CN115299443B - 用于抑制病原微生物的组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明属于消杀防护技术领域,具体涉及一种用于抑制病原微生物的组合物。该组合物的活性组分:由一个含游离巯基的化合物(如N‑乙酰半胱氨酸)和一个锌盐(如葡萄糖酸锌或醋酸锌)。本发明还给出了一种抑菌剂,该抑菌剂是由山梨酸钾、N‑乙酰半胱氨酸、蛋氨酸、二水合醋酸锌、葡萄糖酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和溶剂组成,其中溶剂由纯化水、甘油和乙二醇苯醚按体积比84:15:1组成。该抑菌剂对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等病原微生物有较强的抑制作用,抑菌率可以达到90%以上,是一种理想的消杀产品。
Description
技术领域
本发明属于消杀防护技术领域,具体涉及一种用于抑制病原微生物的组合物。
背景技术
人类的生存环境中充满了细菌和真菌,大部分情况下这些细菌真菌并不会对人造成危害,然而近些年来细菌、病毒逐渐活跃,对人类健康造成了极大地威胁,人们对于消杀产品的需求日益增多。
但是常见的可用于物品/皮肤表面的消杀产品存在副作用大的问题,例如84消毒液,较大的残氯不仅会影响人类健康,还会对环境造成破坏;酒精使用风险较大,如果大面积的消毒遇火星易造成火灾;强氧化化合物如过氧化物(过氧化氢或过氧乙酸)或醛类化合物(如邻苯二甲醛)有修饰或偶联DNA等核酸物质的可能,从而长期使用会有致癌风险。并且伴随着抗生素和杀菌剂的频繁使用,病菌的抗药性日益增强,现有消杀产品的抑菌效果逐渐降低,因此急需推出新的抑菌效果好的消杀产品。
公开号为CN113575611A的中国发明专利公开了一种可在高铁车厢应用的消杀喷剂及制备方法,该消杀喷剂含有微纳锌组分,而微纳锌则由葡萄糖酸锌等锌盐制备而成,该消杀喷剂具有较好的杀菌效果,不过该消杀喷剂更适用于公共环境卫生消毒,长期使用对皮肤的刺激和腐蚀性作用明显,不适用于人体皮肤表面消毒。
发明内容
为了解决上述问题,本发明研究了多种具有抑菌效果的物质,发现由一种含游离巯基的化合物(如N-乙酰半胱氨酸)和一种锌盐(如葡萄糖酸锌或醋酸锌)作为活性成分组成的复合物,可以形成较稳定的组合,并发现这两种活性成分例如N-乙酰半胱氨酸与葡萄糖酸锌的联合使用对白色念珠菌等病原微生物的抑制具有一定的协同作用。
本发明的目的之一在于提供一种用于抑制病原微生物的组合物,该组合物对白色念珠菌等病原微生物具有协同抑制作用。
为实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种用于抑制病原微生物的组合物,所述组合物的活性成分由一种含游离巯基的化合物和一种锌盐组成。
进一步,所述病原微生物包括白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和/或大肠杆菌。
进一步,所述一种含游离巯基的化合物包括N-乙酰半胱氨酸、半胱氨酸、2-巯基乙醇、二硫苏糖醇中的任一种或几种,优选地,为乙酰半胱氨酸。
进一步,所述一种锌盐包括葡萄糖酸锌、醋酸锌、硫酸锌、氯化锌中的任一种或几种,优选地,为葡萄糖酸锌和/或醋酸锌。
更进一步,所述一种锌盐优选为葡萄糖酸锌。
进一步,所述组合物活性成分由N-乙酰半胱氨酸和葡萄糖酸锌组成。
进一步,所述组合物的活性成分由N-乙酰半胱氨酸、葡萄糖酸锌和醋酸锌组成。
进一步,所述组合物活性成分由N-乙酰半胱氨酸和醋酸锌组成。
进一步,所述一种含游离巯基的化合物与所述一种锌盐的摩尔比为10:1至1:10。
更进一步,所述一种含游离巯基的化合物与一种锌盐的摩尔比为10:1至1:9、10:1至1:8、10:1至1:7、10:1至1:6、10:1至1:5、10:1至1:4、10:1至1:3、10:1至1:2、10:1至1:1、9:1至1:10、8:1至1:10、7:1至1:10、6:1至1:10、5:1至1:10、4:1至1:10、3:1至1:10、2:1至1:10或1:1至1:10,或者1:1、1:1.5、1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、1:4、1:4.5、1:5、1:5.5、1:6、1:6.5、1:7、1:7.5、1:8、1:8.5、1:9、1:9.5、1:10、1.5:1、2:1、2.5:1、3:1、3.5:1、4:1、4.5:1、5:1、5.5:1、6:1、6.5:1、7:1、7.5:1、8:1、8.5:1、9:1、9.5:1、10:1。
更进一步,所述一种含游离巯基的化合物与一种锌盐的摩尔比为1:2。
本发明的目的之二在于提供一种所述一种含游离巯基的化合物和所述一种锌盐的协同应用在制备抑制白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和/或大肠杆菌的产品中的应用。
进一步,所述一种含游离巯基的化合物包括N-乙酰半胱氨酸、半胱氨酸、2-巯基乙醇、二硫苏糖醇中的任一种或几种,优选为乙酰半胱氨酸;所述一种锌盐包括葡萄糖酸锌、醋酸锌、硫酸锌、氯化锌中的任一种或几种,优选为葡萄糖酸锌和/或醋酸锌。
在本发明的组合物中,N-乙酰半胱氨酸(N—acetylcysteine,NAC)具有一定的抗菌活性,可以抑制细菌的黏附,减少细胞外多糖蛋白复合物的产生,破坏已生成的生物被膜,对被膜下细菌也有一定的杀菌作用。葡萄糖酸锌是一种常用辅助药物,存在于众多的酶系中,为核酸、蛋白质、碳水化合物的合成和维生素A的利用所必需。锌是生理学上重要的微量元素,参与机体各种生物过程,具有一定的抑菌活性。
本发明的目的之三在于提供一种用于抑制病原微生物的制剂组合物。
为实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种用于抑制病原微生物的制剂组合物,所述制剂组合物由上述组合物的活性成分,以及抗坏血酸、聚乙烯吡咯烷酮、焦亚硫酸钠、山梨酸钾、蛋氨酸和溶剂组成。
进一步,所述制剂组合物由山梨酸钾、N-乙酰半胱氨酸、蛋氨酸、二水合醋酸锌、葡萄糖酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和溶剂组成,任选地,山梨酸钾、N-乙酰半胱氨酸、蛋氨酸、二水合醋酸锌、葡萄糖酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠与聚乙烯吡咯烷酮的重量比为10:600:60:378:785:30:80:10。
进一步,所述制剂组合物的溶剂由纯化水、甘油和乙二醇苯醚按体积比84:15:1组成;所述制剂组合物和溶液的质量/体积比为1953:20000,单位为g/mL。
进一步,所述制剂组合物由N-乙酰半胱氨酸、二水合醋酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠和溶剂组成,任选地,N-乙酰半胱氨酸、二水合醋酸锌、抗坏血酸与焦亚硫酸钠重量比为30:54:1:4。
进一步,所述制剂组合物的溶剂由纯化水、甘油和乙二醇苯醚按体积比84:15:1组成;所述制剂组合物和溶液的质量/体积比为89:1000,单位为g/mL。
进一步,所述制剂组合物由N-乙酰半胱氨酸、蛋氨酸、葡萄糖酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和溶剂组成,任选地,N-乙酰半胱氨酸、蛋氨酸、葡萄糖酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠与聚乙烯吡咯烷酮重量比为60:6:157:3:12:1。
进一步,所述制剂组合物的溶剂由纯化水、甘油和乙二醇苯醚按体积比84:15:1组成;所述制剂组合物和溶液的质量/体积比为239:2000,单位为g/mL。
山梨酸钾是世界卫生组织添加剂委员会允许使用的很少的几种防腐剂之一,具有较高的安全性,对霉菌很强的抑制能力,具有防腐、安全、稳定三大优势。山梨酸钾通过抑制微生物体内的脱氢酶系统,从而抑制微生物的生长,达到防腐的目的,不仅对细菌、霉菌、酵母菌均有抑制作用,还能防止肉毒杆菌、葡萄球菌、沙门氏菌等有害微生物的生长和繁殖。不过山梨酸钾在微生物数量过高的情况下作用甚微。
本发明的目的之四在于提供一种所述制剂组合物的制备方法。
为实现上述目的,本发明采用以下技术方案:
一种所述制剂组合物的制备方法,包括以下步骤:
S1:制备溶剂;
S2:用S1所得溶剂溶解所述山梨酸钾、所述一种含游离巯基的化合物、所述蛋氨酸、所述二水合醋酸锌、所述一种锌盐、所述抗坏血酸、所述焦亚硫酸钠和所述聚乙烯吡咯烷酮,制得混合溶液;
S3:调节S2所得混合溶液的pH值并定容,制得所述制剂组合物。
进一步,S1具体为:取适量纯化水、甘油、乙二醇苯醚混合均匀,即得溶剂。
进一步,S2所得混合溶液呈酸性,S3调pH值前需先检测混合溶液的初始pH值。
进一步,S3中采用NaOH水溶液调节混合溶液pH值至6.4±0.2,任选地,所述NaOH水溶液的浓度为10mol/L。
进一步,S3中所述混合溶液采用纯化水定容,定容后所述混合溶液pH值为6.5±0.2。
进一步,S3中混合溶液定容后需采用微孔滤膜过滤,所述微孔滤膜为水系,孔径为0.45μm,直径为50mm。
或者,
S1:制备溶剂;
S2:用S1所得溶剂溶解所述一种含游离巯基的化合物、所述一种锌盐、所述抗坏血酸和所述焦亚硫酸钠,制得混合溶液;
S3:调节S2所得混合溶液的pH值并定容,制得所述制剂组合物。
进一步,S3中采用NaOH水溶液调节混合溶液pH值至6.0±0.2。
或者,
S1:制备溶剂;
S2:用S1所得溶剂溶解所述一种含游离巯基的化合物、所述蛋氨酸、所述一种锌盐、所述抗坏血酸、所述焦亚硫酸钠和所述聚乙烯吡咯烷酮,制得混合溶液;
S3:调节S2所得混合溶液的pH值并定容,制得所述制剂组合物。
进一步,S3中采用NaOH水溶液调节混合溶液pH值至6.2±0.2。
进一步,S3中所述混合溶液采用纯化水定容,定容后所述混合溶液pH值为6.2±0.2。
本发明的目的之五在于提供一种所述组合物和/或所述制剂组合物在制备抑菌药物中的应用。
本发明的目的之六在于提供一种所述组合物和/或所述制剂组合物在制备抑制白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和/或大肠杆菌的消杀产品中的应用。
进一步,所述消杀产品用于物品消毒和/或皮肤消毒。
进一步,所述消杀产品可制成外用溶液剂、洗剂、喷剂、鼻喷剂和/或喷雾剂。
本发明的有益效果在于:
1.抑菌剂中的有效成分经过一段时间的放置后会有一定的减少并趋于平衡,从而在低浓度时抑菌效果会随之降低。本发明研究发现,在较低浓度时,N-乙酰半胱氨酸和葡萄糖酸锌联合使用要比只含其中任一种组分的抑菌剂的抑菌效果更佳。即N-乙酰半胱氨酸和葡萄糖酸锌的联合使用对白色念珠菌等病原微生物的抑制具有一定的协同作用,基于此,本发明提出了含有N-乙酰半胱氨酸和葡萄糖酸锌的抑菌剂,低浓度下仍具有较好的抑菌效果,稀释4倍后仍有近100%的抑菌率。是一种理想的消杀产品。
2.本发明提供的抑菌剂对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等病原微生物有较强的抑制作用,抑菌率可以达到90%以上,并且该抑菌剂稳定性较好,可长期储存;该抑菌剂原液作用2~20min,对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌的抑菌率可达到100%;
3.本发明提供的抑菌剂未检出大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和溶血性链球菌,且真菌、细菌菌落总数为0;同时该抑菌剂刺激指数为0,属于无刺激性产品,可用于人体肌肤表面及粘膜消毒;
4.本发明提供的抑菌剂铅含量<15μg/L,砷含量<4.0μg/L,汞含量<2μg/L。
具体实施方式
下面将结合具体的实施例对本发明的技术方案进行更进一步地清楚、完整地描述。显然,所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例,而不是全部实施例。因此,基于本发明中的实施例,本领域技术人员在没有付出创造性劳动前提下所获得的其他所有实施例都属于本发明的保护范围。
实施例1.
原料:N-乙酰半胱氨酸、二水合醋酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠按质量比30:54:1:4组成。
溶剂:纯化水、甘油、乙二醇苯醚按体积比84:15:1组成。
原料与溶液的质量/体积比为89:1000,单位为g/mL。
制备方法:
1.按上述质量比称取2份处方量的原辅料:N-乙酰半胱氨酸、二水合醋酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠;
2.取适量高纯水,分别进行溶解;
3.分别测得上述两个溶液的初始pH值为3.97和4.11,用浓度为10mol/L的NaOH溶液调节溶液pH至6.0±0.2;
4.向溶液中添加处方量的甘油和乙二醇苯醚;
5.将上述溶液用孔径为0.45μm的微孔过滤膜(水系;直径:50mm;厂家:天津市津腾试验设备有限公司)过滤;
6.最后将溶液移入容量瓶进行定容;得NAC-锌溶液。
实施例2.
原料:山梨酸钾、N-乙酰半胱氨酸、蛋氨酸、二水合醋酸锌、葡萄糖酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮按质量比10:600:60:378:785:30:80:10组成。
溶剂:纯化水、甘油、乙二醇苯醚按体积比84:15:1组成。
原料与溶液的质量/体积比为1953:20000,单位为g/mL。
制备方法:
1.制备溶剂:按实施例1的体积比取适量纯化水、甘油、乙二醇苯醚混合均匀,得溶剂;
2.按上述质量比称取处方量的原辅料:山梨酸钾(称样量:0.6038g/1.2L;批号:C12694872;厂家:上海麦克林生化科技有限公司)、N-乙酰半胱氨酸、蛋氨酸、二水合醋酸锌、葡萄糖酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮,加入上述溶剂溶解,得混合溶液;
3.测得混合溶液的初始pH值为3.6,用浓度为10mol/L的NaOH溶液调节该溶液pH至6.4±0.2,用纯化水定容,测其最终pH为6.5±0.2;
4.将定容后的混合溶液用孔径为0.45μm的微孔过滤膜(水系;直径:50mm;厂家:天津市津腾试验设备有限公司)过滤,得NAC-锌-山梨酸钾溶液。
实施例3.
原料:N-乙酰半胱氨酸、蛋氨酸、葡萄糖酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮按质量比60:6:157:3:12:1组成。
溶剂:纯化水、甘油、乙二醇苯醚按体积比84:15:1组成。
原料与溶液的质量/体积比为239:2000单位为g/mL。
制备方法:
1.制备溶剂:按本实施例的体积比取适量纯化水、甘油、乙二醇苯醚混合均匀,得溶剂;
2.按上述质量比称取处方量的原辅料:N-乙酰半胱氨酸、蛋氨酸、葡萄糖酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮,加入上述溶剂溶解,得混合溶液;
3.测得混合溶液的初始pH值为3.19,用浓度为10mol/L的NaOH溶液调节该溶液pH至6.2±0.2,用纯化水定容,测其最终pH为6.2±0.2;
4.将定容后的混合溶液用孔径为0.45μm的微孔过滤膜(混合膜;直径:50mm;厂家:上海市新亚净化器件厂)过滤,得NAC-锌溶液。
对比例1.
原料:葡萄糖酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮按质量比157:3:12:1组成。
溶剂:纯化水、甘油、乙二醇苯醚按体积比84:15:1组成。
原料与溶液的质量/体积比为173:2000单位为g/mL。
制备方法参考实施例3。
对比例2.
原料:N-乙酰半胱氨酸、蛋氨酸、抗坏血酸、焦亚硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮按质量比60:6:3:12:1组成。
溶剂:纯化水、甘油、乙二醇苯醚按体积比84:15:1组成。
原料与溶液的质量/体积比为82:2000单位为g/mL。
制备方法参考实施例3。
对比例3.
取对比例2和生理盐水按体积比1:9混合即得。
实施例4.NAC-锌溶液稳定性试验研究
1.采用实施例1制得的2份NAC-锌溶液,实施例1-1和实施例1-2:
溶液定容后取部分密封储存,进行稳定性加速试验考察。
2.采用加速试验进行产品的稳定性考察研究:
加速试验的目的是通过加速药物制剂的化学或物理变化,探讨药物制剂的稳定性,为处方设计、工艺改进、质量研究、包装改进、运输、贮存提供必要的资料。本次方案具体为:将供试品放置在温度40℃±2℃、相对湿度75%±5%的条件下,定期取样检测,每个月检测一次,时间为6个月;检测项目包括药液pH值(5.0-7.0)测定及外观检测;所用设备需可以控制温度±2℃、相对湿度±5%,并能对真实温度与湿度进行监测。试验结果如表1所示,结果表明:
表1
实施例5.NAC-锌溶液抑菌性能试验研究
1.实施例1制得的抑菌剂抑菌性能测试试验
1)检测依据:GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C2和附录C4。
2)检验方法:采用实施例1制备的抑菌剂原液分别对白色念珠菌、大肠杆菌进行作用,作用时间为2.0min、5.0min、10.0min、20.0min,试验温度为20℃恒温,试验重复3次。
3)检验结果如表2所示:
表2
注:阴性对照无菌生长;阳性对照菌落数为1.33×104~2.10×104CFU/mL。
结果分析:经3次重复试验,用NAC-锌溶液原液作用2min,5min,10min,20min,对1.33×104~2.10×104CFU/mL菌落数的白色念珠菌和大肠埃希菌的抑菌率均>90%,具有较强抑菌作用,符合GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》的规定。
实施例6.抑菌剂抑菌性能检验
1.采用实施例2制得的NAC-锌-山梨酸钾溶液,并将其分装至10mL/瓶的顶喷PE瓶中。
2.实施例2制得的抑菌剂抑菌性能测试试验
1)检测依据:GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C2和附录C4。
2)检验方法:采用实施例1制备的抑菌剂原液分别对白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌进行作用,作用时间为2.0min、5.0min、10.0min、20.0min,试验温度为20℃恒温,试验重复3次。
3)检验结果如表3所示:
表3
注:阴性对照无菌生长;阳性对照菌落数为1.11×104~2.86×104CFU/mL。
结果分析:经3次重复试验,在20℃恒温试验条件下,用NAC-锌-山梨酸钾溶液原液作用2min,5min,10min,20min,对悬液中白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌率均>90%,产品具有较强抑菌作用,符合GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》的规定。
2.稳定性试验1(54.0℃恒温保存14天)
1)检测依据:GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C2、附录C4和附录C6。
2)检验方法:将实施例2制得的抑菌剂放入54.0℃恒温保存14天后,对白色念珠菌进行作用,作用时间为2.0min、5.0min、10.0min、20.0min,试验温度为20℃恒温,试验重复3次。
3)检验结果如表4所示:
表4
注:阴性对照无菌生长;阳性对照菌落数为1.49×104~1.63×104CFU/mL。
结果分析:经3次重复试验,置于54.0℃恒温保存14d的抑菌喷剂原液作用2.0min,5.0min,10.0min,20.0min,对悬液中白色念珠菌的抑菌率均>90%,产品具有较强抑菌作用。符合GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》将产品贮存有效期定为1年的规定。
3.稳定性试验2(37.0℃恒温保存90天)
1)检测依据:GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录C2、附录C4和附录C6。
2)检测方法:将实施例2制得的抑菌喷剂放入37.0℃恒温保存90天后,采用原液对白色念珠菌进行作用,作用2.0min、5.0min、10.0min和20.0min,试验温度为20℃恒温,试验重复3次。检测环境温度:22.5℃~23.6℃,相对湿度:53%~58%。
3)检测结果:抑菌剂对白色念珠菌的抑菌率如表5所示。
表5
注:阴性对照无菌生长,阳性对照菌落数为1.22×104~2.46×104CFU/mL。。
结果分析:经3次重复试验,置于37.0℃恒温保存90d的抑菌喷剂原液作用2.0min,5.0min,10.0min,20.0min,对悬液中白色念珠菌的抑菌率均>90%,产品具有较强抑菌作用。符合GB15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》将产品贮存有效期定为2年的规定。
实施例7.抑菌剂pH值测定
1.检验方法:取10mL实施例2制得的抑菌剂样品原液作为待测液,用pH广范试纸测定,测得待测液pH值为6,用邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液(pH 4.0,25℃)和混合磷酸盐标准缓冲液(pH 6.86,25℃)校准pH计,将电极浸在待测液中,待显示值稳定后记录其pH值。取3瓶样品,每瓶样品重复测定2次;检测环境温度:21.5C,相对湿度:56%。
2.检测结果:经检测,该抑菌剂pH值平均值为6.39,符合标准。
实施例8.抑菌剂铅含量检测
1.检测方法:
(1)检测依据:《化妆品安全技术规范》(2015年版)第四章1.3铅(第一法);
(2)标准工作曲线的配制:配制铅浓度为0μg/L-20.00μg/L的标准系列;在设定条件下进行分析,得到线性方程;
(3)样品前处理:摇匀后,准确移取1.00mL实施例2制得的抑菌剂样品置于消解罐中,先加3.0mL硝酸,静置过夜,充分作用,然后再加1.0mL 30%过氧化氢,晃动摇匀后,使样品充分浸没。在100℃下加热20min取下,冷却。置于微波消解仪中进行消解。消解后在100℃下加热数分钟,驱除样品中多余的氮氧化物。冷却后转移至10mL比色管中,用一级水洗涤消解罐,洗液并入比色管中,再用一级水定容至刻度,混匀,同时做试剂空白;
(4)分别吸取适量样液和试剂空白液,注入原子吸收光谱仪测其吸光度,由标准曲线读出相应的铅浓度。
(5)取3瓶样品,每瓶样品重复测定2次。检测环境温度:20.2℃,相对湿度:56%。
2.检测结果:经检测,该抑菌剂中铅含量平均值为14.7μg/L,符合标准。
实施例9.抑菌剂砷含量检测
1.检测方法:
(1)检测依据:《化妆品安全技术规范》(2015年版)第四章1.4砷(第一法);
(2)标准工作曲线的配制:配制砷浓度为0μg/L-20.00μg/L的标准系列;在设定条件下进行分析,得到线性方程;
(3)样品前处理:摇匀后,准确移取1.00mL实施例2制得的抑菌剂样品置于消解罐中,先加3.0mL硝酸,静置过夜,充分作用,然后再加1.0mL 30%过氧化氢,晃动摇匀后,使样品充分浸没。在100℃下加热20min取下,冷却。置于微波消解仪中进行消解。消解后在100℃下加热数分钟,驱除样品中多余的氮氧化物。冷却后转移至10mL比色管中,用一级水洗涤消解罐,洗液并入比色管中,再用一级水定容至刻度,再加入硫脲-抗坏血酸溶液2.0mL混匀,同时做试剂空白;
(4)分别吸取适量样液和试剂空白液,注入原子荧光光度计测其荧光值,由标准曲线读出相应的砷浓度;
(5)取3瓶样品,每瓶样品重复测定2次;检测环境温度:20.2℃,相对湿度:56%。
2.检测结果:经检测,该抑菌剂中砷含量<4.0μg/L,符合规定。
实施例10.抑菌剂汞含量检测
1.检测方法:
(1)检测依据:《化妆品安全技术规范》(2015年版)第四章1.2汞(第一法);
(2)标准工作曲线的配制:配制汞浓度为0μg/L-2.000μg/L的标准系列;在设定条件下进行分析,得到线性方程;
(3)样品前处理:摇匀后,准确移取1.00mL实施例2制得的抑菌剂样品置于消解罐中,先加3.0mL硝酸,静置过夜,充分作用,然后再加1.0mL 30%过氧化氢,晃动摇匀后,使样品充分浸没。在100℃下加热20min取下,冷却。置于微波消解仪中进行消解。消解后在100℃下加热数分钟,驱除样品中多余的氮氧化物。冷却后转移至10mL比色管中,用一级水洗涤消解罐,洗液并入比色管中,混匀加入0.5mL盐酸羟胺溶液,再用一级水定容至刻度,混匀;同时做试剂空白;
(4)分别吸取适量样液和试剂空白液,注入原子荧光光度计测其荧光值,由标准曲线读出相应的汞浓度;
(5)取3瓶样品,每瓶样品重复测定2次;检测环境温度:20.2℃,相对湿度:56%。
2.检测结果:经检测,该抑菌剂中汞含量平均值为1.32μg/L,符合规定。
实施例11.抑菌剂微生物污染检验
1.检测方法
(1)检测依据:GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录B;
(2)样品处理:在无菌室100级超净工作台内,用无菌操作方法,打开实施例2制得的抑菌剂3个独立包装,共取样10.0mL加入到200mL含中和剂的生理盐水中混匀,作用10min,作为样液;
(3)细菌菌落总数测定:分别取上述(2)中的样液1.0mL接种平皿,共接种5个平血;各平皿倾注营养琼脂培养基,待冷凝后翻转平皿,置35.0℃恒温培养箱培养48h,计数活菌数;
(4)真菌菌落总数测定:分别取上述(2)中的样液1.0mL接种平皿,共接种5个平皿;各平皿倾注沙氏琼脂培养基,待冷凝后翻转平皿,置25.0℃恒温培养箱培养7d,计数活菌数。
(5)大肠菌群检测:取上述(2)中的样液5.0mL接种到50mL乳糖胆盐发酵管中,进行初发酵试验,根据分离培养和染色镜检筛选具有大肠菌群典型特征的菌落进行乳糖复发酵试验,记录结果。
(6)致病性化脓菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、溶血性链球菌)检测:取上述(2)中的样液5mL,经增菌、分离培养后,根据分离培养和染色镜检筛选的具有致病性化脓菌(金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、溶血性链球菌)典型特征的菌落进行生化鉴定。
2.检测结果:经检测,该抑菌剂中细菌菌落总数、真菌菌落总数、大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌和溶血性链球菌检测结果符合GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》对产品微生物污染的规定,检测结果如表6所示。
表6.微生物污染指标检测结果
检测指标 | 标准值 | 实测值 |
细菌菌落总数(CFU/mL) | ≤200 | 0 |
大肠菌群 | 不得检出 | 未检出 |
金黄色葡萄球菌 | 不得检出 | 未检出 |
铜绿假单胞菌 | 不得检出 | 未检出 |
溶血性链球菌 | 不得检出 | 未检出 |
真菌菌落总数(CFU/mL) | ≤100 | 0 |
注:阴性对照无菌生长。
实施例12.抑菌剂毒理学性能检验——多次完整皮肤刺激实验
1.检测方法
(1)检测依据:《消毒技术规范》(2002年版)第2.3.3.3.3项和GB 15979-2002《一次性使用卫生用品卫生标准》附录A;
(2)受试样品配制:使用实施例2样品原液;
(3)试验方法:在试验前24h,用电推刀将新西兰兔背部脊柱两侧的毛去掉,面积约3cm×3cm;次日将实施例2制得的抑菌剂样品原液0.5mL涂在2.5cm×2.5cm左侧皮肤上,右侧作为空白对照,在涂抹后4h,用温水清洗,除去残留受试样品;每天涂抹一次,方法同前述,连续涂抹14d,为了便于受试样品的涂抹和结果观察,必要时剃毛;
(4)观察与评价:在每次涂抹后24h观察皮肤反应并评分,评分标准及刺激强度分级参照《消毒技术规范》(2002年版)2.3.3“皮肤刺激试验”中表2-11和表2-12。
2.检测结果:
每次给药后24h观察皮肤局部反应,14d内3只新西兰兔染毒侧皮肤与对照侧皮肤均未见红斑、水肿等异常,刺激指数为0.00,属于无刺激性,符合《消毒技术规范》(2002年版)合格要求。
实施例13.抑菌剂毒理学性能检验——急性眼刺激实验
1.检测方法
(1)检测依据:《消毒技术规范》(2002年版)第2.3.4项;
(2)受试样品配制:使用实施例2样品原液;
(3)试验方法:吸取实施例2制得的抑菌剂样品0.1ml,滴入新西兰兔左侧眼结膜囊内,滴入受试样品后,将眼被动闭合4s,30s后用生理盐水冲洗;右侧眼滴入生理盐水作为正常对照;
(4)观察与评价:于滴眼后lh、24h、48h、72h、7d、14d和21d,肉眼观察新西兰兔眼结膜、虹膜和角膜的损伤与恢复情况。如在72h内未出现刺激反应,或第7d或14d眼睛刺激反应完全恢复,提前终止试验。评分标准及刺激强度分级参照《消毒技术规范》(2002年版)第2.3.4“急性眼刺激试验”中表2-13和表2-14评分。
2.检测结果:
在72h观察未见刺激反应,提前终止试验,72h内3只新西兰兔染毒侧眼睛与对照组眼睛均未见角膜损害、虹膜损害、结膜充血、结膜水肿等异常,损伤类型属无刺激,符合《消毒技术规范》(2002年版)合格的要求。
实施例14.NAC-锌溶液抑菌性能试验研究
1.配制溶液:
1)配制10mol/L氢氧化钠溶液:称取处方量的氢氧化钠用适量水溶解后定容至量瓶中,摇匀即得。
2)采用实施例3配制的溶液;
3)采用对比例1配制的溶液(无N-乙酰半胱氨酸);
4)采用对比例2配制的溶液(无葡萄糖酸锌);
5)采用对比例3配制的溶液(对比例1-2溶液的稀释液);
6)将对比例1分装成对比例1-1(对比例1-1用生理盐水稀释)和对比例1-2(对比例1-2用对比例3稀释),并对对照品(某已上市鼻剂)、实施例3、对比例1-1、对比例1-2和对比例2进行检测。
2.检测方法:以WS/T 650-2019《抗菌和抑菌效果评价方法》为依据进行检测。
3.抑菌试验结果
(1)实施例3及比对照品对白色念珠菌的抑菌率如表7所示,两者100%原药液对白色念珠菌的抑菌率均为100%;两者药液浓度均降低为50%(用生理盐水稀释)时,本品对白色念珠菌的抑菌率仍为100%,抑菌率比对照品高40.12%(抑菌率取三次均值),可见实施例3抑菌性能优于对照品。
表7.实施例3及对照品对白色念珠菌的抑菌率
(2)对比例1-1、对比例1-2和对比例2对白色念珠菌的抑菌率如表8所示,由表8可知:
1)样品相对浓度在25%时,对比例1-1和对比例1-2在第一次试验时抑菌效果优于第二次、第三次的抑菌效果,第二次、第三次的抑菌效果差不多,分析原因或为,对比例1-1和对比例1-2中有效成分在第一次检测完成后放置2天中后有一定的减少并趋于平衡,从而在低浓度时降低了抑菌效果(三次重复独立试验每次间隔2天)。
2)对比例1-1,即不含N-乙酰半胱氨酸时,100%原药液和药液浓度降低为50%(用生理盐水稀释1倍)时,对白色念珠菌的抑菌率均为100%;药液浓度降低为25%(用生理盐水稀释2倍)时,对白色念珠菌的抑菌率62.63%(抑菌率取三次均值)。
3)对比例2,即不含葡萄糖酸锌时,100%原药液对白色念珠菌的抑菌率均为80.15%;药液浓度降低为50%(用生理盐水稀释1倍)时,对白色念珠菌的抑菌率均为45.03%;药液浓度降低为25%(用生理盐水稀释2倍)时,对白色念珠菌的抑菌率24.44%(抑菌率取三次均值)。
4)对比例1-2,即不含N-乙酰半胱氨酸时,100%原药液和药液浓度降低为50%(用对比例3稀释1倍)时,对白色念珠菌的抑菌率均为100%;药液浓度降低为25%(用对比例3稀释2倍)时,对白色念珠菌的抑菌率68.72%(抑菌率取三次均值)。
由2)、3)、4)可知:含有葡萄糖酸锌及N-乙酰半胱氨酸的溶液对白色念珠菌均有抑制作用:含有葡萄糖酸锌的溶液在对白色念珠菌的抑制作用大于含有N-乙酰半胱氨酸的溶液对白色念珠菌的抑制作用;当对比例1用不同稀释液进行稀释时,在其相对浓度较高时抑菌效果无法区分,当样品相对浓度在25%时,用对比例3溶液稀释得到的样品与用生理盐水稀释的得到样品相比,对比例1-2对白色念珠菌的抑菌率提高了6.09%,表明(稀释液中含有一定量的N-乙酰半胱氨酸)可提高对白色念珠菌的抑制作用(抑菌率取三次均值)。
由此可见,N-乙酰半胱氨酸和葡萄糖酸锌的联合使用对白色念珠菌的抑制具有一定的协同作用。
表8.实施例3各对比例对白色念珠菌的抑菌率
Claims (27)
1.一种用于抑制病原微生物的制剂组合物,其特征在于,所述制剂组合物由山梨酸钾、N-乙酰半胱氨酸、蛋氨酸、二水合醋酸锌、葡萄糖酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和溶剂组成,所述山梨酸钾、所述N-乙酰半胱氨酸、所述蛋氨酸、所述二水合醋酸锌、所述葡萄糖酸锌、所述抗坏血酸、所述焦亚硫酸钠与所述聚乙烯吡咯烷酮的重量比为10:600:60:378:785:30:80:10。
2.根据权利要求1所述的制剂组合物,其特征在于,所述制剂组合物的溶剂由纯化水、甘油和乙二醇苯醚按体积比84:15:1组成;所述制剂组合物和溶液的质量/体积比为1953:20000,单位为g/mL。
3.权利要求1-2任一所述制剂组合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1:制备溶剂;
S2:用S1所得溶剂溶解所述山梨酸钾、所述N-乙酰半胱氨酸、所述蛋氨酸、所述葡萄糖酸锌、所述二水合醋酸锌、所述抗坏血酸、所述焦亚硫酸钠和所述聚乙烯吡咯烷酮,制得混合溶液;
S3:调节S2所得混合溶液的pH值并定容,制得所述制剂组合物。
4.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,S3中采用NaOH水溶液调节混合溶液pH值至6.4±0.2。
5.根据权利要求3所述的制备方法,其特征在于,S3中所述混合溶液采用纯化水定容,定容后所述混合溶液pH值为6.5±0.2。
6.权利要求1-2任一所述制剂组合物在制备抑菌药物中的应用。
7.权利要求1-2任一所述制剂组合物在制备抑制白色念珠菌、金黄色葡萄球菌和/或大肠杆菌的消杀产品中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述消杀产品用于物品消毒和/或皮肤及粘膜消毒。
9.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述消杀产品可制成外用溶液剂、洗剂、喷剂、鼻喷剂和/或喷雾剂。
10.一种用于抑制病原微生物的制剂组合物,其特征在于,所述制剂组合物由N-乙酰半胱氨酸、二水合醋酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠和溶剂组成,所述N-乙酰半胱氨酸、所述二水合醋酸锌、所述抗坏血酸和所述焦亚硫酸钠的重量比为30:54:1:4。
11.根据权利要求10所述的制剂组合物,其特征在于,所述制剂组合物的溶剂由纯化水、甘油和乙二醇苯醚按体积比84:15:1组成;所述制剂组合物和溶液的质量/体积比为89:1000,单位为g/mL。
12.权利要求10-11任一所述制剂组合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1:制备溶剂;
S2:用S1所得溶剂溶解所述N-乙酰半胱氨酸、所述二水合醋酸锌、所述抗坏血酸和所述焦亚硫酸钠,制得混合溶液;
S3:调节S2所得混合溶液的pH值并定容,制得所述制剂组合物。
13.根据权利要求12所述的制备方法,其特征在于,S3中采用NaOH水溶液调节混合溶液pH值至6.0±0.2。
14.根据权利要求12所述的制备方法,其特征在于,S3中所述混合溶液采用纯化水定容。
15.权利要求10-11任一所述制剂组合物在制备抑菌药物中的应用。
16.权利要求10-11任一所述制剂组合物在制备抑制白色念珠菌和/或大肠杆菌的消杀产品中的应用。
17.根据权利要求16所述的应用,其特征在于,所述消杀产品用于物品消毒和/或皮肤及粘膜消毒。
18.根据权利要求16所述的应用,其特征在于,所述消杀产品可制成外用溶液剂、洗剂、喷剂、鼻喷剂和/或喷雾剂。
19.另一种用于抑制病原微生物的制剂组合物,其特征在于,所述制剂组合物由N-乙酰半胱氨酸、蛋氨酸、葡萄糖酸锌、抗坏血酸、焦亚硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮和溶剂组成,所述N-乙酰半胱氨酸、所述蛋氨酸、所述葡萄糖酸锌、所述抗坏血酸、所述焦亚硫酸钠与所述聚乙烯吡咯烷酮的重量比为60:6:157:3:12:1。
20.根据权利要求19所述的制剂组合物,其特征在于,所述制剂组合物的溶剂由纯化水、甘油和乙二醇苯醚按体积比84:15:1组成;所述制剂组合物和溶液的质量/体积比为239:2000,单位为g/mL。
21.权利要求19-20任一所述制剂组合物的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:
S1:制备溶剂;
S2:用S1所得溶剂溶解所述N-乙酰半胱氨酸、所述蛋氨酸、所述葡萄糖酸锌、所述抗坏血酸、所述焦亚硫酸钠和所述聚乙烯吡咯烷酮,制得混合溶液;
S3:调节S2所得混合溶液的pH值并定容,制得所述制剂组合物。
22.根据权利要求21所述的制备方法,其特征在于,S3中采用NaOH水溶液调节混合溶液pH值至6.2±0.2。
23.根据权利要求21所述的制备方法,其特征在于,S3中所述混合溶液采用纯化水定容,定容后所述混合溶液pH值为6.2±0.2。
24.权利要求19-20任一所述制剂组合物在制备抑菌药物中的应用。
25.权利要求19-20任一所述制剂组合物在制备抑制白色念珠菌的消杀产品中的应用。
26.根据权利要求25所述的应用,其特征在于,所述消杀产品用于物品消毒和/或皮肤及粘膜消毒。
27.根据权利要求25所述的应用,其特征在于,所述消杀产品可制成外用溶液剂、洗剂、喷剂、鼻喷剂和/或喷雾剂。
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