CN115282163B - 一种搭载顺铂的纳米粒及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种搭载顺铂的纳米粒，纳米粒由顺铂和LA‑IR820结合形成，本发明还提供了上述纳米粒的制备方法和临床应用，与现有技术相比，通过本发明前期制备的纳米粒子CIS/LA‑IR820具备合适的EPR效应粒径与电势，并且具有良好的体外升温和细胞摄取效果，且化疗、光疗与化学动力学联合治疗具有良好的肿瘤细胞杀伤效果，体内实验证明了纳米粒子可以良好在肿瘤部位富集，并通过诱导肿瘤细胞凋亡及铁死亡进行肿瘤杀伤，抑制肿瘤生长。

Description

一种搭载顺铂的纳米粒及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及纳米药物技术领域，具体而言，涉及一种搭载顺铂的纳米粒及其制备方法和应用。
背景技术
最新数据显示，结直肠癌发病率已超过胃癌成为全球第三大癌症，病死率更是跃居世界第二位，严重威胁人类健康。手术配合化学治疗是结直肠癌主要的治疗方式，除少数早期患者可以单纯依靠手术达到根治目的外，进展期及晚期患者均需接受不同程度的放、化疗等全身治疗。近10年来结直肠癌化疗的研究有了很大进展，但由于化学药物(如铂类、5-FU、伊立替康等)较高的血药浓度要求以及因此带来的副作用和耐药等问题，治疗效果并不令人满意，晚期结直肠癌患者5年生存率仍不超过20％。
目前，癌症治疗的新兴疗法包括免疫疗法、基因疗法、光化学疗法、化学动力疗法、声动力治疗、饥饿治疗等，已被证明可以改善肿瘤治疗效果。其中，光疗(Phototherapy)是一种新型的抗肿瘤方式，是指通过光源，尤其是通过近红外光源照射病灶区，刺激光疗试剂(如新吲哚菁绿IR-820)产生局部高热和活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)杀死肿瘤细胞，以达到治疗的目的。吲哚菁绿分子是一个大的π共轭体系，这种基本结构特征决定了染料的主要吸收峰在600-850nm范围，由于其在近红外区存在吸收，激光或近红外光照射后，电子的能量增加，发生电子跃迁，由基态跃迁至单线激发态，当电子由单线激发态回落至基态时，能量就会以光和热能的形式释放出来，使其具有发射荧光和光热转换的能力，用于荧光成像及肿瘤的光热/光动治疗。新吲哚菁绿(IR820)是最常用的光热制剂之一，因其具有良好的体内相容性和光热转换效率，受到了广泛的关注，但体内的半衰期较短、脱靶效应明显且聚集依赖浓度，大大限制了其在体内的应用。
化学动力疗法(Chemodynamic therapy,CDT)，是一类基于肿瘤内源性化学产物转化反应的新型肿瘤治疗技术，利用肿瘤微环境酸性、过量产生H2O2、低过氧化氢酶(CAT)活性和缺氧等特性激活芬顿反应(类芬顿反应)，产生强氧化性的羟基自由基，用于肿瘤特异性治疗。但无论光化学治疗或化学动力治疗，单独应用的疗效面对恶性肿瘤强大的侵袭生长能力而言还是不足够的。据报道，光热治疗所造成的肿瘤区域温度升高可以加速芬顿/类芬顿反应，从而增强协同抗癌功效；同时局部的热暴露也同样可以增加ROS的产生，引起肿瘤细胞的凋亡。铂类化合物，即顺铂([Pt(NH3)2Cl2])或卡铂([Pt(C6H6O4)(NH3)2])是结直肠癌等实体肿瘤化疗最重要的药物之一，其化疗作用机制是通过交联并损伤肿瘤细胞DNA，从而诱导细胞凋亡。有研究显示，顺铂可以直接甚至优先影响线粒体DNA，诱导ROS产生，从而决定肿瘤细胞的命运，除此之外，铂类化合物还可以作为一种人工酶，通过级联反应为CDT产生H2O2，与细胞内Fe2+发生芬顿反应，生成强氧化性的羟基自由基，同时，铂元素作为一种过渡金属，在肿瘤高H2O2环境中同样能够发生类芬顿反应，进一步提升细胞内ROS水平，实现化疗与化学动力治疗的联动，过量的ROS同时氧化细胞内不饱和脂肪酸增加过氧化脂质的累积，即触发铁死亡，显著提升肿瘤杀伤效果。因此，顺铂是临床常用的广谱抗癌药，但是肿瘤细胞对顺铂的化疗敏感性低，且其非特异的组织分布、无差别的细胞毒性会带来严重的毒副作用，因此在临床应用受到限制。
鉴于此，在现有基础上开发新型用药策略和治疗方法，是当前肿瘤治疗的重要研究方向之一。
发明内容
本发明的目的是提供一种搭载顺铂的纳米粒，以酯键修饰的光热制剂IR820为前体的纳米粒克服了单体在循环内稳定性差和脱靶明显的缺点，同时利用纳米技术对制剂进行精确表征，借助纳米制剂靶向肿瘤富集及肿瘤微环境响应释放的特性，解决化疗药物顺铂生物溶解性差及副反应强烈等问题。
为解决上述问题，本发明提供一种搭载顺铂的纳米粒，所述纳米粒由顺铂和LA-IR820结合形成，所述LA-IR820的结构式为：
本发明的目的之二在于提供一种搭载顺铂的纳米粒的制备方法：将LA-IR820溶于甲醇中得A溶液，将顺铂溶于二甲基亚砜中得B溶液，再将A溶液和B溶液超声混合后搅拌得C溶液，将C溶液逐滴滴入甲醇中，避光反应后蒸干有机溶剂得搭载顺铂的纳米粒。
作为优选，所述LA-IR820与所述顺铂的摩尔比为(1-2):1。
作为优选，所述LA-IR820的制备方法包括以下步骤：
S1、合成IR820-OH：将IR820和3-氨基-1-丙醇超声溶解于N,N-二甲基甲酰胺中得D溶液，在磁力搅拌条件下将三乙胺逐滴加入到D溶液中反应4-5h，反应结束后经后处理得IR820-OH；
S2、配制原料溶液：将亚油酸溶解于乙醇中得E溶液，将N-羟基琥珀酰亚胺溶解于甲醇中得F溶液，将4-二甲氨基吡啶溶解于甲醇中得G溶液，将碳二亚胺盐酸盐溶解于甲醇中得H溶液，将步骤S2得到的IR820-OH超声溶解于甲醇中得I溶液；
S3、合成LA-IR820：依次将E溶液、F溶液、G溶液和H溶液滴加进反应容器中反应30-60min，然后将I溶液加入到反应后的容器中反应24-48h，反应结束后经后处理得LA-IR820。
本发明制备LA-IR820的合成过程如下：
本发明将光热剂新吲哚菁绿(IR820)经过酯键修饰，再与传统的抗肿瘤药物顺铂组装成纳米制剂，将化学治疗、光学治疗与化学动力治疗结合起来，协同增效，以最大程度提升肿瘤杀伤效果。
本发明通过两步反应分别获得羟基化的IR820(IR820-OH)，再与不饱和脂肪酸(亚油酸)通过酯化反应制得了亚油酸化的IR820(LA-IR820)，使其具备PH响应活性的酯键，在延长IR820体内代谢时长的同时，通过添加外源性的脂质，对铁死亡脂质过氧化过程起正向促进作用，再通过超声分散法将顺铂与制备的LA-IR820自组装形成最终的纳米粒子(CIS/LA-IR820)。在循环过程中的高稳定性源于其强烈的疏水相互作用力和金属离子与有机体之间的配位作用，利用经典的纳米粒子在实体瘤组织的高通透性和滞留效应(EPR效应)，实现纳米药物制剂在肿瘤组织中的高度选择性分布，并在细胞内化后做到pH响应释放，达到靶向肿瘤微环境精准递药，同时启动多种肿瘤杀伤效应的目的。
作为优选，所述步骤S1中，IR820和3-氨基-1-丙醇的摩尔比为(1-2):1。
作为优选，所述步骤S1和步骤S3中，后处理均包括以下步骤：先用旋转蒸发仪去除溶剂，经硅胶色谱柱分离提纯后，用体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液进行梯度洗脱。
如权利要求4所述的搭载顺铂的纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，IR820-OH、亚油酸、N-羟基琥珀酰亚胺、4-二甲氨基吡啶和碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为(1-1.5):2:2:2:2。
作为优选，所述步骤S1和步骤S3中，反应均在锡箔纸避光、氮气保护条件下进行。
本发明的目的之三在于提供搭载顺铂的纳米粒在制备抗结直肠肿瘤药物中的应用。
与现有技术相比，通过本发明前期制备的纳米粒子CIS/LA-IR820具备合适的EPR效应粒径与电势，并且具有良好的体外升温和细胞摄取效果，且化疗、光疗与化学动力学联合治疗具有良好的肿瘤细胞杀伤效果，体内实验证明了纳米粒子可以良好在肿瘤部位富集，并通过诱导肿瘤细胞凋亡及铁死亡进行肿瘤杀伤，抑制肿瘤生长。
附图说明
图1为本发明实施例3制得的IR820、IR820-OH及LA-IR820的核磁共振氢谱图；
图2为本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820纳米粒粒径统计图；
图3为本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820纳米粒的zeta电势图；
图4为本发明实施例3制得的LA-IR820的透射电镜图；
图5为本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820纳米制剂水溶液的透射电镜图；
图6为本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820纳米粒在RKO中体外摄取荧光图；
图7为本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820纳米粒在HCT116中体外摄取荧光图；
图8为光照条件下HCT116经不同浓度顺铂、IR820、LA-IR820及本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820处理后的细胞活力柱状图；
图9为非光照条件下HCT116经不同浓度顺铂、IR820、LA-IR820及本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820处理后的细胞活力柱状图；
图10为光照条件下生理盐水、顺铂、IR820、LA-IR820及本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820处理HCT116后诱导凋亡产生的柱状统计图；
图11为生理盐水、顺铂、IR820、LA-IR820及本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820处理结直肠癌细胞系诱导ROS产生及积累DCFH-DA探针荧光强度图；
图12为生理盐水、顺铂、IR820、LA-IR820及本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820处理结直肠癌细胞系诱导脂质过氧化C11探针荧光强度图；
图13为生理盐水、顺铂、IR820、LA-IR820及本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820处理结直肠癌细胞系诱导脂质过氧化C11探针流式分析曲线图；
图14为尾静脉注射IR820、LA-IR820以及本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820不同时间后药物体内分布图；
图15为尾静脉注射IR820、LA-IR820以及本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820注射24小时后，药物在小鼠各脏器分布图；
图16为本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820的释放试验结果图；
图17为尾部静脉注射NS、IR820、L820以及本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820后，小鼠体内升温图；
图18为尾部静脉注射NS、IR820、L820以及本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820后的抑瘤实验结果示意图；
图19为尾部静脉注射NS、IR820、L820以及本发明实施例3制得的CIS/LA-IR820后的各重要脏器及肿瘤HE染色；
图20为本发明制得的CIA/LA-IR820的作用机制图。
具体实施方式
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施例做详细的说明。
在本发明中，制备LA-IR820的合成过程如下：
实施例1
本发明提供一种搭载顺铂的纳米粒，纳米粒由顺铂和LA-IR820结合形成，其中LA-IR820(L820)的结构式为：
在此基础上，本发明实施例还提供上述搭载顺铂的纳米粒的制备方法，将LA-IR820(L820)溶于甲醇中得A溶液，将顺铂溶于二甲基亚砜中得B溶液，再将A溶液和B溶液超声混合后搅拌得C溶液，将C溶液逐滴滴入甲醇中，避光反应后蒸干有机溶剂得搭载顺铂的纳米粒CIS/LA-IR820(C820)，其中LA-IR820(L820)与顺铂的摩尔比为1:1。
在本实施例中，LA-IR820的制备方法包括以下步骤：
S1、合成IR820-OH：在锡箔纸避光、氮气保护条件下，将摩尔比为1:1的IR820和3-氨基-1-丙醇超声溶解于N,N-二甲基甲酰胺中得D溶液，在磁力搅拌条件下将三乙胺逐滴加入到D溶液中反应5h，反应结束后，先用旋转蒸发仪去除溶剂，经硅胶色谱柱分离提纯后，用体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液进行梯度洗脱得IR820-OH；
S2、配制原料溶液：将亚油酸溶解于乙醇中得E溶液，将N-羟基琥珀酰亚胺溶解于甲醇中得F溶液，将4-二甲氨基吡啶溶解于甲醇中得G溶液，将碳二亚胺盐酸盐溶解于甲醇中得H溶液，将步骤S2得到的IR820-OH超声溶解于甲醇中得I溶液，其中IR820-OH、亚油酸、N-羟基琥珀酰亚胺、4-二甲氨基吡啶和碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:2:2:2:2；
S3、合成LA-IR820(L820):在锡箔纸避光、氮气保护条件下，依次将E溶液、F溶液、G溶液和H溶液滴加进反应容器中反应30min，然后将I溶液加入到反应后的容器中反应24h，反应结束后，先用旋转蒸发仪去除溶剂，经硅胶色谱柱分离提纯后，用体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液进行梯度洗脱得LA-IR820(L820)。
实施例2
本发明提供一种搭载顺铂的纳米粒，纳米粒由顺铂和LA-IR820结合形成，其中LA-IR820(L820)的结构式为：
在此基础上，本发明实施例还提供上述搭载顺铂的纳米粒的制备方法，将LA-IR820(L820)溶于甲醇中得A溶液，将顺铂溶于二甲基亚砜中得B溶液，再将A溶液和B溶液超声混合后搅拌得C溶液，将C溶液逐滴滴入甲醇中，避光反应后蒸干有机溶剂得搭载顺铂的纳米粒CIS/LA-IR820(C820)，其中LA-IR820(L820)与顺铂的摩尔比为1.5:1。
在本实施例中，LA-IR820(L820)的制备方法包括以下步骤：
S1、合成IR820-OH：在锡箔纸避光、氮气保护条件下，将摩尔比为1.5:1的IR820和3-氨基-1-丙醇超声溶解于N,N-二甲基甲酰胺中得D溶液，在磁力搅拌条件下将三乙胺逐滴加入到D溶液中反应4.5h，反应结束后，先用旋转蒸发仪去除溶剂，经硅胶色谱柱分离提纯后，用体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液进行梯度洗脱得IR820-OH；
S2、配制原料溶液：将亚油酸溶解于乙醇中得E溶液，将N-羟基琥珀酰亚胺溶解于甲醇中得F溶液，将4-二甲氨基吡啶溶解于甲醇中得G溶液，将碳二亚胺盐酸盐溶解于甲醇中得H溶液，将步骤S2得到的IR820-OH超声溶解于甲醇中得I溶液，其中IR820-OH、亚油酸、N-羟基琥珀酰亚胺、4-二甲氨基吡啶和碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1.3:2:2:2:2；
S3、合成LA-IR820:在锡箔纸避光、氮气保护条件下，依次将E溶液、F溶液、G溶液和H溶液滴加进反应容器中反应50min，然后将I溶液加入到反应后的容器中反应36h，反应结束后，先用旋转蒸发仪去除溶剂，经硅胶色谱柱分离提纯后，用体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液进行梯度洗脱得LA-IR820(L820)。
实施例3
本发明提供一种搭载顺铂的纳米粒，纳米粒由顺铂和LA-IR820结合形成，其中LA-IR820(L820)的结构式为：
在此基础上，本发明实施例还提供上述搭载顺铂的纳米粒的制备方法，将LA-IR820(L820)溶于甲醇中得A溶液，将顺铂溶于二甲基亚砜中得B溶液，再将A溶液和B溶液超声混合后搅拌得C溶液，将C溶液逐滴滴入甲醇中，避光反应后蒸干有机溶剂得搭载顺铂的纳米粒CIS/LA-IR820(C820)，其中LA-IR820(L820)与顺铂的摩尔比为2:1。
在本实施例中，LA-IR820(L820)的制备方法包括以下步骤：
S1、合成IR820-OH：在锡箔纸避光、氮气保护条件下，将摩尔比为2:1的IR820和3-氨基-1-丙醇超声溶解于N,N-二甲基甲酰胺中得D溶液，在磁力搅拌条件下将三乙胺逐滴加入到D溶液中反应5h，反应结束后，先用旋转蒸发仪去除溶剂，经硅胶色谱柱分离提纯后，用体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液进行梯度洗脱得IR820-OH；
S2、配制原料溶液：将亚油酸溶解于乙醇中得E溶液，将N-羟基琥珀酰亚胺溶解于甲醇中得F溶液，将4-二甲氨基吡啶溶解于甲醇中得G溶液，将碳二亚胺盐酸盐溶解于甲醇中得H溶液，将步骤S2得到的IR820-OH超声溶解于甲醇中得I溶液，其中IR820-OH、亚油酸、N-羟基琥珀酰亚胺、4-二甲氨基吡啶和碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为1:1:1:1:1；
S3、合成LA-IR820:在锡箔纸避光、氮气保护条件下，依次将E溶液、F溶液、G溶液和H溶液滴加进反应容器中反应60min，然后将I溶液加入到反应后的容器中反应48h，反应结束后，先用旋转蒸发仪去除溶剂，经硅胶色谱柱分离提纯后，用体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液进行梯度洗脱得LA-IR820(L820)。
本实施例还提供了纳米制剂水溶液的制备方法：将纳米粒CIS/LA-IR820(C820)加入到超纯水中超声溶解，得纳米制剂水溶液。
本实施例还提供了两种纳米制剂的制备方法，两种纳米制剂分别用于细胞实验和动物实验中，其中细胞实验用纳米制剂采用双无培养基与纳米粒配制得到，动物实验用纳米制剂采用生理盐水与纳米粒配制得到。
1、纳米粒制备过程的基本性质表征：
发明人对实施例3的制备过程进行了基本性质的表征检测，图1中分别展示了IR820、IR820-OH及LA-IR820(L820)的核磁共振氢谱，在此基础上，发明人对实施例3制得的纳米粒进行检测，经测定该纳米粒子平均粒径为130nm(PDI＝0.17)，符合纳米制剂EPR效应范围(图2)；电势为-28mV，同样符合纳米制剂在体内静脉注射的要求，免于巨噬细胞的快速识别吞噬(图3)；各合成中产物相比原料IR820紫外最大吸收峰发生迁移，表征合成顺利(图4)；纳米制剂水溶液中呈深色圆球形，均匀分散(图5)。
2、纳米粒体外摄取实验：
发明人验证纳米粒子CIS/LA-IR820(C820)相比于生理盐水、顺铂、IR820以及LA-IR820(L820)在人类结直肠癌细胞系HCT116和RKO中药物摄取情况，结果表明纳米粒子组较各对照组效果更加明显，并且确定了最佳摄取时间4h为药物作用时间，如图6和图7所示。
3、纳米制剂CIS/LA-IR820(C820)的细胞杀伤作用及引起结直肠癌细胞凋亡实验：
发明人用MTT法验证光照与非光照两种条件下生理盐水、顺铂、IR820、LA-IR820(L820)及CIS/LA-IR820(C820)分别对结直肠癌细胞系HCT116的细胞杀伤作用，如图8和图9所示，图8中，从左到右的柱状依次表示：CIS、LA-IR820(L820)、IR820和CIS/LA-IR820(C820)，图9中，从左到右的柱状依次表示：IR820+Laser、LA-IR820+Laser、CIS/LA-IR820+Laser。发现纳米粒子CIS/LA-IR820(C820)组对结直肠癌细胞具有显著杀伤作用，且在红外光照后杀伤效果显著增强。Annexin V和PI双染后采用流式检测生理盐水、顺铂、IR820、LA-IR820(L820)及CIS/LA-IR820(C820)诱导结直肠癌细胞凋亡情况，如图10所示，从左到右的柱状依次表示：NC、CIS、IR820、LA-IR820(L820)、CIS/LA-IR820(C820)，结果显示纳米制剂组细胞凋亡率显著高于其他参照组。
4、纳米制剂CIS/LA-IR820(C820)诱导细胞氧化应激及脂质过氧化实验：
发明人用DCFH-DA探针对细胞内产生的ROS进行了标记，结果如图11和图12所示，发现纳米粒子组较各对照组效果更加明显，CIS/LA-IR820(C820)能够明显促进结直肠癌肿瘤细胞内ROS的产生和积累。如图13所示，进一步采用脂质过氧化C11荧光探针检测细胞内脂质过氧化最终产物丙二醛的含量发现，CIS/LA-IR820(C820)处理肿瘤细胞后，过氧化脂质含量明显增多，纳米制剂具有显著的诱导铁死亡的作用。
5、纳米制剂在体内靶向肿瘤区域聚集实验：
发明人通过小鼠活体成像探究了经尾静脉给药1、2、4、6、8、24h后IR820、LA-IR820(L820)以及CIS/LA-IR820(C820)在荷瘤小鼠体内分布情况，如图14所示，结果显示给药后，CIS/LA-IR820(C820)在肿瘤区域荧光信号强于IR820和LA-IR820(L820)，且在其他脏器内信号较低，表明纳米粒子CIS/LA-IR820(C820)可经被动靶向效应在肿瘤部位达到最大蓄积。24小时后解剖小鼠各脏器，如图15所示，荧光分布同样提示纳米粒子在肿瘤部位具有最大蓄积。
6、释放实验：
将纳米粒子CIS/LA-IR820(C820)分别置于pH＝5及pH＝7.4的PBS溶液中，置于37℃恒温摇床，分别吸取不同时间点释放液测量吸光度值，并绘制释放曲线，如图16所示，结果显示：在模拟肿瘤内部的酸性环境中，纳米粒子的释放效率更高。
7、体内升温实验：
构建裸鼠皮下结直肠癌模型，经尾静脉分别注射NS、IR820、LA-IR820(L820)及CIS/LA-IR820(C820)，2mg/kg，4小时后使用660nm近红外激光发射器，照射肿瘤部位，测量5分钟内，肿瘤部位温度变化并绘制曲线，结果如图17所示。
8、抑瘤实验和安全性评价实验：
采用人源结直肠癌HCT116构建裸鼠皮下瘤，测量肿瘤大小，待肿瘤体积达到1cm3时，经尾静脉分别注入NS、CIS、LA-IR820(L820)、CIS/LA-IR820(C820)，2mg/kg，给药后4小时，采用660nm近红外激光发射器照射皮下肿瘤，每两天1次，连续给药7次，测量小鼠体重、肿瘤体积及抑瘤率。结果显示纳米粒子具有良好的肿瘤抑制效果，结果如图18。肿瘤组织及个脏器HE染色并分别测量小鼠血液生化指标，评价药物副损伤，结果如图19所示。
纳米制剂CIS/LA-IR820(C820)进入小鼠后的作用机制如图20所示：纳米制剂CIS/LA-IR820(C820)经小鼠尾静脉注射入血，通过EPR效应富集到肿瘤部位，pH响应拆解释放出IR820、亚油酸及顺铂在近红外光照射条件下，启动光疗、化疗以及化学动力治疗多重模式诱导肿瘤细胞凋亡及铁死亡，抑制肿瘤生长。
从上述实验结果可以明确得出，发明人通过构建了纳米粒子CIS/LA-IR820(C820)，并对其结构成分及基本性质进行了表征，显示其具备基本的纳米粒子结构和性质，具备体内应用及临床推广的可能，除此之外，发明人前期还初步验证了纳米粒子通过光、化疗以及化学动力治疗多种途径对抗肿瘤的设想，取得了良好的成效，通过对铁死亡相关脂质过氧化等的检测发现，初步证实CIS/LA-IR820(C820)可通过提高细胞内ROS水平和过氧化脂质含量导致铁死亡发生。
虽然本公开披露如上，但本公开的保护范围并非仅限于此。本领域技术人员，在不脱离本公开的精神和范围的前提下，可进行各种变更与修改，这些变更与修改均将落入本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种搭载顺铂的纳米粒，其特征在于，所述纳米粒由顺铂和LA-IR820结合形成，所述LA-IR820的结构式为：
2.一种如权利要求1所述的搭载顺铂的纳米粒的制备方法，其特征在于：将LA-IR820溶于甲醇中得A溶液，将顺铂溶于二甲基亚砜中得B溶液，再将A溶液和B溶液超声混合后搅拌得C溶液，将C溶液逐滴滴入甲醇中，避光反应后蒸干有机溶剂得搭载顺铂的纳米粒。
3.如权利要求2所述的搭载顺铂的纳米粒的制备方法，其特征在于：所述LA-IR820与所述顺铂的摩尔比为(1-2):1。
4.如权利要求2所述的搭载顺铂的纳米粒的制备方法，其特征在于，所述LA-IR820的制备方法包括以下步骤：
S1、合成IR820-OH：将IR820和3-氨基-1-丙醇超声溶解于N,N-二甲基甲酰胺中得D溶液，在磁力搅拌条件下将三乙胺逐滴加入到D溶液中反应4-5h，反应结束后经后处理得IR820-OH；
S2、配制原料溶液：将亚油酸溶解于乙醇中得E溶液，将N-羟基琥珀酰亚胺溶解于甲醇中得F溶液，将4-二甲氨基吡啶溶解于甲醇中得G溶液，将碳二亚胺盐酸盐溶解于甲醇中得H溶液，将步骤S2得到的IR820-OH超声溶解于甲醇中得I溶液；
S3、合成LA-IR820：依次将E溶液、F溶液、G溶液和H溶液滴加进反应容器中反应30-60min，然后将I溶液加入到反应后的容器中反应24-48h，反应结束后经后处理得LA-IR820。
5.如权利要求4所述的搭载顺铂的纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，IR820和3-氨基-1-丙醇的摩尔比为(1-2):1。
6.如权利要求4所述的搭载顺铂的纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤S1中，后处理包括以下步骤：先用旋转蒸发仪去除溶剂，经硅胶色谱柱分离提纯后，用体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液进行梯度洗脱。
7.如权利要求4所述的搭载顺铂的纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤S3中，后处理包括以下步骤：先用旋转蒸发仪去除溶剂，经硅胶色谱柱分离提纯后，用体积比为10:1的二氯甲烷和甲醇混合液进行梯度洗脱。
8.如权利要求4所述的搭载顺铂的纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中，IR820-OH、亚油酸、N-羟基琥珀酰亚胺、4-二甲氨基吡啶和碳二亚胺盐酸盐的摩尔比为(1-1.5):2:2:2:2。
9.如权利要求4所述的搭载顺铂的纳米粒的制备方法，其特征在于，所述步骤S1和步骤S3中，反应均在锡箔纸避光、氮气保护条件下进行。
10.根据权利要求1所述的搭载顺铂的纳米粒在制备抗结直肠肿瘤药物中的应用。
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