CN115397444A - 用于同种异体移植的组合物和方法 - Google Patents

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Abstract

本文描述了可用于使CD45+细胞耗竭以及用于治疗各种造血疾病、代谢病症、癌症和自身免疫疾病等的组合物和方法。本文所描述的组合物和方法能够用于治疗病症，例如，通过使CD45+癌细胞或自身免疫细胞群体耗竭。本文所描述的组合物和方法还能够用于通过在移植程序之前选择性地使内源性造血干细胞耗竭来使患者为同种异体造血干细胞移植疗法做好准备，并且改善同种异体造血干细胞移植物的植入。

Description

用于同种异体移植的组合物和方法
相关申请
本申请要求2020年2月18日提交的美国临时申请号62/978,141和2020年8月7日提交的美国临时申请号63/062,845的优先权。前述优先权申请中的每一者的全部内容以引用的方式并入本文中。
序列表
本申请含有序列表，所述序列表以ASCII格式通过电子方式提交并且特此以全文引用的方式并入。所述ASCII副本创建于2021年2月11日，命名为M103034_2195WO_0576_7_SL.txt并且大小为261,714字节。
技术领域
本公开涉及通过施用偶联至毒素的CD45靶向部分(例如，抗体药物缀合物)来治疗罹患各种病态，尤其诸如血液疾病、代谢病症、癌症和自身免疫疾病的患者，所述CD45靶向部分能够结合CD45，例如，如由CD45+细胞，诸如造血干细胞或成熟免疫细胞(例如，T细胞)表达的CD45。
背景技术
同种异体造血干细胞移植(allo-HSCT)是治疗恶性和非恶性血液病症的潜在治愈性治疗。同种异体细胞疗法包括将细胞移植至患者中，其中移植的细胞来源于除患者外的供体。用于同种异体细胞疗法的常见类型的同种异体供体包括HLA匹配的兄弟姐妹、匹配的无关供体、部分匹配的家庭成员供体、相关的脐带血供体和无关的脐带血供体。细胞疗法的最终目的是鉴定可以形成“现成”产品基础的同种异体细胞疗法(Brandenberger等,(2011).BioProcess International.9(增刊I):30-37)，这将扩大同种异体细胞疗法的用途。
尽管有前景，但目前同种异体细胞的治疗用途可能会有并发症，使得这种疗法具有挑战性。在有免疫能力的宿主中，移植的同种异体细胞迅速被排斥，这一过程称为宿主抗移植物排斥(HvG)。HvG可能大大降低转移细胞的功效，以及在接受体中造成不良事件，从而限制同种异体细胞的使用。此外，在allo-HSCT之前用于患者准备或调理的当前方案限制了这种治愈性程序的使用，这归因于方案相关的死亡率和发病率，包括器官毒性、不孕症和继发性恶性病的风险。这极大地限制了allo-HSCT在恶性和非恶性疾患中的使用。当前需要更安全的调理方案，以避免使用免疫抑制剂并促进同种异体造血干细胞移植物的植入，从而在移植后保留这些细胞的多能性和造血功能。
发明内容
本文提供了特异性靶向CD45的CD45靶向部分(例如，抗体和抗体-药物缀合物(ADC))。CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体和ADC)可用于单剂调理程序，其中患者准备接受同种异体移植，例如，完全错配同种异体移植，而无需使用额外的调理剂，诸如免疫抑制剂。根据本文所描述的方法，可以通过向患者施用CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体或抗体药物缀合物)来调理患者用于同种异体造血干细胞移植疗法，所述CD45靶向部分能够结合CD45，例如，如由CD45+细胞，诸如造血干细胞或成熟免疫细胞(例如，T细胞)表达的CD45。在一些实施方案中，CD45靶向部分可以偶联至毒素。在一些实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体或ADC)在不存在其它调理剂的情况下作为单一疗法施用。举例来说，CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体或ADC)可以在不存在一种或多种免疫抑制剂，诸如免疫耗竭剂(例如，抗CD4和/或抗CD8)、全身照射(例如，低剂量TBI)和/或环磷酰胺的情况下，以足以使患者中的CD45+细胞耗竭的量施用。
在一个方面，本公开提供了一种使需要造血干细胞(HSC)移植的人类患者中的CD45+细胞群体耗竭的方法，所述方法包括在患者接受包含同种异体HSC的移植物之前向患者施用有效量的偶联至细胞毒素的CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体药物缀合物(ADC))，其中所述患者在移植之前或与移植大体上同时没有用免疫抑制剂调理。
在另一个方面，本公开提供了一种方法，所述方法包括(a)在不存在免疫抑制剂的情况下以足以使患者中的CD45+细胞群体耗竭的有效量向人类患者施用偶联至细胞毒素的CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体药物缀合物(ADC))；以及(b)随后向患者施用包含同种异体HSC的移植物。
在另一个方面，本公开提供了一种方法，所述方法包括向人类患者施用包含同种异体HSC的移植物，其中先前已经在不存在免疫抑制剂的情况下以足以使患者中的造血干细胞群体耗竭的有效量向患者施用偶联至细胞毒素的CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体药物缀合物(ADC))。
在一些实施方案中，偶联至细胞毒素的CD45靶向部分是抗CD45抗体药物缀合物(ADC)。在本文所公开的一些实施方案中，同种异体HSC包含相对于患者中的HLA抗原的一个或多个HLA错配。在其它实施方案中，同种异体HSC包含相对于患者中的HLA抗原的两个或更多个HLA错配。在一些实施方案中，同种异体HSC包含相对于患者中的HLA抗原的三个或更多个HLA错配。在一些实施方案中，同种异体HSC包含相对于患者中的HLA抗原的五个或更多个HLA错配。在一些实施方案中，同种异体HSC包含相对于患者中的HLA抗原的完全HLA错配。在一些实施方案中，同种异体HSC包含相对于患者中的次要组织相容性抗原的一个或多个次要组织相容性抗原(miHA)错配。在一些实施方案中，同种异体HSC包含相对于患者中的次要组织相容性抗原的两个或更多个miHA错配。在一些实施方案中，同种异体HSC包含相对于患者中的次要组织相容性抗原的五个或更多个miHA错配。
在前述方面的一些实施方案中，移植物可以包含完全错配同种异体HSC。
在本文所公开的一些实施方案中，免疫抑制剂是全身照射(TBI)。在前述方面的一些实施方案中，免疫抑制剂是低剂量TBI。在前述方面的一些实施方案中，免疫抑制剂是抗CD4抗体、抗CD8抗体或它们的组合。在前述方面的一些实施方案中，免疫抑制剂是环磷酰胺。
在本文所公开的一些实施方案中，患者在移植前至少24小时和/或移植后至少24小时不接受免疫抑制剂。在其它实施方案中，患者在移植前至少48小时和/或移植后至少48小时不接受免疫抑制剂。在其它实施方案中，患者在移植前至少72小时和/或移植后至少72小时不接受免疫抑制剂。在其它实施方案中，患者在移植前至少96小时和/或移植后至少96小时不接受免疫抑制剂。在其它实施方案中，患者在移植前至少7天和/或移植后至少7天不接受免疫抑制剂。在其它实施方案中，患者在移植前至少14天和/或移植后至少14天不接受免疫抑制剂。在其它实施方案中，患者在移植前至少1个月和/或移植后至少1个月不接受免疫抑制剂。
在一些实施方案中，患者在移植前至少3天、至少7天、至少14天、至少21天、至少28天、至少1个月或至少2个月不接受免疫抑制剂。在一些实施方案中，患者在移植后至少3天、至少7天、至少14天、至少21天、至少28天、至少1个月或至少2个月不接受免疫抑制剂。
在本文所公开的一些实施方案中，向患者施用有效量的偶联至细胞毒素的CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)。在一些实施方案中，有效量是足以建立至少80％、85％、90％、95％、97％、99％或100％供体嵌合的量。举例来说，在一些实施方案中，有效量是当在不存在其它调理剂的情况下作为单剂施用时，足以建立至少80％、85％、90％、95％、97％、99％或100％供体嵌合的量。在一些实施方案中，有效量是在患者接受同种异体移植(例如，完全错配同种异体移植)之前，当在不存在其它调理剂的情况下作为单剂施用时，足以建立至少80％、85％、90％、95％、97％、99％或100％供体嵌合的量。在一些实施方案中，在移植后至少6周、7周、8周、9周或10周评估供体嵌合。在一些实施方案中，供体嵌合是总外周嵌合。在一些实施方案中，供体嵌合是骨髓嵌合。在一些实施方案中，供体嵌合是T细胞嵌合。在一些实施方案中，供体嵌合是B细胞嵌合。
在本文所公开的一些实施方案中，以单个剂量向患者施用有效量的偶联至细胞毒素的CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)。在其它实施方案中，以两个剂量向患者施用有效量的偶联至细胞毒素的CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)。在其它实施方案中，以两个或更多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个)剂量向患者施用有效量的偶联至细胞毒素的CD45靶向部分(例如，抗CD45ADC)。
在本文所公开的一些实施方案中，在抗CD45 ADC的浓度已经从患者血液中大体上清除后，向患者施用移植物。
在本文所公开的一些实施方案中，造血干细胞或其子代在将造血干细胞移植至患者中之后两天或更长时间后维持造血干细胞功能潜力。
在本文所公开的一些实施方案中，同种异体造血干细胞或其子代能够在将造血干细胞移植至患者中之后定位至造血组织和/或重建造血。
在本文所公开的一些实施方案中，在移植至患者中之后，造血干细胞引起细胞群体的恢复，所述细胞选自由巨核细胞、血栓细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成髓细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞组成的组。
在本文所公开的一些实施方案中，其中患者正罹患干细胞病症。在一些实施方案中，患者正罹患血红蛋白病病症、自身免疫病症、骨髓增生异常病症、免疫缺陷病症或代谢病症。在一些实施方案中，患者正罹患癌症。
在本文所公开的一些实施方案中，抗CD45 ADC包含如通过生物层干涉法(BLI)所测量，解离率(KOFF)为1x10-2至1x10-3、1x10-3至1x10-4、1x10-5至1x10-6、1x10-6至1x10-7或1x10-7至1x10-8的抗体。在一些实施方案中，抗CD45 ADC包含如通过生物层干涉法(BLI)测定所确定，以约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约8nM或更小、约6nM或更小、约4nM或更小、约2nM或更小、约1nM或更小的KD结合CD45的抗体。
在本文所公开的一些实施方案中，抗CD45 ADC包含人源化抗CD45抗体。在本文所公开的一些实施方案中，抗CD45 ADC包含人类抗CD45抗体。在一些实施方案中，抗CD45 ADC包含表5中所列的抗CD45抗体。在一些实施方案中，抗CD45 ADC包含重链互补决定区(CDR)1-3和轻链CDR 1-3，或表5中所列的抗体。在一些实施方案中，抗CD45 ADC包含表5中所列的抗体的重链可变区和轻链可变区。在一些实施方案中，抗CD45 ADC包含表5中所列的抗CD45抗体的人源化型式。在一些实施方案中，抗CD45 ADC包含表5中所列的抗CD45抗体的去免疫型式。
在本文所公开的一些实施方案中，抗CD45 ADC包含完整抗CD45抗体。在一些实施方案中，抗CD45 ADC包含IgG抗体。在一些实施方案中，IgG是IgG1同种型、IgG2同种型、IgG3同种型或IgG4同种型。
在本文所公开的一些实施方案中，抗CD45 ADC包含通过连接子缀合至细胞毒素的抗CD45抗体。在一些实施方案中，细胞毒素是RNA聚合酶抑制剂。在一些实施方案中，RNA聚合酶抑制剂是鹅膏毒素(amatoxin)。在一些实施方案中，RNA聚合酶抑制剂是鹅膏蕈碱(amanitin)。在一些实施方案中，鹅膏蕈碱选自由α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素(amanin)、鹅膏酰胺(amaninamide)、鹅膏无毒环肽(amanullin)、鹅膏蕈酸(amanullinic acid)和鹅膏无毒环肽原(proamanullin)组成的组。在一些实施方案中，细胞毒素是吡咯并苯并二氮杂卓(pyrrolobenzodiazepine)(PBD)。在一些实施方案中，细胞毒素选自由假单胞菌外毒素A、德博甘宁(deBouganin)、白喉毒素(diphtheriatoxin)、皂草素(saporin)、美登素(maytansine)、类美登素(maytansinoid)、奥瑞他汀(auristatin)、蒽环霉素(anthracycline)、加利车霉素(calicheamicin)、伊立替康(irinotecan)、SN-38、多卡霉素(duocarmycin)、吡咯并苯并二氮杂卓、吡咯并苯并二氮杂卓二聚体、吲哚啉并苯并二氮杂卓、吲哚啉并苯并二氮杂卓二聚体和吲哚啉并苯并二氮杂卓假二聚体组成的组。在一些实施方案中，细胞毒素是奥瑞他汀，例如，MMAE或MMAF。
在本文所公开的一些实施方案中，抗体通过抗体的Fc结构域中的半胱氨酸残基缀合至毒素。在一些实施方案中，半胱氨酸残基通过抗体的Fc结构域中的氨基酸取代而引入。在一些实施方案中，氨基酸取代是S239C或D265C。
附图说明
图1A-1H以图形方式描绘了体内耗竭测定的结果，显示CD45-ADC有效地使C57 Bl/6小鼠骨髓中的鼠类HSC、WBC、淋巴细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞耗竭。图1A描绘了流式细胞术门控策略和结果，显示在施用PBS或3mg/kg CD45-ADC(第0天施用)后第2天收集的骨髓中长期HSC的耗竭。图1B以图形方式描绘了PBS、同种型ADC或CD45-ADC给药后两天骨髓中长期HSC(LT-HSC)的水平。图1C以图形方式描绘了在向小鼠施用3mg/kg CD45-ADC后随时间而变的CD45-ADC血浆抗体浓度，指示3mg/kg CD45-ADC在C57Bl/6小鼠中的CD45-ADC半衰期为1.7小时。图1D以图形方式描绘了PBS、同种型SAP或CD45-SAP给药后0、3、7、9、14和21天的外周淋巴细胞水平。当比较CD45-ADC处理的小鼠与未处理的小鼠时，星号(*)指示p<0.05。图1E以图形方式描绘了体内耗竭测定的结果，显示相对于未处理的小鼠，用CD45-ADC(0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg)处理的小鼠的骨髓中WBC、淋巴细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞的耗竭。图1F以图形方式描绘了显示LSK、ST-HSC和LT-HSC在用CD45-ADC处理的小鼠骨髓中被CD45-ADC耗竭的结果。图1G以图形方式描绘了用CD45-ADC(0.3、1mg/kg或3mg/kg)处理进行处理后在处理后第0天、第3天、第7天、第9天、第14天和第21天(*3mg/kg由于身体状况不佳和显著体重减轻在第11天实施安乐死)小鼠中白血细胞(WBC)、嗜中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的水平。图1H以图形方式描绘了用CD45-ADC(0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg)处理后在剂量施用后第0天、第3天、第7天、第9天、第14天和第21天(*3mg/kg由于身体状况不佳和显著体重减轻在第11天实施安乐死)小鼠中RBC和血小板的水平。
图2A-2D以图形方式描绘了体内研究的结果，显示CD45-ADC能够在鼠类模型中进行同类骨髓移植。C57Bl/6小鼠用9Gy TBI、同种型ADC或CD45-ADC进行调理并且用来自B6.SJL(B6 CD45.1+)小鼠的全骨髓进行移植。图2A以图形方式描绘了使用CD45.1+抗原在移植后4周、8周、12周和16周在血液中检测到的移植接受体中随处理模式而变的供体嵌合百分比。图2B-2D以图形方式描绘了在移植后4周、8周、12周和16周移植接受体中随处理模式而变的外周供体骨髓嵌合百分比(图2B)、B细胞嵌合百分比(图2C)和T细胞嵌合百分比(图2D)。
图3A-3D以图形方式描绘了在将Balb/c CD45.1供体细胞次要错配同种异体移植至DBA/2接受体小鼠中之前CD45-ADC调理的体内研究结果。图3A以图形方式描绘了使用CD45.1+抗原在移植后4周、8周、12周和16周在血液中检测到的移植接受体中随处理模式而变的供体嵌合百分比。图3B-3D以图形方式描绘了在移植后4周、8周、12周和16周移植接受体中随处理模式而变的外周供体骨髓嵌合百分比(图3B)、B细胞嵌合百分比(图3C)和T细胞嵌合百分比(图3D)。
图4A-4E以图形方式描绘了在将Balb/c CD45.1供体细胞完全错配同种异体移植至C57BL/6接受体小鼠中之前CD45-ADC调理的体内研究结果。图4A以图形方式描绘了使用CD45.1+抗原在移植后4周和8周在血液中检测到的移植接受体中随处理模式而变的供体嵌合百分比。图4B-4D以图形方式描绘了在移植后4周和8周移植接受体中随处理模式而变的外周供体骨髓嵌合百分比(图4B)、B细胞嵌合百分比(图4C)和T细胞嵌合百分比(图4D)。图4E以图形方式描绘了在完全错配小鼠模型中类似于图4B-4D中所描述的研究的体内研究结果，但在移植后至第22周监测供体嵌合。C57Bl/6(H-2b,CD45.2+)小鼠用同种型ADC或CD45-ADC(5mg/kg)进行调理并且用Balb/c(H-2d,CD45.1+)骨髓进行移植。使用CD45.1+抗原在移植后4周在外周血中检测到供体细胞并且持续至第22周(左上)。重构是多系的(左下和中图)。在CD45-ADC调理的小鼠中终末脾(右上)和胸腺(右下)嵌合类似于TBI。*p<0.05，对比TBI；#p<0.05，对比CD45-ADC；使用事后图基多重比较检验(post hoc Tukey's multiplecomparisons test)的ANOVA。
图5以图形方式描述了用CD45-ADC在小鼠HSC中进行的离体杀伤测定的结果，这些HSC已经谱系耗竭并且在含干细胞因子(SCF)的培养基中培养。显示了CD45活骨髓(BM)细胞计数、Lin-BM总细胞计数和LKS(Lin-Sca-1+c-Kit+)BM总细胞计数。
图6以图形方式描绘了在以单个剂量或以3mg/kg Q2D分次剂量向小鼠施用3mg/kg或6mg/kg CD45-ADC之后随时间而变的CD45-ADC血浆抗体浓度。
图7A-7C以图形方式描绘了在将CByJ.SJL(B6)-Ptprca/J(CD45.1)供体细胞次要错配同种异体移植至DBA/2(CD45.2)接受体小鼠中之前CD45-ADC调理的体内研究结果。图7A以图形方式描绘了第0周、第4周、第8周、第12周和第16周用IRR、Iso-ADC、CD45-ADC或CD45-ADC与抗CD4和抗CD8抗体组合处理的小鼠在16周时的B220+、CD11B+和CD3+外周血嵌合百分比。图7B以图形方式描绘了在所指示的条件下处理后第16周小鼠中的外周血组成(B220+、CD11B+和CD3+外周血嵌合百分比)。图7C以图形方式描绘了如通过频率百分比和细胞计数/股骨所测量，在所指示的条件下处理后第3天从小鼠提取的骨髓中LSK(Lin-Sca-1+c-Kit+)细胞、LT-HSC和ST-HSC的耗竭水平。
图8A-8C以图形方式描绘了在将CByJ.SJL(B6)-Ptprca/J(CD45.1)供体细胞完全错配同种异体移植至C57Bl/6(CD45.2)接受体小鼠中之前CD45-ADC调理的体内研究结果。图8A以图形方式描绘了如通过频率百分比和细胞计数/股骨所测量，用Iso-ADC或CD45-ADC(2x3mg/kg，或4mg/kg、5mg/kg或6mg/kg的单个剂量)处理后第3天从小鼠提取的骨髓中LSK(Lin-Sca-1+c-Kit+)细胞、LT-HSC和ST-HSC的耗竭水平。还评估了9Gy TBI、CD45-ADC与0.5Gy TBI组合或初始条件的处理。图8B以图形方式描绘了使用CD45.1+抗原在移植后4周和8周在血液中检测到的移植接受体中随处理模式而变的供体嵌合百分比。图8C以图形方式描绘了第4周在所指示的处理组中小鼠在16周时的B220+、CD11B+和CD3+外周血嵌合百分比。
具体实施方式
本文提供了可用于单剂调理程序的CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体或ADC)，其中患者准备接受包括同种异体造血干细胞的移植物，而无需使用额外的调理剂，诸如免疫抑制剂。此类程序促进同种异体造血干细胞移植物的植入。根据本文所描述的方法，可以通过在不存在免疫抑制剂的情况下施用CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体、其抗原结合部分或ADC)来调理患者用于同种异体造血干细胞移植疗法。CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体、其抗原结合部分或ADC)能够结合由造血细胞，包括造血干细胞和成熟免疫细胞表达的CD45抗原。如本文所描述，CD45靶向部分(例如，抗体或其抗原结合部分)可以共价缀合至细胞毒素，以将CD45靶向部分偶联至毒素(例如，以形成抗体药物缀合物(ADC))。向需要造血干细胞移植疗法的患者施用能够结合CD45的CD45靶向部分(例如，ADC、抗体、其抗原结合部分或药物-抗体缀合物)可以促进同种异体造血干细胞移植物的植入，例如，通过选择性地使内源性造血干细胞耗竭，从而创造由外源性造血干细胞移植物填补的空缺。在一个示例性实施方案中，移植物包含完全错配的同种异体造血干细胞。
定义
如本文所用，术语“约”是指高于或低于所描述值的5％以内的值。
如本文所用，术语“同种异体”当在移植的情形中使用时，用于定义从基因不相似的供体移植至相同物种的接受体的细胞(或组织或器官)。
如本文所用，术语“自体”是指供体和接受体是同一受试者的细胞或移植物。
如本文所用，术语“异种”是指供体和接受体种类不同的细胞。
如本文所用，术语“免疫细胞”旨在包括但不限于具有造血来源并且在免疫反应中起作用的细胞。免疫细胞包括但不限于T细胞和自然杀伤(NK)细胞。自然杀伤细胞在本领域中是众所周知的。在一个实施方案中，自然杀伤细胞包括细胞系，诸如NK-92细胞。NK细胞系的其它实例包括NKG、YT、NK-YS、HANK-1、YTS细胞和NKL细胞。免疫细胞可以是同种异体的或自体的。
如本文所用，术语“CD45靶向部分”是指能够结合至CD45的分子，包括例如抗体、抗体片段或适体。在一些实施方案中，CD45靶向部分与纳米颗粒(例如，在纳米颗粒的表面上)偶联以形成靶向纳米颗粒(例如，载药的纳米颗粒，诸如载有毒素的纳米颗粒)。
如本文所用，术语“抗体”是指特异性结合至特定抗原或与特定抗原发生免疫反应的免疫球蛋白分子。抗体包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、基因工程抗体和其它修饰形式的抗体，包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体、异源缀合物抗体(例如，双特异性、三特异性和四特异性抗体、双链抗体、三链抗体和四链抗体)和抗体片段(即，抗体的抗原结合片段)，包括例如Fab'、F(ab')2、Fab、Fv、rIgG和scFv片段，只要它们展现所需抗原结合活性即可。
本公开的抗体一般是分离的或重组的。“分离的”当在本文中使用时，是指已经从表达其的细胞或细胞培养物中鉴定并分离和/或回收的多肽，例如，抗体。通常，分离的抗体将通过至少一个纯化步骤来制备。因此，“分离的抗体”是指大体上不含具有不同抗原特异性的其它抗体的抗体。举例来说，特异性结合至CD45的分离抗体大体上不含特异性结合除CD45以外的抗原的抗体。
如本文所用，术语“单克隆抗体”是指通过本领域中可用或已知的任何方式从单个克隆体，包括任何真核、原核或噬菌体克隆体得到的抗体，并且不限于通过杂交瘤技术产生的抗体。可以使用本领域中已知的多种技术制备可用于本公开的单克隆抗体，包括使用杂交瘤、重组和噬菌体展示技术或它们的组合。除非另有指示，否则术语“单克隆抗体”(mAb)意指既包括完整分子，也包括能够特异性结合至靶蛋白的抗体片段(包括例如Fab和F(ab')2片段)。如本文所用，Fab和F(ab')2片段是指缺少完整抗体的Fc片段的抗体片段。在一个实施方案中，抗体片段包含Fc区。
一般来说，抗体包含含有抗原结合区的重链和轻链。每条重链由重链可变区(本文中缩写为HCVR或VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(本文中缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，间插有更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基端至羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)。
如本文所用，术语抗体的“抗原结合片段”或“抗原结合部分”是指保留特异性结合至靶抗原的能力的抗体的一个或多个部分。抗体的抗原结合功能可以由全长抗体的片段来执行。抗体片段可以是例如Fab、F(ab')2、scFv、双链抗体、三链抗体、亲和抗体、纳米抗体、适体或结构域抗体。术语抗体的“抗原结合片段”所涵盖的结合片段的实例包括但不限于：(i)Fab片段，由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，含有在铰链区通过二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(v)包括VH和VL结构域的dAb；(vi)由VH结构域组成的dAb片段(参见例如Ward等,Nature341:544-546,1989)；(vii)由VH或VL结构域组成的dAb；(viii)分离的互补决定区(CDR)；以及(ix)可以任选地通过合成连接子连接的两个或更多个(例如，两个、三个、四个、五个或六个)分离的CDR的组合。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由单独的基因编码，但它们可以使用重组方法通过连接子连接，使它们能够制成单个蛋白质链，其中VL和VH区配对形成单价分子(称为单链Fv(scFv)；参见例如Bird等,Science 242:423-426,1988和Huston等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883,1988)。这些抗体片段可以使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且可以按与完整抗体相同的方式针对效用来筛选片段。抗原结合片段可以通过重组DNA技术、完整免疫球蛋白的酶促或化学裂解，或者在某些情况下通过本领域中已知的化学肽合成程序来产生。
本文所公开的组合物和方法中使用的“适体”包括由肽或核苷酸制成的适体分子。在某些实施方案中，适体是结合至特定分子靶标的小核苷酸聚合物。核苷酸适体可以是单链或双链核酸分子(DNA或RNA)，不过基于DNA的适体最常见是双链的。适体核酸没有确定的长度；然而，适体分子最常见的长度介于15个与40个核苷酸之间。在其它实施方案中，适体是肽适体。肽适体与核苷酸适体共享许多特性(例如，小尺寸和以高亲和力结合靶分子的能力)并且它们可以通过与用于产生核苷酸适体的那些具有相似原理的选择方法产生，例如，Baines和Colas.2006.Drug Discov Today.11(7-8):334-41；以及Bickle等2006.NatProtoc.1(3):1066-91，其以引用的方式并入本文中。适体可以使用多种技术产生，但最初使用体外选择(Ellington和Szostak.(1990)Nature.346(6287):818-22)和SELEX方法(配体指数富集的系统进化)(Schneider等1992.J Mol Biol.228(3):862-9)而开发，其内容以引用的方式并入本文中。已经公布了用以制造和使用适体的其它方法，包括例如Klussmann,The Aptamer Handbook:Functional Oligonucleotides and TheirApplications.ISBN:978-3-527-31059-3；Ulrich等2006.Comb Chem High ThroughputScreen 9(8):619-32；Cerchia和de Franciscis.2007.Methods Mol Biol.361:187-200；Ireson和Kelland.2006.Mol Cancer Ther.2006 5(12):2957-62；美国专利号5,582,981；5,840,867；5,756,291；6,261,783；6,458,559；5,792,613；6,111,095；以及美国专利申请美国公布号US20070009476A1；美国公布号US20050260164A1；美国专利号7,960,102；和美国公布号US20040110235A1，全部以引用的方式并入本文中。
如本文所用，术语“抗CD45抗体”或“结合至CD45的抗体”是指能够以足够的亲和力结合CD45的抗体，以使得这种抗体可用作靶向CD45的诊断和/或治疗剂。
如本文所用，术语“双链抗体”是指含有两条多肽链的二价抗体，其中每条多肽链包括通过连接子连接的VH和VL结构域，这种连接子过短(例如，由五个氨基酸组成的连接子)而不允许同一肽链上的VH和VL结构域进行分子内缔合。这种构型迫使每个结构域与另一条多肽链上的互补结构域配对，从而形成同源二聚结构。因此，术语“三链抗体”是指含有三条肽链的三价抗体，其中每条肽链含有通过连接子连接的一个VH结构域和一个VL结构域，这种连接子极短(例如，由1-2个氨基酸组成的连接子)而不允许同一肽链内的VH和VL结构域进行分子内缔合。为了折叠成它们的天然结构，以这种方式配置的肽通常会三聚化，以便定位相邻肽链的VH和VL结构域在空间上彼此靠近(参见例如Holliger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-48,1993)。
如本文所用，术语“双特异性抗体”是指例如能够结合至少两个不同抗原或两个不同表位的单克隆抗体，例如，人类或人源化抗体。举例来说，一种结合特异性可以针对造血干细胞表面抗原，诸如CD45上的表位，而另一种结合特异性可以特异性结合不同造血干细胞表面抗原或另一种细胞表面蛋白上的表位，诸如参与增强细胞生长的信号转导途径的受体或受体亚单位等。在一些实施方案中，结合特异性可以针对相同靶抗原上的独特的、非重叠的表位(即，双互补位抗体)。如本文所用，“完整”或“全长”抗体是指具有通过二硫键互连的两条重(H)链多肽和两条轻(L)链多肽的抗体。每条重链由重链可变区(本文中缩写为HCVR或VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域CH1、CH2和CH3组成。每条轻链由轻链可变区(本文中缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区可以进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，间插有更保守的区域，称为框架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基端至羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)。
如本文所用，术语“互补决定区”(CDR)是指在抗体的轻链和重链可变结构域中均发现的高变区。可变结构域的更加高度保守的部分称作框架区(FR)。描绘抗体高变区的氨基酸位置可以变化，这取决于上下文和本领域中已知的各种定义。可变结构域内的一些位置可以视为混合高变位置，因为这些位置在一组准则下可以视为在高变区内，而在一组不同准则下视为在高变区外。这些位置中的一个或多个也可以在扩展的高变区中发现。本文所描述的抗体可以在这些混合高变位置处含有修饰。天然重链和轻链的可变结构域各自含有四个框架区，它们主要采用由三个CDR连接的β-折叠构型，这三个CDR形成连接β-折叠结构并且在一些情况下构成β-折叠结构的一部分的环。每条链中的CDR通过框架区按FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4的顺序紧密保持在一起，并且与来自其它抗体链的CDR一起有助于形成抗体的靶结合位点(参见Kabat等,Sequences of Proteins of ImmunologicalInterest,National Institute of Health,Bethesda,MD.,1987)。在某些实施方案中，除非另有指示，否则根据Kabat等的免疫球蛋白氨基酸残基编号系统进行免疫球蛋白氨基酸残基的编号(不过可以利用任何抗体编号方案，包括但不限于IMGT和Chothia)。
如本文所用，术语“特异性结合”是指抗体(或ADC)识别并结合至特定蛋白质结构(表位)而不是一般蛋白质的能力。如果抗体对表位“A”具有特异性，那么在含有标记的“A”和抗体的反应中，含有表位A(或游离、未标记的A)的分子的存在将减少结合至抗体的标记的A的量。举例来说，如果抗体在标记时可以与相应的未标记抗体竞争离开其靶标，那么抗体“特异性结合”至靶标。在一个实施方案中，如果抗体对靶标具有至少约10-4M、约10-5M、约10-6M、约10-7M、约10-8M、约10-9M、约10-10M、约10-11M、约10-12M或更小(更小意味着小于约10-12的数字，例如，10-13)的KD，那么抗体特异性结合至靶标，例如，由造血干细胞表达的抗原，诸如CD45。在一个实施方案中，术语“特异性结合”是指抗体以至少约1x10-6M、1x10-7M、约1x10-8M、约1x10-9M、约1x10-10M、约1x10-11M、约1x10-12M或更大的Kd结合至抗原和/或以比其对非特异性抗原的亲和力至少高两倍的亲和力结合至抗原的能力。在一个实施方案中，根据标准生物层干涉法(BLI)确定KD。然而，应了解，抗体可能能够特异性结合至序列相关的两个或更多个抗原。举例来说，在一个实施方案中，抗体可以特异性结合至抗原，例如CD45的人类和非人类(例如，小鼠或非人类灵长类动物)直系同源物。
如本文所用，术语“嵌合”抗体是指具有来源于非人类免疫球蛋白，诸如大鼠或小鼠抗体的可变序列和通常选自人类免疫球蛋白模板的人类免疫球蛋白恒定区的抗体。用于产生嵌合抗体的方法在本领域中是已知的。参见例如Morrison,1985,Science 229(4719):1202-7；Oi等,1986,BioTechniques 4:214-221；Gillies等,1985,J.Immunol.Methods125:191-202；美国专利号5,807,715；4,816,567；和4,816,397。如本文所用，术语“Fc”、“Fc区”、“Fc结构域”和“IgG Fc结构域”是指与通过IgG分子的木瓜蛋白酶消化获得的可结晶片段相关的免疫球蛋白，例如IgG分子的部分。Fc区包含通过二硫键连接的IgG分子的两条重链的C端一半。它没有抗原结合活性，但含有碳水化合物部分以及补体和Fc受体，包括FcRn受体(见下文)的结合位点。举例来说，Fc结构域含有第二恒定结构域CH2(例如，人类IgG1的EU位置231-340处的残基)和第三恒定结构域CH3(例如，人类IgG1的EU位置341-447处的残基)。如本文所用，Fc结构域包括“下铰链区”(例如，人类IgG1的EU位置233-239处的残基)。
Fc可以指孤立的这个区域，或在抗体、抗体的抗原结合部分或Fc融合蛋白的情形中的这个区域。已经在Fc结构域中的多个位置处观察到多态性，包括但不限于EU位置270、272、312、315、356和358，并且因此在本申请中呈现的序列与本领域中已知的序列之间可能存在细微差异。因此，“野生型IgG Fc结构域”或“WT IgG Fc结构域”是指任何天然存在的IgG Fc区(即，任何等位基因)。人类IgG1、IgG2、IgG3和IgG4的重链序列可以在许多序列数据库中找到，例如，在Uniprot数据库(www.uniprot.org)中登录号分别为P01857(IGHG1_HUMAN)、P01859(IGHG2_HUMAN)、P01860(IGHG3_HUMAN)和P01861(IGHG1_HUMAN)。
如本文所用，术语“修饰的Fc区”或“变体Fc区”是指包含在Fc结构域内的任何位置处引入的一个或多个氨基酸取代、缺失、插入或修饰的IgG Fc结构域。在某些方面，与不包含一个或多个氨基酸取代的野生型Fc结构域相比，变体IgG Fc结构域包含一个或多个氨基酸取代，使得对FcγR和/或C1q的结合亲和力降低或消除。此外，Fc结合相互作用对于多种效应子功能和下游信号传导事件是必不可少的，包括但不限于抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。因此，在某些方面，相对于其它方面具有相同氨基酸序列但不包含一个或多个氨基酸取代、缺失、插入或修饰，诸如在Fc区中的相应位置处含有天然存在的氨基酸残基的未修饰的Fc区的相应抗体，包含变体Fc结构域的抗体(例如，抗体、融合蛋白或缀合物)可以展现出对至少一个或多个Fc配体(例如，FcγR)的结合亲和力改变。
本文所描述的变体Fc结构域根据构成它们的氨基酸修饰来定义。对于本文所论述的关于Fc区的所有氨基酸取代，编号始终根据Kabat中的EU索引。因此，举例来说，D265C是Fc变体，其中EU位置265处的天冬氨酸(D)相对于亲本Fc结构域被半胱氨酸(C)取代。同样地，举例来说，D265C/L234A/L235A定义变体Fc变体，在相对于亲本Fc结构域的EU位置265(D至C)、234(L至A)和235(L至A)处具有取代。还可以根据其在突变的EU氨基酸位置中的最终氨基酸组成来指定变体。举例来说，L234A/L235A突变体可以称作“LAL A”。作为另一个实例，E233P.L234V.L235A.delG236(236缺失)突变体可以称作“EPLVLAdelG”。作为又一个实例，I253A.H310A.H435A突变体可以称作“IHH”。应注意，提供取代的顺序是任意的。
如本文所用，术语“Fcγ受体”或“FcγR”是指结合IgG抗体Fc区并且由FcγR基因编码的蛋白质家族的任何成员。在人类中，这个家族包括但不限于FcγRI(CD64)，包括同种型FcγRIa、FcγRIb和FcγRIc；FcγRII(CD32)，包括同种型FcγRIIa(包括同种异型H131和R131)、FcγRIIb(包括FcγRIIb-1和FcγRIIb-2)和FcγRIIc；以及FcγRIII(CD16)，包括同种型FcγRIIIa(包括同种异型V158和F158)和FcγRIIIb(包括同种异型FcγRIIIb-NA1和FcγRIIIb-NA2)，以及任何未发现的人类FcγR或FcγR同种型或同种异型。FcγR可以来自任何生物体，包括但不限于人类、小鼠、大鼠、兔和猴。小鼠FcγR包括但不限于FcγRI(CD64)、FcγRII(CD32)、FcγRIII(CD16)和FcγRIII-2(CD16-2)，以及任何未发现的小鼠FcγR或FcγR同种型或同种异型。
如本文所用，术语“效应子功能”是指由Fc结构域与Fc受体相互作用引起的生物化学事件。效应子功能包括但不限于ADCC、ADCP和CDC。如本文所用，“效应细胞”是指免疫系统中表达一个或多个Fc受体并介导一种或多种效应子功能的细胞。效应细胞包括但不限于单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞、树突细胞、嗜酸性粒细胞、肥大细胞、血小板、B细胞、大颗粒淋巴细胞、朗格汉斯细胞(Langerhans'cell)、自然杀伤(NK)细胞和γδT细胞，并且可以来自任何生物体，包括但不限于人类、小鼠、大鼠、兔和猴。
如本文所用，术语“沉默的”、“沉默”或“沉默中”是指具有本文所描述的修饰的Fc区的抗体，相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体的与FcγR的结合，这种抗体与Fcγ受体(FcγR)的结合降低(例如，如通过例如BLI所测量，与FcγR的结合相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体与FcγR的结合降低至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少98％、至少99％或100％)。在一些实施方案中，Fc沉默的抗体与FcγR的结合不可检测。具有修饰的Fc区的抗体与FcγR的结合可以使用本领域中已知的多种技术来确定，例如但不限于平衡方法(例如，酶联免疫吸附测定(ELISA)；KinExA，Rathanaswami等AnalyticalBiochemistry,第373卷:52-60,2008；或放射免疫测定(RIA))，或通过表面等离子共振测定或其它基于动力学的测定机制(例如，BIACORE.RTM.分析或OctetTM分析(forteBIO))，以及其它方法，诸如间接结合测定、竞争性结合测定、荧光共振能量转移(FRET)、凝胶电泳和色谱法(例如，凝胶过滤)。这些和其它方法可以利用一种或多种所检查的组分上的标记和/或采用多种检测方法，包括但不限于显色、荧光、发光或同位素标记。结合亲和力和动力学的详细描述可以在Paul,W.E.编,Fundamental Immunology,第4版,Lippincott-Raven,Philadelphia(1999)中找到，其重点是抗体-免疫原相互作用。竞争性结合测定的一个实例是放射免疫测定，包括在增加量的未标记的抗原存在下将标记的抗原与所关注的抗体一起孵育，以及检测结合至标记的抗原的抗体。所关注的抗体对特定抗原的亲和力和结合解离率可以通过斯卡查德图分析(scatchard plot analysis)从数据中确定。还可以使用放射免疫测定来确定与第二抗体的竞争。在这种情况下，在增加量的未标记的第二抗体存在下，将抗原与缀合至标记的化合物的所关注的抗体一起孵育。
如本文所用，术语“包含未修饰的Fc区的相同抗体”是指缺乏所列氨基酸取代(例如，D265C、L234A、L235A和/或H435A)，但在其它方面与所比较的Fc修饰的抗体具有相同氨基酸序列的抗体。
术语“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”或“ADCC”是指一种细胞毒性形式，其中包含Fc结构域的多肽，例如抗体，结合至某些细胞毒性细胞(例如，主要是NK细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞)上存在的Fc受体(FcR)，并且使这些细胞毒性效应细胞能够特异性结合至带有抗原的“靶细胞”，随后用细胞毒素杀死靶细胞。(Hogarth等,Nature review DrugDiscovery 2012,11:313)预期除了抗体及其片段之外，具有特异性结合至带有抗原的靶细胞的能力的包含Fc结构域的其它多肽，例如Fc融合蛋白和Fc缀合物蛋白，将能够实现细胞介导的细胞毒性。
为简单起见，由包含Fc结构域的多肽的活性产生的细胞介导的细胞毒性在本文中也称作ADCC活性。可以测定本公开的任何特定多肽介导ADCC对靶细胞的溶解的能力。为了评估ADCC活性，将所关注的多肽(例如，抗体)与免疫效应细胞组合添加至靶细胞中，引起靶细胞的细胞溶解。细胞溶解一般通过从溶解的细胞中释放标记(例如，放射性底物、荧光染料或天然细胞内蛋白质)来检测。可用于此类测定的效应细胞包括外周血单核细胞(PBMC)和自然杀伤(NK)细胞。体外ADCC测定的具体实例描述于Bruggemann等,J.Exp.Med.166:1351(1987)；Wilkinson等,J.Immunol.Methods 258:183(2001)；Patel等,J.Immunol.Methods 184:29(1995)中。替代地或另外，可以在体内，例如在动物模型中评估所关注的抗体的ADCC活性，诸如Clynes等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95:652(1998)中所公开的动物模型。
如本文所用，术语“调理”和“调理中”是指患者准备接受移植物，例如含有造血干细胞的移植物的过程。此类程序促进了造血干细胞移植物的植入(例如，根据在调理程序和后续造血干细胞移植后从患者分离的血液样品内活的造血干细胞数量的持续增加推断出)。根据本文所描述的方法，可以通过向患者施用能够结合由造血干细胞表达的抗原，诸如CD45的ADC、抗体或其抗原结合部分来调理患者用于造血干细胞移植疗法。如本文所描述，抗体可以共价缀合至细胞毒素以形成ADC。向需要造血干细胞移植疗法的患者施用能够结合一种或多种前述抗原的ADC、抗体或其抗原结合部分可以促进造血干细胞移植物的植入，例如，通过选择性地使内源性造血干细胞耗竭，从而创造由外源性造血干细胞移植物填补的空缺。
如本文所用，术语“有效量”或“治疗有效量”是指足以达成所需结果或对自身免疫疾病或癌症有作用的量。
如本文所用，术语“半衰期”是指抗体药物在体内的血浆浓度降低一半或50％所需的时间。血清浓度的这种50％降低反映了药物循环量。
如本文所用，术语“人类抗体”旨在包括具有来源于人类种系免疫球蛋白序列的可变区和恒定区的抗体。人类抗体可以包括不是由人类种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或定点诱变或在基因重排期间或通过体内体细胞突变而引入的突变)。然而，如本文所用，术语“人类抗体”不旨在包括其中来源于另一哺乳动物物种，诸如小鼠的种系的CDR序列已经移植至人类框架序列上的抗体。人类抗体可以在人类细胞中(例如，通过重组表达)或由能够表达功能重排的人类免疫球蛋白(诸如重链和/或轻链)基因的非人类动物或原核或真核细胞产生。当人类抗体是单链抗体时，它可以包含天然人类抗体中未发现的连接子肽。举例来说，Fv可以含有连接重链可变区和轻链可变区的连接子肽，诸如两个至约八个甘氨酸或其它氨基酸残基。此类连接子肽视为人类来源的。人类抗体可以通过本领域中已知的多种方法制得，包括使用来源于人类免疫球蛋白序列的抗体文库的噬菌体展示方法。人类抗体也可以使用不能表达功能性内源性免疫球蛋白，但可以表达人类免疫球蛋白基因的转基因小鼠产生(参见例如PCT公布号WO 1998/24893；WO 1992/01047；WO 1996/34096；WO 1996/33735；美国专利号5,413,923；5,625,126；5,633,425；5,569,825；5,661,016；5,545,806；5,814,318；5,885,793；5,916,771；和5,939,598)。
“人源化”形式的非人类(例如，鼠类)抗体是含有来源于非人类免疫球蛋白的最小序列的嵌合免疫球蛋白。一般来说，人源化抗体将包含大体上全部的至少一个且通常两个可变结构域，其中全部或大体上全部的CDR区对应于非人类免疫球蛋白的那些并且全部或大体上全部的FR是人类免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体还可以包含免疫球蛋白恒定区(Fc)的至少一部分，通常是人类免疫球蛋白共有序列的。抗体人源化的方法在本领域中是已知的。参见例如Riechmann等,1988,Nature 332:323-7；美国专利号5,530,101；5,585,089；5,693,761；5,693,762；和6,180,370，Queen等；EP239400；PCT公布WO 91/09967；美国专利号5,225,539；EP592106；EP519596；Padlan,1991,Mol.Immunol.,28:489-498；Studnicka等,1994,Prot.Eng.7:805-814；Roguska等,1994,Proc.Natl.Acad.Sci.91:969-973；以及美国专利号5,565,332。
如本文所用，术语“植入潜力”用于指造血干细胞和祖细胞在组织中再植的能力，无论此类细胞是天然循环的还是通过移植提供的。这个术语涵盖围绕或促成植入的所有事件，诸如细胞的组织归巢和细胞在所关注的组织内的定植。可以使用本领域技术人员已知的任何临床上可接受的参数来评价或定量植入效率或植入率，并且可以包括例如竞争性再植单位(CRU)的评估；在干细胞已经归巢、定植或植入的一个或多个组织中掺入或表达标志物；或通过疾病进展、造血干细胞和祖细胞的存活或接受体的存活评价受试者的进展。还可以通过在移植后的时段期间测量外周血中的白血细胞计数来确定植入。还可以通过测量骨髓抽吸样品中供体细胞对骨髓细胞的恢复来评估植入。
如本文所用，术语“造血干细胞”(“HSC”)是指具有自我更新并分化成构成不同谱系的成熟血细胞的能力的未成熟血细胞，包括但不限于粒细胞(例如，早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如，网织红细胞、红细胞)、血栓细胞(例如，巨核细胞、产生血小板的巨核细胞、血小板)、单核细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如，NK细胞、B细胞和T细胞)。此类细胞可以包括CD34+细胞。CD34+细胞是表达CD34细胞表面标志物的未成熟细胞。在人类中，据信CD34+细胞包括具有上文所定义的干细胞特性的细胞亚群，而在小鼠中，HSC是CD34-。另外，HSC还指长期再植HSC(LT-HSC)和短期再植HSC(ST-HSC)。LT-HSC和ST-HSC是基于功能潜力和细胞表面标志物表达来区分。举例来说，人类HSC是CD34+、CD38-、CD45RA-、CD90+、CD49F+和lin-(对于成熟谱系标志物，包括CD2、CD3、CD4、CD7、CD8、CD10、CD11B、CD19、CD20、CD56、CD235A呈阴性)。在小鼠中，骨髓LT-HSC是CD34-、SCA-1+、C-kit+、CD135-、Slamfl/CD150+、CD48-和lin-(对于成熟谱系标志物，包括Ter119、CD11b、Gr1、CD3、CD4、CD8、B220、IL7ra呈阴性)，而ST-HSC是CD34+、SCA-1+、C-kit+、CD135-、Slamfl/CD150+和lin-(对于成熟谱系标志物，包括Ter119、CD11b、Gr1、CD3、CD4、CD8、B220、IL7ra呈阴性)。另外，在稳态条件下，ST-HSC比LT-HSC的静止性更弱并且增殖性更强。然而，LT-HSC具有更大的自我更新潜力(即，它们可以在整个成年期存活，并且可以通过继承的接受体连续移植)，而ST-HSC具有有限的自我更新(即，它们仅存活有限的时间段，并且不具备连续移植潜力)。这些HSC中的任一者可以用于本文所描述的方法中。ST-HSC特别有用，因为它们具有高度增殖性并且因此可以更快地产生分化的子代。
如本文所用，术语“造血干细胞功能潜力”是指造血干细胞的功能特性，包括1)多能性(指分化成多种不同血液谱系的能力，包括但不限于粒细胞(例如，早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如，网织红细胞、红细胞)、血栓细胞(例如，巨核细胞、产生血小板的巨核细胞、血小板)、单核细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如，NK细胞、T细胞和B细胞)，2)自我更新(指造血干细胞产生与母细胞具有同等潜力的子细胞的能力，并且进一步说明这种能力可以在个体一生中反复出现而不会耗尽)，以及3)造血干细胞或其子代再引入移植接受体中的能力，随之，它们归巢于造血干细胞生态位并重建生产性和持续性造血作用。
如本文所用，术语“供体嵌合”或“总供体嵌合”是指源自供体的细胞在同种异体造血干细胞移植的接受体(即，宿主)的淋巴造血系统中的百分比。举例来说，85％供体嵌合是指在同种异体造血干细胞移植后包含85％供体细胞的淋巴造血系统。在一些实施方案中，本文中的方法有效地在体内建立完全或接近完全的供体嵌合，例如，体内至少80％供体嵌合、至少85％供体嵌合、至少90％供体嵌合、至少95％供体嵌合、至少97％供体嵌合、至少99％供体嵌合或至少100％供体嵌合。还可能确定存在于各种造血亚组或谱系中的源自供体的细胞的百分比。举例来说，骨髓嵌合是指移植接受体中源自供体的骨髓细胞的百分比。举例说明，如果移植接受体在HSC移植后具有85％骨髓嵌合，那么受试者中85％的骨髓细胞来源于移植供体，并且15％来源于移植接受体。类似地，B细胞嵌合是指移植接受体中源自供体的B细胞的百分比。T细胞嵌合是指移植接受体中源自供体的T细胞的百分比。外周供体嵌合是指源自供体的外周血细胞的百分比。可以通过许多标准方法检测植入和嵌合程度(例如，宿主中供体干细胞的百分比)。可以确定宿主中供体标志物，诸如性染色体特异性标志物的存在，例如，使用标准细胞遗传学分析、使用适当引物的聚合酶链反应(PCR)、可变数目串联重复-PCR(VNTR-PCR)、微卫星标志物或其它指纹技术，或荧光原位杂交(FISH)。也可以通过使用例如标准补体依赖性微细胞毒性测试确定宿主血液中供体型细胞的百分比来确定宿主-供体嵌合。
如本文所用，在造血干细胞移植的情形中，术语“错配”(例如，“MHC-错配”、“HLA-错配”或“miHA-错配”)是指相对于接受体表达的抗原的变体，同种异体细胞(或组织或器官)(例如，供体细胞)上至少一种不相似(例如，不相同)的细胞表面抗原的存在。在一些实施方案中，同种异体移植物可以含有相对于移植接受体的“次要错配”。此类“次要错配”包括除MHC抗原或HLA抗原以外的细胞表面抗原的个别差异。次要错配包括次要组织相容性抗原的差异。在一些实施方案中，同种异体移植物可以含有相对于移植接受体的“主要错配”。此类“主要错配”是指移植物与接受体之间MHC单倍型或HLA单倍型的差异。在一个示例性实施方案中，同种异体移植物可以与移植接受体共享相同的MHC或HLA单倍型，但可以含有一个或多个次要错配(本文中也称作“次要错配同种异体移植”)。在另一个示例性实施方案中，同种异体移植物可以含有单独或除一个或多个次要错配之外的一个或多个主要错配。“完全错配”同种异体移植物是指含有一个或多个主要错配和一个或多个次要错配的同种异体移植物。主要和/或次要错配的存在可以通过本领域中使用的标准测定来确定，诸如血清学、基因组或分子分析。在一些实施方案中，至少一种主要组织相容性复合物抗原相对于接受体表达的等位基因是错配的。替代地或另外，至少一种次要组织相容性抗原相对于接受体表达的等位基因是错配的。
如本文所用，术语“受试者”和“患者”是指接受针对本文所描述的特定疾病或疾患的治疗的生物体，诸如人类。举例来说，患者，诸如人类患者，可以在造血干细胞移植疗法之前接受治疗，以促进外源性造血干细胞的植入。
如本文所用，术语“供体”是指在向接受体施用细胞或其子代之前分离出一种或多种细胞的人类或动物。一种或多种细胞可以是例如造血干细胞群体。
如本文所用，术语“接受体”是指接受移植物，诸如含有造血干细胞群体的移植物的患者。向接受体施用的移植细胞可以是例如自体、同基因或同种异体细胞。
如本文所用，术语“内源性”描述天然存在于特定生物体，诸如人类患者中的物质，诸如分子、细胞、组织或器官(例如，造血干细胞或造血谱系的细胞，诸如巨核细胞、血栓细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成髓细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞或B淋巴细胞)。
如本文所用，术语“样品”是指取自受试者的样本(例如，血液、血液组分(例如，血清或血浆)、尿液、唾液、羊水、脑脊液、组织(例如，胎盘或真皮)、胰液、绒毛膜绒毛样品和细胞)。
如本文所用，术语“scFv”是指单链Fv抗体，其中来自抗体的重链和轻链的可变结构域已经连接形成一条链。scFv片段含有单个多肽链，所述多肽链包括通过连接子隔开的抗体轻链可变区(VL)(例如，CDR-L1、CDR-L2和/或CDR-L3)和抗体重链可变区(VH)(例如，CDR-H1、CDR-H2和/或CDR-H3)。连接scFv片段的VL和VH区的连接子可以是由蛋白质氨基酸组成的肽连接子。可以使用替代性连接子以增加scFv片段对蛋白水解降解的抗性(例如，含有D-氨基酸的连接子)，以增强scFv片段的溶解度(例如，亲水性连接子，诸如含有聚乙二醇的连接子或含有重复甘氨酸和丝氨酸残基的多肽)，以改善分子的生物物理稳定性(例如，含有形成分子内或分子间二硫键的半胱氨酸残基的连接子)，或者以减弱scFv片段的免疫原性(例如，含有糖基化位点的连接子)。本领域普通技术人员还将了解，本文所描述的scFv分子的可变区可以被修饰，使得它们的氨基酸序列与它们所源自的抗体分子不同。举例来说，可以进行引起氨基酸残基的保守取代或改变的核苷酸或氨基酸取代(例如，在CDR和/或框架残基中)，以保留或增强scFv结合至由相应抗体识别的抗原的能力。
如本文所用，短语“大体上从血液中清除”是指在向患者施用治疗剂(诸如抗CD45抗体或其抗原结合部分)之后的时间点，此时从患者分离的血液样品中治疗剂的浓度使得治疗剂通过常规方式不可检测(例如，使得治疗剂在用于检测治疗剂的装置或测定的噪声阈值以上不可检测)。本领域中已知的多种技术可以用于检测抗体、抗体片段和蛋白质配体，诸如本领域中已知或本文所描述的基于ELISA的检测测定。可以用于检测抗体或抗体片段的额外测定包括免疫沉淀技术和免疫印迹测定，以及本领域中已知的其它测定。
如本文所用，术语“转染”是指通常用于将外源性DNA引入原核或真核宿主细胞中的多种技术中的任一者，诸如电穿孔、脂转染、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。
如本文所用，“用以治疗”或“治疗”是指降低疾病症状的严重度和/或频率，消除疾病症状和/或所述症状的基本病因，降低疾病症状和/或它们的基本病因的频率或可能性，以及改善或补救由疾病直接或间接引起的损害，对疾病的任何后果的任何改善，诸如延长生存期、降低发病率和/或减少作为替代性治疗模态的副产物的副作用；如本领域中容易理解，完全根除疾病是优选的，但不是治疗行为的必要条件。有益的或期望的临床结果包括但不限于在本文所描述的抗体调理疗法和后续造血干细胞移植疗法后促进外源性造血细胞在患者中的植入。额外的有益结果包括在调理疗法以及向患者后续施用外源性造血干细胞移植物后，需要造血干细胞移植的患者中造血干细胞的细胞计数或相对浓度增加。本文所描述的疗法的有益结果还可以包括在调理疗法和后续造血干细胞移植疗法后，一种或多种造血谱系细胞，诸如巨核细胞、血栓细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成髓细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞或B淋巴细胞的细胞计数或相对浓度增加。额外的有益结果可以包括致病细胞群体，诸如癌细胞(例如，CD45+白血病细胞)或自身免疫细胞(例如，CD45+自身免疫淋巴细胞，诸如表达与自身抗原发生交叉反应的T细胞受体的CD45+T细胞)群体的数量减少。就本公开的方法针对预防疾病来说，应了解，术语“预防”并不要求完全阻止疾病状态。相反，如本文所用，术语预防是指技术人员鉴定易患病症的群体的能力，使得本公开的化合物的施用可以在疾病发作之前发生。这个术语并不暗示着完全避免疾病状态。
如本文所用，“需要”造血干细胞移植的患者包括在一种或多种血细胞类型中展现出缺陷或不足的患者，以及患有干细胞病症、自身免疫疾病、癌症或本文所描述的其它病态的患者。造血干细胞一般展现出1)多能性，并且因此可以分化成多种不同血液谱系，包括但不限于粒细胞(例如，早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如，网织红细胞、红细胞)、血栓细胞(例如，巨核细胞、产生血小板的巨核细胞、血小板)、单核细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如，NK细胞、B细胞和T细胞)，2)自我更新，并且因此可以产生与母细胞具有同等潜力的子细胞，以及3)再引入移植接受体中的能力，随之，它们归巢于造血干细胞生态位并重建生产性和持续性造血作用。因此可以向造血谱系的一种或多种细胞类型有缺陷或不足的患者施用造血干细胞以在体内重构缺陷或不足的细胞群体。举例来说，患者可能罹患癌症，并且缺陷可能是由于施用选择性地或非特异性地使癌细胞群体耗竭的化疗剂或其它药物所致。另外或替代地，患者可能罹患血红蛋白病(例如，非恶性血红蛋白病)，诸如镰状细胞性贫血、地中海贫血、范可尼贫血(Fanconi anemia)、再生障碍性贫血和威-奥二氏综合征(Wiskott-Aldrich syndrome)。受试者可以是罹患腺苷脱氨酶严重联合免疫缺陷病(ADA SCID)、HIV/AIDS、异染性脑白质营养不良、戴-布二氏贫血(Diamond-Blackfan anemia)和施-戴二氏综合征(Schwachman-Diamond syndrome)的受试者。受试者可能患有遗传性血液病症(例如，镰状细胞性贫血)或自身免疫病症或受其影响。另外或替代地，受试者可能患有恶性病，诸如成神经细胞瘤或血液癌症或受其影响。举例来说，受试者可能患有白血病、淋巴瘤或骨髓瘤。在一些实施方案中，受试者患有急性髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴性白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma)。在一些实施方案中，受试者患有骨髓增生异常综合征。在一些实施方案中，受试者患有自身免疫疾病，诸如硬皮病、多发性硬化症、溃疡性结肠炎、克罗恩氏病(Crohn's disease)、1型糖尿病或本文所描述的另一种自身免疫病态。在一些实施方案中，受试者需要嵌合抗原受体T细胞(CART)疗法。在一些实施方案中，受试者患有代谢贮积症或以其它方式受代谢贮积症影响。受试者可能罹患代谢病症或以其它方式受代谢病症影响，所述代谢病症选自由以下组成的组：糖原贮积病、粘多糖贮积症、高歇氏病(Gaucher'sDisease)、赫尔勒氏病(Hurlers Disease)、鞘脂贮积症、异染性脑白质营养不良，或可能受益于本文所公开的治疗和疗法的任何其它疾病或病症并且包括但不限于严重联合免疫缺陷病、威-奥二氏综合征、高免疫球蛋白M(IgM)综合征、切-希二氏病(Chediak-Higashidisease)、遗传性淋巴组织细胞增多症、骨硬化症、成骨不全症、贮积病、重型地中海贫血、镰状细胞病、全身性硬化症、全身性红斑狼疮、多发性硬化症、幼年类风湿性关节炎和"BoneMarrow Transplantation for Non-Malignant Disease,"ASH Education Book,1:319-338(2000)中所描述的那些疾病或病症，所述文献关于可以通过施用造血干细胞移植疗法治疗的病态的公开内容以全文引用的方式并入本文中。另外或替代地，“需要”造血干细胞移植的患者可能罹患或未罹患前述病态之一，但仍然展现出造血谱系内的一种或多种内源性细胞类型，诸如巨核细胞、血栓细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成肌细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞的水平降低(例如，与其它方面健康的受试者相比)。本领域技术人员可以容易地确定一种或多种前述细胞类型或其它血细胞类型的水平相对于其它方面健康的受试者是否降低，例如，通过流式细胞术和荧光激活细胞分选(FACS)方法以及本领域中已知的其它程序。
在一些实施方案中，本发明的方法在不使用免疫抑制剂治疗的情况下进行。如本文所用，术语“免疫抑制剂”或“免疫抑制药”是指起作用以抑制或掩蔽造血移植接受体的免疫系统的物质。这将包括抑制细胞因子产生、下调或抑制自身抗原表达或掩蔽MHC抗原的物质。此类药剂的实例包括钙调神经磷酸酶(calcineurin)/MTOR抑制剂(例如，他克莫司(tacrolimus)、西罗莫司(sirolimus)、雷帕霉素(rapamycin)、环孢素(ciclosporin)、依维莫司(everolimus))、共刺激阻断分子(例如，CTLA4-Ig、抗CD40L)、NK耗竭剂、抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、烷化剂(例如氮芥，例如环磷酰胺；亚硝基脲(例如，卡莫司汀(carmustine))；铂化合物)、甲氨蝶呤(methotrexate)、抗TCR剂(例如，莫罗单抗-CD3(muromonab-CD3))、抗CD20抗体(例如，利妥昔单抗(rituximab)、奥瑞珠单抗(ocrelizumab)、奥法木单抗(ofatumumab)和维妥珠单抗(veltuzumab))、氟达拉滨(fludarabine)、坎帕斯(Campath)(阿仑单抗(alemtuzumab))、2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶(参见上文美国专利号4,665,077，其公开内容以引用的方式并入本文中)、硫唑嘌呤(azathioprine)(或环磷酰胺，如果对硫唑嘌呤有不良反应)；溴隐亭(bromocryptine)；戊二醛(其掩蔽MHC抗原，如上文美国专利号4,120,649所述)；MHC抗原的抗独特型抗体；环孢素A；一种或多种类固醇，例如皮质类固醇，例如糖皮质类固醇，诸如强的松(prednisone)、甲基强的松龙(methylprednisolone)、氢化可的松(hydrocortisone)和地塞米松(dexamethasone)；抗干扰素-γ抗体；抗肿瘤坏死因子-α抗体；抗肿瘤坏死因子-β抗体；抗白细胞介素-2抗体；抗细胞因子受体抗体，诸如抗IL-2受体抗体；异源性抗淋巴细胞球蛋白；泛T抗体，例如，OKT-3单克隆抗体；针对CD4的抗体；针对CD8的抗体、针对CD45的抗体(例如，30-F11、YTH24.5和/或YTH54.12(例如，YTH24.5和YTH54.12的组合))；链激酶(streptokinase)；链道酶(streptodornase)；或来自宿主的RNA或DNA。额外的免疫抑制剂包括但不限于全身照射(TBI)、低剂量TBI和/或癌得星(Cytoxan)。
在一些实施方案中，本发明的方法在不使用免疫抑制剂同时或大体上同时治疗的情况下进行。举例来说，在一些实施方案中，接受偶联至本文所提供的毒素的CD45靶向部分的受试者不同时接受免疫抑制剂治疗。在一些实施方案中，受试者在施用CD45靶向部分时不经历免疫抑制剂治疗作用。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前至少3天、至少7天、至少14天、至少21天、至少28天、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月或至少12个月不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间后至少3天、至少7天、至少14天、至少21天、至少28天、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月或至少12个月不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前1天与后1天之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前3天与后3天之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前7天与后7天之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前14天与后14天之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前21天与后21天之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前28天与后28天之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前1个月与后1个月之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前2个月与后2个月之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前6个月与后6个月之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前8个月与后8个月之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前10个月与后10个月之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前1年与后1年之间不向受试者施用免疫抑制剂。
如本文所用，术语“变体”和“衍生物”可互换使用，并且是指本文所描述的化合物、肽、蛋白质或其它物质的天然存在的、合成的和半合成的类似物。本文所描述的化合物、肽、蛋白质或其它物质的变体或衍生物可以保留或改善原始材料的生物活性。
如本文所用，短语“干细胞病症”泛指可以通过调理受试者的靶组织和/或通过消融靶组织中的内源性干细胞群体(例如，从受试者的骨髓组织消融内源性造血干细胞或祖细胞群体)和/或通过在受试者的靶组织中植入或移植干细胞而治疗或治愈的任何疾病、病症或疾患。举例来说，已经显示I型糖尿病可以通过造血干细胞移植而治愈，并且可以受益于根据本文所描述的组合物和方法进行的调理。可以使用本文所描述的组合物和方法治疗的额外病症包括但不限于镰状细胞性贫血、地中海贫血、范可尼贫血、再生障碍性贫血、威-奥二氏综合征、ADA SCID、HIV/AIDS、异染性脑白质营养不良、戴-布二氏贫血和施-戴二氏综合征。可以使用本文所描述的患者调理和/或造血干细胞移植方法治疗的额外疾病包括遗传性血液病症(例如，镰状细胞性贫血)和自身免疫病症，诸如硬皮病、多发性硬化症、溃疡性结肠炎和克罗恩氏病。可以使用本文所描述的调理和/或移植方法治疗的额外疾病包括恶性病，诸如成神经细胞瘤或血液癌症，诸如白血病、淋巴瘤和骨髓瘤。举例来说，癌症可以是急性髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴性白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤或非霍奇金氏淋巴瘤。使用本文所描述的调理和/或移植方法可治疗的额外疾病包括骨髓增生异常综合征。在一些实施方案中，受试者患有代谢贮积症或以其它方式受代谢贮积症影响。举例来说，受试者可能罹患代谢病症或以其它方式受代谢病症影响，所述代谢病症选自由以下组成的组：糖原贮积病、粘多糖贮积症、高歇氏病、赫尔勒氏病、鞘脂贮积症、异染性脑白质营养不良，或可能受益于本文所公开的治疗和疗法的任何其它疾病或病症并且包括但不限于严重联合免疫缺陷病、威-奥二氏综合征、高免疫球蛋白M(IgM)综合征、切-希二氏病、遗传性淋巴组织细胞增多症、骨硬化症、成骨不全症、贮积病、重型地中海贫血、镰状细胞病、全身性硬化症、全身性红斑狼疮、多发性硬化症、幼年类风湿性关节炎和"Bone Marrow Transplantation for Non-Malignant Disease,"ASHEducation Book,1:319-338(2000)中所描述的那些疾病或病症，所述文献关于可以通过施用造血干细胞移植疗法治疗的病态的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
如本文所用，术语“载体”包括核酸载体，诸如质粒、DNA载体、质粒、RNA载体、病毒或其它适合的复制子。本文所描述的表达载体可以含有多核苷酸序列以及例如用于表达蛋白质和/或将这些多核苷酸序列整合至哺乳动物细胞基因组中的额外序列元件。可以用于表达本公开的抗体和抗体片段的某些载体包括含有调控序列的质粒，诸如指导基因转录的启动子和增强子区域。用于表达抗体和抗体片段的其它有用载体含有多核苷酸序列，这些多核苷酸序列增强这些基因的翻译速率或改善由基因转录产生的mRNA的稳定性或核输出。这些序列元件可以包括例如5'和3'非翻译区和多腺苷酸化信号位点，以指导表达载体上携带的基因的有效转录。本文所描述的表达载体还可以含有编码用于选择含有此种载体的细胞的标志物的多核苷酸。适合的标志物的实例包括编码抗生素抗性的基因，诸如氨苄青霉素(ampicillin)、氯霉素(chloramphenicol)、卡那霉素(kanamycin)和诺尔丝菌素(nourseothricin)。
如本文所用，术语“缀合物”或“抗体药物缀合物”或“ADC”是指连接至细胞毒素的抗体。ADC通过一个分子(诸如抗体或其抗原结合片段)的反应性官能团与另一个分子(诸如本文所描述的细胞毒素)的适当反应性官能团的化学键结形成。缀合物可以包括在彼此结合的两个分子之间，例如在抗体与细胞毒素之间的连接子。可以用于形成缀合物的连接子的实例包括含有肽的连接子，诸如含有天然存在或非天然存在的氨基酸，诸如D-氨基酸的那些。可以使用本文所描述和本领域中已知的多种策略来制备连接子。取决于其中的反应性组分，连接子可以裂解，例如，通过酶促水解、光解、在酸性条件下水解、在碱性条件下水解、氧化、二硫化物还原、亲核裂解或有机金属裂解(参见例如Leriche等,Bioorg.Med.Chem.,20:571-582,2012)。
如本文所用，术语“微管结合剂”是指通过破坏对于细胞中的有丝分裂和间期细胞功能必不可少的微管网络而起作用的化合物。微管结合剂的实例包括但不限于美登素(maytasine)、类美登素(maytansinoid)及其衍生物，诸如本文所描述或本领域中已知的那些；长春花生物碱，诸如长春碱(vinblastine)、硫酸长春碱(vinblastine sulfate)、长春新碱(vincristine)、硫酸长春新碱(vincristine sulfate)、长春地辛(vindesine)和长春瑞滨(vinorelbine)；紫杉烷，诸如多烯紫杉醇(docetaxel)和太平洋紫杉醇(paclitaxel)；大环内酯，诸如圆皮海绵内酯(discodermolide)、秋水仙素(cochicine)和埃坡霉素(epothilone)及其衍生物，诸如埃坡霉素B或其衍生物。
如本文所用，术语“鹅膏毒素”是指由毒鹅膏菌(Amanita phalloides)产生的鹅膏毒素肽家族的成员或其变体或衍生物，诸如能够抑制RNA聚合酶II活性的变体或衍生物。可用于与本文所描述的组合物和方法联合的鹅膏毒素包括化合物，诸如但不限于式(III)、(IIIA)、(IIIB)和(IIIC)的化合物，各自如下文所描述(例如，α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素、鹅膏酰胺、鹅膏无毒环肽、鹅膏蕈酸或鹅膏无毒环肽原)。如本文所描述，鹅膏毒素可以缀合至抗体或其抗原结合部分，例如，通过连接子部分(L)(由此形成ADC)。下文描述了鹅膏毒素缀合的示例性方法和可用于此类过程的连接子。本文还描述了根据组合物和方法可用于缀合至抗体或抗原结合部分的示例性的含有连接子的鹅膏毒素。
如本文所用，术语“酰基”是指-C(＝O)R，其中如本文所定义，R是如本文所定义的氢(“醛”)、烷基、烯基、炔基、碳环基、芳基、杂芳基或杂环基。非限制性实例包括甲酰基、乙酰基、丙酰基、苄酰基和丙烯酰基。
如本文所用，术语“烷基”是指在链中具有例如1个至20个碳原子的直链或支链烷基。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、异戊基、叔戊基、己基、异己基等。
如本文所用，术语“亚烷基”是指直链或支链二价烷基。二价位置可以在烷基链内的相同或不同原子上。亚烷基的实例包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基等。
如本文所用，术语“杂烷基”是指在链中具有例如1个至20个碳原子并且在链中进一步含有一个或多个杂原子(例如，氧、氮或硫等)的直链或支链烷基。
如本文所用，术语“亚杂烷基”是指直链或支链二价杂烷基。二价位置可以在杂烷基链内的相同或不同原子上。二价位置可以是一个或多个杂原子。
如本文所用，术语“烯基”是指在链中具有例如2个至20个碳原子的直链或支链烯基。烯基的实例包括乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、叔丁烯基、己烯基等。
如本文所用，术语“亚烯基”是指直链或支链二价烯基。二价位置可以在烯基链内的相同或不同原子上。亚烯基的实例包括亚乙烯基、亚丙烯基、亚异丙烯基、亚丁烯基等。
如本文所用，术语“杂烯基”是指在链中具有例如2个至20个碳原子并且在链中进一步含有一个或多个杂原子(例如，氧、氮或硫等)的直链或支链烯基。
如本文所用，术语“亚杂烯基”是指直链或支链二价杂烯基。二价位置可以在杂烯基链内的相同或不同原子上。二价位置可以是一个或多个杂原子。
如本文所用，术语“炔基”是指在链中具有例如2个至20个碳原子的直链或支链炔基。炔基的实例包括炔丙基、丁炔基、戊炔基、己炔基等。
如本文所用，术语“亚炔基”是指直链或支链二价炔基。二价位置可以在炔基链内的相同或不同原子上。
如本文所用，术语“杂炔基”是指在链中具有例如2个至20个碳原子并且在链中进一步含有一个或多个杂原子(例如，氧、氮或硫等)的直链或支链炔基。
如本文所用，术语“亚杂炔基”是指直链或支链二价杂炔基。二价位置可以在杂炔基链内的相同或不同原子上。二价位置可以是一个或多个杂原子。
如本文所用，术语“环烷基”是指饱和的并且具有例如3个至12个碳环原子的单环或稠合、桥接或螺多环结构。环烷基的实例包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、双环[3.1.0]己烷等。
如本文所用，术语“亚环烷基”是指二价环烷基。二价位置可以在环结构内的相同或不同原子上。亚环烷基的实例包括亚环丙基、亚环丁基、亚环戊基、亚环己基等。
如本文所用，术语“杂环烷基”是指饱和的并且每个环结构具有例如3个至12个环原子的单环或稠合、桥接或螺多环结构，所述环原子选自碳原子和选自例如氮、氧和硫等的杂原子。环结构可以在碳、氮或硫环成员上含有例如一个或多个氧代基团。杂环烷基的实例包括例如并且不限于二氢吡啶基、四氢吡啶基(哌啶基)、四氢噻吩基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、2-吡咯烷酮基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、双-四氢吡喃基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、八氢异喹啉基、哌嗪基、奎宁环基和吗啉基。
如本文所用，术语“亚杂环烷基”是指二价杂环烷基。二价位置可以在环结构内的相同或不同原子上。
如本文所用，术语“芳基”是指含有例如6个至19个碳原子的单环或多环芳香族环系统。芳基包括但不限于苯基、芴基、萘基等。二价位置可以是一个或多个杂原子。
如本文所用，术语“亚芳基”是指二价芳基。二价位置可以在相同或不同原子上。
如本文所用，“杂芳烷基”是指其中键结至碳原子(通常是末端或sp3碳原子)的一个氢原子被杂芳基置换的非环状烷基。典型的杂芳基烷基包括但不限于2-苯并咪唑基甲基、2-呋喃基乙基等。杂芳基烷基包含6个至20个碳原子，例如，杂芳基烷基的烷基部分(包括烷基、烯基或炔基)是1个至6个碳原子并且杂芳基部分是5个至14个碳原子和1个至3个选自N、O、P和S的杂原子。杂芳基烷基的杂芳基部分可以是具有3个至7个环成员(2个至6个碳原子)的单环或具有7个至10个环成员(4个至9个碳原子和1个至3个选自N、O、P和S的杂原子)的双环，例如：双环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统。
如本文所用，术语“杂环烷基”是指饱和的并且每个环结构具有例如3个至12个环原子的单环或稠合、桥接或螺多环结构，所述环原子选自碳原子和选自例如氮、氧和硫等的杂原子。环结构可以在碳、氮或硫环成员上含有例如一个或多个氧代基团。杂环烷基的实例包括例如并且不限于二氢吡啶基、四氢吡啶基(哌啶基)、四氢噻吩基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、2-吡咯烷酮基、四氢呋喃基、四氢吡喃基、双-四氢吡喃基、四氢喹啉基、四氢异喹啉基、十氢喹啉基、八氢异喹啉基、哌嗪基、奎宁环基和吗啉基。
如本文所用，术语“亚杂环烷基”是指二价杂环烷基。二价位置可以在环结构内的相同或不同原子上。
如本文所用，术语“芳基”是指含有例如6个至19个碳原子的单环或多环芳香族环系统。芳基包括但不限于苯基、芴基、萘基等。二价位置可以是一个或多个杂原子。
如本文所用，术语“亚芳基”是指二价芳基。二价位置可以在相同或不同原子上。
如本文所用，术语“杂芳基”是指单环杂芳香族或双环或三环稠环杂芳香族基团，其中一个或多个环原子是杂原子，例如氮、氧或硫。杂芳基包括吡啶基、吡咯基、呋喃基、噻吩基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、异噻唑基、吡唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、1,3,4-三嗪基、1,2,3-三嗪基、苯并呋喃基、[2,3-二氢]苯并呋喃基、异苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并三唑基、异苯并噻吩基、吲哚基、异吲哚基、3H-吲哚基、苯并咪唑基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹嗪基、喹唑啉基、酞嗪基、喹喔啉基、噌啉基、萘啶基、吡啶并[3,4-b]吡啶基、吡啶并[3,2-b]吡啶基、吡啶并[4,3-b]吡啶基、喹啉基、异喹啉基、四唑基、5,6,7,8-四氢喹啉基、5,6,7,8-四氢异喹啉基、嘌呤基、蝶啶基、咔唑基、呫吨基、苯并喹啉基等。
如本文所用，术语“亚杂芳基”是指二价杂芳基。二价位置可以在相同或不同原子上。二价位置可以是一个或多个杂原子。
杂芳基和杂环烷基描述于Paquette,Leo A.；"Principles of ModernHeterocyclic Chemistry"(W.A.Benjamin,New York,1968)，特别是第1、3、4、6、7和9章；"The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series of Monographs"(John Wiley&Sons,New York,1950年至今)，特别是第13、14、16、19和28卷；和J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566中。
举例来说并且不受限制，碳键结的杂芳基和杂环烷基键结在吡啶的位置2、3、4、5或6；哒嗪的位置3、4、5或6；嘧啶的位置2、4、5或6；吡嗪的位置2、3、5或6；呋喃、四氢呋喃、硫代呋喃、噻吩、吡咯或四氢吡咯的位置2、3、4或5；噁唑、咪唑或噻唑的位置2、4或5；异噁唑、吡唑或异噻唑的位置3、4或5；氮杂环丙烷的位置2或3；氮杂环丁烷的位置2、3或4；喹啉的位置2、3、4、5、6、7或8；或异喹啉的位置1、3、4、5、6、7或8。进一步更典型地，碳键结的杂环包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-哒嗪基、4-哒嗪基、5-哒嗪基、6-哒嗪基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基。
举例来说并且不受限制，氮键结的杂芳基和杂环烷基键结在氮杂环丙烷、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑的位置1；异吲哚或异吲哚啉的位置2；吗啉的位置4；以及咔唑或β-咔啉的位置9。进一步更典型地，氮键结的杂环包括1-氮杂环丙烷基、1-氮杂环丁烷基、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基和1-哌啶基。
除非个别取代基的定义另有限制，否则前述化学部分，诸如“烷基”、“亚烷基”、“杂烷基”、“亚杂烷基”、“烯基”、“亚烯基”、“杂烯基”、“亚杂烯基”，“炔基”、“亚炔基”、“杂炔基”、“亚杂炔基”、“环烷基”、“亚环烷基”、“杂环烷基”、“亚杂环烷基”、“芳基”、“亚芳基”、“杂芳基”和“亚杂芳基”基团可以任选地被例如1个至5个选自由以下组成的组的取代基取代：烷基、烯基、炔基、环烷基、杂环烷基、烷基芳基、烷基杂芳基、烷基环烷基、烷基杂环烷基、氨基、铵、酰基、酰氧基、酰基氨基、氨基羰基、烷氧基羰基、脲基、氨基甲酸酯、芳基、杂芳基、亚磺酰基、磺酰基、烷氧基、硫烷基、卤素、羧基、三卤甲基、氰基、羟基、巯基、硝基等。典型的取代基包括但不限于-X、-R、-OH、-OR、-SH、-SR、NH2、-NHR、-N(R)2、-N+(R)3、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-NCO、-NCS、-NO、-NO2、-N3、-NC(＝O)H、-NC(＝O)R、-C(＝O)H、-C(＝O)R、-C(＝O)NH2、-C(＝O)N(R)2、-SO3-、-SO3H、-S(＝O)2R、-OS(＝O)2OR、-S(＝O)2NH2、-S(＝O)2N(R)2、-S(＝O)R、-OP(＝O)(OH)2、-OP(＝O)(OR)2、-P(＝O)(OR)2、-PO3、-PO3H2、-C(＝O)X、-C(＝S)R、-CO2H、-CO2R、-CO2-、-C(＝S)OR、-C(＝O)SR、-C(＝S)SR、-C(＝O)NH2、-C(＝O)N(R)2、-C(＝S)NH2、-C(＝S)N(R)2、-C(＝NH)NH2和-C(＝NR)N(R)2；其中每个X在每次出现时独立地选自F、Cl、Br和I；并且每个R在每次出现时独立地选自烷基、芳基、杂环烷基或杂芳基、保护基和前药部分。当基团描述为“任选取代”时，那个基团可以在每次出现时独立地被一个或多个上述取代基取代。取代可以包括相邻取代基已经经历闭环的情况，诸如邻位功能性取代基的闭环，以形成例如通过闭环形成的内酰胺、内酯、环酐、缩醛、半缩醛、硫代缩醛、缩醛胺和半缩醛胺，例如，以提供保护基。
应了解，某些基团命名约定可以包括单基团或双基团，这取决于上下文。举例来说，在取代基需要两个与分子其余部分的连接点的情况下，应了解，这个取代基是双基团。举例来说，鉴定为需要两个连接点的烷基的取代基包括双基团，诸如-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-等。其它基团命名约定清楚地指示基团是双基团，诸如“亚烷基”、“亚烯基”、“亚芳基”、“亚杂环烷基”等。
如本文所用，术语“偶联反应”是指化学反应，其中适合于彼此反应的两个或更多个取代基反应以形成化学部分，这个化学部分连接(例如共价)结合至每个取代基的分子片段。偶联反应包括其中结合至作为细胞毒素(诸如本领域中已知或本文所描述的细胞毒素)的片段的反应性取代基与结合至作为抗体或其抗原结合部分(诸如本领域中已知或本文所描述的对CD45具有特异性的抗体或其抗原结合部分)的片段的适合反应性取代基反应的那些反应。适合反应性取代基的实例包括亲核体/亲电体对(例如，硫醇/卤烷基对、胺/羰基对或硫醇/α,β-不饱和羰基对等)、二烯/亲二烯体对(例如，叠氮化物/炔烃对等)，等等。偶联反应包括但不限于硫醇烷基化、羟基烷基化、胺烷基化、胺缩合、酰胺化、酯化、二硫化物形成、环加成(例如，[4+2]狄尔斯-阿尔德环加成(Diels-Alder cycloaddition)、[3+2]胡伊斯根环加成(Huisgen cycloaddition)等)、亲核芳香族取代、亲电芳香族取代和本领域中已知或本文所描述的其它反应模态。
如本文所用，“CRU(竞争性再植单位)”是指可以在体内移植后检测的长期植入干细胞的计量单位。
如本文所用，“药物与抗体的比率”或“DAR”是指连接至ADC抗体的细胞毒素(例如，鹅膏毒素)的数量。ADC的DAR可以在1至8的范围内，不过取决于抗体上连接位点的数量，也可能有更高的负载。因此，在某些实施方案中，本文所描述的ADC具有1、2、3、4、5、6、7或8的DAR。
在取代基描绘为双基团(即，具有与分子其余部分的两个连接点)的任何情况下，应了解，除非另有指示，否则取代基可以按任何方向构型连接。
治疗方法
本文公开了通过施用可以偶联至毒素的CD45靶向部分使需要同种异体移植，例如同种异体造血干细胞(HSC)移植的患者中的CD45+细胞群体耗竭的方法。在一些实施方案中，CD45靶向部分可以是抗CD45抗体或其抗原结合片段或部分，或靶向CD45的抗体-药物缀合物(ADC)。
在一些方面，本文提供了能够在同种异体造血干细胞(HSC)移植，包括完全错配HSC移植后达成显著供体嵌合的单剂调理方案。在示例性实施方案中，在不存在额外的调理剂，诸如免疫抑制剂的情况下，向需要HSC移植的受试者施用CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体药物缀合物(ADC))。CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)可以按足以实现完全或接近完全供体嵌合的量向受试者施用，而不需要与免疫抑制剂，诸如低剂量全身照射，或清髓剂，诸如抗CD4或抗CD8抗体治疗同时或大体上同时。
因此，本文提供了使需要造血干细胞移植的患者中的CD45+细胞群体耗竭的方法，所述方法包括在接受移植前向患者施用有效量的CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)。在一些实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)在不存在其它调理剂的情况下作为单剂施用。在一些实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)作为单一疗法施用。在一些实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45ADC)在不存在免疫抑制剂的情况下施用。在一些实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)在不使用免疫抑制剂先前或同时治疗患者的情况下施用。在一些实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)在不使用全身照射，包括低剂量TBI先前或同时治疗患者的情况下施用。低剂量TBI包括非清髓剂量的TBI。在一些实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)在不使用抗CD4抗体先前或同时治疗患者的情况下施用。在一些实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)在不使用抗CD8抗体先前或同时治疗患者的情况下施用。
在一些实施方案中，方法在不使用免疫抑制剂同时或大体上同时治疗的情况下进行。举例来说，在一些实施方案中，接受偶联至本文所提供的毒素的CD45靶向部分的受试者不同时接受免疫抑制剂治疗。在一些实施方案中，受试者在施用CD45靶向部分时不经历免疫抑制剂治疗作用。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前至少3天、至少7天、至少14天、至少21天、至少28天、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月或至少12个月不向受试者施用免疫抑制剂。另外或替代地，在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间后至少3天、至少7天、至少14天、至少21天、至少28天、至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月、至少6个月、至少7个月、至少8个月、至少9个月、至少10个月、至少11个月或至少12个月不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前1天与后1天之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前3天与后3天之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前7天与后7天之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前14天与后14天之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前21天与后21天之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前28天与后28天之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前1个月与后1个月之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前2个月与后2个月之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前6个月与后6个月之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前8个月与后8个月之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前10个月与后10个月之间不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前1年与后1年之间不向受试者施用免疫抑制剂。
在一些实施方案中，移植是次要错配同种异体移植。在一些实施方案中，移植是主要错配同种异体移植。在一些实施方案中，移植是完全错配同种异体移植。
本文还提供了增加接受体受试者中同种异体细胞的植入水平的方法。本文所提供的方法可以用于治疗与同种异体移植相关的多种病症，诸如造血谱系中的细胞类型的疾病、癌症、自身免疫疾病、代谢病症、移植物抗宿主病、宿主抗移植物排斥和干细胞病症等。本文所描述的组合物和方法可以(i)直接使引起病态的细胞群体，诸如癌细胞(例如，白血病细胞)和自身免疫细胞(例如，自身反应性T细胞)群体耗竭，和/或(ii)可以使内源性造血干细胞群体耗竭，从而通过提供移植的细胞可以归巢的生态位来促进移植的造血干细胞的植入。需要移植，例如HSC移植的受试者中内源性造血细胞的耗竭可以通过施用能够结合由内源性造血干细胞表达的抗原的抗原靶向部分、ADC、抗体或其抗原结合部分来达成。在为患者准备移植疗法的情况下，这种施用可以促成内源性造血干细胞群体的选择性耗竭，从而在造血组织，诸如骨髓中创造空缺，随后被移植的外源性造血干细胞填补。能够结合由造血干细胞(例如，CD45+细胞)表达的抗原或由免疫细胞(例如，成熟免疫细胞)，诸如T细胞(例如，CD45)表达的抗原的抗原靶向部分、ADC、抗体或其抗原结合部分可以向患者施用以实现细胞耗竭。因此，结合由造血干细胞(例如，CD45)表达的抗原或由免疫细胞(例如，成熟免疫细胞)，诸如T细胞(例如，CD45)表达的抗原的抗原靶向部分、ADC、抗体或其抗原结合部分可以向罹患癌症或自身免疫疾病的患者施用以直接使癌细胞或自身免疫细胞群体耗竭，并且也可以向需要造血干细胞移植疗法的患者施用以促进移植的细胞，例如造血干细胞的存活和植入潜力。
移植患者可以接受自体的移植物，其中移植物包含受试者自身的细胞。在其它实施方案中，移植患者可以接受同种异体的移植物，其中移植物包含获自或来源于另一个个体的细胞。在同种异体移植的情况下，移植细胞的植入由于宿主免疫细胞介导的针对移植物的免疫反应(宿主抗移植物病)的潜在性或由于移植物中存在的免疫细胞介导的针对宿主细胞的免疫反应(移植物抗宿主病)的潜在性而变得复杂。上述并发症的可能性随着移植的抗原组成的非相似性程度而增加，与移植接受体患者有关。因此，同种异体移植通常在HLA抗原与次要组织相容性抗原之间可能具有最高相似度的患者之间进行。由于自体移植供体与接受体之间需要极高抗原相似度，有些需要移植的患者不能接受这种疗法，这是因为没有适合的匹配供体。
在一些实施方案中，通过用CXCR2激动剂，例如MGTA-145，任选地与CXCR4拮抗剂，例如普乐沙福(plerixafor)或BL-8040组合动员供体来获得用于移植的同种异体HSC。举例来说，在施用CXCR2激动剂，任选地施用CXCR2激动剂和CXCR4拮抗剂后，将HSC动员至外周血中之后，可以通过单采术获得同种异体HSC。
本文所提供的方法至少部分基于以下发现：用能够结合CD45的ADC调理需要同种异体移植的患者能够植入同种异体供体细胞，包括在同种异体细胞含有相对于移植接受体的高度抗原错配，诸如完全错配同种异体移植的情况下。在这方面，CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)可以在不存在额外调理剂，诸如免疫抑制剂的情况下作为单一疗法以有效量施用。因此，在一些实施方案中，本文所描述的方法可以用于增加自体造血干细胞的植入，并且增加骨髓和外周血中的供体嵌合(包括骨髓嵌合、B细胞嵌合和T细胞嵌合)，而无需使用免疫抑制剂。
如本文所描述，可以向需要治疗的受试者施用造血干细胞移植疗法以定植或再植一种或多种血细胞类型。造血干细胞一般展现出多能性，并且因此可以分化成多种不同血液谱系，包括但不限于粒细胞(例如，早幼粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞)、红细胞(例如，网织红细胞、红细胞)、血栓细胞(例如，巨核细胞、产生血小板的巨核细胞、血小板)、单核细胞(例如，单核细胞、巨噬细胞)、树突细胞、小胶质细胞、破骨细胞和淋巴细胞(例如，NK细胞、B细胞和T细胞)。造血干细胞另外能够自我更新，并且因此可以产生与母细胞具有同等潜力的子细胞，并且还具有再引入移植接受体中的能力，随之，它们归巢于造血干细胞生态位并重建生产性和持续性造血作用。
因此可以向造血谱系的一种或多种细胞类型有缺陷或不足的患者施用造血干细胞以在体内重构缺陷或不足的细胞群体，从而治疗与内源性血细胞群体的缺陷或耗竭相关的病态。本文所描述的组合物和方法因此可以用于治疗非恶性血红蛋白病(例如，选自由镰状细胞性贫血、地中海贫血、范可尼贫血、再生障碍性贫血和威-奥二氏综合征组成的组的血红蛋白病)。另外或替代地，本文所描述的组合物和方法可以用于治疗免疫缺陷，诸如先天性免疫缺陷。另外或替代地，本文所描述的组合物和方法可以用于治疗获得性免疫缺陷(例如，选自由HIV和AIDS组成的组的获得性免疫缺陷)。本文所描述的组合物和方法可以用于治疗代谢病症(例如，选自由糖原贮积病、粘多糖贮积症、高歇氏病、赫尔勒氏病、鞘脂贮积症和异染性脑白质营养不良组成的组的代谢病症)。
另外或替代地，本文所描述的组合物和方法可以用于治疗恶性病或增殖性病症，诸如血液癌症、骨髓增殖性疾病。在癌症治疗的情况下，可以向患者施用本文所描述的组合物和方法，以在造血干细胞移植疗法之前使内源性造血干细胞群体耗竭，在这种情况下，移植的细胞可以归巢于通过内源性细胞耗竭步骤创造的生态位并建立生产性造血作用。反过来，这可以重构在癌细胞根除期间，诸如在全身化疗期间耗竭的细胞群体。可以使用本文所描述的组合物和方法治疗的示例性血液癌症包括但不限于急性髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴性白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤，以及其它癌症疾患，包括成神经细胞瘤。
可以用本文所描述的组合物和方法治疗的额外疾病包括但不限于腺苷脱氨酶缺乏和严重联合免疫缺陷病、高免疫球蛋白M综合征、切-希二氏病、遗传性淋巴组织细胞增多症、骨质疏松症、成骨不全症、贮积病、重型地中海贫血、全身性硬化症、全身性红斑狼疮、多发性硬化症和幼年类风湿性关节炎。
本文所描述的抗体或其抗原结合部分和缀合物可以用于诱导实体器官移植耐受。举例来说，本文所描述的组合物和方法可以用于使来自靶组织的细胞群体耗竭或消除(例如，使来自骨髓干细胞生态位的造血干细胞耗竭)。在来自靶组织的细胞的此种耗竭之后，可以向移植接受体施用来自器官供体的干细胞或祖细胞群体(例如，来自器官供体的造血干细胞)，并且在植入此类干细胞或祖细胞之后，可以达成暂时或稳定的混合嵌合，从而实现长期移植器官耐受，而无需进一步的免疫抑制剂。举例来说，本文所描述的组合物和方法可以用于在实体器官移植接受体(例如，肾移植、肺移植、肝移植和心脏移植等)中诱导移植耐受。本文所描述的组合物和方法非常适合联合用于例如诱导实体器官移植耐受，因为低百分比的暂时或稳定的供体植入足以诱导植入器官的长期耐受。
另外，本文所描述的组合物和方法可以用于直接治疗癌症，诸如以CD45+细胞为特征的癌症。举例来说，本文所描述的组合物和方法可以用于治疗白血病，诸如在展现出CD45+白血病细胞的患者中。通过使CD45+癌细胞，诸如白血病细胞耗竭，本文所描述的组合物和方法可以用于直接治疗各种癌症。可以按这种方式治疗的示例性癌症包括血液癌症，诸如急性髓性白血病、急性淋巴性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴性白血病、多发性骨髓瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤和非霍奇金氏淋巴瘤。
另外，本文所描述的组合物和方法可以用于治疗自身免疫病症。举例来说，可以向受试者，诸如罹患自身免疫病症的人类患者施用抗体或其抗原结合部分，以杀死CD45+免疫细胞。举例来说，CD45+免疫细胞可以是自身反应性淋巴细胞，诸如表达T细胞受体的T细胞，所述T细胞受体特异性结合自身抗原并产生针对自身抗原的免疫反应。通过使自身反应性CD45+细胞耗竭，本文所描述的组合物和方法可以用于治疗自身免疫病态，诸如下文所描述的那些。另外或替代地，本文所描述的组合物和方法可以用于通过在造血干细胞移植疗法之前使内源性造血干细胞群体耗竭来治疗自身免疫疾病，在这种情况下，移植的细胞可以归巢于通过内源性细胞耗竭步骤创造的生态位并建立生产性造血作用。反过来，这可以重构在自身免疫细胞根除期间耗竭的细胞群体。
可以在将细胞或实体器官移植至患者之前向有需要的人类患者施用抗体或抗体-药物缀合物。在一个实施方案中，在细胞或实体器官移植前(例如，移植前约3天、约2天、约12小时；约12小时至3天、约1至3天、约1至2天或约12小时至2天)向有需要的人类患者施用CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)。在一个实施方案中，在CD45靶向部分(例如，ADC)已经从患者血液中清除或大体上清除后，向患者施用移植物。
本文所描述的方法也可用于预防宿主抗移植物(HvG)反应。移植物衰竭或移植物排斥，包括同种异体造血干细胞移植后的衰竭，一般可以表现为缺乏供体细胞的初始植入，或初始植入后的供体细胞损失(综述见Mattsson等(2008)Biol Blood MarrowTransplant.14(增刊1):165-170)。
在本文所提供的方法的一些实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)在不存在额外调理剂，诸如免疫抑制剂的情况下向受试者施用。在某些实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)在不存在一种或多种选自以下的药剂的情况下向受试者施用：钙调神经磷酸酶/MTOR抑制剂(例如，他克莫司、西罗莫司、雷帕霉素、环孢素、依维莫司)、共刺激阻断分子(例如，CTLA4-Ig、抗CD40L)、NK耗竭剂、抗胸腺细胞球蛋白(ATG)、烷化剂(例如氮芥，例如环磷酰胺；亚硝基脲(例如，卡莫司汀)；铂化合物)、甲氨蝶呤、抗TCR剂(例如，莫罗单抗-CD3)、抗CD20抗体(例如，利妥昔单抗、奥瑞珠单抗、奥法木单抗和维妥珠单抗)、氟达拉滨、坎帕斯(阿仑单抗)、2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶(参见上文美国专利号4,665,077，其公开内容以引用的方式并入本文中)、硫唑嘌呤(或环磷酰胺，如果对硫唑嘌呤有不良反应)；溴隐亭；戊二醛(其掩蔽MHC抗原，如上文美国专利号4,120,649所述)；MHC抗原的抗独特型抗体；环孢素A；一种或多种类固醇，例如皮质类固醇，例如糖皮质类固醇，诸如强的松、甲基强的松龙、氢化可的松和地塞米松；抗干扰素-γ抗体；抗肿瘤坏死因子-α抗体；抗肿瘤坏死因子-β抗体；抗白细胞介素-2抗体；抗细胞因子受体抗体，诸如抗IL-2受体抗体；异源性抗淋巴细胞球蛋白；泛T抗体，例如，OKT-3单克隆抗体；针对CD4的抗体；针对CD8的抗体、针对CD45的抗体(例如，30-F11、YTH24.5和/或YTH54.12(例如，YTH24.5和YTH54.12的组合))；链激酶；链道酶；或来自宿主的RNA或DNA。
举例来说，在一些实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45ADC)在不存在全身照射(TBI)(例如，低剂量TBI)的情况下向受试者施用。在其它实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)在不存在环磷酰胺(即，癌得星)的情况下向受试者施用。在更进一步的实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)在不存在能够使B细胞和/或T细胞耗竭的免疫耗竭剂，诸如抗CD4抗体和/或抗CD8抗体的情况下向受试者施用。在一些实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)在不存在TBI、癌得星、抗CD4抗体、抗CD8抗体或它们的组合的情况下向受试者施用。
在一些实施方案中，在接受包含同种异体细胞，例如同种异体HSC的移植物之前不向患者施用免疫抑制剂(包括但不限于抗CD4抗体、抗CD8抗体、癌得星和/或TBI)。在一些实施方案中，在移植后不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在移植前后不向受试者施用免疫抑制剂。
在某些实施方案中，本文所描述的CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体、其抗原结合部分或ADC)用于治疗接受错配同种异体移植的受试者。在一些实施方案中，供体是错配的供体。错配的供体细胞、器官或组织相对于由接受体表达的变体包含至少一种不相似(例如，不相同)的主要组织相容性复合物(MHC)抗原(即，人类白细胞抗原(HLA))，例如I类、II类或III类MHC抗原或次要组织相容性抗原(miHA)，如通常通过本领域中使用的标准测定所确定，诸如规定数量的MHC或miHA抗原的血清学、基因组或分子分析。在一个示例性实施方案中，同种异体移植物是含有一个或多个主要错配和一个或多个次要错配的“完全错配”同种异体移植物。在另一个示例性实施方案中，同种异体移植物与移植接受体共享相同的MHC或HLA单倍型，但可以含有一个或多个次要错配(例如，次要错配同种异体移植)。在另一个示例性实施方案中，同种异体移植物含有单独或除一个或多个次要错配之外的一个或多个主要错配。
MHC蛋白对于免疫反应中的淋巴细胞与抗原呈递细胞或患病细胞之间的信号传导很重要，其中MHC蛋白结合肽并将它们呈递以供T细胞受体识别。由MHC基因编码的蛋白质在细胞表面表达，并且向T细胞展示自身抗原(来自细胞自身的肽片段)和非自身抗原(例如，入侵微生物的片段)。
MHC区域分为三个亚组，I类、II类和III类。MHC I类蛋白含有α链和β2微球蛋白(即，B2M)并且将抗原片段呈递给细胞毒性T细胞。在大多数免疫系统细胞上，特别是在抗原呈递细胞上，MHC II类蛋白含有α链和β链并且将抗原片段呈递给T辅助细胞。MHC III类区域编码其它免疫成分，诸如补体组分和编码细胞因子的一些组分。MHC是多基因的(有几个MHC I类和MHC II类基因)和多态的(每个基因有多个等位基因)。
在人类中，主要组织相容性复合物替代地称作人类白细胞抗原(HLA)复合物。每一类MHC在人类中由几个基因座代表：例如，对于I类，HLA-A(人类白细胞抗原-A)、HLA-B、HLA-C、HLA-E、HLA-F、HLA-G、HLA-H、HLA-J、HLA-K、HLA-L、HLA-P和HLA-V；以及对于II类，HLA-DRA、HLA-DRB1-9、HLA-、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DPA1、HLA-DPB1、HLA-DMA、HLA-DMB、HLA-DOA和HLA-DOB。MHC展现出极端多态性：在人类群体中，在每个基因座处存在大量包含不同等位基因的单倍型。I类和II类的不同多态性MHC等位基因具有不同的肽特异性：每个等位基因编码结合展现特定序列模式的肽的蛋白质。在本领域中已经描述了HLA基因组基因座和测试人类HLA等位基因或蛋白质的方法(参见例如Choo等(2007).Yonsei medicaljournal.48.1:11-23；Shiina等(2009).Journal of human genetics.54.1:15；Petersdorf.(2013).Blood.122.11:1863-1872；以及Bertaina和Andreani.(2018).International journal of molecular sciences.19.2:621，特此以全文引用的方式并入)。
在一些实施方案中，至少一种主要组织相容性复合物抗原(例如，HLA抗原)在根据本文所提供的方法接受移植的受试者中相对于移植供体是错配的。在某些实施方案中，MHC抗原是MHC I类分子或MHC II类分子。在特定实施方案中，MHC抗原是B2M、HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DRA、HLA-DRB1、HLA-DRB3、HLA-DRB4、HLA-DRB5、HLA-DPA1、HLA-DPA2、HLA-DQA1和/或HLA-DQB1中的任一者或任何组合。在一些实施方案中，移植物包含含有相对于人类患者中的HLA抗原的至少一个HLA错配的同种异体造血干细胞。举例来说，在某些情况下，同种异体造血干细胞包含相对于人类患者中的HLA抗原的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或超过九个HLA错配。在一些实施方案中，同种异体造血干细胞包含相对于人类患者中的HLA抗原的完全HLA错配。
替代地或另外，至少一种次要组织相容性抗原在根据本文所提供的方法接受移植的受试者中相对于供体是错配的。在一些实施方案中，移植物包含含有相对于人类患者中的miHA抗原的至少一个miHA错配的同种异体造血干细胞。举例来说，在某些情况下，同种异体造血干细胞包含相对于人类患者中的miHA抗原的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个或超过九个miHA错配。在某些实施方案中，次要组织相容性抗原是HA-1、HA-2、HA-8、HA-3、HB-1、HY-Al、HY-A2、HY-B7、HY-B8、HY-B60或HY-DQ5蛋白。其它次要组织相容性抗原的实例在本领域中是已知的(例如，Perreault等(1990).Blood.76.7:1269-1280；Martin等(2017).Blood.129.6:791-798；以及美国专利号US10414813B2，特此以全文引用的方式并入)。
在一些实施方案中，所述方法有效地在移植接受体中建立完全或接近完全的供体嵌合，例如，在移植接受体中至少80％供体嵌合(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少99％或约100％供体嵌合)。同种异体HSC移植后供体嵌合的水平可以是例如总嵌合、骨髓嵌合、外周嵌合、髓样嵌合、B细胞嵌合或T细胞嵌合。
施用和给药途径
可以向患者(例如，罹患癌症、自身免疫疾病或需要造血干细胞移植疗法的人类患者)以多种剂型施用本文所描述的CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体、其抗原结合部分或ADC)。举例来说，可以向罹患癌症、自身免疫疾病或需要造血干细胞移植疗法的患者以水溶液，诸如含有一种或多种药学上可接受的赋形剂的水溶液形式施用本文所描述的CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体、其抗原结合部分或ADC)。与本文所描述的组合物和方法一起使用的药学上可接受的赋形剂包括粘度调节剂。可以使用本领域中已知的技术对水溶液进行灭菌。
通过将此种抗体或ADC与一种或多种任选的药学上可接受的载体混合以冻干制剂或水溶液的形式来制备包含抗CD45抗体、抗原结合部分或其缀合物(例如，本文所描述的ADC)的药物制剂(Remington's Pharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编(1980))。药学上可接受的载体在所采用的剂量和浓度下一般对接受体是无毒的，并且包括但不限于：缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵(hexamethonium chloride)；苯扎氯铵(benzalkonium chloride)；苄索氯铵(benzethonium chloride)；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)的多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，诸如钠；金属络合物(例如，Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，诸如聚乙二醇(PEG)。
本文所描述的CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体、抗原结合部分或ADC)可以通过多种途径施用，诸如经口、经皮、皮下、鼻内、静脉内、肌内、眼内或肠道外。在任何给定情况下最适合的施用途径将取决于所施用的特定抗体或抗原结合部分、患者、药物配制方法、施用方法(例如，施用时间和施用途径)、患者的年龄、体重、性别、所治疗疾病的严重度、患者的饮食和患者的排泄率。
本文所描述的CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体或抗原结合部分或抗体-药物缀合物)的有效剂量或有效量优选是足以在不存在免疫抑制剂的情况下，例如在不存在全身照射(TBI)的情况下、不存在抗CD4抗体的情况下和/或不存在抗CD8抗体的情况下，在接受同种异体移植(例如，同种异体HSC移植)后达成完全或接近完全的供体嵌合的量。举例来说，本文所描述的抗CD45抗体、抗原结合部分或抗体-药物缀合物的有效量可以是足以在不存在免疫抑制剂的情况下，例如在不存在全身照射(TBI)的情况下、不存在抗CD4抗体的情况下和/或不存在抗CD8抗体的情况下，在接受完全错配同种异体移植(例如，完全错配同种异体HSC移植)后达成至少80％供体嵌合的量。当用作单剂疗法时，本文所描述的抗CD45抗体、抗原结合部分或抗体-药物缀合物的有效量可能高于抗CD45抗体、抗原结合部分或抗体-药物缀合物与其它调理剂，诸如免疫抑制剂，例如TBI、抗CD4和/或抗CD8联合施用时的有效量。
在示例性实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体、抗原结合部分或抗体-药物缀合物)的有效量是足以在不存在其它调理剂的情况下，在同种异体HSC移植后达成至少80％供体嵌合(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或约100％)供体嵌合的量。
在其它示例性实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体、抗原结合部分或抗体-药物缀合物)的有效量是足以在不存在其它调理剂的情况下，在同种异体HSC移植后达成至少80％骨髓嵌合(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或约100％)骨髓嵌合的量。
在其它示例性实施方案中，抗CD45抗体、抗原结合部分或抗体-药物缀合物的有效量是足以在不存在其它调理剂的情况下，在同种异体HSC移植后达成至少80％B细胞嵌合(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或约100％)B细胞嵌合的量。
在其它示例性实施方案中，抗CD45抗体、抗原结合部分或抗体-药物缀合物的有效量是足以在不存在其它调理剂的情况下，在同种异体HSC移植后达成至少80％T细胞嵌合(例如，至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％或约100％)T细胞嵌合的量。
本文所描述的抗CD45抗体、抗原结合部分或ADC的有效剂量可以在例如约0.001至约100mg/kg体重/单次(例如，推注)施用、多次施用或连续施用的范围内，或用以达到抗体或其抗原结合片段的最佳血清浓度(例如，约0.0001至约5000μg/mL的血清浓度)。可以每天、每周或每月一次或多次(例如，2-10次)向罹患癌症、自身免疫疾病或经历调理疗法以准备接受造血干细胞移植的受试者(例如，人类)施用这种剂量。
在某些实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体或ADC)作为单个剂量向患者施用。在其它实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体或ADC)作为分次剂量向患者施用，其中抗CD45靶向部分(例如，CD45抗体或ADC)的剂量被分开并且以隔开的时间间隔向受试者施用。举例来说，在分次给药方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体或ADC)的剂量可以分为两个、三个、四个、五个、六个、七个、八个、九个或十个部分，并且以隔开的时间间隔向受试者施用每个部分。在一些实施方案中，时间间隔隔开1小时、3小时、6小时、9小时、12小时、15小时、18小时、21小时、24小时、36小时、48小时、72小时、96小时、120小时、1周、1.5周、2周、2.5周、3周、4周、5周、6周、7周或8周。在一些实施方案中，本文所描述的CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体或ADC)作为分次剂量向患者施用，其中向患者施用两个部分。在一些实施方案中，本文所描述的CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体或ADC)作为分次剂量向患者施用，其中向患者施用三个部分。在一些实施方案中，本文所描述的CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体或ADC)作为分次剂量向患者施用，其中以隔开1-7天的时间间隔向患者施用两个或三个部分。在一些实施方案中，本文所描述的CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体或ADC)作为分次剂量向患者施用，其中以隔开1-3天的时间间隔向患者施用两个或三个部分。
在一个实施方案中，向人类患者施用的抗CD45 ADC(例如，通过连接子缀合至细胞毒素的抗CD45抗体)的剂量为约3mg/kg至约12mg/kg。
在一个实施方案中，向人类患者施用的抗CD45 ADC(例如，通过连接子缀合至细胞毒素的抗CD45抗体)的剂量为约3.5mg/kg至约10mg/kg。
在一个实施方案中，向人类患者施用的抗CD45 ADC(例如，通过连接子缀合至细胞毒素的抗CD45抗体)的剂量为约4mg/kg至约8mg/kg。
在一个实施方案中，向人类患者施用的抗CD45 ADC(例如，通过连接子缀合至细胞毒素的抗CD45抗体)的剂量为约4mg/kg至约6mg/kg。
在一个实施方案中，向人类患者施用的抗CD45 ADC(例如，通过连接子缀合至细胞毒素的抗CD45抗体)的剂量为约0.1mg/kg至约0.3mg/kg。
在一个实施方案中，向人类患者施用的抗CD45 ADC(例如，通过连接子缀合至细胞毒素的抗CD45抗体)的剂量为约0.15mg/kg至约0.3mg/kg。
在一个实施方案中，向人类患者施用的抗CD45 ADC(例如，通过连接子缀合至细胞毒素的抗CD45抗体)的剂量为约0.15mg/kg至约0.25mg/kg。
在一个实施方案中，向人类患者施用的抗CD45 ADC(例如，通过连接子缀合至细胞毒素的抗CD45抗体)的剂量为约0.2mg/kg至约0.3mg/kg。
在一个实施方案中，向人类患者施用的抗CD45 ADC(例如，通过连接子缀合至细胞毒素的抗CD45抗体)的剂量为约0.25mg/kg至约0.3mg/kg。
在一个实施方案中，向人类患者施用的抗CD45 ADC(例如，通过连接子缀合至细胞毒素的抗CD45抗体)的剂量为约0.1mg/kg。
在一个实施方案中，向人类患者施用的抗CD45 ADC(例如，通过连接子缀合至细胞毒素的抗CD45抗体)的剂量为约0.2mg/kg。
在一个实施方案中，向人类患者施用的抗CD45 ADC(例如，通过连接子缀合至细胞毒素的抗CD45抗体)的剂量为约0.3mg/kg。
在一些实施方案中，向人类患者施用的本文所描述的抗CD45ADC的剂量为约0.001mg/kg至10mg/kg、约0.01mg/kg至9.5mg/kg、约0.1mg/kg至9mg/kg、约0.1mg/kg至8.5mg/kg、约0.1mg/kg至8mg/kg、约0.1mg/kg至7.5mg/kg、约0.1mg/kg至7mg/kg、约0.1mg/kg至6.5mg/kg、约0.1mg/kg至6mg/kg、约0.1mg/kg至5.5mg/kg、约0.1mg/kg至5mg/kg、约0.1mg/kg至4.5mg/kg、约0.1mg/kg至4mg/kg、约0.5mg/kg至3.5mg/kg、约0.5mg/kg至3mg/kg、约1mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至9mg/kg、约1mg/kg至8mg/kg、约1mg/kg至7mg/kg、约1mg/kg至6mg/kg、约1mg/kg至5mg/kg、约1mg/kg至4mg/kg或约1mg/kg至3mg/kg。在一些实施方案中，向人类患者施用的本文所描述的抗CD45 ADC的剂量为约12mg/kg、约11mg/kg、约10mg/kg、约9mg/kg、约8mg/kg、约7mg/kg、约6mg/kg、约5mg/kg、约4mg/kg、约3mg/kg、约2mg/kg、约1mg/kg或约0.5mg/kg。
在一个实施方案中，向人类患者施用的本文所描述的抗CD45ADC具有等于或小于24小时、等于或小于22小时、等于或小于20小时、等于或小于18小时、等于或小于16小时、等于或小于14小时、等于或小于13小时、等于或小于12小时、等于或小于11小时、等于或小于10小时、等于或小于9小时、等于或小于8小时、等于或小于7小时、等于或小于6小时或者等于或小于5小时的半衰期。在一个实施方案中，抗CD45 ADC的半衰期为5小时至7小时；5小时至9小时；15小时至11小时；5小时至13小时；5小时至15小时；5小时至20小时；5小时至24小时；7小时至24小时；9小时至24小时；11小时至24小时；12小时至22小时；10小时至20小时；8小时至18小时；或14小时至24小时。
在某些实施方案中，有效量的如本文所描述的CD45靶向部分(例如，ADC)以单个剂量施用。举例来说，单个剂量可以包括足以在不存在一种或多种额外调理剂的情况下，例如在不存在免疫抑制剂，诸如全身照射(TBI)、抗CD4抗体和/或抗CD8抗体的情况下，在接受同种异体移植(例如，同种异体HSC移植)后达成至少80％供体嵌合的量。在一个示例性实施方案中，单个剂量可以包括足以在不存在免疫抑制剂的情况下，例如在不存在全身照射(TBI)的情况下、不存在抗CD4抗体的情况下和/或不存在抗CD8抗体的情况下，在接受完全错配同种异体移植(例如，完全错配同种异体HSC移植)后达成至少80％供体嵌合的量。
在一些实施方案中，有效量的CD45靶向部分(例如，ADC)以两个或更多个剂量(例如，作为分割剂量)施用。举例来说，受试者可以接受第一剂量的ADC，继之以第二剂量的ADC，其中第一剂量和第二剂量中的每一者包括足以在不存在免疫抑制剂的情况下，例如在不存在全身照射(TBI)的情况下、不存在抗CD4抗体的情况下和/或不存在抗CD8抗体的情况下，在接受同种异体移植(例如，同种异体HSC移植)后达成至少80％供体嵌合的量的约一半。在一些实施方案中，同种异体移植是完全错配同种异体移植，例如，完全错配同种异体HSC移植。在一些实施方案中，有效量的ADC以两个或更多个、三个或更多个、四个或更多个或者五个或更多个剂量施用。
在一个实施方案中，本文所公开的方法使接受抗CD45 ADC进行调理的患者的肝毒性最小化。举例来说，在某些实施方案中，本文所公开的方法使得患者的肝脏标志物水平保持低于已知毒性水平超过24小时、48小时、72小时或96小时。在其它实施方案中，本文所公开的方法使得患者的肝脏标志物水平保持处于参考范围内超过24小时、48小时、72小时或96小时。在某些实施方案中，本文所公开的方法使得肝脏标志物水平升高不超过参考范围的1.5倍、不超过参考范围的3倍、不超过参考范围的5倍或不超过参考范围的10倍，持续超过24小时、48小时、72小时或96小时。可以用于测试毒性的肝脏标志物的实例包括丙氨酸氨基转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)和天冬氨酸氨基转氨酶(AST)。在某些实施方案中，施用如本文所描述的ADC，即，施用两个剂量而不是单个剂量，引起肝脏标志物，例如AST、LDH和/或ALT的瞬时增加。在一些情况下，可以达到指示毒性的肝脏标志物的升高水平，但在特定时间段内，例如，约12小时、约18小时、约24小时、约36小时、约48小时、约72小时、3天以上、约3.5天、约4天、约4.5天、约5天、约5.5天、约6天、约6.5天、约7天、约7.5天或不到一周，肝脏标志物水平恢复至与肝毒性无关的正常水平。举例来说，在人类(平均成年男性)中，ALT的正常无毒水平为每升7至55单位(U/L)；并且AST的正常无毒水平为8至48U/L。在某些实施方案中，患者的血液AST、ALT或LDH水平中的至少一者在向患者施用第一剂量的ADC与施用第一剂量后14天之间未达到毒性水平。举例来说，可以向患者施用第一剂量，并且随后在例如施用第一剂量5、10或14天内施用第二剂量、第三剂量、第四剂量或更多剂量，但患者的血液AST、ALT或LDH水平中的至少一者在向患者施用第一剂量的ADC与施用第一剂量后14天之间未达到毒性水平。
在某些实施方案中，患者的血液AST、ALT或LDH水平中的至少一者升高不超过正常水平，升高不超过正常水平的1.5倍，升高不超过正常水平的3倍，升高不超过正常水平的5倍，或升高不超过正常水平的10倍。
在造血干细胞移植前的调理程序的情况下，CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体、其抗原结合片段或ADC)可以在最佳促进外源性造血干细胞植入的时间，例如，在施用外源性造血干细胞移植物前约1小时至约1周(例如，约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、约24小时、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天)或更长时间向患者施用。包括本文所列举的数字的范围也包括于预期的方法中。
上文所描述的剂量范围可以与具有本文所列举的半衰期的抗CD45 ADC组合。
使用本文所公开的方法，本领域技术医师可以向需要造血干细胞移植疗法的人类患者施用能够结合由造血干细胞表达的抗原(例如，CD45)或由成熟免疫细胞，诸如T细胞表达的抗原(例如，CD45)的靶向部分(例如，ADC、抗体或其抗原结合片段)。以这种方式，可以在施用外源性造血干细胞移植物之前使内源性造血干细胞群体耗竭，以促进造血干细胞移植物的植入。抗体可以共价缀合至毒素，诸如本文所描述或本领域中已知的细胞毒性分子。举例来说，抗CD45抗体或其抗原结合片段可以共价缀合至细胞毒素，诸如假单胞菌外毒素A、德博甘宁、白喉毒素、鹅膏毒素(诸如γ-鹅膏蕈碱、α-鹅膏蕈碱)、皂草素、美登素、类美登素、奥瑞他汀、蒽环霉素、加利车霉素、伊立替康、SN-38、多卡霉素、吡咯并苯并二氮杂卓、吡咯并苯并二氮杂卓二聚体、吲哚啉并苯并二氮杂卓、吲哚啉并苯并二氮杂卓二聚体或其变体。可以使用本文所描述或本领域中已知的共价键形成技术进行这种缀合。随后，在将外源性造血干细胞(诸如自体、同基因或同种异体造血干细胞)移植至患者之前，可以例如通过静脉内施用向患者施用抗体、其抗原结合片段或药物-抗体缀合物。
抗CD45抗体、其抗原结合部分或药物-抗体缀合物可以按足以在造血干细胞移植疗法之前使内源性造血干细胞的量减少例如约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％或更多的量施用。可以使用本领域中已知的常规技术监测造血干细胞计数的减少，诸如通过在调理疗法期间以不同时间间隔从患者抽取的血液样品中表达特征性造血干细胞表面抗原的细胞的FACS分析。举例来说，本领域技术医师可以在调理疗法期间在各个时间点从患者抽取血液样品，并且通过进行FACS分析来确定内源性造血干细胞减少的程度，以使用结合至造血干细胞标志物抗原的抗体阐明样品中造血干细胞的相对浓度。根据一些实施方案，当造血干细胞的浓度已经达到响应于抗CD45抗体、其抗原结合片段或药物-抗体缀合物的调理疗法的最小值时，医师可以结束调理疗法并且可以开始为患者准备造血干细胞移植疗法。
CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体、其抗原结合部分或药物-抗体缀合物)可以在含有一种或多种药学上可接受的赋形剂(诸如粘度调节剂)的水溶液中向患者施用。可以使用本文所描述或本领域中已知的技术对水溶液进行灭菌。在向患者施用造血干细胞移植物之前，可以按例如约0.001mg/kg至约100mg/kg、约0.001mg/kg至约10mg/kg、约0.01mg/kg至9.5mg/kg、约0.1mg/kg至9mg/kg、约0.1mg/kg至8.5mg/kg、约0.1mg/kg至8mg/kg、约0.1mg/kg至7.5mg/kg、约0.1mg/kg至7mg/kg、约0.1mg/kg至6.5mg/kg、约0.1mg/kg至6mg/kg、约0.1mg/kg至5.5mg/kg、约0.1mg/kg至5mg/kg、约0.1mg/kg至4.5mg/kg、约0.1mg/kg至4mg/kg、约0.5mg/kg至3.5mg/kg、约0.5mg/kg至3mg/kg、约1mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至9mg/kg、约1mg/kg至8mg/kg、约1mg/kg至7mg/kg、约1mg/kg至6mg/kg、约1mg/kg至5mg/kg、约1mg/kg至4mg/kg或约1mg/kg至3mg/kg的剂量向患者施用抗CD45抗体、其抗原结合部分或药物-抗体缀合物。抗CD45抗体、其抗原结合部分或药物-抗体缀合物可以在最佳促进外源性造血干细胞植入的时间，例如，在施用外源性造血干细胞移植物前约1小时至约1周(例如，约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、约24小时、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天或约7天)或更长时间向患者施用。
在一些实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体、其抗原结合部分或ADC)作为单一疗法，例如在不存在额外调理剂的情况下施用。举例来说，在特定实施方案中，CD45靶向部分(例如，抗CD45 ADC)在不存在额外免疫抑制剂的情况下施用。举例来说，在一些实施方案中，接受偶联至本文所提供的毒素的CD45靶向部分的受试者不同时接受免疫抑制剂治疗。在一些实施方案中，受试者在施用CD45靶向部分时不经历免疫抑制剂治疗作用。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间前至少3天、至少7天、至少14天、至少21天、至少28天、至少1个月或至少两个月不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，在施用CD45靶向部分的时间后至少3天、至少7天、至少14天、至少21天、至少28天、至少1个月或至少两个月不向受试者施用免疫抑制剂。在一些实施方案中，免疫抑制剂包含抗CD4抗体或其抗原结合部分、抗CD8抗体或其抗原结合部分、全身照射(例如，低剂量TBI)和/或环磷酰胺。
在调理疗法结束后，患者然后可以接受外源性造血干细胞的输注(例如，静脉内输注)，例如，来自于进行调理疗法的同一医师或来自于不同医师。医师可以向患者施用自体、同基因或同种异体造血干细胞的输注，例如，以1x103至1x109个造血干细胞/kg的剂量。医师可以在施用移植物后监测造血干细胞移植物的植入，例如，通过从患者抽取血液样品并确定造血干细胞或造血谱系的细胞(诸如巨核细胞、血栓细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成髓细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞)的浓度增加。这种分析可以在造血干细胞移植疗法后例如1小时至6个月或更长时间进行(例如，约1小时、约2小时、约3小时、约4小时、约5小时、约6小时、约7小时、约8小时、约9小时、约10小时、约11小时、约12小时、约13小时、约14小时、约15小时、约16小时、约17小时、约18小时、约19小时、约20小时、约21小时、约22小时、约23小时、约24小时、约2天、约3天、约4天、约5天、约6天、约7天、约2周、约3周、约4周、约5周、约6周、约7周、约8周、约9周、约10周、约11周、约12周、约13周、约14周、约15周、约16周、约17周、约18周、约19周、约20周、约21周、约22周、约23周、约24周或更长时间)。在移植疗法后造血干细胞或造血谱系细胞的浓度相对于移植疗法前相应细胞类型的浓度已增加(例如，约1％、约2％、约3％、约4％、约5％、约6％、约7％、约8％、约9％、约10％、约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约100％、约200％、约500％或更大)的发现提供了用抗CD45抗体、其抗原结合部分或药物-抗体缀合物治疗已经成功地促进移植的造血干细胞移植物植入的一种指示。
由于施用CD45靶向部分(例如，抗CD45抗体、其抗原结合部分或ADC)所致的造血干细胞移植物的植入可以在多种经验测量中体现。举例来说，可以通过评估在施用能够结合由造血干细胞表达的抗原(例如，CD45)的抗体或其抗原结合部分并随后施用造血干细胞移植物之后患者骨髓内存在的竞争性再植单位(CRU)的数量来评价移植的造血干细胞的植入。另外，可以通过将报告基因，诸如催化化学反应产生荧光、发色或发光产物的酶掺入已经转染供体造血干细胞的载体中并随后监测造血干细胞已经归巢的组织(诸如骨髓)中的相应信号来观察造血干细胞移植物的植入。还可以通过评价造血干细胞和祖细胞的数量和存活率来观察造血干细胞植入，例如，通过本领域中已知的荧光激活细胞分选(FACS)分析方法所确定。还可以通过在移植后的时段期间测量外周血中的白血细胞计数和/或通过测量骨髓抽吸样品中供体细胞对骨髓细胞的恢复来确定植入。
抗CD45抗体
在本公开的某些方面，能够结合CD45(如由CD45+细胞，诸如造血干细胞或成熟免疫细胞(例如，T细胞)表达)的抗体或其抗原结合部分可以用作单独或作为抗体药物缀合物(ADC)的治疗剂，以(i)治疗以CD45+造血细胞为特征的癌症和自身免疫疾病；以及(ii)促进移植的造血干细胞在需要移植疗法的患者中植入。这些治疗活性可以例如通过抗CD45抗体或其抗原结合片段与由造血细胞(例如，造血干细胞)、白细胞或免疫细胞，例如成熟细胞(例如，T细胞)，诸如癌细胞、自身免疫细胞或造血干细胞表达的CD45的结合并随后诱导细胞死亡而引起。内源性造血干细胞的耗竭可以提供移植的造血干细胞可以归巢的生态位并随后建立生产性造血作用。以这种方式，移植的造血干细胞可以成功地植入患者中，诸如罹患本文所描述的干细胞病症的人类患者。
本文所描述的抗CD45抗体可以呈特异性结合人类CD45的全长抗体、双特异性抗体、双可变结构域抗体、多链或单链抗体和/或结合片段的形式，包括但不限于Fab、Fab'、(Fab')2、Fv、scFv(单链Fv)、替代抗体(包括替代轻链构建体)、单结构域抗体、骆驼化抗体等。它们也可以是或来源于任何同种型，包括例如IgA(例如，IgA1或IgA2)、IgD、IgE、IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)或IgM。在一些实施方案中，抗CD45抗体是IgG(例如，IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。
与本文所描述的方法联合使用的抗体包括上文所描述的那些抗体的变体，诸如含有或缺乏Fc结构域的抗体片段，以及含有本文所描述的抗体或抗体片段的一个或多个或所有CDR或其等效区域的本文所描述的非人类抗体的人源化变体和抗体样蛋白支架(例如，10Fn3结构域)。前述抗体的示例性抗原结合片段包括双可变免疫球蛋白结构域、单链Fv分子(scFv)、双链抗体、三链抗体、纳米抗体、抗体样蛋白支架、Fv片段、Fab片段、F(ab')2分子和串联二-scFv等。
在某些实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段具有特定解离率，这在用作缀合物的一部分时是特别有利的。举例来说，在某些实施方案中，如通过生物层干涉法(BLI)所测量，抗CD45抗体对人类CD45和/或恒河猴CD45的解离率(Koff)为1x10-2至1x10-3、1x10-3至1x10-4、1x10-5至1x10-6、1x10-6至1x10-7或1x10-7至1x10-8。在一些实施方案中，如通过生物层干涉法(BLI)测定所确定，抗体或其抗原结合片段以约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约8nM或更小、约6nM或更小、约4nM或更小、约2nM或更小、约1nM或更小的KD结合CD45(例如，人类CD45和/或恒河猴CD45)。
在一个实施方案中，本发明提供了结合至人类CD45(SEQ ID NO:175)和食蟹猴CD45(SEQ ID NO:194)和/或恒河猴CD45(SEQ ID NO:195)的抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，如通过生物层干涉法(BLI)所确定，抗体或其抗原结合部分可以依约100nM或更小，例如约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约10nM或更小或约0.1nM或更小的KD结合至人类CD45。在一些实施方案中，如通过生物层干涉法(BLI)所确定，抗体或其抗原结合部分可以依约100nM或更小，例如约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约10nM或更小或约0.1nM或更小的KD结合至食蟹猴CD45。在一些实施方案中，如通过生物层干涉法(BLI)所确定，抗体或其抗原结合部分可以依约100nM或更小，例如约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约10nM或更小或约0.1nM或更小的KD结合至恒河猴CD45。在一些实施方案中，抗体是完全人类抗体或其抗原结合部分。在其它实施方案中，抗体是人源化抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，抗体是嵌合抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，抗体是去免疫抗体或其抗原结合部分。
在一个实施方案中，提供了包含一个或多个放射性标记氨基酸的抗CD45抗体。放射性标记的抗CD45抗体可以用于诊断和治疗目的(与放射性标记分子的缀合是另一种可能的特征)。多肽的标记的非限制性实例包括但不限于3H、14C、15N、35S、90Y、99Tc和125I、131I和186Re。用于制备放射性标记的氨基酸和相关肽衍生物的方法在本领域中是已知的(参见例如Junghans等,Cancer Chemotherapy and Biotherapy 655-686(第2版,Chafner和Longo编,Lippincott Raven(1996))和美国专利号4,681,581、美国专利号4,735,210、美国专利号5,101,827、美国专利号5,102,990(U.S.RE35,500)、美国专利号5,648,471和美国专利号5,697,902。举例来说，放射性同位素可以通过氯胺T方法缀合。
本文所描述的抗CD45抗体、结合片段或其缀合物还可以包括改变抗体和/或片段的特性的修饰和/或突变，诸如增加半衰期、增加或减少ADCC等的那些，如本领域中已知的。
在一个实施方案中，抗CD45抗体或其结合片段包含修饰的Fc区，其中所述修饰的Fc区相对于野生型Fc区包含至少一个氨基酸修饰，使得所述分子对FcgammaR(FcγR)的亲和力或结合改变。通过晶体学研究已知Fc区内的某些氨基酸位置以与FcγR直接接触。具体来说，氨基酸234-239(铰链区)、氨基酸265-269(B/C环)、氨基酸297-299(C'/E环)和氨基酸327-332(F/G)环。(参见Sondermann等,2000Nature,406:267-273)。在一些实施方案中，本文所描述的抗体可以包含变体Fc区，其包含基于结构和晶体学分析与FcγR直接接触的至少一个残基的修饰。在一个实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段的Fc区根据如Kabat等,Sequences of Proteins of Immunological Interest,第5版Public HealthService,NH1,MD(1991)中的EU索引在氨基酸265处包含氨基酸取代，所述文献以引用的方式明确并入本文中。“Kabat中的EU索引”是指人类IgG1 EU抗体的编号。在一个实施方案中，Fc区包含D265A突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C突变。在一些实施方案中，抗体(或其片段)的Fc区根据如Kabat中的EU索引在氨基酸234处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含L234A突变。在一些实施方案中，抗CD45抗体或其片段的Fc区根据如Kabat中的EU索引在氨基酸235处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含L235A突变。
在又一个实施方案中，Fc区包含L234A和L235A突变(本文中也称作“L234A.L235A”或“LALA”)。在另一个实施方案中，Fc区包含L234A和L235A突变，其中Fc区不包括P329G突变。在又一个实施方案中，Fc区包含D265C、L234A和L235A突变(本文中也称作“D265C.L234A.L235A”)。在另一个实施方案中，Fc区包含D265C、L234A和L235A突变，其中Fc区不包括P329G突变。在又一个实施方案中，Fc区包含D265C、L234A、L235A和H435A突变(本文中也称作“D265C.L234A.L235A.H435A”)。在另一个实施方案中，Fc区包含D265C、L234A、L235A和H435A突变，其中Fc区不包括P329G突变。在又一个实施方案中，Fc区包含D265C和H435A突变(本文中也称作“D265C.H435A”)。在又一个实施方案中，Fc区包含D265A、S239C、L234A和L235A突变(本文中也称作“D265A.S239C.L234A.L235A”)。在另一个实施方案中，Fc区包含D265A、S239C、L234A和L235A突变，其中Fc区不包括P329G突变。在又一个实施方案中，Fc区包含D265C、N297G和H435A突变(本文中也称作“D265C.N297G.H435A”)。在又一个实施方案中，Fc区包含D265C、N297Q和H435A突变(本文中也称作“D265C.N297Q.H435A”)。在另一个实施方案中，Fc区包含E233P、L234V、L235A和delG236(236缺失)突变(本文中也称作“E233P.L234V.L235A.delG236”或“EPLVLAdelG”)。在另一个实施方案中，Fc区包含E233P、L234V、L235A和delG236(236缺失)突变，其中Fc区不包括P329G突变。在另一个实施方案中，Fc区包含E233P、L234V、L235A、delG236(236缺失)和H435A突变(本文中也称作“E233P.L234V.L235A.delG236.H435A”或“EPLVLAdelG.H435A”)。在另一个实施方案中，Fc区包含E233P、L234V、L235A、delG236(236缺失)和H435A突变，其中Fc区不包括P329G突变。在另一个实施方案中，Fc区包含L234A、L235A、S239C和D265A突变。在另一个实施方案中，Fc区包含L234A、L235A、S239C和D265A突变，其中Fc区不包括P329G突变。在另一个实施方案中，Fc区包含H435A、L234A、L235A和D265C突变。在另一个实施方案中，Fc区包含H435A、L234A、L235A和D265C突变，其中Fc区不包括P329G突变。
在一些实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段具有修饰的Fc区，使得所述抗体在体外效应子功能测定中降低效应子功能，其中相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体与FcR的结合，与Fc受体(Fc R)的结合降低。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合片段具有修饰的Fc区，使得所述抗体在体外效应子功能测定中降低效应子功能，其中相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体与FcγR的结合，与Fcγ受体(FcγR)的结合降低。在一些实施方案中，FcγR是FcγR1。在一些实施方案中，FcγR是FcγR2A。在一些实施方案中，FcγR是FcγR2B。在其它实施方案中，FcγR是FcγR2C。在一些实施方案中，FcγR是FcγR3A。在一些实施方案中，FcγR是FcγR3B。在其它实施方案中，结合的降低是抗体与FcγR的结合相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体与FcγR的结合降低至少70％、降低至少80％、降低至少90％、降低至少95％、降低至少98％、降低至少99％或降低100％。在其它实施方案中，结合的降低是抗体与FcγR的结合相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体与FcγR的结合降低至少70％至100％、降低至少80％至100％、降低至少90％至100％、降低至少95％至100％或降低至少98％至100％。
在一些实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段具有修饰的Fc区，使得所述抗体在体外细胞因子释放测定中减少细胞因子释放，其中细胞因子释放相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体的细胞因子释放减少至少50％。在一些实施方案中，细胞因子释放的减少是细胞因子释放相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体的细胞因子释放减少至少70％、减少至少80％、减少至少90％、减少至少95％、减少至少98％、减少至少99％或减少100％。在一些实施方案中，细胞因子释放的减少是细胞因子释放相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体的细胞因子释放减少至少70％至100％、减少至少80％至100％、减少至少90％至100％、减少至少95％至100％。在某些实施方案中，细胞因子释放是通过免疫细胞进行的。
在一些实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段具有修饰的Fc区，使得所述抗体在体外肥大细胞脱粒测定中减少肥大细胞脱粒，其中肥大细胞脱粒相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体的肥大细胞脱粒减少至少50％。在一些实施方案中，肥大细胞脱粒的减少是肥大细胞脱粒相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体的肥大细胞脱粒减少至少70％、减少至少80％、减少至少90％、减少至少95％、减少至少98％、减少至少99％或减少100％。在一些实施方案中，肥大细胞脱粒的减少是肥大细胞脱粒相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体的肥大细胞脱粒减少至少70％至100％、减少至少80％至100％、减少至少90％至100％或减少至少95％至100％。
在一些实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段具有修饰的Fc区，使得所述抗体在体外抗体依赖性细胞吞噬测定中减少或防止抗体依赖性细胞吞噬(ADCP)，其中ADCP相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体的ADCP减少至少50％。在一些实施方案中，ADCP的减少是细胞因子释放相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体的细胞因子释放减少至少70％、减少至少80％、减少至少90％、减少至少95％、减少至少98％、减少至少99％或减少100％。
在一些实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段包含Fc区，所述Fc区包含以下修饰之一或修饰的组合：D265A、D265C、D265C/H435A、D265C/LALA、D265C/LALA/H435A、D265A/S239C/L234A/L235A/H435A、D265A/S239C/L234A/L235A、D265C/N297G、D265C/N297G/H435A、D265C(EPLVLAdelG*)、D265C(EPLVLAdelG)/H435A、D265C/N297Q/H435A、D265C/N297Q、EPLVLAdelG/H435A、EPLVLAdelG/D265C、EPLVLAdelG/D265A、N297A、N297G或N297Q。
修饰的Fc区与Fcγ受体之间的结合或亲和力可以使用本领域中已知的多种技术来确定，例如但不限于平衡方法(例如，酶联免疫吸附测定(ELISA)；KinExA，Rathanaswami等Analytical Biochemistry,第373卷:52-60,2008；或放射免疫测定(RIA))，或通过表面等离子共振测定或其它基于动力学的测定机制(例如，BIACORE.RTM.分析或Octet.RTM.分析(forteBIO))，以及其它方法，诸如间接结合测定、竞争性结合测定、荧光共振能量转移(FRET)、凝胶电泳和色谱法(例如，凝胶过滤)。这些和其它方法可以利用一种或多种所检查的组分上的标记和/或采用多种检测方法，包括但不限于显色、荧光、发光或同位素标记。结合亲和力和动力学的详细描述可以在Paul,W.E.编,Fundamental Immunology,第4版,Lippincott-Raven,Philadelphia(1999)中找到，其重点是抗体-免疫原相互作用。竞争性结合测定的一个实例是放射免疫测定，包括在增加量的未标记的抗原存在下将标记的抗原与所关注的抗体一起孵育，以及检测结合至标记的抗原的抗体。所关注的抗体对特定抗原的亲和力和结合解离率可以通过斯卡查德图分析从数据中确定。还可以使用放射免疫测定来确定与第二抗体的竞争。在这种情况下，在增加量的未标记的第二抗体存在下，将抗原与缀合至标记的化合物的所关注的抗体一起孵育。
在一个实施方案中，具有本文所描述的Fc修饰(例如，D265C、L234A、L235A和/或H435A)的抗CD45抗体或其抗原结合片段与Fcγ受体的结合相对于包含未修饰的Fc区的相同抗体与Fcγ受体的结合降低至少70％、降低至少80％、降低至少90％、降低至少95％、降低至少98％、降低至少99％或降低100％(例如，如通过生物层干涉法(BLI)所评估)。
不希望受任何理论约束，据信Fc区与Fcγ受体的结合相互作用对于多种效应子功能和下游信号传导事件是必不可少的，包括但不限于抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。因此，在某些方面，包含修饰的Fc区(例如，包含L234A、L235A和/或D265C突变)的抗体具有显著降低或消除的效应子功能。可以使用本领域中已知的多种方法测定效应子功能，例如，通过测量响应于所关注抗体的细胞反应(例如，肥大细胞脱粒或细胞因子释放)。举例来说，使用本领域中的标准方法，可以测定Fc修饰的抗体例如由人类外周血单核细胞在体外触发肥大细胞脱粒的能力或触发细胞因子释放的能力。
本公开的抗体可以进一步工程化以通过引入额外的Fc突变来进一步调节抗体半衰期，诸如在(Dall'Acqua等(2006)J Biol Chem 281:23514-24)、(Zalevsky等(2010)NatBiotechnol 28:157-9)、(Hinton等(2004)J Biol Chem 279:6213-6)、(Hinton等(2006)JImmunol 176:346-56)、(Shields等(2001)J Biol Chem 276:6591-604)、(Petkova等(2006)Int Immunol 18:1759-69)、(Datta-Mannan等(2007)Drug Metab Dispos 35:86-94)、(Vaccaro等(2005)Nat Biotechnol 23:1283-8)、(Yeung等(2010)Cancer Res 70:3269-77)和(Kim等(1999)Eur J Immunol 29:2819-25)中所描述的那些，并且包括位置250、252、253、254、256、257、307、376、380、428、434和435。可以单独或组合产生的示例性突变是T250Q、M252Y、1253A、S254T、T256E、P2571、T307A、D376V、E380A、M428L、H433K、N434S、N434A、N434H、N434F、H435A和H435R突变。
因此，在一个实施方案中，Fc区包含引起半衰期缩短(例如，相对于具有未修饰的Fc区的抗体)的突变。具有短半衰期的抗体在预期抗体用作短寿命治疗剂的某些情况下可能是有利的，例如，在本文所描述的其中施用抗体继之以HSC的调理步骤中。理想地，抗体将在递送HSC之前大体上清除，与内源性干细胞不同，HSC一般也表达靶抗原(例如，CD45)，但不是抗体(例如，抗CD45抗体)的靶标。在一个实施方案中，Fc区在位置435处包含突变(根据Kabat的EU索引)。在一个实施方案中，突变是H435A突变。
在一个实施方案中，本文所描述的抗CD45抗体或其抗原结合片段具有等于或小于约24小时、等于或小于约23小时、等于或小于约22小时、等于或小于约21小时、等于或小于约20小时、等于或小于约19小时、等于或小于约18小时、等于或小于约17小时、等于或小于约16小时、等于或小于约15小时、等于或小于约14小时、等于或小于约13小时、等于或小于约12小时或者等于或小于约11小时的半衰期(例如，在人类中)。
在一个实施方案中，本文所描述的抗CD45抗体或其抗原结合片段具有约1-5小时、约5-10小时、约10-15小时、约15-20小时或约20至25小时的半衰期(例如，在人类中)。在一个实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段的半衰期为约5-7小时；约5-9小时；约5-11小时；约5-13小时；约5-15小时；约5-20小时；约5-24小时；约7-24小时；约9-24小时；约11-24小时；约12-22小时；约10-20小时；约8-18小时；或约14-24小时。
在一些方面，抗CD45抗体或其抗原结合片段的Fc区包含两个或更多个突变，这些突变赋予缩短的半衰期并降低抗体的效应子功能。在一些实施方案中，Fc区包含促使半衰期减少的突变和可以与FcγR直接接触的至少一个残基的突变(例如，基于结构和晶体学分析)。在一个实施方案中，Fc区包含H435A突变、L234A突变和L235A突变。在一个实施方案中，Fc区包含H435A突变和D265C突变。在一个实施方案中，Fc区包含H435A突变、L234A突变、L235A突变和D265C突变。
在一些实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段通过抗体或其抗原结合片段的Fc结构域中的半胱氨酸残基缀合至细胞毒素(例如，鹅膏毒素)。
在这些方面的一些实施方案中，半胱氨酸残基天然存在于抗CD45抗体或其抗原结合片段的Fc结构域中。举例来说，Fc结构域可以是IgG Fc结构域，诸如人类IgG1 Fc结构域，并且半胱氨酸残基可以选自由Cys261、Csy321、Cys367和Cys425组成的组。
在一些实施方案中，半胱氨酸残基通过抗CD45抗体或其抗原结合片段的Fc结构域中的突变而引入。举例来说，半胱氨酸残基可以选自由Cys118、Cys239和Cys265组成的组。在一个实施方案中，抗CD45抗体或其片段的Fc区根据如Kabat中的EU索引在氨基酸265处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含D265C突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C和H435A突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C、L234A和L235A突变。在一个实施方案中，Fc区包含D265C、L234A、L235A和H435A突变。在一个实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段的Fc区根据如Kabat中的EU索引在氨基酸239处包含氨基酸取代。在一个实施方案中，Fc区包含S239C突变。在一个实施方案中，Fc区包含L234A突变、L235A突变、S239C突变和D265A突变。在另一个实施方案中，Fc区包含S239C和H435A突变。在另一个实施方案中，Fc区包含L234A突变、L235A突变和S239C突变。在又一个实施方案中，Fc区包含H435A突变、L234A突变、L235A突变和S239C突变。在又一个实施方案中，Fc区包含H435A突变、L234A突变、L235A突变、S239C突变和D265A突变。
值得注意的是，除非另有指示，否则Fc氨基酸位置是参照EU编号索引。
本文所描述的变体Fc结构域是根据构成它们的氨基酸修饰来定义。对于本文所论述的关于Fc区的所有氨基酸取代，编号始终根据EU索引。因此，例如，D265C是Fc变体，其中相对于亲本Fc结构域在EU位置265处的天冬氨酸(D)被半胱氨酸(C)取代。同样地，例如，D265C/L234A/L235A定义了相对于亲本Fc结构域在EU位置265(D至C)、234(L至A)和235(L至A)处具有取代的变体Fc变体。还可以根据其在突变的EU氨基酸位置中的最终氨基酸组成来指定变体。举例来说，L234A/L235A突变体可以称作LALA。应注意，提供取代的顺序是任意的。值得注意的是，除非另有指示，否则Fc氨基酸位置是参照EU编号索引。
在一些实施方案中，本文中的抗CD45抗体或其抗原结合片段包含Fc区，所述Fc区包含以下修饰之一或修饰的组合：D265A、D265C、D265C/H435A、D265C/LALA、D265C/LALA/H435A、D265C/N297G、D265C/N297G/H435A、D265C(IgG2*)、D265C(IgG2)/H435A、D265C/N297Q/H435A、D265C/N297Q、EPLVLAdelG/H435A、N297A、N297G或N297Q。
如以下更详细描述，本文所公开的抗体及其结合片段可以用于缀合物中。
可以使用重组方法和组合物来产生抗体，例如，如美国专利号4,816,567中所描述。在一个实施方案中，提供了编码本文所描述的抗CD45抗体的分离的核酸。此种核酸可以编码组成抗体VL的氨基酸序列和/或组成抗体VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在另一个实施方案中，提供了一种或多种包含此种核酸的载体(例如，表达载体)。在另一个实施方案中，提供了包含此种核酸的宿主细胞。在一个此类实施方案中，宿主细胞包含(例如，已经用以下转化)：(1)包含编码组成抗体VL的氨基酸序列和组成抗体VH的氨基酸序列的核酸的载体，或(2)包含编码组成抗体VL的氨基酸序列的核酸的第一载体和包含编码组成抗体VH的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一个实施方案中，宿主细胞是真核的，例如，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施方案中，提供了一种制造抗CLL-1抗体的方法，其中所述方法包括在适合于表达抗体的条件下培养包含编码如上文所提供的抗体的核酸的宿主细胞，以及任选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收抗体。
对于抗CD45抗体的重组产生，将编码例如上文所描述的抗体的核酸分离并插入一个或多个载体中，以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可以使用常规程序将此种核酸容易地分离并进行测序(例如，通过使用能够特异性结合至编码抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。
适合于克隆或表达编码抗体的载体的宿主细胞包括本文所描述的原核或真核细胞。举例来说，可以在细菌中产生抗体，特别是在不需要糖基化和Fc效应子功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见例如美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523。(还参见Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,N.J.,2003),第245-254页，其描述抗体片段在大肠杆菌(E.coli)中的表达。)表达后，可以从细菌细胞糊的可溶性部分中分离抗体并且可以进一步纯化。
也可以使用脊椎动物细胞作为宿主。举例来说，适于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它实例是由SV40(COS-7)转化的猴肾CV1系；人胚胎肾系(293或293细胞，例如Graham等,J.Gen Virol.36:59(1977)中所描述)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠支持细胞(TM4细胞，例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所描述)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，例如Mather等,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所描述；MRC 5细胞；和FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系，诸如Y0、NS0和Sp2/0。对于适用于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,N.J.),第255-268页(2003)。
在一个实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段包含具有与本文所公开的SEQID No(表5)至少95％、96％、97％或99％相同的氨基酸序列的可变区。或者，抗CD45抗体或其抗原结合片段包含CDR，所述CDR包含具有本文所描述的可变区的框架区的本文所公开的SEQ ID No，所述可变区具有与本文所公开的SEQ ID No(表5)至少95％、96％、97％或99％相同的氨基酸序列。
在一个实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段包含具有本文所公开的氨基酸序列的重链可变区和重链恒定区。在另一个实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段包含具有本文所公开的氨基酸序列的轻链可变区和轻链恒定区。在又一个实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段包含具有本文所公开的氨基酸序列的重链可变区、轻链可变区、重量恒定区和轻链恒定区。
本文进一步描述了抗CD45抗体的实例。
抗CD45抗体
能够结合人类CD45(mRNA NCBI参考序列：NM_080921.3，蛋白质NCBI参考序列：NP_563578.2)的抗体和抗原结合片段，包括能够结合同种型CD45RO的那些，可以与本文所公开的组合物和方法联合使用，诸如以促进造血干细胞移植物在需要造血干细胞移植疗法的患者中植入。在一个实施方案中，本文所公开的组合物和方法包括结合至如SEQ ID NO:1的氨基酸序列所示的人类CD45RO的抗CD45抗体或ADC。结合至本文所公开的CD45的各种同种型的抗体也预期用于本文所公开的方法和组合物中。CD45的多种同种型源于初级转录物中34个外显子的可变剪接。外显子4、5、6和潜在7的剪接产生多个CD45变异。在下表1中所描述的CD45同种型中观察到选择性外显子表达。
表1.各种CD45同种型中的外显子表达
CD45同种型 外显子表达模式
CD45RA(SEQ ID NO:2) 仅表达外显子4
CD45RB(SEQ ID NO:3) 仅表达外显子5
CD45RC(SEQ ID NO:4) 仅表达外显子6
CD45RO(SEQ ID NO:1) 不表达外显子4-6
可变剪接可以产生以CD45蛋白的各种同种型(例如，CD45RA、CD45RAB、CD45RABC)表达的个别外显子或外显子组合。相比之下，CD45RO缺乏外显子4-6的表达并且由外显子1-3和7-34的组合产生。有证据表明外显子7也可以从蛋白质中排除，使得外显子1-3和8-34剪接在一起。这种蛋白质，指定为E3-8，已经在mRNA水平上检测到，但当前尚未通过流式细胞术鉴定。
CD45RO是当前唯一已知的在造血干细胞上表达的CD45同种型。CD45RA和CD45RABC尚未检测到或排除在造血干细胞的表型之外。在小鼠中进行的研究有证据表明，CD45RB在胚胎造血干细胞上表达，但不存在于成年骨髓造血干细胞上。值得注意的是，CD45RC在亚洲人群中发现的外显子6中具有高多态率(在大约25％的日本人群中发现了CD45RC中外显子6处的多态性)。这种多态性促成CD45RO的高表达和CD45RA、CD45RB和CD45RC水平的降低。另外，CD45RA变体(诸如CD45RAB和CD45RAC)在外显子4中展现出与自身免疫疾病相关的多态性。
CD45RO在造血干细胞上的存在及其在其它免疫细胞(诸如T和B淋巴细胞亚组和各种骨髓细胞)上相对有限的表达使CD45RO成为特别适于对需要造血干细胞移植的患者进行调理疗法的靶标。由于CD45RO仅缺乏外显子4、5和6的表达，因此将其用作免疫原能够筛选泛CD45 Ab和CD45RO特异性抗体。
可以与本文所描述的患者调理方法联合使用的抗CD45抗体包括抗CD45抗体及其抗原结合部分。抗体的抗原结合部分在本领域中是众所周知的，并且可以容易地基于抗体的抗原结合区来构建。在示例性实施方案中，与本文所描述的调理方法联合使用的抗CD45抗体可以是单克隆抗体或其抗原结合片段、多克隆抗体或其抗原结合片段、人源化抗体或其抗原结合片段，全人类抗体或其抗原结合片段、嵌合抗体或其抗原结合片段、双特异性抗体或其抗原结合片段、双可变免疫球蛋白结构域、单链Fv分子(scFv)、双链抗体、三链抗体、纳米抗体、抗体样蛋白支架、Fv片段、Fab片段、F(ab')2分子或串联二-scFv。下文提供了可以全部或部分用于本文所描述的ADC或方法中的示例性抗CD45抗体。
在一些实施方案中，抗CD45抗体是本文所公开的抗体A(AbA)、抗体B(AbB)、抗体C(AbC)、抗体D(AbD)、抗体E(AbE)或抗体F(AbF)。这些抗体与人类CD45和恒河猴CD45发生交叉反应。此外，这些抗体能够结合人类CD45的各种同种型的细胞外结构域。因此，在某些实施方案中，本文中的抗体是泛特异性抗CD45抗体(即，结合所有六种人类CD45同种型的抗体)。此外，本文所公开的AbA、AbB和AbC(或具有这些抗体的结合区或特异性的抗体)也可以结合至食蟹猴CD45。
表5中描述了抗CD45抗体AbA、AbB、AbC、AbD、AbE和AbF的各种结合区的氨基酸序列。
本发明包括了基于抗体AbA、AbB或AbC，例如包含如表5中所列的CDR的人源化和嵌合抗CD45抗体。
在一个实施方案中，本公开提供了包含与AbA的那些区域对应的结合区，例如CDR、可变区的抗CD45抗体或其抗原结合片段。AbA的重链可变区(VH)氨基酸序列以SEQ ID NO:13示出(参见表5)。AbA的VH CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:14(VH CDR1)、SEQ ID NO:15(VH CDR2)和SEQ ID NO:16(VH CDR3)示出。AbA的轻链可变区(VL)氨基酸序列以SEQ IDNO:17描述(参见表5)。AbA的VL CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:18(VL CDR1)、SEQ IDNO:19(VL CDR2)和SEQ ID NO:20(VL CDR3)示出。因此，在某些实施方案中，本文所提供的抗CD45抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含含有SEQ ID NO:14、15和16所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的重链和包含含有SEQ ID NO:18、19和20所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
本文也预期结合至人类CD45上的表位的抗人CD45抗体或其片段，所述表位被抗体AbA、AbB、AbC、AbD、AbE或AbF(或具有AbA、AbB、AbC、AbD、AbE或AbF的结合区的抗体)中的任一者结合。进一步预期与抗体AbA、AbB、AbC、AbD、AbE或AbF(或具有AbA、AbB、AbC、AbD、AbE或AbF的结合区的抗体)中的任一者竞争结合至人类CD45和/或结合至食蟹猴CD45或恒河猴CD45的抗人CD45抗体或其抗原结合片段。AbA-AbC描述于例如国际公布号WO2020/092654中，特此以全文引用的方式并入。AbD-AbF描述于例如国际申请号PCT/US2020/058373中，特此以全文引用的方式并入。
在一些实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段在包含氨基酸序列RNGPHERYHLEVEAGNT(SEQ ID NO:181)的区域处特异性结合至人类CD45。举例来说，在某些实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段在SEQ ID NO:176的氨基酸残基486R、493Y和502T(对应于NP_002829.3的CD45同种型的片段)处，或在其它人类CD45同种型中包含序列RNGPHERYHLEVEAGNT(SEQ ID NO:181；粗体残基指示结合位点)的区域中与其对应的残基处特异性结合至人类CD45。在一些实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段特异性结合至人类CD45的纤连蛋白结构域(例如，纤连蛋白d4结构域)。
在一个实施方案中，分离的抗CD45抗体或其抗原结合部分，特异性结合至包含SEQID NO:176的残基486R、493Y和502T的人类CD45的表位，并且还结合至食蟹猴和/或恒河猴CD45。
在一个实施方案中，分离的抗CD45抗体或其抗原结合部分，特异性结合至包含氨基酸序列RNGPHERYHLEVEAGNT(SEQ ID NO:181)的人类CD45的表位，并且还结合至食蟹猴和恒河猴CD45。
在一个实施方案中，分离的抗CD45抗体或其抗原结合部分，特异性结合至包含氨基酸序列CRPPRDRNGPHERYHLEVEAGNTLVR NESHK(SEQ ID NO:180)的人类CD45的表位，并且还结合至食蟹猴和恒河猴CD45。
在一个实施方案中，分离的抗CD45抗体或其抗原结合部分，特异性结合至包含SEQID NO:176的残基486R、493Y和502T的人类CD45的表位；结合至包含RNGPHERYHLEVEAGNT(SEQ ID NO:181)的肽中的至少一个额外氨基酸、至少两个额外氨基酸、至少三个额外氨基酸、至少四个额外氨基酸或至少五个额外氨基酸，其中额外氨基酸残基不是SEQ ID NO:176的残基486R、493Y和502T；并且还结合至食蟹猴和恒河猴CD45。
在一个实施方案中，本发明提供了包含与AbB的那些区域对应的结合区，例如CDR、可变区的抗CD45抗体或其抗原结合片段。AbB的重链可变区(VH)氨基酸序列以SEQ ID NO:21示出(参见表5)。AbB的VH CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:22(VH CDR1)、SEQ ID NO:23(VH CDR2)和SEQ ID NO:24(VH CDR3)示出。AbB的轻链可变区(VL)氨基酸序列以SEQ IDNO:25描述(参见表5)。AbB的VL CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:26(VL CDR1)、SEQ IDNO:27(VL CDR2)和SEQ ID NO:28(VL CDR3)示出。因此，在某些实施方案中，本文所提供的抗CD45抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:21所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含含有SEQ ID NO:22、23和24所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的重链和包含含有SEQ ID NO:26、27和28所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
在一个实施方案中，本发明提供了包含与AbC的那些区域对应的结合区，例如CDR、可变区的抗CD45抗体或其抗原结合片段。AbC的重链可变区(VH)氨基酸序列以SEQ ID NO:29示出(参见表5)。AbC的VH CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:30(VH CDR1)、SEQ ID NO:31(VH CDR2)和SEQ ID NO:32(VH CDR3)示出。AbC的轻链可变区(VL)氨基酸序列以SEQ IDNO:33描述(参见表5)。AbC的VL CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:34(VL CDR1)、SEQ IDNO:35(VL CDR2)和SEQ ID NO:36(VL CDR3)示出。因此，在某些实施方案中，本文所提供的抗CD45抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含含有SEQ ID NO:30、31和32所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的重链和包含含有SEQ ID NO:34、35和36所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
在一个实施方案中，本发明提供了包含与AbD的那些区域对应的结合区，例如CDR、可变区的抗CD45抗体或其抗原结合片段。AbD的重链可变区(VH)氨基酸序列以SEQ ID NO:37示出(参见表5)。AbD的VH CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:38(VH CDR1)、SEQ ID NO:39(VH CDR2)和SEQ ID NO:40(VH CDR3)示出。AbD的轻链可变区(VL)氨基酸序列以SEQ IDNO:41描述(参见表5)。AbD的VL CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:42(VL CDR1)、SEQ IDNO:43(VL CDR2)和SEQ ID NO:44(VL CDR3)示出。因此，在某些实施方案中，本文所提供的抗CD45抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含含有SEQ ID NO:38、39和40所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的重链和包含含有SEQ ID NO:42、43和44所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
在一个实施方案中，本发明提供了包含与AbE的那些区域对应的结合区，例如CDR、可变区的抗CD45抗体或其抗原结合片段。AbE的重链可变区(VH)氨基酸序列以SEQ ID NO:47示出(参见表5)。AbE的VH CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:48(VH CDR1)、SEQ ID NO:49(VH CDR2)和SEQ ID NO:50(VH CDR3)示出。AbE的轻链可变区(VL)氨基酸序列以SEQ IDNO:51描述(参见表5)。AbE的VL CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:52(VL CDR1)、SEQ IDNO:53(VL CDR2)和SEQ ID NO:54(VL CDR3)示出。因此，在某些实施方案中，本文所提供的抗CD45抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含含有SEQ ID NO:48、49和50所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的重链和包含含有SEQ ID NO:52、53和54所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
在一个实施方案中，本发明提供了包含与AbF的那些区域对应的结合区，例如CDR、可变区的抗CD45抗体或其抗原结合片段。AbF的重链可变区(VH)氨基酸序列以SEQ ID NO:57示出(参见表5)。AbF的VH CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:58(VH CDR1)、SEQ ID NO:59(VH CDR2)和SEQ ID NO:60(VH CDR3)示出。AbF的轻链可变区(VL)氨基酸序列以SEQ IDNO:61描述(参见表5)。AbF的VL CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:62(VL CDR1)、SEQ IDNO:63(VL CDR2)和SEQ ID NO:64(VL CDR3)示出。因此，在某些实施方案中，本文所提供的抗CD45抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:61所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含含有SEQ ID NO:58、59和60所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的重链和包含含有SEQ ID NO:62、63和64所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
在一些实施方案中，抗CD45抗体是本文所公开的抗体1(Ab1)、抗体2(Ab2)、抗体3(Ab3)、抗体4(Ab4)、抗体5(Ab5)、抗体6(Ab6)或抗体7(Ab7)。这些抗体与人类CD45、恒河猴CD45和食蟹猴CD45发生交叉反应。此外，这些抗体是泛特异性的，因为它们能够结合人类CD45的各种同种型的细胞外结构域。Ab1-Ab7描述于例如国际申请号PCT/US2020/058373中，特此以全文引用的方式并入。
人类CD45的细胞外区域包括一个粘蛋白样结构域和四个纤连蛋白样结构域(d1、d2、d3和d4)。不希望受任何理论约束，据信抗体Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6和Ab7与位于d3和d4纤连蛋白样结构域内的人类CD45的残基相互作用。特别地，这些抗体可以与SEQ IDNO:178所示的人类CD45片段和SEQ ID NO:180所示的人类CD45片段相互作用。交联研究(国际申请号PCT/US2020/058373中所描述，特此以引用的方式并入)表明抗体可以与在人类CD45、食蟹猴CD45和恒河猴CD45之间保守的一个或多个CD45氨基酸残基特异性相互作用。这些残基包括405T、407K、419Y、425K和505R(参考SEQ ID NO:176所示的hCD45片段进行编号)。另外，这些抗体可以与人类CD45中的残基481R和/或509H相互作用(参考SEQ ID NO:176所示的hCD45片段进行编号)。因此，在一些实施方案中，抗CD45抗体是在位于d3和/或d4纤连蛋白样结构域中的表位处结合至人类CD45的抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，抗CD45抗体是在位于CD45片段2(SEQ ID NO:178)和/或CD45片段4(SEQ ID NO:180)内的人类CD45的表位处结合至CD45的抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，抗CD45抗体是在位于CD45片段1(SEQ ID NO:177)和/或CD45片段3(SEQ ID NO:179)内的人类CD45的表位处结合至CD45的抗体或其抗原结合部分。
在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分在包含在人类CD45、食蟹猴CD45和/或恒河猴CD45之间保守的至少一个、至少两个、至少三个、至少四个或至少五个氨基酸残基的表位处结合至CD45。举例来说，在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分可以结合至人类CD45中的以下氨基酸残基中的至少一者、至少两者、至少三者、至少四者或所有五者：405T、407K、419Y、425K和505R(参考SEQ ID NO:176所示的hCD45片段进行编号)。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分可以结合至人类CD45中的以下氨基酸残基中的一者或多者、两者或多者、三者或多者、四者或多者、五者或多者、六者或多者或七者：405T、407K、419Y、425K、481R和505R、509H(参考SEQ ID NO:176所示的hCD45片段进行编号)。本文还提供了与Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6和/或Ab7竞争结合至人类CD45(SEQ ID NO:175)的抗体或其抗原结合部分。在一些实施方案中，抗体或其抗原结合部分还可以与Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6和/或Ab7竞争结合至食蟹猴CD45(SEQ ID NO:194)和/或恒河猴CD45(SEQ ID NO:195)。
结合至人类CD45上的表位的抗人CD45抗体或其片段也预期用于本文所提供的方法和组合物中，所述表位被抗体Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6或Ab7(或具有Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6或Ab7的结合区的抗体)中的任一者结合。进一步预期与抗体Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6或Ab7(或具有Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6或Ab7的结合区的抗体)中的任一者竞争结合至人类CD45和/或结合至食蟹猴CD45或恒河猴CD45的抗人CD45抗体或其抗原结合片段。
在一个实施方案中，本发明提供了包含与Ab1的那些区域对应的结合区，例如CDR、可变区的抗CD45抗体或其抗原结合片段。Ab1的重链可变区(VH)氨基酸序列以SEQ ID NO:67示出(参见表5)。Ab1的VH CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:68(VH CDR1)、SEQ ID NO:69(VH CDR2)和SEQ ID NO:70(VH CDR3)示出。Ab1的轻链可变区(VL)氨基酸序列以SEQ IDNO:71描述(参见表5)。Ab1的VL CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:72(VL CDR1)、SEQ IDNO:73(VL CDR2)和SEQ ID NO:74(VL CDR3)示出。因此，在某些实施方案中，本文所提供的抗CD45抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含含有SEQ ID NO:68、69和70所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的重链和包含含有SEQ ID NO:72、73和74所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
在一个实施方案中，本发明提供了包含与Ab2的那些区域对应的结合区，例如CDR、可变区的抗CD45抗体或其抗原结合片段。Ab2的重链可变区(VH)氨基酸序列以SEQ ID NO:77示出(参见表5)。Ab2的VH CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:78(VH CDR1)、SEQ ID NO:79(VH CDR2)和SEQ ID NO:80(VH CDR3)示出。Ab2的轻链可变区(VL)氨基酸序列以SEQ IDNO:81描述(参见表5)。Ab2的VL CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:82(VL CDR1)、SEQ IDNO:83(VL CDR2)和SEQ ID NO:84(VL CDR3)示出。因此，在某些实施方案中，本文所提供的抗CD45抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:77所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:81所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含含有SEQ ID NO:78、79和80所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的重链和包含含有SEQ ID NO:82、83和84所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
在一个实施方案中，本发明提供了包含与Ab3的那些区域对应的结合区，例如CDR、可变区的抗CD45抗体或其抗原结合片段。Ab3的重链可变区(VH)氨基酸序列以SEQ ID NO:87示出(参见表5)。Ab3的VH CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:88(VH CDR1)、SEQ ID NO:89(VH CDR2)和SEQ ID NO:90(VH CDR3)示出。Ab3的轻链可变区(VL)氨基酸序列以SEQ IDNO:91描述(参见表5)。Ab3的VL CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:92(VL CDR1)、SEQ IDNO:93(VL CDR2)和SEQ ID NO:94(VL CDR3)示出。因此，在某些实施方案中，本文所提供的抗CD45抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:87所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:91所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含含有SEQ ID NO:88、89和90所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的重链和包含含有SEQ ID NO:92、93和94所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
在一个实施方案中，本发明提供了包含与Ab4的那些区域对应的结合区，例如CDR、可变区的抗CD45抗体或其抗原结合片段。Ab4的重链可变区(VH)氨基酸序列以SEQ ID NO:97示出(参见表5)。Ab4的VH CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:98(VH CDR1)、SEQ ID NO:99(VH CDR2)和SEQ ID NO:100(VH CDR3)示出。Ab4的轻链可变区(VL)氨基酸序列以SEQ IDNO:101描述(参见表5)。Ab4的VL CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:102(VL CDR1)、SEQID NO:103(VL CDR2)和SEQ ID NO:104(VL CDR3)示出。因此，在某些实施方案中，本文所提供的抗CD45抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:101所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含含有SEQ ID NO:98、99和100所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的重链和包含含有SEQ ID NO:102、103和104所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
在一个实施方案中，本发明提供了包含与Ab5的那些区域对应的结合区，例如CDR、可变区的抗CD45抗体或其抗原结合片段。Ab5的重链可变区(VH)氨基酸序列以SEQ ID NO:107示出(参见表5)。Ab5的VH CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:108(VH CDR1)、SEQ IDNO:109(VH CDR2)和SEQ ID NO:110(VH CDR3)示出。Ab5的轻链可变区(VL)氨基酸序列以SEQ ID NO:111描述(参见表5)。Ab5的VL CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:112(VLCDR1)、SEQ ID NO:113(VL CDR2)和SEQ ID NO:114(VL CDR3)示出。因此，在某些实施方案中，本文所提供的抗CD45抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:107所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:111所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含含有SEQ ID NO:108、109和110所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的重链和包含含有SEQ ID NO:112、113和114所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
在一个实施方案中，本发明提供了包含与Ab6的那些区域对应的结合区，例如CDR、可变区的抗CD45抗体或其抗原结合片段。Ab6的重链可变区(VH)氨基酸序列以SEQ ID NO:117示出(参见表5)。Ab6的VH CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:118(VH CDR1)、SEQ IDNO:119(VH CDR2)和SEQ ID NO:120(VH CDR3)示出。Ab6的轻链可变区(VL)氨基酸序列以SEQ ID NO:121描述(参见表5)。Ab6的VL CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:122(VLCDR1)、SEQ ID NO:123(VL CDR2)和SEQ ID NO:124(VL CDR3)示出。因此，在某些实施方案中，本文所提供的抗CD45抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:117所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:121所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含含有SEQ ID NO:118、119和120所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的重链和包含含有SEQ ID NO:122、123和124所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
在一个实施方案中，本发明提供了包含与Ab7的那些区域对应的结合区，例如CDR、可变区的抗CD45抗体或其抗原结合片段。Ab7的重链可变区(VH)氨基酸序列以SEQ ID NO:127示出(参见表5)。Ab7的VH CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:128(VH CDR1)、SEQ IDNO:129(VH CDR2)和SEQ ID NO:130(VH CDR3)示出。Ab7的轻链可变区(VL)氨基酸序列以SEQ ID NO:131描述(参见表5)。Ab7的VL CDR结构域氨基酸序列以SEQ ID NO:132(VLCDR1)、SEQ ID NO:133(VL CDR2)和SEQ ID NO:134(VL CDR3)示出。因此，在某些实施方案中，本文所提供的抗CD45抗体或其抗原结合片段包括包含SEQ ID NO:127所示的氨基酸序列的重链可变区和包含SEQ ID NO:131所示的氨基酸序列的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含含有SEQ ID NO:128、129和130所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的重链和包含含有SEQ ID NO:132、133和134所示的氨基酸序列的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
在某些实施方案中，抗体包含修饰的重链(HC)可变区，所述可变区包含表5中所描述的HC可变结构域或表5中的HC变体区的变体，所述变体(i)与表5中所描述的HC可变结构域的不同之处在于1、2、3、4或5个氨基酸取代、添加或缺失；(ii)与表5中所描述的HC可变结构域的不同之处在于最多5、4、3、2或1个氨基酸取代、添加或缺失；(iii)与表5中所描述的HC可变结构域的不同之处在于1-5、1-3、1-2、2-5或3-5个氨基酸取代、添加或缺失；和/或(iv)包含与SEQ ID NO:1至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，其中在(i)-(iv)中的任一者中，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代。
在某些实施方案中，抗体包含修饰的轻链(LC)可变区，所述可变区包含表5中所描述的LC可变结构域或其变体，所述变体(i)与表5中所描述的LC可变结构域的不同之处在于1、2、3、4或5个氨基酸取代、添加或缺失；(ii)与表5中所描述的LC可变结构域的不同之处在于最多5、4、3、2或1个氨基酸取代、添加或缺失；(iii)与表5中所描述的LC可变结构域的不同之处在于1-5、1-3、1-2、2-5或3-5个氨基酸取代、添加或缺失；和/或(iv)包含与表5中所描述的LC可变结构域至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，其中在(i)-(iv)中的任一者中，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代。
在某些实施方案中，抗CD45抗体包含本文表5中所描述的CDR，其中所述CDR包含保守氨基酸取代(或2、3、4或5个氨基酸取代)，同时保留抗体的CD45特异性(即，类似于AbA、AbB或AbC的特异性)。
在某些实施方案中，抗CD45抗体是基于AbA、AbB或AbC抗体或其抗原结合部分的去免疫抗体。去免疫抗体是其V区已经被选择为缺乏T细胞表位或被改变以去除T细胞表位的抗体，从而最小化或消除抗体具有免疫原性的可能性。在某些实施方案中，抗CD45抗体通过选择或工程化框架结构域使其不具有T细胞表位而去免疫，所述T细胞表位如果存在于抗体序列中将使人类受试者能够产生针对抗CD45抗体的HAHA/HAMA反应，从而引起免疫介导的反应，导致人类受试者出现不良事件或降低治疗有效性。本文所公开的抗体(即，表5中所描述的AbA、AbB和AbC可变序列和CDR序列)可以用作可以得到去免疫抗体的亲本序列。
在一个实施方案中，抗CD45抗体是或来源于从
Figure BDA0003880030040000891
(San Diego,CA)可商购的克隆体HI30或其人源化变体。抗体的人源化可以通过根据本领域中已知的程序(例如下文实施例7中所描述)用种系人类抗体的框架残基和恒定区残基置换非人类抗体的框架残基和恒定区残基来进行。可以与本文所描述的方法联合使用的额外抗CD45抗体包括从
Figure BDA0003880030040000901
(Cambridge,MA)可商购的抗CD45抗体ab10558、EP322Y、MEM-28、ab10559、0.N.125、F10-89-4、HIe-1、2B11、YTH24.5、PD7/26/16、F10-89-4、1B7、ab154885、B-A11、磷光体S1007、ab170444、EP350、Y321、GA90、D3/9、X1 6/99和LT45，以及其人源化变体。可以与本文所描述的患者调理程序联合使用的其它抗CD45抗体包括从
Figure BDA0003880030040000902
(St.Louis,MO)可商购的抗CD45抗体HPA000440，以及其人源化变体。可以与本文所描述的患者调理方法联合使用的额外抗CD45抗体包括描述于例如Matthews等,Blood 78:1864-1874,1991中的鼠类单克隆抗体BC8，所述文献关于抗CD45抗体的公开内容以引用的方式并入本文中，以及其人源化变体。可以与本文所描述的方法联合使用的其它抗CD45抗体包括描述于例如Glatting等,J.Nucl.Med.8:1335-1341,2006中的单克隆抗体YAML568，所述文献关于抗CD45抗体的公开内容以引用的方式并入本文中，以及其人源化变体。可以与本文所描述的患者调理程序联合使用的额外抗CD45抗体包括描述于例如Brenner等,Ann.N.Y.Acad.Sci.996:80-88,2003中的单克隆抗体YTH54.12和YTH25.4，所述文献关于抗CD45抗体的公开内容以引用的方式并入本文中，以及其人源化变体。与本文所描述的患者调理方法一起使用的额外抗CD45抗体包括描述于例如Brown等,Immunology64:331-336,1998中的UCHL1、2H4、SN130、MD4.3、MBI和MT2，所述文献关于抗CD45抗体的公开内容以引用的方式并入本文中，以及其人源化变体。可以与本文所描述的方法联合使用的额外抗CD45抗体包括从美国典型培养物保藏中心(ATCC)登录号RA3-6132、RA3-2C2和TIB122生产和发布的那些，以及描述于例如Johnson等,J.Exp.Med.169:1179-1184,1989中的单克隆抗体C363.16A和13/2，所述文献关于抗CD45抗体的公开内容以引用的方式并入本文中，以及其人源化变体。可以与本文所描述的患者调理方法联合使用的其它抗CD45抗体包括描述于例如Harvath等,J.Immunol.146:949-957,1991中的单克隆抗体AHN-12.1、AHN-12、AHN-12.2、AHN-12.3、AHN-12.4、HLe-1和KC56(T200)，所述文献关于抗CD45抗体的公开内容以引用的方式并入本文中，以及其人源化变体。
可以与本文所描述的患者调理方法联合使用的额外抗CD45抗体包括描述于例如美国专利号7,265,212(描述了例如抗CD45抗体39E11、16C9和1G10等克隆体)；7,160,987(描述了例如由ATCC登录号HB-11873生产和发布的抗CD45抗体，诸如单克隆抗体6G3)；和6,099,838(描述了例如抗CD45抗体MT3，以及由ATCC登录号HB220(也指定为MB23G2)和HB223生产和发布的抗体)，以及US 2004/0096901和US 2008/0003224(描述了例如由ATCC登录号PTA-7339生产和发布的抗CD45抗体，诸如单克隆抗体17.1)中的那些，每个文献关于抗CD45抗体的公开内容以引用的方式并入本文中。
可以与本文所描述的患者调理方法联合使用的其它抗CD45抗体包括从ATCC登录号MB4B4、MB23G2、14.8、GAP 8.3、74-9-3、I/24.D6、9.4、4B2、M1/9.3.4.HL.2生产和发布的抗体，以及其人源化和/或亲和力成熟变体。可以例如使用本文所描述或本领域中已知的体外展示技术，诸如噬菌体展示进行亲和力成熟。
可以与本文所描述的患者调理方法联合使用的额外抗CD45抗体包括描述于例如Morikawa等,Int.J.Hematol.54:495-504,1991中的抗CD45抗体T29/33，所述文献关于抗CD45抗体的公开内容以引用的方式并入本文中。
在某些实施方案中，抗CD45抗体选自艾妥单抗(apamistamab)(也称为90Y-BC8、Iomab-B、BC8；例如US20170326259、WO2017155937和Orozco等Blood.127.3(2016):352-359中所描述)或BC8-B10(例如Li等PloS one 13.10(2018):e0205135中所描述)，每个文献以引用的方式并入。其它抗CD45抗体已经描述于例如WO2003/048327、WO2016/016442、US2017/0226209、US2016/0152733、US9,701,756、US2011/0076270或US7,825,222中，每个文献以全文引用的方式并入。
举例来说，在一个实施方案中，包含与艾妥单抗的那些区域对应的结合区，例如CDR、可变区的抗CD45抗体或其抗原结合片段。艾妥单抗的重链可变区(VH)氨基酸序列以SEQ ID NO:7示出(参见表5)。艾妥单抗的轻链可变区(VL)氨基酸序列以SEQ ID NO:8描述(参见表5)。在其它实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合部分包括包含SEQ ID NO:7所示的氨基酸残基的可变重链和SEQ ID NO:8所示的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含艾妥单抗的CDR1、CDR2和CDR3的重链以及包含艾妥单抗的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
在一个实施方案中，抗CD45抗体包含本文所描述的抗CD45抗体的重链和本文所描述的抗CD45抗体的轻链可变区。在一个实施方案中，抗CD45抗体包括包含本文所描述的抗CD45抗体的CDR1、CDR2和CDR3的重链以及包含本文所描述的抗CD45抗体的CDR1、CDR2和CDR3的轻链可变区。
在另一个实施方案中，抗体或其抗原结合片段包含重链可变区，所述重链可变区包含与本文中的抗CD45抗体具有至少95％同一性，例如与本文中的抗CD45抗体具有至少95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。在某些实施方案中，抗体包含修饰的重链(HC)可变区，所述可变区包含本文中的抗CD45抗体的HC可变结构域或其变体，所述变体(i)与抗CD45抗体的不同之处在于1、2、3、4或5个氨基酸取代、添加或缺失；(ii)与抗CD45抗体的不同之处在于最多5、4、3、2或1个氨基酸取代、添加或缺失；(iii)与抗CD45抗体的不同之处在于1-5、1-3、1-2、2-5或3-5个氨基酸取代、添加或缺失；和/或(iv)包含与抗CD45抗体至少约75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列，其中在(i)-(iv)中的任一者中，氨基酸取代可以是保守氨基酸取代或非保守氨基酸取代；并且其中修饰的重链可变区相对于抗CD45抗体的重链可变区可以具有增强的生物活性，同时保留抗体的CD45结合特异性。
可以与本文所描述的组合物和方法联合使用的抗体和抗原结合片段包括上文所描述的抗体及其抗原结合片段，以及上文所描述的那些非人类抗体和抗原结合片段的人源化变体和结合与上文所描述的那些相同的表位的抗体或抗原结合片段，例如，通过竞争性CD45结合测定所评估。
共有CDR
Ab1、Ab2、Ab3、Ab4、Ab5、Ab6和Ab7结合至人类CD45上的相同表位，并且在其CDR区域中共享某些共有残基(参见国际申请号PCT/US2020/058373，特此以引用的方式并入)。共有重链氨基酸CDR序列以SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:189和SEQ ID NO:190呈现；并且共有轻链氨基酸CDR序列以SEQ ID NO:191、SEQ ID NO:192和SEQ ID NO:193呈现。
因此，在一些实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合部分可以包含重链可变区，所述重链可变区包括包含SEQ ID NO:188所示的氨基酸序列的CDR1结构域、包含SEQ ID NO:189所示的氨基酸序列CDR2结构域和包含SEQ ID NO:190所示的氨基酸序列的CDR3结构域；以及轻链可变区，所述轻链可变区包括包含SEQ ID NO:191所示的氨基酸序列的CDR1结构域、包含SEQ ID NO:192所示的氨基酸序列的CDR2结构域和包含SEQ ID NO:193所示的氨基酸序列的CDR3结构域。在一些实施方案中，前述抗体还可以包含重链恒定区和/或轻链恒定区。举例来说，在一些实施方案中，前述抗体还可以包含重链恒定区，所述重链恒定区选自SEQ ID NO:183、SEQ ID NO:184、SEQ ID NO:185、SEQ ID NO:186或SEQ ID NO:187中的任一者所示的重链恒定区，和/或SEQ ID NO:182所示的轻链恒定区。
鉴定抗体的方法
用于高通量筛选能够结合由造血干细胞或成熟免疫细胞(例如，T细胞)表达的抗原(例如，CD45)的分子的抗体或抗体片段文库的方法可以用于鉴定可用于治疗癌症、自身免疫疾病以及调理需要如本文所描述的造血干细胞疗法的患者(例如，人类患者)的亲和力成熟抗体。此类方法包括本领域中已知的体外展示技术，诸如噬菌体展示、细菌展示、酵母展示、哺乳动物细胞展示、核糖体展示、mRNA展示和cDNA展示等。使用噬菌体展示来分离结合生物学相关分子的抗体或抗原结合片段已经例如在Felici等,Biotechnol.AnnualRev.1:149-183,1995；Katz,Annual Rev.Biophys.Biomol.Struct.26:27-45,1997；和Hoogenboom等,Immunotechnology 4:1-20,1998中评述，每个文献关于体外展示技术的公开内容以引用的方式并入本文中。已经构建随机化组合肽文库以选择结合细胞表面抗原的多肽，如Kay,Perspect.Drug Discovery Des.2:251-268,1995和Kay等,Mol.Divers.1:139-140,1996中所描述，每个文献关于抗原结合分子发现的公开内容以引用的方式并入本文中。蛋白质，诸如多聚蛋白质，已经成功地被噬菌体展示为功能性分子(参见例如EP0349578；EP 4527839；和EP0589877，以及Chiswell和McCafferty,Trends Biotechnol.10:80-841992，每个文献关于使用体外展示技术来发现抗原结合分子的公开内容以引用的方式并入本文中。另外，功能性抗体片段，诸如Fab和scFv片段，已经以体外展示形式表达(参见例如McCafferty等,Nature348:552-554,1990；Barbas等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:7978-7982,1991；以及Clackson等,Nature 352:624-628,1991，每个文献关于用于发现抗原结合分子的体外展示平台的公开内容以引用的方式并入本文中)。人类抗CD45抗体也可以例如在
Figure BDA0003880030040000941
或XenoMouseTM中产生。这些技术尤其可以用于鉴定和改善能够结合由造血干细胞表达的抗原(例如，CD45)的抗体、抗体或片段的亲和力，进而可以用于使需要造血干细胞移植疗法的患者(例如，人类患者)中的内源性造血干细胞耗竭。
除了体外展示技术之外，计算建模技术可以用于经由电脑模拟来设计和鉴定能够结合由造血干细胞表达的抗原(例如，CD45)的抗体。举例来说，使用计算建模技术，本领域技术人员可以经由电脑模拟来筛选抗体或抗体片段的文库中能够结合CD45上的特定表位，诸如CD45的细胞外表位的分子。
可以使用额外的技术来鉴定能够结合由造血干细胞表达的抗原(例如，CD45)并且例如通过受体介导的内吞作用被细胞内化的抗体或抗体片段。举例来说，上文所描述的体外展示技术可以适于筛选结合由造血干细胞表达的抗原(例如，或CD45)并随后被细胞内化的抗体或抗体片段。噬菌体展示代表了一种可以与这种筛选范例联合使用的此类技术。为了鉴定随后被造血干细胞内化的抗CD45抗体，本领域技术人员可以使用Williams等,Leukemia 19:1432-1438,2005中描述的噬菌体展示技术，这个文献的公开内容以全文引用的方式并入本文中。举例来说，使用本领域中已知的诱变方法，可以产生重组噬菌体文库，所述文库编码抗体、抗体片段，诸如scFv片段、Fab片段、双链抗体、三链抗体和10Fn3结构域等，或含有随机化氨基酸盒(例如，在一个或多个或所有CDR或其等效区域或抗体或抗体片段中)的配体。可以设计抗体或抗体片段的框架区、铰链、Fc结构域和其它区域，使得它们在人类中是非免疫原性的，例如，由于具有人类种系抗体序列或相对于人类种系抗体仅展现出微小变化的序列。
使用本文所描述或本领域中已知的噬菌体展示技术，可以将含有共价结合至噬菌体颗粒的随机化抗体或抗体片段的噬菌体文库与抗原(例如，CD45)一起孵育，例如，通过首先将噬菌体文库与封闭剂(诸如乳蛋白、牛血清白蛋白和/或IgG，以去除编码展现出非特异性蛋白质结合的抗体或抗体片段的噬菌体和编码结合Fc结构域的抗体或其片段的噬菌体)一起孵育，然后将噬菌体文库与表达例如CD45的造血干细胞或成熟免疫细胞(例如，T细胞)群体一起孵育。可以将噬菌体文库与造血干细胞一起孵育，持续足以使抗体(例如，抗CD45抗体)或抗体片段结合同源细胞表面抗原(例如，CD45)并随后被造血干细胞内化的时间(例如，在4℃下30分钟至6小时，诸如在4℃下1小时)。含有对抗原(例如，CD45)未展现出足以允许结合至造血干细胞并被造血干细胞内化的亲和力的抗体或抗体片段的噬菌体随后可以通过例如用冷的(4℃)0.1M甘氨酸缓冲液(pH 2.8)洗涤细胞来去除。结合至已经被造血干细胞内化的抗体或抗体片段的噬菌体可以例如通过使细胞溶解并从细胞培养基中回收内化的噬菌体来鉴定。然后可以在细菌细胞中扩增噬菌体，例如，通过使用本领域中已知的方法在2xYT培养基中将细菌细胞与回收的噬菌体一起孵育。然后可以表征从这种培养基回收的噬菌体，例如，通过确定编码插入噬菌体基因组内的抗体或抗体片段的一个或多个基因的核酸序列。随后可以通过化学合成(例如，抗体片段，诸如scFv片段的化学合成)或通过重组表达(例如，全长抗体的重组表达)重新制备编码的抗体或抗体片段。
可以例如使用本领域中已知的放射性核素内化测定来评估制备的抗体或抗体片段的内化能力。举例来说，使用本文所描述或本领域中已知的体外展示技术鉴定的抗体(例如，抗CD45抗体)或抗体片段可以通过掺入放射性同位素来功能化，诸如18F、75Br、77Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、211At、67Ga、111In、99Tc、169Yb、186Re、64Cu、67Cu、177Lu、77As、72As、86Y、90Y、89Zr、212Bi、213Bi或225Ac。举例来说，放射性卤素，诸如18F、75Br、77Br、122I、123I、124I、125I、129I、131I、211At，可以使用含有亲电卤素试剂的珠粒，诸如聚苯乙烯珠粒(例如，碘化珠粒(Iodination Beads)；Thermo Fisher Scientific,Inc.,Cambridge,MA)掺入抗体或抗体片段中。可以将放射性标记的抗体、其片段或ADC与造血干细胞一起孵育，持续足以允许内化的时间(例如，在4℃下30分钟至6小时，诸如在4℃下1小时)。然后可以洗涤细胞以去除非内化抗体或其片段(例如，使用冷的(4℃)0.1M甘氨酸缓冲液(pH 2.8))。内化抗体或抗体片段可以通过检测与回收的洗涤缓冲液的发射辐射(例如，γ-辐射)进行比较的所得造血干细胞的发射辐射(例如，γ-辐射)来鉴定。前述内化测定也可以用于表征ADC。
可以使用重组方法和组合物来产生抗体，例如美国专利号4,816,567中所描述。在一个实施方案中，提供了编码本文所描述的抗CD45抗体的分离的核酸。此种核酸可以编码组成抗体VL的氨基酸序列和/或组成抗体VH的氨基酸序列(例如，抗体的轻链和/或重链)。在另一个实施方案中，提供了一种或多种包含此种核酸的载体(例如，表达载体)。在另一个实施方案中，提供了包含此种核酸的宿主细胞。在一个此类实施方案中，宿主细胞包含(例如，已经用以下转化)：(1)包含编码组成抗体VL的氨基酸序列和组成抗体VH的氨基酸序列的核酸的载体，或(2)包含编码组成抗体VL的氨基酸序列的核酸的第一载体和包含编码组成抗体VH的氨基酸序列的核酸的第二载体。在一个实施方案中，宿主细胞是真核的，例如，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。在一个实施方案中，提供了一种制造抗CLL-1抗体的方法，其中所述方法包括在适合于表达抗体的条件下培养包含编码如上文所提供的抗体的核酸的宿主细胞，以及任选地从宿主细胞(或宿主细胞培养基)回收抗体。
对于抗CD45抗体的重组产生，将编码例如上文所描述的抗体的核酸分离并插入一个或多个载体中，以在宿主细胞中进一步克隆和/或表达。可以使用常规程序将此种核酸容易地分离并进行测序(例如，通过使用能够特异性结合至编码抗体的重链和轻链的基因的寡核苷酸探针)。
适合于克隆或表达编码抗体的载体的宿主细胞包括本文所描述的原核或真核细胞。举例来说，可以在细菌中产生抗体，特别是在不需要糖基化和Fc效应子功能时。对于抗体片段和多肽在细菌中的表达，参见例如美国专利号5,648,237、5,789,199和5,840,523。(还参见Charlton,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,N.J.,2003),第245-254页，其描述抗体片段在大肠杆菌中的表达。)表达后，可以从细菌细胞糊的可溶性部分中分离抗体并且可以进一步纯化。
也可以使用脊椎动物细胞作为宿主。举例来说，适于在悬浮液中生长的哺乳动物细胞系可能是有用的。有用的哺乳动物宿主细胞系的其它实例是由SV40(COS-7)转化的猴肾CV1系；人胚胎肾系(293或293细胞，例如Graham等,J.Gen Virol.36:59(1977)中所描述)；幼仓鼠肾细胞(BHK)；小鼠支持细胞(TM4细胞，例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)中所描述)；猴肾细胞(CV1)；非洲绿猴肾细胞(VERO-76)；人宫颈癌细胞(HELA)；犬肾细胞(MDCK)；水牛大鼠肝细胞(BRL 3A)；人肺细胞(W138)；人肝细胞(Hep G2)；小鼠乳腺肿瘤(MMT 060562)；TRI细胞，例如Mather等,Annals N.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)中所描述；MRC 5细胞；和FS4细胞。其它有用的哺乳动物宿主细胞系包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞，包括DHFR-CHO细胞(Urlaub等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216(1980))；和骨髓瘤细胞系，诸如Y0、NS0和Sp2/0。对于适用于抗体产生的某些哺乳动物宿主细胞系的综述，参见例如Yazaki和Wu,Methods in Molecular Biology,第248卷(B.K.C.Lo编,Humana Press,Totowa,N.J.),第255-268页(2003)。在一个实施方案中，宿主细胞是真核的，例如，中国仓鼠卵巢(CHO)细胞或淋巴样细胞(例如，Y0、NS0、Sp20细胞)。
抗体药物缀合物
本文所描述的抗体及其抗原结合片段可以通过连接子缀合(连接)至细胞毒素。在一些实施方案中，细胞毒性分子缀合至本文所公开的细胞内化抗体或其抗原结合片段，使得在细胞摄取抗体或其片段后，细胞毒素可以接近其细胞内靶标并介导造血细胞死亡。任何数量的细胞毒素可以缀合至抗CD45抗体或其抗原结合片段，例如，1、2、3、4、5、6、7或8个。
适用于本文所描述的组合物和方法的细胞毒素包括DNA嵌入剂(例如，蒽环霉素)、能够破坏有丝分裂纺锤体的剂(例如，长春花生物碱、美登素、类美登素及其衍生物)、RNA聚合酶抑制剂(例如，鹅膏毒素，诸如α-鹅膏蕈碱及其衍生物)和能够破坏蛋白质生物合成的剂(例如，展现出rRNA N-糖苷酶活性的剂，诸如皂草素和蓖麻毒蛋白A链(ricin A-chain))，以及本领域中已知的其它剂。
细胞毒素
各种细胞毒素可以通过连接子缀合至抗CD45抗体或其抗原结合片段，以用于本文所描述的疗法中。特别地，抗CD45 ADC包括缀合(即，通过连接子共价连接)至细胞毒性部分(或细胞毒素)的抗体(或其抗原结合片段)。在各种实施方案中，细胞毒性部分在缀合物中结合时展现出降低的细胞毒性或不展现出细胞毒性，但在从连接子裂解后恢复细胞毒性。在各种实施方案中，细胞毒性部分维持细胞毒性而不从连接子裂解。在一些实施方案中，细胞毒性分子缀合至本文所公开的细胞内化抗体或其抗原结合片段，使得在细胞摄取抗体或其片段后，细胞毒素可以接近其细胞内靶标并例如介导T细胞死亡。
因此，本公开的ADC可以具有通式Ab-(Z-L-D)n，其中抗体或其抗原结合片段(Ab)通过化学部分(Z)缀合(共价连接)至连接子(L)，缀合至细胞毒性部分(“药物”，D)，每一者如本文所公开。
因此，抗体或其抗原结合片段可以缀合至如整数n所指示的数量的药物部分，整数n表示每个抗体的细胞毒素的平均数，其可以在例如约1至约20的范围内。在一些实施方案中，n为1至4。在一些实施方案中，n为1。在由偶联反应制备ADC中每个抗体的药物部分的平均数可以通过常规方式，诸如质谱法、ELISA测定和HPLC来表征。也可以根据n确定ADC的定量分布。在一些情况下，均匀的ADC(其中n为具有其它药物负载的ADC的某一值)的分离、纯化和表征可以通过诸如反相HPLC或电泳的方式来达成。
一些抗CD45 ADC可能受抗体上连接位点的数量所限制。举例来说，当连接为半胱氨酸硫醇时，抗体可以仅具有一个或数个半胱氨酸硫醇基团，或者可以仅具有一个或数个充分反应性硫醇基团，通过所述硫醇基团可以连接连接子。一般来说，抗体不含有许多可以连接至药物部分的游离和反应性半胱氨酸硫醇基团；抗体中的半胱氨酸硫醇残基主要作为二硫桥而存在。在某些实施方案中，可以用还原剂，诸如二硫苏糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)在部分或完全还原条件下使抗体还原，以产生反应性半胱氨酸硫醇基团。在某些实施方案中，较高药物负载(例如，n>5)可能导致聚集、不溶性、毒性或损失某些抗体-药物缀合物的细胞渗透性。
在某些实施方案中，在缀合反应期间缀合至抗体的药物部分的量少于理论最大值。抗体可以含有例如不与药物-连接子中间体或连接子试剂反应的赖氨酸残基，如下文所论述。只有最具反应性的赖氨酸基团可以与胺反应性连接子试剂反应。在某些实施方案中，使抗体经受变性条件以揭露反应性亲核基团，诸如赖氨酸或半胱氨酸。
ADC的负载(药物/抗体比率)可以按不同方式控制，例如通过：(i)限制药物-连接子中间体或连接子试剂相对于抗体的摩尔过量，(ii)限制缀合反应时间或温度，(iii)部分或限制半胱氨酸硫醇修饰的还原条件，(iv)通过重组技术工程化抗体的氨基酸序列以修饰半胱氨酸残基的数量和位置用于控制连接子-药物连接的数量和/或位置。
适用于本文所描述的组合物和方法的细胞毒素包括DNA嵌入剂(例如，蒽环霉素)、能够破坏有丝分裂纺锤体的剂(例如，长春花生物碱、美登素、类美登素及其衍生物)、RNA聚合酶抑制剂(例如，鹅膏毒素，诸如α-鹅膏蕈碱及其衍生物)和能够破坏蛋白质生物合成的剂(例如，展现出rRNA N-糖苷酶活性的剂，诸如皂草素和蓖麻毒蛋白A链)，以及本领域中已知的其它剂。
在一些实施方案中，细胞毒素是微管结合剂(例如，美登素或类美登素)、鹅膏毒素、假单胞菌外毒素A、德博甘宁、白喉毒素、皂草素、奥瑞他汀、蒽环霉素、加利车霉素、伊立替康、SN-38、多卡霉素、吡咯并苯并二氮杂卓、吡咯并苯并二氮杂卓二聚体、吲哚啉并苯并二氮杂卓、吲哚啉并苯并二氮杂卓二聚体、吲哚啉并苯并二氮杂卓假二聚体或其变体，或本文所描述或本领域中已知的另一种细胞毒性化合物。
在一些实施方案中，抗体-药物缀合物的细胞毒素是RNA聚合酶抑制剂。在一些实施方案中，RNA聚合酶抑制剂是鹅膏毒素或其衍生物。在一些实施方案中，本文所公开的抗体-药物缀合物的细胞毒素是鹅膏毒素或其衍生物，诸如α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素、鹅膏酰胺、鹅膏无毒环肽、鹅膏蕈酸、鹅膏无毒环肽原或其衍生物。
下文描述了关于可用于本公开的方法中的抗CD45 ADC中可以使用的细胞毒素的更多细节。
鹅膏毒素
本文所公开的方法和组合物包括ADC，所述ADC包含作为缀合至抗CD45抗体或其抗原结合片段的细胞毒素的RNA聚合酶抑制剂，例如，鹅膏毒素。在一些实施方案中，RNA聚合酶抑制剂是鹅膏毒素或其衍生物。在一些实施方案中，本文所公开的抗体-药物缀合物的细胞毒素是鹅膏毒素或其衍生物，诸如α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素、鹅膏酰胺、鹅膏无毒环肽、鹅膏蕈酸、鹅膏无毒环肽原或其衍生物。各种天然存在的鹅膏毒素的结构公开于例如Zanotti等,Int.J.Peptide Protein Res.30,1987,450-459中。
与本文所描述的组合物和方法联合可用的鹅膏毒素包括根据但不限于式(III)的化合物，包括α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素、鹅膏酰胺、鹅膏无毒环肽、鹅膏蕈酸或鹅膏无毒环肽原。式(III)如下：
Figure BDA0003880030040001021
其中R1为H、OH或ORA；
R2为H、OH或ORB；
当存在时，RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3为H或RD；
R4为H、OH、ORD或RD；
R5为H、OH、ORD或RD；
R6为H、OH、ORD或RD；
R7为H、OH、ORD或RD；
R8为OH、NH2或ORD；
R9为H、OH或ORD；
X为-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
RD为任选取代的烷基(例如，C1-C6烷基)、任选取代的杂烷基(例如，C1-C6杂烷基)、任选取代的烯基(例如，C2-C6烯基)、任选取代的杂烯基(例如，C2-C6杂烯基)、任选取代的炔基(例如，C2-C6炔基)、任选取代的杂炔基(例如，C2-C6杂炔基)、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。
举例来说，在一个实施方案中，与本文所描述的组合物和方法联合可用的鹅膏毒素包括根据式(IIIA)的化合物
Figure BDA0003880030040001031
其中R4、R5、X和R8各自如上文所定义。
举例来说，在一个实施方案中，与本文所描述的组合物和方法联合可用的鹅膏毒素包括根据下式(IIIB)的化合物：
Figure BDA0003880030040001032
其中R1为H、OH或ORA；
R2为H、OH或ORB；
当存在时，RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3为H或RD；
R4为H、OH、ORD或RD；
R5为H、OH、ORD或RD；
R6为H、OH、ORD或RD；
R7为H、OH、ORD或RD；
R8是OH、NH2或ORD；
R9为H、OH或ORD；
X为-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
RD为任选取代的烷基(例如，C1-C6烷基)、任选取代的杂烷基(例如，C1-C6杂烷基)、任选取代的烯基(例如，C2-C6烯基)、任选取代的杂烯基(例如，C2-C6杂烯基)、任选取代的炔基(例如，C2-C6炔基)、任选取代的杂炔基(例如，C2-C6杂炔基)、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。
在一个实施方案中，与本文所描述的组合物和方法联合可用的鹅膏毒素还包括根据下式(IIIC)的化合物：
Figure BDA0003880030040001051
其中R1为H、OH或ORA；
R2为H、OH或ORB；
当存在时，RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3为H或RD；
R4为H、OH、ORD或RD；
R5为H、OH、ORD或RD；
R6为H、OH、ORD或RD；
R7为H、OH、ORD或RD；
R8为OH、NH2或ORD；
R9为H、OH或ORD；
X为-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
RD为任选取代的烷基(例如，C1-C6烷基)、任选取代的杂烷基(例如，C1-C6杂烷基)、任选取代的烯基(例如，C2-C6烯基)、任选取代的杂烯基(例如，C2-C6杂烯基)、任选取代的炔基(例如，C2-C6炔基)、任选取代的杂炔基(例如，C2-C6杂炔基)、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。
在一个实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈碱。
举例来说，本文所描述的抗CD45抗体和抗原结合片段可以结合至鹅膏毒素(例如，式III、IIIA、IIIB或IIIC的鹅膏毒素)以形成由式Ab-Z-L-Am表示的缀合物，其中Ab为抗体或其抗原结合片段，L为连接子，Z为化学部分并且Am为鹅膏毒素。鹅膏毒素或其衍生物上的许多位置可以用作共价键结连接部分L并且因此键结抗体或其抗原结合片段的位置。下文描述了鹅膏毒素缀合的示例性方法和可用于此类过程的连接子。根据本文所描述的组合物和方法可用于缀合至抗体或抗原结合片段的示例性的含有连接子的鹅膏毒素Am-L-Z以本文所列的结构式(I)、(IA)、(IB)、(II)、(IIA)和(IIB)示出。
在一些实施方案中，鹅膏毒素-连接子缀合物Am-L-Z由式(I)表示
Figure BDA0003880030040001061
其中R1为H、OH、ORA或ORC；
R2为H、OH、ORB或ORC；
当存在时，RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3为H、RC或RD；
R4为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8为OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9为H、OH、ORC或ORD；
X为-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC为-L-Z；
RD为任选取代的烷基(例如，C1-C6烷基)、任选取代的杂烷基(例如，C1-C6杂烷基)、任选取代的烯基(例如，C2-C6烯基)、任选取代的杂烯基(例如，C2-C6杂烯基)、任选取代的炔基(例如，C2-C6炔基)、任选取代的杂炔基(例如，C2-C6杂炔基)、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；
L为连接子，诸如任选取代的亚烷基(例如，C1-C6亚烷基)、任选取代的亚杂烷基(C1-C6亚杂烷基)、任选取代的亚烯基(例如，C2-C6亚烯基)、任选取代的亚杂烯基(例如，C2-C6亚杂烯基)、任选取代的亚炔基(例如，C2-C6亚炔基)、任选取代的亚杂炔基(例如，C2-C6亚杂炔基)、任选取代的亚环烷基、任选取代的亚杂环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的亚杂芳基、肽、二肽、-(C＝O)-、二硫化物、腙或它们的组合；
并且
Z为由L上存在的反应性取代基与结合靶抗原(例如，CD45)的抗体或其抗原结合片段内存在的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分。
在一些实施方案中，Am恰好含有一个RC取代基。
在一些实施方案中，L-Z为
Figure BDA0003880030040001081
其中S为硫原子，其代表结合靶抗原(例如，来自半胱氨酸残基的-SH基团)的抗体或其抗原结合片段内存在的反应性取代基。
在一些实施方案中，L-Z为
Figure BDA0003880030040001082
在一些实施方案中，缀合物Am-L-Z-Ab由式IV、IVA或IVB之一表示：
Figure BDA0003880030040001091
其中X为S、SO或SO2，并且示出Ab以指示Ab连接点。
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab为
Figure BDA0003880030040001101
其中示出Ab以指示Ab连接点。
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab为
Figure BDA0003880030040001102
其中示出Ab以指示Ab连接点。
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab为
Figure BDA0003880030040001111
其中示出Ab以指示Ab连接点。
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab前体Am-L-Z'为
Figure BDA0003880030040001112
其中马来酰亚胺与抗体中半胱氨酸上发现的硫醇基团反应。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IA)表示
Figure BDA0003880030040001121
其中R1为H、OH、ORA或ORC；
R2为H、OH、ORB或ORC；
当存在时，RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3为H、RC或RD；
R4为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8为OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9为H、OH、ORC或ORD；
X为-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC为-L-Z；
RD为任选取代的烷基(例如，C1-C6烷基)、任选取代的杂烷基(例如，C1-C6杂烷基)、任选取代的烯基(例如，C2-C6烯基)、任选取代的杂烯基(例如，C2-C6杂烯基)、任选取代的炔基(例如，C2-C6炔基)、任选取代的杂炔基(例如，C2-C6杂炔基)、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；
L为连接子，诸如任选取代的亚烷基(例如，C1-C6亚烷基)、任选取代的亚杂烷基(C1-C6亚杂烷基)、任选取代的亚烯基(例如，C2-C6亚烯基)、任选取代的亚杂烯基(例如，C2-C6亚杂烯基)、任选取代的亚炔基(例如，C2-C6亚炔基)、任选取代的亚杂炔基(例如，C2-C6亚杂炔基)、任选取代的亚环烷基、任选取代的亚杂环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的亚杂芳基、肽、二肽、-(C＝O)-、二硫化物、腙或它们的组合；
Z为由L上存在的反应性取代基与结合CD45的抗体或其抗原结合片段内存在的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分；并且
其中Am恰好含有一个RC取代基。
在一些实施方案中，L-Z为
Figure BDA0003880030040001131
在一些实施方案中，L-Z为
Figure BDA0003880030040001132
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IB)表示
Figure BDA0003880030040001141
其中R1为H、OH、ORA或ORC；
R2为H、OH、ORB或ORC；
当存在时，RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成任选取代的5元杂环烷基；
R3为H、RC或RD；
R4为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8为OH、NH2、ORC、ORD、NHRC或NRCRD；
R9为H、OH、ORC或ORD；
X为-S-、-S(O)-或-SO2-；
RC为-L-Z；
RD为任选取代的烷基(例如，C1-C6烷基)、任选取代的杂烷基(例如，C1-C6杂烷基)、任选取代的烯基(例如，C2-C6烯基)、任选取代的杂烯基(例如，C2-C6杂烯基)、任选取代的炔基(例如，C2-C6炔基)、任选取代的杂炔基(例如，C2-C6杂炔基)、任选取代的环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的芳基或任选取代的杂芳基；
L为连接子，诸如任选取代的亚烷基(例如，C1-C6亚烷基)、任选取代的亚杂烷基(C1-C6亚杂烷基)、任选取代的亚烯基(例如，C2-C6亚烯基)、任选取代的亚杂烯基(例如，C2-C6亚杂烯基)、任选取代的亚炔基(例如，C2-C6亚炔基)、任选取代的亚杂炔基(例如，C2-C6亚杂炔基)、任选取代的亚环烷基、任选取代的亚杂环烷基、任选取代的亚芳基、任选取代的亚杂芳基、肽、二肽、-(C＝O)-、二硫化物、腙或它们的组合；
Z为由L上存在的反应性取代基与结合CD45的抗体或其抗原结合片段内存在的反应性取代基之间的偶联反应形成的化学部分；并且
其中Am恰好含有一个RC取代基。
在一些实施方案中，L-Z为
Figure BDA0003880030040001151
在一些实施方案中，L-Z为
Figure BDA0003880030040001152
在一些实施方案中，当存在时，RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成下式的5元杂环烷基：
Figure BDA0003880030040001161
其中Y为-(C＝O)-、-(C＝S)-、-(C＝NRE)-或-(CRERE')-；并且
RE和RE'各自独立地为任选取代的C1-C6亚烷基-RC、任选取代的C1-C6亚杂烷基-RC、任选取代的C2-C6亚烯基-RC、任选取代的C2-C6亚杂烯基-RC、任选取代的C2-C6亚炔基-RC、任选取代的C2-C6亚杂炔基-RC、任选取代的亚环烷基-RC、任选取代的亚杂环烷基-RC、任选取代的亚芳基-RC或任选取代的亚杂芳基-RC。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1为H、OH、ORA或ORC；
R2为H、OH、ORB或ORC；
当存在时，RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成：
Figure BDA0003880030040001162
R3为H或RC；
R4为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R5为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R6为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R7为H、OH、ORC、ORD、RC或RD；
R8为OH、NH2、ORC或NHRC；
R9为H或OH；
X为-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
其中RC和RD各自如上文所定义。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1为H、OH、ORA或ORC；
R2为H、OH、ORB或ORC；
当存在时，RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成：
Figure BDA0003880030040001171
R3为H或RC；
R4和R5各自独立地为H、OH、ORC、RC或ORD；
R6和R7各自为H；
R8为OH、NH2、ORC或NHRC；
R9为H或OH；
X为-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
其中RC如上文所定义。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1为H、OH或ORA；
R2为H、OH或ORB；
当存在时，RA和RB与它们所结合的氧原子一起组合形成：
Figure BDA0003880030040001181
R3、R4、R6和R7各自为H；
R5为ORC；
R8为OH或NH2；
R9为H或OH；
X为-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
其中RC如上文所定义。此类鹅膏毒素缀合物描述于例如美国专利申请公布号2016/0002298中，其公开内容以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1和R2各自独立地为H或OH；
R3为RC；
R4、R6和R7各自为H；
R5为H、OH或OC1-C6烷基；
R8为OH或NH2；
R9为H或OH；
X为-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
其中RC如上文所定义。此类鹅膏毒素缀合物描述于例如美国专利申请公布号2014/0294865中，其公开内容以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1和R2各自独立地为H或OH；
R3、R6和R7各自为H；
R4和R5各自独立地为H、OH、ORC或RC；
R8为OH或NH2；
R9为H或OH；
X为-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
其中RC如上文所定义。此类鹅膏毒素缀合物描述于例如美国专利申请公布号2015/0218220中，其公开内容以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(IA)或式(IB)表示，
其中R1和R2各自独立地为H或OH；
R3、R6和R7各自为H；
R4和R5各自独立地为H或OH；
R8为OH、NH2、ORC或NHRC；
R9为H或OH；
X为-S-、-S(O)-或-SO2-；并且
其中RC如上文所定义。此类鹅膏毒素缀合物描述于例如美国专利号9,233,173和9,399,681中以及US 2016/0089450中，每个文献的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，Am-L-Z'为
Figure BDA0003880030040001201
根据本文所描述的组合物和方法，可以用于缀合至抗体或其抗原结合片段的额外鹅膏毒素描述于例如WO 2016/142049、WO 2016/071856、WO 2017/149077、WO 2018/115466和WO 2017/046658中，每个文献的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，Am-L-Z由式(II)、式(IIA)或式(IIB)表示
Figure BDA0003880030040001211
其中X为S、SO或SO2；R1为H或通过化学部分Z共价结合至抗体或其抗原结合片段的连接子，所述化学部分Z由连接子上存在的反应性取代基Z'与抗体或其抗原结合片段内存在的反应性取代基之间的偶联反应形成；并且R2为H或通过化学部分Z共价结合至抗体或其抗原结合片段的连接子，所述化学部分Z由连接子上存在的反应性取代基Z'与抗体或其抗原结合片段内存在的反应性取代基之间的偶联反应形成；其中当R1为H时，R2为连接子，并且当R2为H时，R1为连接子。在一些实施方案中，R1为连接子并且R2为H，并且在一起作为L-Z的连接子和化学部分为
Figure BDA0003880030040001212
在一些实施方案中，L-Z为
Figure BDA0003880030040001221
在一些实施方案中，R1为连接子并且R2为H，并且在一起作为L-Z的连接子和化学部分为
Figure BDA0003880030040001222
在一个实施方案中，Am-L-Z-Ab为：
Figure BDA0003880030040001223
在一个实施方案中，Am-L-Z-Ab为：
Figure BDA0003880030040001224
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab前体(即，Am-L-Z')为以下之一：
Figure BDA0003880030040001231
其中马来酰亚胺与抗体中半胱氨酸上发现的硫醇基团反应。
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab为以下之一：
Figure BDA0003880030040001232
在一个实施方案中，Am-L-Z-Ab为：
Figure BDA0003880030040001233
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab前体(即，Am-L-Z')为以下之一：
Figure BDA0003880030040001234
其中马来酰亚胺与抗体中半胱氨酸上发现的硫醇基团反应。此类鹅膏毒素-连接子缀合物和包含鹅膏毒素-连接子缀合物的ADC公开于例如国际专利申请公布号WO2020/216947中，其全部内容以引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，Am-L-Z-Ab前体(即，Am-L-Z')为
Figure BDA0003880030040001241
在一些实施方案中，细胞毒素是α-鹅膏蕈碱。在一些实施方案中，α-鹅膏蕈碱通过连接子L连接至抗CD45抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，α-鹅膏蕈碱是式III的化合物。连接子L可以在数个可能的位置中的任一者(例如，R1-R9中的任一者)处连接至式III的α-鹅膏蕈碱，以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB的α-鹅膏蕈碱-连接子缀合物。在一些实施方案中，连接子包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施方案中，连接子包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。在一些实施方案中，连接子包括对氨基苄基(PAB)。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施方案中，连接子包括-((C＝O)(CH2)n-单元，其中n为1-6的整数。
在一些实施方案中，连接子包括-(CH2)n-单元，其中n为2-6的整数。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Cit-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Ala-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，在一起作为L-Z的连接子L和化学部分Z为
Figure BDA0003880030040001251
在一些实施方案中，细胞毒素是β-鹅膏蕈碱。在一些实施方案中，β-鹅膏蕈碱通过连接子L连接至抗CD45抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，β-鹅膏蕈碱是式III的化合物。连接子L可以在数个可能的位置中的任一者(例如，R1-R9中的任一者)处连接至式III的β-鹅膏蕈碱，以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB的β-鹅膏蕈碱-连接子缀合物。在一些实施方案中，连接子包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施方案中，连接子包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。在一些实施方案中，连接子包括对氨基苄基(PAB)。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施方案中，连接子包括-((C＝O)(CH2)n-单元，其中n为1-6的整数。
在一些实施方案中，连接子包括-(CH2)n-单元，其中n为2-6的整数。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Cit-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Ala-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，在一起作为L-Z的连接子L和化学部分Z为
Figure BDA0003880030040001252
在一些实施方案中，细胞毒素是γ-鹅膏蕈碱。在一些实施方案中，γ-鹅膏蕈碱通过连接子L连接至抗CD45抗体或其抗原结合片段。在一些实施方案中，γ-鹅膏蕈碱是式III的化合物。连接子L可以在数个可能的位置中的任一者(例如，R1-R9中的任一者)处连接至式III的γ-鹅膏蕈碱，以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB的γ-鹅膏蕈碱-连接子缀合物。在一些实施方案中，连接子包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施方案中，连接子包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。在一些实施方案中，连接子包括对氨基苄基(PAB)。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施方案中，连接子包括-((C＝O)(CH2)n-单元，其中n为1-6的整数。
在一些实施方案中，连接子包括-(CH2)n-单元，其中n为2-6的整数。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Cit-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Ala-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，在一起作为L-Z的连接子L和化学部分Z为
Figure BDA0003880030040001261
在一些实施方案中，细胞毒素是ε-鹅膏蕈碱。在一些实施方案中，ε-鹅膏蕈碱通过连接子L连接至抗CD45抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，ε-鹅膏蕈碱是式III的化合物。连接子L可以在数个可能的位置中的任一者(例如，R1-R9中的任一者)处连接至式III的ε-鹅膏蕈碱，以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB的ε-鹅膏蕈碱-连接子缀合物。在一些实施方案中，连接子包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施方案中，连接子包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。在一些实施方案中，连接子包括对氨基苄基(PAB)。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施方案中，连接子包括-((C＝O)(CH2)n-单元，其中n为1-6的整数。
在一些实施方案中，连接子包括-(CH2)n-单元，其中n为2-6的整数。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Cit-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Ala-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，在一起作为L-Z的连接子L和化学部分Z为
Figure BDA0003880030040001271
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏素。在一些实施方案中，鹅膏素通过连接子L连接至抗CD45抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，鹅膏素是式III的化合物。连接子L可以在数个可能的位置中的任一者(例如，R1-R9中的任一者)处连接至式III的鹅膏素，以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB的鹅膏素-连接子缀合物。在一些实施方案中，连接子包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施方案中，连接子包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。在一些实施方案中，连接子包括对氨基苄基(PAB)。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施方案中，连接子包括-((C＝O)(CH2)n-单元，其中n为1-6的整数。
在一些实施方案中，连接子包括-(CH2)n-单元，其中n为2-6的整数。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Cit-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Ala-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，在一起作为L-Z的连接子L和化学部分Z为
Figure BDA0003880030040001272
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏酰胺。在一些实施方案中，鹅膏酰胺通过连接子L连接至抗CD45抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，鹅膏酰胺是式III的化合物。连接子L可以在数个可能的位置中的任一者(例如，R1-R9中的任一者)处连接至式III的鹅膏酰胺，以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB的鹅膏酰胺-连接子缀合物。在一些实施方案中，连接子包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施方案中，连接子包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。在一些实施方案中，连接子包括对氨基苄基(PAB)。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施方案中，连接子包括-((C＝O)(CH2)n-单元，其中n为1-6的整数。
在一些实施方案中，连接子包括-(CH2)n-单元，其中n为2-6的整数。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Cit-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Ala-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，在一起作为L-Z的连接子L和化学部分Z为
Figure BDA0003880030040001281
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏无毒环肽。在一些实施方案中，鹅膏无毒环肽通过连接子L连接至抗CD45抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，鹅膏无毒环肽是式III的化合物。连接子L可以在数个可能的位置中的任一者(例如，R1-R9中的任一者)处连接至式III的鹅膏无毒环肽，以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB的鹅膏无毒环肽-连接子缀合物。在一些实施方案中，连接子包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施方案中，连接子包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。在一些实施方案中，连接子包括对氨基苄基(PAB)。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施方案中，连接子包括-((C＝O)(CH2)n-单元，其中n为1-6的整数。
在一些实施方案中，连接子包括-(CH2)n-单元，其中n为2-6的整数。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Cit-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Ala-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，在一起作为L-Z的连接子L和化学部分Z为
Figure BDA0003880030040001291
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏蕈酸。在一些实施方案中，鹅膏蕈酸通过连接子L连接至抗CD45抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，鹅膏蕈酸是式III的化合物。连接子L可以在数个可能的位置中的任一者(例如，R1-R9中的任一者)处连接至式III的鹅膏蕈酸，以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB的鹅膏蕈酸-连接子缀合物。在一些实施方案中，连接子包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施方案中，连接子包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。在一些实施方案中，连接子包括对氨基苄基(PAB)。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施方案中，连接子包括-((C＝O)(CH2)n-单元，其中n为1-6的整数。
在一些实施方案中，连接子包括-(CH2)n-单元，其中n为2-6的整数。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Cit-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Ala-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，在一起作为L-Z的连接子L和化学部分Z为
Figure BDA0003880030040001301
在一些实施方案中，细胞毒素是鹅膏无毒环肽原。在一些实施方案中，鹅膏无毒环肽原通过连接子L连接至抗CD45抗体或其抗原结合片段。在一些实施方式中，鹅膏无毒环肽原是式III的化合物。连接子L可以在数个可能的位置中的任一者(例如，R1-R9中的任一者)处连接至式III的鹅膏无毒环肽原，以提供式I、IA、IB、II、IIA或IIB的鹅膏无毒环肽原-连接子缀合物。在一些实施方案中，连接子包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施方案中，连接子包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。在一些实施方案中，连接子包括对氨基苄基(PAB)。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施方案中，连接子包括-((C＝O)(CH2)n-单元，其中n为1-6的整数。
在一些实施方案中，连接子包括-(CH2)n-单元，其中n为2-6的整数。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Cit-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Ala-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，在一起作为L-Z的连接子L和化学部分Z为
Figure BDA0003880030040001302
制造鹅膏毒素的合成方法描述于美国专利号9,676,702中，其以引用的方式并入本文中。
可以使用本领域中已知或本文所描述的缀合技术将用于本文所描述的组合物和方法的抗体和抗原结合片段缀合至鹅膏毒素，诸如α-鹅膏蕈碱或其变体。举例来说，识别并结合靶抗原(例如，CD45)的抗体及其抗原结合片段可以缀合至鹅膏毒素，诸如α-鹅膏蕈碱或其变体，如US 2015/0218220中所描述，这个文献关于例如鹅膏毒素，诸如α-鹅膏蕈碱及其变体，以及可以用于共价缀合的共价连接子的公开内容以引用的方式并入本文中。
奥瑞他汀
本文所描述的抗CD45抗体及其抗原结合片段可以缀合至作为奥瑞他汀的细胞毒素(美国专利号5,635,483、5,780,588)。奥瑞他汀是干扰微管动力学、GTP水解以及核和细胞分裂的抗有丝分裂剂(Woyke等(2001)Antimicrob.Agents and Chemother.45(12):3580-3584)并且具有抗癌(美国专利号5,663,149)和抗真菌活性(Pettit等(1998)Antimicrob.Agents Chemother.42:2961-2965)。(美国专利号5,635,483、5,780,588)。澳瑞他汀药物部分可以通过肽药物部分的N(氨基)末端或C(羧基)末端连接至抗体(WO 02/088172)。
示例性澳瑞他汀实施方案包括N-末端连接的单甲基澳瑞他汀药物部分DE和DF，公开于Senter等,Proceedings of the American Association for Cancer Research,第45卷,文摘号623,2004年3月28日呈现中，其公开内容以全文引用的方式明确并入。
一个示例性澳瑞他汀实施方案是MMAE，其中波浪线指示与抗体-连接子缀合物(-L-Z-Ab或-L-Z′，如本文所描述)的连接子共价连接的点。
Figure BDA0003880030040001311
另一个示例性澳瑞他汀实施方案是MMAF，其中波浪线指示与抗体-连接子缀合物(-L-Z-Ab或-L-Z′，如本文所描述)的连接子共价连接的点，如US 2005/0238649中所描述：
Figure BDA0003880030040001321
澳瑞他汀可以根据以下方法制备：美国专利号5,635,483；美国专利号5,780,588；Pettit等(1989)J.Am.Chem.Soc.111:5463-5465；Pettit等(1998)Anti-Cancer DrugDesign 13:243-277；Pettit,G.R.等Synthesis,1996,719-725；Pettit等(1996)J.Chem.Soc.Perkin Trans.15:859-863；以及Doronina(2003)Nat.Biotechnol.21(7):778-784。
类美登素
本文所描述的抗CD45抗体及其抗原结合片段可以缀合至作为微管结合剂的细胞毒素。在一些实施方案中，微管结合剂是美登素、类美登素或类美登素类似物。类美登素是结合微管并通过抑制微管蛋白聚合起作用的有丝分裂抑制剂。美登素首先从东非灌木齿叶美登木(Maytenus serrata)中分离出(美国专利号3,896,111)。随后，发现某些微生物也产生类美登素，诸如美登醇和C-3美登醇酯(美国专利号4,151,042)。合成美登醇及其衍生物和类似物公开于例如美国专利号4,137,230、4,248,870、4,256,746、4,260,608、4,265,814、4,294,757、4,307,016、4,308,268、4,308,269、4,309,428、4,313,946、4,315,929、4,317,821、4,322,348、4,331,598、4,361,650、4,364,866、4,424,219、4,450,254、4,362,663和4,371,533中。类美登素药物部分是抗体药物缀合物中有吸引力的药物部分，因为它们：(i)相对易于通过发酵或化学修饰、发酵产物的衍生来制备，(ii)易于用适合于通过非二硫化物连接子缀合至抗体的官能团进行衍生，(iii)在血浆中稳定，以及(iv)对多种肿瘤细胞系有效。
适合的类美登素的实例包括美登醇、合成美登醇以及美登醇类似物和衍生物的酯。本文包括抑制微管形成并且对哺乳动物细胞具有高毒性的任何细胞毒素，如类美登素、美登醇以及美登醇类似物和衍生物。
适合的美登醇酯的实例包括具有修饰的芳香族环的那些和在其它位置处具有修饰的那些。此类适合的类美登素公开于美国专利号4,137,230、4,151,042、4,248,870、4,256,746、4,260,608、4,265,814、4,294,757、4,307,016、4,308,268、4,308,269、4,309,428、4,313,946、4,315,929、4,317,821、4,322,348、4,331,598、4,361,650、4,362,663、4,364,866、4,424,219、4,450,254、4,322,348、4,362,663、4,371,533、5,208,020、5,416,064、5,475,092、5,585,499、5,846,545、6,333,410、7,276,497和7,473,796中，每个专利关于类美登素及其衍生物的公开内容以引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，本公开的抗体-药物缀合物(ADC)利用正式称为N2′-脱乙酰基-N2′-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素的含硫醇类美登素(DM1)作为细胞毒性剂。DM1由以下结构式V表示：
Figure BDA0003880030040001331
在另一个实施方案中，本公开的缀合物利用含硫醇类美登素N2′-脱乙酰基-N2′(4-甲基-4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(例如，DM4)作为细胞毒性剂。DM4由以下结构式VI表示：
Figure BDA0003880030040001341
另一种包含含有空间位阻硫醇键的侧链的类美登素是N2'-脱乙酰基-N-2'(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(称为DM3)，由以下结构式VII表示：
Figure BDA0003880030040001342
美国专利号5,208,020和7,276,497中教示的每种类美登素也可以用于本公开的缀合物中。在这方面，5,208,020和7,276,697的全部公开内容以引用的方式并入本文中。
类美登素上的许多位置可以用作共价键结连接部分，并且因此共价键结抗体或其抗原结合片段(-L-Z-Ab或-L-Z′，如本文所描述)的位置。举例来说，具有羟基的C-3位置、用羟甲基修饰的C-14位置、用羟基修饰的C-15位置和具有羟基的C-20位置都预期是有用的。在一些实施方案中，C-3位置用作共价键结连接子部分的位置，并且在一些特定实施方案中，美登醇的C-3位置用作共价键结连接部分的位置。本领域中已知有许多用于制造抗体-类美登素缀合物的连接基团，包括例如美国专利号5,208,020、6,441,163和EP专利号0425235B1；Chari等,Cancer Research 52:127-131(1992)；以及U.S.2005/0169933A1中公开的那些，这些文献的公开内容特此以引用的方式明确并入。额外的连接基团在本文中描述和举例说明。
本公开还包括类美登素和缀合物的各种异构体和混合物。本公开的某些化合物和缀合物可以呈各种立体异构体、对映异构体和非对映异构体形式存在。用于产生此类抗体-类美登素缀合物的若干描述在美国专利号5,208,020、5,416,064、6,333,410、6,441,163、6,716,821和7,368,565中提供，每个专利以全文引用的方式并入本文中。
蒽环霉素
在其它实施方案中，本文所描述的抗CD45抗体及其抗原结合片段可以缀合至作为蒽环霉素分子的细胞毒素。蒽环霉素是展现出细胞毒性活性的抗生素化合物。研究已经指示蒽环霉素可以通过许多不同机制操作来杀死细胞，所述机制包括：1)将药物分子嵌入细胞的DNA中，从而抑制DNA依赖性核酸合成；2)由自由基的药物产生，所述自由基然后与细胞大分子反应以引起细胞损伤；或3)药物分子与细胞膜相互作用[参见例如C.Peterson等,"Transport And Storage Of Anthracycline In Experimental Systems And HumanLeukemia",Anthracycline Antibiotics In Cancer Therapy；N.R.Bachur,"FreeRadical Damage"同上第97-102页]。由于它们具有细胞毒性的可能性，因此蒽环霉素已经用于治疗众多癌症，诸如白血病、乳腺癌、肺癌、卵巢腺癌和肉瘤[参见例如P.H-Wiernik,Anthracycline: Current Status and New Developments第11页]。常用的蒽环霉素包括多柔比星(doxorubicin)、表柔比星(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)和道诺霉素(daunomycin)。
蒽环霉素类似物多柔比星(ADRIAMYCINO)被认为通过酶类拓扑异构酶II的嵌入和进程抑制而与DNA相互作用，这种酶解开用于转录的DNA。多柔比星在已经破坏用于复制的DNA链之后稳定拓扑异构酶II复合物，防止DNA双螺旋再封闭，从而停止复制过程。多柔比星和道诺霉素(DAUNOMYCIN)是原型细胞毒性天然产物蒽环霉素化疗剂(Sessa等,(2007)Cardiovasc.Toxicol.7:75-79)。
常用的蒽环霉素包括多柔比星、表柔比星、伊达比星和道诺霉素。在一些实施方案中，细胞毒素是选自由道诺霉素、多柔比星、表柔比星和伊达比星组成的组的蒽环霉素。
蒽环霉素的代表性实例包括但不限于道诺霉素(柔红霉素(Cerubidine)；BedfordLaboratories)、多柔比星(阿霉素(Adriamycin)；Bedford Laboratories；也称作盐酸多柔比星、羟基道诺霉素和Rubex)、表柔比星(表阿霉素(Ellence)；Pfizer)和伊达比星(去甲氧柔红霉素(Idamycin)；Pfizer Inc.)。蒽环霉素类似物多柔比星(ADRIAMYCINO)被认为通过酶类拓扑异构酶II的嵌入和进程抑制而与DNA相互作用，这种酶解开用于转录的DNA。多柔比星在已经破坏用于复制的DNA链之后稳定拓扑异构酶II复合物，防止DNA双螺旋再封闭，从而停止复制过程。多柔比星和道诺霉素(DAUNOMYCIN)是原型细胞毒性天然产物蒽环霉素化疗剂(Sessa等,(2007)Cardiovasc.Toxicol.7:75-79)。
适用于本文的蒽环霉素的一个非限制性实例是PNU-159682(“PNU”)。PNU展现出相对于母体奈莫柔比星大3000倍的细胞毒性(Quintieri等,Clinical Cancer Research2005,11,1608-1617)。PNU由以下结构式表示：
Figure BDA0003880030040001361
蒽环霉素(诸如PNU)上的多个位置可以用作共价键结连接部分，并且因此共价键结如本文所描述的抗CD45抗体或其抗原结合片段的位置。举例来说，可以通过修饰将连接子引入羟甲基酮侧链。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的PNU衍生物：
Figure BDA0003880030040001371
其中波浪线指示与本文所描述的ADC的连接子共价连接的点。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的PNU衍生物：
Figure BDA0003880030040001372
其中波浪线指示与本文所描述的ADC的连接子共价连接的点。
苯并二氮杂卓细胞毒素
如本文所描述的抗CD45抗体及其抗原结合片段(包括例如双特异性和双互补位抗体)可以缀合至如本文所描述的包含苯并二氮杂卓部分(诸如PBD或IGN)的细胞毒素。
吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)
在其它实施方案中，本文所描述的抗CD45抗体或其抗原结合片段可以缀合至作为吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)的细胞毒素或包含PBD的细胞毒素。PBD是由某些放线菌产生的天然产物，并且已经显示是序列选择性DNA烷基化化合物。PBD细胞毒素包括但不限于蒽霉素(anthramycin)、二聚PBD，以及例如Hartley,JA(2011)The development ofpyrrolobenzodiazepines as antitumour agents.Expert Opin Inv Drug,20(6),733-744和Antonow D,Thurston DE(2011)Synthesis of DNA-interactive pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepines(PBDs).Chem Rev 111:2815-2864中公开的那些。
PBD具有以下一般结构：
Figure BDA0003880030040001381
它们在取代基的数量、类型和位置、芳香族(“A”)环和吡咯并(“C”)环以及C环的饱和度方面不同。在二氮杂卓B环中，在N10-C11位置处有亚胺(N＝C)、甲醇胺(NH-CH(OH))或甲醇胺甲基醚(NH-CH(OMe))。这个位置是负责DNA烷基化的亲电部分。所有已知的天然产物PBD在手性C11a位置处具有(S)构型，当从C环向A环观察时，这为它们提供了右向扭曲。这为与B型DNA的小沟的等螺旋性提供了适当的三维形状，使得在结合位点处紧密配合(Kohn,Antibiotics III.Springer-Verlag,New York,第3-11页(1975)；Hurley和Needham-VanDevanter,Acc.Chem.Res.,19)。
PBD在小沟中形成加合物的能力使它们能够干扰DNA加工，从而产生抗肿瘤活性。
先前已经公开了这些分子的生物活性可以通过将两个PBD单元通过它们的C8-羟基官能团经柔性亚烷基连接子连接在一起来增强(Bose,D.S.等,J.Am.Chem.Soc.,114,4939-4941(1992)；Thurston,D.E.等,J.Org.Chem.,61,8141-8147(1996))。PBD二聚体被认为形成序列选择性DNA损伤，诸如回文5'-Pu-GATC-Py-3'链间交联(Smellie,M.等,Biochemistry,42,8232-8239(2003)；Martin,C.等,Biochemistry,44,4135-4147)，这被认为主要负责它们的生物活性。Gregson等(Chem.Commun.1999,797-798；"compound 1")和Gregson等(J.Med.Chem.2001,44,1161-1174；"compound 4a")已经描述了有利的二聚吡咯并苯并二氮杂卓化合物。这种化合物也称为SG2000，具有以下结构式：
Figure BDA0003880030040001391
一般来说，对吡咯烷烯烃部分的修饰提供了共价键结连接部分，并且因此共价键结抗体或其抗原结合片段(分别为-L-Z'和-L-Z-Ab，如本文所描述)的手柄。或者，可以在位置N10处连接连接子。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的吡咯并苯并二氮杂卓二聚体：
Figure BDA0003880030040001392
其中n为2至5的整数。其中n为3的此式化合物称为DSB-120(Bose等,J.Am.Chem.Soc.1992,114,4939-4941)。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的吡咯并苯并二氮杂卓二聚体：
Figure BDA0003880030040001393
其中n为2至5的整数。其中n为3的此式化合物称为SJG-136(Gregson等,J.Med.Chem.2001,44,737-748)。其中n为5的此式化合物称为DRG-16(Gregson等,Med.Chem.2004；47:1161-1174)。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的吡咯并苯并二氮杂卓二聚体：
Figure BDA0003880030040001401
其中波浪线指示与本文所描述的ADC的连接子共价连接的点。基于这种PBD的ADC公开于例如Sutherland等,Blood 2013122:1455-1463中，其以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的PBD二聚体：
Figure BDA0003880030040001402
其中n为3或5，并且其中波浪线指示与本文所描述的ADC的连接子共价连接的点。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的吡咯并苯并二氮杂卓二聚体：
Figure BDA0003880030040001403
其中波浪线指示连接子的连接点。
在一些实施方案中，细胞毒素通过马来酰亚胺基己酰基连接子缀合至抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，连接子包含肽、寡糖、-(CH2)p-、-(CH2CH2O)q-、-(C＝O)(CH2)r-、-(C＝O)(CH2CH2O)t-、-(NHCH2CH2)u-、-PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB中的一者或多者，其中p、q、r、t和u中的每一者为1-12的整数，在每次出现时独立选择。
在一些实施方案中，连接子具有下式的结构：
Figure BDA0003880030040001411
其中R1为CH3(Ala)或(CH2)3NH(CO)NH2(Cit)。
在一些实施方案中，在缀合至抗体之前并包括反应性取代基Z'的连接子，在一起作为L-Z'，具有以下结构：
Figure BDA0003880030040001412
其中波浪线指示与细胞毒素(例如，PBD)的连接点。在某些实施方案中，R1为CH3。
在一些实施方案中，在缀合至抗体之前并包括反应性取代基Z'的细胞毒素-连接子缀合物，在一起作为Cy-L-Z'，具有以下结构式：
Figure BDA0003880030040001421
这种特定的细胞毒素-连接子缀合物被称为特司林(tesirine)(SG3249)，并且已经描述于例如Howard等,ACS Med.Chem.Lett.2016,7(11),983-987中，其公开内容以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，细胞毒素是由以下结构式表示的吡咯并苯并二氮杂卓二聚体：
Figure BDA0003880030040001422
其中波浪线指示连接子的连接点。
在一些实施方案中，在缀合至抗体之前并包括反应性取代基Z'的细胞毒素-连接子缀合物，在一起作为Cy-L-Z'，具有以下结构式：
Figure BDA0003880030040001423
这种特定的细胞毒素-连接子缀合物被称为他立林(talirine)，并且关于ADC伐达妥昔单抗-他立林(Vadastuximab talirine)(SGN-CD33A)已经描述于例如Mantaj等,Angewandte Chemie International Edition English 2017,56,462-488中，其公开内容以全文引用的方式并入本文中。
吲哚啉并苯并二氮杂卓(IGN)
在一些实施方案中，如本文所描述的结合CD45的抗体或其抗原结合片段可以缀合至作为吲哚啉并苯并二氮杂卓(“IGN”)的细胞毒素或包含IGN的细胞毒素。在一些实施方案中，IGN细胞毒素是吲哚啉并苯并二氮杂卓二聚体或吲哚啉并苯并二氮杂卓假二聚体。
吲哚啉并苯并二氮杂卓二聚体代表了对癌细胞具有高体外效力(低pM范围IC50值)的细胞毒素的相对较新的化学类别。与PBD二聚体SJG-136类似，IGN二聚体结合至DNA的小沟，并且通过二聚体中的两个亚胺官能团共价结合至鸟嘌呤残基，促使DNA交联。IGN二聚体(IGN 6；用苯基环置换PBD部分的亚甲基)在体外展示出与SJG-136相比约高10倍的效力，这可能是由于DNA IGN形成加合物的速率更快(参见例如Miller等,"A New Class ofAntibody-Drug Conjugates with Potent DNA Alkylating Activity"Mol.CancerTher.2016,15(8),1870-1878)。相比之下，IGN假二聚体包含单个反应性吲哚啉并苯并二氮杂卓亚胺；二聚细胞毒素中的第二吲哚啉并苯并二氮杂卓以还原(胺)形式存在。因此，IGN假二聚体通过二聚体中存在的单个亚胺部分使DNA烷基化，并且不交联DNA。
在一些实施方案中，细胞毒素是具有以下结构式的吲哚啉并苯并二氮杂卓(IGN)假二聚体：
Figure BDA0003880030040001441
其中波浪线指示连接子的连接点。
在一些实施方案中，在缀合至抗体之前并包括反应性取代基Z'的细胞毒素-连接子缀合物，在一起作为Cy-L-Z'，具有以下结构式：
Figure BDA0003880030040001442
这种细胞毒素-连接子缀合物在本文中称作DGN549，并且存在于ADC IMGN632中，这两者都公开于例如国际专利申请公布号WO2017004026中，其以引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，细胞毒素是具有下式结构的吲哚啉并苯并二氮杂卓假二聚体：
Figure BDA0003880030040001443
其中波浪线指示连接子的连接点。这种IGN假二聚体细胞毒素在本文中称作DGN462，公开于例如美国专利申请公布号20170080102中，其以引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，在缀合至抗体之前并包括化学部分Z的细胞毒素-连接子缀合物，在一起作为Cy-L-Z，具有以下结构：
Figure BDA0003880030040001451
其中波浪线指示与抗体(例如，抗CD45抗体或其片段)的连接点。这种细胞毒素-连接子缀合物存在于ADC IMGN779中，公开于例如美国专利申请公布号20170080102中，先前以引用的方式并入本文中。
加利车霉素
在其它实施方案中，本文所描述的抗CD45抗体及其抗原结合片段可以缀合至作为烯二炔抗肿瘤抗生素(例如，加利车霉素、奥佐米星(ozogamicin))的细胞毒素。加利车霉素家族的抗生素能够在亚皮摩尔浓度下产生双链DNA断裂。关于加利车霉素家族缀合物的制备，参见美国专利号5,712,374、5,714,586、5,739,116、5,767,285、5,770,701、5,770,710、5,773,001和5,877,296(全部归属于American Cyanamid Company)。可以使用的加利车霉素的结构类似物包括但不限于例如Hinman等,Cancer Research 53:3336-3342(1993)，Lode等,Cancer Research 58:2925-2928(1998)，以及归属于American Cyanamid的前述美国专利中公开的那些。
示例性加利车霉素指定为γ1，在本文中简称为γ，并且具有以下结构式：
Figure BDA0003880030040001461
在一些实施方案中，加利车霉素是γ-加利车霉素衍生物或N-乙酰基γ-加利车霉素衍生物。可以使用的加利车霉素的结构类似物包括但不限于例如Hinman等,CancerResearch 53:3336-3342(1993)，Lode等,Cancer Research 58:2925-2928(1998)，以及前述美国专利中公开的那些。加利车霉素含有甲基三硫化物部分，所述部分可以与适当硫醇反应形成二硫化物，同时引入可用于将加利车霉素衍生物通过连接子连接至如本文所描述的抗CD45抗体或其抗原结合片段的官能团。关于加利车霉素家族缀合物的制备，参见美国专利号5,712,374、5,714,586、5,739,116、5,767,285、5,770,701、5,770,710、5,773,001和5,877,296(全部归属于American Cyanamid Company)。可以使用的加利车霉素的结构类似物包括但不限于例如Hinman等,Cancer Research 53:3336-3342(1993)，Lode等,CancerResearch 58:2925-2928(1998)，以及归属于American Cyanamid的前述美国专利中公开的那些。
在一个实施方案中，如本文所公开的ADC的细胞毒素是由以下结构式表示的二硫化加利车霉素衍生物：
Figure BDA0003880030040001471
其中波浪线指示连接子的连接点。
核糖体失活蛋白(RIP)
在一些实施方案中，缀合至抗CD45抗体的细胞毒素是核糖体失活蛋白(RIP)。核糖体失活蛋白是通常不可逆地作用于核糖体的蛋白质合成抑制剂。RIP在植物以及细菌中发现。RIP的实例包括但不限于皂草素、蓖麻毒蛋白、相思豆毒蛋白(abrin)、白树花蛋白(gelonin)、假单胞菌外毒素(或外毒素A)、天花粉蛋白(trichosanthin)、丝瓜籽蛋白(luffin)、凝集素和白喉毒素。
可以用于本文所公开的ADC和方法的RIP的另一个实例是志贺毒素(Shiga toxin，Stx)或志贺样毒素(Shiga-like toxin，SLT)。志贺毒素(Stx)是在痢疾志贺氏菌(Shigelladysenteriae)1中和大肠杆菌的一些血清群(包括血清型O157:H7和O104:H4)(称为大肠杆菌中的Stx1)中发现的强效细菌毒素。除了Stx1之外，一些大肠杆菌菌株产生具有与Stx/Stx1相同的作用模式，但抗原性不同的第二种类型的Stx(Stx2)。SLT是由大肠杆菌产生的相似或相同毒素的历史术语。由于已经鉴定了每种毒素的亚型，因此现在将每组的原型毒素指定为Stx1a或Stx2a。Stx1a和Stx2a对各种细胞类型展现出细胞毒性的差异，以不同方式结合至受体类似物或模拟物，诱导不同的趋化因子反应，并且具有若干独特的结构特征。
志贺毒素家族的成员是指结构上和功能上相关的天然存在的蛋白质毒素家族的任何成员，特别是从痢疾志贺氏菌(S.dysenteriae)和大肠杆菌中分离的毒素(JohannesL,Romer W,Nat Rev Microbiol 8:105-16(2010))。举例来说，志贺毒素家族涵盖从痢疾志贺氏菌血清型1中分离的真志贺毒素(Stx)、从肠出血性大肠杆菌血清型中分离的志贺样毒素1变体(SLT1或Stx1或SLT-1或Slt-I)，以及从肠出血性大肠杆菌血清型中分离的志贺样毒素2变体(SLT2或Stx2或SLT-2)。SLT1与Stx只有一个残基不同，两者都被称作维罗细胞毒素(Verocytotoxin)或维罗毒素(Verotoxin)(VT)(O'Brien A等,Curr Top MicrobiolImmunol 180:65-94(1992))。尽管据报道SLT1和SLT2变体在氨基酸序列水平上只有约53-60％相似，但它们共享志贺毒素家族成员共有的酶促活性和细胞毒性机制(Johannes,NatRev Microbiol8:105-16(2010))。
志贺毒素家族的成员有两个亚单位；A亚单位和B亚单位。毒素的B亚单位结合至称为糖脂球形三酰神经酰胺(Gb3)的细胞膜组分。亚单位B与Gb3的结合得以诱导窄管膜内陷，这驱动了向内膜小管的形成以将细菌吸收至细胞中。志贺毒素(一种非成孔毒素)通过高尔基网络(Golgi network)和ER转移至细胞溶质中。从高尔基体将毒素运输至ER。志贺毒素通过与蓖麻毒蛋白类似的机制抑制靶细胞内的蛋白质合成(Sandvig和van Deurs(2000)EMBOJ 19(220:5943)。进入细胞后，毒素的A亚单位从核糖体60S亚单位的28S RNA中裂解出特定的腺嘌呤核碱基，从而停止蛋白质合成(Donohue-Rolfe等(2010)Reviews of InfectiousDiseases 13增刊4(7):S293-297)。
如本文所用，提及志贺家族毒素是指结构上和功能上相关的天然存在的蛋白质毒素的志贺毒素家族的任何成员(例如，从痢疾志贺氏菌和大肠杆菌中分离的毒素)。举例来说，志贺毒素家族涵盖从痢疾志贺氏菌血清型1中分离的真志贺毒素(Stx)、从肠出血性大肠杆菌血清型中分离的志贺样毒素1变体(SLT1或Stx1或SLT-1或Slt-I)，以及从肠出血性大肠杆菌血清型中分离的志贺样毒素2变体(SLT2或Stx2或SLT-2)。如本文所用，“来自志贺家族毒素的亚单位A”或“志贺家族毒素亚单位A”是指来自志贺毒素家族(包括志贺毒素或志贺样毒素)的任何成员的亚单位A。
在一个实施方案中，抗CD45 ADC包含缀合至具有细胞毒性活性，即，核糖体抑制活性的志贺家族毒素亚单位A或志贺家族毒素亚单位A的一部分的抗CD45抗体。志贺毒素亚单位A细胞毒性活性包括例如核糖体失活、蛋白质合成抑制、N-糖苷酶活性、多核苷酸:腺苷糖苷酶活性、RNA酶活性和DNA酶活性。志贺毒素效应子活性测定的非限制性实例测量蛋白质合成抑制活性、脱嘌呤活性、细胞生长抑制、细胞毒性、超螺旋DNA松弛活性和核酸酶活性。
在某些实施方案中，抗CD45抗体或其抗原结合片段缀合至具有核糖体抑制活性的志贺家族毒素A亚单位或其片段。志贺家族毒素亚单位A的一个实例是志贺样毒素1亚单位A(SLT-1A)，其氨基酸序列提供如下
KEFTLDFSTAKTYVDSLNVIRSAIGTPLQTISSGGTSLLMIDSGSGDNLFAVDVRGIDPEEGRFNNLRLIVERNNLYVTGFVNRTNNVFYRFADFSHVTFPGTTAVTLSGDSSYTTLQRVAGISRTGMQINRHSLTTSYLDLMSHSGTSLTQSVARAMLRFVTVTAEALRFRQIQRGFRTTLDDLSGRSYVMTAEDVDLTLNWGRLSSVLPDYHGQDSVRVGRISFGSINAILGSVALILNCHHHASRVARMASDEFPSMCPADGRVRGITHNKILWDSSTLGAILMRRTISS(SEQID NO:196)。
志贺家族毒素亚单位A的另一个实例是志贺毒素亚单位A(StxA)，其氨基酸序列提供如下
KEFTLDFSTAKTYVDSLNVIRSAIGTPLQTISSGGTSLLMIDSGTGDNLFAVDVRGIDPEEGRFNNLRLIVERNNLYVTGFVNRTNNVFYRFADFSHVTFPGTTAVTLSGDSSYTTLQRVAGISRTGMQINRHSLTTSYLDLMSHSGTSLTQSVARAMLRFVTVTAEALRFRQIQRGFRTTLDDLSGRSYVMTAEDVDLTLNWGRLSSVLPDYHGQDSVRVGRISFGSINAILGSVALILNCHHHASRVARMASDEFPSMCPADGRVRGITHNKILWDSSTLGAILMRRTISS(SEQID NO:197)。
志贺家族毒素亚单位A的另一个实例是志贺样毒素2亚单位A(SLT-2A)，其氨基酸序列提供如下
DEFTVDFSSQKSYVDSLNSIRSAISTPLGNISQGGVSVSVINHVLGGNYISLNVRGLDPYSERFNHLRLIMERNNLYVAGFINTETNIFYRFSDFSHISVPDVITVSMTTDSSYSSLQRIADLERTGMQIGRHSLVGSYLDLMEFRGRSMTRASSRAMLRFVTVIAEALRFRQIQRGFRPALSEASPLYTMTAQDVDLTLNWGRISNVLPEYRGEEGVRIGRISFNSLSAILGSVAVILNCHSTGSYSVRSVSQKQKTECQIVGDRAAIKVNNVLWEANTIAALLNRKPQDLTEPNQ(SEQ ID NO:198)。
在某些情况下，天然存在的志贺家族毒素亚单位A可以包含在其氨基末端含有约22个氨基酸的信号序列的前体形式，这些信号序列被去除以产生成熟的志贺家族毒素A亚单位并且是技术工作者可识别的。志贺家族毒素亚单位A的细胞毒性片段或截短型式也可以用于本文所公开的ADC和方法中。
在某些实施方案中，志贺家族毒素亚单位A与天然存在的志贺毒素A亚单位相差多达1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40个或更多个氨基酸残基(但不超过保留至少85％、90％、95％、99％或更高氨基酸序列同一性的氨基酸残基)。在一些实施方案中，志贺家族毒素亚单位A与天然存在的志贺家族毒素A亚单位相差多达1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、15、20、25、30、35、40个或更多个氨基酸残基(但不超过保留至少85％、90％、95％、99％或更高氨基酸序列同一性的氨基酸残基)。因此，来源于志贺毒素家族成员的A亚单位的多肽区可以包含对原始序列的添加、缺失、截短或其它改变，只要与天然存在的志贺家族毒素亚单位A维持至少85％、90％、95％、99％或更高氨基酸序列同一性即可。
因此，在某些实施方案中，志贺家族毒素亚单位A包含或基本上由与天然存在的志贺家族毒素亚单位A，诸如SLT-1A(SEQ ID NO:196)、StxA(SEQ ID NO:197)和/或SLT-2A(SEQ ID NO:198)具有至少55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％、98％、99％、99.5％或99.7％总体序列同一性的氨基酸序列组成。
在一些实施方案中，用于本文所提供的方法的CD45靶向部分是靶向CD45的工程化毒素体(ETB)。ETB公开于例如US2018/0057544A1、US2018/0258144A1、US2018/0258143A1、US2021/0008208A1和WO2014/164693A2中，每个文献以全文引用的方式并入本文中。
额外的细胞毒素
在其它实施方案中，本文所描述的抗CD45抗体及其抗原结合片段可以缀合至不同于或除上文所公开的那些细胞毒素之外的细胞毒素。适用于本文所描述的组合物和方法的额外细胞毒素包括但不限于5-乙炔基尿嘧啶、阿比特龙(abiraterone)、酰基富烯(acylfulvene)、腺环戊醇(adecypenol)、阿多来新(adozelesin)、阿地白介素(aldesleukin)、阿曲他明(altretamine)、安莫司汀(ambamustine)、阿米多西(amidox)、氨磷汀(amifostine)、氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)、氨柔比星(amrubicin)、安吖啶(amsacrine)、阿那格雷(anagrelide)、阿那曲唑(anastrozole)、穿心莲内酯(andrographolide)、血管生成抑制剂、安瑞克(antarelix)、抗背侧形态发生蛋白-1、抗雄激素、前列腺癌、抗雌激素、抗瘤酮(antineoplaston)、反义寡核苷酸、甘氨酸阿非迪霉素(aphidicolin glycinate)、凋亡基因调节剂、凋亡调控剂、无嘌呤酸(apurinic acid)、舒拉克林(asulacrine)、阿米司坦(atamestane)、阿曲莫司汀(atrimustine)、阿司他汀1(axinastatin 1)、阿司他汀2(axinastatin2)、阿司他汀3(axinastatin 3)、阿扎司琼(azasetron)、阿扎毒素(azatoxin)、重氮酪氨酸(azatyrosine)、巴卡亭III(baccatinIII)衍生物、巴拉醇(balanol)、巴马司他(batimastat)、BCR/ABL拮抗剂、苯并二氢卟吩(benzochlorin)、苄酰基星孢菌素(benzoylstaurosporine)、β内酰胺衍生物、β-艾塞因(beta-alethine)、贝塔克拉霉素B(betaclamycin B)、桦木酸(betulinic acid)、bFGF抑制剂、比卡鲁胺(bicalutamide)、比生群(bisantrene)、双吖丙啶基精胺(bisaziridinylspermine)、双萘法德(bisnafide)、比曲坦A(bistratene A)、比折来新(bizelesin)、贝伏特(breflate)、博来霉素A2(bleomycin A2)、博来霉素B2(bleomycinB2)、溴匹利明(bropirimine)、布朵替坦(budotitane)、丁硫氨酸亚砜亚胺(buthioninesulfoximine)、卡泊三醇(calcipotriol)、钙磷酸蛋白C(calphostin C)、喜树碱(camptothecin)衍生物(例如，10-羟基-喜树碱)、卡培他滨(capecitabine)、羧酰胺-氨基-三唑、羧酰胺三唑、卡折来新(carzelesin)、酪蛋白激酶抑制剂、粟精胺(castanospermine)、天蚕素B(cecropin B)、西曲瑞克(cetrorelix)、二氢卟吩(chlorin)、氯喹喔啉磺胺(chloroquinoxaline sulfonamide)、西卡前列素(cicaprost)、顺卟啉(cis-porphyrin)、克拉屈滨(cladribine)、克罗米芬(clomifene)及其类似物、克霉唑(clotrimazole)、克来霉素A(collismycin A)、克来霉素B(collismycin B)、考布他汀A4(combretastatin A4)、考布他汀(combretastatin)类似物、康纳宁(conagenin)、坎贝司丁816(crambescidin 816)、克立那托(crisnatol)、隐藻素8(cryptophycin 8)、隐藻素A(cryptophycin A)衍生物、库拉新A(curacin A)、环戊蒽醌(cyclopentanthraquinone)、环铂(cycloplatam)、赛普霉素(cypemycin)、阿糖胞苷烷磷酯(cytarabine ocfosfate)、溶细胞因子(cytolytic factor)、细胞抑制素(cytostatin)、达克利昔单抗(dacliximab)、地西他滨(decitabine)、脱氢膜海鞘素B(dehydrodidemnin B)、2'脱氧考福霉素(2'deoxycoformycin)(DCF)、德舍瑞林(deslorelin)、右异环磷酰胺(dexifosfamide)、右雷佐生(dexrazoxane)、右维拉帕米(dexverapamil)、地齐醌(diaziquone)、膜海鞘素B(didemnin B)、迪多克斯(didox)、二乙基去甲精胺(diethylnorspermine)、二氢-5-氮杂胞苷、二氢紫杉醇(dihydrotaxol)、二恶霉素(dioxamycin)、二苯基螺莫司汀(diphenylspiromustine)、圆皮海绵内酯(discodermolide)、二十二烷醇(docosanol)、多拉司琼(dolasetron)、脱氧氟尿苷(doxifluridine)、屈洛昔芬(droloxifene)、屈大麻酚(dronabinol)、倍癌霉素SA(duocarmycin SA)、依布硒啉(ebselen)、依莫司汀(ecomustine)、依地福辛(edelfosine)、依决洛单抗(edrecolomab)、依氟鸟氨酸(eflornithine)、榄香烯(elemene)、依地福尔(emitefur)、埃坡霉素(epothilone)、依普利酮(epithilone)、依立雄胺(epristeride)、雌莫司汀(estramustine)及其类似物、依托泊苷(etoposide)、4'-磷酸依托泊苷(也称为依托泊磷(etopofos))、依西美坦(exemestane)、法屈唑(fadrozole)、法扎拉滨(fazarabine)、维甲酰酚胺(fenretinide)、非格司亭(filgrastim)、非那雄胺(finasteride)、夫拉平度(flavopiridol)、氟卓斯汀(flezelastine)、氟甾酮(fluasterone)、氟达拉滨(fludarabine)、盐酸氟道诺霉素(fluorodaunorunicin hydrochloride)、福酚美克(forfenimex)、福美司坦(formestane)、福司曲星(fostriecin)、福莫司汀(fotemustine)、德克萨斯卟啉钆(gadoliniumtexaphyrin)、硝酸镓、加洛他滨(galocitabine)、加尼瑞克(ganirelix)、明胶酶抑制剂、吉西他滨(gemcitabine)、谷胱甘肽抑制剂、赫普磺胺(hepsulfam)、高三尖杉酯碱(homoharringtonine)(HHT)、金丝桃素(hypericin)、伊班膦酸(ibandronic acid)、艾多昔芬(idoxifene)、伊决孟酮(idramantone)、伊莫福新(ilmofosine)、伊洛马司他(ilomastat)、咪唑并吖啶酮(imidazoacridones)、咪喹莫特(imiquimod)、免疫刺激肽、碘苄胍(iobenguane)、碘阿霉素(iododoxorubicin)、甘薯苦醇(ipomeanol)、伊立替康、伊罗普拉(iroplact)、依索拉定(irsogladine)、异本格唑(isobengazole)、茉莉花内酯(jasplakinolide)、卡哈莱德F(kahalalide F)、三醋酸片螺素N(lamellarin-Ntriacetate)、兰瑞肽(lanreotide)、雷拉霉素(leinamycin)、来格司亭(lenograstim)、硫酸香菇多糖(lentinan sulfate)、莱托斯汀(leptolstatin)、来曲唑(letrozole)、亲脂性铂化合物、立索克林酰胺7(lissoclinamide 7)、络铂(lobaplatin)、洛美曲索(lometrexol)、氯尼达明(lonidamine)、洛索蒽醌(losoxantrone)、洛索立宾(loxoribine)、勒托替康(lurtotecan)、德克萨斯卟啉镥(lutetium texaphyrin)、利索茶碱(lysofylline)、马索罗酚(masoprocol)、乳腺丝抑蛋白(maspin)、基质金属蛋白酶抑制剂、美诺立尔(menogaril)、奈巴瑞酮(rnerbarone)、美替瑞林(meterelin)、蛋氨酸酶(methioninase)、甲氧氯普胺(metoclopramide)、MIF抑制剂、伊非司酮(ifepristone)、米替福新(miltefosine)、米立司亭(mirimostim)、光辉霉素(mithracin)、米托胍腙(mitoguazone)、二溴卫矛醇(mitolactol)、丝裂霉素(mitomycin)及其类似物、米托萘胺(mitonafide)、米托蒽醌(mitoxantrone)、莫法罗汀(mofarotene)、莫拉司亭(molgramostim)、美培西德B(mycaperoxide B)、米亚普龙(myriaporone)、N-乙酰地那林(N-acetyldinaline)、N-取代的苯甲酰胺、那法瑞林(nafarelin)、纳戈斯替(nagrestip)、纳帕维(napavin)、萘萜二醇(naphterpin)、那托司亭(nartograstim)、奈达铂(nedaplatin)、奈莫柔比星(nemorubicin)、奈立膦酸(neridronic acid)、尼鲁米特(nilutamide)、尼萨霉素(nisamycin)、尼多林(nitrullyn)、奥曲肽(octreotide)、奥齐恩酮(okicenone)、奥那司酮(onapristone)、昂丹司琼(ondansetron)、奥拉新(oracin)、奥马铂(ormaplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、氧诺霉素(oxaunomycin)、太平洋紫杉醇及其类似物、帕劳胺(palauamine)、棕榈酰根瘤菌素(palmitoylrhizoxin)、帕米膦酸(pamidronicacid)、人参三醇(panaxytriol)、帕诺米芬(panomifene)、副球菌素(parabactin)、帕折普汀(pazelliptine)、培门冬酶(pegaspargase)、培德新(peldesine)、戊聚糖多硫酸钠(pentosan polysulfate sodium)、喷司他丁(pentostatin)、喷曲唑(pentrozole)、全氟溴烷(perflubron)、培磷酰胺(perfosfamide)、苯连氮霉素(phenazinomycin)、毕西巴尼(picibanil)、吡柔比星(pirarubicin)、吡曲克辛(piritrexim)、鬼臼毒素(podophyllotoxin)、泊非霉素(porfiromycin)、嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂、雷替曲塞(raltitrexed)、根瘤菌素(rhizoxin)、罗谷亚胺(rogletimide)、罗希吐碱(rohitukine)、茜草酮B1(rubiginone B1)、鲁泊塞(ruboxyl)、沙芬戈(safingol)、圣特平(saintopin)、肌肉叶绿醇A(sarcophytol A)、沙格司亭(sargramostim)、索布佐生(sobuzoxane)、索纳明(sonermin)、膦门冬酸(sparfosic acid)、斯皮卡霉素D(spicamycin D)、螺莫司汀(spiromustine)、斯替匹酰胺(stipiamide)、索非诺辛(sulfinosine)、他莫司汀(tallimustine)、替加氟(tegafur)、替莫唑胺(temozolomide)、替尼泊苷(teniposide)、噻立拉斯汀(thaliblastine)、噻可拉林(thiocoraline)、替拉扎明(tirapazamine)、拓扑替康(topotecan)、托普森汀(topsentin)、曲西立滨(triciribine)、三甲曲沙(trimetrexate)、藜芦胺(veramine)、长春瑞滨(vinorelbine)、维西汀(vinxaltine)、伏氯唑(vorozole)、折尼铂(zeniplatin)和扎拉考布(zilascorb)等。
连接子
多种连接子可以用于将本文所描述的抗CD45抗体或其抗体片段缀合至细胞毒性分子。
如本文所用，术语“连接子”意指包含共价键或原子链的二价化学部分，所述共价键或原子链将抗CD45抗体共价连接至细胞毒素以形成本公开的抗体药物缀合物(ADC)(ADC；Ab-Z-L-D，其中D为细胞毒素)。适合的连接子具有两个反应性末端，一个用于缀合至抗体并且另一个用于缀合至细胞毒素。连接子的抗体缀合反应性末端(反应性部分，Z')通常是能够通过抗体上的半胱氨酸硫醇或赖氨酸胺基缀合至抗体的位点，并且因此通常是硫醇反应性基团，诸如双键(如在马来酰亚胺中)或离去基团，诸如氯、溴、碘或R-硫烷基，或胺反应性基团，诸如羧基；而连接子的抗体缀合反应性末端通常是能够通过与细胞毒素上的碱性胺基或羧基形成酰胺键来缀合至细胞毒素的位点，并且因此通常是羧基或碱性胺基。当术语“连接子”用于描述缀合形式的连接子时，一个或两个反应性末端将不存在(诸如反应性部分Z'，已经转化为化学部分Z)或不完整(诸如仅作为羧酸的羰基)，因为在连接子和/或细胞毒素之间以及连接子和/或抗体或其抗原结合片段之间形成键。此类缀合反应在下文进一步描述。
在一些实施方案中，连接子在细胞内条件下是可裂解的，使得连接子的裂解在细胞内环境中从抗体释放药物单元。在其它实施方案中，连接子单元是不可裂解的并且药物例如通过抗体降解而释放。可用于本发明ADC的连接子优选在细胞外稳定，防止ADC分子聚集并保持ADC在水性介质中和单体状态下自由溶解。在转运或递送至细胞中之前，ADC优选是稳定的并保持完整，即，抗体保持连接至药物部分。连接子在靶细胞外是稳定的，并且可以在细胞内以一定有效速率裂解。有效的连接子将：(i)维持抗体的特异性结合特性；(ii)允许缀合物或药物部分在细胞内递送；(iii)保持稳定和完整，即，不裂解，直至缀合物已经递送或转运至其靶向位点；以及(iv)维持细胞毒性部分的细胞毒性、细胞杀伤作用或细胞抑制作用。ADC的稳定性可以通过标准分析技术，诸如质谱法、HPLC和分离/分析技术LC/MS来测量。抗体和药物部分的共价连接需要连接子具有两个反应性官能团，即，在反应性意义上的二价。可用于连接两个或更多个功能性或生物活性部分的二价连接子试剂是已知的，诸如肽、核酸、药物、毒素、抗体、半抗原和报告基团，并且已经描述了它们所得缀合物的方法(Hermanson,G.T.(1996)Bioconjugate Techniques；Academic Press:New York,第234-242页)。
连接子包括可以例如通过酶促水解、光解、在酸性条件下水解、在碱性条件下水解、氧化、二硫化物还原、亲核裂解或有机金属裂解而裂解的那些(参见例如Leriche等,Bioorg.Med.Chem.,20:571-582,2012，这个文献关于适合于共价缀合的连接子的公开内容以引用的方式并入本文中)。适合的可裂解连接子可以包括例如化学部分，诸如肼、二硫化物、硫醚或二肽。
在酸性条件下可水解的连接子包括例如腙、缩氯基脲(semicarbazone)、缩氨基硫脲(thiosemicarbazone)、顺乌头酰胺(cis-aconitic amide)、原酸酯、缩醛、缩酮等。(参见例如美国专利号5,122,368、5,824,805、5,622,929；Dubowchik和Walker,1999,Pharm.Therapeutics 83:67-123；Neville等,1989,Biol.Chem.264:14653-14661，每个文献关于适合于共价缀合的连接子的公开内容以全文引用的方式并入本文中)。此类连接子在中性pH条件(诸如血液中的那些条件)下相对稳定，但在低于pH 5.5或5.0(溶酶体的近似pH)下不稳定。
在还原条件下可裂解的连接子包括例如二硫化物。多种二硫化物连接子在本领域中是已知的，包括例如可以使用SATA(N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰硫代乙酸酯)、SPDP(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯)、SPDB(N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丁酸酯)和SMPT(N-琥珀酰亚胺基-氧羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫代)甲苯)、SPDB和SMPT形成的那些(参见例如Thorpe等,1987,Cancer Res.47:5924-5931；Wawrzynczak等,Immunoconjugates:Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer(C.W.Vogel编,Oxford U.Press,1987))。还参见美国专利号4,880,935，每个文献关于适合于共价缀合的连接子的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
对酶促水解敏感的连接子可以是例如由细胞内肽酶或蛋白酶，包括但不限于溶酶体或核内体蛋白酶裂解的含肽连接子。使用治疗剂的细胞内蛋白水解释放的一个优点是药剂在缀合时通常被减毒并且缀合物的血清稳定性通常很高。在一些实施方案中，肽基连接子的长度为至少两个氨基酸或至少三个氨基酸。示例性氨基酸连接子包括二肽、三肽、四肽或五肽。适合肽的实例包括含有氨基酸，诸如缬氨酸、丙氨酸、瓜氨酸(Cit)、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸和甘氨酸的那些。包含氨基酸连接子组分的氨基酸残基包括天然存在的那些，以及次要氨基酸和/或非天然存在的氨基酸类似物，诸如瓜氨酸。示例性二肽包括缬氨酸-瓜氨酸(vc或val-cit)和丙氨酸-苯丙氨酸(af或ala-phe)。示例性三肽包括但不限于甘氨酸-缬氨酸-瓜氨酸(gly-val-cit)和甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸(gly-gly-gly)。在一些实施方案中，连接子包括二肽，诸如Val-Cit、Ala-Val或Phe-Lys、Val-Lys、Ala-Lys、Phe-Cit、Leu-Cit、Ile-Cit、Phe-Arg或Trp-Cit。含有二肽，诸如Val-Cit或Phe-Lys的连接子公开于例如美国专利号6,214,345中，这个专利关于适合于共价缀合的连接子的公开内容以全文引用的方式并入本文中。在一些实施方案中，连接子包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。
适用于将本文所描述的抗体或其抗体片段缀合至细胞毒性分子的连接子包括能够通过1,6-消除过程释放细胞毒素的那些连接子(“自牺牲”基团)。能够进行这种消除过程的化学部分包括对氨基苄基(PAB)基团、6-马来酰亚胺基己酸、pH敏感性碳酸酯以及如Jain等,Pharm.Res.32:3526-3540,2015中所描述的其它试剂，这个文献关于适合于共价缀合的连接子的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，连接子包括“自牺牲”基团，诸如前述PAB或PABC(对氨基苄氧基羰基)，公开于例如Carl等,J.Med.Chem.(1981)24:479-480；Chakravarty等(1983)J.Med.Chem.26:638-644；US 6214345；US20030130189；US20030096743；US6759509；US20040052793；US6218519；US6835807；US6268488；US20040018194；WO98/13059；US20040052793；US6677435；US5621002；US20040121940；WO2004/032828中。能够进行这种过程的其它此类化学部分(“自牺牲连接子”)包括亚甲基氨基甲酸酯和杂芳基，诸如氨基噻唑、氨基咪唑、氨基嘧啶等。含有此类杂环自牺牲基团的连接子公开于例如美国专利公布号20160303254和20150079114，以及美国专利号7,754,681；Hay等(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9:2237；US 2005/0256030；de Groot等(2001)J.Org.Chem.66:8815-8830；和US 7223837中。在一些实施方案中，二肽与自牺牲连接子组合使用。
适用于本文的连接子还可以包括一个或多个选自以下的基团：C1-C6亚烷基、C1-C6亚杂烷基、C2-C6亚烯基、C2-C6亚杂烯基、C2-C6亚炔基、C2-C6亚杂炔基、C3-C6亚环烷基、亚杂环烷基、亚芳基、亚杂芳基和它们的组合，其中每一者可以任选地被取代。此类基团的非限制性实例包括(CH2)p、(CH2CH2O)p和-(C＝O)(CH2)p-单元，其中p为1-6的整数，在每次出现时独立选择。
适合的连接子可以含有具有溶解度增强特性的基团。包括例如(CH2CH2O)p单元(聚乙二醇，PEG)的连接子可以增强溶解度，被氨基、磺酸、膦酸或磷酸残基取代的烷基链也可以如此。包括此类部分的连接子公开于例如美国专利号8,236,319和9,504,756中，每个专利关于适合于共价缀合的连接子的公开内容以全文引用的方式并入本文中。进一步的溶解度增强基团包括例如酰基和氨基甲酰基磺酰胺基团，具有以下结构：
Figure BDA0003880030040001591
其中a为0或1；并且
R10选自由以下组成的组：氢、C1-C24烷基、C3-C24环烷基、C1-C24(杂)芳基、C1-C24烷基(杂)芳基和C1-C24(杂)芳基烷基、C1-C24烷基、C3-C24环烷基、C2-C24(杂)芳基、C3-C24烷基(杂)芳基和C3-C24(杂)芳基烷基，其中每一者可以任选地被一个或多个选自O、S和NR11R12的杂原子取代和/或任选地被其间插，其中R11和R12独立地选自由氢和C1-C4烷基组成的组；或R10为细胞毒素，其中所述细胞毒素视情况通过间隔子部分连接至N。含有此类基团的连接子描述于例如美国专利号9,636,421和美国专利申请公布号2017/0298145中，这些专利关于适合于共价缀合至细胞毒素和抗体或其抗原结合片段的连接子的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，连接子可以包括以下一者或多者：肼、二硫化物、硫醚、二肽、对氨基苄基(PAB)基团、杂环自牺牲基团、任选取代的C1-C6烷基、任选取代的C1-C6杂烷基、任选取代的C2-C6烯基、任选取代的C2-C6杂烯基、任选取代的C2-C6炔基、任选取代的C2-C6杂炔基、任选取代的C3-C6环烷基、任选取代的杂环烷基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、溶解度增强基团、酰基、-(C＝O)-或-(CH2CH2O)p-基团，其中p为1-6的整数。本领域技术人员将认识到列出的一个或多个基团可以呈二价(双基)物质的形式存在，例如，C1-C6亚烷基等。
在一些实施方案中，连接子L包含部分*-L1L2-**，其中：
L1不存在或为-(CH2)mNR13C(＝O)-、-(CH2)mNR13-、-(CH2)mX3(CH2)m-、
Figure BDA0003880030040001601
L2不存在或为-(CH2)m-、-NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-X4、-(CH2)mNR13C(＝O)X4、-(CH2)mNR13C(＝O)-、-((CH2)mO)n(CH2)m-、-((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-、-NR13((CH2)mO)nX3(CH2)m-、-NR13((CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-、-X1X2C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)m(O(CH2)m)n-、-(CH2)mNR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mNR13(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mO)n(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)n-、-(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mNR13(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)-、-(CH2)m(O(CH2)m)nX3(CH2)m-、-(CH2)mX3((CH2)mO)n(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mO)n(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)n-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-((CH2)mO)n(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13-、-(CH2)mX3-、-C(R13)2(CH2)m-、-(CH2)mC(R13)2NR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)NR13-、-(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)-、-C(R13)2(CH2)mNR13C(＝O)(CH2)m-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(R13)2NR13-、-C(R13)2(CH2)mX3(CH2)m-、-(CH2)mX3(CH2)mC(R13)2NR13-、-C(R13)2(CH2)mOC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)O(CH2)mC(R13)2NR13-、-(CH2)mX3(CH2)mNR13-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nNR13-、-(CH2)mNR13-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nNR13-、-(CH2)m(O(CH2)m)nNR13-、-(CH2CH2O)n(CH2)m-、-(CH2)m(OCH2CH2)n、-(CH2)mO(CH2)m-、-(CH2)mS(＝O)2-、-(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mS(＝O)2-、-(CH2)mX3(CH2)mS(＝O)2-、-(CH2)mX2X1C(＝O)-、-(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)X2X1C(＝O)-、-(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mX2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)m(O(CH2)m)nX2X1C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mNR13C(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)mC(＝O)-、-(CH2)mX3(CH2)mC(＝O)NR13(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mC(＝O)X2X1C(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mX3(O(CH2)m)nC(＝O)-、-(CH2)mNR13C(＝O)((CH2)mO)n(CH2)m-、-(CH2)m(O(CH2)m)nC(＝O)NR13(CH2)m-、-(CH2)mNR13C(＝O)NR13(CH2)m-或-(CH2)mX3(CH2)mNR13C(＝O)-；
其中
X1为
Figure BDA0003880030040001611
X2为
Figure BDA0003880030040001621
X3为
Figure BDA0003880030040001622
并且
X4为
Figure BDA0003880030040001623
其中
R13在每次出现时独立地选自H和C1-C6烷基；
m在每次出现时独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9和10；
n在每次出现时独立地选自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13和14；并且
其中单星号(*)指示与细胞毒素(例如，鹅膏毒素)的连接点，并且双星号(**)指示与反应性取代基Z'或化学部分Z的连接点，前提条件是L1和L2两者都不缺失。
在一些实施方案中，连接子包括对氨基苄基(PAB)。在一个实施方案中，对氨基苄基位于细胞毒性药物与连接子中的蛋白酶裂解位点之间。在一个实施方案中，对氨基苄基是对氨基苄氧基羰基单元的一部分。在一个实施方案中，对氨基苄基是对氨基苄基酰胺基单元的一部分。
在一些实施方案中，连接子包含PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB。
在一些实施方案中，连接子包含以下一者或多者的组合：肽、寡糖、-(CH2)p-、-(CH2CH2O)p-、PAB、Val-Cit-PAB、Val-Ala-PAB、Val-Lys(Ac)-PAB、Phe-Lys-PAB、Phe-Lys(Ac)-PAB、D-Val-Leu-Lys、Gly-Gly-Arg、Ala-Ala-Asn-PAB或Ala-PAB。
在一些实施方案中，连接子包含-(C＝O)(CH2)p-单元，其中n为1-6的整数。
在一些实施方案中，连接子包含-(CH2)n-单元，其中n为2至6的整数。
在某些实施方案中，ADC的连接子为马来酰亚胺基己酰基-Val-Ala-对氨基苄基(mc-Val-Ala-PAB)。
在某些实施方案中，ADC的连接子为马来酰亚胺基己酰基-Val-Ala-对氨基苄基(mc-vc-PAB)。
在一些实施方案中，连接子包含
Figure BDA0003880030040001631
在一些实施方案中，连接子包含MCC(4-[N-马来酰亚胺基甲基]环己烷-1-甲酸酯)。
在一个具体实施方案中，连接子包含以下结构
Figure BDA0003880030040001641
其中波浪线指示与细胞毒素和反应性部分Z′的连接点。在另一个具体实施方案中，连接子包含以下结构
Figure BDA0003880030040001642
其中波浪线指示与细胞毒素和反应性部分Z′的连接点。此类PAB-二肽-丙酰基连接子公开于例如专利申请公布号WO2017/149077中，其以全文引用的方式并入本文中。此外，WO2017/149077中公开的细胞毒素以引用的方式并入本文中。可以用于将抗体或其抗原结合片段缀合至细胞毒性剂的连接子包括在连接子的一端共价结合至细胞毒性剂并且在连接子的另一端含有化学部分的那些连接子，所述化学部分由存在于连接子上的反应性取代基与存在于结合例如CD45的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基之间的偶联反应形成。可以存在于结合例如CD45的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基包括但不限于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基的羟基部分；赖氨酸残基的氨基部分；天冬氨酸和谷氨酸残基的羧基部分；和半胱氨酸残基的硫醇部分，以及非天然存在氨基酸的炔丙基、叠氮基、卤芳基(例如，氟芳基)、卤杂芳基(例如，氟杂芳基)、卤烷基和卤杂烷基部分。
可用于合成药物-抗体缀合物的连接子的实例包括含有亲电体的那些连接子，所述亲电体诸如迈克尔受体(Michael acceptor)(例如，马来酰亚胺)、活化酯、缺电子羰基化合物和醛等，其适合与存在于抗体或抗原结合片段内的亲核取代基，诸如胺和硫醇部分反应。举例来说，适用于合成药物-抗体缀合物的连接子包括但不限于4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-L-甲酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)、碘乙酸N-琥珀酰亚胺酯(SIA)、磺基-SMCC、间马来酰亚胺基苄酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)、磺基-MBS和碘乙酸琥珀酰亚胺酯等，描述于例如Liu等,18:690-697,1979中，这个文献关于用于化学缀合的连接子的公开内容以引用的方式并入本文中。额外的连接子包括不可裂解的马来酰亚胺基己酰基连接子，所述连接子特别可用于缀合微管破坏剂，诸如澳瑞他汀，由Doronina等,Bioconjugate Chem.17:14-24,2006描述，这个文献关于用于化学缀合的连接子的公开内容以引用的方式并入本文中。
本领域技术人员将认识到，本文所公开的任何一种或多种化学基团、部分和特征可以按多种方式组合以形成可用于缀合本文所公开的抗体和细胞毒素的连接子。与本文所描述的组合物和方法联合可用的其它连接子描述于例如美国专利申请公布号2015/0218220中，其公开内容以全文引用的方式并入本文中。
在某些实施方案中，作为连接子前体的中间体在适当条件下与药物部分反应。在某些实施方案中，在药物和/或中间体或连接子上使用反应性基团。药物与中间体或衍生药物之间的反应产物随后在适当条件下与抗体或抗原结合片段反应。或者，连接子或中间体可以首先与抗体或衍生抗体反应，然后与药物或衍生药物反应。现在将更全面地描述此类缀合反应。
许多不同的反应可用于将连接子或药物-连接子缀合物共价连接至抗体或其抗原结合片段。抗体分子上适合的连接点包括赖氨酸的胺基、谷氨酸和天冬氨酸的游离羧酸基、半胱氨酸的巯基和芳香族氨基酸的各种部分。举例来说，可以使用碳二亚胺反应进行非特异性共价连接，以将化合物上的羧基(或氨基)基团连接至抗体部分上的氨基(或羧基)基团。另外，双功能剂，诸如二醛或亚胺酯也可以用于将化合物上的氨基连接至抗体部分上的氨基。希夫碱反应(Schiff base reaction)也可用于药物与结合剂的连接。这种方法涉及对含有二醇或羟基的药物进行高碘酸盐氧化，从而形成醛，然后与结合剂反应。通过与结合剂的氨基形成希夫碱而发生连接。异硫氰酸酯也可以用作偶联剂以将药物共价连接至结合剂。其它技术是技术人员已知的并且在本公开的范围内。
可用于缀合至本文所描述的抗体或抗原结合片段的连接子包括但不限于含有通过如下表2中描绘的偶联反应形成的化学部分Z的连接子。曲线分别标示抗体或抗原结合片段和细胞毒性分子的连接点。
表2.在抗体-药物缀合物形成中通过偶联反应形成的示例性化学部分Z
Figure BDA0003880030040001661
Figure BDA0003880030040001671
Figure BDA0003880030040001681
Figure BDA0003880030040001691
本领域技术人员将认识到连接至连接子的反应性取代基Z'和抗体或其抗原结合片段上的反应性取代基参与共价偶联反应以产生化学部分Z，并且将认识到反应性部分Z'。因此，与本文所描述的方法联合可用的抗体-药物缀合物可以通过抗体或其抗原结合片段与连接子或细胞毒素-连接子缀合物的反应形成，如本文所描述，所述连接子或细胞毒素-连接子缀合物包括反应性取代基Z'，所述反应性取代基Z'适合与抗体或其抗原结合片段上的反应性取代基反应，以形成化学部分Z。
如表2中所描绘，连接子和抗体或其抗原结合片段上的适合反应性取代基的实例包括亲核体/亲电体对(例如，硫醇/卤烷基对、胺/羰基对或硫醇/α,β-不饱和羰基对等)、二烯/亲二烯体对(例如，叠氮化物/炔烃对或二烯/α,β-不饱和羰基对等)，等等。在反应性取代基之间形成化学部分Z的偶联反应包括但不限于硫醇烷基化、羟基烷基化、胺烷基化、胺或羟胺缩合、肼形成、酰胺化、酯化、二硫化物形成、环加成(例如，[4+2]狄尔斯-阿尔德环加成、[3+2]胡伊斯根环加成等)、亲核芳香族取代、亲电芳香族取代和本领域中已知或本文所描述的其它反应模态。优选地，连接子含有用于与抗体或其抗原结合片段上的亲核官能团反应的亲电官能团。
在一些实施方案中，Z'为-NR13C(＝O)CH＝CH2、-N3、-SH、-S(＝O)2(CH＝CH2)、-(CH2)2S(＝O)2(CH＝CH2)、-NR13S(＝O)2(CH＝CH2)、-NR13C(＝O)CH2R14、-NR13C(＝O)CH2Br、-NR13C(＝O)CH2I、-NHC(＝O)CH2Br、-NHC(＝O)CH2I、-ONH2、-C(O)NHNH2、-CO2H、-NH2、-NH(C＝O)、-NC(＝S)、
Figure BDA0003880030040001701
Figure BDA0003880030040001711
Figure BDA0003880030040001721
其中
R13在每次出现时独立地选自H和C1-C6烷基；
R14为-S(CH2)nCHR15NHC(＝O)R13；
R15为R13或-C(＝O)OR13；
R16在每次出现时独立地选自H、C1-C6烷基、F、Cl和-OH；
R17在每次出现时独立地选自H、C1-C6烷基、F、Cl、-NH2、-OCH3、-OCH2CH3、-N(CH3)2、-CN、-NO2和-OH；并且
R18在每次出现时独立地选自H、C1-C6烷基、F、经-C(＝O)OH取代的苄氧基、经-C(＝O)OH取代的苄基、经-C(＝O)OH取代的C1-C4烷氧基和经-C(＝O)OH取代的C1-C4烷基。
可以存在于本文所公开的抗CD45抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基包括但不限于亲核基团，诸如(i)N-末端胺基，(ii)侧链胺基，例如赖氨酸，(iii)侧链硫醇基，例如半胱氨酸，以及(iv)糖羟基或氨基，其中抗体是糖基化的。可以存在于本文所公开的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基包括但不限于丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸残基的羟基部分；赖氨酸残基的氨基部分；天冬氨酸和谷氨酸残基的羧基部分；和半胱氨酸残基的硫醇部分，以及非天然存在氨基酸的炔丙基、叠氮基、卤芳基(例如，氟芳基)、卤杂芳基(例如，氟杂芳基)、卤烷基和卤杂烷基部分。在一些实施方案中，存在于本文所公开的抗体或其抗原结合片段内的反应性取代基包括胺或硫醇部分。某些抗体具有可还原的链间二硫化物，即，半胱氨酸桥。可以通过用还原剂，诸如DTT(二硫苏糖醇)处理使得抗体具有反应性以与连接子试剂缀合。理论上，每个半胱氨酸桥将因此形成两个反应性硫醇亲核体。可以通过使赖氨酸与2-亚胺基硫杂环戊烷(特劳特氏试剂(Traut's reagent))反应将额外的亲核基团引入抗体中，以使胺转化为硫醇。可以通过引入一个、两个、三个、四个或更多个半胱氨酸残基(例如，制备包含一个或多个非天然半胱氨酸氨基酸残基的突变体抗体)将反应性硫醇基团引入抗体(或其片段)中。美国专利号7,521,541教示了通过引入反应性半胱氨酸氨基酸对抗体进行工程化。
在一些实施方案中，连接至连接子的反应性部分Z'是与存在于抗体上的亲电基团反应的亲核基团。抗体上的可用亲电基团包括但不限于醛和酮的羰基。亲核基团的杂原子可以与抗体上的亲电基团反应并且与抗体形成共价键。可用的亲核基团包括但不限于酰肼、肟、氨基、羟基、肼、缩氨基硫脲、肼羧酸酯和芳基酰肼。
在一些实施方案中，Z是存在于抗体或其抗原结合片段内的反应性亲核取代基(诸如胺和硫醇部分)与反应性亲电取代基Z'之间的反应产物。举例来说，Z'可以是迈克尔受体(例如，马来酰亚胺)、活化酯、缺电子羰基化合物和醛等。
举例来说，适合于合成ADC的连接子包括但不限于反应性取代基Z'，诸如马来酰亚胺或卤烷基。这些可以由以下试剂连接至连接子：诸如4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-L-甲酸琥珀酰亚胺酯(SMCC)、碘乙酸N-琥珀酰亚胺酯(SIA)、磺基-SMCC、间马来酰亚胺基苄酰基-N-羟基琥珀酰亚胺酯(MBS)、磺基-MBS和碘乙酸琥珀酰亚胺酯等，描述于例如Liu等,18:690-697,1979中，这个文献关于用于化学缀合的连接子的公开内容以引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，连接至连接子L的反应性取代基Z'是马来酰亚胺、叠氮化物或炔烃。含有马来酰亚胺的连接子的一个实例是不可裂解的基于马来酰亚胺基己酰基的连接子，它特别可用于缀合微管破坏剂，诸如奥瑞他汀。此类连接子由Doronina等,Bioconjugate Chem.17:14-24,2006描述，这个文献关于用于化学缀合的连接子的公开内容以引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，反应性取代基Z'是-(C＝O)-或-NH(C＝O)-，使得连接子可以通过分别由-(C＝O)-或-NH(C＝O)-基团与抗体或其抗原结合片段的氨基反应产生的酰胺或脲部分连接至抗体或其抗原结合片段。
在一些实施方案中，反应性取代基是N-马来酰亚胺基、卤化N-烷基酰胺基、磺酰氧基N-烷基酰胺基、碳酸酯基、磺酰基卤基、硫醇基或其衍生物、包含内部碳碳三键的炔基、(杂)环炔基、双环[6.1.0]壬-4-炔-9-基、包含内部碳碳双键的烯基、环烯基、四嗪基、叠氮基、膦基、氧化腈基、硝酮基、腈亚胺基、重氮基、酮基、(O-烷基)羟基氨基、肼基、卤化N-马来酰亚胺基、1,1-双(磺酰基甲基)甲基羰基或其消除衍生物、羰基卤基或联烯酰胺基，其中每一者可以任选地被取代。在一些实施方案中，反应性取代基包含环烯基、环炔基或任选取代的(杂)环炔基。
含有适合与抗体或其抗原结合片段上的反应性残基反应的反应性取代基Z′的鹅膏毒素-连接子缀合物的非限制性实例包括但不限于7'C-(4-(6-(马来酰亚胺基)己酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷羰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(3-羧基丙酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(2-溴乙酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(3-(吡啶-2-基二硫烷基)丙酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(4-(马来酰亚胺基)丁酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(马来酰亚胺基)乙酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(3-(马来酰亚胺基)丙酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(4-(马来酰亚胺基)丁酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(3-((6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(3-((6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(3-((4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(3-((6-((4-(马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(6-(2-(氨氧基)乙酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(4-(2-(氨氧基)乙酰胺基)丁酰胺基)乙基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(4-(2-(氨氧基)乙酰胺基)丁酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(6-(2-(氨氧基)乙酰胺基)己酰基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(6-(马来酰亚胺基)己酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；(R)-7'C-((3-((6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；(S)-7'C-((3-((6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-((6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰胺基)-S-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-((6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰胺基)-R-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-((4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)-S-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-((4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)-R-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-((6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(3-羧基丙酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(马来酰亚胺基)乙酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(3-(马来酰亚胺基)丙酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(4-(马来酰亚胺基)丁酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(2-(马来酰亚胺基)乙酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(4-(马来酰亚胺基)丁酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-((6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)乙基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-((4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)甲基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-(2-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)乙基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)乙基)氮杂环丁烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-(((2-(6-(马来酰亚胺基)-N-甲基己酰胺基)乙基)(甲基)氨基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-(((4-(6-(马来酰亚胺基)-N-甲基己酰胺基)丁基(甲基)氨基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((2-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)乙基)氮杂环丙烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((2-(2-(6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)乙基)氮杂环丙烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(6-(6-(2-(氨氧基)乙酰胺基)己酰胺基)己酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(1-(氨氧基)-2-氧代-6,9,12,15-四氧杂-3-氮杂十七烷-17-酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(2-(氨氧基)乙酰胺基)乙酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(3-(2-(氨氧基)乙酰胺基)丙酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(4-(2-(氨氧基)乙酰胺基)丁酰基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(6-(2-(氨氧基)乙酰胺基)己酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(2-(2-(氨氧基)乙酰胺基)乙酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(4-(2-(氨氧基)乙酰胺基)丁酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(20-(氨氧基)-4,19-二氧代-6,9,12,15-四氧杂-3,18-二氮杂二十烷基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-(((2-(6-(2-(氨氧基)乙酰胺基)-N-甲基己酰胺基)乙基)(甲基)氨基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-(((4-(6-(2-(氨氧基)乙酰胺基)-N-甲基己酰胺基)丁基)(甲基)氨基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-((6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)甲基)吡咯烷-1-基)-S-甲基)-鹅膏毒素；7'C-((3-((6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己酰胺基)-R-甲基)吡咯烷-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(2-溴乙酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(2-溴乙酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；7'C-((4-(2-(3-(吡啶-2-基二硫烷基)丙酰胺基)乙基)哌啶-1-基)甲基)-鹅膏毒素；6'O-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己基)-鹅膏毒素；6'O-(5-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)戊基)-鹅膏毒素；6'O-(2-((6-(马来酰亚胺基)己基)氧基)-2-氧代乙基)-鹅膏毒素；6'O-((6-(马来酰亚胺基)己基)氨甲酰基)-鹅膏毒素；6'O-((6-(4-((马来酰亚胺基)甲基)环己烷甲酰胺基)己基)氨甲酰基)-鹅膏毒素；6'O-(6-(2-溴乙酰胺基)己基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(6-(叠氮基)己酰胺基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(己-5-酰基氨基)哌啶-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；7'C-(4-(2-(6-(6-(马来酰亚胺基)己酰胺基)己酰胺基)乙基)哌嗪-1-基)-鹅膏毒素；6'O-(6-(6-(11,12-二脱氢-5,6-二氢-二苯并[b,f]氮杂环辛四烯-5-基)-6-氧代己酰胺基)己基)-鹅膏毒素；6'O-(6-(己-5-酰基氨基)己基)-鹅膏毒素；6'O-(6-(2-(氨氧基)乙酰基酰胺基)己基)-鹅膏毒素；6'O-((6-氨氧基)己基)-鹅膏毒素；以及6'O-(6-(2-碘乙酰胺基)己基)-鹅膏毒素。
本领域技术人员将认识到，连接子反应性取代基结构在与抗体或其抗原结合片段缀合之前包括作为基团Z'的马来酰亚胺。与本文所描述的组合物和方法联合可用的前述连接子部分和鹅膏毒素-连接子缀合物等描述于例如美国专利申请公布号2015/0218220和专利申请公布号WO2017/149077中，每个文献的公开内容以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施方案中，连接子反应性取代基结构L-Z'在与抗体或其抗原结合片段缀合之前是：
Figure BDA0003880030040001781
在一些实施方案中，本文所公开的鹅膏毒素缀合至具有下式的连接子反应性部分-L-Z′：
Figure BDA0003880030040001782
在一些实施方案中，本文所公开的鹅膏毒素缀合至具有下式的连接子反应性部分-L-Z′：
Figure BDA0003880030040001791
在一些实施方案中，ADC包含通过连接子和化学部分Z缀合至本文所公开的式III、IIIA或IIIB中任一者的鹅膏毒素的抗CD45抗体。在一些实施方案中，连接子包括肼、二硫化物、硫醚或二肽。在一些实施方案中，连接子包括选自Val-Ala和Val-Cit的二肽。在一些实施方案中，连接子包括对氨基苄基(PAB)。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Cit-Val。在一些实施方案中，连接子包括部分PAB-Ala-Val。在一些实施方案中，连接子包括-((C＝O)(CH2)n-单元，其中n为1-6的整数。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Cit-Val-((C＝O)(CH2)n-。
在一些实施方案中，连接子包括-(CH2)n-单元，其中n为2-6的整数。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Cit-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，连接子为-PAB-Ala-Val-((C＝O)(CH2)n-。在一些实施方案中，连接子为-(CH2)n-。在一些实施方案中，连接子为-((CH2)n-，其中n为6。
在一些实施方案中，化学部分Z选自表2。在一些实施方案中，化学部分Z为
Figure BDA0003880030040001792
其中S为硫原子，其代表结合CD45(例如，来自半胱氨酸残基的-SH基团)的抗体或其抗原结合片段内存在的反应性取代基。
在一些实施方案中，在一起作为L-Z的连接子L和化学部分Z为
Figure BDA0003880030040001801
抗体-药物缀合物的制备
在本文所公开的式I的ADC中，抗CD45抗体或其抗原结合片段通过本文所公开的连接子L和化学部分Z缀合至一个或多个细胞毒性药物部分(D)，例如，每个抗体约1个至约20个药物部分。本公开的ADC可以通过数种途径，采用本领域技术人员已知的有机化学反应、条件和试剂来制备，包括：(1)抗体或其抗原结合片段的反应性取代基与二价连接子试剂反应以形成如上文所描述的Ab-Z-L，继而与药物部分D反应；或(2)药物部分的反应性取代基与二价连接子试剂反应以形成D-L-Z′，继而与如上文所描述的抗体或其抗原结合片段的反应性取代基反应以形成式D-L-Z-Ab，诸如Am-Z-L-Ab的ADC。本文描述了用于制备ADC的额外方法。
在另一个方面，抗CD45抗体或其抗原结合片段具有一个或多个赖氨酸残基，所述赖氨酸残基可以被化学修饰以引入一个或多个巯基。然后如上文所描述通过巯基的硫原子缀合形成ADC。可以用于修饰赖氨酸的试剂包括但不限于S-乙酰基硫代乙酸N-琥珀酰亚胺酯(SATA)和2-亚胺基硫杂环戊烷盐酸盐(特劳特氏试剂)。
在另一个方面，抗CD45抗体或其抗原结合片段可以具有一个或多个碳水化合物基团，所述碳水化合物基团可以被化学修饰以具有一个或多个巯基。然后如上文所描述通过巯基的硫原子缀合形成ADC。
在又一个方面，抗CD45抗体或其抗原结合片段可以具有一个或多个碳水化合物基团，所述碳水化合物基团可以被氧化以提供醛(-CHO)基团(参见例如Laguzza等,J.Med.Chem.1989,32(3),548-55)。然后如上文所描述通过相应的醛缀合形成ADC。用于修饰蛋白质以连接或缔合细胞毒素的其它方案描述于Coligan等,Current Protocols inProtein Science,第2卷,John Wiley&Sons(2002)中，其以引用的方式并入本文中。
用于将连接子-药物部分缀合至细胞靶向蛋白，诸如抗体、免疫球蛋白或其片段的方法见于例如美国专利号5,208,020、美国专利号6,441,163、WO2005037992、WO2005081711和WO2006/034488中，所有文献特此以全文引用的方式明确并入。
或者，可以制得包含抗体和细胞毒性剂的融合蛋白，例如，通过重组技术或肽合成。DNA的长度可以包含编码缀合物的两个部分的各自的区域，这两个部分彼此邻近或由编码不破坏缀合物的所需特性的连接子肽的区域隔开。
可以向患者(例如，罹患免疫疾病或癌症的人类患者)以多种剂型施用本文所描述的ADC。举例来说，可以向罹患免疫疾病或癌症的患者以水溶液，诸如含有一种或多种药学上可接受的赋形剂的水溶液形式施用本文所描述的ADC。用于本文所描述的组合物和方法的适合的药学上可接受的赋形剂包括粘度调节剂。可以使用本领域中已知的技术对水溶液进行灭菌。
通过将此种ADC与一种或多种任选的药学上可接受的载体(Remington'sPharmaceutical Sciences第16版,Osol,A.编(1980))混合，以冻干制剂或水溶液的形式制备包含如本文所描述的抗CD45ADC的药物制剂。药学上可接受的载体在所采用的剂量和浓度下一般对接受体是无毒的，并且包括但不限于：缓冲剂，诸如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(小于约10个残基)的多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成盐抗衡离子，诸如钠；金属络合物(例如，Zn-蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，诸如聚乙二醇(PEG)。
实施例
提出以下实施例以便为本领域普通技术人员提供可以如何使用、制备和评价本文所描述的组合物和方法的描述，并且旨在纯粹例示本发明且不旨在限制发明者认为是其发明的范围。
实施例1：通过CD45-ADC单一疗法使小鼠HSC耗竭
同种异体造血干细胞移植(allo-HSCT)是用于恶性和非恶性血液病症的潜在治愈性治疗。在allo-HSCT之前用于患者准备或调理的当前方案限制了这种治愈性程序的使用，这归因于方案相关的死亡率和发病率，包括器官毒性、不孕症和继发性恶性病的风险。这极大地限制了allo-HSCT在恶性和非恶性疾患中的使用。
为了解决这些问题，开发了抗体药物缀合物(ADC)以提供全强度调理的益处，从而去除致病细胞，同时降低治疗相关的不良事件的严重度。为了模拟这些更安全的替代性调理策略，开发了一种靶向小鼠CD45的ADC，对所述ADC进行工程化以具有快速清除性，从而提供一种作为单剂进行清髓的易于转化的方法。
评估了一种经过工程化以具有短半衰期的抗小鼠CD45 ADC(104(S239C N297AIHH)-PBD)作为单剂(即，不存在额外调理剂，诸如免疫抑制剂)在小鼠中实现造血干细胞移植(HSCT)的能力。抗CD45ADC含有缀合至抗体S239C位点的吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)细胞毒素。
首先，在未操纵的C57BL/6小鼠中评价CD45-ADC以确定清髓剂量并确立药代动力学。第0天给与CD45-ADC(0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg)或同种型ADC阴性对照(3mg/kg)。随后，第2天收集骨髓并且通过流式细胞术评估HSC耗竭，如图1A中所示。
如图1B和1D中所示，CD45-ADC使长期HSC和淋巴细胞耗竭。外周淋巴细胞在施用3mg/kg CD45-ADC后第9天达到最低点，指示被CD45-ADC有效耗竭。3mg/kg CD45-ADC在C57Bl/6小鼠中的半衰期为1.7小时(图1C)。
如图1E中所示，相对于未处理的小鼠，用CD45-ADC处理的小鼠骨髓中的WBC、淋巴细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞大量耗竭。另外，LSK(Lin-Sca-1+c-Kit+)细胞、ST-HSC和LT-HSC都被CD45-ADC耗竭(图1F)。
截至施用后第7天观察到用0.3mg/kg或1mg/kg CD45-ADC处理后WBC、嗜中性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞的剂量反应性耗竭，截至第21天反弹至基线水平(图1G)。截至施用后第7天用0.3mg/kg或1mg/kg CD45-ADC处理后，还观察到RBC和血小板的短暂减少(图1H)。
这些结果指示，单剂量的CD45-ADC有效地使鼠类HSC、WBC、淋巴细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞耗竭。
实施例2：用CD45-ADC单一疗法调理后的鼠类同类移植
在同类自体小鼠移植模型中移植前评价实施例1中确定的CD45-ADC用于调理的最佳剂量。将C57Bl/6小鼠用单剂量的9Gy TBI、同种型ADC(3mg/kg)或CD45-ADC(0.3mg/kg、1mg/kg或3mg/kg)进行调理并移植来自B6.SJL(B6 CD45.1+)小鼠的全骨髓。9Gy TBI用作常规调理阳性对照。在16周内评估外周血嵌合体。
植入测定的结果示于图2A-2D中，这些图显示了在骨髓移植后第4周、第8周、第12周和第16周每个处理组中的总体供体嵌合百分比(图2A)、骨髓嵌合百分比(图2B)、B细胞嵌合百分比(图2C)和T细胞嵌合百分比(图2D)。
用3mg/kg CD45-ADC调理的小鼠在移植后16周内达成>85％的总体外周供体嵌合，与用9Gy TBI调理的小鼠相当(图2A)。如图2B-2D中所示，在16周时的外周供体植入是多系的，在T细胞、B细胞和骨髓细胞区室中观察到重建。
这些结果指示，CD45-ADC能够在鼠类模型中进行同类移植。
实施例3：用CD45-ADC单一疗法调理后的鼠类次要错配移植
在同种异体、次要组织相容性抗原错配的HSCT模型中评价抗CD45-ADC(104-PBD)。在用收集自汇集的Balb/c CD45.1+供体的2x107个全骨髓细胞移植前向DBA/2小鼠施用单剂量的3mg/kg同种型ADC或3mg/kg CD45-ADC。9Gy TBI用作常规调理阳性对照。在16周内评估外周血嵌合。
植入测定的结果示于图3A-3D中，这些图显示了在骨髓移植后第4周、第8周、第12周和第16周每个处理组中的总体供体嵌合百分比(图3A)、骨髓嵌合百分比(图3B)、B细胞嵌合百分比(图3C)和T细胞嵌合百分比(图3D)。
用3mg/kg CD45-ADC调理的小鼠在移植后16周内达成≥95％的供体嵌合(图3A)。用匹配剂量的同种型ADC处理是无效的。如图3B-3D中所示，在16周时的外周供体植入是多系的，在T细胞、B细胞和骨髓细胞区室中观察到重建。
实施例4：用CD45-ADC单一疗法调理后的完全错配同种异体移植
为了确定单剂量的CD45-ADC(104-PBD)是否足以在完全错配同种异体HSCT模型中实现供体嵌合，向C57BL/6小鼠(H2-b)施用单剂量的CD45-ADC(4mg/kg或5mg/kg)或同种型ADC(4mg/kg或5mg/kg)，然后移植来自汇集的Balb/c CD45.1+(H-2d)供体的4x107个全骨髓细胞。9Gy TBI用作常规调理阳性对照。在16周内评估外周血嵌合。本研究中使用的抗体是抗CD45抗体(104S239C/IHH Ab)，所述抗体针对快速清除(T1/2＝1.7h)进行工程化，以在调理后能够进行HSCT。这种抗体缀合至PBD。
植入测定的结果示于图4A-4D中，这些图显示了在骨髓移植后第4周和第8周每个处理组中的总体供体嵌合百分比(图4A)、骨髓嵌合百分比(图4B)、B细胞嵌合百分比(图4C)和T细胞嵌合百分比(图4D)。
如图4A中所示，单剂量的CD45-ADC是完全清髓性的并且在完全错配allo-HSCT模型中实现完全嵌合。如图4B-4D中所示，在8周时的外周供体植入是多系的，在T细胞、B细胞和骨髓细胞区室中观察到重建。
用5mg/kg剂量的CD45-ADC重复前述研究并且在第22周监测供体嵌合。单剂量的5mg/kg CD45-ADC用于调理C57BL/6宿主(H-2b,CD45.2+)以移植来自CByJ.SJL(B6)供体(H-2d,CD45.1+)的细胞。匹配剂量的同种型ADC(Iso-ADC)用作阴性对照，而9Gy TBI用作常规调理阳性对照。向调理过的小鼠移植4x107个全BM细胞并且在22周内评估外周血嵌合。在22周时，在接受体的脾、骨髓和胸腺中评价供体造血细胞嵌合。
在完全错配的Balb/c→C57Bl/6allo-HSCT模型中，用单剂量的5mg/kg CD45-ADC作为单剂调理接受体小鼠具有良好耐受性并且能够实现完全同种异体供体嵌合(n＝2个独立实验)。在第4周用CD45-ADC调理的小鼠中观察到外周血嵌合并维持到第22周(图1)。在T细胞、B细胞和骨髓细胞区室中观察到多系重建，在每个区室中观察到>90％供体嵌合，从而指示HSC植入。这些结果与9Gy TBI阳性对照中观察到的嵌合相当。用匹配剂量的非靶向同种型ADC处理是无效的(图4E)。对于所有组，骨髓中的干细胞嵌合与外周嵌合相匹配。第22周在CD45-ADC与TBI调理之间的脾和胸腺供体免疫细胞重建是类似的(图4E)，证明CD45-ADC有效地使次级淋巴器官中的宿主淋巴细胞耗竭，同时保留宿主胸腺支持移植后源自供体的T细胞重新产生的能力。
总之，用CD45-ADC调理具有良好耐受性、完全清髓性，并且在完全错配allo-HSCT模型中作为单剂实现完全嵌合。这种用于调理的靶向方法可以改善同种异体和半相合HSCT的安全性和可用性。
实施例5.离体HSC杀伤测定
在小鼠HSC中评估CD45-ADC(104-PBD)进行的离体杀伤，这些HSC已经谱系耗竭并且在含干细胞因子(SCF)的培养基中培养。评估随ADC浓度而变的CD45活骨髓(BM)细胞计数、Lin-BM总细胞计数和LKS(Lin-Sca-1+c-Kit+)BM总细胞计数。评估同种型ADC(“Iso-ADC”)和未缀合的抗CD45抗体(“裸露的CD45”)作为比较物。
如图5中所示，CD45-ADC在Ms Lin耗竭的LKS细胞中展现出最强效的杀伤。这些结果指示，CD45 ADC在体外以EC50 2.8x10-13杀死小鼠造血细胞。
实施例6.鼠类抗CD45 ADC在B6小鼠中的PK
为了评估一定剂量范围内的CD45 ADC(104-PBD)在小鼠中的PK，向C57BL/6雌性小鼠静脉内施用3mg/kg(QDx1)、3mg/kg(Q2Dx)或6mg/kg(QDx1)剂量的CD45-ADC。然后确定随施用后小时数而变的CD45-ADC的血浆药物浓度。
如图6中所示，单剂量的3mg/kg CD45-ADC在C57Bl/6小鼠中的半衰期为1.4小时，分次Q2D剂量的3mg/kg CD45-ADC的半衰期为6.07小时，并且单剂量的6mg/kg CD45-ADC的半衰期为3.88小时。
实施例7.CD45-ADC调理能够在次要错配模型中作为单剂进行移植
在同种异体、次要组织相容性抗原错配的HSCT模型中评价抗CD45-ADC(104-PBD)。在用收集自CByJ.SJL(B6)-Ptprca/J(CD45.1)供体的2x107个全骨髓细胞移植前向DBA/2(CD45.2)小鼠静脉内施用单剂量的3mg/kg同种型ADC或3mg/kg CD45-ADC。在ADC施用后两天施用移植。9Gy TBI用作常规调理阳性对照。在16周内评估外周血嵌合，包括CD11b+、B220+和CD3+细胞的百分比。评估HSC耗竭，包括LSK(Lin-Sca-1+c-Kit+)、ST-HSC和LT-HSC细胞的水平。处理组汇总于表3中。
表3.研究设计
Figure BDA0003880030040001871
植入测定的结果示于图7A-7C中。每个处理组中的外周血嵌合程度(对于B220+、CD3+和CD11b+外周细胞)示于图7A和7B中。这些结果指示，单剂量的3mg/kg CD45-ADC作为单剂在次要错配模型中实现完全嵌合。特别地，在用IRR、作为单剂的CD45-ADC或与抗CD4和抗CD8抗体组合施用的CD45-ADC处理的小鼠中，在16周时达成大于99％的供体CD11b+和B220+外周血嵌合。
LSK(Lin-Sca-1+c-Kit+)细胞、ST-HSC和LT-HSC的耗竭程度示于图7C中。对于测试的所有条件，在ADC施用后第3天达成骨髓中LT-HSC的耗竭(>90％)。相对于Iso-ADC，在施用CD45-ADC后也达成ST-HSC的较大耗竭。
这些结果指示，单剂量的CD45 ADC在3mg/kg下在次要错配移植中实现完全供体嵌合。
实施例8.在完全同种异体错配小鼠模型(CByJ.SJL(B6)-Ptprca/J→B6)中用较高剂量水平的CD45-ADC作为单剂进行调理
在完全错配同种异体HSC移植小鼠模型中评估用较高剂量水平的单剂量CD45-ADC(104-PBD)进行的调理。向C57BL/6小鼠(CD45.2)接受体施用单剂量的CD45-ADC(3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg或6mg/kg)或同种型ADC(3mg/kg、4mg/kg、5mg/kg或6mg/kg)，然后移植来自CByJ.SJL(B6)-Ptprca/J(CD45.1)供体的4x107个全骨髓细胞。9Gy TBI用作常规调理阳性对照。还评估在Q2Dx2给药时程下以3mg/kg进行的给药。第4周评估外周血嵌合。处理组汇总于表4中。
表4.研究设计
Figure BDA0003880030040001881
Figure BDA0003880030040001891
植入测定的结果示于图8A-8C中。LSK(Lin-Sca-1+c-Kit+)细胞、ST-HSC和LT-HSC的耗竭程度示于图8A中。对于测试的所有条件，在ADC施用后第3天骨髓中的LT-HSC耗竭(>95％)。相对于同种型ADC，在施用CD45-ADC后也达成ST-HSC的较大耗竭。
供体嵌合的总体水平示于图8B中并且每个处理组中的外周血嵌合程度(对于B220+、CD3+和CD11b+外周细胞)示于图8C中。在施用CD45-ADC(5或6mg/kg单剂量，3mg/kgQ2Dx2)后第4周达成大于90％的供体嵌合。此外，在施用CD45-ADC(5或6mg/kg单剂量，3mg/kg Q2Dx2)后第4周达成大于90％的供体B细胞和骨髓嵌合以及大于80％的T细胞嵌合。
这些结果指示，单剂量的CD45 ADC以≥5mg/kg单剂量在小鼠中在完全错配移植中实现完全供体嵌合。
表5：序列汇总
Figure BDA0003880030040001892
Figure BDA0003880030040001901
Figure BDA0003880030040001911
Figure BDA0003880030040001921
Figure BDA0003880030040001931
Figure BDA0003880030040001941
Figure BDA0003880030040001951
Figure BDA0003880030040001961
Figure BDA0003880030040001971
Figure BDA0003880030040001981
Figure BDA0003880030040001991
Figure BDA0003880030040002001
Figure BDA0003880030040002011
Figure BDA0003880030040002021
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Figure BDA0003880030040002051
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Figure BDA0003880030040002081
Figure BDA0003880030040002091
Figure BDA0003880030040002101
Figure BDA0003880030040002111
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Figure BDA0003880030040002191
Figure BDA0003880030040002201
Figure BDA0003880030040002211
Figure BDA0003880030040002221
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Figure BDA0003880030040002301
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Figure BDA0003880030040002361
Figure BDA0003880030040002371
其它实施方案
本说明书中提及的所有出版物、专利和专利申请以引用的方式并入本文中，引用的程度如同每个独立的出版物或专利申请具体地和单独地指示以引用的方式并入一样。
尽管已经结合其具体的实施方案描述本发明，但应了解，能够进行进一步修改，并且本申请旨在涵盖大体上符合本发明的原理并包括虽然偏离本发明但属于本发明所属领域内的已知或常用惯例并且可以应用于上文中阐述和权利要求书的范围所列出的必要特征中的任何变型、用途或变更。
其它实施方案在权利要求书内。
序列表
<110> 美真达治疗公司(MAGENTA THERAPEUTICS, INC.)
<120> 用于同种异体移植的组合物和方法
<130> M103034 2195WO (0576.7)
<140>
<141>
<150> 63/062,845
<151> 2020-08-07
<150> 63/978,141
<151> 2020-02-18
<160> 198
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1145
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
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Lys Glu Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met Ile Phe Gln Arg Lys Val
945 950 955 960
Lys Val Ile Val Met Leu Thr Glu Leu Lys His Gly Asp Gln Glu Ile
965 970 975
Cys Ala Gln Tyr Trp Gly Glu Gly Lys Gln Thr Tyr Gly Asp Ile Glu
980 985 990
Val Asp Leu Lys Asp Thr Asp Lys Ser Ser Thr Tyr Thr Leu Arg Val
995 1000 1005
Phe Glu Leu Arg His Ser Lys Arg Lys Asp Ser Arg Thr Val Tyr
1010 1015 1020
Gln Tyr Gln Tyr Thr Asn Trp Ser Val Glu Gln Leu Pro Ala Glu
1025 1030 1035
Pro Lys Glu Leu Ile Ser Met Ile Gln Val Val Lys Gln Lys Leu
1040 1045 1050
Pro Gln Lys Asn Ser Ser Glu Gly Asn Lys His His Lys Ser Thr
1055 1060 1065
Pro Leu Leu Ile His Cys Arg Asp Gly Ser Gln Gln Thr Gly Ile
1070 1075 1080
Phe Cys Ala Leu Leu Asn Leu Leu Glu Ser Ala Glu Thr Glu Glu
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Val Val Asp Ile Phe Gln Val Val Lys Ala Leu Arg Lys Ala Arg
1100 1105 1110
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Val Ile Ala Ser Thr Tyr Pro Ala Gln Asn Gly Gln Val Lys Lys
1130 1135 1140
Asn Asn His Gln Glu Asp Lys Ile Glu Phe Asp Asn Glu Val Asp
1145 1150 1155
Lys Val Lys Gln Asp Ala Asn Cys Val Asn Pro Leu Gly Ala Pro
1160 1165 1170
Glu Lys Leu Pro Glu Ala Lys Glu Gln Ala Glu Gly Ser Glu Pro
1175 1180 1185
Thr Ser Gly Thr Glu Gly Pro Glu His Ser Val Asn Gly Pro Ala
1190 1195 1200
Ser Pro Ala Leu Asn Gln Gly Ser
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<210> 3
<211> 1192
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 3
Met Thr Met Tyr Leu Trp Leu Lys Leu Leu Ala Phe Gly Phe Ala Phe
1 5 10 15
Leu Asp Thr Glu Val Phe Val Thr Gly Gln Ser Pro Thr Pro Ser Pro
20 25 30
Thr Gly Val Ser Ser Val Gln Thr Pro His Leu Pro Thr His Ala Asp
35 40 45
Ser Gln Thr Pro Ser Ala Gly Thr Asp Thr Gln Thr Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Ala Ala Asn Ala Lys Leu Asn Pro Thr Pro Gly Ser Asn Ala Ile Ser
65 70 75 80
Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Ser Glu Thr Thr Thr Leu Ser Pro Ser Gly
85 90 95
Ser Ala Val Ile Ser Thr Thr Thr Ile Ala Thr Thr Pro Ser Lys Pro
100 105 110
Thr Cys Asp Glu Lys Tyr Ala Asn Ile Thr Val Asp Tyr Leu Tyr Asn
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Glu Cys Lys Asn Ala Ser Val Ser Ile Ser His Asn Ser Cys Thr Ala
165 170 175
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180 185 190
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195 200 205
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225 230 235 240
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245 250 255
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260 265 270
Thr Asp Phe Gly Ser Pro Gly Glu Pro Gln Ile Ile Phe Cys Arg Ser
275 280 285
Glu Ala Ala His Gln Gly Val Ile Thr Trp Asn Pro Pro Gln Arg Ser
290 295 300
Phe His Asn Phe Thr Leu Cys Tyr Ile Lys Glu Thr Glu Lys Asp Cys
305 310 315 320
Leu Asn Leu Asp Lys Asn Leu Ile Lys Tyr Asp Leu Gln Asn Leu Lys
325 330 335
Pro Tyr Thr Lys Tyr Val Leu Ser Leu His Ala Tyr Ile Ile Ala Lys
340 345 350
Val Gln Arg Asn Gly Ser Ala Ala Met Cys His Phe Thr Thr Lys Ser
355 360 365
Ala Pro Pro Ser Gln Val Trp Asn Met Thr Val Ser Met Thr Ser Asp
370 375 380
Asn Ser Met His Val Lys Cys Arg Pro Pro Arg Asp Arg Asn Gly Pro
385 390 395 400
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405 410 415
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420 425 430
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435 440 445
Gly Glu Pro Phe Ile Leu His His Ser Thr Ser Tyr Asn Ser Lys Ala
450 455 460
Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ile Val Thr Ser Ile Ala Leu
465 470 475 480
Leu Val Val Leu Tyr Lys Ile Tyr Asp Leu His Lys Lys Arg Ser Cys
485 490 495
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515 520 525
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530 535 540
Ser Ile Pro Arg Val Phe Ser Lys Phe Pro Ile Lys Glu Ala Arg Lys
545 550 555 560
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565 570 575
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595 600 605
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625 630 635 640
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645 650 655
Glu Gly Thr Arg Ala Phe Gly Asp Val Val Val Lys Ile Asn Gln His
660 665 670
Lys Arg Cys Pro Asp Tyr Ile Ile Gln Lys Leu Asn Ile Val Asn Lys
675 680 685
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705 710 715 720
Arg Arg Arg Val Asn Ala Phe Ser Asn Phe Phe Ser Gly Pro Ile Val
725 730 735
Val His Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr Gly Thr Tyr Ile Gly Ile
740 745 750
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755 760 765
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835 840 845
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850 855 860
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865 870 875 880
Lys Glu Ser Glu His Asp Ser Asp Glu Ser Ser Asp Asp Asp Ser Asp
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900 905 910
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915 920 925
Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met Ile Phe Gln Arg Lys Val Lys Val Ile
930 935 940
Val Met Leu Thr Glu Leu Lys His Gly Asp Gln Glu Ile Cys Ala Gln
945 950 955 960
Tyr Trp Gly Glu Gly Lys Gln Thr Tyr Gly Asp Ile Glu Val Asp Leu
965 970 975
Lys Asp Thr Asp Lys Ser Ser Thr Tyr Thr Leu Arg Val Phe Glu Leu
980 985 990
Arg His Ser Lys Arg Lys Asp Ser Arg Thr Val Tyr Gln Tyr Gln Tyr
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Ile Ser Met Ile Gln Val Val Lys Gln Lys Leu Pro Gln Lys Asn
1025 1030 1035
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1040 1045 1050
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1055 1060 1065
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1070 1075 1080
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1085 1090 1095
Ser Thr Phe Glu Gln Tyr Gln Phe Leu Tyr Asp Val Ile Ala Ser
1100 1105 1110
Thr Tyr Pro Ala Gln Asn Gly Gln Val Lys Lys Asn Asn His Gln
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1130 1135 1140
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1175 1180 1185
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<210> 4
<211> 1193
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 4
Met Thr Met Tyr Leu Trp Leu Lys Leu Leu Ala Phe Gly Phe Ala Phe
1 5 10 15
Leu Asp Thr Glu Val Phe Val Thr Gly Gln Ser Pro Thr Pro Ser Pro
20 25 30
Thr Asp Val Pro Gly Glu Arg Ser Thr Ala Ser Thr Phe Pro Thr Asp
35 40 45
Pro Val Ser Pro Leu Thr Thr Thr Leu Ser Leu Ala His His Ser Ser
50 55 60
Ala Ala Leu Pro Ala Arg Thr Ser Asn Thr Thr Ile Thr Ala Asn Thr
65 70 75 80
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85 90 95
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100 105 110
Pro Thr Cys Asp Glu Lys Tyr Ala Asn Ile Thr Val Asp Tyr Leu Tyr
115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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165 170 175
Ala Pro Asp Lys Thr Leu Ile Leu Asp Val Pro Pro Gly Val Glu Lys
180 185 190
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195 200 205
Cys Leu Lys Trp Lys Asn Ile Glu Thr Phe Thr Cys Asp Thr Gln Asn
210 215 220
Ile Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly Asn Met Ile Phe Asp Asn Lys Glu
225 230 235 240
Ile Lys Leu Glu Asn Leu Glu Pro Glu His Glu Tyr Lys Cys Asp Ser
245 250 255
Glu Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys Phe Thr Asn Ala Ser Lys Ile Ile
260 265 270
Lys Thr Asp Phe Gly Ser Pro Gly Glu Pro Gln Ile Ile Phe Cys Arg
275 280 285
Ser Glu Ala Ala His Gln Gly Val Ile Thr Trp Asn Pro Pro Gln Arg
290 295 300
Ser Phe His Asn Phe Thr Leu Cys Tyr Ile Lys Glu Thr Glu Lys Asp
305 310 315 320
Cys Leu Asn Leu Asp Lys Asn Leu Ile Lys Tyr Asp Leu Gln Asn Leu
325 330 335
Lys Pro Tyr Thr Lys Tyr Val Leu Ser Leu His Ala Tyr Ile Ile Ala
340 345 350
Lys Val Gln Arg Asn Gly Ser Ala Ala Met Cys His Phe Thr Thr Lys
355 360 365
Ser Ala Pro Pro Ser Gln Val Trp Asn Met Thr Val Ser Met Thr Ser
370 375 380
Asp Asn Ser Met His Val Lys Cys Arg Pro Pro Arg Asp Arg Asn Gly
385 390 395 400
Pro His Glu Arg Tyr His Leu Glu Val Glu Ala Gly Asn Thr Leu Val
405 410 415
Arg Asn Glu Ser His Lys Asn Cys Asp Phe Arg Val Lys Asp Leu Gln
420 425 430
Tyr Ser Thr Asp Tyr Thr Phe Lys Ala Tyr Phe His Asn Gly Asp Tyr
435 440 445
Pro Gly Glu Pro Phe Ile Leu His His Ser Thr Ser Tyr Asn Ser Lys
450 455 460
Ala Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ile Val Thr Ser Ile Ala
465 470 475 480
Leu Leu Val Val Leu Tyr Lys Ile Tyr Asp Leu His Lys Lys Arg Ser
485 490 495
Cys Asn Leu Asp Glu Gln Gln Glu Leu Val Glu Arg Asp Asp Glu Lys
500 505 510
Gln Leu Met Asn Val Glu Pro Ile His Ala Asp Ile Leu Leu Glu Thr
515 520 525
Tyr Lys Arg Lys Ile Ala Asp Glu Gly Arg Leu Phe Leu Ala Glu Phe
530 535 540
Gln Ser Ile Pro Arg Val Phe Ser Lys Phe Pro Ile Lys Glu Ala Arg
545 550 555 560
Lys Pro Phe Asn Gln Asn Lys Asn Arg Tyr Val Asp Ile Leu Pro Tyr
565 570 575
Asp Tyr Asn Arg Val Glu Leu Ser Glu Ile Asn Gly Asp Ala Gly Ser
580 585 590
Asn Tyr Ile Asn Ala Ser Tyr Ile Asp Gly Phe Lys Glu Pro Arg Lys
595 600 605
Tyr Ile Ala Ala Gln Gly Pro Arg Asp Glu Thr Val Asp Asp Phe Trp
610 615 620
Arg Met Ile Trp Glu Gln Lys Ala Thr Val Ile Val Met Val Thr Arg
625 630 635 640
Cys Glu Glu Gly Asn Arg Asn Lys Cys Ala Glu Tyr Trp Pro Ser Met
645 650 655
Glu Glu Gly Thr Arg Ala Phe Gly Asp Val Val Val Lys Ile Asn Gln
660 665 670
His Lys Arg Cys Pro Asp Tyr Ile Ile Gln Lys Leu Asn Ile Val Asn
675 680 685
Lys Lys Glu Lys Ala Thr Gly Arg Glu Val Thr His Ile Gln Phe Thr
690 695 700
Ser Trp Pro Asp His Gly Val Pro Glu Asp Pro His Leu Leu Leu Lys
705 710 715 720
Leu Arg Arg Arg Val Asn Ala Phe Ser Asn Phe Phe Ser Gly Pro Ile
725 730 735
Val Val His Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr Gly Thr Tyr Ile Gly
740 745 750
Ile Asp Ala Met Leu Glu Gly Leu Glu Ala Glu Asn Lys Val Asp Val
755 760 765
Tyr Gly Tyr Val Val Lys Leu Arg Arg Gln Arg Cys Leu Met Val Gln
770 775 780
Val Glu Ala Gln Tyr Ile Leu Ile His Gln Ala Leu Val Glu Tyr Asn
785 790 795 800
Gln Phe Gly Glu Thr Glu Val Asn Leu Ser Glu Leu His Pro Tyr Leu
805 810 815
His Asn Met Lys Lys Arg Asp Pro Pro Ser Glu Pro Ser Pro Leu Glu
820 825 830
Ala Glu Phe Gln Arg Leu Pro Ser Tyr Arg Ser Trp Arg Thr Gln His
835 840 845
Ile Gly Asn Gln Glu Glu Asn Lys Ser Lys Asn Arg Asn Ser Asn Val
850 855 860
Ile Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Pro Leu Lys His Glu Leu Glu Met
865 870 875 880
Ser Lys Glu Ser Glu His Asp Ser Asp Glu Ser Ser Asp Asp Asp Ser
885 890 895
Asp Ser Glu Glu Pro Ser Lys Tyr Ile Asn Ala Ser Phe Ile Met Ser
900 905 910
Tyr Trp Lys Pro Glu Val Met Ile Ala Ala Gln Gly Pro Leu Lys Glu
915 920 925
Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met Ile Phe Gln Arg Lys Val Lys Val
930 935 940
Ile Val Met Leu Thr Glu Leu Lys His Gly Asp Gln Glu Ile Cys Ala
945 950 955 960
Gln Tyr Trp Gly Glu Gly Lys Gln Thr Tyr Gly Asp Ile Glu Val Asp
965 970 975
Leu Lys Asp Thr Asp Lys Ser Ser Thr Tyr Thr Leu Arg Val Phe Glu
980 985 990
Leu Arg His Ser Lys Arg Lys Asp Ser Arg Thr Val Tyr Gln Tyr Gln
995 1000 1005
Tyr Thr Asn Trp Ser Val Glu Gln Leu Pro Ala Glu Pro Lys Glu
1010 1015 1020
Leu Ile Ser Met Ile Gln Val Val Lys Gln Lys Leu Pro Gln Lys
1025 1030 1035
Asn Ser Ser Glu Gly Asn Lys His His Lys Ser Thr Pro Leu Leu
1040 1045 1050
Ile His Cys Arg Asp Gly Ser Gln Gln Thr Gly Ile Phe Cys Ala
1055 1060 1065
Leu Leu Asn Leu Leu Glu Ser Ala Glu Thr Glu Glu Val Val Asp
1070 1075 1080
Ile Phe Gln Val Val Lys Ala Leu Arg Lys Ala Arg Pro Gly Met
1085 1090 1095
Val Ser Thr Phe Glu Gln Tyr Gln Phe Leu Tyr Asp Val Ile Ala
1100 1105 1110
Ser Thr Tyr Pro Ala Gln Asn Gly Gln Val Lys Lys Asn Asn His
1115 1120 1125
Gln Glu Asp Lys Ile Glu Phe Asp Asn Glu Val Asp Lys Val Lys
1130 1135 1140
Gln Asp Ala Asn Cys Val Asn Pro Leu Gly Ala Pro Glu Lys Leu
1145 1150 1155
Pro Glu Ala Lys Glu Gln Ala Glu Gly Ser Glu Pro Thr Ser Gly
1160 1165 1170
Thr Glu Gly Pro Glu His Ser Val Asn Gly Pro Ala Ser Pro Ala
1175 1180 1185
Leu Asn Gln Gly Ser
1190
<210> 5
<211> 445
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 5
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Thr Ser Ser Thr Ile Asn Phe Thr Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Lys Val Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asn Tyr Tyr Arg Tyr Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser
115 120 125
Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val
130 135 140
Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro
195 200 205
Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly
210 215 220
Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln
260 265 270
Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Glu Arg Ser Val Ser Glu Leu
290 295 300
Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg
305 310 315 320
Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro
340 345 350
Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr
355 360 365
Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly
385 390 395 400
Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu
405 410 415
Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn
420 425 430
His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 6
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 6
Asp Ile Ala Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln
115 120 125
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Glu Tyr
130 135 140
Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln
145 150 155 160
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg
180 185 190
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro
195 200 205
Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 215
<210> 7
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 7
Glu Val Lys Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asp Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Trp Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Thr Ser Ser Thr Ile Asn Phe Thr Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Asp Lys Val Phe Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Lys Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Asn Tyr Tyr Arg Tyr Gly Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120
<210> 8
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 8
Asp Ile Ala Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Leu Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
<210> 9
<211> 450
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 9
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Ile Arg Gln Thr Pro Asp Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Val Gly Asn Asp Tyr Thr Tyr Phe Pro Asp Ser Met Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Asn Ser Leu Ala Ser Ala Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Thr
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
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Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Asn Thr Trp Pro Ser
180 185 190
Gln Thr Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val
195 200 205
Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Val Pro Ile Thr Gln Asn Pro Cys Pro
210 215 220
Pro Leu Lys Glu Cys Pro Pro Cys Ala Ala Pro Asp Leu Leu Gly Gly
225 230 235 240
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile
245 250 255
Ser Leu Ser Pro Met Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp
260 265 270
Asp Pro Asp Val Gln Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His
275 280 285
Thr Ala Gln Thr Gln Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg
290 295 300
Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys
305 310 315 320
Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Arg Ala Leu Pro Ser Pro Ile Glu
325 330 335
Lys Thr Ile Ser Lys Pro Arg Gly Pro Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr
340 345 350
Val Leu Pro Pro Pro Ala Glu Glu Met Thr Lys Lys Glu Phe Ser Leu
355 360 365
Thr Cys Met Ile Thr Gly Phe Leu Pro Ala Glu Ile Ala Val Asp Trp
370 375 380
Thr Ser Asn Gly Arg Thr Glu Gln Asn Tyr Lys Asn Thr Ala Thr Val
385 390 395 400
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Gln
405 410 415
Lys Ser Thr Trp Glu Arg Gly Ser Leu Phe Ala Cys Ser Val Val His
420 425 430
Glu Gly Leu His Asn His Leu Thr Thr Lys Thr Ile Ser Arg Ser Leu
435 440 445
Gly Lys
450
<210> 10
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 10
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Ile Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Phe Ala
20 25 30
Gly Ser Ser Leu Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Gln Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asp Leu Glu Thr Gly Ile Pro Thr
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Arg
85 90 95
Glu Tyr Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu Gln
115 120 125
Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg Gln
145 150 155 160
Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu Arg
180 185 190
His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser Pro
195 200 205
Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
210 215
<210> 11
<211> 453
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 11
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Leu Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Glu Tyr Asp Gly Thr Glu Thr Asn Tyr Ala Pro Ser Met
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Val Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Thr Leu Gln Ile Tyr Asn Asn Tyr Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser Ala Gln Thr Thr Ala Pro Ser Val
115 120 125
Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly Asp Thr Thr Ser Ser Thr Val Thr
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Ser Ser Asp Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Thr Ser Ser Val Thr Ser Ser Thr
180 185 190
Trp Pro Ser Gln Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Arg Arg Asn Gly Gly Ile Gly His
210 215 220
Lys Cys Pro Thr Cys Pro Thr Cys His Lys Cys Pro Val Pro Glu Leu
225 230 235 240
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile
245 250 255
Leu Leu Ile Ser Gln Asn Ala Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
260 265 270
Ser Glu Glu Glu Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asn Asn Val
275 280 285
Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
290 295 300
Thr Phe Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met
305 310 315 320
Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser
325 330 335
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Pro Lys Gly Leu Val Arg Lys Pro
340 345 350
Gln Val Tyr Val Met Gly Pro Pro Thr Glu Gln Leu Thr Glu Gln Thr
355 360 365
Val Ser Leu Thr Cys Leu Thr Ser Gly Phe Leu Pro Asn Asp Ile Gly
370 375 380
Val Glu Trp Thr Ser Asn Gly His Ile Glu Lys Asn Tyr Lys Asn Thr
385 390 395 400
Glu Pro Val Met Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Met Tyr Ser Lys Leu
405 410 415
Asn Val Glu Arg Ser Arg Trp Asp Ser Arg Ala Pro Phe Val Cys Ser
420 425 430
Val Val His Glu Gly Leu His Asn His His Val Glu Lys Ser Ile Ser
435 440 445
Arg Pro Pro Gly Lys
450
<210> 12
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 12
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Pro Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Asn Ser Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Thr Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gln His Asn Arg Gly Val Thr
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Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro
100 105 110
Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Met Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly
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Ala Thr Val Val Cys Phe Val Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Asp Ile Ser
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Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Gln Arg Asp Gly Val Leu Asp
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Ser Val Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Ser Leu Thr Lys Val Glu Tyr Glu Arg His Asn Leu Tyr Thr
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Cys Glu Val Val His Lys Thr Ser Ser Ser Pro Val Val Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Asn Glu Cys
210
<210> 13
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 13
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Arg Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Thr Leu Ser Cys Val Thr Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Ile Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
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Ala Arg Asp Glu Arg Trp Ala Gly Ala Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly
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Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 14
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 14
Phe Thr Phe Asn Asn Tyr Trp Met Thr
1 5
<210> 15
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 15
Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 16
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 16
Ala Arg Asp Glu Arg Trp Ala Gly Ala Met Asp Ala
1 5 10
<210> 17
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 17
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Pro Val Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Asn
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys His Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Tyr Glu Thr Asn Asn Leu Gln Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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<210> 18
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 18
Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Asn Leu Asp
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<210> 19
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 19
Glu Thr Asn Asn Leu Gln Thr
1 5
<210> 20
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 20
Tyr Gln His Asn Ser Arg Phe Thr
1 5
<210> 21
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 21
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ile Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Phe
20 25 30
Trp Met Thr Trp Ile Arg Gln Val Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
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Val Lys Leu His Tyr Tyr Ser Gly Gly Gly Asp Ala Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
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<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 22
Phe Thr Phe Thr Asn Phe Trp Met Thr
1 5
<210> 23
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 23
Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 24
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 24
Val Lys Leu His Tyr Tyr Ser Gly Gly Gly Asp Ala
1 5 10
<210> 25
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 25
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Asn Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys His Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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50 55 60
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65 70 75 80
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
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<210> 26
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 26
Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr Leu Asp
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<210> 27
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 27
Tyr Thr Asn Asn Leu His Thr
1 5
<210> 28
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 28
Leu Gln His Ser Ser Arg Trp Thr
1 5
<210> 29
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 29
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Ile Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
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Ala Arg Leu Tyr Tyr Tyr Ser Gly Gly Gly Asp Ala Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 30
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 30
Phe Thr Phe Asn Asn Tyr Trp Met Thr
1 5
<210> 31
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 31
Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 32
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 32
Ala Arg Leu Tyr Tyr Tyr Ser Gly Gly Gly Asp Ala
1 5 10
<210> 33
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 33
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Ile Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Asn Asn Leu His Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gln His Ile Ser Arg Trp Thr
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Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
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<210> 34
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 34
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Leu Asp
1 5 10
<210> 35
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 35
Asn Thr Asn Asn Leu His Thr
1 5
<210> 36
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 36
Leu Gln His Ile Ser Arg Trp Thr
1 5
<210> 37
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 37
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Arg Val
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Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Glu Arg Trp Ala Gly Ala Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 38
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 38
Phe Thr Phe Asn Asn Tyr Trp Met Thr
1 5
<210> 39
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 39
Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Arg Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 40
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 40
Ala Arg Asp Glu Arg Trp Ala Gly Ala Met Asp Ala
1 5 10
<210> 41
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 41
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Asn
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
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Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
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85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 42
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 42
Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Asn Leu Asp
1 5 10
<210> 43
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 43
Glu Thr Asn Asn Leu Gln Thr
1 5
<210> 44
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 44
Tyr Gln His Asn Ser Arg Phe Thr
1 5
<210> 45
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 45
Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Arg Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Glu Arg Trp Ala Gly Ala Met Asp Ala Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 46
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 46
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Asn
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Glu Thr Asn Asn Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Tyr Gln His Asn Ser Arg Phe Thr
85 90 95
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 47
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 47
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Phe
20 25 30
Trp Met Ala Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Phe His His Tyr Ser Gly Gly Gly Asp Ala Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 48
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 48
Phe Thr Phe Thr Asn Phe Trp Met Ala
1 5
<210> 49
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 49
Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 50
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 50
Val Lys Phe His His Tyr Ser Gly Gly Gly Asp Ala
1 5 10
<210> 51
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 51
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
His Tyr Thr Asn Asn Leu His Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ser Ser Arg Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 52
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 52
Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr Leu Asp
1 5 10
<210> 53
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 53
Tyr Thr Asn Asn Leu His Thr
1 5
<210> 54
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 54
Leu Gln His Ser Ser Arg Trp Thr
1 5
<210> 55
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 55
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asn Phe
20 25 30
Trp Met Ala Trp Ile Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Val Lys Phe His His Tyr Ser Gly Gly Gly Asp Ala Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 56
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 56
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
His Tyr Thr Asn Asn Leu His Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ser Ser Arg Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 57
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 57
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Tyr Tyr Tyr Asp Gly Gly Gly Asp Ala Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 58
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 58
Phe Thr Phe Asn Asn Tyr Trp Met Thr
1 5
<210> 59
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 59
Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 60
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 60
Ala Arg Leu Tyr Tyr Tyr Asp Gly Gly Gly Asp Ala
1 5 10
<210> 61
<211> 106
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 61
Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Asn Asn Leu His Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ile Ser Arg Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 62
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 62
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr Leu Asp
1 5 10
<210> 63
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 63
Asn Thr Asn Asn Leu His Thr
1 5
<210> 64
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 64
Leu Gln His Ile Ser Arg Trp Thr
1 5
<210> 65
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 65
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr
20 25 30
Trp Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ile Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Met Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Tyr Tyr Tyr Asp Gly Gly Gly Asp Ala Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 66
<211> 213
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 66
Gly Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Asn Lys Tyr
20 25 30
Leu Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asn Thr Asn Asn Leu His Thr Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Ile Ser Arg Trp Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 67
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 67
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 68
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 68
Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 69
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 69
Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 70
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 70
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
<210> 71
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 71
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg
85 90 95
Arg Arg Thr Pro Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys
<210> 72
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 72
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 73
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 73
Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser
1 5
<210> 74
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 74
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Pro Phe Thr
1 5 10
<210> 75
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 75
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Arg Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
225 230 235 240
Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 76
<211> 220
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 76
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg
85 90 95
Arg Arg Thr Pro Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp
115 120 125
Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn
130 135 140
Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu
145 150 155 160
Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp
165 170 175
Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr
180 185 190
Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser
195 200 205
Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215 220
<210> 77
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 77
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
100 105 110
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115 120 125
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 78
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<211> 17
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 79
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1 5 10 15
Gly
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 80
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
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Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Asn
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Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
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Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
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65 70 75 80
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 82
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<400> 83
Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 84
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Trp Ser
1 5
<210> 85
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 85
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
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Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
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<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 86
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 87
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Gly Tyr
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 88
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<211> 17
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 89
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Gly
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 90
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 91
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
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Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Asn
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Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
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Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 92
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 93
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<212> PRT
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<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 93
Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser
1 5
<210> 94
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 94
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Pro Phe Thr
1 5 10
<210> 95
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 95
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Gly Tyr
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Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ser Tyr Ile Ser Ile Ser Gly Ala Thr Ile Thr Tyr Ala Asp Ser Val
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Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 96
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 96
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
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Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Asn
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Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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<210> 97
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 97
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
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Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 98
Phe Thr Phe Glu Ala Tyr Ser Met Asn
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<210> 99
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 99
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Gly
<210> 100
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 100
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
<210> 101
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 101
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
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<210> 102
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 102
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 103
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 103
Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser
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<210> 104
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 104
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Trp Ser
1 5
<210> 105
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 105
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
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Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
210 215 220
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245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
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Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 106
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 106
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
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Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Asn
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115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 107
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 107
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 108
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 108
Phe Thr Phe Glu Ala Tyr Ser Met Asn
1 5
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 109
Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 110
<211> 20
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 110
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
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<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 111
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
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Arg Thr Pro Trp Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 112
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 113
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 113
Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser
1 5
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 114
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Trp Ser
1 5
<210> 115
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 115
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
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165 170 175
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Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
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Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
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Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
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Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
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Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
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Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
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Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
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Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln
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Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 116
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 116
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
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Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
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Arg Thr Pro Trp Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
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Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
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165 170 175
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195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 117
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 117
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
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Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
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<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 118
Phe Thr Phe Glu Ala Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 119
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 119
Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
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<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 120
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
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<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 121
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
35 40 45
Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser
65 70 75 80
Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
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Arg Thr Pro Trp Ser Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 122
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 122
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 123
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 123
Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser
1 5
<210> 124
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 124
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Trp Ser
1 5
<210> 125
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 125
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Glu Ala Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Leu Ser Gly Ala Thr Ile His Tyr Ala Asp Ser Val
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65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Thr Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
100 105 110
Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala
115 120 125
Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser
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Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
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Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
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275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
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Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
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405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr Gln
435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 126
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 126
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
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Gln Leu Leu Ile Tyr Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser Gly Val Pro Asp
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Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 127
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 127
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Gly Tyr
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Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
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<210> 128
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 128
Phe Thr Phe Gly Gly Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 129
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 129
Tyr Ile Ser Ile Ser Gly Ala Thr Ile Thr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 130
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 130
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Asp Ser Ser Asp Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
<210> 131
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 131
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser
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Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
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Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
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<210> 132
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 132
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 133
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 133
Phe Gly Ser Ser Arg Ala Ser
1 5
<210> 134
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<400> 134
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Pro Phe Thr
1 5 10
<210> 135
<211> 457
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 135
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Gly Gly Tyr
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130 135 140
Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe
145 150 155 160
Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly
165 170 175
Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu
180 185 190
Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr
195 200 205
Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys
210 215 220
Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro
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Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
245 250 255
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
260 265 270
Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
275 280 285
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
290 295 300
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
305 310 315 320
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
325 330 335
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
340 345 350
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
355 360 365
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
370 375 380
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
385 390 395 400
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
405 410 415
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
420 425 430
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435 440 445
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 136
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 136
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Ser Ser
20 25 30
Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro
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Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Arg Arg
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Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 137
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 137
gacatccaga tgacccagtc tccacctgtg ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
ctttcatgca aggcaagtca gaatattaac aaaaatttag actggtatca gcagaaacat 120
ggggaagccc ctaagctcct gatctatgag acaaataatt tgcaaacggg gatcccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat tacactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagatgtgg caacttacta ctgttaccag cacaactcca gattcacttt tggctcaggg 300
accaagctgg agatcaaa 318
<210> 138
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 138
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggagac agggtacagc ctggcaggtc cctgacactc 60
tcctgtgtaa catctggatt cacctttaac aactattgga tgacctggat ccggcaagta 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtcgcttct attagttcca gtggcggtag catatattat 180
cccgactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa caccctgtat 240
ctgcaaatga acagtctgag atccgaggac acggcgacct actactgcgc aagagacgaa 300
agatgggctg gcgctatgga cgcctggggg caagggacct ccgtcaccgt ctcctca 357
<210> 139
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 139
gacatccaga tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcaactgca aggcgagtca gaacattaat aaatatttag attggtatca gcagaaacat 120
ggggaggccc ctaagctcct gatccattac accaataatt tgcacacagg gataccatca 180
aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tacactttga ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatgttg caacatattt ctgtctgcaa cattccagca ggtggacctt cggcggaggg 300
accaagcttg agctgaaa 318
<210> 140
<211> 234
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 140
gggaagggcc tggagtgggt cgctagcatt agttctagtg gaggtagcat atattatccc 60
gactctgtga aggaccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaacac actgtatctg 120
caaatgaaca gtctgagatc cgaggacacg gcgacatact actgcgttaa gcttcactac 180
tattccggag ggggtgatgc ttggggccaa ggaacctccg tcaccgtctc ctca 234
<210> 141
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 141
gacatccaga tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcatctgca aggcgagtca ggacattaac aagtatttag actggtatca gcagaaattg 120
ggggaagccc ctaagctcct gatctacaat acaaataatt tgcacacagg gataccatca 180
aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tacactttga ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagatgtcg caacatattt ttgtctgcag cacattagca gatggacctt cggcggaggg 300
accaagctgg agctgaaa 318
<210> 142
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 142
gaagtgcagc tggtggagtc tgggggagat ttggtacagc ctggcaggtc cctgaaactc 60
tcctgtgttg cctctggatt cacctttaat aactattgga tgacatggat tcggcaagtt 120
ccagggaagg gcctggagtg ggtcgcttcc attagtagta gtggtggtag catatattat 180
cccgactctg tgaaggatcg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacactgttt 240
ctgcaaatga acagtctgag atctgaggac acggcgacat actactgcgc gagactgtat 300
tactattctg gtggtggcga tgcgtggggc caaggaacct ccgtcaccgt ctcctca 357
<210> 143
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 143
gaagtgcagc ttctggagtc cggtggcgga ctggtccagc cgggcggatc tctgagactt 60
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ctccaaatga acagcctgcg cgctgaggac actgctgtgt actattgcgc gagggacgag 300
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<210> 144
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 144
gatattcaga tgacccagtc cccatcatcc ctgtccgcct ccgtgggcga ccgcgtgacg 60
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<210> 145
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 145
gaagtgcagc tcgtggagtc gggtggaggc cttgtgcaac cgggaggatc cctgcggctc 60
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<210> 146
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 146
gacatccaga tgacccagag cccctcctcc ctgtccgcgt ctgtgggcga ccgcgtgacc 60
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<210> 147
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 147
gaagtgcagc tcgtggagtc gggtggaggc cttgtgcaac cgggaggatc cctgcggctc 60
tcctgcgccg catcaggctt cacgttcaac aactactgga tgacttgggt cagacaggca 120
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tactacgatg gggggggcga tgcctgggga cagggaaccc tagtgactgt gtcgtcc 357
<210> 148
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 148
ggaatccaga tgacacagag cccgtctagc ctgtcagcat ccgtggggga cagggtcacc 60
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gaggacttcg ccacttacta ttgcctccaa cacatttccc ggtggacttt cggcggcggc 300
accaaggtcg agatcaag 318
<210> 149
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 149
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
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<210> 150
<211> 339
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 150
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
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cctttcactt ttggcggagg gaccaaggtt gagatcaaa 339
<210> 151
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 151
gaagtgcagc ttgtggagtc cggtggcgga ctggtccagc cgggcggatc tctgagactt 60
tcgtgtgccg cctcgggatt caccttcgaa gcgtattcca tgaactgggt cagacaggcc 120
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<210> 152
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 152
gatatcgtga tgacacagtc ccctctgtcc ctccctgtga cccccggaga accagcctct 60
atttcctgcc ggtcctccca atccctggtg tccaacggtt ataactacct ggattggtac 120
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<210> 153
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 153
caagtgcagc ttgtggagtc cggtggcgga ctggtcaagc cgggcggatc tctgagactt 60
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<210> 154
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 154
gatatcgtga tgacacagtc ccctctgtcc ctccctgtga cccccggaga accagcctct 60
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<210> 155
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 155
gaagtgcagc ttgtggagtc cggtggcgga ctggtccagc cgggcggatc tctgagactt 60
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
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gatatcgtga tgacacagtc ccctctgtcc ctccctgtga cccccggaga accagcctct 60
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ttgcaaaagc ccggacagag cccccagctg ctcatctact tcggaagctc acgcgcgagc 180
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<210> 157
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 157
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 158
gatatcgtga tgacacagtc ccctctgtcc ctccctgtga cccccggaga accagcctct 60
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 159
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 161
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<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 162
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<210> 163
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 163
gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggcgggtc cctgagactc 60
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 164
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gaagattttg caacttacta ctgttatcag cataattcta gatttacttt tggccagggg 300
accaagctgg agatcaaa 318
<210> 165
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 165
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cacctttacc aatttttgga tggcgtggat ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtcgcaagt attagttcaa gtggtggtag catctactac 180
cctgactccg tgaaggaccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgt caagtttcac 300
cactattcag gcggcggcga tgcttggggc caagggaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 166
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 166
gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgca aagcaagtca gaatattaac aagtatttag attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatccattac actaacaact tgcacaccgg gattccatca 180
aggttcagtg gcagtggatc tgggacagat tatactctca ccatcagcag tctgcaacct 240
gaagattttg caacttacta ctgtctgcag cacagttcca gatggacatt cggcggaggg 300
accaaggtgg agatcaaa 318
<210> 167
<211> 357
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 167
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcaat aactattgga tgacgtgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatcc attagtagta gtggcggtag tatatactac 180
cctgactctg tgaaggatcg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac atggcggtgt actactgcgc caggttgtac 300
tactacgacg ggggagggga tgcgtggggc caaggaaccc tggtcaccgt ctcctca 357
<210> 168
<211> 318
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 168
ggcatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60
atcacttgca aggcgagtca ggacattaat aagtatttag attggtatca gcagaaacca 120
gggaaagccc ctaagctcct gatctacaat acaaacaatt tgcatacagg gatcccatca 180
aggttcagtg gaagtggatc tgggacagat tatactctta ccatcagcag cctgcagcct 240
gaagattttg caacatatta ctgtcttcaa cacatatcta gatggacgtt cggcggaggg 300
accaaggtgg agatcaaa 318
<210> 169
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 169
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcgaa gcatatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtctca gtggtgccac catacactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt attactgcgc cagaggtgga 300
caatactact acgacagcag tgattacggt gaggtagcat tcgacatatg gggtcagggt 360
acaatggtca ccgtctcctc a 381
<210> 170
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 170
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctggtc agtaatggat acaactattt ggattggtac 120
ctgcagaagc cagggcagtc tccacagctc ctgatctatt tcggttcttc ccgggcctcc 180
ggggtccctg acaggttcag tggcagtgga tcaggcacag attttacact gaaaatcagc 240
agagtggagg ctgaggatgt tggggtttat tactgcatgc agagaagacg cactccttgg 300
tcttttggcg gagggaccaa ggttgagatc aaa 333
<210> 171
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 171
caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtcaagc ctggagggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcgga ggatatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtatca gtggtgccac cataacctac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt actactgcgc cagaggtgga 300
caatactact acgacagcag cgattatggt gaggtagcat tcgacatatg gggtcagggt 360
acaatggtca ccgtctcctc a 381
<210> 172
<211> 336
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 172
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctggtc agtaatggat acaactattt ggattggtac 120
ctgcagaagc cagggcagtc tccacagctc ctgatctatt tcggttcttc ccgggcctcc 180
ggggtccctg acaggttcag tggcagtgga tcaggcacag attttacact gaaaatcagc 240
agagtggagg ctgaggatgt tggggtttat tactgcatgc agagaagacg cactcctcct 300
ttcacttttg gcggagggac caaggttgag atcaaa 336
<210> 173
<211> 381
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 173
gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60
tcctgtgcag cctctggatt caccttcgaa gcatatagca tgaactgggt ccgccaggct 120
ccagggaagg ggctggagtg ggtttcatac attagtctca gtggtgccac catacactac 180
gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagggaca acgccaagaa ctcactgtat 240
ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggcggtgt attactgcgc cagaggtgga 300
caatactact acacgagcag tgattacggt gaggtagcat tcgacatatg gggtcagggt 360
acaatggtca ccgtctcctc a 381
<210> 174
<211> 333
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多核苷酸
<400> 174
gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60
atctcctgca ggtctagtca gagcctggtc agtaatggat acaactattt ggattggtac 120
ctgcagaagc cagggcagtc tccacagctc ctgatctatt tcggttcttc ccgggcctcc 180
ggggtccctg acaggttcag tggcagtgga tcaggcacag attttacact gaaaatcagc 240
agagtggagg ctgaggatgt tggggtttat tactgcatgc agagaagacg cactccttgg 300
tcttttggcg gagggaccaa ggttgagatc aaa 333
<210> 175
<211> 1306
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 175
Met Thr Met Tyr Leu Trp Leu Lys Leu Leu Ala Phe Gly Phe Ala Phe
1 5 10 15
Leu Asp Thr Glu Val Phe Val Thr Gly Gln Ser Pro Thr Pro Ser Pro
20 25 30
Thr Gly Leu Thr Thr Ala Lys Met Pro Ser Val Pro Leu Ser Ser Asp
35 40 45
Pro Leu Pro Thr His Thr Thr Ala Phe Ser Pro Ala Ser Thr Phe Glu
50 55 60
Arg Glu Asn Asp Phe Ser Glu Thr Thr Thr Ser Leu Ser Pro Asp Asn
65 70 75 80
Thr Ser Thr Gln Val Ser Pro Asp Ser Leu Asp Asn Ala Ser Ala Phe
85 90 95
Asn Thr Thr Gly Val Ser Ser Val Gln Thr Pro His Leu Pro Thr His
100 105 110
Ala Asp Ser Gln Thr Pro Ser Ala Gly Thr Asp Thr Gln Thr Phe Ser
115 120 125
Gly Ser Ala Ala Asn Ala Lys Leu Asn Pro Thr Pro Gly Ser Asn Ala
130 135 140
Ile Ser Asp Val Pro Gly Glu Arg Ser Thr Ala Ser Thr Phe Pro Thr
145 150 155 160
Asp Pro Val Ser Pro Leu Thr Thr Thr Leu Ser Leu Ala His His Ser
165 170 175
Ser Ala Ala Leu Pro Ala Arg Thr Ser Asn Thr Thr Ile Thr Ala Asn
180 185 190
Thr Ser Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Ser Glu Thr Thr Thr Leu Ser Pro
195 200 205
Ser Gly Ser Ala Val Ile Ser Thr Thr Thr Ile Ala Thr Thr Pro Ser
210 215 220
Lys Pro Thr Cys Asp Glu Lys Tyr Ala Asn Ile Thr Val Asp Tyr Leu
225 230 235 240
Tyr Asn Lys Glu Thr Lys Leu Phe Thr Ala Lys Leu Asn Val Asn Glu
245 250 255
Asn Val Glu Cys Gly Asn Asn Thr Cys Thr Asn Asn Glu Val His Asn
260 265 270
Leu Thr Glu Cys Lys Asn Ala Ser Val Ser Ile Ser His Asn Ser Cys
275 280 285
Thr Ala Pro Asp Lys Thr Leu Ile Leu Asp Val Pro Pro Gly Val Glu
290 295 300
Lys Phe Gln Leu His Asp Cys Thr Gln Val Glu Lys Ala Asp Thr Thr
305 310 315 320
Ile Cys Leu Lys Trp Lys Asn Ile Glu Thr Phe Thr Cys Asp Thr Gln
325 330 335
Asn Ile Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly Asn Met Ile Phe Asp Asn Lys
340 345 350
Glu Ile Lys Leu Glu Asn Leu Glu Pro Glu His Glu Tyr Lys Cys Asp
355 360 365
Ser Glu Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys Phe Thr Asn Ala Ser Lys Ile
370 375 380
Ile Lys Thr Asp Phe Gly Ser Pro Gly Glu Pro Gln Ile Ile Phe Cys
385 390 395 400
Arg Ser Glu Ala Ala His Gln Gly Val Ile Thr Trp Asn Pro Pro Gln
405 410 415
Arg Ser Phe His Asn Phe Thr Leu Cys Tyr Ile Lys Glu Thr Glu Lys
420 425 430
Asp Cys Leu Asn Leu Asp Lys Asn Leu Ile Lys Tyr Asp Leu Gln Asn
435 440 445
Leu Lys Pro Tyr Thr Lys Tyr Val Leu Ser Leu His Ala Tyr Ile Ile
450 455 460
Ala Lys Val Gln Arg Asn Gly Ser Ala Ala Met Cys His Phe Thr Thr
465 470 475 480
Lys Ser Ala Pro Pro Ser Gln Val Trp Asn Met Thr Val Ser Met Thr
485 490 495
Ser Asp Asn Ser Met His Val Lys Cys Arg Pro Pro Arg Asp Arg Asn
500 505 510
Gly Pro His Glu Arg Tyr His Leu Glu Val Glu Ala Gly Asn Thr Leu
515 520 525
Val Arg Asn Glu Ser His Lys Asn Cys Asp Phe Arg Val Lys Asp Leu
530 535 540
Gln Tyr Ser Thr Asp Tyr Thr Phe Lys Ala Tyr Phe His Asn Gly Asp
545 550 555 560
Tyr Pro Gly Glu Pro Phe Ile Leu His His Ser Thr Ser Tyr Asn Ser
565 570 575
Lys Ala Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ile Val Thr Ser Ile
580 585 590
Ala Leu Leu Val Val Leu Tyr Lys Ile Tyr Asp Leu His Lys Lys Arg
595 600 605
Ser Cys Asn Leu Asp Glu Gln Gln Glu Leu Val Glu Arg Asp Asp Glu
610 615 620
Lys Gln Leu Met Asn Val Glu Pro Ile His Ala Asp Ile Leu Leu Glu
625 630 635 640
Thr Tyr Lys Arg Lys Ile Ala Asp Glu Gly Arg Leu Phe Leu Ala Glu
645 650 655
Phe Gln Ser Ile Pro Arg Val Phe Ser Lys Phe Pro Ile Lys Glu Ala
660 665 670
Arg Lys Pro Phe Asn Gln Asn Lys Asn Arg Tyr Val Asp Ile Leu Pro
675 680 685
Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Glu Leu Ser Glu Ile Asn Gly Asp Ala Gly
690 695 700
Ser Asn Tyr Ile Asn Ala Ser Tyr Ile Asp Gly Phe Lys Glu Pro Arg
705 710 715 720
Lys Tyr Ile Ala Ala Gln Gly Pro Arg Asp Glu Thr Val Asp Asp Phe
725 730 735
Trp Arg Met Ile Trp Glu Gln Lys Ala Thr Val Ile Val Met Val Thr
740 745 750
Arg Cys Glu Glu Gly Asn Arg Asn Lys Cys Ala Glu Tyr Trp Pro Ser
755 760 765
Met Glu Glu Gly Thr Arg Ala Phe Gly Asp Val Val Val Lys Ile Asn
770 775 780
Gln His Lys Arg Cys Pro Asp Tyr Ile Ile Gln Lys Leu Asn Ile Val
785 790 795 800
Asn Lys Lys Glu Lys Ala Thr Gly Arg Glu Val Thr His Ile Gln Phe
805 810 815
Thr Ser Trp Pro Asp His Gly Val Pro Glu Asp Pro His Leu Leu Leu
820 825 830
Lys Leu Arg Arg Arg Val Asn Ala Phe Ser Asn Phe Phe Ser Gly Pro
835 840 845
Ile Val Val His Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr Gly Thr Tyr Ile
850 855 860
Gly Ile Asp Ala Met Leu Glu Gly Leu Glu Ala Glu Asn Lys Val Asp
865 870 875 880
Val Tyr Gly Tyr Val Val Lys Leu Arg Arg Gln Arg Cys Leu Met Val
885 890 895
Gln Val Glu Ala Gln Tyr Ile Leu Ile His Gln Ala Leu Val Glu Tyr
900 905 910
Asn Gln Phe Gly Glu Thr Glu Val Asn Leu Ser Glu Leu His Pro Tyr
915 920 925
Leu His Asn Met Lys Lys Arg Asp Pro Pro Ser Glu Pro Ser Pro Leu
930 935 940
Glu Ala Glu Phe Gln Arg Leu Pro Ser Tyr Arg Ser Trp Arg Thr Gln
945 950 955 960
His Ile Gly Asn Gln Glu Glu Asn Lys Ser Lys Asn Arg Asn Ser Asn
965 970 975
Val Ile Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Pro Leu Lys His Glu Leu Glu
980 985 990
Met Ser Lys Glu Ser Glu His Asp Ser Asp Glu Ser Ser Asp Asp Asp
995 1000 1005
Ser Asp Ser Glu Glu Pro Ser Lys Tyr Ile Asn Ala Ser Phe Ile
1010 1015 1020
Met Ser Tyr Trp Lys Pro Glu Val Met Ile Ala Ala Gln Gly Pro
1025 1030 1035
Leu Lys Glu Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met Ile Phe Gln Arg
1040 1045 1050
Lys Val Lys Val Ile Val Met Leu Thr Glu Leu Lys His Gly Asp
1055 1060 1065
Gln Glu Ile Cys Ala Gln Tyr Trp Gly Glu Gly Lys Gln Thr Tyr
1070 1075 1080
Gly Asp Ile Glu Val Asp Leu Lys Asp Thr Asp Lys Ser Ser Thr
1085 1090 1095
Tyr Thr Leu Arg Val Phe Glu Leu Arg His Ser Lys Arg Lys Asp
1100 1105 1110
Ser Arg Thr Val Tyr Gln Tyr Gln Tyr Thr Asn Trp Ser Val Glu
1115 1120 1125
Gln Leu Pro Ala Glu Pro Lys Glu Leu Ile Ser Met Ile Gln Val
1130 1135 1140
Val Lys Gln Lys Leu Pro Gln Lys Asn Ser Ser Glu Gly Asn Lys
1145 1150 1155
His His Lys Ser Thr Pro Leu Leu Ile His Cys Arg Asp Gly Ser
1160 1165 1170
Gln Gln Thr Gly Ile Phe Cys Ala Leu Leu Asn Leu Leu Glu Ser
1175 1180 1185
Ala Glu Thr Glu Glu Val Val Asp Ile Phe Gln Val Val Lys Ala
1190 1195 1200
Leu Arg Lys Ala Arg Pro Gly Met Val Ser Thr Phe Glu Gln Tyr
1205 1210 1215
Gln Phe Leu Tyr Asp Val Ile Ala Ser Thr Tyr Pro Ala Gln Asn
1220 1225 1230
Gly Gln Val Lys Lys Asn Asn His Gln Glu Asp Lys Ile Glu Phe
1235 1240 1245
Asp Asn Glu Val Asp Lys Val Lys Gln Asp Ala Asn Cys Val Asn
1250 1255 1260
Pro Leu Gly Ala Pro Glu Lys Leu Pro Glu Ala Lys Glu Gln Ala
1265 1270 1275
Glu Gly Ser Glu Pro Thr Ser Gly Thr Glu Gly Pro Glu His Ser
1280 1285 1290
Val Asn Gly Pro Ala Ser Pro Ala Leu Asn Gln Gly Ser
1295 1300 1305
<210> 176
<211> 552
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 176
Gln Ser Pro Thr Pro Ser Pro Thr Gly Leu Thr Thr Ala Lys Met Pro
1 5 10 15
Ser Val Pro Leu Ser Ser Asp Pro Leu Pro Thr His Thr Thr Ala Phe
20 25 30
Ser Pro Ala Ser Thr Phe Glu Arg Glu Asn Asp Phe Ser Glu Thr Thr
35 40 45
Thr Ser Leu Ser Pro Asp Asn Thr Ser Thr Gln Val Ser Pro Asp Ser
50 55 60
Leu Asp Asn Ala Ser Ala Phe Asn Thr Thr Gly Val Ser Ser Val Gln
65 70 75 80
Thr Pro His Leu Pro Thr His Ala Asp Ser Gln Thr Pro Ser Ala Gly
85 90 95
Thr Asp Thr Gln Thr Phe Ser Gly Ser Ala Ala Asn Ala Lys Leu Asn
100 105 110
Pro Thr Pro Gly Ser Asn Ala Ile Ser Asp Val Pro Gly Glu Arg Ser
115 120 125
Thr Ala Ser Thr Phe Pro Thr Asp Pro Val Ser Pro Leu Thr Thr Thr
130 135 140
Leu Ser Leu Ala His His Ser Ser Ala Ala Leu Pro Ala Arg Thr Ser
145 150 155 160
Asn Thr Thr Ile Thr Ala Asn Thr Ser Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Ser
165 170 175
Glu Thr Thr Thr Leu Ser Pro Ser Gly Ser Ala Val Ile Ser Thr Thr
180 185 190
Thr Ile Ala Thr Thr Pro Ser Lys Pro Thr Cys Asp Glu Lys Tyr Ala
195 200 205
Asn Ile Thr Val Asp Tyr Leu Tyr Asn Lys Glu Thr Lys Leu Phe Thr
210 215 220
Ala Lys Leu Asn Val Asn Glu Asn Val Glu Cys Gly Asn Asn Thr Cys
225 230 235 240
Thr Asn Asn Glu Val His Asn Leu Thr Glu Cys Lys Asn Ala Ser Val
245 250 255
Ser Ile Ser His Asn Ser Cys Thr Ala Pro Asp Lys Thr Leu Ile Leu
260 265 270
Asp Val Pro Pro Gly Val Glu Lys Phe Gln Leu His Asp Cys Thr Gln
275 280 285
Val Glu Lys Ala Asp Thr Thr Ile Cys Leu Lys Trp Lys Asn Ile Glu
290 295 300
Thr Phe Thr Cys Asp Thr Gln Asn Ile Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly
305 310 315 320
Asn Met Ile Phe Asp Asn Lys Glu Ile Lys Leu Glu Asn Leu Glu Pro
325 330 335
Glu His Glu Tyr Lys Cys Asp Ser Glu Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys
340 345 350
Phe Thr Asn Ala Ser Lys Ile Ile Lys Thr Asp Phe Gly Ser Pro Gly
355 360 365
Glu Pro Gln Ile Ile Phe Cys Arg Ser Glu Ala Ala His Gln Gly Val
370 375 380
Ile Thr Trp Asn Pro Pro Gln Arg Ser Phe His Asn Phe Thr Leu Cys
385 390 395 400
Tyr Ile Lys Glu Thr Glu Lys Asp Cys Leu Asn Leu Asp Lys Asn Leu
405 410 415
Ile Lys Tyr Asp Leu Gln Asn Leu Lys Pro Tyr Thr Lys Tyr Val Leu
420 425 430
Ser Leu His Ala Tyr Ile Ile Ala Lys Val Gln Arg Asn Gly Ser Ala
435 440 445
Ala Met Cys His Phe Thr Thr Lys Ser Ala Pro Pro Ser Gln Val Trp
450 455 460
Asn Met Thr Val Ser Met Thr Ser Asp Asn Ser Met His Val Lys Cys
465 470 475 480
Arg Pro Pro Arg Asp Arg Asn Gly Pro His Glu Arg Tyr His Leu Glu
485 490 495
Val Glu Ala Gly Asn Thr Leu Val Arg Asn Glu Ser His Lys Asn Cys
500 505 510
Asp Phe Arg Val Lys Asp Leu Gln Tyr Ser Thr Asp Tyr Thr Phe Lys
515 520 525
Ala Tyr Phe His Asn Gly Asp Tyr Pro Gly Glu Pro Phe Ile Leu His
530 535 540
His Ser Thr Ser Tyr Asn Ser Lys
545 550
<210> 177
<211> 21
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 177
Thr Glu Lys Asp Cys Leu Asn Leu Asp Lys Asn Leu Ile Lys Tyr Asp
1 5 10 15
Leu Gln Asn Leu Lys
20
<210> 178
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 178
Cys Tyr Ile Lys Glu Thr Glu Lys Asp Cys Leu Asn Leu Asp Lys Asn
1 5 10 15
Leu Ile Lys Tyr Asp Leu Gln Asn Leu Lys Pro Tyr Thr Lys Tyr
20 25 30
<210> 179
<211> 29
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 179
Arg Pro Pro Arg Asp Arg Asn Gly Pro His Glu Arg Tyr His Leu Glu
1 5 10 15
Val Glu Ala Gly Asn Thr Leu Val Arg Asn Glu Ser His
20 25
<210> 180
<211> 31
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 180
Cys Arg Pro Pro Arg Asp Arg Asn Gly Pro His Glu Arg Tyr His Leu
1 5 10 15
Glu Val Glu Ala Gly Asn Thr Leu Val Arg Asn Glu Ser His Lys
20 25 30
<210> 181
<211> 17
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 181
Arg Asn Gly Pro His Glu Arg Tyr His Leu Glu Val Glu Ala Gly Asn
1 5 10 15
Thr
<210> 182
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 182
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 183
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 183
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 184
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 184
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 185
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 185
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 186
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 186
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 187
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成多肽
<400> 187
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Cys Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Ala Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 188
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Ser、Glu或Gly
<220>
<221> MOD_RES
<222> (5)..(5)
<223> Ser、Ala或Gly
<400> 188
Phe Thr Phe Xaa Xaa Tyr Ser Met Asn
1 5
<210> 189
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Ser、Leu或Ile
<220>
<221> MOD_RES
<222> (6)..(6)
<223> Ser或Gly
<220>
<221> MOD_RES
<222> (7)..(7)
<223> Ser或Ala
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Tyr、His或Thr
<400> 189
Tyr Ile Ser Xaa Ser Xaa Xaa Thr Ile Xaa Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
1 5 10 15
Lys Gly
<210> 190
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Asp或Thr
<220>
<221> MOD_RES
<222> (12)..(12)
<223> Arg或Asp
<400> 190
Ala Arg Gly Gly Gln Tyr Tyr Tyr Xaa Ser Ser Xaa Tyr Gly Glu Val
1 5 10 15
Ala Phe Asp Ile
20
<210> 191
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> His或不存在
<400> 191
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Xaa Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 192
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (1)..(1)
<223> Leu或Phe
<220>
<221> MOD_RES
<222> (4)..(4)
<223> Asn或Ser
<400> 192
Xaa Gly Ser Xaa Arg Ala Ser
1 5
<210> 193
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 人工序列的描述：合成肽
<220>
<221> MOD_RES
<222> (8)..(8)
<223> Pro或Trp
<220>
<221> MOD_RES
<222> (9)..(9)
<223> Phe或Ser
<220>
<221> MOD_RES
<222> (10)..(10)
<223> Thr或Phe
<400> 193
Met Gln Arg Arg Arg Thr Pro Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 194
<211> 1310
<212> PRT
<213> 食蟹猴(Macaca fascicularis)
<400> 194
Met Thr Met Cys Leu Trp Leu Lys Leu Leu Ala Phe Val Phe Ala Phe
1 5 10 15
Leu Asp Thr Glu Val Phe Val Thr Gly Gln Gly Ser Thr Leu Ser Pro
20 25 30
Thr Gly Arg Arg Thr Thr Lys Met Pro Ser Val Pro Leu Ser Ser Asp
35 40 45
Pro Leu Pro Thr His Thr Thr Ala Phe Ser Pro Ala Ser Ile Ser Glu
50 55 60
Arg Glu Asn Asp Phe Ser Glu Thr Thr Pro Ser Leu Ser Ser Asp Asn
65 70 75 80
Thr Ser Thr Gln Val Ser Pro Asp Ser Leu Asp Asn Ala Ser Ala Phe
85 90 95
Asn Thr Thr Gly Val Ser Ser Ala Leu Thr Pro His Leu Pro Thr His
100 105 110
Ala Asp Ser Gln Thr Pro Ser Thr Gly Thr Asp Thr Gln Thr Pro Ser
115 120 125
Gly Ser Ala Ala Asn Thr Thr Leu Ser Pro Thr Pro Arg Ser Asn Asp
130 135 140
Ile Ser Asp Val Pro Gly Glu Arg Ser Thr Ala Ser Thr Phe Pro Thr
145 150 155 160
Asp Pro Ile Ser Pro Leu Ala Thr Thr Leu Ile Pro Ala Arg Asn Ser
165 170 175
Ser Ala Ala Leu Pro Ala Arg Thr Ser Asn Thr Thr Ile Thr Ala Asn
180 185 190
Thr Ser Val Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Glu Thr Thr Thr Pro Ser Pro
195 200 205
Ser Gly Ser Thr Val Ile Ser Thr Pro Thr Ile Ala Thr Thr Thr Ser
210 215 220
Lys Pro Thr Cys Ala Glu Lys Tyr Ala Thr Ile Pro Val Asp Tyr Leu
225 230 235 240
Tyr Asn Asn Lys Thr Lys Leu Phe Thr Ala Lys Leu Asn Val Asn Glu
245 250 255
Asn Val Glu Cys Thr Asn Asn Asn His Thr His Asn Ile Cys Thr Asn
260 265 270
Asn Glu Val Leu Asn Leu Pro Glu Cys Lys Glu Met Asn Val Phe Val
275 280 285
Ser His Asn Ser Cys Thr Asp Arg His Lys Glu Leu Lys Leu Asp Val
290 295 300
Pro Pro Glu Val Glu Lys Phe Gln Leu Asp Asp Cys Thr Pro Asp Val
305 310 315 320
Glu Ala Asn Thr Thr Ile Cys Leu Lys Trp Lys Ile Ile Glu Thr Phe
325 330 335
Ala Cys Asp Lys Ser Lys Ile Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly Asn Lys
340 345 350
Thr Tyr Asn Lys Glu Gly Ile Tyr Leu Glu Asn Leu Glu Pro Glu Tyr
355 360 365
Glu Tyr Lys Cys Asp Ser Glu Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys Tyr Ile
370 375 380
Asn Ile Thr Lys Leu Ile Lys Thr Asp Phe Gly Ile Pro Gly Gln Pro
385 390 395 400
Gln Asn Val Val Cys Arg His Glu Asp Ala His Gln Gly Val Ile Thr
405 410 415
Trp Asn Pro Pro Gln Arg Ser Phe His Asn Phe Thr Leu Cys Tyr Val
420 425 430
Asn Lys Pro Ala Lys Lys Cys Leu Ile Leu Asp Lys His Leu Thr Thr
435 440 445
Tyr His Leu Gln Asn Leu Lys Pro Tyr Thr Asn Tyr Ser Leu Ser Leu
450 455 460
His Ala Tyr Ile Ile Ala Lys Val Gln Arg Asn Gly Thr Ala Ala Thr
465 470 475 480
Cys Asn Phe Thr Thr Glu Ser Ala Pro Pro Ser Gln Val Gln Asn Met
485 490 495
Ile Val Ser Thr Ser Asp Asn Ser Met His Val Lys Cys Glu Val Pro
500 505 510
Arg Asp Val Asn Gly Pro Thr Gly Leu Tyr His Leu Glu Val Glu Ala
515 520 525
Gly Asn Thr Leu Val Arg Asn Leu Ser Gln Ser Lys Cys Asp Phe Ser
530 535 540
Val Asn Asn Leu Gln Tyr Ser Thr Tyr Tyr Asn Leu Lys Ala Tyr Tyr
545 550 555 560
His Asn Gly Lys Tyr Ser Gly Glu Pro Val Ile Leu Arg Glu Ser Thr
565 570 575
Ser Tyr Asn Ser Lys Ala Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ile
580 585 590
Val Thr Ser Ile Ala Leu Leu Val Val Leu Tyr Lys Ile Tyr Asp Leu
595 600 605
His Lys Lys Arg Ser Cys Asn Leu Asp Glu Gln Gln Glu Leu Val Glu
610 615 620
Arg Asp Asp Glu Lys Gln Leu Met Asn Val Glu Pro Ile His Ala Asp
625 630 635 640
Ile Leu Leu Glu Thr Tyr Lys Arg Lys Ile Ala Asp Glu Gly Arg Leu
645 650 655
Phe Leu Ala Glu Phe Gln Ser Ile Pro Arg Val Phe Ser Lys Phe Pro
660 665 670
Ile Lys Glu Ala Arg Lys Pro Phe Asn Gln Asn Lys Asn Arg Tyr Val
675 680 685
Asp Ile Leu Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Glu Leu Ser Glu Ile Asn
690 695 700
Gly Asp Ala Gly Ser Asn Tyr Ile Asn Ala Ser Tyr Ile Asp Gly Phe
705 710 715 720
Lys Glu Pro Arg Lys Tyr Ile Ala Ala Gln Gly Pro Arg Asp Glu Thr
725 730 735
Val Asp Asp Phe Trp Arg Met Ile Trp Glu Gln Lys Ala Thr Val Ile
740 745 750
Val Met Val Thr Arg Cys Glu Glu Gly Asn Arg Asn Lys Cys Ala Glu
755 760 765
Tyr Trp Pro Ser Met Glu Glu Gly Thr Arg Ala Phe Gly Asp Ile Val
770 775 780
Val Lys Ile Asn Gln His Lys Arg Cys Pro Asp Tyr Ile Ile Gln Lys
785 790 795 800
Leu Asn Ile Val Asn Lys Lys Glu Lys Ala Thr Gly Arg Glu Val Thr
805 810 815
His Ile Gln Phe Thr Ser Trp Pro Asp His Gly Val Pro Glu Asp Pro
820 825 830
His Leu Leu Leu Lys Leu Arg Arg Arg Val Asn Ala Phe Ser Asn Phe
835 840 845
Phe Ser Gly Pro Ile Val Val His Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr
850 855 860
Gly Thr Tyr Ile Gly Ile Asp Ala Met Leu Glu Gly Leu Glu Ala Glu
865 870 875 880
Asn Lys Val Asp Val Tyr Gly Tyr Val Val Lys Leu Arg Arg Gln Arg
885 890 895
Cys Leu Met Val Gln Val Glu Ala Gln Tyr Ile Leu Ile His Gln Ala
900 905 910
Leu Val Glu Tyr Asn Gln Phe Gly Glu Thr Glu Val Asn Leu Ser Glu
915 920 925
Leu His Pro Tyr Leu His Asn Met Lys Lys Arg Asp Pro Pro Ser Glu
930 935 940
Pro Ser Pro Leu Glu Ala Glu Phe Gln Arg Leu Pro Ser Tyr Arg Ser
945 950 955 960
Trp Arg Thr Gln His Ile Gly Asn Gln Glu Glu Asn Lys Asn Lys Asn
965 970 975
Arg Asn Ser Asn Val Ile Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Pro Leu Lys
980 985 990
His Glu Leu Glu Met Ser Lys Glu Ser Asp His Asp Ser Asp Glu Ser
995 1000 1005
Ser Asp Asp Asp Ser Asp Ser Glu Glu Pro Ser Lys Tyr Ile Asn
1010 1015 1020
Ala Ser Phe Ile Met Ser Tyr Trp Lys Pro Glu Val Met Ile Ala
1025 1030 1035
Ala Gln Gly Pro Leu Lys Glu Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met
1040 1045 1050
Ile Phe Gln Arg Lys Val Lys Val Ile Val Met Leu Thr Glu Leu
1055 1060 1065
Lys His Gly Asp Gln Glu Ile Cys Ala Gln Tyr Trp Gly Glu Gly
1070 1075 1080
Lys Gln Thr Tyr Gly Asp Ile Glu Val Asp Met Lys Asp Thr Asn
1085 1090 1095
Lys Ser Ser Thr Tyr Thr Leu Arg Val Phe Glu Leu Arg His Ser
1100 1105 1110
Lys Arg Lys Asp Ser Arg Thr Val Tyr Gln Tyr Gln Tyr Thr Asn
1115 1120 1125
Trp Ser Val Glu Gln Leu Pro Ala Glu Pro Lys Glu Leu Val Ser
1130 1135 1140
Leu Ile Gln Val Leu Lys Glu Lys Leu Pro Gln Lys Asn Phe Ser
1145 1150 1155
Glu Gly Asn Lys His His Lys Ser Thr Pro Leu Leu Ile His Cys
1160 1165 1170
Arg Asp Gly Ser Gln Gln Thr Gly Ile Phe Cys Ala Leu Leu Asn
1175 1180 1185
Leu Leu Glu Ser Ala Glu Thr Glu Glu Val Val Asp Ile Phe Gln
1190 1195 1200
Val Val Lys Ala Leu Arg Lys Ala Arg Pro Gly Met Val Ser Thr
1205 1210 1215
Phe Glu Gln Tyr Gln Phe Leu Tyr Asp Ile Ile Ala Ser Thr Tyr
1220 1225 1230
Pro Ala Gln Asn Gly Gln Val Lys Lys Asn Asn His Gln Glu Asp
1235 1240 1245
Lys Ile Glu Phe Asp Asn Glu Val Asp Lys Val Lys Gln Asp Ala
1250 1255 1260
Asn Cys Val Asn Pro Leu Gly Ala Thr Glu Lys Leu Pro Glu Ala
1265 1270 1275
Lys Glu Gln Ala Thr Gly Ser Glu Pro Thr Ser Gly Thr Glu Gly
1280 1285 1290
Pro Glu His Ser Val Asn Gly Pro Ala Ser Pro Ala Leu Asn Gln
1295 1300 1305
Gly Ser
1310
<210> 195
<211> 1310
<212> PRT
<213> 恒河猴(Macaca mulatta)
<400> 195
Met Thr Met Cys Leu Trp Leu Lys Leu Leu Ala Phe Val Phe Ala Phe
1 5 10 15
Leu Asp Thr Glu Val Phe Val Thr Gly Gln Gly Ser Thr Leu Ser Pro
20 25 30
Thr Gly Arg Arg Thr Thr Lys Met Pro Ser Val Pro Leu Ser Ser Asp
35 40 45
Pro Leu Pro Thr His Thr Thr Ala Phe Ser Pro Ala Ser Ile Ser Glu
50 55 60
Arg Glu Asn Asp Phe Ser Glu Thr Thr Pro Ser Leu Ser Ser Asp Asn
65 70 75 80
Thr Ser Thr His Val Ser Pro Asp Ser Leu Asp Asn Ala Ser Ala Phe
85 90 95
Asn Thr Thr Gly Val Ser Ser Ala Leu Thr Pro His Leu Pro Thr His
100 105 110
Ala Asp Ser Gln Thr Pro Ser Thr Gly Thr Asp Thr Gln Thr Pro Ser
115 120 125
Gly Ser Ala Ala Asn Thr Thr Leu Ser Pro Thr Pro Arg Ser Asn Asp
130 135 140
Ile Ser Asp Val Pro Gly Glu Arg Ser Thr Ala Ser Thr Phe Pro Thr
145 150 155 160
Asp Pro Ile Ser Pro Leu Ala Thr Thr Leu Ile Pro Ala Arg Asn Ser
165 170 175
Ser Ala Ala Leu Pro Ala Arg Thr Ser Asn Thr Thr Ile Thr Ala Asn
180 185 190
Thr Ser Val Ser Tyr Leu Asn Ala Ser Glu Thr Thr Thr Pro Ser Pro
195 200 205
Ser Gly Ser Thr Val Ile Ser Thr Pro Thr Ile Ala Thr Thr Thr Ser
210 215 220
Lys Pro Thr Cys Ala Glu Lys Tyr Ala Thr Ile Pro Val Asp Tyr Leu
225 230 235 240
Tyr Asn Asn Lys Thr Lys Leu Phe Thr Ala Lys Leu Asn Val Asn Glu
245 250 255
Asn Val Glu Cys Thr Asn Asn Asn His Thr His Asn Ile Cys Thr Asn
260 265 270
Asn Glu Val Leu Asn Leu Pro Glu Cys Lys Glu Met Asn Val Phe Val
275 280 285
Ser His Asn Ser Cys Thr Asp Arg His Lys Glu Leu Lys Leu Asp Val
290 295 300
Pro Pro Glu Val Glu Lys Phe Gln Leu Asp Asp Cys Thr Pro Asp Val
305 310 315 320
Glu Ala Asn Thr Thr Ile Cys Leu Lys Trp Lys Ile Ile Glu Thr Phe
325 330 335
Ala Cys Asp Lys Ser Lys Ile Thr Tyr Arg Phe Gln Cys Gly Asn Lys
340 345 350
Thr Tyr Asn Lys Glu Gly Ile Tyr Leu Glu Asn Leu Glu Pro Glu Tyr
355 360 365
Glu Tyr Lys Cys Asp Ser Glu Ile Leu Tyr Asn Asn His Lys Tyr Ile
370 375 380
Asn Ile Thr Lys Leu Ile Lys Thr Asp Phe Gly Ile Pro Gly Gln Pro
385 390 395 400
Gln Asn Val Val Cys Arg His Glu Asp Ala His Gln Gly Val Ile Thr
405 410 415
Trp Asn Pro Pro Gln Arg Ser Phe His Asn Phe Thr Leu Cys Tyr Val
420 425 430
Ser Lys Thr Ala Lys Lys Cys Leu Ser Leu Asp Lys His Leu Thr Thr
435 440 445
Tyr His Leu Gln Asn Leu Lys Pro Tyr Thr Asn Tyr Ser Leu Ser Leu
450 455 460
His Ala Tyr Ile Ile Ala Lys Val Gln Arg Asn Gly Thr Ala Ala Thr
465 470 475 480
Cys Asn Phe Thr Thr Glu Ser Ala Pro Pro Ser Gln Val Gln Asn Met
485 490 495
Ile Val Ser Thr Ser Asp Asn Ser Met Arg Val Lys Cys Glu Ala Pro
500 505 510
Arg Asp Val Asn Gly Pro Thr Glu Leu Tyr Leu Leu Glu Val Glu Ala
515 520 525
Gly Asn Thr Leu Val Arg Asn Leu Ser Gln Ser Glu Cys Asp Phe Ser
530 535 540
Val Asn Asn Leu Gln Tyr Ser Thr Tyr Tyr Asn Leu Lys Ala Tyr Tyr
545 550 555 560
His Asn Gly Lys Tyr Ser Gly Glu Pro Val Ile Leu Arg Glu Ser Thr
565 570 575
Ser Tyr Asn Ser Lys Ala Leu Ile Ala Phe Leu Ala Phe Leu Ile Ile
580 585 590
Val Thr Ser Ile Ala Leu Leu Val Val Leu Tyr Lys Ile Tyr Asp Leu
595 600 605
His Lys Lys Arg Ser Cys Asn Leu Asp Glu Gln Gln Glu Leu Val Glu
610 615 620
Arg Asp Asp Glu Lys Gln Leu Met Asn Val Glu Pro Ile His Ala Asp
625 630 635 640
Ile Leu Leu Glu Thr Tyr Lys Arg Lys Ile Ala Asp Glu Gly Arg Leu
645 650 655
Phe Leu Ala Glu Phe Gln Ser Ile Pro Arg Val Phe Ser Lys Phe Pro
660 665 670
Ile Lys Glu Ala Arg Lys Pro Phe Asn Gln Asn Lys Asn Arg Tyr Val
675 680 685
Asp Ile Leu Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Glu Leu Ser Glu Ile Asn
690 695 700
Gly Asp Ala Gly Ser Asn Tyr Ile Asn Ala Ser Tyr Ile Asp Gly Phe
705 710 715 720
Lys Glu Pro Arg Lys Tyr Ile Ala Ala Gln Gly Pro Arg Asp Glu Thr
725 730 735
Val Asp Asp Phe Trp Arg Met Ile Trp Glu Gln Lys Ala Thr Val Ile
740 745 750
Val Met Val Thr Arg Cys Glu Glu Gly Asn Arg Asn Lys Cys Ala Glu
755 760 765
Tyr Trp Pro Ser Met Glu Glu Gly Thr Arg Ala Phe Gly Asp Val Val
770 775 780
Val Lys Ile Asn Gln His Lys Arg Cys Pro Asp Tyr Ile Ile Gln Lys
785 790 795 800
Leu Asn Ile Val Asn Lys Lys Glu Lys Ala Thr Gly Arg Glu Val Thr
805 810 815
His Ile Gln Phe Thr Ser Trp Pro Asp His Gly Val Pro Glu Asp Pro
820 825 830
His Leu Leu Leu Lys Leu Arg Arg Arg Val Asn Ala Phe Ser Asn Phe
835 840 845
Phe Ser Gly Pro Ile Val Val His Cys Ser Ala Gly Val Gly Arg Thr
850 855 860
Gly Thr Tyr Ile Gly Ile Asp Ala Met Leu Glu Gly Leu Glu Ala Glu
865 870 875 880
Asn Lys Val Asp Val Tyr Gly Tyr Val Val Lys Leu Arg Arg Gln Arg
885 890 895
Cys Leu Met Val Gln Val Glu Ala Gln Tyr Ile Leu Ile His Gln Ala
900 905 910
Leu Val Glu Tyr Asn Gln Phe Gly Glu Thr Glu Val Asn Leu Ser Glu
915 920 925
Leu His Pro Tyr Leu His Asn Met Lys Lys Arg Asp Pro Pro Ser Glu
930 935 940
Pro Ser Pro Leu Glu Ala Glu Phe Gln Arg Leu Pro Ser Tyr Arg Ser
945 950 955 960
Trp Arg Thr Gln His Ile Gly Asn Gln Glu Glu Asn Lys Asn Lys Asn
965 970 975
Arg Asn Ser Asn Val Ile Pro Tyr Asp Tyr Asn Arg Val Pro Leu Lys
980 985 990
His Glu Leu Glu Met Ser Lys Glu Ser Asp His Asp Ser Asp Glu Ser
995 1000 1005
Ser Asp Asp Asp Ser Asp Ser Glu Glu Pro Ser Lys Tyr Ile Asn
1010 1015 1020
Ala Ser Phe Ile Met Ser Tyr Trp Lys Pro Glu Val Met Ile Ala
1025 1030 1035
Ala Gln Gly Pro Leu Lys Glu Thr Ile Gly Asp Phe Trp Gln Met
1040 1045 1050
Ile Phe Gln Arg Lys Val Lys Val Ile Val Met Leu Thr Glu Leu
1055 1060 1065
Lys His Gly Asp Gln Glu Ile Cys Ala Gln Tyr Trp Gly Glu Gly
1070 1075 1080
Lys Gln Thr Tyr Gly Asp Ile Glu Val Asp Met Lys Asp Thr Asn
1085 1090 1095
Lys Ser Ser Thr Tyr Thr Leu Arg Val Phe Glu Leu Arg His Ser
1100 1105 1110
Lys Arg Lys Asp Ser Arg Thr Val Tyr Gln Tyr Gln Tyr Thr Asn
1115 1120 1125
Trp Ser Val Glu Gln Leu Pro Ala Glu Pro Lys Glu Leu Val Ser
1130 1135 1140
Leu Ile Gln Val Leu Lys Glu Lys Leu Pro Gln Lys Asn Ser Ser
1145 1150 1155
Glu Gly Asn Lys His His Lys Ser Thr Pro Leu Leu Ile His Cys
1160 1165 1170
Arg Asp Gly Ser Gln Gln Thr Gly Ile Phe Cys Ala Leu Leu Asn
1175 1180 1185
Leu Leu Glu Ser Ala Glu Thr Glu Glu Val Val Asp Ile Phe Gln
1190 1195 1200
Val Val Lys Ala Leu Arg Lys Ala Arg Pro Gly Met Val Ser Thr
1205 1210 1215
Phe Glu Gln Tyr Gln Phe Leu Tyr Asp Ile Ile Ala Ser Thr Tyr
1220 1225 1230
Pro Ala Gln Asn Gly Gln Val Lys Lys Asn Asn His Gln Glu Asp
1235 1240 1245
Lys Ile Glu Phe Asp Asn Glu Val Asp Lys Val Lys Gln Asp Ala
1250 1255 1260
Asn Cys Val Asn Pro Leu Gly Ala Thr Glu Lys Leu Pro Glu Ala
1265 1270 1275
Lys Glu Gln Ala Thr Gly Ser Glu Pro Thr Ser Gly Thr Glu Gly
1280 1285 1290
Pro Glu His Ser Val Asn Gly Pro Ala Ser Pro Ala Leu Asn Gln
1295 1300 1305
Gly Ser
1310
<210> 196
<211> 293
<212> PRT
<213> 大肠杆菌(Escherichia coli)
<400> 196
Lys Glu Phe Thr Leu Asp Phe Ser Thr Ala Lys Thr Tyr Val Asp Ser
1 5 10 15
Leu Asn Val Ile Arg Ser Ala Ile Gly Thr Pro Leu Gln Thr Ile Ser
20 25 30
Ser Gly Gly Thr Ser Leu Leu Met Ile Asp Ser Gly Ser Gly Asp Asn
35 40 45
Leu Phe Ala Val Asp Val Arg Gly Ile Asp Pro Glu Glu Gly Arg Phe
50 55 60
Asn Asn Leu Arg Leu Ile Val Glu Arg Asn Asn Leu Tyr Val Thr Gly
65 70 75 80
Phe Val Asn Arg Thr Asn Asn Val Phe Tyr Arg Phe Ala Asp Phe Ser
85 90 95
His Val Thr Phe Pro Gly Thr Thr Ala Val Thr Leu Ser Gly Asp Ser
100 105 110
Ser Tyr Thr Thr Leu Gln Arg Val Ala Gly Ile Ser Arg Thr Gly Met
115 120 125
Gln Ile Asn Arg His Ser Leu Thr Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Met Ser
130 135 140
His Ser Gly Thr Ser Leu Thr Gln Ser Val Ala Arg Ala Met Leu Arg
145 150 155 160
Phe Val Thr Val Thr Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln Arg
165 170 175
Gly Phe Arg Thr Thr Leu Asp Asp Leu Ser Gly Arg Ser Tyr Val Met
180 185 190
Thr Ala Glu Asp Val Asp Leu Thr Leu Asn Trp Gly Arg Leu Ser Ser
195 200 205
Val Leu Pro Asp Tyr His Gly Gln Asp Ser Val Arg Val Gly Arg Ile
210 215 220
Ser Phe Gly Ser Ile Asn Ala Ile Leu Gly Ser Val Ala Leu Ile Leu
225 230 235 240
Asn Cys His His His Ala Ser Arg Val Ala Arg Met Ala Ser Asp Glu
245 250 255
Phe Pro Ser Met Cys Pro Ala Asp Gly Arg Val Arg Gly Ile Thr His
260 265 270
Asn Lys Ile Leu Trp Asp Ser Ser Thr Leu Gly Ala Ile Leu Met Arg
275 280 285
Arg Thr Ile Ser Ser
290
<210> 197
<211> 293
<212> PRT
<213> 痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)
<400> 197
Lys Glu Phe Thr Leu Asp Phe Ser Thr Ala Lys Thr Tyr Val Asp Ser
1 5 10 15
Leu Asn Val Ile Arg Ser Ala Ile Gly Thr Pro Leu Gln Thr Ile Ser
20 25 30
Ser Gly Gly Thr Ser Leu Leu Met Ile Asp Ser Gly Thr Gly Asp Asn
35 40 45
Leu Phe Ala Val Asp Val Arg Gly Ile Asp Pro Glu Glu Gly Arg Phe
50 55 60
Asn Asn Leu Arg Leu Ile Val Glu Arg Asn Asn Leu Tyr Val Thr Gly
65 70 75 80
Phe Val Asn Arg Thr Asn Asn Val Phe Tyr Arg Phe Ala Asp Phe Ser
85 90 95
His Val Thr Phe Pro Gly Thr Thr Ala Val Thr Leu Ser Gly Asp Ser
100 105 110
Ser Tyr Thr Thr Leu Gln Arg Val Ala Gly Ile Ser Arg Thr Gly Met
115 120 125
Gln Ile Asn Arg His Ser Leu Thr Thr Ser Tyr Leu Asp Leu Met Ser
130 135 140
His Ser Gly Thr Ser Leu Thr Gln Ser Val Ala Arg Ala Met Leu Arg
145 150 155 160
Phe Val Thr Val Thr Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln Arg
165 170 175
Gly Phe Arg Thr Thr Leu Asp Asp Leu Ser Gly Arg Ser Tyr Val Met
180 185 190
Thr Ala Glu Asp Val Asp Leu Thr Leu Asn Trp Gly Arg Leu Ser Ser
195 200 205
Val Leu Pro Asp Tyr His Gly Gln Asp Ser Val Arg Val Gly Arg Ile
210 215 220
Ser Phe Gly Ser Ile Asn Ala Ile Leu Gly Ser Val Ala Leu Ile Leu
225 230 235 240
Asn Cys His His His Ala Ser Arg Val Ala Arg Met Ala Ser Asp Glu
245 250 255
Phe Pro Ser Met Cys Pro Ala Asp Gly Arg Val Arg Gly Ile Thr His
260 265 270
Asn Lys Ile Leu Trp Asp Ser Ser Thr Leu Gly Ala Ile Leu Met Arg
275 280 285
Arg Thr Ile Ser Ser
290
<210> 198
<211> 297
<212> PRT
<213> 大肠杆菌(Escherichia coli)
<400> 198
Asp Glu Phe Thr Val Asp Phe Ser Ser Gln Lys Ser Tyr Val Asp Ser
1 5 10 15
Leu Asn Ser Ile Arg Ser Ala Ile Ser Thr Pro Leu Gly Asn Ile Ser
20 25 30
Gln Gly Gly Val Ser Val Ser Val Ile Asn His Val Leu Gly Gly Asn
35 40 45
Tyr Ile Ser Leu Asn Val Arg Gly Leu Asp Pro Tyr Ser Glu Arg Phe
50 55 60
Asn His Leu Arg Leu Ile Met Glu Arg Asn Asn Leu Tyr Val Ala Gly
65 70 75 80
Phe Ile Asn Thr Glu Thr Asn Ile Phe Tyr Arg Phe Ser Asp Phe Ser
85 90 95
His Ile Ser Val Pro Asp Val Ile Thr Val Ser Met Thr Thr Asp Ser
100 105 110
Ser Tyr Ser Ser Leu Gln Arg Ile Ala Asp Leu Glu Arg Thr Gly Met
115 120 125
Gln Ile Gly Arg His Ser Leu Val Gly Ser Tyr Leu Asp Leu Met Glu
130 135 140
Phe Arg Gly Arg Ser Met Thr Arg Ala Ser Ser Arg Ala Met Leu Arg
145 150 155 160
Phe Val Thr Val Ile Ala Glu Ala Leu Arg Phe Arg Gln Ile Gln Arg
165 170 175
Gly Phe Arg Pro Ala Leu Ser Glu Ala Ser Pro Leu Tyr Thr Met Thr
180 185 190
Ala Gln Asp Val Asp Leu Thr Leu Asn Trp Gly Arg Ile Ser Asn Val
195 200 205
Leu Pro Glu Tyr Arg Gly Glu Glu Gly Val Arg Ile Gly Arg Ile Ser
210 215 220
Phe Asn Ser Leu Ser Ala Ile Leu Gly Ser Val Ala Val Ile Leu Asn
225 230 235 240
Cys His Ser Thr Gly Ser Tyr Ser Val Arg Ser Val Ser Gln Lys Gln
245 250 255
Lys Thr Glu Cys Gln Ile Val Gly Asp Arg Ala Ala Ile Lys Val Asn
260 265 270
Asn Val Leu Trp Glu Ala Asn Thr Ile Ala Ala Leu Leu Asn Arg Lys
275 280 285
Pro Gln Asp Leu Thr Glu Pro Asn Gln
290 295

Claims (58)

1.一种使需要造血干细胞(HSC)移植的人类患者中的CD45+细胞群体耗竭的方法，所述方法包括在所述患者接受包含同种异体HSC的移植物之前向所述患者施用有效量的偶联至细胞毒素的CD45靶向部分，其中所述患者在所述移植之前或与所述移植大体上同时没有用免疫抑制剂调理。
2.一种方法，所述方法包括：
a.在不存在免疫抑制剂的情况下以足以使人类患者中的CD45+细胞群体耗竭的有效量向所述患者施用偶联至细胞毒素的CD45靶向部分；以及
b.随后向所述患者施用包含同种异体HSC的移植物。
3.一种方法，所述方法包括向人类患者施用包含同种异体HSC的移植物，其中先前已经在不存在免疫抑制剂的情况下以足以使所述患者中的造血干细胞群体耗竭的有效量向所述患者施用偶联至细胞毒素的CD45靶向部分。
4.如权利要求1-3中任一项所述的方法，其中偶联至所述细胞毒素的所述CD45靶向部分是抗CD45抗体药物缀合物(ADC)。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述同种异体HSC包含相对于所述患者中的HLA抗原的一个或多个HLA错配。
6.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述同种异体HSC包含相对于所述患者中的HLA抗原的两个或更多个HLA错配。
7.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述同种异体HSC包含相对于所述患者中的HLA抗原的三个或更多个HLA错配。
8.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述同种异体HSC包含相对于所述患者中的HLA抗原的五个或更多个HLA错配。
9.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述同种异体HSC包含相对于所述患者中的HLA抗原的完全HLA错配。
10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述同种异体HSC包含相对于所述患者中的次要组织相容性抗原的一个或多个次要组织相容性抗原(miHA)错配。
11.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述同种异体HSC包含相对于所述患者中的次要组织相容性抗原的两个或更多个miHA错配。
12.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述同种异体HSC包含相对于所述患者中的次要组织相容性抗原的五个或更多个miHA错配。
13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述免疫抑制剂是全身照射(TBI)。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述免疫抑制剂是低剂量TBI。
15.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述免疫抑制剂是抗CD4抗体、抗CD8抗体或它们的组合。
16.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述免疫抑制剂是环磷酰胺。
17.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述患者在所述移植前至少24小时和/或所述移植后至少24小时不接受免疫抑制剂。
18.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述患者在所述移植前至少48小时和/或所述移植后至少48小时不接受免疫抑制剂。
19.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述患者在所述移植前至少72小时和/或所述移植后至少72小时不接受免疫抑制剂。
20.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述患者在所述移植前至少96小时和/或所述移植后至少96小时不接受免疫抑制剂。
21.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述患者在所述移植前至少7天和/或所述移植后至少7天不接受免疫抑制剂。
22.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述患者在所述移植前至少14天和/或所述移植后至少14天不接受免疫抑制剂。
23.如权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述患者在所述移植前至少1个月和/或所述移植后至少1个月不接受免疫抑制剂。
24.如权利要求1-23中任一项所述的方法，其中偶联至所述毒素的所述CD45靶向部分的所述有效量是足以建立至少80％、85％、90％、95％、97％、99％或100％供体嵌合的量。
25.如权利要求24所述的方法，其中在移植后至少6周、7周、8周、9周或10周评估供体嵌合。
26.如权利要求24或25所述的方法，其中所述供体嵌合是总外周嵌合。
27.如权利要求24或25所述的方法，其中所述供体嵌合是骨髓嵌合。
28.如权利要求24或25所述的方法，其中所述供体嵌合是T细胞嵌合。
29.如权利要求24或25所述的方法，其中所述供体嵌合是B细胞嵌合。
30.如权利要求1-29中任一项所述的方法，其中以单个剂量向所述患者施用所述有效量的偶联至所述毒素的所述CD45靶向部分。
31.如权利要求1-29中任一项所述的方法，其中以两个剂量向所述患者施用所述有效量的偶联至所述毒素的所述CD45靶向部分。
32.如权利要求1-29中任一项所述的方法，其中以两个或更多个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个)剂量向所述患者施用所述有效量的偶联至所述毒素的所述CD45靶向部分。
33.如权利要求1-32中任一项所述的方法，其中在偶联至所述毒素的所述CD45靶向部分的浓度已经从所述患者的血液中大体上清除后，向所述患者施用所述移植物。
34.如权利要求1-33中任一项所述的方法，其中所述造血干细胞或其子代在将所述造血干细胞移植至所述患者中之后两天或更长时间后维持造血干细胞功能潜力。
35.如权利要求1-34中任一项所述的方法，其中所述同种异体造血干细胞或其子代能够在将所述造血干细胞移植至所述患者中之后定位至造血组织和/或重建造血。
36.如权利要求1-35中任一项所述的方法，其中在移植至所述患者中之后，所述造血干细胞引起细胞群体的恢复，所述细胞选自由巨核细胞、血栓细胞、血小板、红细胞、肥大细胞、成髓细胞、嗜碱性粒细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、小胶质细胞、粒细胞、单核细胞、破骨细胞、抗原呈递细胞、巨噬细胞、树突细胞、自然杀伤细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞组成的组。
37.如权利要求1-36中任一项所述的方法，其中所述患者正罹患干细胞病症。
38.如权利要求1-36中任一项所述的方法，其中所述患者正罹患血红蛋白病病症、自身免疫病症、骨髓增生异常病症、免疫缺陷病症或代谢病症。
39.如权利要求1-36中任一项所述的方法，其中所述患者正罹患癌症。
40.如权利要求4-40中任一项所述的方法，其中所述抗CD45ADC包含如通过生物层干涉法(BLI)所测量，解离率(KOFF)为1x10-2至1x10-3、1x10-3至1x10-4、1x10-5至1x10-6、1x10-6至1x10-7或1x10-7至1x10-8的抗体。
41.如权利要求4-40中任一项所述的方法，其中所述抗CD45ADC包含如通过生物层干涉法(BLI)测定所确定，以约100nM或更小、约90nM或更小、约80nM或更小、约70nM或更小、约60nM或更小、约50nM或更小、约40nM或更小、约30nM或更小、约20nM或更小、约10nM或更小、约8nM或更小、约6nM或更小、约4nM或更小、约2nM或更小、约1nM或更小的KD结合CD45的抗体。
42.如权利要求4-41中任一项所述的方法，其中所述抗CD45ADC包含人源化抗CD45抗体或其抗原结合部分。
43.如权利要求4-41中任一项所述的方法，其中所述抗CD45ADC包含人类抗CD45抗体或其抗原结合部分。
44.如权利要求4-43中任一项所述的方法，其中所述抗CD45ADC包含表5中所列的抗CD45抗体或其抗原结合部分。
45.如权利要求4-44中任一项所述的方法，其中所述抗CD45ADC包含完整抗CD45抗体。
46.如权利要求4-45中任一项所述的方法，其中所述抗CD45ADC包含IgG抗体。
47.如权利要求46所述的方法，其中所述IgG是IgG1同种型、IgG2同种型、IgG3同种型或IgG4同种型。
48.如权利要求4-47中任一项所述的方法，其中所述抗CD45ADC包含通过连接子缀合至细胞毒素的抗CD45抗体或其抗原结合部分。
49.如权利要求48所述的方法，其中所述细胞毒素是RNA聚合酶抑制剂。
50.如权利要求49所述的方法，其中所述RNA聚合酶抑制剂是鹅膏毒素。
51.如权利要求50所述的方法，其中所述鹅膏毒素是鹅膏蕈碱。
52.如权利要求50所述的方法，其中所述鹅膏毒素选自由α-鹅膏蕈碱、β-鹅膏蕈碱、γ-鹅膏蕈碱、ε-鹅膏蕈碱、鹅膏素、鹅膏酰胺、鹅膏无毒环肽、鹅膏蕈酸和鹅膏无毒环肽原组成的组。
53.如权利要求48所述的方法，其中所述细胞毒素是吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)。
54.如权利要求48所述的方法，其中所述细胞毒素选自由假单胞菌外毒素A、德博甘宁、白喉毒素、皂草素、美登素、类美登素、奥瑞他汀、蒽环霉素、加利车霉素、伊立替康、SN-38、多卡霉素、吡咯并苯并二氮杂卓、吡咯并苯并二氮杂卓二聚体、吲哚啉并苯并二氮杂卓、吲哚啉并苯并二氮杂卓二聚体和吲哚啉并苯并二氮杂卓假二聚体组成的组。
55.如权利要求54所述的方法，其中所述奥瑞他汀是MMAE或MMAF。
56.如权利要求48-55中任一项所述的方法，其中所述抗体通过所述抗体的Fc结构域中的半胱氨酸残基缀合至所述毒素。
57.如权利要求56所述的方法，其中所述半胱氨酸残基通过所述抗体的Fc结构域中的氨基酸取代而引入。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述氨基酸取代是S239C或D265C。
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