CN115287192A - 一种利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法及其应用 - Google Patents

一种利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法及其应用。该方法包括如下步骤：S1：将活化后的产油微藻种子液接种到含氮培养基中，第一阶段在纯红光条件下以二氧化碳为碳源光合自养培养8～10天；第二阶段在红光和蓝光的比例为1:1的混合光下，补充氮源后继续诱导培养1～3天，以促进产油微藻固定二氧化碳联产高蛋白生物质；S2：待两阶段培养结束后，离心收集藻泥，洗涤后冷冻干燥得到藻粉，即可获得以蛋白质为主要成分的微藻生物质。本发明采用光诱导协同补氮模式培养产油微藻，在光合固碳的同时可以生产高蛋白质生物质，拓展了产油微藻的应用场景，提高了微藻生物固碳的环境效益和经济效益。

Description

一种利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法及 其应用
技术领域
本发明属于工业生物技术领域，特别涉及一种利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法及其应用。
背景技术
CO2排放量逐年增加对全球环境造成严重破坏，如全球变暖、海洋酸化、极端气候等。微藻因其生长迅速和光合固碳效率高，近年来在碳中和领域的应用备受关注。然而，微藻光合固碳生产生物质的成本一直居高不下，尤其将产油微藻用于光合固碳生产生物燃料的原料油面临生产周期长、产率低、产品价值低的困境，使其终端产品价格尚无法与化石燃料竞争。为摆脱此困境，众多国际知名藻基生物燃料公司将产油微藻转型用于食用油生产，但其市场价值依然不高。因此，产油微藻光合固碳生产体系不仅面临经济可行性低的问题，还面临终端产品出路问题。由此可见，开发产油微藻新用途，将微藻光合固碳与产品高值化深度耦合，实现“价值驱动”的高值化生产，是微藻固碳减排技术产业化应用的关键。
微藻光合固碳的产物除了油脂、淀粉以外，微藻蛋白也是一大类高营养、高价值的产物。作为一种新型蛋白来源，微藻蛋白比传统的大豆、花生等蛋白具有同等甚至更高的营养价值，是人类蛋白膳食补充剂、动物饲料蛋白的良好来源，在解决人类粮食危机、营养强化、保健功能等方面具有突出的经济和社会价值。此外，微藻细胞可实现从CO2到蛋白质的生物转化而无需胁迫条件的诱导。因此，开发微藻高效光合固碳与高蛋白生物质生产的偶联技术，将有望克服微藻生物量产率低、产品价值低的困境。
目前，利用螺旋藻和小球藻等富含蛋白质的微藻来生产高蛋白生物质已实现产业化，但自养条件下其生物量产量低，致使蛋白的面积或体积产率低的问题依旧突出。因此，强化微藻光合固碳效率以提高生物质产量是提高微藻蛋白质生产潜力的关键。进一步地，通过代谢调控驱动碳代谢流流向蛋白质合成途径，从而获得产量高、品质佳的高蛋白生物质，以实现产油微藻生物质的转型应用。然而，目前缺乏调控产油微藻高效光合固碳偶联高蛋白生物质生产的成熟技术及代谢调控手段。故，亟待开发产油微藻从CO2到蛋白质的高效生物转化技术，以拓展产油微藻应用场景并提高其产品价值。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法。
本发明的另一目的在于提供所述利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法，包括如下步骤：
S1：两阶段光诱导协同补氮培养：将活化后的产油微藻种子液接种到含氮培养基中，第一阶段在纯红光(RL)条件下以二氧化碳为碳源光合自养8～10天；第二阶段在红光和蓝光的比例为1:1的混合光下，补充氮源后继续诱导培养1～3天，以促进产油微藻固定二氧化碳联产高蛋白生物质；
S2：收集微藻生物质：待两阶段培养结束后，离心收集藻泥，洗涤后冷冻干燥得到藻粉，即为以蛋白质为主要成分的微藻生物质。
步骤S1中所述的产油微藻优选为胶球藻(Coccomyxa subellipsoidea C-169)，其编码油脂合成的基因丰富，是产油微藻的代表性藻种。
步骤S1中所述的活化后的产油微藻种子液通过如下方法获得：将产油微藻接种到种子液培养基中，培养至对数生长期，得到活化后的种子液。
所述的种子液培养基为Basal培养基，其配方如下：NaNO3 1250mg/L，H3BO3114.2mg/L，MoO3 7.1mg/L，KH2PO4 1250mg/L，CaCl2·2H2O 111mg/L，MnCl2·4H2O 14.2mg/L，MgSO4·7H2O 1000mg/L，FeSO4·7H2O 49.8mg/L，CuSO4·5H2O 15.7mg/L，EDTA 500mg/L，ZnSO4·7H2O 88.2mg/L，CoNO3·6H2O 6.1mg/L，pH 6～7(优选为pH 6.1)。
所述的培养的条件为：光照强度60～80μmol/m2/s(优选为80μmol/m2/s)，温度25±1℃，摇床转速140～180rpm(优选为160rpm)。
所述的培养的时间为7～10天；优选为7天。
步骤S1中所述的含氮培养基为含氮Basal培养基，其氮源为NaNO3，初始浓度为1250～6250mg/L(优选为2500mg/L)。
所述的含氮Basal培养基的配方如下：NaNO3 1250～6250mg/L(优选为2500mg/L)，H3BO3 114.2mg/L，MoO3 7.1mg/L，KH2PO4 1250mg/L，CaCl2·2H2O 111mg/L，MnCl2·4H2O14.2mg/L，MgSO4·7H2O 1000mg/L，FeSO4·7H2O 49.8mg/L，CuSO4·5H2O 15.7mg/L，EDTA500mg/L，ZnSO4·7H2O 88.2mg/L，CoNO3·6H2O 6.1mg/L，pH 6～7(优选为pH 6.1)。
步骤S1中所述的光合自养和诱导培养的条件均为：光照强度60～80μmol/m2/s(优选为80μmol/m2/s)，温度25±1℃，摇床转速140～180rpm(优选为160rpm)。
步骤S1中所述的纯红光(RL)及混合光(红光/蓝光＝1:1)均由light-emittingdiode(LED)提供。
步骤S1中所述的碳源为由二氧化碳与空气的混合气体，其中二氧化碳的体积分数为1％～5％(优选为2％)。
步骤S1中所述的第一阶段的培养时间优选为9天。
步骤S1中所述的补充的氮源为NaNO3，使补料后的培养基中的NO3 -的浓度达到600～900mg/L(优选为700mg/L)，促进胶球藻进一步生长及诱导蛋白质累积。
步骤S1中所述的第二阶段的培养时间优选为3天。
步骤S2中所述的离心的条件优选为：10000转/min离心4min。
步骤S2中所述的冷冻干燥为在-35℃下进行真空冷冻干燥。
步骤S2中所述的微藻生物质中的蛋白质含量达到50～55％。
所述的利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法在固定二氧化碳(碳减排、环境修复)、和/或生产高蛋白微藻生物质饲料中的应用。
所述的高蛋白微藻生物质中包含了禽畜所需的必需氨基酸，其可以作为产蛋鸡(包括0～6周龄的产蛋鸡等)的饲料中蛋白来源。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明采用光诱导协同补氮诱导培养胶球藻，在光合固碳的同时生产高蛋白质生物质，以取代传统的氮饥饿策略诱导油脂累积，不仅可以解决氮饥饿胁迫环境抑制微藻生物量产能、降低微藻生物固碳经济可行性的瓶颈，还能将微藻产油转向蛋白质生产，开拓了胶球藻高值化产物的新应用场景；获得的高蛋白生物质具备优质饲料蛋白的营养特性，提高了胶球藻生物固碳的环境效益和经济效益。
(2)本发明中将产油微藻用于碳减排偶联蛋白质生产的新思路，将促进碳中和背景下微藻在食品、饲料等急需蛋白的行业绿色循环发展中的应用。
附图说明
图1是光质诱导协同补氮策略对产油胶球藻(C.subellipsoidea)生长的影响图；其中，A为不同光质的光谱图；B为胶球藻的生物量浓度；C为胶球藻的细胞密度。
图2是光质诱导协同补氮策略对产油胶球藻(C.subellipsoidea)固碳及蛋白质含量的影响图；其中，A为固碳速率；B为蛋白质含量及产率。
图3是不同光质诱导协同补氮策略下产油胶球藻(C.subellipsoidea)硝酸根浓度变化图；其中，A为一阶段培养的硝酸根浓度；B为两阶段培养的硝酸根浓度。
图4是产油胶球藻藻粉中蛋白质和必需氨基酸含量与常见蛋白饲料的对比结果图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。需指出的是，以下若有未特别详细说明之过程，均是本领域技术人员可参照现有技术实现或理解的。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，视为可以通过市售购买得到的常规产品。
以下实施例中，胶球藻(Coccomyxa subellipsoidea C-169)购自日本国立环境研究所(NIES)藻种保藏中心，藻株编号为NIES 2166；所使用的硝酸钠是常规市售可得，其纯度为85～90％。
本发明实施例中采取的检测方法可参照如下说明。
1.生物量浓度
将2mL胶球藻藻液置于预先称重的离心管(标记为W1)中，在10,000rpm转速下离心4min，沉淀藻泥用蒸馏水洗涤两次，将含有藻泥的离心管置于60℃烘箱中烘干至恒重，测定其质量(标记为W2)，并按如下公式计算生物量：
生物量浓度(g/L)＝(W2-W1)/0.002 (1)
W1为预先称重的离心管质量；
W2为离心管与烘干后藻泥两者质量之和。
2.固碳速率
取0时和培养结束时的藻液，在10,000rpm转速下离心4min，藻泥用蒸馏水洗涤两次，-35℃真空冷冻干燥获得藻粉。取冻干藻粉3～5mg用元素分析仪测定其中的C元素含量，结果用百分比表示。固碳速率(g/L/d)的计算方式见如下公式：
固碳速率＝Cc·P(MCO2/MC) (2)
P＝生物量产量/培养时间 (3)
Cc——胞内碳元素含量(％，w/w)；
P——生物量产率(g/L/d)；
MCO2，MC——分别表示CO2的相对分子质量和碳元素的相对原子/分子质量；
生物量产量为培养结束的生物量浓度减去第0天的生物量浓度。
3.细胞密度
取1mL新鲜胶球藻藻液，进行稀释后，利用流式细胞仪测定得到细胞密度。
4.蛋白质含量分析
取0时和培养结束时的藻液，在10,000rpm转速下离心4min，藻泥用蒸馏水洗涤两次，-35℃真空冷冻干燥获得藻粉。取冻干藻粉100mg，用凯氏定氮仪测定其中的蛋白质含量，结果用百分比表示。蛋白质产率计算方式见如下公式：
蛋白质产率(mg/L/d)＝生物量产量(g/L)×蛋白质含量(％DW)/培养时间(d)(4)
以下实施例中，图形均采用origin9.0软件进行绘制；SPSS 23.0软件进行显著性分析，图中标注的不同字母代表数据具有显著性差异(P<0.05)，相同字母代表数据无显著性差异(P>0.05)。
实施例1光质诱导协同补氮模式对光合自养培养胶球藻(C.subellipsoidea)生长的影响
1.1藻种活化及种子液制备
将胶球藻(Coccomyxa subellipsoidea C-169)转接到Basal固体培养基上培养12天，培养温度25℃，pH值6.1，光照强度60μmol/m2/s，并观察其生长的情况。从固体平板上挑取胶球藻藻苔于灭菌Basal液体培养基中，在250mL三角瓶中装液量为100mL，置于光照恒温摇床中培养7天用作种子液，设置pH值6.1、温度25±1℃，光强80μmol/m2/s、转速150rpm。其中，Basal培养基配方如表1所示。
表1 Basal培养基配方
组分 含量(mg/L) 组分 含量(mg/L) 组分 含量(mg/L)
NaNO<sub>3</sub> 1250 H<sub>3</sub>BO<sub>3</sub> 114.2 MoO<sub>3</sub> 7.1
KH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub> 1250 CaCl<sub>2</sub>·2H<sub>2</sub>O 111 MnCl<sub>2</sub>·4H<sub>2</sub>O 14.2
MgSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O 1000 FeSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O 49.8 CuSO<sub>4</sub>·5H<sub>2</sub>O 15.7
EDTA 500 ZnSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O 88.2 CoNO<sub>3</sub>·6H<sub>2</sub>O 6.1
注：若配制固体Basal培养基，需再加入2wt％琼脂；EDTA为乙二胺四乙酸。
1.2不同培养模式下胶球藻的生物量浓度和细胞密度的变化
1.2.1不同培养模式下胶球藻的自养培养
将活化好的胶球藻种子液在无菌条件下分别接种至100mL的Basal培养基中(NaNO3的含量为2500mg/L，其他成分含量同上述表1)，起始细胞密度为0.8～1.0×107/mL，设置不同比例的LED红蓝组合光作为光源，一阶段培养分别在纯白光(WL)、纯红光(RL)、纯蓝光(BL)下培养12天；两阶段培养的第一阶段在RL下培养9天，第二阶段在红光：蓝光-1:1(R:B-1:1)下培养3天。不同光质的光谱组成见图1A。其他培养条件为：碳源为2％CO2(v/v)，光照强度为80μmol/m2/s，温度25±1℃，摇床转速160rpm，总培养时间均为12天；其中，提供的碳源是在培养箱中通入纯度为99.9％的CO2以保持培养箱中CO2与空气的混合气体中CO2体积分数为2％。培养过程中每2天取一次样，离心取上清液用于测定生物量浓度和细胞密度。
1.2.2分析检测
培养过程中，每2天取2mL藻液，离心、洗涤并烘干后测定生物量；每天另取1mL藻液，适当稀释后用于细胞密度测定。
1.2.3分析结果
在不同培养策略下，胶球藻的生物量浓度和细胞密度见图1B和图1C。由图1B可知，一阶段培养时，生物量浓度大小排序为RL>BL>WL，RL条件下生物量浓度最高可达5.26g/L，显著高于其他组别(P<0.05)，说明红光更利于胶球藻生物量的累积。而一阶段培养时不同光质下细胞密度的大小排序为RL>WL>BL，RL条件下细胞密度最高达到1.83×108/mL，是WL组别的1.1倍，是BL组别的2.06倍，说明红光有利于细胞的快速分裂。此外，BL条件下细胞密度最低仅有0.89×108/mL，但其生物量浓度却高于WL；这说明有BL参与培养胶球藻时，其细胞的体积可能更大且细胞内颗粒复杂程度更高，使其在相对低的细胞密度下却达到了更高的生物量。因此，采用两阶段光质诱导培养时，第一阶段(0～9天)采用RL促进了细胞快速分裂达到高细胞密度，第二阶段(9～12天)加入BL进一步提高了细胞分裂潜力，使得两阶段培养时生物量浓度高达6.30g/L，细胞密度也达到2.61×108/mL，分别是对照组(WL)的2.0倍和1.8倍。
实施例2光质诱导协同补氮策略对光合自养培养胶球藻(C.subellipsoidea)固碳的影响
2.1藻种活化及种子液制备
按1.1所述方法活化胶球藻制备种子液。
2.2不同培养策略下胶球藻固碳能力分析
2.2.1不同培养策略下胶球藻的自养培养
按1.2.1所述方法自养培养胶球藻
2.2.2分析检测
取培养0时和培养结束时的藻液，经离心、洗涤、真空冷冻干燥获得藻粉，用于测量藻细胞内碳含量，计算固碳速率。
2.2.3结果分析
不同培养模式下胶球藻固碳速率见图2A。一阶段培养时，RL条件下的固碳速率达到0.74g/L/d，是WL组别的1.6倍，是BL组别的1.4倍。说明RL不仅有利于胶球藻生物量的累积且也能促进无机碳的固定。采用两阶段光质诱导策略培养时，其固碳速率进一步提高，达到0.90g/L/d。这说明可根据微藻细胞对不同光质的响应特点提供特定的光质，可极显著提高其固碳能力，使微藻生物固碳能更好的应用在碳中和领域。
实施例3光质诱导协同补氮模式对产油胶球藻(C.subellipsoidea)蛋白质累积的影响
3.1藻种活化及种子液制备
按1.1所述方法活化胶球藻制备种子液。
3.2胶球藻蛋白质生产分析
3.2.1不同培养模式下胶球藻的自养培养
按1.2.1所述方法自养培养胶球藻；其中，在两阶段培养时，培养至第二阶段(第9天)将光质由第一阶段的RL转为R:B(1:1)并向培养基中补加硝酸钠，使NO3 -的浓度达到700mg/L。
3.2.2分析检测
取培养0时和培养结束时的藻液，经离心、洗涤、真空冷冻干燥获得藻粉，用于测量藻细胞内蛋白质含量。另取培养0时和培养结束时的藻液，经离心后获得上清液，经过适当稀释后，采用HANNA多参数水质分析仪以及配套的HANNA硝酸根检测试剂包测定培养中的NO3 -浓度。
3.2.3结果分析
结果如图2B和图3所示：由图2B可知，BL条件下蛋白质含量最高，达到52.07％DW，分别高于RL和WL组别23.01％、17.75％，说明BL有利于胶球藻蛋白质的累积；但BL条件下的蛋白质产率(156.94mg/L/d)显著低于RL(178.00mg/L/d)，这表明因RL促进了胶球藻的生长使其达到了更高的蛋白质产率。由图3A可知，在NO3 -初始浓度相似时，一阶段培养各组别NO3 -终浓度具有显著差异，BL条件下NO3 -终浓度最高(512.00mg/L)，是RL条件下的2.09倍、WL条件下的1.56倍，这说明蓝光下富氮培养有利于提高产油胶球藻蛋白质的含量。因此，在两阶段培养时，培养至第9天向培养基中补加一定硝酸钠，使NO3 -的浓度达到700mg/L左右(图3B)，协同调光模式进一步诱导蛋白质合成。通过两阶段培养，第一阶段RL促进胶球藻生长，第二阶段R:B(1:1)协同氮补充诱导其蛋白质的合成，使其蛋白质含量和产率最终分别达到52.00％、265.83mg/L/d，分别是一阶段WL培养的1.2倍和2.3倍，实现了高蛋白质生物质生产。
实施例4高蛋白胶球藻生物质作为蛋白饲料的可行性分析
4.1胶球藻藻粉的分析测试
4.1.2胶球藻藻粉蛋白质和氨基酸组成与含量分析
对实施例3中两阶段光诱导协同氮补充培养获得的胶球藻藻粉中蛋白质及氨基酸含量和组成进行分析，以评价其作为蛋白饲料的可行性。其中，蛋白质含量的测试与3.2.2所述方法相同。氨基酸的测定方法如下：取100mg冷冻干燥的胶球藻藻粉，加5mL HCl溶液(6M)在110℃下水解24小时；将水解后的样品冷却至室温，漏斗过滤，并适当稀释；取2mL稀释后样品烘干脱酸，加入1mL HCl溶液(0.02M)复溶，然后采用全自动氨基酸分析仪测定氨基酸组成与含量。
4.1.3必需氨基酸指数计算(EAAI)
必需氨基酸指数是对饲料蛋白质中各种必需氨基酸含量与标准蛋白质中相应的各种氨基酸含量之比的加权平均值，是对受验蛋白中的必需氨基酸的综合评价。本发明中以大豆蛋白及产蛋鸡的必需氨基酸需求量作为参比标准来评价胶球藻蛋白的品质，其计算公式如下：
Figure BDA0003821867740000081
式中：aai是指受验蛋白质(胶球藻藻体蛋白)中某种必需氨基酸占必需氨基酸总量的百分数；AAi是指参比蛋白中该必需氨基酸占必需氨基酸总量的百分数；n为必需氨基酸数。
4.2高蛋白胶球藻藻粉作为蛋白饲料的可行性分析
4.2.1胶球藻藻粉中蛋白质和必需氨基酸含量与常见蛋白饲料的比较
如图4所示，本发明采用光诱导协同氮补充模式所获得的胶球藻藻粉中蛋白质含量为52％，高于我国常用饲料大豆饼(35.5％)，花生仁粕(44.7％)，苜蓿草粉(19.1％)和玉米饲料蛋白(19.3％)，其与肉粉(54％)相当[1]。同时胶球藻藻体蛋白质中必需氨基酸含量达17.80％，高于肉粉(16.46％)、大豆饼(12.64％)、花生仁粕(9.81％)、苜蓿草粉(5.81％)和玉米饲料蛋白(5.81％)[1]。说明胶球藻藻粉作为生物固碳后获得的高蛋白生物质，其蛋白质与必需氨基酸的营养价值高于常见蛋白饲料，能够满足动物生长所需。
进一步对胶球藻蛋白的必需氨基酸指数进行计算分析结果如表2所示，以常见的大豆蛋白作为参比蛋白时，EAAI为0.99；以0～6周龄的产蛋鸡氨基酸需求量[2]作为参照时，EAAI为1.00。根据中国饲料营养标准[3]，当必需氨基酸数在6～12时，EAAI>0.95为优质蛋白。
以上数据表明，通过光诱导协同氮补充模式培养胶球藻所获得的高蛋白胶球藻藻粉，具备用于动物蛋白饲料的可行性。由此可见，采用富氮培养产油胶球藻促进蛋白质累积取代传统氮饥饿培养促进油脂合成，克服了营养胁迫对细胞生长的限制，实现了在高效光合固碳的同时生产高蛋白生物质，提高了其生物固碳的经济可行性。故本发明利用产油微藻固定二氧化碳并联产高蛋白微藻作为饲料蛋白原料，为微藻资源化利用提供了新思路，可运用在绿色循环经济的碳中和技术领域。
表2胶球藻的EAAs组成与常见饲料蛋白源和产蛋鸡饲料对EAAs需求量的比较
Figure BDA0003821867740000082
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
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[3]中国饲料数据库情报中心中国饲料成分及营养价值表中国饲料，2000,(23):23～29.

Claims (10)

1.一种利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：两阶段光诱导协同补氮培养：将活化后的产油微藻种子液接种到含氮培养基中，第一阶段在纯红光条件下以二氧化碳为碳源光合自养8～10天；第二阶段在红光和蓝光的比例为1:1的混合光下，补充氮源后继续诱导培养1～3天，以促进产油微藻固定二氧化碳联产高蛋白生物质；
S2：收集微藻生物质：待两阶段培养结束后，离心收集藻泥，洗涤后冷冻干燥得到藻粉，即为以蛋白质为主要成分的微藻生物质。
2.根据权利要求1所述的利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法，其特征在于：
步骤S1中所述的产油微藻为胶球藻(Coccomyxa subellipsoidea C-169)。
3.根据权利要求1所述的利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法，其特征在于：
步骤S1中所述的含氮培养基为含氮Basal培养基，其氮源为NaNO3，初始浓度为1250～6250mg/L；
步骤S1中所述的补充的氮源为NaNO3，使补料后的培养基中的NO3 -浓度达到600～900mg/L。
4.根据权利要求3所述的利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法，其特征在于：
步骤S1中所述的含氮培养基中NaNO3的初始浓度为2500mg/L；
步骤S1中所述的补充的氮源为NaNO3，使补料后的培养基中的NO3 -浓度达到700mg/L。
5.根据权利要求3所述的利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法，其特征在于：
所述的含氮Basal培养基的配方如下：NaNO3 1250～6250mg/L，H3BO3 114.2mg/L，MoO37.1mg/L，KH2PO4 1250mg/L，CaCl2·2H2O 111mg/L，MnCl2·4H2O 14.2mg/L，MgSO4·7H2O1000mg/L，FeSO4·7H2O 49.8mg/L，CuSO4·5H2O 15.7mg/L，EDTA 500mg/L，ZnSO4·7H2O88.2mg/L，CoNO3·6H2O 6.1mg/L，pH 6～7。
6.根据权利要求1所述的利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法，其特征在于：
步骤S1中所述的碳源为由二氧化碳与空气的混合气体，其中二氧化碳的体积分数为1％～5％。
7.根据权利要求6所述的利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法，其特征在于：
步骤S1中所述的碳源为由二氧化碳与空气的混合气体，其中二氧化碳的体积分数为2％。
8.根据权利要求1所述的利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法，其特征在于：
步骤S1中所述的光合自养和诱导培养的条件均为：光照强度60～80μmol/m2/s，温度25±1℃，摇床转速140～180rpm。
9.根据权利要求1所述的利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法，其特征在于：
步骤S1中所述的第一阶段的培养时间为9天；
步骤S1中所述的第二阶段的培养时间为3天；
步骤S2中所述的冷冻干燥为在-35℃下进行真空冷冻干燥。
10.权利要求1～9任一项所述的利用产油微藻高效光合固碳联产高蛋白生物质的方法在固定二氧化碳和/或生产高蛋白微藻生物质饲料中的应用。
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