CN115232130B - 一种apn和akt双靶点抑制剂及其制备方法和应用 - Google Patents
一种apn和akt双靶点抑制剂及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115232130B CN115232130B CN202110437816.0A CN202110437816A CN115232130B CN 115232130 B CN115232130 B CN 115232130B CN 202110437816 A CN202110437816 A CN 202110437816A CN 115232130 B CN115232130 B CN 115232130B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- methyl ester
- room temperature
- compound
- ester hydrochloride
- apn
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 title claims abstract description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 46
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 73
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 9
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 5
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 66
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 60
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 46
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 102100033810 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Human genes 0.000 claims description 33
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 claims description 31
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- -1 hydrogen chloride saturated ethyl acetate Chemical class 0.000 claims description 26
- 108091008611 Protein Kinase B Proteins 0.000 claims description 23
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- SWVMLNPDTIFDDY-SBSPUUFOSA-N methyl (2r)-2-amino-3-phenylpropanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 SWVMLNPDTIFDDY-SBSPUUFOSA-N 0.000 claims description 18
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 claims description 12
- DODCBMODXGJOKD-FYZOBXCZSA-N methyl (2r)-2-amino-4-methylpentanoate;hydrochloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@H](N)CC(C)C DODCBMODXGJOKD-FYZOBXCZSA-N 0.000 claims description 12
- DTHMTBUWTGVEFG-QRPNPIFTSA-N [(1s)-2-methoxy-2-oxo-1-phenylethyl]azanium;chloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 DTHMTBUWTGVEFG-QRPNPIFTSA-N 0.000 claims description 11
- LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide Substances CCN=C=NCCCN(C)C LMDZBCPBFSXMTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- BPTCCCTWWAUJRK-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidine Chemical compound ClC1=NC=NC2=C1C=CN2 BPTCCCTWWAUJRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 8
- PHRZTXWNFAEVIA-UHFFFAOYSA-N hydroxylamine;potassium Chemical compound [K].ON PHRZTXWNFAEVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 8
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 8
- UCPYLLCMEDAXFR-UHFFFAOYSA-N triphosgene Chemical compound ClC(Cl)(Cl)OC(=O)OC(Cl)(Cl)Cl UCPYLLCMEDAXFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 claims description 4
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- IYUKFAFDFHZKPI-AENDTGMFSA-N [(2r)-1-methoxy-1-oxopropan-2-yl]azanium;chloride Chemical compound Cl.COC(=O)[C@@H](C)N IYUKFAFDFHZKPI-AENDTGMFSA-N 0.000 claims description 3
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 201000005787 hematologic cancer Diseases 0.000 claims description 3
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 claims description 3
- XNFNGGQRDXFYMM-UHFFFAOYSA-N hydron;methyl 2-amino-3-(1h-indol-3-yl)propanoate;chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC=C2C(CC([NH3+])C(=O)OC)=CNC2=C1 XNFNGGQRDXFYMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 claims description 3
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 2
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010018852 Haematoma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 2
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 2
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 2
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 claims description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 206010028537 myelofibrosis Diseases 0.000 claims description 2
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 claims description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 claims description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims description 2
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 claims 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 46
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 45
- QZDDFQLIQRYMBV-UHFFFAOYSA-N 2-[3-nitro-2-(2-nitrophenyl)-4-oxochromen-8-yl]acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(C(C=2[N+]([O-])=O)=O)=C1OC=2C1=CC=CC=C1[N+]([O-])=O QZDDFQLIQRYMBV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 25
- 108010049990 CD13 Antigens Proteins 0.000 description 25
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 22
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 14
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 14
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 10
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 10
- VGGGPCQERPFHOB-MCIONIFRSA-N Bestatin Chemical compound CC(C)C[C@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 VGGGPCQERPFHOB-MCIONIFRSA-N 0.000 description 9
- VGGGPCQERPFHOB-UHFFFAOYSA-N Bestatin Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 VGGGPCQERPFHOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 101000779418 Homo sapiens RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 9
- 229950009811 ubenimex Drugs 0.000 description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 8
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 8
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000003197 protein kinase B inhibitor Substances 0.000 description 7
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 7
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- VUDZSIYXZUYWSC-DBRKOABJSA-N (4r)-1-[(2r,4r,5r)-3,3-difluoro-4-hydroxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-4-hydroxy-1,3-diazinan-2-one Chemical compound FC1(F)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)N[C@H](O)CC1 VUDZSIYXZUYWSC-DBRKOABJSA-N 0.000 description 6
- JDUBGYFRJFOXQC-KRWDZBQOSA-N 4-amino-n-[(1s)-1-(4-chlorophenyl)-3-hydroxypropyl]-1-(7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)piperidine-4-carboxamide Chemical compound C1([C@H](CCO)NC(=O)C2(CCN(CC2)C=2C=3C=CNC=3N=CN=2)N)=CC=C(Cl)C=C1 JDUBGYFRJFOXQC-KRWDZBQOSA-N 0.000 description 6
- TZKBVRDEOITLRB-UHFFFAOYSA-N 4-methyl-n-[4-[(4-methylpiperazin-1-yl)methyl]-3-(trifluoromethyl)phenyl]-3-[2-(1h-pyrazolo[3,4-b]pyridin-5-yl)ethynyl]benzamide Chemical compound C1CN(C)CCN1CC(C(=C1)C(F)(F)F)=CC=C1NC(=O)C1=CC=C(C)C(C#CC=2C=C3C=NNC3=NC=2)=C1 TZKBVRDEOITLRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- JOTMMIYKEOOTNZ-SNVBAGLBSA-N methyl (2r)-2-isocyanato-3-phenylpropanoate Chemical compound COC(=O)[C@H](N=C=O)CC1=CC=CC=C1 JOTMMIYKEOOTNZ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 6
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 5
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 5
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 5
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MWDVCHRYCKXEBY-LBPRGKRZSA-N 3-chloro-n-[2-oxo-2-[[(1s)-1-phenylethyl]amino]ethyl]benzamide Chemical compound N([C@@H](C)C=1C=CC=CC=1)C(=O)CNC(=O)C1=CC=CC(Cl)=C1 MWDVCHRYCKXEBY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 4
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IXBZOABELVHJMJ-UHFFFAOYSA-N CO.[K].NO Chemical compound CO.[K].NO IXBZOABELVHJMJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N Heavy water Chemical compound [2H]O[2H] XLYOFNOQVPJJNP-ZSJDYOACSA-N 0.000 description 4
- 229940125773 compound 10 Drugs 0.000 description 4
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N jdtic Chemical compound C1([C@]2(C)CCN(C[C@@H]2C)C[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@@H]2NCC3=CC(O)=CC=C3C2)=CC=CC(O)=C1 ZLVXBBHTMQJRSX-VMGNSXQWSA-N 0.000 description 4
- 238000010534 nucleophilic substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 125000004482 piperidin-4-yl group Chemical group N1CCC(CC1)* 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 125000004527 pyrimidin-4-yl group Chemical group N1=CN=C(C=C1)* 0.000 description 4
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 4
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 4
- JQSHBVHOMNKWFT-DTORHVGOSA-N varenicline Chemical compound C12=CC3=NC=CN=C3C=C2[C@H]2C[C@@H]1CNC2 JQSHBVHOMNKWFT-DTORHVGOSA-N 0.000 description 4
- JOFDSYLCZIHGGO-UHFFFAOYSA-N 4-[(4-cyclohexylphenyl)methyl-[2-[[5-(dimethylamino)naphthalen-1-yl]sulfonyl-methylamino]acetyl]amino]-2-hydroxybenzoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N(C)C)=CC=CC2=C1S(=O)(=O)N(C)CC(=O)N(C=1C=C(O)C(C(O)=O)=CC=1)CC(C=C1)=CC=C1C1CCCCC1 JOFDSYLCZIHGGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229940126638 Akt inhibitor Drugs 0.000 description 3
- CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N Pyrimidine Chemical compound C1=CN=CN=C1 CZPWVGJYEJSRLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 3
- SRJOCJYGOFTFLH-UHFFFAOYSA-N isonipecotic acid Chemical compound OC(=O)C1CCNCC1 SRJOCJYGOFTFLH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- CKXZPVPIDOJLLM-UHFFFAOYSA-N tert-butyl n-piperidin-4-ylcarbamate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NC1CCNCC1 CKXZPVPIDOJLLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CWXPZXBSDSIRCS-UHFFFAOYSA-N tert-butyl piperazine-1-carboxylate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N1CCNCC1 CWXPZXBSDSIRCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N (2S,3R)-N-[(2S)-3-(cyclopenten-1-yl)-1-[(2R)-2-methyloxiran-2-yl]-1-oxopropan-2-yl]-3-hydroxy-3-(4-methoxyphenyl)-2-[[(2S)-2-[(2-morpholin-4-ylacetyl)amino]propanoyl]amino]propanamide Chemical compound C1(=CCCC1)C[C@@H](C(=O)[C@@]1(OC1)C)NC([C@H]([C@@H](C1=CC=C(C=C1)OC)O)NC([C@H](C)NC(CN1CCOCC1)=O)=O)=O GHYOCDFICYLMRF-UTIIJYGPSA-N 0.000 description 2
- LJIOTBMDLVHTBO-CUYJMHBOSA-N (2s)-2-amino-n-[(1r,2r)-1-cyano-2-[4-[4-(4-methylpiperazin-1-yl)sulfonylphenyl]phenyl]cyclopropyl]butanamide Chemical compound CC[C@H](N)C(=O)N[C@]1(C#N)C[C@@H]1C1=CC=C(C=2C=CC(=CC=2)S(=O)(=O)N2CCN(C)CC2)C=C1 LJIOTBMDLVHTBO-CUYJMHBOSA-N 0.000 description 2
- QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N (3S)-3-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[5-[(3aS,6aR)-2-oxo-1,3,3a,4,6,6a-hexahydrothieno[3,4-d]imidazol-4-yl]pentanoylamino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-(4-hydroxyphenyl)propanoyl]amino]-4-[1-bis(4-chlorophenoxy)phosphorylbutylamino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound CCCC(NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](Cc1ccc(O)cc1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CCCCC1SC[C@@H]2NC(=O)N[C@H]12)C(C)C)P(=O)(Oc1ccc(Cl)cc1)Oc1ccc(Cl)cc1 QFLWZFQWSBQYPS-AWRAUJHKSA-N 0.000 description 2
- RUXSFWFRCSJWQK-UHFFFAOYSA-N 1-(7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C1CC(C(=O)O)CCN1C1=NC=NC2=C1C=CN2 RUXSFWFRCSJWQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BXOSYQSFTOLZST-UHFFFAOYSA-N 4-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-1-(7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C1CC(NC(=O)OC(C)(C)C)(C(O)=O)CCN1C1=NC=NC2=C1C=CN2 BXOSYQSFTOLZST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RAENIWWUAIMXSI-UHFFFAOYSA-N 4-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)NC1(C(O)=O)CCNCC1 RAENIWWUAIMXSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RRELDGDKULRRDM-UHFFFAOYSA-N 6-[2-chloro-4-nitro-5-(oxan-4-yloxy)anilino]-3,4-dihydro-1H-quinolin-2-one Chemical compound [O-][N+](=O)c1cc(Cl)c(Nc2ccc3NC(=O)CCc3c2)cc1OC1CCOCC1 RRELDGDKULRRDM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MITGKKFYIJJQGL-UHFFFAOYSA-N 9-(4-chlorobenzoyl)-6-methylsulfonyl-2,3-dihydro-1H-carbazol-4-one Chemical compound ClC1=CC=C(C(=O)N2C3=CC=C(C=C3C=3C(CCCC2=3)=O)S(=O)(=O)C)C=C1 MITGKKFYIJJQGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007730 Akt signaling Effects 0.000 description 2
- QUMCIHKVKQYNPA-RUZDIDTESA-N C1(CCCCC1)CN1[C@@H](C=2N(C=3C=NC(=NC1=3)NC1=C(C=C(C(=O)NC3CCN(CC3)C)C=C1)OC)C(=NN=2)C)CC Chemical compound C1(CCCCC1)CN1[C@@H](C=2N(C=3C=NC(=NC1=3)NC1=C(C=C(C(=O)NC3CCN(CC3)C)C=C1)OC)C(=NN=2)C)CC QUMCIHKVKQYNPA-RUZDIDTESA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- HPKJGHVHQWJOOT-ZJOUEHCJSA-N N-[(2S)-3-cyclohexyl-1-oxo-1-({(2S)-1-oxo-3-[(3S)-2-oxopyrrolidin-3-yl]propan-2-yl}amino)propan-2-yl]-1H-indole-2-carboxamide Chemical compound C1C(CCCC1)C[C@H](NC(=O)C=1NC2=CC=CC=C2C=1)C(=O)N[C@@H](C[C@H]1C(=O)NCC1)C=O HPKJGHVHQWJOOT-ZJOUEHCJSA-N 0.000 description 2
- FGFVJKWYMGSEKK-UHFFFAOYSA-N [1-(7H-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)piperidin-4-yl]carbamic acid Chemical compound C1CC(NC(=O)O)CCN1C1=NC=NC2=C1C=CN2 FGFVJKWYMGSEKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 2
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 2
- 125000003917 carbamoyl group Chemical group [H]N([H])C(*)=O 0.000 description 2
- 125000001951 carbamoylamino group Chemical group C(N)(=O)N* 0.000 description 2
- 229940125797 compound 12 Drugs 0.000 description 2
- 238000006482 condensation reaction Methods 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 2
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 2
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000012046 mixed solvent Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- KYIUIOLRCKTBSG-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 4-(7h-pyrrolo[2,3-d]pyrimidin-4-yl)piperazine-1-carboxylate Chemical compound C1CN(C(=O)OC(C)(C)C)CCN1C1=NC=NC2=C1C=CN2 KYIUIOLRCKTBSG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 2
- KUZSBKJSGSKPJH-VXGBXAGGSA-N 5-[(9R)-6-[(3R)-3-methylmorpholin-4-yl]-11-oxa-1,3,5-triazatricyclo[7.4.0.02,7]trideca-2,4,6-trien-4-yl]pyrazin-2-amine Chemical compound C[C@@H]1COCCN1c1nc(nc2N3CCOC[C@H]3Cc12)-c1cnc(N)cn1 KUZSBKJSGSKPJH-VXGBXAGGSA-N 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 102100030146 Epithelial membrane protein 3 Human genes 0.000 description 1
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 description 1
- 101001011788 Homo sapiens Epithelial membrane protein 3 Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102000038030 PI3Ks Human genes 0.000 description 1
- 108091007960 PI3Ks Proteins 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 101710113459 RAC-alpha serine/threonine-protein kinase Proteins 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000003527 anti-angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000009789 autophagic cell death Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical compound N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000008406 drug-drug interaction Effects 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 1
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000002434 immunopotentiative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 150000002894 organic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 1
- 229940002612 prodrug Drugs 0.000 description 1
- 239000000651 prodrug Substances 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
- C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
- C07D487/04—Ortho-condensed systems
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
- C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
- C07B2200/07—Optical isomers
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Immunology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
本发明公开了一种APN和AKT双靶点抑制剂及其制备方法和应用。所述的APN和AKT双靶点抑制剂，其结构通式为(I)、(II)、(III)或(IV)。本发明还提供该类化合物的制备方法以及在制备预防或治疗与APN和AKT活性异常相关的疾病的药物中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及一种APN和AKT双靶点抑制剂及其制备方法和应用，属于有机化合物合成与医药应用技术领域。
背景技术
联合用药和多靶点药物都可以通过协同作用显著提高对肿瘤的治疗效果。相比于联合用药，多靶点药物还在改善药代动力学性质、避免不良药物-药物相互作用和提高病人的依从性等方面具有明显优势(J Med Chem,62(2019)420-444；J Med Chem,62(2019)8881-8914)。
氨肽酶N(Aminopeptidase N，APN)和蛋白激酶B(Protein kinase B，AKT/PKB)已经成为治疗各种肿瘤重要的生物靶标。APN抑制剂bestatin被批准上市，用作免疫调节剂。后续研究表明，bestatin还具有一定的抗肿瘤活性，目前bestatin已被开发为一种辅助治疗的药物，用以提高癌症术后治疗的效果。此外，由于bestatin的免疫增强功能，已被广泛应用于白血病、非小细胞肺癌、胃癌、宫颈癌的治疗。虽然目前没有AKT抑制剂被批准上市，但有多个AKT抑制剂已经处于治疗各种血液瘤和实体瘤的临床研究阶段。
目前有许多研究表明APN和AKT抑制剂联用具有良好的协同作用，比如在黑色素瘤细胞中，bestatin与AKT抑制剂联合使用抗癌效果更佳。此外，bestatin可以通过调控AKT信号通路诱导膀胱癌细胞自噬性死亡。Bestatin和放疗联用可有效抑制肾癌细胞中的AKT信号通路。Bestatin还可以通过抑制CD13/EMP3/PI3K/AKT/NF-κB通路的激活来克服胃癌细胞对顺铂的耐药性(Oncotargets&Therapy,11(2018)943；Aging 12.1(2019)80-105；Oncology Letters(2016))。因此，APN/AKT双靶点抑制剂有望发挥比单靶点药物更强的抗癌活性。我们以AKT抑制剂AZD5363为分子模板，分析它与AKT之间的结合模式，结合APN抑制剂的药效团模型，设计合成了一系列的APN和AKT双靶点抑制剂。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种APN和AKT双靶点抑制剂及其制备方法和应用。
本发明的技术方案为：
一、APN和AKT双靶点抑制剂
具有如下结构通式(I)、(II)、(III)或(IV)的APN和AKT双靶点抑制剂，其药学上可接受的盐，溶剂合物或前药：
其中R是 或H；
*是S构型、R构型或其消旋体。
根据本发明优选的，所述的药学上可接受的盐为结构通式(I)、(II)、(III)或(IV)的盐酸盐。
根据本发明进一步优选的，上述化合物为下列之一：
二、APN和AKT双靶点抑制剂的制备方法
具有通式(I)、(II)、(III)和(IV)结构的化合物的制备方法为下列之一：
Scheme 1以化合物1为起始原料，与4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶在碱性条件下发生亲核取代反应得到化合物2，化合物2和L-或D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐、L-或D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐、L-或D-亮氨酸甲酯盐酸盐、L-或D-丙氨酸甲酯盐酸盐或L-或D-色氨酸甲酯盐酸盐通过酰胺缩合反应得到中间体(S)-3a-(S)-3e，(R)-3f-(R)-3j，中间体(S)-3a-(S)-3e，(R)-3f-(R)-3j和羟胺钾甲醇溶液反应得到化合物(S)-4a-(S)-4e，(R)-4f-(R)-4j，最后中间体(S)-4a-(S)-4e，(R)-4f-(R)-4j在酸性条件下脱去Boc保护基得到终产物(S)-5a-(S)-5e，(R)-5f-(R)-5j。
合成路线Scheme 1如下：
上述合成路线中的试剂及反应条件：a)4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶，碳酸氢钠，乙腈，水，回流；b)L-或D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐或L-或D-亮氨酸甲酯盐酸盐或L-或D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐或L-或D-色氨酸甲酯盐酸盐或L-或D-丙氨酸甲酯盐酸盐，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，1-羟基苯并三唑，三乙胺，N,N-二甲基甲酰胺，室温；c)羟胺钾甲醇溶液，室温；d)氯化氢饱和的乙酸乙酯。
Scheme 2以化合物6为起始原料，化合物6与1-BOC-哌嗪在碱性条件下发生亲核取代反应得到化合物7a，化合物7a在酸性条件下脱去Boc保护基得到中间体8a。D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐、D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐和D-亮氨酸甲酯盐酸盐分别和三光气反应生成(R)-2-异氰酰基-3-苯基丙酸甲酯、(R)-2-异氰酰基-3-异丙基丙酸甲酯和(R)-2-异氰酰基-2-苯基乙酸甲酯，随后中间体8a分别与这三种异氰酸酯反应得到中间体9a-9c。最后中间体9a-9c和羟胺钾甲醇溶液反应得到终产物10a-10c。
合成路线Scheme 2如下：
上述合成路线中的试剂及反应条件：a)碳酸氢钠，三乙胺，乙腈，水，N,N-二甲基甲酰胺，回流；b)浓盐酸，甲醇，室温；c)D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐或D-亮氨酸甲酯盐酸盐或D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐，三光气，碳酸氢钠，三乙胺，N,N-二甲基甲酰胺，室温；d)羟胺钾甲醇溶液，室温。
Scheme 3以化合物6为起始原料，化合物6与4-Boc-氨基哌啶在碱性条件下发生亲核取代反应得到化合物7c，化合物7c在酸性条件下脱去Boc保护基得到中间体8c。D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐、D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐和D-亮氨酸甲酯盐酸盐分别和三光气反应生成(R)-2-异氰酰基-3-苯基丙酸甲酯、(R)-2-异氰酰基-3-异丙基丙酸甲酯和(R)-2-异氰酰基-2-苯基乙酸甲酯，随后中间体8c分别与这三种异氰酸酯反应得到中间体9d-9f。最后中间体9d-9f和羟胺钾甲醇溶液反应得到终产物10d-10f。
合成路线Scheme 3如下：
上述合成路线中的试剂及反应条件：a)碳酸氢钠，三乙胺，乙腈，水，N,N-二甲基甲酰胺，回流；b)浓盐酸，甲醇，室温；c)D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐或D-亮氨酸甲酯盐酸盐或D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐，三光气，碳酸氢钠，三乙胺，N,N-二甲基甲酰胺，室温；d)羟胺钾甲醇溶液，室温。
Scheme 4以化合物6为起始原料，化合物6与4-哌啶甲酸在碱性条件下发生亲核取代反应得到化合物7b，化合物7b直接和D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐、D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐、D-亮氨酸甲酯盐酸盐发生酰胺缩合反应得到中间体11a-11c，最后中间体11a-11c和羟胺钾甲醇溶液反应得到终产物12a-12c。
合成路线Scheme 4如下：
上述合成路线中的试剂及反应条件：a)碳酸氢钠，三乙胺，乙腈，水，N,N-二甲基甲酰胺，回流；d)羟胺钾甲醇溶液，室温；e)D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐或D-亮氨酸甲酯盐酸盐或D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，1-羟基苯并三唑，三乙胺，N,N-二甲基甲酰胺，室温。
根据本发明优选的，APN和AKT双靶点抑制剂的制备方法，具体步骤如下：
1、化合(S)-5a-(S)-5e，(R)-5f-(R)-5j的制备方法，以(S)-5a为例，具体步骤如下：
(1)中间体2：4-((叔丁氧羰基)氨基)-1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-羧酸的制备
将4-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-4-羧酸(1，0.4g，1.63mmol)加入到5mL乙腈和15mL水的混合溶剂中，加入4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.27g，1.80mmol)和碳酸氢钠(0.64g，7.69mmol)。加毕后，在氩气保护下，回流反应12小时，TLC监测反应进程，反应结束后，反应液用EA萃取三次，收集水层浓缩，随后加入15mL甲醇，45℃搅拌0.5小时，过滤后浓缩滤液，加入少量水，6M盐酸调节pH到4，析出大量固体，过滤，所得固体真空干燥，得到0.45g灰白色固体，产率76％。ESI-MS,m/z＝362.16[M+H]+。
(2)中间体(S)-3a：(S)-2-(4-((叔丁氧羰基)氨基)-1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-甲酰胺基)-2-苯基乙酸甲酯的制备
冰浴下，将化合物2(0.20g，0.55mmol)溶解在10mL DMF中，加入EDCI(0.17g，0.83mmol)，HOBT(0.11g，0.83mmol)，Et3N，冰浴下搅拌0.5小时后加入L-苯甘氨酸甲酯盐酸盐(0.17g，0.83mmol)。加毕后，室温下继续搅拌3小时，TLC监测反应进程，反应结束后，反应液倾入100mL水中，反应液用EA萃取3次，5％柠檬酸溶液洗3次，饱和碳酸氢钠溶液洗2次，饱和氯化钠溶液洗2次，无水硫酸镁干燥后除去溶剂，所得固体真空干燥，得到0.14g浅黄色固体，产率50％。ESI-MS,m/z＝509.24[M+H]+。
化合物(S)-3b-(S)-3e，(R)-3f-(R)-3j的制备方法与化合物(S)-3a类似。
(3)中间体(S)-4a：叔丁基(S)-(4-((2-(羟氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酰基)-1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-基氨基甲酸酯的制备
室温下，将化合物(S)-3a(0.14g，0.28mmol)加入到4mL NH2OK甲醇溶液中，室温下搅拌反应2小时，反应结束后，将反应液浓缩，用1M盐酸调节溶液pH值为6，将析出的固体过滤，真空干燥，得到0.10g灰白色固体，产率71％。ESI-MS,m/z＝510.31[M+H]+。
化合物(S)-4b-(S)-4e，(R)-4f-(R)-4j的制备方法与化合物(S)-4a类似。
(4)中间体(S)-5a：(S)-4-氨基-N-(2-(羟基氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)-1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-甲酰胺盐酸盐的制备
室温下，将化合物(S)-4a(0.12g，0.23mmol)加入到4mL HCl饱和的乙酸乙酯溶液中，室温下搅拌反应8小时，反应结束后，过滤得到88mg灰白色固体，产率84％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),11.17(s,1H),9.11(d,J＝8.0Hz,1H),8.89(s,3H),8.40(s,1H),7.49(s,1H),7.43-7.25(m,J＝24.7,18.7,7.4Hz,5H),7.03(s,1H),5.48(d,J＝7.9Hz,1H),4.60-4.45(m,2H),4.14-3.97(m,2H),2.71-2.53(m,2H),2.09-1.96(m,2H)。13CNMR(101MHz,Deuterium Oxide)δ169.79,168.29,152.15,142.25,134.53,129.20,129.07,127.64,127.46,124.36,103.80,102.24,57.72,56.26,42.55,42.43,30.29,30.24。HRMS(AP-ESI),calcd for C20H24ClN7O3[M+H]+410.1935,found 410.1919。
化合物(S)-5b-(S)-5e，(R)-5f-(R)-5j的制备方法与化合物(S)-5a类似。
2、化合物10a-10c的制备方法，以化合物10a为例，具体步骤如下：
(1)中间体7a：4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
室温下，将化合物4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(6，1g，4.10mmol)和1-BOC-哌嗪(0.84g，4.50mmol)加入到MeCN，H2O，DMF(v:v:v＝1:3:4,20mL)中，加入NaHCO3(0.52g，6.10mmol)和Et3N(0.62g，6.10mmol)。加毕后，回流反应8小时，TLC监测反应进程，反应结束后，反应液静置3小时，有大量白色固体析出，过滤后真空干燥，得到1.2g白色固体，产率96％。ESI-MS,m/z＝304.58[M+H]+。
(2)中间体8a：4-(哌嗪-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶盐酸盐的制备
室温下，将化合物7a(0.20g，0.66mmol)溶于3mL甲醇中，加入3mL浓盐酸，室温搅拌10小时后出现白色固体，过滤后真空干燥，得到80mg白色固体，产率51％。ESI-MS,m/z＝204.07[M+H]+。
(3)中间体9a：(4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羰基)-D-苯丙氨酸甲酯的制备
冰浴下，将D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(1.0g，4.60mmol)和三光气(0.46g，1.50mmol)加入20mL DCM中，加入20mL饱和NaHCO3溶液，冰浴下搅拌1小时，TLC监测反应结束后，DCM萃取3次，合并有机相用饱和NaCl洗涤2次，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，浓缩，真空干燥，得到0.43g透明油状物(R)-2-异氰酰基-3-苯基丙酸甲酯，产率46％。室温下，将8a(0.20g，0.83mmol)加入10mL DMF中，随后加入(R)-2-异氰酰基-3-苯基丙酸甲酯(0.17g，0.83mmol)和Et3N(0.25g，2.50mmol)，室温搅拌3小时。TLC监测反应进程，反应结束后，将反应液倾入大量水中，EtOAc萃取3次，合并有机相依次用饱和NaHCO3和饱和NaCl溶液洗涤2次，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，浓缩，真空干燥，得到0.22g淡黄色固体，产率94％。ESI-MS,m/z＝409.26[M+H]+。
中间体9b-9c的制备方法与化合物9a类似。
(4)化合物10a：(R)-N-(1-(羟氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
室温下，将化合物9a(0.20g，0.56mmol)加入到5mL NH2OK甲醇溶液中，室温下搅拌反应1小时，反应结束后，将反应液浓缩，用1M盐酸调节溶液pH值为6，将析出的固体过滤，真空干燥，得到90mg白色固体，产率45％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.70(s,1H),10.60(s,1H),8.79(s,1H),8.15(s,1H),7.31-7.21(m,4H),7.21-7.14(m,2H),6.67(d,J＝8.5Hz,1H),6.61(d,J＝3.4Hz,1H),4.31-4.22(m,1H),3.87-3.71(m,4H),3.49-3.40(m,4H),2.90(d,J＝9.2Hz,2H)。13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.62-169.09(m),157.31,156.88,152.38,150.98,139.04,129.72,128.45,126.55,121.94,102.80,101.34,54.40,45.22,43.55,38.24。HRMS(AP-ESI),calcd for C20H23N7O3[M+H]+410.1935,found 410.1918。
化合物10b-10c的制备方法与化合物10a类似。
3、化合物10d-10e的制备方法，以化合物10d为例，具体步骤如下：
(1)中间体7c：(1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
以化合物4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(6，1.0g，4.10mmol)和4-Boc-氨基哌啶(0.90g，4.50mmol)为原料，参照化合物7a的合成方法，得到1.2g白色固体，产率92％。ESI-MS,m/z＝247.13[M+H]+。
(2)中间体8c：1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-氨基盐酸盐的制备
以化合物7c(0.28g，0.88mmol)为原料，参照化合物8a的合成方法，得到0.1g白色固体，产率45％。ESI-MS,m/z＝218.13[M+H]+。
(3)中间体9d：((1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]哌啶-4-基)氨基甲酰基)-D-苯丙氨酸甲酯的制备
以化合物8c(0.20g，0.79mmol)和D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(1.0g，4.60mmol)为原料，参照化合物9a的合成方法，得到0.23g白色固体，产率70％。ESI-MS,m/z＝845.04[2M+H]+。
中间体9e-9f的制备方法与化合物9d类似。
(4)化合物10d：(R)-2-(3-(1-(1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]哌啶-4-基)脲基)-N-羟基-3-苯基丙酰胺的制备
以化合物9b(0.12g，0.28mmol)为原料，参照化合物10a的合成方法，得到0.1g白色固体，产率83％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.67(s,1H),10.64(s,1H),8.84(s,1H),8.13(s,1H),7.26(t,J＝7.1Hz,2H),7.22-7.13(m,4H),6.60-6.55(m,1H),6.10(d,J＝7.8Hz,1H),6.02(d,J＝8.9Hz,1H),4.51-4.37(m,2H),4.27(td,J＝8.3,6.1Hz,1H),3.71-3.59(m,1H),3.32-3.21(m,2H),2.86(dd,J＝13.5,6.1Hz,1H),2.71(dd,J＝13.6,8.0Hz,1H),1.88-1.76(m,2H),1.35-1.19(m,2H)。13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ170.20,147.96,141.25,138.80,138.27,136.08,133.18,127.83,127.14,125.95,119.50,109.96,104.46,52.46,39.42,35.17,11.32.HRMS(AP-ESI),calcd for C21H25N7O3[M+H]+424.2092,found424.2075。
化合物10e-10f的制备方法与化合物10d类似。
4、化合物12a-12c的制备方法，以化合物12a为例，具体步骤如下：
(1)中间体7b：1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-羧酸的制备
以化合物4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(6,1.0g,4.10mmol)和4-哌啶甲酸(0.58g,4.50mmol)为原料，参照化合物7a的合成方法，得到0.64g白色固体，产率64％。ESI-MS,m/z＝247.12[M+H]+。
(2)中间体11a：(1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-羰基)-D-苯丙氨酸甲酯的制备
室温下，将化合物7b(0.30g，1.22mmol)溶于10mL DMF中，加入EDCI(0.37g，1.83mmol)，HOBT(0.25g，1.83mmol)和Et3N(0.18g，1.83mmol)，冰浴下搅拌0.5小时，加入D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(0.39g，1.83mmol)。加毕后，室温搅拌4小时，TLC监测反应进程，反应结束后，将反应液倾入大量水中，EtOAc萃取3次，合并有机相依次用饱和NaHCO3和饱和NaCl溶液洗涤2次，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，浓缩，真空干燥，得到0.47g淡黄色固体，产率94％。ESI-MS,m/z＝408.56[M+H]+。
中间体11b-11c的制备方法与化合物11a类似。
(3)中间体12a：(R)-N-(1-(羟基氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-甲酰胺的制备
室温下，将化合物11a(0.23g，0.56mmol)加入到5mL新鲜制备的NH2OK甲醇溶液中，室温下搅拌反应1小时，反应结束后，将反应液浓缩，用1M盐酸调节溶液pH值为6，将析出的固体过滤，真空干燥，得到0.12g白色固体，产率52％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.66(s,1H),10.68(d,J＝1.6Hz,1H),8.86(d,J＝1.6Hz,1H),8.19-8.09(m,2H),7.35-7.12(m,6H),6.57-6.52(m,1H),4.58(dd,J＝27.1,13.3Hz,2H),4.46-4.35(m,1H),3.15-2.97(m,2H),2.92(dd,J＝13.6,5.1Hz,1H),2.78(dd,J＝13.6,9.8Hz,1H),1.79-1.54(m,2H),1.53-1.25(m,2H)。13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ174.14,168.43,156.72,152.42,151.10,138.26,129.63,128.45,126.69,121.68,102.62,101.35,51.89,45.43,45.37,42.00,38.40,28.72,28.27。HRMS(AP-ESI),calcd for C21H24N6O3[M+H]+409.1983,found 410.1969。
化合物12b-12c的制备方法与化合物12a类似。
三、APN和AKT双靶点抑制剂的应用
本发明还提供了APN和AKT双靶点抑制剂在制备预防或治疗与APN和AKT活性或表达异常相关的疾病的药物中的应用；
所述的与APN和AKT活性或表达异常相关疾病为各种实体瘤、血液瘤和自身免疫性疾病等。
所述的各种实体瘤为乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌、黑色素瘤；所述的血液瘤为骨髓纤维化、多发性骨髓瘤、人红细胞白血病、人慢性髓细胞性白血病；所述的自身免疫性疾病为类风湿性关节炎、炎症。
此外，本发明还包括适于口服或胃肠外给药的药物组合物，包含本发明通式(I)、(II)、(III)或(IV)所述的化合物或其药学上可接受的盐以及一种或多种药学上可接受载体或赋形剂。
附图说明
图1是抑制人脐静脉内皮细胞成管腔实验结果图；
图2是蛋白质印迹实验结果图；其中A)AGS细胞中p-GSK3β表达((R)-5h/AZD5363处理2小时/6小时后)；B)蛋白质印迹的定量分析结果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，但不限于此。
实施例1、化合物(S)-5a-(S)-5e，(R)-5f-(R)-5j的制备方法，以(S)-5a为例，具体步骤如下：(1)中间体2：4-((叔丁氧羰基)氨基)-1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-羧酸的制备
将4-((叔丁氧羰基)氨基)哌啶-4-羧酸(1，0.4g，1.63mmol)加入到5mL乙腈和15mL水的混合溶剂中，加入4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(0.27g，1.80mmol)和碳酸氢钠(0.64g，7.69mmol)。加毕后，在氩气保护下，回流反应12小时，TLC监测反应进程，反应结束后，反应液用EA萃取三次，收集水层浓缩，随后加入15mL甲醇，45℃搅拌0.5小时，过滤后浓缩滤液，加入少量水，6M盐酸调节pH到4，析出大量固体，过滤，所得固体真空干燥，得到0.45g灰白色固体，产率76％。ESI-MS,m/z＝362.16[M+H]+。
(2)中间体(S)-3a：(S)-2-(4-((叔丁氧羰基)氨基)-1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-甲酰胺基)-2-苯基乙酸甲酯的制备
冰浴下，将化合物2(0.20g，0.55mmol)溶解在10mL DMF中，加入EDCI(0.17g，0.83mmol)，HOBT(0.11g，0.83mmol)，Et3N，冰浴下搅拌0.5小时后加入L-苯甘氨酸甲酯盐酸盐(0.17g，0.83mmol)。加毕后，室温下继续搅拌3小时，TLC监测反应进程，反应结束后，反应液倾入100mL水中，反应液用EA萃取3次，5％柠檬酸溶液洗3次，饱和碳酸氢钠溶液洗2次，饱和氯化钠溶液洗2次，无水硫酸镁干燥后除去溶剂，所得固体真空干燥，得到0.14g浅黄色固体，产率50％。ESI-MS,m/z＝509.24[M+H]+。
化合物(S)-3b-(S)-3e，(R)-3f-(R)-3j的制备方法与化合物(S)-3a类似。
(3)中间体(S)-4a：叔丁基(S)-(4-((2-(羟氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)氨基甲酰基)-1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-基氨基甲酸酯的制备
室温下，将化合物(S)-3a(0.14g，0.28mmol)加入到4mL NH2OK甲醇溶液中，室温下搅拌反应2小时，反应结束后，将反应液浓缩，用1M盐酸调节溶液pH值为6，将析出的固体过滤，真空干燥，得到0.10g灰白色固体，产率71％。ESI-MS,m/z＝510.31[M+H]+。
化合物(S)-4b-(S)-4e，(R)-4f-(R)-4j的制备方法与化合物(S)-4a类似。
(4)中间体(S)-5a：(S)-4-氨基-N-(2-(羟基氨基)-2-氧代-1-苯基乙基)-1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-甲酰胺盐酸盐的制备
室温下，将化合物(S)-4a(0.12g，0.23mmol)加入到4mL新鲜制备的HCl饱和的乙酸乙酯溶液中，室温下搅拌反应8小时，反应结束后，过滤得到88mg灰白色固体，产率84％。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),11.17(s,1H),9.11(d,J＝8.0Hz,1H),8.89(s,3H),8.40(s,1H),7.49(s,1H),7.43-7.25(m,J＝24.7,18.7,7.4Hz,5H),7.03(s,1H),5.48(d,J＝7.9Hz,1H),4.60-4.45(m,2H),4.14-3.97(m,2H),2.71-2.53(m,2H),2.09-1.96(m,2H)。13C NMR(101MHz,Deuterium Oxide)δ169.79,168.29,152.15,142.25,134.53,129.20,129.07,127.64,127.46,124.36,103.80,102.24,57.72,56.26,42.55,42.43,30.29,30.24。HRMS(AP-ESI),calcd for C20H24ClN7O3[M+H]+410.1935,found 410.1919。
化合物(S)-5b-(S)-5e，(R)-5f-(R)-5j的制备方法与化合物(S)-5a类似。
实施例2、化合物10a-10c的制备方法，以化合物10a为例，具体步骤如下：
(1)中间体7a：4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯的制备
室温下，将化合物4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(6，1g，4.10mmol)和1-BOC-哌嗪(0.84g，4.50mmol)加入到MeCN，H2O，DMF(v:v:v＝1:3:4,20mL)中，加入NaHCO3(0.52g，6.10mmol)和Et3N(0.62g，6.10mmol)。加毕后，回流反应8小时，TLC监测反应进程，反应结束后，反应液静置3小时，有大量白色固体析出，过滤后真空干燥，得到1.2g白色固体，产率96％。ESI-MS,m/z＝304.58[M+H]+。
(2)中间体8a：4-(哌嗪-1-基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶盐酸盐的制备
室温下，将化合物7a(0.20g，0.66mmol)溶于3mL甲醇中，加入3mL浓盐酸，室温搅拌10小时后出现白色固体，过滤后真空干燥，得到80mg白色固体，产率51％。ESI-MS,m/z＝204.07[M+H]+。
(3)中间体9a：(4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羰基)-D-苯丙氨酸甲酯的制备
冰浴下，将D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(1.0g，4.60mmol)和三光气(0.46g，1.50mmol)加入20mL DCM中，加入20mL饱和NaHCO3溶液，冰浴下搅拌1小时，TLC监测反应结束后，DCM萃取3次，合并有机相用饱和NaCl洗涤2次，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，浓缩，真空干燥，得到0.43g透明油状物(R)-2-异氰酰基-3-苯基丙酸甲酯，产率46％。室温下，将8a(0.20g，0.83mmol)加入10mL DMF中，随后加入(R)-2-异氰酰基-3-苯基丙酸甲酯(0.17g，0.83mmol)和Et3N(0.25g，2.50mmol)，室温搅拌3小时。TLC监测反应进程，反应结束后，将反应液倾入大量水中，EtOAc萃取3次，合并有机相依次用饱和NaHCO3和饱和NaCl溶液洗涤2次，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，浓缩，真空干燥，得到0.22g淡黄色固体，产率94％。ESI-MS,m/z＝409.26[M+H]+。
中间体9b-9c的制备方法与化合物9a类似。
(4)化合物10a：(R)-N-(1-(羟氨基)-1-氧代-3-苯基丙烷-2-基)-4-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酰胺的制备
室温下，将化合物9a(0.20g，0.56mmol)加入到5mL NH2OK甲醇溶液中，室温下搅拌反应1小时，反应结束后，将反应液浓缩，用1M盐酸调节溶液pH值为6，将析出的固体过滤，真空干燥，得到90mg白色固体，产率45％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.70(s,1H),10.60(s,1H),8.79(s,1H),8.15(s,1H),7.31-7.21(m,4H),7.21-7.14(m,2H),6.67(d,J＝8.5Hz,1H),6.61(d,J＝3.4Hz,1H),4.31-4.22(m,1H),3.87-3.71(m,4H),3.49-3.40(m,4H),2.90(d,J＝9.2Hz,2H)。13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ169.62-169.09(m),157.31,156.88,152.38,150.98,139.04,129.72,128.45,126.55,121.94,102.80,101.34,54.40,45.22,43.55,38.24。HRMS(AP-ESI),calcd for C20H23N7O3[M+H]+410.1935,found 410.1918。
化合物10b-10c的制备方法与化合物10a类似。
实施例3、化合物10d-10e的制备方法，以化合物10d为例，具体步骤如下：
(1)中间体7c：(1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]哌啶-4-基)氨基甲酸叔丁酯的制备
以化合物4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(6，1.0g，4.10mmol)和4-Boc-氨基哌啶(0.90g，4.50mmol)为原料，参照化合物7a的合成方法，得到1.2g白色固体，产率92％。ESI-MS,m/z＝247.13[M+H]+。
(2)中间体8c：1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-氨基盐酸盐的制备
以化合物7c(0.28g，0.88mmol)为原料，参照化合物8a的合成方法，得到0.1g白色固体，产率45％。ESI-MS,m/z＝218.13[M+H]+。
(3)中间体9d：((1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]哌啶-4-基)氨基甲酰基)-D-苯丙氨酸甲酯的制备
以化合物8c(0.20g，0.79mmol)和D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(1.0g，4.60mmol)为原料，参照化合物9a的合成方法，得到0.23g白色固体，产率70％。ESI-MS,m/z＝845.04[2M+H]+。
中间体9e-9f的制备方法与化合物9d类似。
(4)化合物10d：(R)-2-(3-(1-(1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基]哌啶-4-基)脲基)-N-羟基-3-苯基丙酰胺的制备
以化合物9b(0.12g，0.28mmol)为原料，参照化合物10a的合成方法，得到0.1g白色固体，产率83％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.67(s,1H),10.64(s,1H),8.84(s,1H),8.13(s,1H),7.26(t,J＝7.1Hz,2H),7.22-7.13(m,4H),6.60-6.55(m,1H),6.10(d,J＝7.8Hz,1H),6.02(d,J＝8.9Hz,1H),4.51-4.37(m,2H),4.27(td,J＝8.3,6.1Hz,1H),3.71-3.59(m,1H),3.32-3.21(m,2H),2.86(dd,J＝13.5,6.1Hz,1H),2.71(dd,J＝13.6,8.0Hz,1H),1.88-1.76(m,2H),1.35-1.19(m,2H)。13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ170.20,147.96,141.25,138.80,138.27,136.08,133.18,127.83,127.14,125.95,119.50,109.96,104.46,52.46,39.42,35.17,11.32.HRMS(AP-ESI),calcd for C21H25N7O3[M+H]+424.2092,found424.2075。
化合物10e-10f的制备方法与化合物10d类似。
实施例4、化合物12a-12c的制备方法，以化合物12a为例，具体步骤如下：
(1)中间体7b：1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-羧酸的制备
以化合物4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶(6,1.0g,4.10mmol)和4-哌啶甲酸(0.58g,4.50mmol)为原料，参照化合物7a的合成方法，得到0.64g白色固体，产率64％。ESI-MS,m/z＝247.12[M+H]+。
(2)中间体11a：(1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-羰基)-D-苯丙氨酸甲酯的制备
室温下，将化合物7b(0.30g，1.22mmol)溶于10mL DMF中，加入EDCI(0.37g，1.83mmol)，HOBT(0.25g，1.83mmol)和Et3N(0.18g，1.83mmol)，冰浴下搅拌0.5小时，加入D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐(0.39g，1.83mmol)。加毕后，室温搅拌4小时，TLC监测反应进程，反应结束后，将反应液倾入大量水中，EtOAc萃取3次，合并有机相依次用饱和NaHCO3和饱和NaCl溶液洗涤2次，有机相用无水MgSO4干燥，过滤，浓缩，真空干燥，得到0.47g淡黄色固体，产率94％。ESI-MS,m/z＝408.56[M+H]+。
中间体11b-11c的制备方法与化合物11a类似。
(3)中间体12a：(R)-N-(1-(羟基氨基)-1-氧代-3-苯基丙-2-基)-1-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)哌啶-4-甲酰胺的制备
室温下，将化合物11a(0.23g，0.56mmol)加入到5mL NH2OK甲醇溶液中，室温下搅拌反应1小时，反应结束后，将反应液浓缩，用1M盐酸调节溶液pH值为6，将析出的固体过滤，真空干燥，得到0.12g白色固体，产率52％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.66(s,1H),10.68(d,J＝1.6Hz,1H),8.86(d,J＝1.6Hz,1H),8.19-8.09(m,2H),7.35-7.12(m,6H),6.57-6.52(m,1H),4.58(dd,J＝27.1,13.3Hz,2H),4.46-4.35(m,1H),3.15-2.97(m,2H),2.92(dd,J＝13.6,5.1Hz,1H),2.78(dd,J＝13.6,9.8Hz,1H),1.79-1.54(m,2H),1.53-1.25(m,2H)。13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ174.14,168.43,156.72,152.42,151.10,138.26,129.63,128.45,126.69,121.68,102.62,101.35,51.89,45.43,45.37,42.00,38.40,28.72,28.27。HRMS(AP-ESI),calcd for C21H24N6O3[M+H]+409.1983,found 410.1969。
化合物12b-12c的制备方法与化合物12a类似。
实施例5、目标化合物体外APN抑制活性评价实验
本发明使用了猪源APN作为酶源，测试目标化合物对APN的体外抑制活性，以已批准上市的APN抑制剂bestatin作为阳性对照。
实验结果(表1)表明，本发明的大部分目标化合物表现出较好的APN抑制作用。具体来说，化合物(S)-5a、(S)-5b、(S)-5c、(S)-5d、(S)-5e、(R)-5f、(R)-5g、(R)-5h、(R)-5j、10a、10b、10c、10d、10e、10f、12a和12b活性均优于阳性对照bestatin，其中化合物12b活性格外突出(IC50＝0.05μM)，比bestatin(IC50＝3.64μM)强70余倍。
表1.体外APN抑制活性评价结果
aIC50值以三次独立重复试验平均值±SD值形式来表示。
实施例6、目标化合物体外AKT1抑制活性评价实验
本发明采用激酶发光实验来测试目标化合物对AKT1的抑制活性，以已经上市的AKT抑制剂AZD5363为阳性对照。首先测试了目标化合物在1μM和200nM浓度下对AKT1的抑制率，然后综合考虑化合物对APN和AKT1的抑制活性，挑选了2个活性较好的化合物进一步测试了其对AKT1的IC50值。
实验结果(表2、表3)表明，部分目标化合物在1μM下对AKT1具有较好的抑制活性，其中化合物(R)-5f和(R)-5h对AKT1的IC50值分别为0.12μM和0.27μM。
表2.体外AKT1抑制活性评价结果
a抑制率@1μM或200μM。
表3.体外AKT1抑制活性评价结果
aIC50值以三次独立重复试验平均值±SD值形式来表示。
实施例7、抑制人脐静脉内皮细胞(HUVECs)成管腔实验
本发明采用HUVECs管状结构形成模型评价目标化合物(R)-5f和(R)-5h的抗血管生成活性。从图1(见说明书附图)的结果可以看出，经过一段时间孵育后，空白组中HUVECs在Matrigel上迁移、连接形成管状结构，此过程可以被bestatin以及(R)-5f和(R)-5h抑制。值得注意的是，化合物(R)-5f和(R)-5h在10μM浓度条件下几乎能完全抑制HUVECs成血管腔作用，活性明显优于阳性对照bestatin。
实施例8、蛋白质印迹法(Western Blot)
本发明通过Western Blot检测经过目标化合物处理后AGS细胞内p-GSK3β的水平，图2(见说明书附图)所示的结果表明，化合物(R)-5h和AZD5363均能剂量和时间依赖性的降低细胞内p-GSK3β的水平，其中的(R)-5h的活性弱于AZD5363，这与我们的抑酶活性测试结果一致。
Claims (6)
1.APN和AKT双靶点抑制剂，其特征在于，是下述化合物之一：
2.如权利要求1所述的APN和AKT双靶点抑制剂的制备方法，为下列之一：
合成路线Scheme 1如下：
上述合成路线中的试剂及反应条件：a)4-氯-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶，碳酸氢钠，乙腈，水，回流；b)L-或D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐或L-或D-亮氨酸甲酯盐酸盐或L-或D-苯甘氨酸甲酯盐酸盐或L-或D-色氨酸甲酯盐酸盐或L-或D-丙氨酸甲酯盐酸盐，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，1-羟基苯并三唑，三乙胺，N,N-二甲基甲酰胺，室温；c)羟胺钾甲醇溶液，室温；d)氯化氢饱和的乙酸乙酯溶液；
合成路线Scheme 2如下：
上述合成路线中的试剂及反应条件：a)碳酸氢钠，三乙胺，乙腈，水，N,N-二甲基甲酰胺，回流；b)浓盐酸，甲醇，室温；c)D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐或D-亮氨酸甲酯盐酸盐，三光气，碳酸氢钠，三乙胺，N,N-二甲基甲酰胺，室温；d)羟胺钾甲醇溶液，室温；
合成路线Scheme 3如下：
上述合成路线中的试剂及反应条件：a)碳酸氢钠，三乙胺，乙腈，水，N,N-二甲基甲酰胺，回流；b)浓盐酸，甲醇，室温；c)D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐或D-亮氨酸甲酯盐酸盐，三光气，碳酸氢钠，三乙胺，N,N-二甲基甲酰胺，室温；d)羟胺钾甲醇溶液，室温；
合成路线Scheme 4如下：
上述合成路线中的试剂及反应条件：a)碳酸氢钠，三乙胺，乙腈，水，N,N-二甲基甲酰胺，回流；d)羟胺钾甲醇溶液，室温；e)D-苯丙氨酸甲酯盐酸盐或D-亮氨酸甲酯盐酸盐，1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐，1-羟基苯并三唑，三乙胺，N,N-二甲基甲酰胺，室温。
3.如权利要求1所述的APN和AKT双靶点抑制剂在制备预防或治疗与APN和AKT活性或表达异常相关的疾病的药物中的应用。
4.如权利要求3所述的所述的与APN和AKT活性或表达异常相关疾病为各种实体瘤、血液瘤和自身免疫性疾病。
5.如权利要求4所述的各种实体瘤为乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌、胰腺癌、胃癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌、黑色素瘤；所述的血液瘤为骨髓纤维化、多发性骨髓瘤、人红细胞白血病、人慢性髓细胞性白血病；所述的自身免疫性疾病为类风湿性关节炎。
6.一种适于口服或胃肠外给药的药物组合物，包含权利要求1所述的APN和AKT双靶点抑制剂和一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110437816.0A CN115232130B (zh) | 2021-04-22 | 2021-04-22 | 一种apn和akt双靶点抑制剂及其制备方法和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110437816.0A CN115232130B (zh) | 2021-04-22 | 2021-04-22 | 一种apn和akt双靶点抑制剂及其制备方法和应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115232130A CN115232130A (zh) | 2022-10-25 |
| CN115232130B true CN115232130B (zh) | 2024-01-12 |
Family
ID=83666514
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110437816.0A Active CN115232130B (zh) | 2021-04-22 | 2021-04-22 | 一种apn和akt双靶点抑制剂及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115232130B (zh) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110248663A (zh) * | 2017-02-03 | 2019-09-17 | 利奥制药有限公司 | 作为新型JAK激酶抑制剂的5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氮杂螺[2.5]辛烷-8-甲酸衍生物 |
| CN112154146A (zh) * | 2018-03-06 | 2020-12-29 | 西奈山伊坎医学院 | 丝氨酸苏氨酸激酶(akt)降解/破坏化合物和使用方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2011529964A (ja) * | 2008-08-04 | 2011-12-15 | シェーリング コーポレイション | 抗菌剤としての尿素誘導体 |
-
2021
- 2021-04-22 CN CN202110437816.0A patent/CN115232130B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110248663A (zh) * | 2017-02-03 | 2019-09-17 | 利奥制药有限公司 | 作为新型JAK激酶抑制剂的5-(7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-4-基)-5-氮杂螺[2.5]辛烷-8-甲酸衍生物 |
| CN112154146A (zh) * | 2018-03-06 | 2020-12-29 | 西奈山伊坎医学院 | 丝氨酸苏氨酸激酶(akt)降解/破坏化合物和使用方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| Design, Synthesis, and Biological Evaluation of APN and AKT Dual- Target Inhibitors;Qian Liu et al;ACS Med. Chem. Lett.;第12卷;第1932-1941页 * |
| HDAC/PI3K 双靶点抑制剂HL-5 对肿瘤细胞凋亡和迁移的影响;甘萍 等;西南国防医药;第30卷(第12期);第1088-1091页 * |
| R ole of ubenimex as an anticancer drug and its synergistic effect with Akt inhibitor in human A375 and A2058 cells;Xiaoqing Wang et al;OncoTargets and Therapy;第11卷;第943-953页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115232130A (zh) | 2022-10-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6944462B2 (ja) | チエノピリミジンジオンａｃｃ阻害剤の固体形態およびその生成のための方法 | |
| JP4629036B2 (ja) | アリールアルキルアミン化合物及びその製法 | |
| JP6254264B2 (ja) | マルチターゲットのウベニメクスプロドラッグ誘導体及びその調製方法と用途 | |
| CN108395443B (zh) | 抑制程序性死亡受体配体1的环状化合物及其用途 | |
| JP6126319B1 (ja) | （６Ｓ，９ａＳ）−Ｎ−ベンジル−６−［（４−ヒドロキシフェニル）メチル］−４，７−ジオキソ−８−（｛６−［３−（ピペラジン−１−イル）アゼチジン−１−イル］ピリジン−２−イル｝メチル）−２−（プロプ−２−エン−１−イル）−オクタヒドロ−１Ｈ−ピラジノ［２，１−ｃ］［１，２，４］トリアジン−１−カルボキサミド化合物の結晶 | |
| EP2949647B1 (en) | Deuterated phenyl amino pyrimidine compound and pharmaceutical composition containing same | |
| JP6704422B2 (ja) | キナゾリン誘導体の塩およびその製造方法 | |
| EP3348548A1 (en) | Nitric oxide-releasing prodrug molecule | |
| JP6581193B2 (ja) | 置換２−チオキソ−イミダゾリジン−４−オン及びそのスピロ類似体、抗癌有効成分、医薬組成物、医薬製剤、並びに前立腺癌の治療法 | |
| CN101812059A (zh) | 一氧化氮供体型法尼基硫代水杨酸衍生物、其制备方法及其医药用途 | |
| WO2015178265A1 (ja) | 新規なグルタミン酸誘導体およびその用途 | |
| ES2575689T3 (es) | Compuestos y métodos para el tratamiento del dolor y otras enfermedades | |
| CN110845425B (zh) | 一种酞嗪衍生物及其制备方法和应用 | |
| JP6606806B2 (ja) | 重水素化キナゾリノン化合物及び該化合物を含む薬物組成物 | |
| JP7214925B2 (ja) | Ｐａｎ－ＲＡＦキナーゼ阻害剤としてのビアリール化合物 | |
| CN115232130B (zh) | 一种apn和akt双靶点抑制剂及其制备方法和应用 | |
| EP2896623A1 (en) | CRYSTAL OF N-[2-({2-[(2S)-2-CYANOPYRROLIDIN-1-YL]-2- OXOETHYL}AMINO)-2-METHYLPROPYL]-2-METHYLPYRAZOLO[1,5-a]PYRIMIDINE-6-CARBOXAMIDE | |
| WO2023130012A1 (en) | Compounds for mutant kras protein degradation and uses thereof | |
| WO2023091747A1 (en) | Modulator compounds, pharmaceutical compositions and uses thereof | |
| EP3105207A1 (en) | Gpr142 agonist compounds | |
| CN111205244A (zh) | 噻唑并环类化合物、其制备方法、中间体和应用 | |
| AU2015212306A1 (en) | Novel heterobicyclic compounds as Kappa opioid agonists | |
| CN103553957B (zh) | 含有组蛋白去乙酰化酶抑制活性的秋水仙碱衍生物及制备方法和用途 | |
| JP5755821B2 (ja) | Ｍｇｌｕ２／３アゴニスト | |
| JP2002145849A (ja) | アルキニルアミノ酸誘導体及びその製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |