CN115379839A - 使用包含免疫抑制剂的合成纳米载体的方法和组合物 - Google Patents

Abstract

本文中提供了与包含免疫抑制剂的合成纳米载体相关的方法和组合物，其可用于例如诱导自噬和/或促进致耐受性表型。

Description

使用包含免疫抑制剂的合成纳米载体的方法和组合物

相关申请

本申请是2020年4月14日提交的国际专利申请No.PCT/US2020/028132的部分继续申请。根据35 U.S.C.§119、35 U.S.C.§120或35 U.S.C.§365(b)要求以下的优先权权益：2020年2月26日提交的美国临时申请No.62/981606；2020年2月26日提交的美国临时申请No.62/981612；2020年2月26日提交的美国临时申请No.62/981594；2020年2月26日提交的美国临时申请No.62/981584；2020年2月26日提交的美国临时申请No.62/981586；2020年2月26日提交的美国临时申请No.62/981589；2020年2月26日提交的美国临时申请No.62/981595；2020年2月26日提交的美国临时申请No.62/981602；以及2020年4月14日提交的国际专利申请No.PCT/US2020/028132。这些申请中的每一个的内容均通过引用整体并入本文。

技术领域

本文中提供了与包含免疫抑制剂的合成纳米载体相关的方法和组合物，其用于诱导自噬和/或促进耐受性形成。所述组合物和方法可用于治疗或预防自噬相关疾病或病症和/或用于调节特异性免疫应答，如本文所提供的。所述组合物和方法可用于在对象中治疗或预防中枢神经系统(central nervous system，CNS)疾病或病症、与器官或组织的移植相关的疾病或病症、或者自身免疫疾病或病症。所述组合物和方法还可用于在对象中治疗或预防NF-kB介导的炎症，用于1)PD-L1和/或PD-1上调和/或2)MHC II类和/或CD80和/或CD86下调，和/或用于增强双阴性T细胞。

发明内容

在一个方面中，本文中提供了用于在对象中诱导或提高自噬的方法，其包括向对象施用含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物。在一个实施方案中，对象是需要诱导或提高自噬的对象。

在一个方面中，本文中提供了用于在对象中治疗或预防自噬相关疾病或病症的方法，其包括向对象施用含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物，其中对象患有自噬相关疾病或病症或者处于发生自噬相关疾病或病症的风险中。

在一个方面中，本文中提供了用于在对象中治疗或预防中枢神经系统(CNS)疾病或病症(例如，神经退行性疾病或病症)的方法，其包括向对象施用含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物，其中对象患有CNS疾病或病症或者处于发生CNS疾病或病症的风险中。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用提高了中枢神经系统(例如，脑、脊髓、视神经)中的自噬。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用提高了肝中的自噬。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用可提高肺、心脏、肾或脑、或其任何组合中的自噬。

在一个方面中，本文中提供了用于在对象中治疗或预防与器官或组织移植相关的疾病或病症的方法，其包括向对象施用含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物，其中对象患有以下或者处于发生以下的风险中：与器官或组织移植相关的疾病或障碍或病症。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，对象是患有移植物抗宿主病(graft versus host disease，GVHD)或者处于患有移植物抗宿主病(GVHD)的风险中的对象。在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，对象是患有以下或者处于患有以下的风险中的对象：与骨髓或干细胞移植物相关的移植物抗宿主病(GVHD)。在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，与器官或组织移植相关的疾病或病症不是移植物抗宿主病(GVHD)。

在一个方面中，本文中提供了用于在对象中治疗或预防自身免疫疾病或病症的方法，其包括向对象施用含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物，其中对象患有自身免疫疾病或病症或者处于发生自身免疫疾病或病症的风险中。

在一个方面中，本文中提供了用于在对象中治疗或预防NF-kB介导的炎症的方法，其包括向对象施用含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物，其中对象患有NF-kB介导的炎症或者处于发生NF-kB介导的炎症的风险中。

在一个方面中，本文中提供了用于在对象中1)上调PD-L1和/或PD-1和/或2)下调MHC II类和/或CD80和/或CD86的方法，其包括向对象施用含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物，其中对象需要这样的上调和/或下调。

在一个方面中，本文中提供了用于在对象中增强双阴性T细胞的方法，其包括向对象施用含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物，其中对象需要这样的增强。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用诱导自噬(例如，调节ATG7、LC3 II和/或p62的水平)。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，对象患有以下或者处于发生以下的风险中：自身免疫疾病或病症、变态反应、移植物或移植排斥、或者抗药物抗体应答，或者对象需要减轻治疗性药物免疫原性。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，对象患有以下或者处于发生以下的风险中：缺血性卒中、重症肌无力、系统性红斑狼疮、自身免疫性淋巴增殖综合征、白塞病(Behcet's disease，BD)、自身免疫性淋巴增殖综合征(ALPS，也称为Canale-Smith综合征)、儿童自身免疫病、SLE、干燥综合征(

syndrome)或银屑病。

在所提供的任一种方法的一些实施方案中，所述方法包括降低免疫应答和/或介导免疫生物标志物。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，免疫生物标志物包括MHCII类复合体、PD-1、PD-L1、CD80、CD86、CD4 T细胞、CD4和CD25调节性T细胞和/或CD8 T细胞。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，免疫生物标志物包括MHC II类复合体、PD-L1、CD80和/或CD86。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，免疫生物标志物包括一种或更多种双阴性T细胞生物标志物。

在所提供的任一种方法的一些实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用提高了致耐受性表型。

在所提供的任一种方法的一些实施方案中，所述方法还包括鉴定和/或提供需要本文中提供的方法或组合物的对象。

在所提供的任一种方法的一些实施方案中，所述方法还包括鉴定和/或提供患有或怀疑患有与器官或组织移植相关的疾病或病症的对象。

在所提供的任一种方法的一些实施方案中，所述方法还包括鉴定和/或提供患有或怀疑患有自身免疫疾病或病症的对象。

在所提供的任一种方法的一些实施方案中，所述方法还包括鉴定和/或提供患有或怀疑患有NF-kB介导的炎症的对象。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体不与治疗性大分子伴随施用，或者以以下组合伴随施用：治疗性大分子和分开(例如，不在同一施用组合物中)施用的包含免疫抑制剂的合成纳米载体。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体不与治疗性大分子同时施用。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体不与病毒载体伴随施用，或者以以下组合伴随施用：病毒载体和分开(例如，不在同一施用组合物中)施用的包含免疫抑制剂的合成纳米载体。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体不与病毒载体同时施用。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体不与APC可呈递抗原伴随施用，或者以以下组合伴随施用：APC可呈递抗原和分开(例如，不在同一施用组合物中)施用的包含免疫抑制剂的合成纳米载体。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体不与APC可呈递抗原同时施用。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，所述方法还包括提供需要如本文中提供的方法或组合物的对象。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，所述方法还包括鉴定对象为需要本文中提供的方法或者患有本文中提供的任一种疾病或障碍或病症或者处于患有本文中提供的任一种疾病或障碍或病症的风险中。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体的量对于如本文中提供的任何一种或更多种目的是有效的。所述方法可以包括分开施用包含免疫抑制剂的合成纳米载体以用于不同目的，并且在这样的实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体的量对于这样的不同的目的是有效的。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，所述方法还包括提供需要诱导或提高自噬或者患有或怀疑患有自噬相关疾病或病症的对象。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，所述方法还包括鉴定对象为需要本文中提供的方法或者需要诱导或提高自噬或者患有自噬相关疾病或病症或者处于患有自噬相关疾病或病症的风险中。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，用于诱导或提高自噬的包含免疫抑制剂的合成纳米载体为在对象中诱导或提高自噬的有效量。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，用于治疗或预防自噬相关疾病或病症的包含免疫抑制剂的合成纳米载体为治疗或预防自噬相关疾病或病症的有效量。所述方法可以包括分开施用包含免疫抑制剂的合成纳米载体以用于不同目的(例如，不用于诱导或提高自噬)，并且在这样的实施方案中，以对于这样的不同目的有效的量施用包含免疫抑制剂的合成纳米载体。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，自噬相关疾病或病症选自：自身免疫疾病、神经退行性疾病、炎性疾病、糖尿病(例如，I型、II型)、肝疾病、肾疾病、心血管疾病、肌肉退行性疾病、代谢疾病、代谢综合征、溶酶体贮积病、衰老相关疾病、线粒体疾病和感染性疾病。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，所述方法还包括提供患有或怀疑患有CNS疾病或病症的对象。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，所述方法还包括鉴定对象为需要本文中提供的方法或者患有CNS疾病或病症或者处于患有CNS疾病或病症的风险中。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，用于治疗或预防CNS疾病或病症的包含免疫抑制剂的合成纳米载体为诱导或提高自噬或者治疗或预防CNS疾病或病症的有效量。所述方法可以包括分开施用包含免疫抑制剂的合成纳米载体以用于不同目的(例如，不用于诱导或提高自噬)，并且在这样的实施方案中，以对于这样的不同目的有效的量施用包含免疫抑制剂的合成纳米载体。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，CNS疾病或病症选自：阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease)、亨廷顿病(Huntington’s disease)、帕金森病(Parkinson’sdisease)和肌萎缩侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis，ALS)。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，所述方法还包括提供患有或怀疑患有与器官或组织移植相关的疾病或病症的对象。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，所述方法还包括鉴定对象为需要本文中提供的方法或者患有与器官或组织移植相关的疾病或病症或者处于患有与器官或组织移植相关的疾病或病症的风险中。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，用于治疗或预防与器官或组织移植相关的疾病或障碍或病症的包含免疫抑制剂的合成纳米载体为治疗或预防与器官或组织移植相关的疾病或病症和/或促进致耐受性表型的有效量。所述方法可以包括分开施用包含免疫抑制剂的合成纳米载体以用于不同目的，并且在这样的实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体为对于这样的不同目的有效的量。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，所述方法还包括提供患有或怀疑患有自身免疫疾病或病症的对象。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，所述方法还包括鉴定对象为需要本文中提供的方法或者患有自身免疫疾病或病症或者处于患有自身免疫疾病或病症的风险中。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，用于治疗或预防自身免疫疾病或病症的包含免疫抑制剂的合成纳米载体为调节本文中提供的任一种免疫应答和/或治疗或预防自身免疫疾病或病症的有效量。所述方法可以包括分开施用包含免疫抑制剂的合成纳米载体以用于不同目的，并且在这样的实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体为对于这样的不同目的有效的量。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，所述方法还包括提供患有或怀疑患有NF-kB介导的炎症的对象。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，所述方法还包括鉴定对象为需要本文中提供的方法或者患有NF-kB介导的炎症或者处于患有NF-kB介导的炎症的风险中。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体为治疗或预防NF-kB介导的炎症的有效量。所述方法可以包括分开施用包含免疫抑制剂的合成纳米载体以用于不同目的，并且在这样的实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体为对于这样的不同目的有效的量。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，对象是本文中提供的任一种对象。在一个实施方案中，对象是儿童或青少年对象。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，免疫抑制剂是mTOR抑制剂。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，mTOR抑制剂是雷帕霉素或雷帕霉素类似物(rapalog)。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，免疫抑制剂包封在合成纳米载体中。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，合成纳米载体包含脂质纳米粒、聚合物纳米粒、金属纳米粒、基于表面活性剂的乳剂、树枝状聚合物、巴基球、纳米线、病毒样颗粒或者肽或蛋白质颗粒。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，聚合物纳米粒包含聚酯、与聚醚连接的聚酯、聚氨基酸、聚碳酸酯、聚缩醛、聚缩酮、多糖、聚乙基

唑啉或聚乙烯亚胺。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，聚合物纳米粒包含聚酯或与聚醚连接的聚酯。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，聚酯包含聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)或聚己内酯。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，聚合物纳米粒包含聚酯和与聚醚连接的聚酯。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，聚醚包含聚乙二醇或聚丙二醇。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，使用动态光散射获得的合成纳米载体的群体的粒度分布的均值为直径大于110nm、大于150nm、大于200nm或大于250nm。在所提供的任一种方法的一个实施方案中，使用动态光散射获得的合成纳米载体的群体的粒度分布的均值为小于5μm、小于4μm、小于3μm、小于2μm、小于1μm、小于750nm、小于500nm、小于450nm、小于400nm、小于350nm或小于300nm。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，基于合成纳米载体之间的平均值，合成纳米载体中包含的免疫抑制剂的负载为0.1％至50％(重量/重量)、4％至40％、5％至30％、或8％至25％。

在所提供的任一种方法的一个实施方案中，合成纳米载体的群体的纵横比大于或等于1:1、1:1.2、1:1.5、1:2、1:3、1:5、1:7或1:10。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，对象是没有肝疾病或病症的对象和/或不是需要本文中提供的组合物来治疗或预防肝疾病或病症或肝毒性的对象。

在另一个方面中，提供了如在所提供的任一种方法或任一个实施例中描述的组合物。在一个实施方案中，组合物是根据所提供的任一种方法用于施用的任一种组合物。

在另一个方面中，任一种组合物均用于所提供的任一种方法中。

附图说明

图1示出了未经处理或经空纳米粒或ImmTOR^TM处理的OTC缺乏症小鼠模型中自噬标志物LC3II、p26和ATG7的水平。

图2示出了在用多克隆T细胞活化剂伴刀豆球蛋白A(Con A)攻击小鼠之后24小时时，用ImmTOR^TM进行的预防性或治疗性处理降低了丙氨酸转氨酶(alanineaminotransferase，ALT)的血清水平。示出了统计学显著性(*，p<0.05)。

图3示出了ImmTOR^TM纳米粒在幼年型OTC^spf-ash小鼠中的耐受性研究的结果，即经处理小鼠的肝裂解物中的自噬标志物(图3)。

图4A和4B示出了在静脉内注射了12mg/kg ImmTOR^TM纳米粒或12mg/kg空颗粒的幼年型OTCspf-ash小鼠中，ImmTOR^TM颗粒诱导了肝中的自噬(n＝4/组)。图4A示出了ATG7、LC3II和p62的Western印迹分析。图4B示出了ATG7、LC3II和p62水平的密度定量。通过单因素ANOVA和Tukey多重比较检验进行统计学分析(*p值<0.05)。

图5A示出了通过眶后(retro-orbital，r.o.)注射(ImmTOR^TM–Alexa488或ImmTOR–A488；用包封的荧光标签Alexa488修饰的ImmTOR)对向肝的ImmTOR^TM运输进行检测和表型表征的研究设计。ImmTOR含有200μg雷帕霉素(RAPA)。结果通过流式细胞术检测。在收获脾和肝之前72小时、48小时和/或24小时，将小鼠用ImmTOR^TM注射。ImmTOR^TM施用的时间用箭头表示。图5B示出了在向小鼠注射ImmTOR^TM-A488 72小时、48小时和24小时之后，ImmTOR^TM-A488运输至所收获的肝细胞的流式细胞术结果。与无处理(

treatment)(对照)组相比的结果示出在条形图中。

图6A示出了在向小鼠施用包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM–CY5之后7天肝细胞和肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cell，LSEC)中MHC II类表达和PD-L1表达的流式细胞术结果。图6B分别示出了总肝细胞、不具有包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM–CY5的肝细胞、具有包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM–CY5的肝细胞与无处理(对照)组相比MHC-II表达降低和PD-L1表达提高的条形图。

图7示出了评价在收获细胞之前7天、5天和3天的施用包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM–CY5之后肝窦内皮细胞(LSEC)、库普弗细胞(Kupffer cell，KC)和肝驻留型T细胞中的响应的研究设计。

图8A和8B示出了在收获肝窦内皮细胞(LSEC，图8A)或库普弗细胞(KC，图8B)之前7天、5天和3天的施用包含200μg雷帕霉素的ImmTORTM–CY5之后PD-L1的表达。示出了统计学显著性(*p<0.05，**p<0.01)。

图9A和9B示出了在收获肝窦内皮细胞(LSEC，图9A)或库普弗细胞(KC，图9B)之前7天、5天和3天的施用包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM–CY5之后MHC II类的表达。示出了统计学显著性(*p<0.05，**p<0.01)。

图10示出了流式细胞术和条形图结果，其显示在收获肝窦内皮细胞(LSEC)之前7天、5天和3天的施用包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM–CY5之后PD-L1的表达上调。示出了统计学显著性(**p<0.01)。

图11A示出了条形图结果，其显示在收获肝窦内皮细胞(LSEC)之前7天、5天和3天的施用包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM–CY5之后肝窦内皮细胞(LSEC)中CD80的表达下调。示出了统计学显著性(*p<0.05，**p<0.01)。图11B示出了条形图结果，其显示在收获肝窦内皮细胞(LSEC)之前7天、5天和3天的施用包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM–CY5之后肝窦内皮细胞(LSEC)中CD86的表达下调。示出了统计学显著性(**p<0.01)。

图12示出了条形图结果，其显示当组合所收获的LESC时在LSEC中诱导致耐受性表型表明了在收获肝窦内皮细胞(LSEC)之前7天、5天和3天的施用包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM–CY5之后CD80和CD86显著下调和PD-L1显著上调。示出了统计学显著性(*p<0.05，**p<0.01)。

图13示出了用于比较以下的作用的研究设计：(1)通过眶后(r.o.)注射的包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM和未经处理的对照，和(2)通过眶后(r.o.)注射的包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM、通过腹膜内注射(i.p.)的200μg游离可溶性雷帕霉素和未经处理的对照。所有注射均在收获肝驻留型T细胞之前7天施用。一些注射在收获肝细胞之前5天或3天施用。

图14A至14C示出了在收获肝细胞之前7天、5天和3天的施用包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM之后(A)肝驻留型CD4 T细胞、(B)肝CD4和CD25调节性T细胞和(C)肝CD4 PD-1+T细胞的表达的条形图。示出了统计学显著性(*p<0.05，***p<0.001，****p<0.0001)。

图15A和15B示出了(A)在施用包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM、200μg可溶性雷帕霉素之后和未经处理组中的小鼠肝驻留型致耐受性CD4 T细胞上CD4+CD25+PD-1+的表达的条形图。示出了统计学显著性(*p<0.05)。(B)在收获细胞之前7天的施用包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM之后肝驻留型致耐受性CD4 T细胞上的CD4+CD25+PD-1+(***p<0.001)。

图16A和16B示出了(A)在施用包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM、200μg可溶性雷帕霉素之后和未经处理组中的小鼠肝驻留型致耐受性CD8 T细胞上CD8+(CD3+CD8+)T细胞和双阴性(CD3+CD4-CD8-)T细胞的表达的条形图。示出了统计学显著性(*p<0.05，**p<.001)，以及(B)在收获细胞之前7天的施用包含200μg雷帕霉素的ImmTOR^TM之后和未经处理组中的双阴性(CD3+CD4-CD8-)T细胞。示出了统计学显著性(***p<0.001)。

图17显示了GvHD的致死率如何可以用本文中提供的合成纳米载体来限制。

图18显示了GvHD中的重量减轻如何可以用本文中提供的合成纳米载体来限制。

图19显示了本文中提供的合成纳米载体如何维持宿主淋巴细胞，同时实现供体细胞存活。

图20显示了GvHD的致死率如何可以用本文中提供的合成纳米载体以剂量依赖性方式来限制。

图21显示了本文中提供的单剂量合成纳米载体如何可以挽救GvHD致死率。

图22显示了本文中提供的合成纳米载体如何可以减轻GvHD的病征。

图23显示了本文中提供的合成纳米载体如何可以促进供体细胞存活。

具体实施方式

在详细描述本发明之前，应理解，本发明不限于特别示例的物质或工艺参数，因为其当然可变化。还应理解，本文中使用的术语仅用于描述本发明的具体实施方案的目的，并且不旨在限制使用替代术语来描述本发明。

本文(无论是上文还是下文)中引用的所有出版物、专利和专利申请，均通过引用整体并入本文以用于所有目的。

除非另有明确规定，否则本说明书和所附权利要求中使用的没有数量词修饰的名词包括复数指示物。例如，提及“聚合物”包括两种或更多种这样的分子的混合物或者不同分子量的单一聚合物种类的混合物，提及“合成纳米载体”包括两种或更多种这样的合成纳米载体的混合物或者多种这样的合成纳米载体等。

本文中使用的术语“包括”或其变化形式例如“包含”或“含有”应解读为表示包括任何所列举的整体(例如特征、要素、特性、属性、方法/过程步骤或限制)或整体(例如特征、要素、特性、属性、方法/过程步骤或限制)的组，但不排除任何其他的整体或整体的组。因此，本文中使用的术语“包括”是包括性的，并且不排除另外的未列举的整体或方法/过程步骤。

在本文中提供的任一种组合物和方法的一些实施方案中，“包含/包括”可用“基本上由......组成”或“由......组成”代替。短语“基本上由......组成”在本文中用于要求指定的整体或步骤以及不会实质性影响要求保护之发明的特征或功能的那些。本文中使用的术语“由......组成”用于表示只存在列举的整体(例如特征、要素、特性、属性、方法/过程步骤或限制)或整体(例如特征、要素、特性、属性、方法/过程步骤或限制)的组。

A.引言

自噬是细胞内组分降解的机制之一。它是一个系统的通用术语，在该系统中胞质中存在的组分移动至自噬体(溶酶体)(其是消化细胞器)并被降解。认为诱导自噬可抑制炎症、防御病原体感染，以及通过已知的自噬作用例如细胞器降解、胞内纯化和抗原呈递来以其他方式预防和治疗广泛多种的疾病和病症。

自噬被认为在CNS疾病和病症中发挥作用。在健康的生物体中，自噬在CNS中具有组成性活性，从而防止聚集体的积累，满足能量需求以及支持神经元的可塑性。也就是说，已发现自噬具有神经保护作用，从而促进细胞存活以及防止神经退行性变(Puyal et al.,Neuroscientist.2012Jun；18(3):224-36)。当自噬或其他蛋白质降解系统无法正常运作时，神经元开始积累有缺陷的或突变体蛋白质聚集体，从而导致毒性细胞损伤和细胞死亡，并最终导致神经退行性变。

如本文所提供的，已发现施用包含免疫抑制剂(例如，雷帕霉素)的合成纳米载体在施用时诱导自噬。如本文中所述，本发明人令人惊讶地发现，含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物可以提高自噬，在小鼠疾病模型中显示出预防性和治疗性作用。

因此，本文中提供了用于治疗患有自噬相关疾病或病症的对象的方法和相关组合物，例如通过施用包含免疫抑制剂的合成纳米载体进行治疗。如本文所表明的，发现这样的方法和组合物与自噬提高一致性地改变生物标志物，例如在肝疾病模型中。所述组合物当在没有其他治疗的情况下施用时可以是有效的，或者如本文所提供的在与其他治疗组合时可以是有效的。本文中所述的组合物还可用于补充现有治疗(例如基因治疗)，即使在不伴随施用时也是如此。

如本文所提供的，还令人惊讶地发现，施用包含免疫抑制剂(例如，雷帕霉素)的合成纳米载体可以具有有益的免疫作用和/或可以促进致耐受性表型，并且这些作用可以通过施用单独的包含免疫抑制剂的合成纳米载体来实现。这样的作用甚至在没有伴随施用抗原的情况下也可以发生。因此，本文中提供了用于以下的方法和相关组合物：治疗自身免疫疾病或病症，治疗患有与器官或组织移植相关的疾病或障碍或病症(例如，例如衰竭和/或排斥)的对象，降低NF-kB介导的炎症和/或治疗相关疾病或病症，上调PD-L1/PD-1和/或下调MHC II类/CD80/CD86和/或治疗相关疾病或病症，以及增强双阴性T细胞和/或治疗相关疾病或病症。

本文中提供的方法和组合物可以预防或降低相关免疫应答的水平。所述组合物当在没有其他治疗的情况下施用时可以是有效的，或者如本文所提供的在与其他治疗组合时可以是有效的。本文中所述的组合物还可用于补充现有治疗，即使在不伴随施用时也是如此。

下面将更详细地描述本发明。

B.定义

“施用”意指以使得在对象中产生药理学结果的方式向对象给予物质。这可以是直接或间接施用，例如通过诱导或指导另外的对象(包括另外的临床医生)或对象本身来进行施用。

在用于向对象施用组合物或剂量的情况下，“有效量”是指在该对象中产生一种或更多种期望的响应(例如诱导或提高自噬，调节免疫应答，或者预防或治疗如本文中所述的相关疾病或障碍或病症)的组合物或剂量的量。因此，在一些实施方案中，有效量是产生本文中提供的一种或更多种期望的治疗性作用和/或响应的本文中提供的组合物或剂量的任意量。该量可用于体外或体内目的。对于体内目的，该量可以是临床医生认为可对有此需要的对象具有临床益处的量。如本文中提供的任一种组合物或剂量(包括标签剂量)可以是有效量。

有效量可涉及降低不期望的响应的水平，但是在一些实施方案中，其涉及完全防止不期望的响应。有效量还可涉及延迟不期望的响应的发生。有效量也可以是产生期望的治疗性终点或期望的响应或结果的量。在另一些实施方案中，有效量可涉及增强期望的响应(例如治疗性终点或结果)的水平。有效量优选地在本文中提供的任一对象中导致针对疾病或障碍或病症的预防性结果或治疗性结果或者终点。可通过常规方法监测前述任一项的实现。

当然，有效量将取决于：所治疗的特定对象；病症、疾病或障碍的严重程度；个体患者参数，包括年龄、身体状况、大小和体重；治疗的持续时间；并行治疗(如果有的话)的性质；具体施用途径以及在健康从业者的知识和专业之内的类似因素。这些因素是本领域普通技术人员公知的并且仅用常规实验就可解决。通常优选的是使用最大剂量，即根据合理医学判断的最高安全剂量。然而，本领域普通技术人员将理解，出于医学原因、心理原因或出于几乎任何其他原因，患者可坚持较低剂量或可耐受剂量。

“APC可呈递抗原”意指可被呈递以用于被免疫系统细胞识别的抗原，例如被抗原呈递细胞(包括但不限于树突细胞、B细胞或巨噬细胞)呈递。APC可呈递抗原可被呈递以用于被细胞识别，例如被T细胞识别。这样的抗原被I类或II类主要组织相容性复合体分子(MHC)或CD1复合体识别，并通过与I类或II类主要组织相容性复合体分子(MHC)结合或与CD1复合体结合的抗原或其部分的呈递在T细胞中触发免疫应答。

“评估治疗性或响应”是指体外或体内治疗性或响应的水平、存在或不存在、降低、提高等的任何测量或确定。这样的测量或确定可对获自对象的一个或更多个样品进行。这样的评估可用本文中提供的任一种方法或本领域中已知的其他方法进行。评估可以是评估本文中提供的任何一种或更多种生物标志物或本领域中已知的其他生物标志物，和/或通过使用神经学测试、神经心理学测试、活检和/或脑成像来进行。例如，评估可以是评估本文中提供的自噬或任一种自噬相关疾病或障碍或病症的任何一种或更多种标志物或本领域中已知的其他标志物。在一个实施方案中，标志物可以是肝疾病/衰竭、炎症、肾疾病/衰竭、心血管疾病/衰竭或糖尿病等的标志物。在一个实施方案中，标志物可以是阿尔茨海默病、亨廷顿病、帕金森病、肌萎缩侧索硬化(ALS)等的标志物。对于阿尔茨海默病，评估可包括磁共振成像(magnetic resonance imaging，MRI)、计算机断层成像(computerizedtomography，CT)、正电子发射断层成像(positron emission tomography，PET)、精神状态测试、神经心理学测试，或其组合。对于亨廷顿病，评估可包括神经学测试、神经心理学测试、精神病学评价、MRI扫描、CT扫描或其组合。对于帕金森病，评估可包括运动功能测试、MRI扫描、PET扫描、CT扫描、单光子发射计算机断层成像(single-photon emissioncomputerized tomography，SPECT)扫描(多巴胺转运蛋白(dopamine transporter，DAT)扫描)或其组合。同样，ALS可以用以下进行评估：神经学测试、肌肉和/或神经活检、颈椎脊髓造影、X射线(例如MRI扫描)、脊椎抽液、电诊断测试(例如，肌电图、神经传导速度)或其组合。

关于肝疾病/衰竭，可以评估天冬氨酸转氨酶(aspartate aminotransferase，AST)水平、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(gamma-glutamyltranspeptidase，GGT)、胆红素、凝血酶原时间、总蛋白、球蛋白、凝血酶原和/或白蛋白。

在一些实施方案中，炎症标志物是细胞因子/趋化因子、免疫相关效应物、急性期蛋白(例如，C-反应蛋白、血清淀粉样蛋白A)、活性氧和氮物质、前列腺素和环氧合酶相关因子(例如，转录因子、生长因子)。

对于肾疾病或病症，可以评估肌酐、尿素、尿酸、半胱氨酸蛋白酶抑制剂C和/或β-痕量蛋白(β-trace protein)。

在一些实施方案中，心血管疾病/衰竭的生物标志物可以是利尿钠肽(例如，B型利尿钠肽(B-type natriuretic peptide，BNP)、N端B型利尿钠肽原(Nt-proBNP)和中段心房利尿钠肽原)(MR-proANP))和/或心肌肌钙蛋白。

感染性疾病的生物标志物包括但不限于总白细胞计数、绝对中性粒细胞计数、C-反应蛋白、以及红细胞沉降率。

“连接”或“连接的”或者“偶联”或“偶联的”(等)意指在化学上使一个实体(例如部分)与另一个实体缔合。在一些实施方案中，连接是共价的，意指连接发生在在两个实体之间存在共价键的情况下。在一些非共价实施方案中，非共价连接由非共价相互作用介导，所述非共价相互作用包括但不限于电荷相互作用、亲和相互作用、金属配位、物理吸附、主客体相互作用(host-guest interaction)、疏水相互作用、TT堆积相互作用、氢键键合相互作用、范德华相互作用(van der Waals interaction)、磁性相互作用、静电相互作用、偶极-偶极相互作用、和/或其组合。在一些实施方案中，包封是连接或偶联形式。

“自身免疫疾病或病症”是指其中免疫系统的功能不正常(特别是当对象中的免疫细胞攻击对象自身的健康细胞时)或者免疫系统的正常功能受损的疾病或病症。其可以是由对自身抗原的免疫耐受性丧失引发的慢性病理，这可导致全身性损伤或器官特异性损伤。在一些情况下，自身免疫应答由负责产生可溶性介质(例如细胞因子、一氧化氮等)和自身抗体的自身反应性T和/或B淋巴细胞介导。感染可以是自身免疫疾病或病症的原因。在一些实施方案中，自身免疫疾病或病症可包括但不限于：失弛缓症(Achalasia)、艾迪生病(Addison’s disease)、成年斯蒂尔病(Adult Still's disease)、无丙种球蛋白血症(Agammaglobulinemia)、斑秃、淀粉样变性、强直性脊柱炎、抗-GBM/抗-TBM肾炎、抗磷脂综合征、自身免疫性血管性水肿、自身免疫性自主神经障碍、自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病(Autoimmune inner ear disease，AIED)、自身免疫性心肌炎、自身免疫性卵巢炎、自身免疫性睾丸炎、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性视网膜病、自身免疫性荨麻疹、轴突和神经元神经病(AMAN)、Baló病、白塞病(Behcet’s disease)、良性黏膜类天疱疮、大疱性类天疱疮、卡斯尔曼病(Castleman disease，CD)、乳糜泻(Celiacdisease)、美洲锥虫病(Chagas disease)、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(Chronicinflammatory demyelinating polyneuropathy，CIDP)、慢性复发性多灶性骨髓炎(Chronic recurrent multifocal osteomyelitis，CRMO)、许尔-斯特劳斯综合征(Churg-Strauss Syndrome，CSS)或嗜酸性肉芽肿(Eosinophilic Granulomatosis，EGPA)、瘢痕性类天疱疮(Cicatricial pemphigoid)、柯根综合征(Cogan’s syndrome)、冷凝集素病(Coldagglutinin disease)、先天性心脏传导阻滞、柯萨奇心肌炎、CREST综合征、克罗恩病、疱疹样皮炎、皮肌炎、德维克病(Devic’s disease)(视神经脊髓炎)、盘状狼疮(Discoidlupus)、德雷斯勒综合征(Dressler’s syndrome)、子宫内膜异位症、嗜酸性食管炎(Eosinophilic esophagitis，EoE)、嗜酸性筋膜炎、结节性红斑(Erythema nodosum)、特发性混合型冷沉淀球蛋白血症(Essential mixed cryoglobulinemia)、Evans综合征、纤维肌痛(Fibromyalgia)、纤维化肺泡炎(Fibrosing alveolitis)、巨细胞动脉炎(颞动脉炎)、巨细胞心肌炎、肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征(Goodpasture’s syndrome)、肉芽肿性多血管炎、格雷夫斯病(Graves’disease)、格林-巴利综合征(Guillain-Barre syndrome)、桥本甲状腺炎(Hashimoto’s thyroiditis)、溶血性贫血、过敏性紫癜(Henoch-Schonleinpurpura，HSP)、妊娠疱疹或妊娠类天疱疮(PG)、化脓性汗腺炎(HidradenitisSuppurativa，HS)(反常性痤疮)、低丙种球蛋白血症(Hypogammalglobulinemia)、IgA肾病、IgG4相关硬化病、免疫性血小板减少性紫癜(Immune thrombocytopenic purpura，ITP)、包涵体肌炎(Inclusion body myositis，IBM)、间质性膀胱炎(Interstitial cystitis，IC)、青少年关节炎、青少年糖尿病(1型糖尿病)、青少年肌炎(JM)、川崎病(Kawasaki disease)、兰伯特-伊顿综合征(Lambert-Eaton syndrome)、白细胞破坏性脉管炎(Leukocytoclasticvasculitis)、扁平苔藓(Lichen planus)、硬化性苔藓(Lichen sclerosus)、木样结膜炎(Ligneous conjunctivitis)、线状IgA病(LAD)、狼疮、慢性莱姆病(Lyme diseasechronic)、美尼尔病(Meniere’s disease)、显微镜下多血管炎(Microscopicpolyangiitis，MPA)、混合性结缔组织病(Mixed connective tissue disease，MCTD)、蚕蚀性角膜溃疡(Mooren’s ulcer)、Mucha-Habermann病、多灶性运动神经病(MultifocalMotor Neuropathy，MMN)或MMNCB、多发性硬化、重症肌无力、肌炎、发作性睡病、新生儿狼疮、视神经脊髓炎、中性粒细胞减少症、眼瘢痕性天疱疮、视神经炎、复发性风湿病(PR)、PANDAS、副肿瘤性小脑变性(Paraneoplastic cerebellar degeneration，PCD)、阵发性睡眠性血红蛋白尿症(Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria，PNH)、Parry Romberg综合征、Pars planitis(周边葡萄膜炎)、Parsonage-Turner综合征、天疱疮、周围神经病变、周围性脑脊髓炎、恶性贫血(PA)、POEMS综合征、结节性多动脉炎、I型、II型、III型多腺综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、心肌梗死后综合征(Postmyocardial infarction syndrome)、心包切开术后综合征、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、孕激素性皮炎(Progesterone dermatitis)、银屑病、银屑病关节炎、单纯红细胞再生障碍性贫血(Purered cell aplasia，PRCA)、坏疽性脓皮病(Pyoderma gangrenosum)、雷诺现象(Raynaud’sphenomenon)、反应性关节炎、反射性交感神经营养不良(Reflex sympatheticdystrophy)、复发性多软骨炎(Relapsing polychondritis)、不宁腿综合症(Restlesslegs syndrome，RLS)、腹膜后纤维化、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、施密特综合征(Schmidt syndrome)、巩膜炎(Scleritis)、硬皮病、干燥综合征(

syndrome)、精子和睾丸自身免疫、僵人综合征(Stiff person syndrome，SPS)、亚急性细菌性心内膜炎(Subacute bacterial endocarditis，SBE)、Susac综合征、交感性眼炎(SO)、大动脉炎(Takayasu’s arteritis)、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、血小板减少性紫癜(Thrombocytopenic purpura，TTP)、托洛萨-亨特综合征(Tolosa-Hunt syndrome，THS)、横贯性脊髓炎(Transverse myelitis)、1型糖尿病、溃疡性结肠炎(UC)、未分化结缔组织病(Undifferentiated connective tissue disease，UCTD)、葡萄膜炎、血管炎、白癜风、和Vogt-Koyanagi-Harada病。

“自噬相关疾病”或“自噬相关病症”是指由自噬或细胞自我消化的破坏引起的或将受益于自噬的诱导或提高的疾病或病症。已发现自噬功能障碍与许多疾病和病症相关，包括神经退行性疾病、感染性疾病和衰老症状等。示例性的非限制性自噬相关疾病或病症包括：溶酶体贮积病、神经退行性疾病(例如，阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病；其他共济失调)、慢性炎性疾病(例如，炎性肠病、克罗恩病、类风湿性关节炎、狼疮、多发性硬化、慢性阻塞性肺疾病/COPD、肺纤维化、囊性纤维化、干燥病(Sjogren's disease)；高血糖症，糖尿病(I和II型)(例如，严重的胰岛素抵抗、高胰岛素血症、胰岛素抵抗型糖尿病、Mendenhall综合征、沃纳综合征(Werner Syndrome)、多诺霍综合征和脂肪萎缩性糖尿病)、血脂异常(例如高脂血症、低密度脂蛋白(low-density lipoprotein，LDL)升高、高密度脂蛋白(high-density lipoprotein，HDL)降低、甘油三酯升高)、代谢综合征、肝疾病、肾疾病(例如斑块、肾小球疾病)、心血管疾病(例如，缺血、卒中、压力超负荷和再灌注期间并发症)、肌肉退化和萎缩、衰老症状(例如，肌肉萎缩、衰弱、代谢紊乱、轻度炎症、动脉粥样硬化卒中、年龄相关性痴呆、阿尔茨海默病和包括抑郁症在内的精神病症)、卒中、脊髓损伤、动脉硬化、感染性疾病(例如，细菌感染、真菌感染、细胞感染、病毒感染)、发育(例如，红细胞分化)和胚胎发生/生育力/不孕。

除非另有说明，否则“平均值”意指均值。

“伴随”意指以在时间上相关(优选地在时间上充分相关)的方式向对象施用两种或更多种物质/药剂以使得第一组合物(例如，包含免疫抑制剂的合成纳米载体)对第二组合物具有影响，例如提高第二组合物的效力，优选地，所述两种或更多种物质/药剂组合施用。在一些实施方案中，伴随施用可包括在指定的时间段内施用两种或更多种组合物。在一些实施方案中，在1个月内、1周内、1天内或1小时内施用两种或更多种组合物。在一些实施方案中，伴随施用包括同时施用两种或更多种组合物。在一些实施方案中，当两种或更多种组合物不伴随施用时，第一组合物(例如，包含免疫抑制剂的合成纳米载体)对第二组合物有极小影响或没有影响。在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，不施用用于本文所提供的目的的包含免疫抑制剂的合成纳米载体来影响第二组合物，例如不同的治疗剂，例如治疗性大分子、病毒载体、APC可呈递抗原等。

“与器官或组织移植相关的疾病或病症”是指这样的疾病或病症，所述疾病或病症作为器官或组织移植的结果干扰所移植器官或组织的接受或正常功能和/或导致所移植器官或组织停止发挥功能以及导致对接受体(例如接受体的细胞或组织)的任何不期望的损伤。前述事项的根本原因可以包括但不限于作为所移植器官或组织的结果的或响应于所移植器官或组织的不期望的免疫应答。与器官或组织移植相关的疾病或病症可包括但不限于移植排斥、移植物功能障碍、器官衰竭和GVHD。在一些实施方案中，“移植排斥”涵盖急性和慢性移植排斥二者。“急性排斥”是当所移植组织在免疫学上是外来的时由组织移植接受体的免疫系统引起的排斥。急性排斥的特征可以是接受体的免疫细胞对所移植组织的浸润，所述免疫细胞发挥其效应物功能并破坏所移植组织。急性排斥的发作很迅速，并通常在移植手术之后数周内在人中发生。在一些实施方案中，“慢性移植排斥”通常在移植之后数月至数年内在人中发生，即使在存在成功的急性排斥免疫抑制的情况下也是如此。纤维化是所有类型器官移植的慢性排斥的常见因素。慢性排斥通常可以通过特定器官所特有的一系列特定病症来描述。在一些实施方案中，移植排斥可以是“超急性排斥”，其可以在移植之后数分钟在抗原完全不匹配时发生。例如，当接受体被给予错误血型时，就会出现这种类型的排斥。移植器官、组织或细胞可以是同种异体的或异种的，使得移植物可以是同种异体移植物或异种移植物。移植的移植物可以是任何实体器官、组织，例如皮肤等。器官移植的一些实例包括但不限于肾移植、胰腺移植、肝移植、心脏移植、肺移植、肠移植、肾移植后胰腺移植等。

“剂型”意指在适于施用于对象的介质、载体、载剂或装置中的药理学和/或免疫学活性物质。本文中提供的任一种组合物或剂量可以是剂型。

“剂量”是指用于在给定时间内施用于对象的药理学和/或免疫学活性物质的特定量。除非另有说明，否则针对含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物所记载的剂量是指免疫抑制剂的重量(即，没有合成纳米载体物质的重量)。当提及用于施用的剂量时，在本文中提供的任一种方法、组合物或药盒的一个实施方案中，本文中提供的任一种剂量是其在标签上显示的剂量/标签剂量。

“包封”意指将物质的至少一部分包封在合成纳米载体内。在一些实施方案中，物质完全包封在合成纳米载体内。在另一些实施方案中，包封的物质中的大部分或全部不暴露于合成纳米载体外部的局部环境。在另一些实施方案中，不超过50％、40％、30％、20％、10％或5％(重量/重量)暴露于局部环境。包封不同于吸收，所述吸收将物质的大部分或全部置于合成纳米载体的表面上，并使物质暴露于合成纳米载体外部的局部环境。在本文中提供的任一种方法或组合物的一些实施方案中，免疫抑制剂包封在合成纳米载体内。

“鉴定对象”是允许临床医生识别可受益于本文中提供的方法或组合物或所提供的一些其他指示物的对象的任何行动或一组行动。在一些实施方案中，所鉴定的对象是需要自噬诱导或提高或者需要针对自噬相关疾病或病症的预防性或治疗性治疗的对象。这样的对象包括患有自噬相关疾病或病症或者处于患有自噬相关疾病或病症的风险中的任何对象。在一些实施方案中，基于症状(和/或缺乏症状)、行为模式(例如，将使对象处于风险之中)和/或基于本文中所述的一种或更多种测试(例如，生物标志物测定、成像研究)，对象被怀疑为具有或者被确定为具有患有自噬相关疾病或病症的可能或风险。

在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，对象是将受益于或需要针对所移植器官或组织的降低的或减弱的免疫应答的对象。在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，对象是将受益于或需要治疗或预防GVHD的对象。在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，对象是将受益于或需要关于自身免疫疾病或病症的降低的或减弱的免疫应答的对象。在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，对象是将受益于或需要关于NF-kB介导的炎症的降低的或减弱的免疫应答的对象。在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，对象是将受益于或需要以下的对象：1)PD-L1和/或PD-1上调，和/或2)MHC II类和/或CD80和/或CD86下调和，/或致耐受性免疫应答。在本文中提供的任一种方法的一些实施方案中，对象是将受益于或需要增强双阴性T细胞和/或致耐受性免疫应答的对象。

在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，所述方法还包括鉴定需要本文中提供的组合物或方法的对象。该行动或一组行动可以是自身直接地或间接地进行，例如但不限于通过依赖某者的言行采取行动的无关第三方。

“免疫抑制剂”意指通过其对APC的作用可引起致耐受性作用的化合物。致耐受性作用通常是指APC或其他免疫细胞进行的调节，其以持久的方式降低、抑制或防止针对抗原的不期望免疫应答。在所提供的任一种方法或组合物的一个实施方案中，免疫抑制剂是引起APC促进一种或更多种免疫效应细胞中的调节性表型的免疫抑制剂。例如，调节性表型的特征可以是：抑制抗原特异性CD4+T细胞或B细胞的产生、诱导、刺激或募集；抑制抗原特异性抗体的产生，Treg细胞(例如，CD4+CD25高FoxP3+Treg细胞)的产生、诱导、刺激或募集等。这可以是CD4+T细胞或B细胞转化为调节性表型的结果。这也可以是在其他免疫细胞(例如CD8+T细胞、巨噬细胞和iNKT细胞)中诱导FoxP3的结果。在所提供的任一种方法或组合物的一个实施方案中，免疫抑制剂是在APC处理抗原之后影响APC的应答的免疫抑制剂。在所提供的任一种方法或组合物的另一个实施方案中，免疫抑制剂不是干扰抗原处理的免疫抑制剂。在所提供的任一种方法或组合物的另一个实施方案中，免疫抑制剂不是凋亡信号传导分子。在所提供的任一种方法或组合物的另一个实施方案中，免疫抑制剂不是磷脂。

免疫抑制剂包括但不限于：mTOR抑制剂，例如雷帕霉素或雷帕霉素类似物(即，rapalog)；TGF-β信号传导剂；TGF-β受体激动剂；组蛋白脱乙酰酶抑制剂，例如曲古抑菌素A(Trichostatin A)；皮质类固醇；线粒体功能抑制剂，例如鱼藤酮；P38抑制剂；NF-κβ抑制剂，例如6Bio、地塞米松(Dexamethasone)、TCPA-1、IKK VII；腺苷受体激动剂；前列腺素E2激动剂(PGE2)，例如米索前列醇(Misoprostol)；磷酸二酯酶抑制剂，例如磷酸二酯酶4抑制剂(PDE4)，例如咯利普兰(Rolipram)；蛋白酶体抑制剂；激酶抑制剂等。本文中使用的“雷帕霉素类似物”是指在结构上与雷帕霉素(西罗莫司(sirolimus))(的类似物)相关的分子。雷帕霉素类似物的一些实例包括但不限于替西罗莫司(temsirolimus)(CCI-779)、依维莫司(everolimus)(RAD001)、地磷莫司(ridaforolimus)(AP-23573)和佐他莫司(zotarolimus)(ABT-578)。雷帕霉素类似物的一些另外的实例可见于例如WO公开WO 1998/002441和美国专利No.8,455,510中，其雷帕霉素类似物通过引用整体并入本文。另外的免疫抑制剂是本领域技术人员已知的，并且本发明不限于此方面。

在一些实施方案中，当与合成纳米载体偶联时，免疫抑制剂是除构成合成纳米载体结构的物质之外的要素。例如，在其中合成纳米载体由一种或更多种聚合物构成的一个这样的实施方案中，免疫抑制剂是除所述一种或更多种聚合物之外并且与其偶联的化合物。作为另一个实例，在其中合成纳米载体由一种或更多种脂质构成的一个这样的实施方案中，免疫抑制剂还是除所述一种或更多种脂质之外并且与其偶联的化合物。

“提高自噬”等意指相对于对照提高对象中的自噬水平。在一些实施方案中，自噬相对于对照提高，例如提高至少20％至40％，更优选至少50％至75％，并且最优选超过80％。优选地，提高至少两倍。在一些实施方案中，对照是在先前时间段(例如，在诊断之前或在治疗之前)来自同一对象的自噬活性(例如，来自肝)。在一些实施方案中，对照自噬水平来自患有相同自噬相关疾病或病症的未经治疗对象。在一些实施方案中，对照是患有相同自噬相关疾病或病症的未经治疗对象群体中的平均自噬水平。

在一些实施方案中，提高自噬包括调节自噬的一种或更多种标志物的水平。在一些实施方案中，标志物相对于对照提高或降低至少20％至40％，更优选至少50％至75％，并且最优选超过80％。优选地，提高或降低至少两倍。“自噬标志物”是通常指示对象中(例如对象的肝或CNS中)的自噬的那些标志物。它们可以用本领域技术人员已知的方法来确定，例如在来自对象的细胞、组织或体液中，特别是在来自对象的肝活检物或血清或血浆或脑脊液中确定。自噬标志物包括例如LC3II、p26、ATG7、Beclin1、LAMP-2和ATG5。

当与合成纳米载体偶联时，“负载”是基于整个合成纳米载体中物质的总干配方重量的与合成纳米载体偶联的免疫抑制剂的量(重量/重量)。一般而言，这样的负载计算为合成纳米载体群体之间的平均值。在所提供的任一种方法或组合物的一个实施方案中，合成纳米载体之间的平均负载为0.1％至50％。在所提供的任一种方法或组合物的另一个实施方案中，合成纳米载体之间的平均负载为4％、5％、65、7％、8％或9％至40％，或者4％、5％、65、7％、8％或9％至30％。在所提供的任一种方法或组合物的另一个实施方案中，合成纳米载体之间的平均负载为10％至40％或10％至30％。在所提供的任一种方法或组合物的另一个实施方案中，负载为0.1％至20％。在所提供的任一种方法或组合物的另一个实施方案中，负载为0.1％至10％。在所提供的任一种方法或组合物的另一个实施方案中，负载为1％至10％。在所提供的任一种方法或组合物的另一个实施方案中，负载为7％至20％。在所提供的任一种方法或组合物的另一个实施方案中，合成纳米载体群体之间的平均负载为至少0.1％、至少0.2％、至少0.3％、至少0.4％、至少0.5％、至少0.6％、至少0.7％、至少0.8％、至少0.9％、至少1％、至少2％、至少3％、至少4％、至少5％、至少6％、至少7％、至少8％、至少9％、至少10％、至少11％、至少12％、至少13％、至少14％、至少15％、至少16％、至少17％、至少18％、至少19％、至少20％、至少21％、至少22％、至少23％、至少24％、至少25％、至少26％、至少27％、至少28％、至少29％或至少30％。在所提供的任一种方法或组合物的另一个实施方案中，合成纳米载体群体之间的平均负载为0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％或30％。在任一个上述实施方案的一些实施方案中，合成纳米载体群体之间的平均负载不超过35％、30％或25％。在本文中提供的任一种方法、组合物或药盒中，免疫抑制剂例如雷帕霉素的负载可以是本文中提供的任一负载。在所提供的任一种方法或组合物的一些实施方案中，如本领域中已知的那样计算负载。

在一些实施方案中，混悬剂中纳米载体的免疫抑制剂负载通过将由受试品的HPLC分析确定的纳米载体的免疫抑制剂含量除以纳米载体质量来计算。总聚合物含量通过干燥纳米载体质量的重量产量或通过根据药典方法确定纳米载体溶液总有机物含量来测量并针对PVA含量进行校正。

“合成纳米载体的最大尺寸”意指沿合成纳米载体的任何轴测量的纳米载体的最大尺寸。“合成纳米载体的最小尺寸”意指沿合成纳米载体的任何轴测量的合成纳米载体的最小尺寸。例如，对于球体合成纳米载体，合成纳米载体的最大尺寸和最小尺寸将基本上相同，并且将是其直径的尺寸。类似地，对于立方体合成纳米载体，合成纳米载体的最小尺寸将是其高度、宽度或长度中的最小者，而合成纳米载体的最大尺寸将是其高度、宽度或长度中的最大者。在一个实施方案中，基于样品中合成纳米载体的总数，该样品中合成纳米载体中的至少75％、优选至少80％、更优选至少90％的最小尺寸等于或大于100nm。在一个实施方案中，基于样品中合成纳米载体的总数，该样品中合成纳米载体中的至少75％、优选至少80％、更优选至少90％的最大尺寸等于或小于5μm。优选地，基于样品中合成纳米载体的总数，该样品中合成纳米载体中的至少75％、优选至少80％、更优选至少90％的最小尺寸大于110nm、更优选大于120nm、更优选大于130nm并且更优选还大于150nm。本发明的合成纳米载体的最大尺寸与最小尺寸的纵横比可根据实施方案而变化。例如，合成纳米载体的最大尺寸与最小尺寸的纵横比可以是1:1至1,000,000:1、优选1:1至100,000:1、更优选1:1至10,000:1、更优选1:1至1000:1、还更优选1:1至100:1并且还更优选1:1至10:1而不等。

优选地，基于样品中合成纳米载体的总数，该样品中合成纳米载体中的至少75％、优选至少80％、更优选至少90％的最大尺寸等于或小于3μm、更优选等于或小于2μm、更优选等于或小于1μm、更优选等于或小于800nm、更优选等于或小于600nm并且更优选还等于或小于500nm。在一些优选实施方案中，基于样品中合成纳米载体的总数，该样品中合成纳米载体中的至少75％、优选至少80％、更优选至少90％的最小尺寸等于或大于100nm、更优选等于或大于120nm、更优选等于或大于130nm、更优选等于或大于140nm，并且更优选还等于或大于150nm。可通过将合成纳米载体混悬在液体(通常为水性)介质中并使用动态光散射(dynamic light scattering，DLS)(例如，使用Brookhaven ZetaPALS仪器)来获得合成纳米载体尺寸(例如，直径)的测量。例如，可将合成纳米载体的混悬液从水性缓冲液稀释到纯水中，以实现约0.01至0.1mg/mL的最终合成纳米载体混悬液浓度。经稀释的混悬液可直接在合适的吸收池内制备或转移到合适的吸收池中用于DLS分析。然后，可将吸收池放置在DLS中，使其平衡至受控温度，并随后基于介质黏度和样品的折射率的合适输入扫描足够的时间以获得稳定且可再现的分布。然后，可报告有效直径或分布均值。在一些实施方案中，合成纳米载体的“尺寸”或“大小”或“直径”意指使用动态光散射获得的粒度分布的均值。

“神经退行性疾病”或“神经退行性病症”(或“CNS疾病”或“CNS病症”)是指通常由运动神经元的损伤或破坏引起的疾病或病症。神经退行性疾病包括但不限于阿尔茨海默病及其前兆性轻度认知障碍(mild cognitive impairment，MCI)、帕金森病(包括帕金森病痴呆)、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化(ALS)、多发性硬化、肾上腺脑白质营养不良、艾滋病相关痴呆综合征、亚历山大病(Alexander disease)、阿尔珀斯病(Alper's disease)、毛细血管扩张性共济失调综合征、巴滕病(Batten disease)、牛海绵状脑病、卡纳万病(Canavandisease)、脑淀粉样血管病、小脑共济失调、科凯恩综合征(Cockayne syndrome)、皮质基底节变性、克罗伊茨费尔特-雅各布病(Creutzfeldt-Jakob disease)、弥漫性髓鞘质硬化(diffuse myelinoclasti sclerosis)、致死性家族型失眠症、法-洛病(Fazio-Londedisease)、弗里德赖希共济失调(Friedreich's ataxia)、额颞叶痴呆或叶变性、遗传性痉挛性截瘫、肯尼迪病(Kennedy's disease)、克拉伯病(Krabbe disease)、路易体痴呆(Lewybody dementia)、莱姆病(Lyme disease)、马查多-约瑟夫病(Machado-Joseph disease)、运动神经元病、多系统萎缩、神经棘红细胞增多症、尼曼-皮克病(Niemann-Pick disease)、佩利措伊斯-梅茨巴赫病(Pelizaeus-Merzbacher Disease)、皮克病(Pick's disease)、原发性侧索硬化症包括其幼年型、进行性延髓麻痹、进行性核上性麻痹、雷夫叙姆病(Refsum's disease)包括其婴儿型、桑德霍夫病(Sandhoff disease)、希尔德病(Schilder'sdisease)、脊髓性肌萎缩、脊髓小脑共济失调、斯蒂尔-理查森-奥尔谢夫斯基病(Steele-Richardson-Olszewski disease)、脊髓亚急性联合变性、存活运动神经元脊髓性肌萎缩、脊髓痨、泰-萨克斯病(Tay-Sachs disease)、中毒性脑病、传染性海绵状脑病、血管性痴呆和X连锁脊髓性肌萎缩。在一些实施方案中，疾病是特发性或隐源性疾病，例如：突触核蛋白病、颗粒蛋白前体蛋白病(progranulinopathy)、tau蛋白病、淀粉样变性病、朊蛋白病、蛋白质聚集病和运动障碍。

“NF-kB介导的炎症”是指由核因子-κB(nuclear factor-κB，NF-κB)调节的免疫和/或炎性应答。NF-κB表示由至少五个结构相关成员(包括NF-κB1(也称为p50)、NF-κB2(也称为p52)、RelA(也称为p65)、RelB和c-Rel)构成的诱导型转录因子家族。在一些实施方案中，NF-κB的激活涉及两个主要信号传导途径：经典和非经典(或旁路)途径。经典的NF-κB途径对多种刺激作出响应，包括多种细胞因子受体的配体、模式识别受体(pattern-recognition receptor，PRR)、TNF受体(TNFR)超家族成员，以及T细胞受体(T-cellreceptor，TCR)和B细胞受体。经典NF-κB通过调节先天免疫细胞中的细胞因子产生和T细胞固有机制二者来调节CD4+T细胞分化。非经典NF-κB途径选择性地对特定刺激组作出响应，包括TNFR超家族成员(例如LTβR、BAFFR、CD40和RANK)的子集的配体。在一些实施方案中，与NF-κB介导的炎症相关的疾病和病症包括但不限于类风湿性关节炎、动脉粥样硬化、多发性硬化、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经根炎、哮喘、炎性肠病、幽门螺杆菌相关性胃炎和全身炎症反应综合征。本文中提供的任一种方法或组合物可用于在对象中治疗或预防这些疾病或病症中的任一种。

“可药用赋形剂”或“可药用载体”意指与药理学活性物质一起使用以配制组合物的药理学惰性物质。可药用赋形剂包括本领域中已知的多种物质，包括但不限于糖类(例如葡萄糖、乳糖等)、防腐剂(例如抗微生物剂)、重构助剂、着色剂、盐水(例如磷酸缓冲盐水)和缓冲剂。本文中提供的任一种组合物可包括可药用赋形剂或载体。

“促进致耐受性免疫作用”等意指调节，例如降低或提高免疫应答的水平，从而促进耐受性。免疫应答可以是相对于对照的，所述对照例如在不施用包含免疫抑制剂的合成纳米载体的情况下的免疫应答。在一些实施方案中，免疫应答相对于对照降低，例如降低至少20％至40％，更优选至少50％至75％，并且最优选超过80％。优选地，降低至少两倍。不希望受理论束缚，可通过下调MHC II类或CD80或CD86表达或者上调PD-1或PD-L1表达来有益地降低免疫应答。在一些情况下，可以通过减少CD T细胞或提高调节性T细胞(包括但不限于CD4 CD25调节性T细胞、Foxp3+T细胞或TR1 T细胞)的数量来有益地降低免疫应答。

“方案”是指向对象的一种或更多种物质的任何给药方案。给药方案可包括施用的量、频率、速率、持续时间和/或模式。在一些实施方案中，这样的方案可用于将本发明的一种或更多种组合物施用于一个或更多个受试对象。然后可评估这些受试对象中的治疗性/预防性响应，以确定该方案是否有效产生期望的响应。可使用本文中提供的任何方法或本领域中已知的其他方法确定方案是否具有期望的作用。例如，可从根据特定方案已经施用了本文中提供的组合物的对象获得细胞群，以确定特定酶、生物标志物等是否被产生、活化等。用于检测生物标志物的存在和/或数量的可用方法包括但不限于流式细胞术方法(例如，FACS)和免疫组织化学方法。用于某些生物标志物的特异性染色的抗体和其他结合剂是可商购的。这样的试剂盒通常包括用于多种抗原的染色试剂，其允许对来自异质细胞群的期望细胞群进行基于FACS的检测、分离和/或定量。本文中提供的任一种方法均可包括确定方案和/或基于所确定的方案进行施用以具有本文中提供的任一种有益结果或期望的有益结果的步骤。

“提供对象”是使得临床医生与对象接触并向其施用本文中提供的组合物或对其执行本文中提供的方法的任何行动或一组行动。该行动或一组行动可以是自身直接地或间接地进行。在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，该方法还包括提供对象。优选地，对象是需要本文中提供的任何一种或更多种响应/结果/作用的对象。

“降低炎症”等意指相对于对照降低炎性细胞(白细胞，例如中性粒细胞)的数量和/或一种或更多种炎性标志物的水平。在一些实施方案中，相对于对照，降低至少20％至40％，更优选至少50％至75％，并且最优选超过80％。优选地，降低至少两倍。在一些实施方案中，对照是在先前时间段来自同一对象的样品，例如在施用包含免疫抑制剂之前和在NF-kB介导的炎症发作之后。在一些实施方案中，对照样品来自患有相同的NF-kB介导的炎症但未施用包含免疫抑制剂的纳米载体的对象。“炎性标志物”是通常指示对象中炎症的那些标志物。炎性标志物可包括FGF-21、肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-alpha，TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、前列腺素E2(PGE2)、基质金属肽酶9(MMP-9)、TIMP金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)、白介素17(IL-17)、C反应蛋白和红细胞沉降率(Erythrocyte SedimentationRate，ESR)等。特定器官部位的降低的炎症可以通过X射线、MRI或CT扫描来确认。可以用本领域技术人员已知的方法确定炎性标志物，例如在来自对象的细胞、组织或体液中，例如在对象的血清或血浆中确定。

“重复剂量”或“重复给药”等意指在相同物质的较早剂量或给药之后向对象施用的至少一个另外的剂量或给药。例如，在相同物质的先前剂量之后的包含免疫抑制剂的纳米载体的重复剂量。虽然物质可以相同，但是重复剂量中物质的量可与早期剂量不同。可以如本文所提供的那样来施用重复剂量。如果重复给药对对象产生有益作用，则认为重复给药是有效的。优选地，有效的重复给药产生本文中提供的任何一种或更多种响应/结果/作用，例如提高的自噬、降低的免疫应答、提高的免疫应答、促进致耐受性表型和/或降低的NF-kB介导的炎症。本文中提供的任一种方法都可以包括重复给药的步骤。

“对象”意指动物，包括温血哺乳动物，例如人和灵长类；禽类；驯养的家养或农场动物，例如猫、狗、绵羊、山羊、牛、马和猪；实验动物，例如小鼠、大鼠和豚鼠；鱼；爬行动物；动物园动物和野生动物；等。在本文中提供的任一种方法、组合物和药盒中，对象是人。

“合成纳米载体”意指不存在于自然界并且至少一个尺寸小于或等于5微米尺寸的离散物体。合成纳米载体可以是多种不同的形状，包括但不限于球体、立方体、棱锥形体、椭圆形体、圆柱体、环形体等。合成纳米载体包含一个或更多个表面。

合成纳米载体可以是但不限于以下中的一种或多种：基于脂质的纳米粒(在本文中也称为脂质纳米粒，即其中构成其结构的大部分物质是脂质的纳米粒)、聚合物纳米粒、金属纳米粒、基于表面活性剂的乳剂、树枝状聚合物、巴基球、纳米线、病毒样颗粒(即主要由病毒结构蛋白构成但不具有感染性或感染性低的颗粒)、基于肽或蛋白质的颗粒(在本文中也称为蛋白质颗粒，即其中构成其结构的大部分物质是肽或蛋白质的颗粒)(例如白蛋白纳米粒)和/或使用纳米材料的组合产生的纳米粒(例如脂质-聚合物纳米粒)。合成纳米载体可以是多种不同的形状，包括但不限于球体、立方体、棱锥形体、椭圆形体、圆柱体、环形体等。合成纳米载体的一些实例包括：(1)Gref等的美国专利5,543,158中公开的生物可降解纳米粒，(2)Saltzman等的公开的美国专利申请20060002852的聚合物纳米粒，(3)DeSimone等的公开的美国专利申请20090028910的光刻法构建的纳米粒，(4)von Andrian等的WO 2009/051837的公开内容，(5)Penades等的公开的美国专利申请2008/0145441中公开的纳米粒，(6)P.Paolicelli et al.,“Surface-modified PLGA-based Nanoparticlesthat can Efficiently Associate and Deliver Virus-like Particles”Nanomedicine.5(6):843-853(2010)中公开的纳米沉淀纳米粒，和(7)Look et al.,Nanogel-based delivery of mycophenolic acid ameliorates systemic lupuserythematosus in mice”J.Clinical Investigation 123(4):1741-1749(2013)的那些。

在一些实施方案中，合成纳米载体可具有等于或小于约100nm、优选等于或小于100nm的最小尺寸，不包含具有活化补体之羟基的表面，或者作为替代包含基本上由不是活化补体之羟基的部分组成的表面。在一个实施方案中，最小尺寸等于或小于约100nm、优选等于或小于100nm的合成纳米载体不包含显著活化补体的表面，或者作为替代包含基本上由不会显著活化补体的部分组成的表面。在一个更优选的实施方案中，最小尺寸等于或小于约100nm、优选等于或小于100nm的根据本发明的合成纳米载体不包含活化补体的表面，或者作为替代包含基本上由不会活化补体的部分组成的表面。在一些实施方案中，合成纳米载体排除病毒样颗粒。在一些实施方案中，合成纳米载体的纵横比可大于或等于1:1、1:1.2、1:1.5、1:2、1:3、1:5、1:7或大于1:10。

“治疗性大分子”是指可施用于对象并具有治疗性作用的任何蛋白质、碳水化合物、脂质或核酸。在一些实施方案中，治疗性大分子可以是治疗性多核苷酸或治疗性蛋白质。

“治疗性多核苷酸”意指可施用于对象并具有治疗性作用的任何多核苷酸或基于多核苷酸的治疗。这样的治疗包括基因沉默。这样的治疗的一些实例是本领域中已知的，并且包括但不限于裸RNA(包括信使RNA、经修饰的信使RNA和RNAi形式)。

“治疗性蛋白质”意指可施用于对象并具有治疗性作用的任何蛋白质或基于蛋白质的治疗。这样的治疗包括蛋白质替代治疗和蛋白质补充治疗。这样的治疗还包括施用外源性或外来蛋白质、抗体治疗等。治疗性蛋白质包括但不限于酶、酶辅因子、激素、凝血因子、细胞因子、生长因子、单克隆抗体、抗体-药物缀合物和多克隆抗体。

“治疗”是指施用一种或更多种治疗剂，期望对象可具有由于该施用而产生的益处。治疗可以是直接的或间接的，例如通过诱导或指导另外的对象(包括另外的临床医生)或对象本身来治疗该对象。

“病毒载体”意指已被适配为包含并递送转基因或核酸物质，例如编码治疗剂(例如治疗性蛋白质)的转基因或核酸物质的具有病毒组分(例如衣壳蛋白和/或包被蛋白)的载体构建体，所述转基因或核酸物质可如本文中提供的那样表达。

C.方法和相关组合物

本文中提供了用于例如诱导或提高自噬和/或促进致耐受性表型和/或降低NF-kB介导的炎症和/或治疗和/或预防相关疾病、障碍和病症的方法和相关组合物。所述方法和组合物有利地提供了不一定需要另外的治疗(例如疾病特异性治疗)的治疗，但是也可以向对象提供另外的治疗(例如疾病特异性治疗)。在本文中提供的任一种方法中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用可以在本文中提供的任一种疾病、障碍或病症的发作之前或者恶化或进展之前。因此，施用可以是在用一种或更多种用于疾病、障碍或病症的其他治疗剂进行治疗之前用包含免疫抑制剂的合成纳米载体进行的预治疗。

合成纳米载体

根据本发明可使用广泛多种的合成纳米载体。在一些实施方案中，合成纳米载体是球体或球状体。在一些实施方案中，合成纳米载体是平的或片状的。在一些实施方案中，合成纳米载体是立方体或立方体的。在一些实施方案中，合成纳米载体是卵形体或椭圆形体。在一些实施方案中，合成纳米载体是圆柱体、锥体或棱锥形体。

在一些实施方案中，期望使用在大小或形状方面相对均匀的合成纳米载体群体，使得每个合成纳米载体具有相似的特性。例如，基于合成纳米载体的总数，所提供的任一种组合物或方法的合成纳米载体的至少80％、至少90％或至少95％可具有落在合成纳米载体的平均直径或平均尺寸的5％、10％或20％内的最小尺寸或最大尺寸。

合成纳米载体可以是实心的或中空的，并且可包含一个或更多个层。在一些实施方案中，每个层相对于另外的层具有独特的组成和独特的特性。仅给出一个实例，合成纳米载体可具有核/壳结构，其中核是一个层(例如聚合物核)，并且壳是第二层(例如脂质双层或单层)。合成纳米载体可包含多个不同的层。

在一些实施方案中，合成纳米载体可任选地包含一种或更多种脂质。在一些实施方案中，合成纳米载体可包含脂质体。在一些实施方案中，合成纳米载体可包含脂质双层。在一些实施方案中，合成纳米载体可包含脂质单层。在一些实施方案中，合成纳米载体可包含胶束。在一些实施方案中，合成纳米载体可包含由脂质层(例如，脂质双层、脂质单层等)包围的包含聚合物基质的核。在一些实施方案中，合成纳米载体可包含由脂质层(例如，脂质双层、脂质单层等)包围的非聚合物的核(例如，金属颗粒、量子点、陶瓷颗粒、骨颗粒、病毒颗粒、蛋白质、核酸、碳水化合物等)。

在另一些实施方案中，合成纳米载体可包含金属颗粒、量子点、陶瓷颗粒等。在一些实施方案中，非聚合物合成纳米载体是非聚合物组分的聚集体，例如金属原子(例如，金原子)的聚集体。

在一些实施方案中，合成纳米载体可任选地包含一种或更多种两亲性实体。在一些实施方案中，两亲性实体可促进具有提高的稳定性、改善的均一性或提高的黏度的合成纳米载体的产生。在一些实施方案中，两亲性实体可与脂质膜(例如，脂质双层、脂质单层等)的内表面缔合。本领域中已知的许多两亲性实体适合用于制备根据本发明的合成纳米载体。这样的两亲性实体包括但不限于：磷酸甘油酯；磷脂酰胆碱；二棕榈酰磷脂酰胆碱(dipalmitoyl phosphatidylcholine，DPPC)；二油基磷脂酰乙醇胺(dioleylphosphatidylethanolamine，DOPE)；二油基丙基三乙基铵(DOTMA)；二油酰磷脂酰胆碱；胆固醇；胆固醇酯；二酰基甘油；琥珀酸二酰基甘油酯；二磷脂酰甘油(diphosphatidyl glycerol，DPPG)；己烷癸醇；脂肪醇例如聚乙二醇(PEG)；聚氧乙烯-9-月桂醚；表面活性脂肪酸，例如棕榈酸或油酸；脂肪酸；脂肪酸单甘油酯；脂肪酸甘油二酯；脂肪酸酰胺；脱水山梨糖醇三油酸酯(

85)甘胆酸盐；脱水山梨糖醇单月桂酸酯(

20)；聚山梨酯20(

20)；聚山梨酯60(

60)；聚山梨酯65(

65)；聚山梨酯80(

80)；聚山梨酯85(

85)；聚氧乙烯单硬脂酸酯；表面活性素；泊洛沙姆；脱水山梨糖醇脂肪酸酯，例如脱水山梨醇三油酸酯；卵磷脂；溶血卵磷脂；磷脂酰丝氨酸；磷脂酰肌醇；鞘磷脂；磷脂酰乙醇胺(脑磷脂)；心磷脂；磷脂酸；脑苷脂；磷酸二鲸蜡酯；二棕榈酰磷脂酰甘油；硬脂胺；十二烷基胺；十六烷基胺；乙酰棕榈酸酯；甘油蓖麻油酸酯；硬脂酸十六烷基酯；豆蔻酸异丙酯；泰洛沙泊；聚(乙二醇)5000-磷脂酰乙醇胺；聚(乙二醇)400单硬脂酸酯；磷脂；具有高表面活性剂性质的合成和/或天然洗涤剂；脱氧胆酸盐；环糊精；离液盐；离子配对剂；及其组合。两亲性实体组分可以是不同的两亲性实体的混合物。本领域技术人员将认识到，这是具有表面活性剂活性的物质的示例性而非全面的列举。任何两亲性实体均可用于产生待根据本发明使用的合成纳米载体。

在一些实施方案中，合成纳米载体可任选地包含一种或更多种碳水化合物。碳水化合物可以是天然的或合成的。碳水化合物可以是衍生化的天然碳水化合物。在某些实施方案中，碳水化合物包含单糖或二糖，其包括但不限于：葡萄糖、果糖、半乳糖、核糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、海藻糖、纤维二糖、甘露糖、木糖、阿拉伯糖、葡糖醛酸、半乳糖醛酸、甘露糖醛酸、葡糖胺、半乳糖胺和神经氨酸。在某些实施方案中，碳水化合物是多糖，其包括但不限于：短梗霉聚糖(pullulan)、纤维素、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素(hydroxypropylmethylcellulose，HPMC)、羟基纤维素(hydroxycellulose，HC)、甲基纤维素(methylcellulose，MC)、葡聚糖、环葡聚糖、糖原、羟乙基淀粉、角叉菜胶、糖基(glycon)、直链淀粉(amylose)、壳聚糖、N,O-羧甲基壳聚糖、藻胶和藻酸、淀粉、壳多糖、菊粉、魔芋、葡甘露聚糖、石耳葡聚糖(pustulan)、肝素、透明质酸、凝胶多糖和黄原胶。在一些实施方案中，合成纳米载体不包含(或特别排除)碳水化合物，例如多糖。在某些实施方案中，碳水化合物可包含碳水化合物衍生物，例如糖醇，其包括但不限于：甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、赤藓糖醇、麦芽糖醇和乳糖醇。

在一些实施方案中，合成纳米载体可包含一种或更多种聚合物。在一些实施方案中，合成纳米载体包含为非甲氧基封端的普朗尼克聚合物的一种或更多种聚合物。在一些实施方案中，构成合成纳米载体的聚合物的至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或99％(重量/重量)是非甲氧基封端的普朗尼克聚合物。在一些实施方案中，构成合成纳米载体的所有聚合物是非甲氧基封端的普朗尼克聚合物。在一些实施方案中，合成纳米载体包含为非甲氧基封端的聚合物的一种或更多种聚合物。在一些实施方案中，构成合成纳米载体的聚合物的至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或99％(重量/重量)是非甲氧基封端的聚合物。在一些实施方案中，构成合成纳米载体的所有聚合物是非甲氧基封端的聚合物。在一些实施方案中，合成纳米载体包含不含普朗尼克聚合物的一种或更多种聚合物。在一些实施方案中，构成合成纳米载体的聚合物的至少1％、2％、3％、4％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、97％或99％(重量/重量)不包含普朗尼克聚合物。在一些实施方案中，构成合成纳米载体的所有聚合物不包含普朗尼克聚合物。在一些实施方案中，这样的聚合物可被包被层(例如，脂质体、脂质单层、胶束等)包围。在一些实施方案中，合成纳米载体的要素可与聚合物连接。

可通过多种方法中的任一种将免疫抑制剂与合成纳米载体偶联。一般而言，连接可以是免疫抑制剂与合成纳米载体之间结合的结果。这种结合可导致免疫抑制剂与合成纳米载体的表面连接和/或被包含(包封)在合成纳米载体内。然而，在所提供的任一种方法或组合物的一些实施方案中，由于合成纳米载体的结构，免疫抑制剂被合成纳米载体包封，而不是与合成纳米载体结合。在所提供的任一种方法或组合物的一些优选实施方案中，合成纳米载体包含如本文中提供的聚合物，并且免疫抑制剂与聚合物偶联。

当由于免疫抑制剂与合成纳米载体之间的结合而发生偶联时，偶联可通过偶联部分来发生。偶联部分可以是免疫抑制剂通过其与合成纳米载体结合的任何部分。这样的部分包括使免疫抑制剂与合成纳米载体(共价或非共价地)结合的共价键(例如酰胺键或酯键)以及单独分子。这样的分子包括接头或聚合物或其单元。例如，偶联部分可包含免疫抑制剂与其静电结合的带电聚合物。作为另一个实例，偶联部分可包含与其共价结合的聚合物或其单元。

在所提供的任一种方法或组合物的一些优选实施方案中，合成纳米载体包含本文中提供的聚合物。这些合成纳米载体可以是完全聚合物，或者其可以是聚合物与其他物质的混合物。

在所提供的任一种方法或组合物的一些实施方案中，合成纳米载体的聚合物缔合以形成聚合物基质。在所提供的任一种方法或组合物的这些实施方案的一些中，组分(例如免疫抑制剂)可与聚合物基质的一种或更多种聚合物共价缔合。在所提供的任一种方法或组合物的一些实施方案中，共价缔合由接头介导。在所提供的任一种方法或组合物的一些实施方案中，组分可与聚合物基质的一种或更多种聚合物非共价缔合。例如，在所提供的任一种方法或组合物的一些实施方案中，组分可包封在聚合物基质内、被聚合物基质包围和/或分散在整个聚合物基质中。作为替代或补充，组分可通过疏水相互作用、电荷相互作用、范德华力等与聚合物基质中的一种或更多种聚合物缔合。用于由此形成聚合物基质的广泛多种的聚合物和方法是常规已知的。

聚合物可以是天然或非天然(合成)聚合物。聚合物可以是均聚物或包含两种或更多种单体的共聚物。就序列而言，共聚物可以是随机的、嵌段的、或包含随机和嵌段序列的组合。通常来说，根据本发明的聚合物是有机聚合物。

在一些实施方案中，聚合物包括聚酯、聚碳酸酯、聚酰胺、或聚醚、或其单元。在另一些实施方案中，聚合物包括聚(乙二醇)(PEG)、聚丙二醇、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)、或聚己内酯、或其单元。在一些实施方案中，优选地，聚合物是生物可降解的。因此，在这些实施方案中，优选地，如果聚合物包括聚醚，例如聚(乙二醇)或聚丙二醇或其单元，则聚合物包括聚醚和生物可降解聚合物的嵌段共聚物，使得聚合物是生物可降解的。在另一些实施方案中，聚合物不仅仅包括聚醚或其单元，例如聚(乙二醇)或聚丙二醇或其单元。

适用于本发明的聚合物的另一些实例包括但不限于：聚乙烯、聚碳酸酯(例如聚(1,3-二氧六环-2酮))、聚酸酐(例如聚(癸二酸酐))、聚富马酸丙酯(polypropylfumerate)、聚酰胺(例如聚己内酰胺)、聚缩醛、聚醚、聚酯(例如，聚丙交酯、聚乙交酯、聚丙交酯-共-乙交酯、聚己内酯、聚羟基酸(例如聚(β-羟基链烷酸酯)))、聚(原酸酯)、聚氰基丙烯酸酯、聚乙烯醇、聚氨酯、聚磷腈、聚丙烯酸酯、聚甲基丙烯酸酯、聚脲、聚苯乙烯、和聚胺、聚赖氨酸、聚赖氨酸-PEG共聚物和聚(乙烯亚胺)、聚(乙烯亚胺)-PEG共聚物。

在一些实施方案中，根据本发明的聚合物包括已由美国食品和药物管理局(Foodand Drug Administration，FDA)根据21C.F.R.§177.2600批准用于人的聚合物，包括但不限于：聚酯(例如，聚乳酸、聚(乳酸-共-乙醇酸)、聚己内酯、聚戊内酯、聚(1,3-二氧六环-2酮))；聚酸酐(例如，聚(癸二酸酐))；聚醚(例如，聚乙二醇)；聚氨酯；聚甲基丙烯酸酯；聚丙烯酸酯；和聚氰基丙烯酸酯。

在一些实施方案中，聚合物可以是亲水性的。例如，聚合物可包含阴离子基团(例如磷酸根基团、硫酸根基团、羧酸根基团)；阳离子基团(例如季铵基团)；或极性基团(例如，羟基、巯基、胺基)。在一些实施方案中，包含亲水性聚合物基质的合成纳米载体在合成纳米载体内产生亲水性环境。在一些实施方案中，聚合物可以是疏水性的。在一些实施方案中，包含疏水性聚合物基质的合成纳米载体在合成纳米载体内产生疏水性环境。聚合物的亲水性或疏水性的选择可对并入合成纳米载体内的物质的性质具有影响。

在一些实施方案中，聚合物可用一个或更多个部分和/或官能团进行修饰。根据本发明可使用多种部分或官能团。在一些实施方案中，聚合物可用聚乙二醇(PEG)、用碳水化合物和/或用来源于多糖的非环状聚缩醛进行修饰(Papisov,2001,ACS SymposiumSeries,786:301)。某些实施方案可使用Gref等的美国专利No.5543158或von Andrian等的WO公开WO 2009/051837的一般教导来进行。

在一些实施方案中，聚合物可用脂质或脂肪酸基团修饰。在一些实施方案中，脂肪酸基团可以是丁酸、己酸、辛酸、癸酸、月桂酸、豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、花生酸、山嵛酸或木蜡酸中的一种或更多种。在一些实施方案中，脂肪酸基团可以是棕榈油酸、油酸、反型异油酸、亚油酸、α-亚油酸、γ-亚油酸、花生四烯酸、鳕油酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸或芥酸中的一种或更多种。

在一些实施方案中，聚合物可以是聚酯，包括：包含乳酸和乙醇酸单元的共聚物，例如聚(乳酸-共-乙醇酸)和聚(丙交酯-共-乙交酯)，在本文中统称为“PLGA”；和包含乙醇酸单元的均聚物，在本文中称为“PGA”，以及包含乳酸单元的均聚物，例如聚-L-乳酸、聚-D-乳酸、聚-D,L-乳酸，聚-L-丙交酯、聚-D-丙交酯和聚-D,L-丙交酯，在本文中统称为“PLA”。在一些实施方案中，示例性聚酯包括例如：聚羟基酸；PEG共聚物以及丙交酯和乙交酯的共聚物(例如，PLA-PEG共聚物、PGA-PEG共聚物、PLGA-PEG共聚物)及其衍生物。在一些实施方案中，聚酯包括例如：聚(己内酯)、聚(己内酯)-PEG共聚物、聚(L-丙交酯-共-L-赖氨酸)、聚(丝氨酸酯)、聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)、聚[α-(4-氨基丁基)-L-乙醇酸]及其衍生物。

在一些实施方案中，聚合物可以是PLGA。PLGA是乳酸和乙醇酸的生物相容性和生物可降解的共聚物，并且多种形式的PLGA的特征在于乳酸:乙醇酸的比例。乳酸可以是L-乳酸、D-乳酸或D,L-乳酸。PLGA的降解速率可通过改变乳酸:乙醇酸的比例来调节。在一些实施方案中，待根据本发明使用的PLGA特征在于乳酸:乙醇酸比例为约85:15、约75:25、约60:40、约50:50、约40:60、约25:75或约15:85。

在一些实施方案中，聚合物可以是一种或更多种丙烯酸类聚合物。在某些实施方案中，丙烯酸类聚合物包括例如：丙烯酸和甲基丙烯酸共聚物、甲基丙烯酸甲酯共聚物、甲基丙烯酸乙氧基乙酯、甲基丙烯酸氰基乙酯、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、聚(丙烯酸)、聚(甲基丙烯酸)、甲基丙烯酸烷基酰胺共聚物、聚(甲基丙烯酸甲酯)、聚(甲基丙烯酸酐)、甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸酯、聚(甲基丙烯酸甲酯)共聚物、聚丙烯酰胺、甲基丙烯酸氨基烷基酯共聚物、甲基丙烯酸缩水甘油酯共聚物、聚氰基丙烯酸酯，以及包含一种或更多种前述聚合物的组合。丙烯酸聚合物可包含具有低含量的季铵基团的丙烯酸酯和甲基丙烯酸酯的完全聚合的共聚物。

在一些实施方案中，聚合物可以是阳离子聚合物。一般而言，阳离子聚合物能够缩合和/或保护核酸的带负电荷的链。含胺聚合物例如聚(赖氨酸)(Zauner et al.,1998,Adv.Drug Del.Rev.,30:97；和Kabanov et al.,1995,Bioconjugate Chem.,6:7)、聚(乙烯亚胺)(PEI；Boussif et al.,1995,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,1995,92:7297)和聚(酰氨基胺)树枝状聚合物(Kukowska-Latallo et al.,1996,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,93:4897；Tang et al.,1996,Bioconjugate Chem.,7:703；和Haensler et al.,1993,Bioconjugate Chem.,4:372)在生理pH下带正电荷，与核酸形成离子对。在一些实施方案中，合成纳米载体可不包含(或可排除)阳离子聚合物。

在一些实施方案中，聚合物可以是带有阳离子侧链的可降解聚酯(Putnam etal.,1999,Macromolecules,32:3658；Barrera et al.,1993,J.Am.Chem.Soc.,115:11010；Kwon et al.,1989,Macromolecules,22:3250；Lim et al.,1999,J.Am.Chem.Soc.,121:5633；和Zhou et al.,1990,Macromolecules,23:3399)。这些聚酯的一些实例包括：聚(L-丙交酯-共-L-赖氨酸)(Barrera et al.,1993,J.Am.Chem.Soc.,115:11010)、聚(丝氨酸酯)(Zhou et al.,1990,Macromolecules,23:3399)、聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)(Putnam etal.,1999,Macromolecules,32:3658；和Lim et al.,1999,J.Am.Chem.Soc.,121:5633)和聚(4-羟基-L-脯氨酸酯)(Putnam et al.,1999,Macromolecules,32:3658；和Lim et al.,1999,J.Am.Chem.Soc.,121:5633)。

这些和其他聚合物的特性及其制备方法是本领域中公知的(参见，例如美国专利6,123,727；5,804,178；5,770,417；5,736,372；5,716,404；6,095,148；5,837,752；5,902,599；5,696,175；5,514,378；5,512,600；5,399,665；5,019,379；5,010,167；4,806,621；4,638,045和4,946,929；Wang et al.,2001,J.Am.Chem.Soc.,123:9480；Lim et al.,2001,J.Am.Chem.Soc.,123:2460；Langer,2000,Acc.Chem.Res.,33:94；Langer,1999,J.Control.Release,62:7；和Uhrich et al.,1999,Chem.Rev.,99:3181)。更一般地，用于合成某些合适聚合物的多种方法描述于Concise Encyclopedia of Polymer Science andPolymeric Amines and Ammonium Salts,由Goethals编辑,Pergamon出版,1980；Principles of Polymerization by Odian,John Wiley&Sons,第四版,2004；Contemporary Polymer Chemistry by Allcock et al.,Prentice-Hall,1981；Deming etal.,1997,Nature,390:386；以及美国专利6,506,577、6,632,922、6,686,446和6,818,732中。

在一些实施方案中，聚合物可以是直链或支链聚合物。在一些实施方案中，聚合物可以是树枝状聚合物。在一些实施方案中，聚合物可基本上彼此交联。在一些实施方案中，聚合物可基本上不交联。在一些实施方案中，聚合物可无需进行交联步骤来根据本发明使用。还应理解，合成纳米载体可包含前述任一种的嵌段共聚物、接枝共聚物、共混物、混合物和/或加合物以及其他聚合物。本领域技术人员将认识到，本文中列出的聚合物代表可根据本发明使用的聚合物的示例性而非全面的列举。

在一些实施方案中，合成纳米载体不包含聚合物组分。在一些实施方案中，合成纳米载体可包含金属颗粒、量子点、陶瓷颗粒等。在一些实施方案中，非聚合物合成纳米载体是非聚合物组分的聚集体，例如金属原子(例如金原子)的聚集体。

免疫抑制剂

在所提供的任一种方法或组合物的一些实施方案中，本文中提供的任何免疫抑制剂可与合成纳米载体偶联。免疫抑制剂包括但不限于：他汀类；mTOR抑制剂，例如雷帕霉素或雷帕霉素类似物(rapalog)；TGF-β信号传导剂；TGF-β受体激动剂；组蛋白脱乙酰酶(histone deacetylase，HDAC)抑制剂；皮质类固醇；线粒体功能抑制剂，例如鱼藤酮；P38抑制剂；NF-κB抑制剂；腺苷受体激动剂；前列腺素E2激动剂；磷酸二酯酶抑制剂，例如磷酸二酯酶4抑制剂；蛋白酶体抑制剂；激酶抑制剂；G蛋白偶联受体激动剂；G蛋白偶联受体拮抗剂；糖皮质激素；类视黄醇；细胞因子抑制剂；细胞因子受体抑制剂；细胞因子受体活化剂；过氧化物酶体增殖物活化受体拮抗剂；过氧化物酶体增殖物活化受体激动剂；组蛋白脱乙酰酶抑制剂；钙调磷酸酶抑制剂；磷酸酶抑制剂和氧化的ATP。免疫抑制剂还包括IDO、维生素D3、环孢素A、芳烃受体抑制剂、白藜芦醇、硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤、阿司匹林(aspirin)、尼氟酸、雌三醇、雷公藤甲素(tripolide)、白介素(例如，IL-1、IL-10)、环孢素A、靶向细胞因子或细胞因子受体的siRNA等。

他汀类的一些实例包括：阿托伐他汀(atorvastatin)

西立伐他汀(cerivastatin)、氟伐他汀(fluvastatin)(

XL)、洛伐他汀(lovastatin)

美伐他汀(mevastatin)

匹伐他汀(pitavastatin)

瑞舒伐他汀(rosuvastatin)

瑞舒伐他汀

和辛伐他汀(simvastatin)

mTOR抑制剂的一些实例包括：雷帕霉素及其类似物(例如，CCL-779、RAD001、AP23573、C20-甲代烯丙基雷帕霉素(C20-Marap)、C16-(S)-丁基磺酰氨基雷帕霉素(C16-BSrap)、C16-(S)-3-甲基吲哚雷帕霉素(C16-iRap)(Bayle et al.Chemistry&Biology2006,13:99-107))、AZD8055、BEZ235(NVP-BEZ235)、大黄根酸(大黄酚)、地磷莫司(deforolimus)(MK-8669)、依维莫司(RAD0001)、KU-0063794、PI-103、PP242、替西罗莫司和WYE-354(可从Selleck,Houston,TX,USA获得)。

本文中使用的“雷帕霉素类似物”是指在结构上与雷帕霉素(西罗莫司)(的类似物)相关的分子。雷帕霉素类似物的一些实例包括但不限于替西罗莫司(CCI-779)、依维莫司(RAD001)、地磷莫司(AP-23573)和佐他莫司(ABT-578)。雷帕霉素类似物的一些另外的实例可见于例如WO公开WO 1998/002441和美国专利No.8,455,510中，其雷帕霉素类似物通过引用整体并入本文。

当与合成纳米载体偶联时，与合成纳米载体偶联的免疫抑制剂的基于整个合成纳米载体中物质的总干配方重量(重量/重量)的量如本文中其他地方所述。优选地，在本文中提供的任一种方法或组合物或药盒的一些实施方案中，免疫抑制剂例如雷帕霉素或雷帕霉素类似物的负载为按重量计4％、5％、65、7％、8％、9％或10％至25％、26％、27％、28％、29％、30％、31％、32％、33％、34％、35％、36％、37％、38％、39％或40％。

关于与免疫抑制剂偶联的合成纳米载体，用于将组分偶联至合成纳米载体的方法可以是有用的。合成纳米载体的要素可例如通过一个或更多个共价键与整个合成纳米载体偶联，或者可通过一个或更多个接头连接。将合成纳米载体官能化的另外的方法可修改自Saltzman等的公开美国专利申请2006/0002852、DeSimone等的公开美国专利申请2009/0028910或Murthy等的公开国际专利申请WO/2008/127532A1。

在一些实施方案中，偶联可以是共价接头。在一些实施方案中，根据本发明的免疫抑制剂可通过由叠氮基团与包含炔基基团的免疫抑制剂的1,3-偶极环加成反应，或通过炔烃与包含叠氮基团的免疫抑制剂的1,3-偶极环加成反应所形成的1,2,3-三唑接头共价偶联至外表面。这样的环加成反应优选在存在Cu(I)催化剂以及合适的Cu(I)-配体和还原剂的情况下进行以将Cu(II)化合物还原为催化活性Cu(I)化合物。这种Cu(I)催化的叠氮化物-炔烃环加成(Cu(I)-catalyzed azide-alkyne cycloaddition，CuAAC)也可以称为点击反应。

另外地，共价偶联可包含共价接头，包括酰胺接头、二硫接头、硫醚接头、腙连接头、酰肼接头、亚胺或肟接头、脲或硫脲接头、脒接头、胺接头和磺酰胺接头。

作为替代或补充，合成纳米载体可通过非共价相互作用直接或间接地与组分偶联。在一些非共价实施方案中，非共价连接由非共价相互作用介导，所述非共价相互作用包括但不限于电荷相互作用、亲和相互作用、金属配位、物理吸附、主客体相互作用、疏水相互作用、TT堆积相互作用、氢键键合相互作用、范德华相互作用、磁性相互作用、静电相互作用、偶极-偶极相互作用、和/或其组合。这样的偶联可布置在合成纳米载体的外表面或内表面上。在所提供的任一种方法或组合物的一些实施方案中，包封和/或吸收是偶联形式。

对于可用的缀合方法的详细描述，参见Hermanson G T“BioconjugateTechniques”,第二版,Academic Press,Inc.出版,2008。除共价连接之外，组分可通过吸附偶联至预先形成的合成纳米载体，或者可在形成合成纳米载体期间通过包封偶联。

D.产生及使用所述方法和相关组合物的方法

合成纳米载体可使用本领域中已知的广泛多种方法制备。例如，合成纳米载体可通过例如以下的方法形成：纳米沉淀、使用流体通道的流聚焦、喷雾干燥、单和双乳液溶剂蒸发、溶剂萃取、相分离、研磨、微乳化操作、微米制造、纳米制造、牺牲层、简单和复杂的凝聚，以及本领域中普通技术人员公知的其他方法。作为替代或补充，已描述了用于单分散半导体、传导性、磁性、有机和其他纳米材料的水性和有机溶剂合成(Pellegrino et al.,2005,Small,1:48；Murray et al.,2000,Ann.Rev.Mat.Sci.,30:545；和Trindade et al.,2001,Chem.Mat.,13:3843)。在文献中已描述了另外的方法(参见，例如Doubrow,Ed.,“Microcapsules and Nanoparticles in Medicine and Pharmacy,”CRC Press,BocaRaton,1992；Mathiowitz et al.,1987,J.Control.Release,5:13；Mathiowitz et al.,1987,Reactive Polymers,6:275；和Mathiowitz et al.,1988,J.Appl.Polymer Sci.,35:755；美国专利5578325和6007845；P.Paolicelli et al.,“Surface-modified PLGA-basedNanoparticles that can Efficiently Associate and Deliver Virus-likeParticles”Nanomedicine.5(6):843-853(2010))。

可使用多种方法如所期望地将物质包封到合成纳米载体中，所述方法包括但不限于：C.Astete et al.,“Synthesis and characterization of PLGA nanoparticles”J.Biomater.Sci.Polymer Edn,Vol.17,No.3,pp.247–289(2006)；K.Avgoustakis“Pegylated Poly(Lactide)and Poly(Lactide-Co-Glycolide)Nanoparticles:Preparation,Properties and Possible Applications in Drug Delivery”CurrentDrug Delivery 1:321-333(2004)；C.Reis et al.,“Nanoencapsulation I.Methods forpreparation of drug-loaded polymeric nanoparticles”Nanomedicine 2:8–21(2006)；P.Paolicelli et al.,“Surface-modified PLGA-based Nanoparticles that canEfficiently Associate and Deliver Virus-like Particles”Nanomedicine.5(6):843-853(2010)。可使用适合于将物质包封到合成纳米载体中的其他方法，包括但不限于2003年10月14日授权的Unger的美国专利6,632,671中公开的方法。

在某些实施方案中，合成纳米载体通过纳米沉淀法或喷雾干燥制备。可改变用于制备合成纳米载体的条件以产生期望尺寸或特性(例如，疏水性、亲水性、外部形态、“黏性”、形状等)的颗粒。制备合成纳米载体的方法和使用的条件(例如，溶剂、温度、浓度、空气流量等)可取决于待与合成纳米载体连接的物质和/或聚合物基质的组成。

如果通过任何上述方法制备的合成纳米载体的尺寸范围在所期望范围之外，则可例如使用筛子对合成纳米载体进行尺寸调整。

本文中提供的组合物可包含无机或有机缓冲剂(例如，磷酸、碳酸、乙酸或柠檬酸的钠盐或钾盐)和pH调节剂(例如，盐酸、氢氧化钠或氢氧化钾、柠檬酸盐或乙酸盐、氨基酸及其盐)、抗氧化剂(例如，抗坏血酸、α-生育酚)、表面活性剂(例如，聚山梨酯20、聚山梨酯80、聚氧乙烯9-10壬基酚、脱氧胆酸钠)、溶液和/或冷冻/冻干稳定剂(例如，蔗糖、乳糖、甘露糖醇、海藻糖)、渗透调节剂(例如，盐或糖)、抗菌剂(例如，苯甲酸、酚、庆大霉素)、消泡剂(例如，聚二甲基硅氧烷(polydimethylsilozone))、防腐剂(例如，硫柳汞、2-苯氧基乙醇、EDTA)、聚合物稳定剂和黏度调节剂(例如，聚乙烯吡咯烷酮、泊洛沙姆488、羧甲基纤维素)和共溶剂(例如，甘油、聚乙二醇、乙醇)。

根据本发明的组合物可包含可药用赋形剂，例如防腐剂、缓冲剂、盐水或磷酸缓冲盐水。可使用常规药物制造和复配技术制备组合物以获得可用的剂型。在所提供的任一种方法或组合物的一个实施方案中，将组合物与防腐剂一起混悬在无菌注射用盐水溶液中。适用于实施本发明的技术可见于Handbook of Industrial Mixing:Science andPractice,Edward L.Paul,Victor A.Atiemo-Obeng,和Suzanne M.Kresta编辑,2004JohnWiley&Sons,Inc.；和Pharmaceutics:The Science of Dosage Form Design,第2版.M.E.Auten编辑,2001,Churchill Livingstone。在所提供的任一种方法或组合物的一个实施方案中，将组合物与防腐剂一起混悬在无菌注射用盐水溶液中。

应理解，本发明的组合物可以以任何合适的方式制备，并且本发明决不限于可使用本文中所述的方法产生的组合物。选择合适的制造方法可能需要注意相关的特定部分的特性。

在所提供的任一种方法或组合物的一些实施方案中，组合物在无菌条件下制备或者最终进行灭菌。这可确保所得组合物是无菌且非感染性的，因此当与非无菌组合物相比时提高安全性。这提供了有价值的安全措施，尤其是当接受组合物的对象具有免疫缺陷、遭受感染和/或易受感染时。

施用

根据本发明的施用可通过多种途径进行，包括但不限于皮下、静脉内和腹膜内途径。例如，用于所提供的任一种治疗方法之组合物的施用方式可以是通过静脉内施用，例如静脉内输注，例如其可在约1小时内进行。可使用常规方法制造和制备本文中提及的组合物用于施用。

本发明的组合物可以以有效量(例如本文中所述的有效量)施用。在所提供的任一种方法或组合物的一些实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体进行重复多次的施用周期。根据本发明，剂型的剂量可包含不同量的免疫抑制剂。剂型中存在的免疫抑制剂的量可根据合成纳米载体和/或免疫抑制剂的性质、待实现的治疗益处和其他这样的参数而变化。在一些实施方案中，可进行剂量范围研究以确定剂型中待存在的组分的最佳治疗量。在一些实施方案中，组分以有效产生本文中提供的任何一种或更多种响应/结果/作用的量存在于剂型中。剂型可以以多种频率施用。

本发明的一些方面涉及确定本文中提供的施用方法的方案。方案可通过至少改变包含免疫抑制剂的合成纳米载体的频率、剂量量并随后评估期望或不期望的响应来确定。方案可至少包含含有免疫抑制剂的合成纳米载体的施用频率和剂量。本文中提供的任一种方法可包括确定方案的步骤或根据所确定的方案进行施用步骤以实现本文中提供的任何一种或更多种期望结果。在本文中提供的任一种方法的一个实施方案中，预防性地向对象提供组合物；即，在对象经历疾病或障碍或病症之前提供。

在一些实施方案中，本文中提供的含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物不与治疗性大分子、病毒载体或APC可呈递抗原伴随(例如同时)施用，或者以以下组合伴随施用：治疗性大分子、病毒载体或APC可呈递抗原、和分开(例如，不在同一施用组合物中)施用的包含免疫抑制剂的合成纳米载体(例如，用于不同目的)。在一些实施方案中，本文中提供的包含与免疫抑制剂偶联的合成纳米载体的组合物不在治疗性大分子、病毒载体或APC可呈递抗原的1个月、1周、6天、5天、4天、3天、2天、1天、12小时、6小时、5小时、4小时、3小时、2小时或1小时之内施用。在前述的一些实施方案中，当与另外的治疗剂伴随施用时，包含免疫抑制剂的合成纳米载体用于本文中提供的作用，并且不用于不同的目的和/或不用于对其他治疗剂的作用。在前述的一些实施方案中，当与另外的治疗剂伴随施用时，包含免疫抑制剂的合成纳米载体用于本文中提供的作用，即1)除不同的目的之外或不用于不同的目的和/或2)不用于对其他治疗剂的作用或除对其他治疗剂的作用之外。

在一些实施方案中，当其他治疗剂和包含免疫抑制剂的合成纳米载体不伴随施用时，包含免疫抑制剂的合成纳米载体对其他治疗剂不具有作用或者临床上有意义或显著的作用，例如当包含免疫抑制剂的纳米载体与其他治疗剂伴随施用时实现的那些。在一些实施方案中，当在其他治疗剂和包含免疫抑制剂的合成纳米载体伴随施用或不伴随施用两种情况时，包含免疫抑制剂的合成纳米载体仅对于本文中提供的目的具有临床上显著的作用，或者除另外的作用(例如对其他治疗剂的作用)之外，还对于本文中提供的目的具有临床上显著的作用。

在一些实施方案中，当其他治疗剂和包含免疫抑制剂的合成纳米载体不伴随施用或者伴随施用但用于本文中提供的目的时，包含免疫抑制剂的合成纳米载体对其他治疗剂的作用是不需要的，或者是另外的作用(当伴随施用时)。在一些实施方案中，当其他治疗剂和包含免疫抑制剂的合成纳米载体不伴随施用时，包含免疫抑制剂的合成纳米载体对其他治疗剂不具有当包含免疫抑制剂的纳米载体与其他治疗剂伴随施用时实现的作用或者临床上有意义或显著的作用(例如，其他治疗剂的提高的效力)。

在一些实施方案中，本文中提供的含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物不与治疗性大分子、病毒载体或APC可呈递抗原伴随(例如同时)施用，或者以以下组合伴随施用：治疗性大分子、病毒载体或APC可呈递抗原、和分开施用(例如，不在同一施用组合物中和/或分开施用以用于不同目的，例如不用于诱导或提高自噬和/或本文中提供的任何所期望的结果/作用/响应)的包含免疫抑制剂的合成纳米载体。在一些实施方案中，本文中提供的包含与免疫抑制剂偶联的合成纳米载体的组合物不在治疗性大分子、病毒载体或APC可呈递抗原的1个月、1周、6天、5天、4天、3天、2天、1天、12小时、6小时、5小时、4小时、3小时、2小时或1小时之内施用。在前述的一些实施方案中，当与另外的治疗剂伴随施用时，包含免疫抑制剂的合成纳米载体用于本文中提供的作用，并且不用于(或至少不仅仅用于)不同目的和/或不用于(或至少不仅仅用于)对其他治疗剂的作用。在一些实施方案中，当其他治疗剂和包含免疫抑制剂的合成纳米载体不伴随施用时，包含免疫抑制剂的合成纳米载体对其他治疗剂不具有作用或者临床上有意义或显著的作用，例如当包含免疫抑制剂的纳米载体与其他治疗剂伴随施用时实现的那些。

在一些实施方案中，当在其他治疗剂和包含免疫抑制剂的合成纳米载体伴随施用或不伴随施用两种情况时，包含免疫抑制剂的合成纳米载体仅对自噬具有临床上显著的作用，或者除另外的作用(例如对其他治疗剂的作用)之外，还对自噬具有临床上显著的作用。

在一些实施方案中，当其他治疗剂和包含免疫抑制剂的合成纳米载体不伴随施用或者伴随施用但用于本文中提供的目的时，包含免疫抑制剂的合成纳米载体对其他治疗剂的作用是不需要的，或者是另外的作用(当伴随施用时)。在一些实施方案中，当其他治疗剂和包含免疫抑制剂的合成纳米载体不伴随施用时，包含免疫抑制剂的合成纳米载体对其他治疗剂不具有当包含免疫抑制剂的纳米载体与其他治疗剂伴随施用时实现的作用或者临床上有意义或显著的作用(例如，其他治疗剂的提高的效力)。

本文中所述的组合物和方法可用于患有一种或更多种自噬相关疾病或病症或者处于患有一种或更多种自噬相关疾病或病症的风险中的对象。自噬相关疾病和病症的一些实例包括但不限于：溶酶体贮积病、神经退行性疾病(例如，阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿病；其他共济失调)、慢性炎性疾病(例如，炎性肠病、克罗恩病、类风湿性关节炎、狼疮、多发性硬化、慢性阻塞性肺疾病/COPD、肺纤维化、囊性纤维化、干燥病；高血糖症，糖尿病(I和II型)(例如，严重的胰岛素抵抗、高胰岛素血症、胰岛素抵抗型糖尿病、Mendenhall综合征、沃纳综合征、多诺霍综合征和脂肪萎缩性糖尿病)、血脂异常(例如高脂血症、低密度脂蛋白(LDL)升高、高密度脂蛋白(HDL)降低、甘油三酯升高)、代谢综合征、肝疾病、肾疾病(例如斑块、肾小球疾病)、心血管疾病(例如，缺血、卒中、压力超负荷和再灌注期间并发症)、肌肉退化和萎缩(例如，肌营养不良、贝克肌营养不良(Becker muscular dystrophy，BMD)、先天性肌营养不良(congenital muscular dystrophies，CMD)、贝特莱姆CMD(Bethlem CMD)、福山型CMD(Fukuyama CMD)、肌-眼-脑疾病(muscle-eye-brain disease，MEB)、脊柱僵硬综合征(rigid spine syndrome)、乌尔里希型CMD(Ullrich CMD)、沃克-沃伯格综合征(Walker-Warburg syndrome，WWS)、迪谢内肌营养不良(Duchenne muscular dystrophy，DMD)、埃默里-德赖弗斯肌营养不良(Emery-Dreifuss muscular dystrophy，EDMD)、面肩肱型肌营养不良(facioscapulohumeral muscular dystrophy，FSHD)、肢带型肌营养不良(limb-girdle muscular dystrophy，LGMD)、强直性肌营养不良(myotonic dystrophy，DM)、眼咽型肌营养不良(oculopharyngeal muscular dystrophy，OPMD))、先天性代谢缺陷(有机酸血症、甲基丙二酸血症、丙酸血症、鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症)、衰老症状(例如，肌肉萎缩、衰弱、代谢紊乱、轻度炎症、动脉粥样硬化卒中、年龄相关性痴呆、阿尔茨海默病和包括抑郁症在内的精神病症)、卒中、脊髓损伤、动脉硬化、感染性疾病(例如，细菌感染、真菌感染、细胞感染、病毒感染)、发育(例如，红细胞分化)和胚胎发生/生育力/不孕。

示例性自身免疫疾病包括但不限于艾迪生病、无丙种球蛋白血症、斑秃、淀粉样变性、强直性脊柱炎、抗-GBM/抗-TBM肾炎、抗磷脂综合征、自身免疫性血管性水肿、自身免疫性自主神经障碍、自身免疫性脑脊髓炎、自身免疫性肝炎、自身免疫性内耳疾病(AIED)、自身免疫性心肌炎、自身免疫性胰腺炎、自身免疫性视网膜病、自身免疫性荨麻疹、轴突和神经元神经病(AMAN)、Bal病、白塞病、良性黏膜类天疱疮、大疱性类天疱疮、卡斯尔曼病(CD)、乳糜泻、美洲锥虫病、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病(CIDP)、慢性复发性多灶性骨髓炎(CRMO)、许尔-斯特劳斯、瘢痕性类天疱疮、柯根综合征、冷凝集素病、先天性心脏传导阻滞、柯萨奇心肌炎、CREST综合征、克罗恩病、疱疹样皮炎、皮肌炎、德维克病(视神经脊髓炎)、盘状狼疮、德雷斯勒综合征、子宫内膜异位症、嗜酸性食管炎(EoE)、嗜酸性筋膜炎、结节性红斑、特发性混合型冷沉淀球蛋白血症、Evans综合征、纤维肌痛、纤维化肺泡炎、巨细胞动脉炎(颞动脉炎)、巨细胞心肌炎、肾小球肾炎、肺出血肾炎综合征、肉芽肿性多血管炎、格雷夫斯病、格林-巴利综合征、桥本甲状腺炎、溶血性贫血、过敏性紫癜(HSP)、妊娠疱疹或妊娠类天疱疮(PG)、低丙种球蛋白血症、IgA肾病、IgG4相关硬化病、免疫性血小板减少性紫癜(ITP)、包涵体肌炎(IBM)、间质性膀胱炎(IC)、青少年关节炎、青少年糖尿病(1型糖尿病)、青少年肌炎(JM)、川崎病、兰伯特-伊顿综合征、白细胞破坏性脉管炎、扁平苔藓、硬化性苔藓、木样结膜炎、线状IgA病(LAD)、狼疮、慢性莱姆病、美尼尔病、显微镜下多血管炎(MPA)、混合性结缔组织病(MCTD)、蚕蚀性角膜溃疡、Mucha-Habermann病、多发性硬化、重症肌无力、肌炎、发作性睡病、视神经脊髓炎、中性粒细胞减少症、眼瘢痕性天疱疮、视神经炎、复发性风湿病(PR)、PANDAS、副肿瘤性小脑变性(PCD)、阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)、ParryRomberg综合征、Pars planitis(周边葡萄膜炎)、Parsonnage-Turner综合征、天疱疮、周围神经病变、周围性脑脊髓炎、恶性贫血(PA)、POEMS综合征、结节性多动脉炎、I型、II型、III型多腺综合征、风湿性多肌痛、多肌炎、心肌梗死后综合征、心包切开术后综合征、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、孕激素性皮炎、银屑病、银屑病关节炎、单纯红细胞再生障碍性贫血(PRCA)、坏疽性脓皮病、雷诺现象、反应性关节炎、反射性交感神经营养不良、复发性多软骨炎、不宁腿综合症(RLS)、腹膜后纤维化、风湿热、类风湿性关节炎、结节病、施密特综合征、巩膜炎、硬皮病、干燥综合征、精子和睾丸自身免疫、僵人综合征(SPS)、亚急性细菌性心内膜炎(SBE)、Susac综合征、交感性眼炎(SO)、大动脉炎、颞动脉炎/巨细胞动脉炎、血小板减少性紫癜(TTP)、托洛萨-亨特综合征(THS)、横贯性脊髓炎、1型糖尿病、溃疡性结肠炎(UC)、未分化结缔组织病(UCTD)、葡萄膜炎、血管炎、白癜风、和韦氏肉芽肿病(Wegener’s granulomatosis)(或肉芽肿性多血管炎(Granulomatosis withPolyangiitis，GPA))。

示例性神经退行性疾病包括但不限于脱髓鞘病变(例如多发性硬化和急性横贯性脊髓炎)；锥体外系和小脑病症(例如，皮质脊髓系统病变)；基底神经节病症或小脑病症；多动性运动障碍(例如亨廷顿病、亨廷顿舞蹈症(Huntington's Chorea)和老年性舞蹈症(senile chorea))；药物引起的运动障碍(例如，由阻断CNS多巴胺受体的药物引起的那些)；运动减少性运动障碍(例如，帕金森病)；进行性核上性麻痹；小脑和脊髓小脑病症(例如，小脑的结构性病变)；脊髓小脑变性(例如，脊髓性共济失调、弗里德赖希共济失调、小脑皮质退化、多系统退化(Mencel、Dejerine-Thomas、Shi-Drager和MachadoJoseph))；全身性病症(雷夫叙姆病(Refsum's disease)、无β脂蛋白血症、共济失调、毛细血管扩张和线粒体多系统病症)；运动单位病症(例如，神经源性肌萎缩(前角细胞变性，如肌萎缩侧索硬化、婴儿型脊髓性肌萎缩和少年型脊髓性肌萎缩))；阿尔茨海默病；肌萎缩侧索硬化(ALS)、唐氏综合症(Down's Syndrome)(例如，在中年)；弥漫性路易体病；路易体型老年痴呆；韦尼克-科尔萨科夫综合征(Wernicke-Korsakoff syndrome)；慢性酒精中毒；克罗伊茨费尔特-雅各布病；亚急性硬化性全脑炎、哈勒沃登-施帕茨病(Hallerrorden-Spatz disease)；和拳击性痴呆。在一些实施方案中，神经退行性疾病是阿尔茨海默病。在一些实施方案中，神经退行性疾病是亨廷顿病。在一些实施方案中，神经退行性疾病是帕金森病。在一些实施方案中，神经退行性疾病是ALS。

在本文中提供的任一种方法或组合物的一个实施方案中，对象是患有炎性疾病或者处于患有炎性疾病的风险中的对象。炎性疾病包括但不限于器官移植排斥；由器官移植引起的再氧合损伤；关节的慢性炎性疾病(例如关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎和与骨吸收提高有关的骨疾病)；炎性肠病(例如回肠炎、溃疡性结肠炎、巴雷特综合征(Barrett'ssyndrome)和克罗恩病)；炎性肺病(例如哮喘、成人型呼吸窘迫综合征和慢性阻塞性气道疾病)；眼部炎性疾病(例如角膜营养不良、沙眼、盘尾丝虫病、葡萄膜炎、交感性眼炎和眼内炎)；牙龈的慢性炎性疾病(例如龈炎和牙周炎)；结核病；麻风；肾炎性疾病(例如尿毒症并发症、肾小球肾炎和肾病)；皮肤炎性疾病(例如硬化性皮炎、银屑病和湿疹)；中枢神经系统的炎性疾病(例如，神经系统的慢性脱髓鞘性病变、多发性硬化、艾滋病相关神经退行性变、阿尔茨海默病、感染性脑膜炎、脑脊髓炎、帕金森病、亨廷顿病、肌萎缩侧索硬化和病毒性或自身免疫性脑炎)；自身免疫疾病(例如I型和II型糖尿病)；糖尿病并发症(例如，糖尿病性白内障、青光眼、视网膜病、肾病、微量白蛋白尿、进行性糖尿病肾病、多发性神经病、足部坏疽、动脉粥样硬化性冠状动脉疾病、外周动脉疾病、非酮症高血糖-高渗性昏迷、单神经病、自主神经病、足部溃疡、关节问题和皮肤或黏膜并发症，例如感染、胫骨斑、念珠菌感染或糖尿病脂质渐进性坏死；免疫复合物血管炎、系统性红斑狼疮(systemic lupuserythematosus，SLE)；心脏炎性疾病(例如心肌病、缺血性心脏病高胆固醇血症和动脉粥样硬化)；以及任何其他可能具有显著炎性成分的疾病或病症(例如先兆子痫、慢性肝衰竭以及脑和脊髓创伤)。炎性疾病也可以是身体的全身性炎症，例如革兰氏阳性或革兰氏阴性休克、出血性或过敏性休克。

肝疾病包括但不限于代谢性肝病(例如，非酒精性脂肪肝病(NAFLD)和非酒精性脂肪性肝炎(NASH))；酒精相关性肝病(例如，脂肪肝、酒精性肝炎)；自身免疫性肝病(例如，自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性胆管炎)；病毒感染(例如，甲型、乙型或丙型肝炎)；遗传性代谢紊乱(例如，阿拉日耶综合征(Alagille syndrome)、α-1抗胰蛋白酶缺乏症、克里格勒-纳贾尔综合征(Crigler-Najjar syndrome)、半乳糖血症、戈谢病(Gaucher disease)、尿素循环障碍(例如，鸟氨酸氨甲酰基转移酶(OrnithineTranscarbamylase，OTC)缺乏症)、吉尔伯特综合征(Gilbert syndrome)、血色素沉着病、溶酶体酸性脂肪酶缺乏症(Lysosomal acid lipase deficiency，LAL-D)、有机酸血症(例如，甲基丙二酸血症)、瑞氏综合征(Reye syndrome)、I型糖原贮积病和威尔逊病(Wilson'sdisease))；药物肝毒性(例如，由于暴露于对乙酰氨基酚，非甾体抗炎药(non-steroidalanti-inflammatory drug，NSAID，阿司匹林、布洛芬(ibuprofen)、萘普生钠(naproxensodium)、胆固醇合成酶抑制剂)，抗生素例如阿莫西林-克拉维酸(amoxicillin-clavulanate)或红霉素，关节炎药物例如甲氨蝶呤或硫唑嘌呤，抗真菌药物烟酸、类固醇、别嘌呤醇，抗病毒药物，化学治疗，草药补充剂(例如芦荟、黑升麻(black cohosh)、药鼠李(cascara)、矮槲林(chaparral)、聚合草(comfrey)、麻黄(ephedra)或卡瓦药(kava))，氯乙烯，四氯化碳，百草枯(paraquat)或多氯联苯)；和纤维化(例如，肝硬化)。

先天性代谢缺陷包括但不限于有机酸血症、甲基丙二酸血症、丙酸血症、尿素循环障碍、鸟氨酸氨甲酰基转移酶缺乏症、瓜氨酸血症(citrillinemia)、同型胱氨酸尿症、半乳糖血症、枫糖尿病(maple sugar urine disease，MSUD)、苯丙酮尿症、糖原贮积病(1-13型)、G6PD缺乏症、戊二酸血症、酪氨酸血症、氨基酸代谢紊乱、脂质代谢紊乱、碳水化合物代谢紊乱。

感染性疾病包括但不限于由病毒、细菌、分枝杆菌、支原体、螺旋体、真菌、寄生虫、变形虫、蠕虫或孢子虫引起的那些。在一些实施方案中，疾病是细菌感染。在另一些实施方案中，疾病是病毒感染。在一些实施方案中，疾病是由结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)引起的结核病。在一些实施方案中，感染性疾病由A族链球菌(Group AStreptococcus)引起的。在一些实施方案中，疾病是病毒性疾病。在一些实施方案中，病毒感染由疱疹病毒(例如，I型单纯疱疹病毒)引起。

给药

本文中提供的组合物可根据给药方案施用。本文中提供了许多可能的给药方案。因此，可根据本文中提供的任一个给药方案治疗本文中提供的任一个对象。作为一个实例，本文中提供的任一个对象可根据这些剂量方案中的任一个用包含含有免疫抑制剂(例如雷帕霉素)的合成纳米载体的组合物进行治疗。

实施例

实施例1：包含免疫抑制剂的合成纳米载体的合成(预示性)

包含免疫抑制剂(例如雷帕霉素)的合成纳米载体可使用本领域普通技术人员已知的任何方法产生。优选地，在本文中提供的任一种方法或组合物的一些实施方案中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体通过美国公开No.US 2016/0128986 A1和美国公开No.US2016/0128987 A1中的任一种方法产生，所描述的这样的产生方法和所得的合成纳米载体通过引用整体并入本文。在本文中提供的任一种方法或组合物中，包含免疫抑制剂的合成纳米载体是这样并入的合成纳米载体。

实施例2：与免疫抑制剂偶联的合成纳米载体在鸟氨酸氨甲酰基转移酶(OTC)缺乏症小鼠模型中诱导了自噬

OTC^spf-ash小鼠是OTC缺乏症小鼠模型，在出生之后30天，将其用ImmTOR^TM(具有包封的雷帕霉素的PLA/PLA-PEG合成纳米载体)的单次注射以4mg/kg、8mg/kg或12mg/kg的剂量处理或用空纳米粒处理。向OTCsph-ash小鼠施用单剂量的ImmTOR^TM诱导了自噬生物标志物肝LC3II和ATG7并降低了自噬生物标志物p26，这与自噬提高一致(图1)。这表明，在OTC缺乏症小鼠模型中，单次注射ImmTOR^TM提高了自噬。

实施例3：在用炎性试剂处理之前或之后施用与免疫抑制剂偶联的合成纳米载体

在实验室模型中，存在数种研究由药物毒性以及慢性和急性性质的炎性反应诱导的肝衰竭的公认模型，其中一种涉及用亚致死量的多克隆T细胞活化剂伴刀豆球蛋白A(ConA)攻击小鼠，伴刀豆球蛋白A(Con A)诱导严重的肝损伤并且经常用于研究人肝疾病，特别是自身免疫性和病毒性肝炎中的肝损伤的病理生理学(Tiegs et al.,1992；Miyazava etal.,1998)。用Con A处理的小鼠立即表现出肝衰竭的关键的临床和生物化学特征，其特征为血清中转氨酶水平明显提高和淋巴细胞大量浸润到肝中，导致广泛肝细胞坏死死亡(Zhang et al.,2009)。虽然已表明用全身剂量的多种免疫抑制性化合物进行预处理针对Con A攻击是有益的，但这些干预既不是肝特异性的也不可行。

单独或与雷帕霉素为200μg的与免疫抑制剂偶联的合成纳米粒(ImmTOR^TM)的静脉内(i.v.)注射一起，向三组野生型BALB/c雌性小鼠静脉内注射Con A(12mg/g)，所述合成纳米粒(ImmTOR^TM)在Con A注射之前一小时或注射之后一小时注射。在24小时之后，将动物终末放血，并使用小鼠丙氨酸转氨酶活性比色/荧光测定(Biovision,Milpitas,CA)测量丙氨酸转氨酶(ALT)的血清浓度。

在几乎所有仅接受Con A注射的小鼠均示出明显的ALT升高时，在无论是预防性地(在Con A攻击之前一小时)还是治疗性地(在Con A攻击之后一小时)用ImmTOR^TM处理的小鼠中，ALT水平要低得多(图2)。这表明在Con A施用之前或之后单次静脉内注射ImmTOR^TM纳米粒提供了针对Con A诱导的毒性的显著益处。

实施例4：与免疫抑制剂偶联的合成纳米载体在鸟氨酸氨甲酰基转移酶(OTC)缺乏症小鼠模型中降低了尿乳清酸水平

在幼年型OTC^spf-ash小鼠中进行了ImmTOR^TM纳米粒的耐受性研究。在OTC^spf-ash幼年型小鼠中i.v.注射空-纳米粒或ImmTOR^TM纳米粒。在14天之后，针对经处理小鼠的肝裂解物中的自噬标志物，对经注射的小鼠进行测试(图3)。值得注意的是，向OTC^spf-ash小鼠施用单剂量的ImmTOR^TM诱导了自噬生物标志物肝LC3II和ATG7并降低了自噬生物标志物p62，这与自噬提高一致。这表明，在OTC缺乏症小鼠模型中，单次注射ImmTOR^TM降低了尿乳清酸，并且这种降低与自噬提高相关。

实施例5：合成纳米载体在OTC^spf-ash小鼠中通过自噬活化降低了尿乳清酸和肝氨

为了进一步研究和确认ImmTOR^TM颗粒在OTC^Spf-Ash表型中的有益作用，将幼年型OTC^Spf-Ash小鼠(30日龄)用12mg/kg ImmTOR^TM颗粒或12mg/kg空颗粒静脉内(IV)注射。注射是在眶后进行的。将来自经ImmTOR^TM处理和经空纳米粒处理的动物的肝用研钵粉碎，并用含有0.5％Triton-x、10mM Hepes pH 7.4和2mM二硫苏糖醇的裂解缓冲液由该粉末制备总肝蛋白质裂解物。将十(10)μg肝裂解物用识别LC3II、ATG7和p62(最常见的自噬标志物)的抗体通过Western印迹进行分析(图4A)。值得注意的是，从经ImmTOR^TM处理的动物收获的肝显示了ATG7自噬标志物的提高，以及LC3II和p62标志物的降低(图4B)，表明在ImmTOR^TM施用之后自噬通量的活化。这些数据支持了：ImmTOR^TM颗粒在OTC^Spf-Ash小鼠中活化肝自噬通量。

实施例6：在小鼠模型中施用与免疫抑制剂偶联的合成纳米载体

为了检测向肝的合成纳米载体运输的表型特征，在指定日(第-3、-2和-1天)将小鼠的组用雷帕霉素剂量为200μg的与免疫抑制剂偶联的合成纳米载体(ImmTOR^TM-Alexa488)眶后注射，或不进行处理。ImmTOR^TM用包封的荧光标签Alexa488进行了修饰(ImmTOR^TM-Alexa 488)(图5A)。在指定的时间(第0天)，收获脾并对肝进行处理。具体来说，将肝用胶原酶IV灌注，并切成约1mm的立方体。添加400U胶原酶4，并将肝搅拌直至分解。红细胞被裂解并将其过滤。然后将肝细胞针对Fc受体进行封闭，并针对细胞表面受体进行染色，然后进行流式细胞术。流式细胞术的方案和分析是本领域已知的。结果显示为总的所收获肝细胞中A488⁺的百分比。

在指示注射ImmTOR^TM-A488的所有时间点(第-3、-2和-1天)，向肝的ImmTOR^TM-A488运输均是明显的(以时间依赖性方式)(图5B)，其中ImmTOR^TM-A488在第-1天(即24小时)的表达最高(约27％)并且ImmTOR^TM-A488在第-3天(即72小时)的表达最低(约10％)。然而，在测试的多个时间点之间，没有观察到向肝的ImmTOR^TM-A488运输的统计学显著性。

实施例7：施用与免疫抑制剂偶联的合成纳米载体对小鼠肝中MHC II类和PD-L1表达的影响

两组小鼠在收获并处理肝组织以用于流式细胞术分析之前7天用雷帕霉素为200μg的与免疫抑制剂偶联的合成纳米粒(ImmTOR^TM-CY5)眶后注射，或者不进行处理。将未经处理的小鼠用作未经处理的对照并作为流式细胞仪的基线确定。流式细胞术的方案和分析是本领域已知的。

如图6A中所示，通过流式细胞术首先确定给定细胞类型的基于其细胞表面表达的表达。具体而言，肝窦内皮细胞(LSEC)显示具有F4/80阴性、CD68阴性和甘露糖受体阳性表达。然后评估LSEC上MHC-2的表达。然后基于阳性或阴性Cy5信号将用ImmTOR^TM-CY5处理的肝细胞分离，以显示在收获的肝细胞上的MHC II类的相对阴性或阳性表达。在ImmTOR^TM-CY5施用之后7天，当与总肝细胞、未注射ImmTOR^TM-CY5的肝细胞和未经处理的对照组(初始)相比，肝细胞MHC II类下调，而肝细胞PD-L1上调(图6B)。本领域已知，PD-L1上调表明免疫力下降(T细胞死亡)和免疫耐受增强。MHC II类下调至少表明免疫力下降(CD4辅助T细胞)和免疫耐受增强。因此，该结果表明，施用雷帕霉素为200μg的ImmTOR^TM至少通过提高PD-L1的表达和降低MHC II类的表达而改善了致耐受性作用。

实施例8：与免疫抑制剂偶联的合成纳米载体介导肝细胞中T细胞反应谱

为了确定与免疫抑制剂偶联的合成纳米粒在一段时间内对肝驻留型T细胞群的影响，将小鼠分配为以下组：(1)雷帕霉素为200μg的ImmTOR^TM-CY5)，在收获并处理肝组织之前7天，(2)雷帕霉素为200μg的ImmTOR^TM-CY5)，在收获并处理肝组织之前5天，(3)雷帕霉素为200μg的ImmTOR^TM-CY5)，在收获并处理肝组织之前3天，或者(4)未经处理的对照(图7)。具体来说，将LSEC细胞通过识别CD146(也称为黑素瘤细胞黏附分子(melanoma cell adhesionmolecule，MCAM))的免疫磁珠选择法增强。将肝巨噬细胞库普弗细胞(KC)和T细胞直接从经处理的肝细胞染色。然后评价LSEC、KC及其肝驻留型T细胞的表型。

在研究设计中所指示的时间段内，ImmTOR^TM介导主要细胞表面活化标志物(PD-L1、MHC-II)的表达。具体而言，与未经处理的小鼠(初始)相比，雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM在施用之后7天、5天和3天显著上调小鼠中的PD-L1表达(**p<0.01)，但是最高的PD-L1上调是在ImmTOR注射之后3天(图8A)。类似地，PD-L1从第3天至第7天在KC中显著(*p<0.05或**p<0.01)上调，其中在ImmTOR注射之后第5天观察到最高表达水平(图8B)。由于ImmTOR^TM在LSEC中被成功摄取，因此还确定了PD-L1的上调。如图10中所示，与未接受ImmTOR^TM处理的初始小鼠相比，无论时间点如何，所有经ImmTOR^TM处理的小鼠中的LSEC均具有显著上调的PD-L1(**p<0.01)。与未经处理的小鼠(初始)相比，雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM在施用之后7天和5天在小鼠LSEC中显著下调MHC II类(**p<0.01)(图9A)，并且从第3天到第7天在肝KC中甚至更显著(*p<0.05或**p<0.01)(图9B)。

如图11A和图11B中所示，ImmTOR^TM下调了抗原呈递细胞活化标志物。具体而言，在施用雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM之后3天(*p<0.05)和5天(**p<0.01)，在LSEC中CD80显著下调(图11A)。在施用雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM之后，在所有时间点(7天、5天和3天)(**p<0.01)，在LSEC中CD86均显著下调(图11B)。通过组合表示致耐受性表型的所有三种标志物(下调的CD80⁺、下调的CD86⁺和上调的PD-L1⁺)，表明雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM在LSEC中诱导了致耐受性表型，其中与未经处理的小鼠(初始)相比在施用之后7天、5天和3天中在经处理的小鼠中LSEC显示出显著的致耐受性表型(**p<0.01)(图12)。

实施例9：与免疫抑制剂偶联的合成纳米载体介导肝细胞中的T细胞反应谱，但可溶性免疫抑制剂并不如此

为了评价肝细胞中与免疫抑制剂处理相关的T细胞反应谱，进行了两项研究。在第一项研究中，将小鼠在收获并处理肝细胞之前7天用雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM处理，或者不进行处理(图13)。在第二项研究中，小鼠被分为以下几组：(1)在收获并处理肝细胞之前7天，用雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM进行眶后注射，(2)用200μg可溶性雷帕霉素腹膜内注射，和(3)未经处理的对照(图13)。或者，评价另外的时间点(5天或3天)。在这两项研究中，在ImmTOR注射之后7天测定了T细胞谱和/或T细胞的相对数量。

如图14A中所示，在施用雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM之后7天、5天和3天，与初始小鼠相比，CD4 T细胞的表达显著下调。具体而言，与施用雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM之后5天或3天(***p<0.001)相比，施用雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM之后7天，CD4 T细胞最显著地降低(****p<0.0001)。在施用雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM之后7天、5天和3天，与初始小鼠相比，CD4 CD25调节性T细胞显著上调(图14B)。具体而言，与施用雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM之后5天或3天(***p<0.001)相比，施用雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM之后7天，CD4 T CD25调节性细胞最显著地提高(****p<0.0001)。在施用雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM之后7天和5天，与初始小鼠相比，CD4 PD-1⁺T细胞显著上调(*p<0.05)，而在施用雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM之后3天没有观察到小鼠的显著变化(图14C)。

如图15A和图15B中所示，与可溶性雷帕霉素或初始未经处理组相比，雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM显著提高了对CD4⁺CD25⁺PD-1⁺T细胞的诱导。可溶性雷帕霉素没有可测得的影响。在雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM进行的处理的情况下，CD8+T细胞的百分比显著降低，而可溶性雷帕霉素没有可测得的影响(图16A)。类似地，与初始未经处理组相比，仅雷帕霉素剂量为200μg的ImmTOR^TM进行的处理显著增强了双阴性(即CD3⁺CD4^–CD8^–)T细胞的表达(图16B)。

实施例10：GvHD

使用GvHD的B6-to-F1或B6-to-Balb模型评估雷帕霉素剂量为15至50μg的ImmTOR^TM施用的影响。施用方式为静脉内，但慢性雷帕霉素为腹膜内给予。结果示出于图17至23中。

Claims (72)

1.在对象中诱导或提高自噬和/或在对象中治疗或预防自噬相关疾病或病症的方法，其包括：

向所述对象施用含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物；

其中所述对象需要诱导或提高自噬，和/或患有自噬相关疾病或病症或者处于发生自噬相关疾病或病症的风险中。

2.权利要求1所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用提高了肝中的自噬，或者其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用用于诱导或提高除肝以外的其他部位的自噬。

3.权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体不与治疗性大分子伴随施用。

4.权利要求3所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体不与所述治疗性大分子同时施用。

5.权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体不与病毒载体伴随施用。

6.权利要求8所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体不与所述病毒载体同时施用。

7.权利要求1至6中任一项所述的方法，其还包括施用病毒载体、治疗性大分子或APC可呈递抗原。

8.权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体不与APC可呈递抗原伴随施用。

9.权利要求8所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体不与所述APC可呈递抗原同时施用。

10.权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体不与用于治疗或预防所述自噬相关疾病或病症的另外的治疗剂伴随施用。

11.权利要求1或权利要求2所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体不与用于治疗或预防所述自噬相关疾病或病症的另外的治疗剂同时施用。

12.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述方法还包括鉴定和/或提供患有或怀疑患有所述自噬相关疾病或病症的对象。

13.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述自噬相关疾病或病症选自：自身免疫疾病、CNS疾病或病症、神经退行性疾病、炎性疾病、肝疾病、肾疾病、心血管疾病、肌肉退行性疾病和感染性疾病。

14.在对象中治疗或预防与器官或组织移植相关的疾病或病症的方法，其包括：

向所述对象施用含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物；

其中所述对象患有移植排斥或与排斥相关的疾病或病症，或者处于发生移植排斥或与排斥相关的疾病或病症的风险中。

15.权利要求14所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用降低了与器官或组织移植相关的免疫应答。

16.权利要求15所述的方法，其中所述免疫应答的降低包括介导免疫生物标志物。

17.权利要求16所述的方法，其中所述免疫生物标志物包括MHC II类复合体、PD-1、PD-L1、CD80、CD86、CD4 T细胞、CD4和CD25调节性T细胞、和/或CD8 T细胞。

18.权利要求14至17中任一项所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用提高了致耐受性表型。

19.权利要求14至18中任一项所述的方法，其中所述方法还包括鉴定和/或提供患有或怀疑患有与器官或组织移植相关的疾病或病症的对象。

20.在对象中治疗或预防自身免疫疾病或病症的方法，其包括：

向所述对象施用含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物；

其中所述对象患有自身免疫疾病或病症或者处于发生自身免疫疾病或病症的风险中。

21.权利要求20所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用降低了与所述自身免疫疾病或病症相关的免疫应答。

22.权利要求21所述的方法，其中所述免疫应答的降低包括介导免疫生物标志物。

23.权利要求22所述的方法，其中所述免疫生物标志物包括MHC II类复合体、PD-1、PD-L1、CD80、CD86、CD4 T细胞、CD4和CD25调节性T细胞、和/或CD8 T细胞。

24.权利要求20至23中任一项所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用提高了致耐受性表型。

25.权利要求20至24中任一项所述的方法，其中所述方法还包括鉴定和/或提供患有或怀疑患有自身免疫疾病或病症的对象。

26.在对象中治疗或预防NF-kB介导的炎症的方法，其包括：

向所述对象施用含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物；

其中所述对象患有NF-kB介导的炎症或者处于发生NF-kB介导的炎症的风险中。

27.权利要求26所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用降低了NF-kB介导的炎症。

28.权利要求27所述的方法，其中所述NF-kB介导的炎症的降低包括介导免疫生物标志物。

29.权利要求28所述的方法，其中所述免疫生物标志物包括MHC II类复合体、PD-1、PD-L1、CD80、CD86、CD4 T细胞、CD4和CD25调节性T细胞、和/或CD8 T细胞。

30.权利要求26至29中任一项所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用提高了致耐受性表型。

31.权利要求26至30中任一项所述的方法，其中所述方法还包括鉴定和/或提供患有或怀疑患有所述NF-kB介导的炎症的对象。

32.在对象中1)上调PD-L1和/或PD-1和/或2)下调MHC II类和/或CD80和/或CD86的方法，其包括：

向所述对象施用含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物；

其中所述对象需要这样的上调和/或下调。

33.权利要求32所述的方法，其中所述对象患有以下或者处于发生以下的风险中：自身免疫疾病或病症、变态反应或者移植物或移植排斥。

34.权利要求33所述的方法，其中所述免疫应答的降低包括介导免疫生物标志物。

35.权利要求34所述的方法，其中所述免疫生物标志物包括MHC II类复合体、PD-1、PD-L1、CD80和/或CD86。

36.权利要求32至35中任一项所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用提高了致耐受性表型。

37.权利要求32至36中任一项所述的方法，其中所述方法还包括鉴定和/或提供需要所述上调和/或下调的对象。

38.在对象中增强双阴性T细胞的方法，其包括：

向所述对象施用含有包含免疫抑制剂的合成纳米载体的组合物；

其中所述对象需要这样的增强。

39.权利要求38所述的方法，其中所述对象患有以下或者处于发生以下的风险中：缺血性卒中、重症肌无力、系统性红斑狼疮、自身免疫性淋巴增殖综合征、白塞病(BD)、自身免疫性淋巴增殖综合征(ALPS，也称为Canale-Smith综合征)、儿童自身免疫病、SLE、干燥综合征或银屑病。

40.权利要求39所述的方法，其中所述免疫应答的降低包括介导双阴性T细胞增强的免疫生物标志物。

41.权利要求38至40中任一项所述的方法，其中所述包含免疫抑制剂的合成纳米载体的施用提高了致耐受性表型。

42.权利要求38至41中任一项所述的方法，其中所述方法还包括鉴定和/或提供需要所述增强的对象。

43.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫抑制剂是mTOR抑制剂。

44.权利要求43所述的方法，其中所述mTOR抑制剂是雷帕霉素或雷帕霉素类似物。

45.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述免疫抑制剂包封在所述合成纳米载体中。

46.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述合成纳米载体包含脂质纳米粒、聚合物纳米粒、金属纳米粒、基于表面活性剂的乳剂、树枝状聚合物、巴基球、纳米线、病毒样颗粒或者肽或蛋白质颗粒。

47.权利要求46所述的方法，其中所述合成纳米载体包含聚合物纳米粒。

48.权利要求47所述的方法，其中所述聚合物纳米粒包含聚酯、与聚醚连接的聚酯、聚氨基酸、聚碳酸酯、聚缩醛、聚缩酮、多糖、聚乙基

唑啉或聚乙烯亚胺。

49.权利要求48所述的方法，其中所述聚合物纳米粒包含聚酯或与聚醚连接的聚酯。

50.权利要求48或49所述的方法，其中所述聚酯包含聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共-乙醇酸)或聚己内酯。

51.权利要求48至50中任一项所述的方法，其中所述聚合物纳米粒包含聚酯和与聚醚连接的聚酯。

52.权利要求48至51中任一项所述的方法，其中所述聚醚包含聚乙二醇或聚丙二醇。

53.前述权利要求中任一项所述的方法，其中使用动态光散射获得的所述合成纳米载体的群体的粒度分布的均值为直径大于110nm。

54.权利要求53所述的方法，其中所述直径大于150nm。

55.权利要求54所述的方法，其中所述直径大于200nm。

56.权利要求55所述的方法，其中所述直径大于250nm。

57.权利要求53至56中任一项所述的方法，其中所述直径小于5μm。

58.权利要求57所述的方法，其中所述直径小于4μm。

59.权利要求58所述的方法，其中所述直径小于3μm。

60.权利要求59所述的方法，其中所述直径小于2μm。

61.权利要求60所述的方法，其中所述直径小于1μm。

62.权利要求61所述的方法，其中所述直径小于750nm。

63.权利要求62所述的方法，其中所述直径小于500nm。

64.权利要求63所述的方法，其中所述直径小于450nm。

65.权利要求64所述的方法，其中所述直径小于400nm。

66.权利要求65所述的方法，其中所述直径小于350nm。

67.权利要求66所述的方法，其中所述直径小于300nm。

68.前述权利要求中任一项所述的方法，其中基于所述合成纳米载体之间的平均值，所述合成纳米载体中包含的免疫抑制剂的负载为0.1％至50％(重量/重量)。

69.权利要求68所述的方法，其中所述负载为4％至40％。

70.权利要求69所述的方法，其中所述负载为5％至30％。

71.权利要求70所述的方法，其中所述负载为8％至25％。

72.前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述合成纳米载体的群体的纵横比大于或等于1:1、1:1.2、1:1.5、1:2、1:3、1:5、1:7或1:10。

Images