CN115337320A - HyG在降低亚胺培南高耐药铜绿假单胞菌MIC的应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及HyG在降低亚胺培南高耐药铜绿假单胞菌MIC的应用，本发明通过生长曲线实验、杀菌曲线实验及药敏实验证明没食子酰基金丝桃苷可以降低亚胺培南对高耐药铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度。没食子酰基金丝桃苷在8μg/mL浓度下将亚胺培南对高耐药铜绿假单胞菌的MIC由4096μg/mL降低至1024μg/mL。没食子酰基金丝桃苷可以作为亚胺培南抑制高耐药铜绿假单胞菌生长的助剂，或将没食子酰基金丝桃苷用于制备高耐药铜绿假单胞菌生长抑制药物或抗高耐药铜绿假单胞菌的药物，可以作为靶向抗菌药物使用，用于抑制高耐药铜绿假单胞菌的生长；对于药物的研发有重要意义。

Description

HyG在降低亚胺培南高耐药铜绿假单胞菌MIC的应用

技术领域

本发明涉及没食子酰基金丝桃苷(HyG)的应用，特别涉及HyG在降低亚胺培南高耐药铜绿假单胞菌最小抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)的应用。

背景技术

铜绿假单胞菌(Pseudomonas areuginasa,PA)具有内毒素、荚膜、胞外酶和外毒素等多种致病因子，为院内感染的主要菌株。对于PA病的治疗，临床上使用的抗生素有β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类。近些年PA耐药性呈现逐年升高的趋势，出现了多重耐药(multi-drug resistance，MDR)PA。目前碳青霉烯类抗生素是治疗MDR-PA的首选药物。细菌为了应对碳青霉烯类抗生素的杀菌活性产生了碳青霉烯酶。编码该酶的基因多位于可移动元件上，导致了耐药基因可以在全世界范围内扩散。

世界卫生组织(WHO)在2017年将具有碳青霉烯抗性的PA列为迫切需要新型抗生素的极为重要的细菌，但是细菌进化的速度快于抗生素研发的速度，因此，寻找一种安全有效的碳青霉烯类抗生素增效剂具有十分重要的意义。

发明内容

本发明提供没食子酰基金丝桃苷(HyG)的一种新应用，特别是在降低亚胺培南高耐药铜绿假单胞菌MIC的应用。

HyG可以降低亚胺培南对高耐药铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度。

进一步的，HyG在8μg/mL浓度下可以将亚胺培南对高耐药铜绿假单胞菌的MIC由4096μg/mL降低至1024μg/mL。

本发明将HyG与亚胺培南联合使用后，可以对高耐药铜绿假单胞菌的生长产生抑制，并维持一定时间。HyG单独使用时对细菌生长无明显影响，仅在与亚胺培南联合使用后对细菌表现出显著的杀伤性。

进一步的，浓度为8μg/mL-16μg/mL的HyG与浓度不小于1024μg/mL的亚胺培南联合作用，有效抑制高耐药铜绿假单胞菌的生长，显著降低高耐药铜绿假单胞菌的数量。

浓度8μg/mL的HyG与浓度1024μg/mL的亚胺培南联合使用后可以对高耐药铜绿假单胞菌的生长产生抑制，并维持8h以上。

本发明还提供HyG的一种新应用：将HyG作为亚胺培南抑制高耐药铜绿假单胞菌生长的助剂，或将HyG作为生产亚胺培南抑制高耐药铜绿假单胞菌生长制剂或药物的助剂。

进一步的，HyG作为助剂的浓度可以为2μg/mL-32μg/mL，优选为8μg/mL-16μg/mL。

本发明还提供HyG的一种新的制药用途，用于制备高耐药铜绿假单胞菌生长抑制剂或抗高耐药铜绿假单胞菌的药物。

所述的高耐药铜绿假单胞菌生长抑制剂或抗高耐药铜绿假单胞菌的药物中，至少同时包括HyG和亚胺培南。

本发明所述的高耐药铜绿假单胞菌生长抑制剂或抗高耐药铜绿假单胞菌的药物，作为靶向生长抑制剂或抗菌药物使用，用于抑制高耐药铜绿假单胞菌的生长。

本发明的有益效果：

本发明的是将原先对亚胺培南具有抗性，且最小抑菌浓度为4096μg/mL的铜绿假单胞菌在使用HyG后最小抑菌浓度下降，因此本发明提供了HyG在降低高耐药铜绿假单胞菌MIC的应用，通过实验证明，HyG单独使用对细菌生长无明显影响，仅在与亚胺培南联合使用后对细菌表现出显著的杀伤性；HyG在8μg/mL浓度下可以将亚胺培南对细菌的MIC由4096μg/mL降低至1024μg/mL。HyG作为一种药食同源中药单体化合物，可以调节人体免疫功能，对人体无明显毒副作用。因此HyG可以用于新药开发，并对药物靶标确认有着重要意义。

附图说明

图1为本发明药敏实验中不同药物对铜绿假单胞菌的MIC值变化示意图，其中a：亚胺培南浓度(μg/mL)；b：HyG浓度(μg/mL)；

图2为本发明生长曲线实验中铜绿假单胞菌的生长曲线示意图；

图3为本发明杀菌曲线实验中杀菌曲线示意图，其中A：未添加任何药物的对照组；B：DMSO浓度(8μg/mL)；C：亚胺培南浓度(1024μg/mL)；D：HyG浓度(8μg/mL)与亚胺培南浓度(1024μg/mL)联合作用；E：HyG浓度(8μg/mL)。

具体实施方式

实施例1：

本发明通过生长曲线实验、杀菌曲线实验及药敏实验证明HyG可以降低亚胺培南对高耐药铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度。HyG在8μg/mL浓度下将亚胺培南对高耐药铜绿假单胞菌的MIC由4096μg/mL降低至1024μg/mL。

(1)药敏实验

使用MH肉汤液体培养基对亚胺培南及HyG进行梯度稀释。通过观察细菌的生长情况并以酶标仪600nm处的吸光度值来反应不同浓度下亚胺培南、HyG及两种药物联合对高耐药铜绿假单胞菌的杀伤情况，结果如图1所示，颜色由绿到红，吸光度值越来越低，表明细菌的菌量越来越少。

当培养基中HyG的含量为8μg/mL及16μg/mL时与浓度为1024μg/mL的亚胺培南联合作用后，细菌数量低于其他组别，并且肉眼不可见培养基浑浊。未加亚胺培南时，细菌在浓度为8μg/mL的HyG中的生长状态优于16μg/mL。

因此当HyG的浓度为8μg/mL时可以将铜绿假单胞菌的MIC值由4096μg/mL下降为1024μg/mL。根据公式FICI＝(MIC_{Concentration of natural compounds in combination}/MIC_{Natural compounds})+(MIC_{Concentration of combined antibiotics}/MIC_Antibiotic)判断两种药物为协同关系。

(2)生长曲线实验

与药敏实验相同，使用MH肉汤液体培养基进行药物的稀释，以未加任何药物的高耐药铜绿假单胞菌生长状态作对照，通过测定加入HyG后0h、1h、2h、3h、4h、5h、6h、7h、8h的细菌OD值来反应生长状态，结果如表1、图2所示，加入HyG的所有组别均与未加入药物的菌株生长趋势一致，结果表明该药物单独使用时对细菌生长无明显影响。

表1HyG在不同浓度下细菌的生长状态

a：药物浓度(μg/mL)；b：时间(h)；A：未添加任何药物的对照组；B：DMSO浓度(32μg/mL)；C：HyG浓度(4μg/mL)；D：HyG浓度(8μg/mL)；E：HyG浓度(16μg/mL)；F：HyG浓度(32μg/mL)。

(3)杀菌曲线实验

与药敏实验相同，使用MH肉汤液体培养基进行药物的稀释，以未加任何药物的细菌生长状态作对照，通过对加入HyG后0h、2h、4h、5h、7h、8h进行梯度稀释涂布的方法来进行活菌数值的测定(以log10表示)以反应药物对细菌的杀伤水平，结果如表2、图3所示，与对照组相比，加入DMSO及HyG后，高耐药铜绿假单胞菌的数量没有明显的下降；当加入药物仅为亚胺培南时，细菌的数量与对照组相比明显下降；当同时加入HyG与亚胺培南4-8h后相对于单独加入亚胺培南，细菌的数量开始呈下降趋势，结果表明HyG(8μg/mL)与亚胺培南(1024μg/mL)联合使用后可以对高耐药铜绿假单胞菌的生长产生抑制，并维持8h以上。

表2没食子酰基金丝桃苷与亚胺培南联合的杀菌情况

a：药物浓度(μg/mL)；b：时间(h)；A：未添加任何药物的对照组；B：DMSO浓度(8μg/mL)；C：亚胺培南浓度(1024μg/mL)；D：HyG浓度(8μg/mL)与亚胺培南浓度(1024μg/mL)联合作用；E：HyG浓度(8μg/mL)。

实施例2：

本实施例将HyG作为亚胺培南抑制高耐药铜绿假单胞菌生长的助剂，在使用亚胺培南抑制高耐药铜绿假单胞菌生长的过程中加入HyG，HyG作为助剂的浓度为8μg/mL或16μg/mL，有效抑制高耐药铜绿假单胞菌的生长，显著降低高耐药铜绿假单胞菌的数量。

实施例3：

本实施例将HyG作为生产亚胺培南抑制高耐药铜绿假单胞菌生长制剂或药物的助剂；在生产亚胺培南抑制高耐药铜绿假单胞菌生长制剂或药物的过程中，加入HyG作为助剂，提高该药物抑制高耐药铜绿假单胞菌生长的能力，HyG作为助剂的浓度为8μg/mL或16μg/mL。

实施例4：

本实施例将HyG用于制备高耐药铜绿假单胞菌生长抑制剂或抗高耐药铜绿假单胞菌的药物，该生长抑制剂或抗菌药物中，至少同时包括HyG和亚胺培南两种成分。其中，HyG的浓度优选为8μg/mL，亚胺培南的浓度优选为1024μg/mL。

实施例5：

实施例4所述的高耐药铜绿假单胞菌生长抑制剂或抗高耐药铜绿假单胞菌的药物，可以作为靶向生长抑制剂或抗菌药物使用，用于抑制高耐药铜绿假单胞菌的生长。

实施例6：

本实施例提供一种抑制高耐药铜绿假单胞菌生长的方法，其特征在于：将浓度为8μg/mL的没食子酰基金丝桃苷与浓度为1024μg/mL的亚胺培南联合使用，8h后活菌数值由9.863±0.046下降至3.247±0.125。

Claims (10)

1.HyG的应用，其特征在于：用于降低亚胺培南对高耐药铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度。

2.根据权利要求1所述的HyG的应用，其特征在于：HyG在8μg/mL浓度下将亚胺培南对高耐药铜绿假单胞菌的MIC由4096μg/mL降低至1024μg/mL。

3.根据权利要求1所述的HyG的应用，其特征在于：浓度为8μg/mL-16μg/mL的没食子酰基金丝桃苷与浓度不小于1024μg/mL的亚胺培南联合作用，抑制高耐药铜绿假单胞菌的生长，降低高耐药铜绿假单胞菌的数量。

4.HyG的应用，其特征在于：将HyG作为亚胺培南抑制高耐药铜绿假单胞菌生长的助剂，或将HyG作为生产亚胺培南抑制高耐药铜绿假单胞菌生长制剂或药物的助剂。

5.根据权利要求4所述的HyG的应用，其特征在于：HyG作为助剂的浓度为8μg/mL-16μg/mL。

6.HyG的制药用途，其特征在于：用于制备高耐药铜绿假单胞菌生长抑制剂或抗高耐药铜绿假单胞菌的药物。

7.根据权利要求6所述的HyG的制药用途，其特征在于：所述的高耐药铜绿假单胞菌生长抑制剂或抗高耐药铜绿假单胞菌的药物中，包括HyG和亚胺培南；HyG的浓度为8μg/mL-16μg/mL。

8.一种高耐药铜绿假单胞菌生长抑制剂或抗高耐药铜绿假单胞菌的药物，其特征在于：至少同时包括HyG和亚胺培南两种成分。

9.根据权利要求8所述的一种高耐药铜绿假单胞菌生长抑制剂或抗高耐药铜绿假单胞菌的药物，其特征在于：作为靶向生长抑制剂或抗菌药物使用，用于抑制高耐药铜绿假单胞菌的生长。

10.一种抑制高耐药铜绿假单胞菌生长的方法，其特征在于：将浓度为8μg/mL-16μg/mL的没食子酰基金丝桃苷与浓度不小于1024μg/mL的亚胺培南联合使用。

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