假丝酵母属(Candida)、隐球菌属(Cryptococcus)、表皮癣菌属(Epidermophyton)、马拉色菌属(Malassezia)、小孢子菌属(Microsporum)、毛癣菌属(Trichophyton)物种等。

在具体(但非限制性)实施方案中，通过免疫测定检测的微生物是严重急性呼吸道综合征冠状病毒2 (SARS-CoV-2)、HIV、乙型肝炎总核心、爱泼斯坦-巴尔二氏病毒、疱疹病毒(HSV)、CMV、风疹病毒、幽门螺杆菌(H. pylori)或刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)。

所述抗原可为来自待检测的微生物的任何抗原。可用于检测以上列出的每种微生物的的抗原是本领域所熟知的并广泛可得的。此外，可以根据本公开利用的抗原的选择是在本领域普通技术人员的能力范围内。因此，认为没有必要对其进一步公开。

针对这些抗原的人抗体同样是广泛已知的并商业可得的。此外，抗体制造商生产出可以根据本公开利用的数千种人类抗-微生物抗体的极其庞大的阵列；参见例如(但不限于)，制造商的抗体目录，诸如Roche (Basel, Switzerland)、Genentech (San Francisco,CA)、Aridis Pharmaceuticals LLC (San Jose, CA)、MedImmune、LLC (Gaithersberg,MD)、XBiotech (Austin, TX)、Rockland Immunochemicals、Inc. (Pottstown, PA)、USBiological Life Sciences (Swampscott, MA)、Santa Cruz Biotechnology、Inc.(Dallas, TX)、Jackson Immuno Research Labs、Inc. (West Grove, PA)、Thermo FisherScientific (Waltham, MA)，和Sigma-Aldrich Corp. (St. Louis, MO)。然而，该列表仅为生产人类抗-微生物抗体的抗体制造商的一个小抽样，并且可根据本公开利用的人类抗-微生物抗体还有许多另外的商业来源。因此，本领域普通技术人员将能够清楚且毫无疑义地鉴别和选择可以根据本公开利用的各种人类抗-微生物抗体，并因此认为没有必要对所述人类抗-微生物抗体或其特性进一步描述。

在具体(但非限制性)实施方案中，所述人类抗-微生物抗体是人源化的抗-SARS-CoV-2抗体，诸如(但不限于)获自GenScript (Piscataway, NJ)的S1抗体的人源化抗-RBD，并且人抗体所针对的抗原是SARS-CoV-2的抗原，诸如(但不限于) CoV刺突蛋白S1亚基的受体结合结构域(RBD)的至少一部分。

所述抗-人Ig抗体可特异性结合任何本领域已知或本文以其它方式考虑的人类免疫球蛋白分子的任何部分。例如(但非限制性地)，所述抗体可针对人IgG、IgE、IgM、IgD和/或IgA，和/或其任何部分(诸如，但不限于，抗-人γ链、抗-人H+L、抗-人轻链等)。抗-人Ig抗体是本领域所熟知的，是广泛商业可得的，并已有广泛研究。例如(但非限制性地)，抗-人IgG单克隆和/或多克隆抗体的一些商业来源包括Rockland Immunochemicals、Inc.(Pottstown, PA)、USBiological Life Sciences (Swampscott, MA)、Santa CruzBiotechnology、Inc. (Dallas, TX)、Jackson Immuno Research Labs、Inc. (WestGrove, PA)、Thermo Fisher Scientific (Waltham, MA)和Sigma-Aldrich Corp. (St.Louis, MO)。然而，这个列表不包括全部，并可以根据本公开利用的抗-人Ig抗体还有许多另外的商业来源。因此，本领域普通技术人员将能够清楚且毫无疑义地鉴别和选择可以根据本公开利用的各种抗-人Ig抗体，并因此认为没有必要对所述抗-人Ig抗体或其特性进一步描述。

每种所述抗-人免疫球蛋白(Ig)抗体和所述针对微生物抗原的人抗体可以以任何浓度存在于所述校准或质量控制试剂中，其中所述浓度允许如本文所描述形成复合物，并允许所述试剂根据本公开发挥功能。在某些非限制性实施方案中，每种所述抗-人免疫球蛋白(Ig)抗体和所述针对微生物抗原的人抗体以如下浓度存在于所述试剂中，所述浓度独立地选自于约0.001 wt%、约0.002 wt%、约0.003 wt%、约0.004 wt%、约0.005 wt%、约0.006wt%、约0.007 wt%、约0.008 wt%、约0.009 wt%、约0.01 wt%、约0.02 wt%、约0.03 wt%、约0.04 wt%、约0.05 wt%、约0.06 wt%、约0.07 wt%、约0.08 wt%、约0.09 wt%、约0.1 wt%、约0.2 wt%、约0.3 wt%、约0.4 wt%、约0.5 wt%、约0.6 wt%、约0.7 wt%、约0.8 wt%、约0.9wt%、约1.0 wt%、约1.1 wt%、约1.2 wt%、约1.3 wt%、约1.4 wt%、约1.5 wt%、约1.6 wt%、约1.7 wt%、约1.8 wt%、约1.9 wt%、约2 wt%、约3 wt%、约4 wt%、约5 wt%、约6 wt%、约7 wt%、约8 wt%、约9 wt%、约10 wt%，或更高，或由两个上述值形成的范围(即，从约0.001 wt%至约10 wt%的范围、从约0.002 wt%至约1 wt%的范围、从约0.001 wt%至约0.5 wt%的范围等)，或落入两个上述值的范围的任何值(即，约0.27 wt%)。

同样，所述针对微生物抗原的人抗体和所述抗-人免疫球蛋白(Ig)抗体可以以彼此之间的任何比例存在于所述试剂中，所述比例允许所述试剂根据本公开发挥功能。例如(但非限制性地)，所述抗-人Ig抗体和所述人类抗-微生物抗体可以如下范围内的比例存在：从约1:1、约1:1.5、约1:2、约1:2.5、约1:3、约1:3.5、约1:4、约1:4.5、约1:5、约1:5.5、约1:6、约1:6.5、约1:7、约1:7.5、约1:8、约1:8.5、约1:9、约1:9.5、约1:10、约2:3、约2:5、约2:7、约2:9、约2:11、约2:13、约2:15、约2:17、约2:19，或更高，或由两个上述值形成的范围(即，从约1:1 至约1:10的范围、从约1:2至约2:3的范围等)，或任何落入两个上述值的范围的值(即，约1:1.7、约1:2.4等)。当期望时，可以优化对每种试剂的比例，以实现稳定性和信号之间的良好平衡。根据所使用的具体试剂，所述比例也可宽泛地变化。

类似地，所述基质中存在的任何额外的组分(即，一种或多种蛋白质、防腐剂、填充剂和/或聚合物)可以各自以任何浓度存在，所述浓度允许由其形成的试剂根据本公开发挥功能。例如(但非限制性地)，每种额外的组分以独立地选自以下的浓度存在：约0.001 wt%、约0.002 wt%、约0.003 wt%、约0.004 wt%、约0.005 wt%、约0.006 wt%、约0.007 wt%、约0.008 wt%、约0.009 wt%、约0.01 wt%、约0.02 wt%、约0.03 wt%、约0.04 wt%、约0.05 wt%、约0.06 wt%、约0.07 wt%、约0.08 wt%、约0.09 wt%、约0.1 wt%、约0.2 wt%、约0.3 wt%、约0.4 wt%、约0.5 wt%、约0.6 wt%、约0.7 wt%、约0.8 wt%、约0.9 wt%、约1.0 wt%、约1.1wt%、约1.2 wt%、约1.3 wt%、约1.4 wt%、约1.5 wt%、约1.6 wt%、约1.7 wt%、约1.8 wt%、约1.9 wt%、约2 wt%、约3 wt%、约4 wt%、约5 wt%、约6 wt%、约7 wt%、约8 wt%、约9 wt%、约10wt%、约15 wt%、约20 wt%、约25 wt%、约30 wt%、约35 wt%、约40 wt%、约45 wt%、约50 wt%、约55 wt%、约60 wt%、约65 wt%、约70 wt%、约75 wt%、约80 wt%、约85 wt%、约90 wt%、约95wt%，或更高，或由两个上述值形成的范围(即，从约0.001 wt%至约20 wt%的范围、从约0.1wt%至约5 wt%的范围、从约2 wt%至约20 wt%的范围等)，或任何落入两个上述值的范围的值(即，约13 wt%、约23 wt%等)。

本公开的所述校准或质量控制试剂在所期望的时间段内在所期望的温度下是实质上稳定的。例如(但非限制性地)，所述校准或质量控制试剂可实质上稳定至少约7天、至少约14天、至少约28天、至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月、至少约12个月、至少约13个月、至少约14个月、至少约15个月、至少约16个月、至少约17个月、至少约18个月、至少约2年、至少约3年或更长。此外，所述校准试剂可储存在室温(即，从约18℃至约20℃的范围)或储存在冷藏或冷冻条件下。当所述校准或质量控制试剂中存在防腐剂时，可基于期望的具体储存条件和储存期选择利用的防腐剂。

本公开的所述校准或质量控制试剂可以以任何允许所述试剂根据本公开发挥功能的形式提供。例如，但非限制性地，所述试剂可以以液体形式提供。或者，所述试剂可经过冷冻-干燥或冻干，并以干燥试剂的形式提供。

本公开的所述校准或质量控制试剂可用于定性或定量的测量。

本公开的某些非限制性实施方案涉及试剂盒，其含有本文所描述的或以其它方式考虑的任何校准或质量控制试剂。

在某些非限制性实施方案中，所述试剂盒可进一步包括至少一种用于血清学免疫测定的试剂。例如，但非限制性地，所述试剂盒可进一步包括至少一种试剂，其含有人类抗-微生物抗体所结合的微生物抗原。

在具体(但非限制性)实施方案中，所述微生物是SARS-CoV-2，并且所述抗原是SARS-CoV-2刺突S1的RBD。该抗原可从本领域已知的任何来源获得。例如(但非限制性地)，该具体抗原是商业可得的，来自GenScript (Piscataway, NJ)、Meridian Life Sciences、Inc. (Memphis, TN)、Sino Biological US Inc. (Wayne, PA)、ACRO Biosystems(Newark, DE)、Biorbyt、LLC (St. Louis, MO)、Icosagen、AS (San Francisco, CA)和Bios Pacific Inc. (Emeryville, CA)。

在具体(但非限制性)实施方案中，所述试剂盒可进一步包括一种或多种试剂，用于进行具体测定形式的免疫测定，诸如(但不限于)LOCI®形式。例如(但非限制性地)，所述试剂盒可进一步包括一种包含单线态氧可激活的化学发光化合物(诸如(但不限于)chemibead)的组合物和一种包含敏化剂(诸如(但不限于) sensibead)的组合物，其各自具有与其直接或间接附接的微生物抗原(或者，所述试剂盒含有试剂，其用于在所述免疫测定之前或期间，将所述组合物直接或间接附接到微生物抗原)。

在具体(但非限制性)实施方案中，所述试剂盒可进一步包括：(i) 组合物，其包含：单线态氧可激活的化学发光化合物，其具有与其直接或间接结合的由所述试剂的人类抗-微生物抗体特异性结合的抗原，和由激活的化学发光化合物激发的荧光分子；和(ii)组合物，其包含敏化剂，所述敏化剂能够在其激发状态产生单线态氧，并且具有与其直接或间接结合的由所述试剂的人类抗-微生物抗体特异性结合的抗原。在另一具体(但非限制性)实施方案中，所述试剂盒可进一步包括：(i) 组合物，其包含：单线态氧可激活的化学发光化合物，其具有与其直接或间接结合的由所述试剂的人类抗-微生物抗体特异性结合的抗原，和由激活的化学发光化合物激发的荧光分子；(ii) 组合物，其包含敏化剂，所述敏化剂能够在其激发状态产生单线态氧，并且具有与其直接或间接结合的生物素-特异性结合配偶体；和(iii)与所述试剂的人类抗-微生物抗体特异性结合的抗原，其中所述抗原是生物素化的。

化学发光化合物(化学发光剂)是化学可激活且作为这种激活的结果而发射特定波长的光的化合物。通过举例说明而非限制性地，化学发光剂的实例包括例如：能够与单线态氧或过氧化物反应以形成可以分解成酮类或羧酸衍生物的氢过氧化物或二氧环丁烷(dioxetane)的烯烃类；可以通过光的作用分解的稳定二氧环丁烷；可以与单线态氧反应以形成二酮类的炔烃类；可以形成偶氮化合物或偶氮羰基化合物的腙类或酰肼类，诸如(但不限于)鲁米诺；和可以形成内过氧化物的芳族化合物。作为激活反应的结果，化学发光剂直接或间接引起发光。

在某些实施方案中，单线态氧可激活的化学发光化合物可以是这样的物质，其经历与单线态氧的化学反应以形成亚稳态中间物质，所述亚稳态中间物质可分解，并同时或随后发射光。包含化学发光化合物的组合物可通过激活的化学发光化合物直接激发；或者，所述组合物可进一步包含至少一种荧光分子，所述荧光分子由激活的化学发光化合物激发。

敏化剂是生成用于激活化学发光化合物的反应性中间产物(诸如例如单线态氧)的分子，通常是化合物。在一些非限制性实施方案中，所述敏化剂是光敏剂。通过实例而非限制性地，可以化学激活(通过，例如酶和金属盐)的其它敏化剂包括，借助外部光源的激活或不借助外部光源的激活而可以产生单线态氧的其它物质和组合物。例如，某些化合物已经显示催化过氧化氢转化为单线态氧和水。其它敏化剂物质和组合物的非限制性实例包括碱土金属Ca、Sr和Ba的氧化物；d⁰构型中的3A、4A、SA和6A族的元素的衍生物；锕系元素和镧系元素的氧化物；和氧化剂CIO^-、BrO^-、Au³⁺、IO₃ ^-和IO₄ ^-；和具体而言，钼酸根、过氧钼酸根、钨酸根和过氧钨酸根离子，和乙腈。下列参考文献(其在此明确地以其整体通过引用并入)提供了关于也落入本公开的范围内的敏化剂物质和组合物的进一步公开内容：Aubry, J. Am. Chem. Soc., 107:5844-5849 (1985)；Aubry, J. Org. Chem., 54:726-728 (1989)；Böhme和Brauer, Inorg. Chem., 31:3468-3471 (1992)；Niu和Foote, Inorg. Chem., 31:3472-3476 (1992)；Nardello等人, Inorg. Chem., 34:4950-4957 (1995)；Aubry和Bouttemy, J. Am. Chem. Soc., 119:5286-5294 (1997)；和Almeida等人, Anal. Chim. Acta, 482:99-104 (2003)；其各自的完整内容在此明确地通过引用并入本文。

光敏剂的范围内还包括不是真的敏化剂、但在热、光、电离辐射或化学激活的激发下将释放单线态氧分子的化合物。此类化合物的成员包括例如(但非限制性地)，内过氧化物，诸如1,4-二羧基乙基-1,4-萘内过氧化物；9,10-二苯基蒽-9,10-内过氧化物；和5,6,11,12-四苯基萘5,12-内过氧化物。加热这些化合物或这些化合物直接吸收光而释放单线态氧。

光敏剂是用于通过例如用光激发生成单线态氧而激活光活性化合物的敏化剂。光敏剂是光可激活的，且包括例如染料和芳族化合物，并且通常是由共价键合的原子构成的化合物，通常具有多个共轭的双键或三键。所述化合物应当吸收在约200 nm至约1,100 nm的波长范围内、诸如(但不限于)约300 nm至约1,000 nm的范围内或约450 nm至950 nm的范围内的光，在激发波长下，其最大吸光度时的消光系数大于500 M^-1cm^-1，或大于5,000 M^-1cm^-1，或大于50,000 M^-1cm^-1。光敏剂应当是相对光稳定的，且可以不与单线态氧有效反应。通过举例说明而非限制性地，光敏剂的实例包括：丙酮；二苯甲酮；9-噻吨酮；伊红；9,10-二溴蒽；亚甲基蓝；金属卟啉类诸如(但不限于)血卟啉；酞菁；叶绿素；玫瑰红；和巴克敏斯特富勒烯；以及这些化合物的衍生物。

可以根据本公开利用的化学发光化合物和光敏剂的具体、非限制性实例记载于美国专利号5,340,716 (Ullman，等人)，其完整内容在此明确地通过引用并入本文。

可以根据本公开内容利用本领域中已知或本文以其它方式考虑的任何生物素-特异性结合配偶体。在某些非限制性实施方案中，所述生物素-特异性结合配偶体是针对生物素的抗体。在其它非限制性实施方案中，所述生物素-特异性结合配偶体是抗生物素蛋白或其类似物。

根据本公开，可以利用本领域已知或本文以其它方式考虑的任何抗生物素蛋白类似物，只要抗生物素蛋白或抗生物素蛋白类似物：(1)能够与敏化剂缔合；(2)能够结合生物素化的分析物-特异性结合配偶体；和(3)能够结合样品中可能存在的生物素。可以根据本公开利用的抗生物素蛋白类似物的非限制性实例包括Kang等人(J Drug Target (1995)3:159-65)(其全部内容明确地通过引用并入本文)中公开的那些。抗生物素蛋白类似物的具体非限制性实例包括抗生物素蛋白、链霉抗生物素蛋白、traptavidin、中性抗生物素蛋白、Neutralite抗生物素蛋白、Neutravidin、Lite-抗生物素蛋白、琥珀酰化抗生物素蛋白、其他形式的修饰或基因工程改造的抗生物素蛋白，上述任一种的酯、盐和/或衍生物等。

能够被激活的化学发光化合物激发并以特定的、可检测的波长发光的本领域中已知的任何荧光分子可以根据本公开用作(a)和(b)(以及(e)，如果存在的话)的荧光分子，只要由每个荧光分子产生的信号都可与由利用的其它荧光分子产生的信号不同地检测到。也就是说，(a)的荧光分子必须发射与(b)的荧光分子发射光的波长充分不同的波长的光，使得当同时检测时两个信号可以与彼此区分。在一个具体(但非限制性)实例中，根据本公开利用的每种荧光分子独立地选自铽、铀、钐、铕、钆和镝。例如(但非限制性地)，铽发射约545nm的波长的光，铀发射约612 nm的波长的光，且钐发射约645 nm的波长的光。

可以以任何形式提供存在于试剂盒的测定组分/试剂，所述形式允许它们根据本公开发挥功能。例如但非限制性地，每种试剂可以以液体形式提供并且以散装和/或单一等分试样形式设置在试剂盒内。或者，在一个具体(但非限制性)实施方案中，一种或多种试剂可以以单一等分试样冻干试剂的形式设置于试剂盒中。微流体装置中干燥试剂的使用详细描述于美国专利号9,244,085 (Samproni)，其完整内容在此明确地通过引用并入本文。

除上文详细描述的测定组分/试剂以外，所述试剂盒可以进一步含有用于进行本文描述或以其它方式考虑的任何具体测定的其它试剂。这些额外的试剂的性质将取决于具体测定形式，并且其鉴定完全在本领域普通技术人员的技能范围内；因此，认为没有必要对其进一步描述。此外，试剂盒中存在的组分/试剂可以各自在分开的容器/隔室中，或者各种组分/试剂可以被组合于一个或多个容器/隔室中，这取决于所述组分/试剂的交叉反应性和稳定性。此外，所述试剂盒可包括在其中设置组分/试剂的微流体装置。

在所述试剂盒中的各种组分/试剂的相对量可以广泛变化，以提供组分/试剂的浓度，所述组分/试剂的浓度实质上优化需要在测定方法期间发生的反应，并且进一步实质上优化测定的灵敏度。在适当情况下，在所述试剂盒中的一种或多种组分/试剂可以作为干燥粉末提供，诸如冻干粉末，并且所述试剂盒可进一步包括用于溶解干燥试剂的赋形剂；以这种方式，可以从这些组分获得具有用于进行根据本公开的方法或测定的适当浓度的试剂溶液。在所述试剂盒中可以包括的其它试剂的非限制性实例包括洗涤溶液、稀释溶液、赋形剂、干扰溶液、阳性对照、阴性对照等。此外，所述试剂盒可进一步包括解释如何使用所述试剂盒的一组书面说明。这种性质的试剂盒可用于本文描述或以其它方式考虑的任何方法。

本公开的某些非限制性实施方案涉及微流体装置，其含有本文描述的或以其它方式考虑的任何校准或质量控制试剂。例如(但非限制性地)，本公开的某些另外的非限制性实施方案涉及微流体装置，其包括上文所述的任何试剂盒的组分。

具体而言，某些非限制性实施方案包括微流体装置，其用于经由本文描述或以其它方式考虑的血清学免疫测定检测样品中针对微生物的抗体。所述微流体装置包括：(i)通过其施加样品的入口通道；和(ii) 至少一个能够与所述入口通道流体连通的第一隔室。(ii)的隔室含有单独或与本文描述或以其它方式考虑的一种或多种其它试剂(诸如，但不限于，用于血清学免疫测定的一种或多种试剂)组合的本文描述或以其它方式考虑的任何校准或质量控制试剂。例如(但非限制性地)，所述一种或多种试剂可包括上文所述或本文以其它方式考虑的LOCI®免疫测定试剂。

在某些非限制性实施方案中，(ii)的所有要素(以及如上文所述的任何额外的要素)存在于同一隔室中。在可替代的非限制性实施方案中，所述要素在两个或更多个隔室之间分开。

所述微流体装置可提供隔室的任何排列和各种组分在这之间的分布，其允许所述装置根据本公开发挥功能。

可以密封微流体装置的任何隔室，以在实质上气密的环境中维持其中设置的试剂，直至使用它们；例如，可以密封含有冻干试剂的隔室以防止试剂任何无意的重构。入口通道和一个隔室，以及两个隔室可以被描述为“能够与彼此流体连通”；该短语指示所述的每个隔室仍可以被密封，但在刺穿在其中或在其之间形成的密封后，两个隔室能够在其之间具有流体流动。

本公开的微流体装置可以提供有本领域中已知的或本文以其它方式考虑的任何其他期望特征。例如但非限制性地，本公开的微流体装置可以进一步包括读取室；所述读取室可以是含有上文所述的试剂的任何隔室，或者所述读取室可以与所述隔室流体连通。所述微流体装置可以进一步包括一个或多个额外的隔室，其含有其它溶液，诸如(但不限于)洗涤溶液、稀释溶液、赋形剂、干扰溶液、阳性对照、阴性对照等。这些额外隔室可以与其它隔室中的一个或多个流体连通。例如，所述微流体装置可以进一步包括一个或多个含有洗涤溶液的隔室，并且这些隔室能够与所述装置的任何其它隔室流体连通。在另一个实例中，所述微流体装置可以进一步包括一个或多个含有用于溶解一种或多种干燥试剂的赋形剂的隔室，并且所述隔室可能够与所述装置的任何其它隔室流体连通。在又一个进一步实例中，所述微流体装置可以包括一个或多个含有稀释溶液的隔室，并且所述隔室能够与所述装置的任何其它隔室流体连通。

本公开的某些非限制性实施方案涉及生产任何校准或质量控制试剂的方法，所述校准或质量控制试剂用于人生物样品中针对微生物的抗体的血清学免疫测定，如本文所描述的或以其它方式考虑的。在所述方法中，针对微生物抗原的人抗体在基质中与抗-人Ig抗体组合，并在抗-人Ig抗体与一种或多种针对微生物抗原的人抗体之间形成复合物的条件下孵育。

所述孵育步骤可在任何温度下进行并持续任何时间段，其允许形成本文所描述的一种或多种复合物。例如，但不限于，所述孵育步骤可以在从约10℃至约50℃的范围(诸如，但不限于，从约18℃至约40℃的范围，并且具体而言(但不限于)，约37℃)内的温度下进行，并持续如下的时间段：约30秒、约60秒、约2分钟、约3分钟、约4分钟、约5分钟、约10分钟、约15分钟、约20分钟、约25分钟、约30分钟、约35分钟、约40分钟、约45分钟、约50分钟、约55分钟、约1小时、约1.5小时、约2小时、约2.5小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约12小时、约18小时、约24小时或更长，以及或由任何两个上述值形成的范围(即，从约1分钟至约5小时的范围、从约30分钟至约2小时的范围等)，或任何落入两个上述值之间的值(即，约53分钟、约15小时等)。

此外，产生任何校准或质量控制试剂的方法可含有一个或多个额外的步骤，以形成本文所描述的试剂。

本公开的某些非限制性实施方案涉及校准用于人生物样品中针对微生物的抗体的血清学免疫测定的方法。在所述方法中，使用本文所描述的或以其它方式考虑的任何校准或质量控制试剂进行免疫测定。

可由本公开的免疫测定来检测能够经由本文所描述的或以其它方式考虑的测定形式检测的任何人类抗-微生物抗体。在具体(但非限制性)实施方案中，所述抗体是针对SARS-Covid2病毒的抗-病毒抗原抗体。

在一些非限制性测定实施方案中，利用信号产生系统(sps)成员，其包括敏化剂，诸如例如光敏剂，和化学发光-荧光分子组合物，并且其各自具有与其直接或间接附接的微生物抗原(或能够在免疫测定期间使抗原与其直接或间接附接)；在这些测定实施方案中，所述敏化剂的激活导致激活化学发光组合物的产物，由此生成可检测信号，所述可检测信号与所检测的结合的人类抗-微生物抗体的量相关。可作为本公开基础的测定平台的一个示例性(但非限制性)实施方案是发光氧通道测定(LOCI®; Siemens HealthcareDiagnostics Inc., Tarrytown, NY)。LOCI®测定描述于例如美国专利号5,340,716(Ullman等人)，其全部内容明确地通过引用并入本文。

在具体(但非限制性)测定实施方案中，通过将所述校准或质量控制试剂与用于LOCI®形式的两种或多种试剂孵育来进行所述测定。例如(但非限制性地)，所述校准或质量控制试剂可与如下一起孵育：单线态氧可激活的化学发光化合物(诸如(但不限于)chemibead)和包含敏化剂(诸如(但不限于) sensibead)的组合物，其各自具有与其直接或间接结合的微生物抗原。在一个具体(但非限制性)的实施方案中，将所述校准或质量控制试剂同时地或部分或全部依次地与以下组合：(i) 组合物，其包含单线态氧可激活的化学发光化合物，其具有与其直接或间接结合的由所述试剂的人类抗-微生物抗体特异性结合的抗原，和由激活的化学发光化合物激发的荧光分子；和(ii) 组合物，其包含敏化剂，所述敏化剂能够在其激发状态产生单线态氧，并且具有与其直接或间接结合的由与所述试剂的人类抗-微生物抗体特异性结合的抗原。在另一具体(但非限制性)的实施方案中，所述校准或质量控制试剂同时地或部分或全部依次地与以下组合：(i) 组合物，其包含单线态氧可激活的化学发光化合物，其具有与其直接或间接结合的由所述试剂的人类抗-微生物抗体特异性结合的抗原，和由激活的化学发光化合物激发的荧光分子；(ii) 组合物，其包含敏化剂，所述敏化剂能够在其激发状态产生单线态氧，并且具有与其直接或间接结合的生物素-特异性结合配偶体；和(iii) 与所述试剂的人类抗-微生物抗体特异性结合的生物素化的抗原。

在第二步骤中，将所述组分一起孵育以允许含有化学发光化合物的组合物和含有敏化剂的组合物与存在于所述校准或质量控制试剂的复合物中的人类抗-微生物抗体结合，由此导致形成复合物/聚集物，其中使敏化剂与化学发光化合物密切接近。

在第三步骤中，激活所述敏化剂以生成单线态氧，其中存在于复合物/聚集物中的敏化剂的激活导致存在于每个复合物/聚集物中在的化学发光化合物的激活。

在第四步骤中，通过测量由所述荧光分子发射的光的量来测定由在复合物/聚集物中激活的化学发光化合物生成的化学发光的量，以测定在所述校准或质量控制试剂中人类抗-微生物抗体的量。

在本公开的方法中可以利用上文详细描述或本文以其他方式考虑的任何微生物抗原、单线态氧可激活的化学发光化合物、敏化剂、荧光分子和生物素或其类似物。

例如，在某些具体(但非限制性)实施方案中，所述单线态氧可激活的化学发光化合物是这样的物质，其经历与单线态氧的化学反应以形成亚稳态中间物质，所述亚稳态中间物质可以分解并同时或随后发射光。

在具体(但非限制性)实施方案中，所述敏化剂是光敏剂，并且在步骤(3)中的敏化剂的激活包括用光照射(诸如，但不限于，在约680 nm处照射)。

如上所提及，组合(同时或依次)提供所述方法的各种组分。当依次添加所述方法的各种组分时，可以改变组分的添加次序；本领域普通技术人员可确定向测定添加不同组分的具体期望次序。最简单的添加次序当然是同时添加所有物质，并测定由其产生的信号。或者，可以依次组合每种组分，或组分的组。在某些实施方案中，可以在一次或多次添加之后包括孵育步骤。

尽管本公开的具体实施方案被描述为具有LOCI®测定形式，但应理解，本公开还涉及能够检测针对微生物抗原的人抗体的任何其它免疫测定形式(和试剂盒、微流体装置，及其实施方法)。因此，该具体测定形式的公开是仅出于举例的目的，并且不应该被解释是本公开的限制。

实施例

下文提供了实施例。然而，应理解本公开的应用不限于本文公开的具体实验、结果和实验室程序。相反，所述实施例仅作为各种实施方案之一提供，并且仅意在是示例性的，而非穷举性的。

在该实施例中，抗-人IgG抗体用于复合校准物基础基质中的抗-病毒抗原(AVAg)抗体。复合的AVAg抗体(其在未复合时分出两个叉臂)，与抗-人IgG抗体复合后成为四叉臂或多叉臂抗体。此类复合物(其含有两个或更多与抗-人Ig抗体复合的AVAg抗体)在抗原桥接测定中能够更有效地交联病毒抗原。

例如，如图1中所示，在CV2T LOCI®测定形式中，仅含有AVAg抗体的校准物以1:1的比例与chemibead和sensibead结合。具体地，将用荧光素标记的SARS-CoV-2刺突蛋白S1亚基的受体结合结构域(RBD)预制的抗-FITC chemibead和链霉抗生物素蛋白包被的与生物素化的S1的RBD结合的sensibead以及含有AVAg抗体的校准物混合。为了生成信号，AVAg抗体的一个叉臂必须结合chemibead，并且同一AVAg抗体的另一叉臂必须结合sensibead。chemibead和sensibead与校准物孵育后，混合物在680 nm处激发，其造成sensibead释放单线态氧。chemibead和sensibead的密切接近(通过与同一抗体结合)造成单线态氧被转移至chemibead，并且这引起化学反应，其导致chemibead发出可在612 nm处测量的光。

相比之下，如图2中所示，利用根据本公开产生的校准物，从而形成与抗-人IgG抗体结合的AVAg抗体的复合物。存在于校准物中的这些复合物可含有与每个抗-人IgG抗体结合的两个AVAg抗体，从而提供了校准物内的试剂，其含有至少四个叉臂，其中每个叉臂都可与抗-病毒抗原结合(即，在所述CV2T测定的情况下，S1的RBD)。当该校准物与来自CV2TLOCI®测定的chemibead和sensibead孵育时，含有四个叉臂的每个复合物可结合最多四个抗原，其各自存在于chemibead或sensibead上，并且由此允许形成含有两个或更多chemibead和/或两个或更多sensibead的聚集物。这些聚集物的形成极大地提高了在暴露于激发波长的时间下sensibead足够密切接近chemibead的机会，并从而指数级提高了在暴露于激发波长后，由存在于聚集物中的各种chemibead发出的发射光。因此，本公开的校准试剂生成的信号可产生比图1中利用的校准物生成的信号强(或多)约20至约80倍的信号。

校准物如下产生：由于人血清/血浆中丰富的内源性抗体，选择BSA作为校准物基质(虽然也可使用不含人血清和血浆的其它材料/样品)。以PBS (pH 7.4)缓冲液中的6%无蛋白酶BSA作为基础基质，人源化嵌合抗-RBD Ig抗体(GenScript, Piscataway, NJ)与两种不同的抗-人单克隆抗体之一混合：4H5 (Siemens Healthcare Diagnostics,Tarrytown, NY)和2F3 (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA)，其中，抗-人Ig抗体与AVAg抗体比例为约1:2。在储存前，该混合物在约37℃孵育至少一小时。

通过用人IgG免疫小鼠生成单克隆抗体4H5，并且这种单克隆抗体特异性结合IgG重链的恒定结构域。为了生产，使杂交瘤细胞系在细胞培养物中生长，并且使用蛋白A亲和色谱法纯化培养上清液。这个单克隆抗体已显示出在与人IgG排他结合方面的特异性。

在具体的样品放大研究中，将以上产生的校准试剂用于含有图1-2的chemibead和sensibead的CV2T LOCI®测定中。如表1中所示，在该病毒抗原桥接免疫测定中，两种校准试剂(其含有由多叉臂AVAg抗体形成的复合物)的每一种都使测定信号相比于校准试剂含有非复合的AVAg抗体时所见的测定信号增强约20至25倍。

表1

利用这种高水平的信号增强，极大减少了产生校准或质量控制试剂所需的抗-病毒抗原抗体的量，由此导致至少节约10至20倍的成本。

因此，根据本公开，已经提供了完全满足上文所述的目的和优点的组合物、试剂盒和装置以及其生产和使用方法。尽管已经结合上文阐述的具体附图、实验、结果和语言描述了本公开，但显然，许多替代、修改和变化对于本领域技术人员将是显而易见的。因此，意欲涵盖落入本公开的精神和广泛范围内的所有此类替代、修改和变化。

Claims

1.一种校准或质量控制试剂，其用于检测人生物样品中针对微生物的抗体的血清学免疫测定，所述试剂包含：

(a) 基质；

(b) 抗-人免疫球蛋白(Ig)抗体；和

(c) 针对所述微生物的抗原的人抗体；和

其中在所述试剂中形成(b)和(c)的复合物。

2.权利要求1的校准或质量控制试剂，其中所述基质包含在PBS中的BSA。

3.权利要求1的校准或质量控制试剂，其中所述基质包含至少一种额外的组分，所述组分选自聚合物、防腐剂、填充剂，及其组合。

4.权利要求1的校准或质量控制试剂，其中所述微生物是病毒。

5.权利要求4的校准或质量控制试剂，其中所述病毒是严重急性呼吸道综合征冠状病毒2 (SARS-CoV-2)。

6.权利要求5的校准或质量控制试剂，其中(c)的抗体针对的SARS-CoV-2的抗原是CoV刺突蛋白的S1亚基的受体结合结构域(RBD)的至少一部分。

7.权利要求1的校准或质量控制试剂，其中(b)和(c)以从约1:1至约1:10的范围内的比例存在。

8.权利要求1的校准或质量控制试剂，其中(b)以从约0.01 wt%至约10 wt%的范围内的浓度存在于所述试剂中。

9.权利要求1的校准或质量控制试剂，其中(c)以从约0.01 wt%至约10 wt%的范围内的浓度存在于所述试剂中。

10.试剂盒，其包括：至少一种权利要求1的试剂。

11.权利要求10的试剂盒，其进一步包括至少一种用于所述血清学免疫测定的试剂。

12.权利要求10的试剂盒，其进一步包括至少一种包含所述微生物的抗原的组合物。

13.权利要求12的试剂盒，其中所述抗原包含CoV刺突蛋白S1亚基的受体结合结构域(RBD)的至少一部分。

14.权利要求11的试剂盒，其进一步包括：

(i) 组合物，其包含：

单线态氧可激活的化学发光化合物，其具有与其直接或间接结合的由所述试剂的(c)的人抗体特异性结合的抗原；和

由激活的化学发光化合物激发的荧光分子；和

(ii) 组合物，其包含敏化剂，所述敏化剂能够在其激发状态产生单线态氧，并且具有与其直接或间接结合的由所述试剂的(c)的人抗体特异性结合的抗原。

15.权利要求11的试剂盒，其进一步包括：

(i) 组合物，其包含：

由激活的化学发光化合物激发的荧光分子；

(ii) 组合物，其包含敏化剂，所述敏化剂能够在其激发状态产生单线态氧，并且具有与其直接或间接结合的生物素-特异性结合配偶体；和

(iii) 生物素化的抗原，其与所述试剂的(c)的人抗体特异性结合。

16.微流体装置，其包括至少一种权利要求1的试剂。

17.产生用于人生物样品中针对微生物的抗体的血清学免疫测定的校准或质量控制试剂的方法，所述方法包括：

将针对所述微生物的抗原的人抗体与抗-人Ig抗体在基质中孵育，由此形成抗-人Ig抗体与针对所述微生物的抗原的一种或多种人抗体之间的复合物。

18.权利要求17的方法，其中所述微生物是严重急性呼吸道综合征冠状病毒2 (SARS-CoV-2)。

19.校准用于人生物样品中针对微生物的抗体的血清学免疫测定的方法，所述方法包括：

使用校准或质量控制试剂进行免疫测定，校准或质量控制试剂包含与针对所述微生物的抗原的人抗体复合的抗-人Ig抗体。

20.权利要求19的方法，其中所述微生物是严重急性呼吸道综合征冠状病毒2 (SARS-CoV-2)。